TÉCNICAS DE ANÁLISIS DE PROTEINAS

primero

Separación
Charge depends of # of
Varias al usar es

Columnas
2D Cromatografía Electroforesis acidic and basic amino
para por acids
Purificación e Integridad
Relación masa-carga
por
segundo como

Polaridad Distribución Carga Tamaño

SDS-PAGE CE-SDS
como como como

Interacción
Molecular weight
Fase Reversa Intercambio Iónico Exclusión Molecular
hidrofóbica/hidrofílica

Caracterización

HDX-MS IMS-MS
Espectrometría de Dicroismo Circular Difracción Rayos X Fluorescencia NMR
FTIR
Masas (MS) (CD) determina determina
determina produce tercero determina
determina
y tercieria Amide I Modelo Molecular Tyr y Trp-fluoroforos Dinámica y Flexibilidad Agregación proteica en
Estructura Terciaria y mezcla
Masa Estructura Secundaria b a n d proteína cristalizada
Cuaternaria
Elucidate structure (1700-1600)
m o d i fi c a t i o n s o r
contaminations Estabilidad
Sequencing of
peptides Cambios en heterogeneidad Results in
Cambios
de carga increase of Cambios en Conformacionales
Cambios tamano
por ejemplo
acidic prot hidrofobicidad mediante
por ejemplo

Species with higher pI variants por ejemplo

cuarta

Desaminación Isomerización Formación

Glicación Oxidación Comparación espectros Fragmentación Agregación
de Asn de Asp Piro-Glu
por
de Sub-visibles
CryoEM
Cromatografía por
Cromatografía Electroforesis como Tecnicas de Cromatografía Electroforesis AF4
como como caracterizacion LO
como como
Interacción FIM
Intercambio Iónico (IEC) Enfoque Isoeléctrico RP-HPLC Separación
De Zona Capilar Hidrofóbica SDS-PAGE RMM
(IEF) (CZE) Exclusión Molecular agregados
NTA
S u r f a c e o Trp, Met, Tyr, His, Phe, Cys Detección por Reemplazado por
Prot estan measuring um
modificacions: IEC IEF capilar fotografiado
Actividad
(icIEF) libres en particles
Buried modifications:
combinado con solucion no en Tinción Western Blotting CE-SDS morphology of
IEF y CZE
matriz particles
SDS-PAGE
[ ] particles
Inmunoensayos Líneas Celulares
se conoce como Resonancia de Plasmones
Superficiales Prot are transfered to membrane
como como
Electroforesis then probed w reagents or
2D
Proliferación/Antiproliferación
antibodies
otro ejemplo es ELISA Citotoxicidad
Western: prot
DIGE Southern: DNA
Northern: RNA

Bibliografía: Crommelin, D., Sindelar, R., Meibohm, B. (2019). Protein Stability and Characterization. Pharmaceutical Biotechnology: Fundamentals and Application 5th Ed. (p 33-57)