UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS

PROGRAMA DE BIOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR

PRACTICA DE LABORATORIO N° 2
OBTENCIÓN DE BIOMASA

OBJETIVO

Esta guía tiene por objeto describir las pautas y recomendaciones generales para
la obtención de biomasa y preparación para una posterior extracción del ADN
genómico y plasmidial.
 
REACTIVOS

 Cepa de E. Coli
 Caldo LB

MATERIALES Y EQUIPOS

 Centrífuga
 Micropipeta de 100-1000ml
 Nevera
 Pipetas de 1 y 2 ml
 Pera automatica
 Viales
 tubos eppendorf
 Caja de petri
 Guantes
 Tapabocas

 PROCEDIMIENTO

1. Prepare caldo LB con antibióticos (Ampicilina):

a) Extracto de levadura 5g/L

b) NaCl 10g/L
c) Triptona 10g/L
d) Ampicilina 50 ug/ml
2. Tome con el asa una pequeña cantidad de colonias de E. Coli contenidas en la
caja de petri y resuspenda en el tubo de ensayo con caldo LB en presencia de
un mechero de alcohol.

3. Incube el cultivo por 18-20 horas a 37º C

4. Añada 1-1,5 ml del cultivo de E.coli en un tubo Eppendorf.

5. Centrifugue  la muestra por 3 min a 12000 r.p.m.

6. Descarte el sobrenadante y llene nuevamente el tubo con 1-1,5 ml del cultivo.

7. Centrifugue  la muestra por 3 min a 12000 r.p.m. Este procedimiento se

realizan con el fin de obtener la mayor cantidad de biomasa.

8. Guarde a –20ºC hasta la próxima utilización.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

¿Para qué se hace la obtención de biomasa de la bacteria E. Coli antes de la

extracción de ADN bacteriano?

¿Por qué se utiliza el caldo LB para hacer la inoculación del cultivo bacteriano de
E. Coli y no otro medio de cultivo?

BIBLIOGRAFIA

http://www.pomif.com/pages/practicas/bacteriologia/transformaciondeecoli/texto-
transfecoli/transformacion-metodo-y-resultados