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UNIVERSIDAD NACIONAL SAN AGUSTIN DE AREQUIPA FACULTAD DE INGENIERIA DE PROCESOS SEGUNDA ESPECIALIADAD INGENIERIA AMBIENTAL BANCO DE PREGUNTAS 1 Para

conseguir la informacin del analito es necesario proporcionar un estmulo en forma de energa este estmulo provoca una respuesta, la informacin resultante radica en el fenmeno que surge de la interaccin del estmulo con el analito-De acuerdo a ello complete el siguiente cuadro : Instrumento Estmulo Seal Analtic a Transductor de entrada Dominio de los datos de la informaci n transforma Fotmetro Espectrofotom etro emisin atmica Columbmetro Lmpara wolframio Llama, or, muestra Fuente de corriente pH metro continua Muestra Haz de Fotocelda Tubo fotomultiplica dor Electrodos Corriente elctrica Electrodos de Potencial vidrio elctrico da Corriente elctrica Potencial elctrico

luz Radiaci n UV-VIS Corrient e de la celda Activida d de protone s

de monocromad

2 Bajo la presentacin del cuadro anterior definir DOMINIO DE LOS DATOS y describirlos

cuando estos se clasifican como : elctricos, no elctricos, analgicos, del tiempo y digitales Esta informacin est codificada en dominios de datos. Estos dominios pueden ser elctricos (cuando la codificacin se realiza a travs de seales elctricas), o no elctricos (cuando no se requiere ninguna codificacin elctrica al comienzo o terminacin de un proceso) Los dominios no elctricos son los ms utilizados por los mtodos clsicos. Las propiedades fsicas y qumicas analizadas por estos instrumentos son la longitud, la densidad, la intensidad de la luz. Por ejemplo, una balanza romana, en la que sabemos el peso al equilibrar los dos brazos, una regla para medir, un matraz para saber el volumen, etc. Aunque hay casos en los que un mtodo instrumental tambin codifica su informacin en dominios no elctricos. Son aquellos en los que el comienzo y el fin pertenecen a dominios no elctricos, pero entre medias se dan procesos codificados por dominios elctricos. Esto es lo que ocurre con las balanzas electrnicas, ya que la masa no est codificada elctricamente, y el resultado obtenido en la pantalla, tampoco lo est. Los dominios elctricos, como su nombre indica, son aquellos codificados a travs de seales elctricas, y dependiendo del almacenamiento de la informacin, podemos distinguir: Dominios analgicos: La informacin se codifica como una magnitud de una cantidad elctrica (tensin, intensidad, carga o potencia). Estas cantidades son continuas en amplitud y tiempo, y se pueden registrar como funciones de ciertas variables (longitud de onda, temperatura, campo magntico) En estos dominios, la tcnica ms utilizada es la comparacin de varias seales. Dominios del tiempo:

La informacin tambin se codifica como una magnitud de una cantidad elctrica, pero en este caso, la informacin se almacena como variacin de la seal con respecto al tiempo (en vez de la amplitud). Lo que interesa es el tiempo que se tarda en hacer algo (perodo) o las veces que se hace algo por unidad de tiempo (frecuencia). Dominios digitales: La informacin se codifica en un esquema de dos niveles, pudiendo haber dos estados en esta codificacin: abierto o cerrado. Estos dos estados son relativos, ya que dependen del lmite que se establezca entre ambos. As, cada dato analizado ser un bit, que podr estar abierto o cerrado. Para mejorar este sistema se usan los nmeros binarios. A cada intervalo de tiempo se le asigna un 2x, siendo x intervalo. Si el bit est abierto, se multiplica el intervalo 2x por 1, mientras que si est cerrado, por 0. La mayora de la informacin digital est codificada, transferida, procesada y descodificada en sistema binario, dada su eficacia. 3 Cuales son los criterios para seleccionar un mtodo analtico. CRITERIOS PARA LA ELECCION DE UN METODO Basndose en las consideraciones de Egan, la eleccin de mtodos debe considerar: Dar preferencia a mtodos cuya calidad y confianza se ha establecido en estudios colaborativos, o similares en varios laboratorios (ISO / REMCO, 1993) Preferir mtodos documentados o adoptados por organizaciones internacionales reconocidas. Preferir mtodos de anlisis que se aplican en forma uniforme a varios tipos de alimentos sobre aquellos que se aplican a alimentos especficos.

Entre los atributos a considerar en la calidad de un mtodo se deben mencionar aquellas caractersticas confiabilidad, aplicabilidad, especifidad, detectabilidad y sensibilidad. que son bsicas: precisin, exactitud,

4 Cmo se entienden los siguientes conceptos : Buenas prcticas de laboratorio: Las buenas prcticas de laboratorio forman parte del trabajar con calidad y cubren aspectos sencillos del trabajo diario en el laboratorio que deben documentarse Acreditacin: La acreditacin es un proceso que se inicia cuando la entidad productora de un servicio asume cumplir un modelo-estndar para el mbito en el que se desarrolla. Validacin: Se define la validacin analtica como el trabajo experimental encaminado a obtener pruebas documentadas de que un mtodo analtico proporciona consistentemente la informacin requerida al uso al que se destina. 5 Presente un protocolo a seguir en la acreditacin de un mtodo analtico cualquiera, por ejemplo determinacin de plomo en aguas residuales de la industria minera. Las directrices especficas escritas que recogen los pasos necesarios para desarrollar el mtodo analtico sin excepcin. (Contiene detalles especficos que no recoge el mtodo). Conjunto de operaciones analticas intercaladas que se realizan entre la muestra y el resultado

6 Qu diferencia existe entre los mtodos de adicin de estndar y patrn interno. Mtodo de las adiciones estndar del componente a determinar, y medir la magnitud de la

El mtodo consiste en aadir sobre una serie de alcuotas, cantidades conocidas propiedad analtica de inters tras las diferentes adiciones. Para llevar a la prctica el mtodo, usualmente se toman volmenes iguales de disolucin problema, y se aaden cantidades conocidas y diferentes de analito a todas las muestras, excepto a una, diluyendo, finalmente, todas al mismo volumen. Patrones internos.

Un patrn interno es una cantidad conocida de un compuesto diferente del analito que se aade a la muestra desconocida. La seal del analito se compara con la del patrn interno, y de ese modo se determina el analito presente en la muestra. Los patrones internos son especialmente tiles cuando la cantidad de muestra analizada o la respuesta del instrumento vara algo de experiencia a experiencia por razones que son difciles de controlar. Para usar un patrn interno, se prepara primero una mezcla conocida de patrn y analito, para medir la respuesta relativa del detector a las dos especies. A continuacin se aade una cantidad conocida de patrn interno a una muestra que contiene una concentracin desconocida del analito. Se mide de nuevo la relacin de seales y se calcula la concentracin del analito. 7 Definir seal y ruido. Cules son las fuentes de ruido en los anlisis instrumentales. SEAL : Lleva informacin relativa al analito

RUIDO: Compuesta por informacin indeseada, ajena al

analito. Es

constante e independiente de la magnitud total, es decir, va a ser independiente de la cantidad de muestra, concentracin etc. Para seales pequeas va a haber, por tanto, mucho ruido, por el contrario, en seales grandes, los ruidos son menores. Para tener un criterio global, se habla de la relacin seal/ruido (S/N) y se define la magnitud del ruido como la desviacin estndar de la seal medida. FUENTES DE RUIDO EN ANLISIS INSTRUMENTAL a) b) Ruido qumico: Fluctuaciones de temperatura, presin, Ruido instrumental: Ruido trmico ( Ruido Johnson) Ruido de disparo (Cuntico) Ruido de parpadeo (o 1/f) Ruido ambiental

humedad, materiales fotosensibles, etc.

8 Qu mtodos hay para lograr la disminucin del ruido. Lo que nos interesa es aumentar la relacin S/N, esto los conseguimos modificando los instrumentos (hardware) o bien limpiando los datos de ruido (software). a) Mtodo Hardware. Conexin a tierra o blindaje. Reducimos el ruido de radiacin ambiental aislando los conductores de los instrumentos. Utilizacin de amplificadores diferenciales o filtrado. Modulacin y uso de amplificadores de corte de seal. Existen tcnicas espectroscopicas en las que la seal que sale del atomizador (o de cualquier elemento emisor) ya viene dada con ruido. Este ruido se limpia con un conmutador, consistente en un

disco giratorio situado entre la fuente el atomizador, que nos hace discontinua la seal procedente de la fuente. El detector esta preparado para que solo tenga en cuenta la radiacin intermitente. En la espectroscopia de absorcin atmica se utilizan los sistemas de doble haz, uno de ellos atraviesa la muestra y el otro no, as se eliminan las posibles fluctuaciones de la llama. a) Mtodo Software Promediado de conjunto. Hacemos el estudio del mximo de absorbancia para diferentes concentraciones de un mismo compuesto, y mediante un programa de ordenador, nos dar un espectro (resultado del promedio) con menos ruido. Es decir, promedia los mximos de absorbancia entre distintas concentraciones. Promediado por grupos. Sustituimos un grupo de puntos por su media. Obteniendo un nuevo espectro, cuyos puntos son los valores medios de los diferentes grupos, con un nivel menor de ruido. Como las seales de ruido son aleatorias, al promediar se eliminan entre s. El principal problema que plantea es que perdemos puntos al promediar. Promedio de ventana mvil. Parecida al anterior, con la diferencia que repite nmeros al promediar, consiguiendo as perder menos puntos. Filtrado digital por transformada de Fourier. Mtodo de correlacin. Se utiliza en espectroscopia y en cromatografia. Hace una correlacin de los resultados con los datos exactos de la sustancia pura que creemos que contiene la muestra. a) Otros tipos de estrategias.

Consiste en trabajar a una longitud de onda superior a la principal. Con esto conseguimos que la seal quede por encima del ruido. El nico

inconveniente que plantea es la perdida de sensibilidad por no trabajar a la longitud de onda principal. 9 Diagrame una celda y seale sus componentes. Cul es su aplicacin en potenciometra.

Se puede describir la potenciometra simplemente como la medicin de un potencial en una celda electroqumica. Es el nico mtodo electroqumico en el que se mide directamente un potencial de equilibrio termodinmico y en el cual esencialmente no fluye corriente neta. El instrumental necesario para las medidas potenciomtricas comprende un electrodo de referencia, un electrodo indicador y un dispositivo de medida de potencial.

10 En potenciometra se utiliza una media celda de referencia y una media celda indicadora Cul es el rol de cada una de ellas .

Electrodos de Referencia

En muchas aplicaciones es deseable que el potencial de media celda de uno de los electrodos sea conocido, constante y completamente insensible a la composicin de la solucin en estudio. Un electrodo con estas caractersticas, se denomina electrodo de referencia. Un electrodo de referencia debe ser fcil de montar, proporcionar potenciales reproducibles y tener un potencial sin cambios con el paso de pequeas corrientes. Dos electrodos comnmente utilizados que satisfacen estos requisitos son el Electrodo de Calomel y el Electrodo de Plata-Cloruro de Plata. Electrodos Indicadores

Junto con el electrodo de referencia se utiliza un electrodo indicador cuya respuesta depende de la concentracin del analito. Los electrodos indicadores para las medidas potenciomtricas son de dos tipos fundamentales, denominados metlicos y de membrana. Estos ltimos se denominan tambin electrodos especficos o selectivos para iones. 11 Describir a detalle el electrodo de referencia de Ag / AgCl indicando su potencial y origen del mismo. Electrodo de plata/cloruro de plata (Ag/AgCl). Est formado por un hilo de Ag sobre el cual se deposita AgCl, generalmente por va electroqumica, en una solucin de NaCl o KCl, en la cual el hilo de Ag acta como nodo, como se muestra en la figura (b).

Figura b) Plata /cloruro de plata, Ag/AgCl La reaccin electrdica es la siguiente: AgCl + eAg + Cl-,

y su potencial de equilibrio a 25C es: E = 0.2224 - 0.059 log [Cl-]. En agua de mar, el valor del potencial es aproximadamente de + 0.25 V respecto al electrodo normal de hidrgeno (ENH) a 25C. El potencial del electrodo depende muy especialmente de la salinidad de la solucin en la cual el electrodo est sumergido. 12 Mediante la membrana de vidrio explicar el funcionamiento del electrodo de medicin de pH. La determinacin de pH consiste en medir el potencial que se desarrolla a travs de una fina membrana de vidrio que separa dos soluciones con diferente concentracin de protones. En consecuencia se conoce muy bien la sensibilidad y la selectividad de las membranas de vidrio delante el pH. La medicin del pH se origina en el sistema de electrodo. Este sistema consiste en un sensor de pH, cuyo voltaje vara proporcionalmente a la actividad de iones de hidrgeno de la solucin (se trata del electrodo

indicador), y un electrodo de referencia, que proporciona un voltaje de referencia constante y estable en el tiempo independientemente de las condiciones externas.

El electrodo de pH consiste en una fina membrana de cristal sensible al hidrgeno en el extremo de un tubo de cristal inerte. Este tubo est lleno de un electrolito, y la seal es transportada a travs de un cable de Ag/AgCl (que acta como referencia). 13 Cul es el origen de : a) Del potencial de asimetra en un electrodo de membrana.: se produce debido a las tensiones e imperfecciones de la membrana de vidrio. b) Del potencial de interfase en un electrodo de membrana: Se puede conseguir de fuentes comerciales una amplia variedad de electrodos de membrana que permiten la determinacin rpida y selectiva de numerosos cationes y aniones por medidas potencio mtricas directas. A menudo, los electrodos de membrana se denominan electrodos selectivos de iones debido a la gran selectividad de la mayor parte de estos dispositivos c) Del potencial de unin del par vidrio/calomelano: debe su origen a las diferentes movilidades de los aniones y cationes. Si los aniones y cationes del electrolito de referencia tienen distintas movilidades, se difunden a diferentes velocidades a travs del diafragma. d) Del potencial de un electrodo de membrana cristalina utilizado para determinar la concentracin del in fluoruro: Muchas investigaciones sistematicas se han dedicado al estudio de los efectos de la composicion del vidrio en la sensibilidad de las membranas frente a protones y otros cationes, y actualmente se utilizan un cierto numero de formulaciones para la fabricacion de electrodos. El vidrio Crning 015, que ha sido

muy utilizado en las membranas, consta de aproximadamente un 22 por 100 de Na2O, 6 por 100 de CaO y 72 por 100 de SiO2. Esta membrana tiene una respuesta especifica a los iones hidrogeno hasta un pH de aproximadamente 9. A valores superiores, sin embargo, el vidrio empieza a dar una cierta respuesta al sodio, al igual que a otros cationes monovalentes. Actualmente se utilizan otras formulaciones de vidrio que sustituyen los iones sodio y calcio en diversos grados por iones bario y litio. Estas membranas tienen una selectividad superior a pH elevados. 14 Al medir el pH de una muestra se encuentra pH = 4,0 Cul es el potencial que se debe registrar cuando se utiliza como electrodo de referencia el Electrodo de calomel saturado. 15 Cul es el fundamento de la espectroscopa La espectroscopa es el estudio de la interaccin entre la radiacin electromagntica y la materia, con absorcin o emisin de energa radiante. Tiene aplicaciones en qumica, fsica y astronoma, entre otras disciplinas cientficas. El anlisis espectral en el cual se basa, permite detectar la absorcin o emisin de radiacin electromagntica a ciertas longitudes de onda, y relacionar stas con los niveles de energa implicados en una transicin cuntica. 16 Cuando el analito es expuesto a una fuente radiante c omo UV, Vis; IR u otra que tipos de transiciones ocurren y que relacin tienen con la formacin de los espectros. Las molculas experimentan tres tipos de transiciones cuantizadas cuando se excitan mediante radiacin ultravioleta visible e infrarroja. La radiacin ultravioleta visible determina la promocin de un electrn

situado en un orbital molecular o atmico de baja energa a otro orbital de mayor energa. La diferencia de energa entre estos orbitales debe coincidir con uno de los fotones con los que se irradia la muestra. A este salto se le llama transicin electrnica. Al proceso de absorcin se le conoce como absorcin electrnica. Adems, las molculas presentan otros dos tipos de transiciones inducidas por la radiacin: vibracionales y rotacionales. En cada nivel electrnico existe multitud de niveles de energa cuantizados propio de los enlaces que mantienen unida a la molcula Los subniveles de energa son debidos a las vibraciones en los enlaces. La diferencia de energa entre los distintos estados vibracionales es de un orden inferior de magnitud que la energa entre los niveles electrnicos. Adems, en cada nivel vibracional existen distintos subniveles de energa llamados subniveles rotacionales debidos a la rotacin de la molcula en torno a su centro de gravedad. 17 Describir los espectros de lnea, de bandas y continuos. La diferencia que existe entre un espectro de continuo, un espectro de lneas y un espectro de bandas, es que en el primero se calienta un slido hasta la incandescencia, por ejemplo: el filamento de una lampara elctrica; si se excita un vapor de gas monoatmico, ya sea por accin trmica (combustin) o elctrica (chispa o arco), se obtiene un espectro de lneas formado por un conjunto de rayas luminosas separadas entre si; el espectro de bandas se obtiene cuando se excita un vapor o un gas formado por molculas poliatomicas, en el cual en los espectrgrafos de poca dispersin parece formado por trozos de espectros continuo, aunque con los espectrgrafos que se utilizan actualmente se alcanza a distinguir que cada banda es una agrupacin de lneas muy prximas. El espectro continuo se atribuye a la agitacin trmica de los tomos, que en el cuerpo slido ocupan posiciones bien determinadas de equilibrio, alrededor de las cuales vibran con mayor energa cuanto mayor es la temperatura del cuerpo. En estos espectros no se observan rayas o zonas oscuras o negras. Se producen cuando la fuente luminosa es un slido o liquido incandescente.

El espectro de lneas se explica por las modificaciones que se producen en el equilibrio de los electrones que rodean al ncleo del tomo, por eso se dice que es de origen atmico. Los espectros de lneas se caracterizan por tener lneas brillantes, muy finas, separadas por intervalos relativamente grandes. El espectro de bandas se origina por las modificaciones de la energa, en las molculas formadas por mas de un tomo. Estos espectros se caracterizan por tener rayas mas anchas y esfumadas. 18 En la determinacin de hierro mediante fenantrolina se utiliza una banda espectral de 510 nm. Calcular a) Energa en Joul/fotn; Kj/mol; elctrn volt b) Frecuencia c) Nmero de onda. 19 Cul es el fundamento de la absorcin por compuesto orgnicos e inorgnicos Absorcin es la operacin unitaria que consiste en la separacin de uno o ms componentes de una mezcla gaseosa con la ayuda de un solvente lquido con el cual forma solucin (un soluto A, o varios solutos, se absorben de la fase gaseosa y pasan a la lquida). Este proceso implica una difusin molecular turbulenta o una transferencia de masa del soluto A a travs del gas B, que no se difunde y est en reposo, hacia un lquido C, tambin en reposo. Un ejemplo es la absorcin de amonaco A del aire B por medio de agua lquida C. Al proceso inverso de la absorcin se le llama empobrecimiento o desabsorcin; cuando el gas es aire puro y el lquido es agua pura, el proceso se llama deshumidificacin, la deshumidificacin significa extraccin de vapor de agua del aire. Muchos procesos industriales de absorcin van acompaados de una reaccin qumica. Es especialmente comn la reaccin en el lquido del

componente absorbido y de un reactivo en el lquido absorbente. Algunas veces, tanto el reactivo como el producto de la reaccin son solubles, como en la absorcin del dixido de carbono en una solucin acuosa de etanolaminas u otras soluciones alcalinas. Por el contrario, los gases de las calderas que contienen dixido de azufre pueden ponerse en contacto con lechadas de piedra caliza en agua, para formar sulfito de calcio insoluble. La reaccin entre el soluto absorbido y un reactivo produce dos hechos favorables a la rapidez de absorcin: (1) la destruccin del soluto absorbido al formar un compuesto reduce la presin parcial en el equilibrio del soluto y, en consecuencia, aumenta la diferencia de concentracin entre el gas y la interfase; aumenta tambin la rapidez de absorcin; (2) el coeficiente de transferencia de masa de la fase lquida aumenta en magnitud, lo cual tambin contribuye a incrementar la rapidez de absorcin. Estos efectos se han analizado bastante desde el punto de vista terico, pero se han verificado experimentalmente poco. 20 Una disolucin que contiene 4,48 ppm de KMnO4 tiene una transmitacia de 0,309 en una celda de 1,0 cm a 520 nm. Calcular la absortividad molar especfica del KMnO4.

21 En la determinacin de hierro en aguas de un desague se tienen los siguientes datos : Una muestra de 25 ml se acidifico con HNO3, se le aadi KSCN para formar un complejo de color rojo. La solucin se diluy a 100 ml y se coloco en una celda con trayecto ptico variable. Con fines de comparacin una muestra de referencia de 10 ml cuya concentracin de Fe (III) era 0,00068 M se trato con HNO3 y SCNK y se diluy a 50 ml. La solucin de referencia se coloc en una celda de trayecto ptico de 1,0 cm. La muestra del desague presento la misma absorbancia que la solucin de referencia cuando el trayecto ptico fue 2,48 cm. Cul es la concentracin del hierro en las aguas del desague?

22 Esquematice los componentes de un espectrofotmetro de Absorcin molecular convencional y un espectrofotmetro con arreglo de diodos. Describa sus componentes y seale las diferencias entre uno y otro espectrofotmetro. El espectrofotmetro convencional Un espectrofotmetro convencional enfoca la luz policromtica de la fuente en un monocromador. Este tiene como componentes principales una ranura de entrada, un elemento que dispersa la luz en sus longitudes de onda componentes (en general una red de difraccin), y una ranura de salida que permite seleccionar la longitud de onda deseada. Esa luz monocromtica atraviesa la muestra, y llega al detector. Las mediciones fotomtricas se hacen en base a la relacin entre la potencia de luz que alcanza al detector cuando est interpuesta la muestra (P) y cuando no lo est (P0) o cuando est interpuesto un blanco.

La transmitancia se define como T = P / P0 y la absorbancia como A = log T = - log P / P0 La base de la espectrometra de absorcin y su uso para el anlisis cuantitativo est dada por la relacin conocida como ley de Beer: Al = al . b. C

Donde al es la absortividad, un coeficiente caracterstico de la sustancia absorbente a cada longitud de onda l , b es la longitud del camino ptico (distancia que atraviesa la luz dentro de la muestra), y C es la concentracin de la sustancia absorbente. En realidad el monocromador no selecciona una nica longitud de onda, sino un rango, cuya amplitud depende de la calidad (resolucin) del mismo. Esta resolucin depende fundamentalmente del diseo (montaje) del monocromador, de su distancia focal y de las dimensiones y densidad de lneas en la red de difraccin. Para cambiar la longitud de onda de medicin, o para hacer un barrido espectral, se mueve el elemento dispersor o algn espejo por medio de un motor por pasos.

El espectrofotmetro de dispositivo de diodos El espectrofotmetro de dispositivo de fotodiodos (diode array, mal traducido como arreglo de diodos) fue introducido a mediados de los ? 70. Utiliza una ptica invertida respecto del convencional: toda la luz de la fuente atraviesa la muestra, luego es dispersada en un monocromador que en lugar de una ranura de salida tiene en el plano focal un dispositivo que integra en un pequeo circuito varios cientos de detectores tipo fotodiodo de silicio. El nmero de elementos vara actualmente entre 64 y 4096, siendo los ms comunes de 512 y 1024 elementos.

Cada elemento del dispositivo recibe luz de un rango particular de longitudes de onda, y una computadora procesa los datos recibidos. Las principales ventajas del espectrofotmetro de dispositivo de fotodiodos son que para obtener un espectro no hace falta mover ningn elemento, y los espectros se obtienen en forma casi instantnea. 23 Qu es, cmo funcionan y cules son los tipos de transductores en espectroscopa de absorcin. El espectro de absorcin de un material muestra la fraccin de la radiacin electromagntica incidente que un material absorbe dentro de un rango de frecuencias. Es, en cierto sentido, el opuesto de un espectro de emisin. Cada elemento qumico posee lneas de absorcin en algunas longitudes de onda, hecho que est asociado a las diferencias de energa de sus distintos orbitales atmicos. De hecho, se emplea el espectro de absorcin para identificar los elementos componentes de algunas muestras, como lquidos y gases; ms all, se puede emplear para determinar la estructura de compuestos orgnicos. Un ejemplo de las implicaciones de un espectro de absorcin es que aquel objeto que lo haga con los colores azul, verde y amarillo aparecer de color rojo cuando incida sobre l luz blanca.

24 Cules son las diferencias entre espectroscopa de absorcin Molecular y atmica En las producciones de absorcin medimos radiacin que proviene de la fuente y al ser absorbida en parte por la especie a analizar puede potenciar y medimos la diferencia de potencia con que incidir. En emisin se mide lo que emite la propia sustancia. Son tcnicas diferentes. Segn la naturaleza de la especie, son los electrones que forman el enlace los excitados a nivel de energa mayores y los responsables de que se absorba radiacin en una longitud de onda determinada. Con establecer una relacin entre la especie y longitud de onda que presente una sustancia puede identificarla, se hace con fines cualitativos. La espectroscopia de absorcin molecular es por tanto valiosa para identificar grupos funcionales de una molcula. Sin embargo, son ms importantes las aplicaciones de espectroscopia de absorcin de ultravioleta y visible para la determinacin cuantitativa de compuestos que contienen grupos absorbentes. Es un equipo relativamente barato, muy utilizado en control de calidad de industrias de medicamentos, alimentos, cosmeticos, pinturas. En cambio la espectrofotomtria de absorcin atmica, es mas cara, y casi siempre la tienen solo entidades gubernamentales, universidades, empresas multinacionales en su departamento de investigacin. Esta tcnica se ha aplicado a cerca de 60 elementos y es una herramienta primordial para los estudios en donde se determinan vestigios de metales en muestras biolgicas o del medio ambiente. Con frecuencia, tambin es til en los casos en donde la muestra contiene un nivel elevado del metal pero solo se cuenta con una muestra pequea para el anlisis, como es el caso algunas veces con las metaloprotenas, por ejemplo. El primer informe de un papel biolgico importante del nquel se bas en la determinacin por absorcin atmica que demostr que la enzima ureasa, al menos la de ciertos organismos, contiene dos

iones nquel por molcula de protena. Con frecuencia el primer paso en el anlisis de muestras biolgicas es la calcinacin para destruir la materia orgnica. 25 Cules son los mtodos de atomizacin Dos mtodos generales de atomizacin son usados: atomizacin a la

flama y atomizacin electrotrmica. Pocos elementos son atomizados usando otras tcnicas.

Atomizacin a la flama.

En la atomizacin a la flama la muestra es primero convertida en una suspensin de gotitas de la solucin. Esto se logra usando un ensamble nebulizador. La muestra es aspirada en una cmara de spray pasando un vapor a alta presin que consiste de uno o ms gases de combustin, pasa al final de un tubo capilar sumergido en la muestra. El impacto de la muestra con el vidrio produce gotas en una solucin en aerosol. La suspensin en aerosol se combina con los gases de combustin en la cmara de spray antes de pasar al quemador donde la energa trmica de la flama desolvata la suspensin de aerosol para secar el aerosol a pequeas, partculas slidas. Despus, la energa trmica volatiliza las partculas, produciendo vapor que consiste de las especies moleculares, especies inica y los tomos libres. La energa trmica en la atomizacin a la flama es suministrada por la combinacin de una mezcla combustible oxidante. Los combustibles comnmente usados son aire-acetileno y xido de nitrgeno-acetileno. Normalmente, el combustible y el oxidante son mezclados en proporciones estequiomtricas; sin embargo, una mezcla rica puede ser aceptable para que los tomos sean fcilmente oxidables. El diseo ms comn para el quemador es con una ranura. Este quemador provee una longitud de la trayectoria para monitorear la absorbancia y una flama estable.

El quemador es montado en una fase ajustable que permite al quemador ensamblarse para moverse vertical y horizontalmente. El ajuste horizontal es necesario para asegurarse que la flama est alineada con la trayectoria de los instrumentos pticos. El ajuste vertical es necesario para ajustar la altura dentro de la flama en el que la absorbancia es monitoreada. Esto es importante porque dos procesos que compiten, afectan la concentracin de los tomos libres. Un incremento en la residencia del tiempo resulta en una mejor eficiencia de la atomizacin; entonces la produccin de tomos libres se incrementa con la altura. Por otro lado, una residencia muy larga de tiempo, puede conducir a la formacin de xidos metlicos, como Cr, la concentracin de los tomos libres es ms grande en la cabeza del quemador. Para metales como Ag, que son difciles de oxidar, la concentracin de los tomos libres se incrementa firmemente con la altura. Otros tomos muestran perfiles de concentracin que se maximizan a las caractersticas de la altura. La manera ms comn de introducir la muestra en el atomizador de flama es por continua aspiracin, en el cual la muestra es pasada continuamente a travs del quemador mientras se monitora la absorbancia. La continua aspiracin de la muestra, requiere de 2-5 ml de muestra. Se puede tambin alimentar micro-muestras que es til cuando el volumen es limitado o cuando la matriz de la muestra no es compatible con el atomizador de flama. Por ejemplo, la continua aspiracin de muestra que contiene altas concentraciones de slidos disueltos, como agua de mar, puede resultar en la acumulacin de depsitos de slidos en la cabeza del quemador. Estos depsitos generalmente obstruyen la flama, bajando la absorbancia. La inmersin de la muestra se logra con un muestreador automtico. Las alimentacin de las micro-muestras a la flama se logra usando una micro-pipeta para poner 50-250 l de muestra en un embudo de tefln conectado al nebulizador, o sumergiendo el tubo nebulizador en la muestra por corto tiempo. La sumersin de la muestra se logra con un muestrador automtico. La seal para micro-muestras es un pico transitorio en el

que su altura o rea es proporcional a la cantidad de analito que es inyectado. Atomizadores electrotrmicos.

Una significativa mejora en la sensibilidad se logr con el calentamiento por resistividad en lugar de la flama. Un atomizador electrotrmico muy comn, es conocido como horno de grafito, que consiste de un tubo cilndrico de grafito de aproximadamente 1-3 cm de longitud, y 3-8 mm de dimetro. El tubo de grafito es alojado en un ensamble que sella las salidas del tubo con ventanas pticamente transparentes. El ensamble tambin permite el paso de corrientes de gas inerte, protegiendo el grafito de la oxidacin, y removiendo los productos gaseosos producidos durante la atomizacin. Una fuente de poder es usada para pasar la corriente a travs del tubo de grafito, resultando en un calentamiento por la resistencia.

Las muestras entre 5 y 50 l, son inyectadas al tubo de grafito a travs de un hoyo de dimetro pequeo localizado en la parte superior del tubo. La atomizacin se logra en tres fases. Primero, la mezcla es secada usando una corriente que eleva la temperatura del tubo de grafito a 110C. En la segunda etapa, que se llama calcinado, la temperatura es incrementada a 350-1200C, a estas temperaturas cualquier material orgnico es convertido en CO2 y H2O, y materiales inorgnicos son volatilizados. Estos gases son removidos por una corriente de gas inerte. En la etapa final, la muestra es atomizada rpidamente incrementando la temperatura a 2000-3000C. El resultado es un pico perecedero cuya altura o rea es proporcional a la cantidad de analito inyectado en el

tubo. Estas tres etapas se llevan a cabo en 45-90 segundos, la mayor parte del tiempo es usada para secar y calcinar la muestra.

Metodos de atomizacin miscelneos.

Pocos elementos pueden ser atomizados por una reaccin qumica que produce un producto voltil. Elementos como As, Se, Sb, Bi, Ge, Sn, Te y Pb forman hidruros voltiles tanto a la flama como en una observacin de un tubo de cuarzo calentado en la trayectoria ptica. El Hg es determinado por un mtodo de vapor fro en el que es reducido a mercurio elemental con SnCl2. El mercurio voltil es acarreado por un gas inerte a un tubo de observacin situado en la trayectoria ptica del instrumento. 26 Porqu un atomizador electrotrmico es ms sensible que un atomizador de llama. Porque la atomizacin electrotrmica provee una significativa mejora en la sensibilidad atrapando el analito gaseoso en un pequeo volumen en el tubo de grafito. La concentracin del analito resultante en el vapor puede ser 1000 veces ms grande que la producida en la atomizacin a la flama. El avance en sensibilidad y en la deteccin de lmites, es compensado por una significativa prdida en la precisin. La eficiencia de la atomizacin est fuertemente influenciada por el contacto de la muestra con el tubo de grafito, en el que es difcil controlar la reproducibilidad. 27 Porqu las lneas espectrales de una lmpara de ctodo hueco son en general ms estrechas que las lneas emitidas por tomos en una llama. Por que lmpara de ctodo hueco es un tipo de fuente de radiacin es de las ampliamente difundidas en la EAA. Las lmpara de ctodo hueco (LCH o HCL Hollow Cathode Lamp ) consisten de un cilindro de vidrio sellado al vaco y con un gas inerte en su interior. Dentro de este mismo cilindro se encuentran dos filamentos; uno de ellos es el ctodo y el otro

el nodo. El nodo generalmente es un alambre grueso hecho de nquel o tungsteno, el ctodo es en forma de un cilindro hueco, en el interior del cual se encuentra depositado en forma de una capa el elemento metlico que se va a excitar. Tambin regularmente y cuando esto es posible el ctodo est enteramente hecho del metal a analizar. 28 Qu tipos de interferencias se dan en absorcin atmica y como se las controla. a) Interferencia Espectral: Se producen cuando la absorcin

o emisin de una especie interferente se solapa o aparece muy prxima a la absorcin o emisin del analito. La resolucin del monocromador resulta imposible b) Interferencia Qumica: Se produce como consecuencia de

diversos procesos qumicos que ocurren durante la atomizacin y que alteran las caractersticas de absorcin del analito c) Interferencias por ionizacion: Se producen cuando la llama

es demasiado caliente y el potencial de ionizacin de los tomos es bajo. La grafica que se obtiene es una curva en lugar de una lnea recta. Esta interferencia se evita agregando un exceso de metal mas fcilmente ionizable que el elemento en estudio d) Interferencias Matriciales o de viscosidad: Se presenta

cuando la solucin problema tiene una viscosidad diferente de la de los estndares, ya que el flujo que llega al quemador no es igual y, por lo tanto, la concentracin medida del elemento no corresponde a la concentracin de ste en la solucin original. Esto se puede evitar agregando sales a los estndares para igualar la viscosidad La interferencia puede ser eliminada por los siguientes medios:

Incremento en la velocidad de flujo de combustible para obtener condiciones reductoras, con lo que disminuye la formacin de xidos estables Aumentando la temperatura de llama cambiando el combustible Extraccin selectiva interferente Agregando un exceso de reactivo que se combine con el interferente

29 Qu es el lmite de deteccin en absorcin atmica . La segunda cantidad utilizada es el lmite de deteccin. Como la concentracin caracterstica, varia de elemento a elemento. El lmite de deteccin se define de esta forma: es la concentracin ms baja del elemento que puede detectarse con un nivel de probabilidad del 95%. Se determina estadsticamente 30 Esquematice y describa el funcionamiento de un HPLC sealando sus aplicaciones en el control del impacto ambiental.

El principio de funcionamiento de un HPLC es el siguiente: En la HPLC isocrtica el compuesto pasa por la columna cromatogrfica a travs de la fase estacionaria (normalmente, un cilindro con pequeas partculas redondeadas con ciertas caractersticas qumicas en su superficie) mediante el bombeo de lquido (fase mvil) a alta presin a travs de la columna. La muestra a analizar es introducida en pequeas cantidades y sus componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones qumicas o fsicas con la fase estacionaria a medida que adelantan por la columna. El grado de retencin de los componentes de la muestra depende de la naturaleza del compuesto, de la composicin de la fase estacionaria y de la fase mvil. El tiempo que tarda un compuesto a ser eluido de la columna se denomina tiempo de retencin y se considera una propiedad identificativa caracterstica de un compuesto en una determinada fase

mvil y estacionaria. La utilizacin de presin en este tipo de cromatografas incrementa la velocidad lineal de los compuestos dentro la columna y reduce as su difusin dentro de la columna mejorando la resolucin de la cromatografa. Los disolventes ms utilizados son el agua, el metanol y el acetonitrilo. El agua puede contener tampones, sales, o compuestos como el cido trifluoroactico, que ayudan a la separacin de los compuestos. Una mejora introducida a la tcnica de HPLC descrita es la variacin en la composicin de la fase mvil durante el anlisis, conocida como elucin en gradiente. Un gradiente normal en una cromatografa de fase reversa puede empezar a un 5% de acetonitrilo y progresar de forma lineal hasta un 50% en 25 minutos. El gradiente utilizado vara en funcin de la hidrofobicidad del compuesto. El gradiente separa los componentes de la muestra como una funcin de la afinidad del compuesto por la fase mvil utilizada respecto a la afinidad por la fase estacionaria. En el ejemplo, utilizando un gradiente agua/acetonitrilo los compuestos ms hidroflicos eluirn a mayor concentracin de agua, mientras que los compuestos ms hidrofbicos eluirn a concentraciones elevadas de acetonitrilo. A menudo, hace falta realizar una serie de pruebas previas con tal de optimizar el gradiente de forma que permita una buena separacin de los compuestos. Cromatologa lquida de alta resolucin H.P.L.C. Es ampliamente utilizado para determinar la pureza, composicin y estabilidad de todo tipo de productos. Este tipo de cromatografa es ampliamente utilizado en las siguientes aplicaciones: purificacin de agua, concentracin de componentes traza, Ligand-exchange chromatography, Ion-exchange chromatography of proteins, High-pH anion-exchange chromatography of carbohydrates and oligosaccharides, etc. 31 Esquematice y describa el funcionamiento de un GC sealando sus aplicaciones en el control del impacto ambiental.

El principio de funcionamiento del cromatgrafo de gases es el siguiente: El gas portador fluye de un tanque a presin por una vlvula reductora, extrangulada por un regulador volumtrico de gas, al bloque de inyeccin, y de ah a la columna separadora y al detector. El paso puede regularse exactamente. Luego se regula la temperatura del bloque, conducciones y columnas separadoras. Debe transcurrir un tiempo determinado, por lo general de 1 a 2 horas, hasta que todo el sistema se encuentre en equilibrio y el anlisis pueda empezar. Dicho estado se reconoce por la lnea horizontal uniforme que escribe el registrador, el cual, ajustado a alta sensibilidad, debe trazar una lnea recta. Luego se inyecta la muestra, con una jeringa de 1mL a lo sumo, y a travs de una membrana de goma de silicona, en el bloque de inyeccin. La muestra se evapora y llega a la columna separadora, en la cual, impulsada por la corriente del gas portador, permanece, segn su coeficiente de distribucin, ms o menos tiempo. Al final de la columna las substancias separadas llegan al detector. Este mide una caracterstica fsica o qumica de la substancia, por ejemplo, en nuestro caso, de

conductividad trmica, y traslada los valores al registrador. Los valores quedan registrados en papel y la grfica resultante constituye el cromatograma . La sensibilidad del registrador se regula de acuerdo con la cantidad de substancias presentes. Dado que a menudo esto slo puede comprobarse despus de finalizar un anlisis, se debe realizar un segundo y tercer cromatograma. La GC tiene dos importantes campos de aplicacin. Por una parte su capacidad para separar mezclas orgnicas complejas, compuestos organometlicos y sistemas bioqumicos. Su otra aplicacin es como mtodo para determinar cuantitativa y cualitativamente los componentes de la muestra. Para el anlisis cualitativo se suele emplear el tiempo de retencin, que es nico para cada compuesto dadas unas determinadas condiciones (mismo gas portador, rampa de temperatura y flujo), o el volumen de retencin. En aplicaciones cuantitativas, integrando las reas de cada compuesto o midiendo su altura, con los calibrados adecuados, se obtiene la concentracin o cantidad presente de cada analito.