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“Año del bicentenario de Perú:200 años de

independencia”
UNIVERSIDAD ANDINA DEL CUSCO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
CARRERA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

INFORME

Asignatura: Microbiología – Prácticas

Docente: Yony Delgado Santos

Alumno: Orializ Iraida Bombilla León

Código: 019200565B

SEMESTRE 2021-II

CUSCO-PERÚ
TÍTULO: PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA BACTERIAS GRAM +
I. INTRODUCCIÓN
Staphylococcus se pueden clasificar, en primera instancia, en cuanto a sus
requerimientos atmosféricos. Así tenemos los cocos Gram positivos anaerobios
estrictos constituidos por los géneros Peptococcus y Peptoestreptococcus, los cuales
serán estudiados en el capítulo referido a bacterias anaerobias. Por otro lado
tenemos los cocos Gram positivos aerobios y anaerobios facultativos que están
constituidos por la familia Micrococacceae (géneros Staphylococcus, Micrococcus,
Planococcus y Stomacoccus) y los géneros Streptococcus y Enterococcus.
 Prueba de catalasa.- Catalasa. La catalasa es un enzima presente en la
mayorÌa de los microorganismos que poseen citocromos. Las bacterias que
sintetizan catalasa hidrolizan el peroxido de hidrogeno en agua y oxigeno
gaseoso que se libera en forma de burbujas. El principal objetivo de esta
prueba es separar Micrococacceae (positiva) de Streptococcus spp. y
Enterococcus spp. (negativa).
 Prueba de coagulasa Permite determinar la capacidad de coagular el plasma
por la acciÛn de la enzima coagulasa. Se utiliza para diferenciar S. aureus
(coagulasa positivo) de otras especies de Staphylococcus. La prueba de la
coagulasa en tubo se puede leer tras incubaciÛn de 4h, pero si es negativa
debe incubarse hasta 24h.
 Prueba pyr La Lpirrolidonil-β-naftilamida sirve como sustrato para la
detecciÛn de pirrolidonil peptidasa. Se utiliza principalmente en la
identificaciÛn de Streptococcus pyogenes y Enterococcus spp. TambiÈn en
la diferenciaciÛn de Staphylococcus lugdunensis de otros estafilocos
coagulasa negativa.
 Agar manitol salado El agar sal manitol en una fórmula diseñada por
Chapman para la diferenciación de estafilococos positivos a la coagulasa
(por ejemplo, Staphylococcus aureus) de los estafilococos negativos a la
coagulasa1 . Este agar se utiliza para el aislamiento de estafilococos a partir
de muestras clínicas2 , de cosméticos3 y de pruebas de límite microbiano
 Prueba de bilis esculina Se basa en la capacidad de determinadas especies
bacterianas de lisarse en presencia de sales biliares, las m·s utilizadas de las
cuales son el taurocolato y el desoxicolato de sodio. Ambas provocan un
descenso de la tensiÛn superficial, que, unido a la actuaciÛn de enzimas
autolÌticos, destruyen la cÈlula. El efecto de esta enzima autolÌtica se pone
de manifiesto sobre colonias de S. pneumoniae crecidas en medios sÛlidos,
en las que se aprecia una umbilicaciÛn central, y tambiÈn en colonias
mucoides.
 Prueba de camp Sirve principalmente para determinar la capacidad de un
microorganismo para producir una proteÌna conocida como factor CAMP.
La proteÌna produce un efecto sinÈrgico con la β-hemolisina de S. aureus
sobre eritrocitos ovinos y bovinos que se observa como un fenÛmeno lÌtico
en la intersecciÛn de los dos microorganismos cuando se siembran en
proximidad. Como alternativa se puede utilizar el CAMP inverso. En esta
prueba la hemÛlisis producida por algunos microorganismos se inhibe por la
β-hemolisina de S. aureus (por ejemplo, la producciÛn de fosfolipasa D de
Arcanobacterium haemolyticum o la fosfolipasa E de Rhodococcus spp.)
 Prueba de susceptibilidad a la novobiocina Varias especies del Género
Staphylococcus son resistentes a la novobiocina (disco de 5 µg).el objetivo
de esta prueba es separar S.saprophyticus (resistente a la novobiocina) de los
demás estafilococos coagulasa negativos
 Prueba de la bacitricina Esta prueba puede utilizarse como diagnÛstico
presuntivo en la identificaciÛn de Streptococcus beta hemolÌtico del grupo A
de Lancefield, ya que, a diferencia de la mayorÌa de los estreptococos, suelen
ser sensibles a bajas concentraciones de bacitracina.
 Prueba de la optoquina El clorhidrato de etilhidroxicupreÌna (optoquina)
inhibe a muy baja concentraciÛn (5 µg/ml o menos) el crecimiento de S.
pneumoniae, mientras que no afecta al crecimiento de otros Streptococcus
alfa-hemolÌticos.
II. COMPETENCIA (OBJETIVO)
 Reconocer las diversas pruebas bioquímicas utilizadas para bacterias gram
positivos.
 Entender los fundamentos para la realización de estas pruebas asi como la
correcta interpretación de sus resultados.
III. MATERIALES
 Prueba de catalasa: Agua oxigenada al 30%, cultivo bacteriano y
portaobjetos o tubo de ensayo.
 Prueba de coagulasa plasma de conejo cultivo de 18- 24 horas del
microorganismo a probar
 Prueba pyr solución fisiología en tubo 18- 24 horas del microorganismo a
probar
 Agar manitol salado el medio contiene manitol (1%), cloruro de sodio (7,5
%), rojo de fenol y peptonas.
IV. PROCEDIMIENTO
 Prueba de catalasa: En un portaobjetos se depositan una o dos gotas de agua
oxigenada al 30% y se pone en contacto con ella una colonia de los
microorganismos a estudiar. La muestra se recoge con el asa de siembra y se
toma preferentemente el centro de una colonia pura de 18-24 horas.
 Prueba de coagulasa:  se coloca una colonia sospechosa de pertenecer a una
especie de Staphylococcus y se emulsifica en una gota de plasma de conejo.
 Prueba pyr: Realizar un alto inóculo e introducir un disco de PYR.Tiempo y
Tº de incubación: 30 minutos a 35º C.Tiempo de lectura: 5
minutos.Interpretación:Disco rosado o rojo (+)Disco y/o solución amarillo a
incoloro
 Agar manitol salado: Sembrar la cepa e incubar 18 a 24 hs a 35ºC.
 Prueba de bilis esculina: Se inocula el microorganismo en la superficie deun
pico de flauta. Incubar 24 hs
 Prueba de camp:  Inocular un tubo con medio hipurato de sodio con
elmicroorganismo. Incubar 24 hs a 35ºC. Centrifugar. Pipetear 0.8 mlel
sobrenadante. Agregar 0.2 ml de cloruro férrico 7%.Inocular un tubo con 0.4
ml de medio hipurato de sodio con elmicroorganismo. Incubar 2 hs a 35ºC.
Agregar 0.2 ml de Ninhidrina
 Prueba de susceptibilidad a la novobiocina Se inocula el microorganismo en
agar Mueller Hinton según técnica de Kirby-Bauer, utilizando discos de
Novobiocina (5 µg)
 Prueba de la bacitricina: Se inocula el microorganismo en AS según
técnicade Kirby-Bauer utilizando discos de Bacitracina (0.04 U)
 Prueba de la optoquina hacer un inoculo equivalente al tubo 0.5 de la escala
de MC. Farland Hisopar el inoculo en Agar MH sangre al 5% colocar el
disco de optoquina, incubar a 35°C de 20-24 h en lata con vela para
proporcionar 5% de CO2.
V. RESULTADOS 
 Prueba de catalasa: Observar la formación inmediata de una efervescencia
rápida con desprendimiento de burbujas (resultado positivo). Desechar el
portaobjetos en un recipiente con desinfectante. Si se invierte el orden del
método (extender la colonia sobre el agua oxigenada) pueden producirse
falsos positivos.
 Prueba de coagulasa: “arracimamiento” bacteriano en 1 minuto = prueba
(+).Si el resultado es negativo ensayar la producción de coagulasa en tubo
 Prueba pyr: si es disco toma un color rosado o rojo será positivo, si es
amarillo la prueba es negativa.  Algunas especies de Staphylococcus y
losestreptococos del grupo A dan, también, una prueba positiva.
 Agar manitol salado
-Crecimiento y virajes amarillo medio.. Aureus
-Crecimiento sin viraje , rojo medio.S. epidermidis.
La alta concentración de sal inhibe otros microorganismos excepto
enterococos (por lo tanto usar la placa para identificación, no para
aislamiento).
 Prueba de bilis esculina La beta glucosidasa escinde la esculina en glucosay
esculetina. Esta ultima es soluble en el medio y forma uncomplejo de color
negro con Fe 3+ .La hidrólisis de esculina seobserva como un
oscurecimiento del medio (color negro) en 24 hsde incubación a 35ºC,
raramente se requieren 48 hs de incubaciónhasta que la hidrólisis sea
aparente
 Prueba de camp La formación de un precipitado denso y persistente por 10
minutos= prueba (+) Benzoato de sodioLa aparición de un color púrpura
profundo = prueba (+) glicina
 Prueba de susceptibilidad a la novobiocina: Sensible: inhibición del
desarrollo con un diámetro mayor o igual a 16 mm Staphylococcus R
Micrococcus S Consideraciones: Kirby Bauer (Difusión en disco) Inoculo
sin incubación previa Tiempo de lectura: 24 hs. Tº de incubación: 33º a 35º
 Prueba de la bacitricina: Sensible: Cualquier zona de inhibición deldesarrollo
 Prueba de la optoquina sensible mayor a 14 mm halos entre 9-14 deben ser
confirmado con la prueba solubilidad en bilis.

VI. CONCLUSIONES 
 Como primera conclusión tenemos que las pruebas bioquímicas son utilizadas
para la identificación de las bacterias. Estas técnicas, en conjunto, permiten
saber exactamente que bacteria está presente en un medio, por lo cual, son
indispensables en la microbiología para analizar los distintos tipos de bacterias.

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