OBJETIVOS

Lograr evidenciar el consumo de glucosa por parte de una levadura y extraer diferentes pigmentos
fotosintéticos por medio de un proceso cromatográfico.
MARCO TEÓRICO
El reactivo utilizado para determinar el consumo de glucosa por parte de una levadora constó de una
disolución que contenía enzimas glucosa oxidasa (GOD) y peroxidasa (POU), 4-aminofenazona (4-
AF) y buffer fosfato pH 7 con hidroxibenzoato. Este reactivo logra evidenciar la presencia de
glucosa en una solución debido a que la enzima glucosa oxidada oxida la glucosa generando ácido
glucónico y peróxido de hidrogeno, este último es reducido por la enzima peroxidasa que toma los
electrones de la 4-aminofenanzona la cual al reaccionar junto con al hidroxibenzoato formando un
compuesto denominado quinonimina roja que se caracteriza por teñir de rojo la disolución.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Para la determinación de glucosa se dejó 10 minutos en baño termostatizado 37°C un tubo cónico
de centrífuga el cual contenía 50mg de levadura deshidratada y 9,0 ml de agua destilada. Luego a
este se le adiciono 1 ml de solución de glucosa y se agito suavemente. De forma casi inmediata, en
un tubo de ensayo rotulado se le adicionó 0,1 ml de agua destilada, 0,1 ml de muestra y 1 ml de
reactivo, esta primera disolución determinada como t=0. El mismo procedimiento fue llevado a
cabo para otros 4 tubos de ensayo, con una diferencia de 10 min.

En un mortero se colocó 20 ml de acetona y hojas de espinaca cortadas, las cuales fueron triturada y
filtradas en un tubo cónico. Al extracto resultante se le adicionó 1,5 ml de hexano y 40 ml de agua,
luego fue mezclada sin agitar demasiado y se dejó reposar. (para que se forme la fase orgánica y la
fase acuosa. Una vez obtenida las dos fases, con una pipeta Pasteur se extrajo la fase superior de la
misma y se colocó en un tubo pequeño de centrífuga.
Posteriormente para realizar la cromatografía, se sembró 3, 5 y 7 gotas en el punto de siembra de la
respectiva placa, se dejó reposar hasta la evaporación del solvente. Luego fue introducida en un
frasco el cual hubo una mezcla de solventes orgánicos hexano - acetona 80:20 y apoyada de forma
diagonal, tal que la mezcla asciende por capilaridad hasta que el frente del mismo este próximo al
borde superior.

RESULTADOS EXPERIMENTALES
Para la determinación del consumo de glucosa se obtuvo los siguientes resultados:

tiempo Observaciones
 t= 0 min La disolución presentó una intensa coloración rojiza
t= 10 min La disolución presentó una coloración roja, menos intensa que en t=0
t= 20 min La disolución presentó una coloración rojiza clara, tendiendo a rosa
t= 30 min La disolución presentó una coloración rosa clara
t= 40 min la disolución presento una disolución rosa muy clara, similar al color del reactivo

Respecto a la clorofila se pueden mencionar que, en el proceso de filtrado, el resultado obtenido fue
un extracto cuya coloración fue verde claro. Mientras que en el proceso de cromatografía se pudo
observar la separación de pigmentos a medida que el solvente fue ascendiendo por capilaridad: los
pigmentos de color verde quedaron en el punto de siembra y pigmentos de coloración amarillo
ascendían en la medida de la capilaridad del solvente.

DISCUSIÓN

En la determinación de glucosa, como se ha mencionado, en t=0 se obtuvo una coloración rojiza.

Esto es debido a que en la solución resultante se ha producido quinonimina la cual surge en primera
instancia por la reacción de glucosa con el reactivo. A mayor cantidad de minutos, se observó la
disminución de la intensidad rojiza en los tubos de ensayo, hasta el punto en que la coloración
presentado en el último tubo de ensayo en t=40 la coloración de la disolución fue similar a la
coloración del reactivo.
En cuanto al desarrollo de la cromatografía se evidenció la separación de los pigmentos, lo cual se
debe, por un lado, a que la mezcla que contenía el frasco correspondía a dos sustancias orgánicas
con diferente polaridad, siendo el hexano apolar y la acetona una polaridad intermedia; por otra
parte, los pigmentos fotosintéticos presentan diferente grado de solubilidad, por lo tanto, el/los
pigmento más soluble en la mezcla será el que forme una banda coloreada en la parte superior de la
placa y el menos soluble será el que prácticamente no ascenderá por la placa.

CONCLUSIÓN

En cuanto a la determinación de glucosa en presencia de levadura se puede concluir que a medida

que fue transcurriendo el tiempo la concentración de glucosa fue disminuyendo debido a que la
levadura consumió de la misma para fines bioenergéticos, cuyo proceso de denomina glucólisis.
Como así también remarcar, que se asumió que la quinonimina se produce a partir de la presencia
de glucosa, sin embargo, esto no necesariamente significa que hay glucosa presente, sino que
puede haber otra sustancia que genere u ocasione la producción de quinonimina. Respecto al
trabajo experimental realizado con los pigmentos fotosintéticos de una planta, se puede
mencionar que los diferentes tipos de pigmentos presente en un organismo vegetal (en este caso)
puede presentar diversas estructuras químicas que pueden ocasionar una mayor o menor
solubilidad, como así también poder captar diferentes longitudes de ondas para llevar adelante el
proceso de fotosíntesis. Pues, esto hizo posibilitó que las sustancias fotosintéticas más solubles se
desplazaran a mayor velocidad acompañando fácilmente al disolvente con mayor polaridad y,
contrariamente, los pigmentos menos solubles avanzar con menor velocidad en la placa
cromatografía.