LABORATORIO 2 BIOTECNOLOGIA: IDENTIFICACIÓN Y AISLAMIENTO DE

MICROORGANISMOS

Jeisson David Aguilar Ortiz

117004001
Brayan Stiven Aguilar
117004101
Yeison Bermeo Riveros
117003906

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES
ESCUELA DE INGENIERIAS EN CIENCIAS AGRICOLAS
PROGRAMA INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
2021
 1. Describa la composición y usos de los medios de cultivo empleados en el laboratorio

Medios usados para la tinción y estandarización:

• Medios Simples

Poseen los requisitos nutricionales para permitir el desarrollo bacteriano general

(agua, sales, peptona, extracto de carne o levadura).

Medio usado: agar nutritivo, en el que se identificaron estafilococos

• Medios selectivos

Se consiguen añadiendo al agar nutritivo compuestos químicos nocivos para

algunas bacterias cuyo crecimiento no es de interés o también mediante una
alteración de las condiciones físicas del medio.

Medio usado: Agar Mac Conkey que contiene cristal violeta. En este se hizo la
tinción y estandarización de un hongo del tipo Aspergillus, el cual creció por
posible contaminación en este agar que era para bacterias.

2. De acuerdo con el estudio realizado indique las morfologías indicadas en la labor,

adjunte imágenes.

Objetivo 40x, Observación hongo Aspergillus, Objetivo 100x, Observación de conidios de

se aprecian claramente sus hifas y hongo Aspergillus
conidióforos.
 Objetivo 100x, Observación de cocos, al parecer
de Escherichia coli por su color tras la tinción.

Punto 3 condiciones necesarias para la identificación microscópica y macroscópica de colonias

Condiciones Microscópica Macroscópica
Tinción Se debe realizar alguno de los No es estrictamente necesaria
tipos de tinciones para que la realizarla.
morfología de la colonia
pueda ser observada en el
microscopio
Medio de cultivo selectivo Para realizar la identificación Se necesita el medio selectivo
no es necesario un medio para poder tener una idea
selectivo. previa de los
microorganismos que pueden
crecer en el medio de cultivo
selectivo.
Técnica de siembra Puede observarse sin Se puede observar las
importar si la siembra fue por colonias mucho mejor cuando
superficie o profundidad la siembra se dio por
agotamiento en la superficie.

Punto 4 Utilidad de las diferentes técnicas de siembra.

Tipo de siembra Característica
Agotamiento Esta técnica suele ser utilizada para aislar
colonias de microorganismos para poder ser
recontados
Masiva Esta técnica como lo dice es utilizada para
tener un crecimiento alto de microorganismos
Profundidad Esta técnica es utilizada para microorganismos
que son aerobios y se realiza vertiendo
primero los microorganismos y seguidamente
le medio de cultivo
Punto 5

En la mayoría de los casos la identificación no se realiza con base a un solo método, sino a la
combinación de más de uno un ejemplo podría ser:

Identificación de bacterias

criterios morfológicos

tinción diferencial

pruebas bioquímicas

ensayos serológicos

IDENTIFICACIÓN GENOTÍPICA DE MICRORGANISMOS

El rápido progreso de la biología molecular ha permitido el desarrollo de técnicas de secuenciación
de ácidos nucleicos para la identificación de microorganismos con alta resolución y que sería
complejo de determinar mediante técnicas morfológicas y bioquímicas

Etapas de identificación genotípica de microrganismos

Recepción del cultivo microbiano es necesario contar con cultivos axénicos o puros
puro (solo contienen un microrganismo).

obtener ADN genómico, involucra generar una

Extracción de ácidos nucleicos lisis celular, separar y purificar los ácidos nucleicos
desde microrganismos del resto de componentes de la célula

obtención de un patrón de bandas visualizado por

Tipificación molecular de electroforesis. Con este patrón es posible detectar
microrganismos y diferenciar cepas o identificar clones dentro de
un grupo de microorganismos aislados

La PCR se compone de tres fases: (i) desnaturalización, que

Amplificación de secuencias
nucleotídicas mediante reacción
en cadena de la polimerasa (PCR)
consiste en la separación de las hebras de ADN a temperaturas
entre 94 y 96 °C; (ii) hibridación, que consiste en la unión de los
cebadores a la secuencia de ADN de una hebra a temperaturas
entre 40 y 60 °C; (iii) elongación, que consiste en la síntesis de la
cadena complementaria de ADN realizada por la enzima ADN
polimerasa a una temperatura de 72 °C

consiste en separar partículas con carga, en este

Electroforesis de los productos caso fragmentos de ADN, cuando son sometidas a
de PCR un campo eléctrico

Este proceso consiste en determinar el orden de las

bases nucleotídicas (adenina A, guanina G, citosina C y
Metodología para la tiamina T) en una molécula de ADN que, en este caso,
secuenciación de genes corresponde a la secuencia del gen amplificado
mediante PCR y que nos permitirá conocer la afiliación
taxonómica del microorganismo en estudio

Con las herramientas que dispone la bioinformática, se

puede efectuar la depuración, alineamiento y comparación
Análisis bioinformático de de una secuencia nucleotídica problema contra una base de
secuencias nucleotídicas datos de secuencias de especies microbianas conocidas ya
secuenciadas depuradas. Con esto se puede contrastar y construir
relaciones evolutivas por comparación de una secuencia
nucleotídica pequeña, varias regiones del ADN o incluso del
genoma completo de un microorganismo
Punto 6

Dificultades y oportunidades

Las dificultades en esta serie de actividades son el contar con la cantidad de equipo necesario
dado a que por falta de este las pruebas que se le dan a microrganismos son pruebas que no
presentan el mismo grado de exactitud que las realizadas por equipos especializados, así como el
manejo adecuado por lo que es posible la contaminación de muestras.

Las oportunidades son las de tener en cuenta que existen distintos métodos para la identificación
de microrganismos que, aunque no presentan el mismo grado de exactitud que las realizadas en
equipos, nos permite hacer una idea y relacionar los microrganismos a grupos más pequeños e
identificables, así como ir identificando los posibles errores que dan paso a la contaminación de
muestras, lo cual ocasionas dificultades al momento de la identificación.