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UNIVERSIDAD NACIONAL

“SANTIAGO ANTÚNEZ DE MAYOLO”

FACULTAD DE CIENCIAS DEL AMBIENTE


ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

TEMA: INFORME DE LABORATORIO 01

DOCENTE: ING. PALOMINO CADENAS EDWIN JULIO

ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

INTEGRANTES:

• AGUILAR YANAC, Antony German


• ARANDA BILLOTA, Alexis Orlando
• LANDAURO TARAZONA, Haydee Milagros Berenice
• LEYVA HURTADO, Danitza Katherine
• ROSALES CLEMENTE, Jessleing Jazmín

HUARAZ – ANCASH - PERÚ


2021
Contenido
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................................3
MARCO TEÓRICO ..........................................................................................................................4
ANTECEDENTES ........................................................................................................................4
ESTUDIO DE LAS POBLACIONES MICROBIANAS DE LA RIZÓSFERA DEL CULTIVO DE PAPA EN
ZONAS ALTOANDINAS ..........................................................................................................4
MARCO CONCEPTUAL ..............................................................................................................4
1. MICROORGANISMOS ....................................................................................................4
2. CLASIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS .....................................................................5
TAXONOMÍA .........................................................................................................................5
3. MICROORGANISMOS COMUNES EN EL SUELO .............................................................6
4. MÉTODOS DE IDENTIDICACIÓN MICROBIANA ..............................................................7
5. MEDIOS DE CULTIVO DE MICROORGANISMOS ............................................................7
6. MEDIOS DE CULTIVO USADOS EN LA PRÁCTICA DE LABORATORIO ..............................9
MATERIALES Y MÉTODOS ...........................................................................................................11
MATERIALES Y EQUIPO DE LABORATORIO .............................................................................11
PROCEDIMIENTO ....................................................................................................................13
1. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO .....................................................................13
2. PREPARACION DE CULTIVOS CON LAS MUESTRAS DE SUELO .....................................19
3. CONTEO Y RECONOCIMIENTO DE MICROORGANISMOS ............................................25
ANÁLISIS DE DATOS ................................................................................................................26
AREQUIPA...........................................................................................................................26
PUCALLPA ...........................................................................................................................30
RESULTADOS Y DISCUCIÓN ........................................................................................................34
RESULTADO 01 .......................................................................................................................34
RESULTADO 02 .......................................................................................................................35
RESULTADO 03 .......................................................................................................................36
DISCUSIÓN SOBRE LOS POSIBLES MICROGANISMOS PRESENTES EN LAS MUESTRAS DE
SUELO DE AREQUIPA Y PUCALLPA. .....................................................................................37
CONCLUSIONES ..........................................................................................................................42
BIBLIOGRAFIA .............................................................................................................................43
INTRODUCCIÓN

Los microorganismos cumplen un rol muy importante dentro del ecosistema del suelo, si bien es

cierto que no todos los microorganismos son beneficiosos de acuerdo a los efectos que provocan

a otros organismos o al ecosistema en sí, existe una infinidad que resultan provechosos para el

equilibrio ecológico, por ello es necesario el iniciarnos en la identificación de estos, para lograr

diferenciarlos en laboratorio.

A manera de iniciación, solo se aplicará el método basado en criterios morfológicos, el trabajo de

identificación será menos preciso, pero, servirá de guía para futuras aplicaciones dentro del

trabajo en laboratorio, ya que el poder diferenciar o manejar ciertos conceptos de forma

constructiva, orienta mejor el trabajo práctico, debido a esto el informe tiene como objetivo

principal el identificar a los diversos microorganismos que comúnmente existen en el suelo, para

ello primero se van a preparar cultivos usando muestras obtenidas de Arequipa y Pucallpa , luego

se van a organizar y analizar los datos y finalmente se van comparar los resultados, para tener una

idea las especies o géneros que abundan en el suelo, en que proporción se encuentran y que

benefician al suelo.
MARCO TEÓRICO

ANTECEDENTES

ESTUDIO DE LAS POBLACIONES MICROBIANAS DE LA RIZÓSFERA DEL


CULTIVO DE PAPA EN ZONAS ALTOANDINAS

Se evaluaron las poblaciones de microorganismos en la rizósfera del cultivo de papa en dos

diferentes regiones Altoandinas. Se encontró que la población de bacterias totales en la rizósfera

de las regiones muestreadas siempre fue mayor que la población de hongos; Puno registra

mayores poblaciones de bacterias totales, lo que se puede deber entre otros factores al pH del

suelo que es más alcalino que en Huancavelica. Se observa que las poblaciones de Actinomicetos

y Azotobacter spp. están influenciadas por el pH y por el tipo de fertilización inorgánica.

Asimismo, las poblaciones de Bacillus spp. son más abundantes en la región de pH neutro, sin

embargo, su presencia en la región de pH ácido confirma su adaptación a estas condiciones.

MARCO CONCEPTUAL

1. MICROORGANISMOS

Son organismos unicelulares, considerados esenciales para la vida debido a su amplia diversidad

y distribución en el planeta. Desde el descubrimiento de los primeros seres microscópicos se han

realizado diferentes clasificaciones de acuerdo al tema de estudio, por ejemplo, dividirlos en dos

grandes grupos: benéficos y no benéficos según el impacto que causan en otros seres vivos o el

ambiente.

En muchas investigaciones se utilizan estos microorganismos como modelo de estudio para

entender fenómenos específicos como la producción eficiente de algún compuesto, mecanismos

de adaptación e interacción en el medio ambiente, así como estudiar problemas de salud.


2. CLASIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS

BACTERIAS.
Se trata de microorganismos unicelulares, es decir, poseen una única célula y un material genético

no organizado en el interior de un núcleo. Se reproducen por bipartición y son capaces de donar

y recibir material genético mediante transformación, transducción o conjugación. Existen varias

formas bacterianas, pudiendo ser redondeadas (cocos), en forma de hélice (espirilos) o pequeños

y curvados (vibrios).

HONGOS
Se trata de microorganismos eucariotas unicelulares o pluricelulares. Se reproducen por

gemación, es decir, el progenitor emite una protuberancia que va creciendo hasta que esté

preparada para separarse. También pueden reproducirse mediante esporulación o rotura en

fragmentos. Pueden ser levaduras (unicelulares) u hongos con hifas (pluricelulares).

PROTOZOO
Los protozoos, también conocidos como protozoarios, son un conjunto de organismos protistas y

unicelulares microscópicos que habitan ambientes húmedos o acuáticos, siendo muchas veces

parásitos de otros organismos. https://enciclopediaonline.com/es/protozoos/

VIRUS
Se trata de formas acelulares que por lo general están formadas por una cápside proteica con o sin

envoltura y una molécula de ADN o ARN (nunca los dos). Son microorganismos parásitos

obligados, es decir, necesitan infectar una célula (animal o vegetal) para poder reproducirse y

sobrevivir.

TAXONOMÍA

En 1978, Carl R. Woese propuso elevar los tres tipos de células a un nivel por encima del reino,

llamado dominio y de ahí surgió el sistema de clasificación de tres dominios que se conoce en la

actualidad y que comprende:

• Bacteria (procariotas unicelulares cuya pared celular contiene peptidoglucano)

• Arquea (procariotas unicelulares cuya pared celular no contiene peptidoglucano)

• Eukarya (todos los eucariotas)


Los virus no son asignados a ningún reino ya que ellos son microorganismos acelulares que

comparten sólo unas pocas características de seres vivientes.

3. MICROORGANISMOS COMUNES EN EL SUELO

El suelo es un gran ecosistema, así mismo, su población es bastante compleja. Dentro de la

población microbiana se tienen bacterias, actinomicetos, cianobacterias, hongos, algas,

protozoarios y virus. En general, los microorganismos más abundantes en el suelo son las

bacterias, aunque los hongos (por su mayor tamaño) representan alrededor del 70% de la biomasa.

Además, la rizosfera, volumen de suelo cerca de las raíces que es afectada por las sustancias

orgánicas que aquellas raíces liberan, es la más poblada del suelo.

La actividad microbiana del suelo es bastante diversa y hace parte de los ciclos biogeoquímicos

de varios elementos (C, N, O, P y S, entre otros). Como actividades específicas en el suelo se

incluyen la descomposición de la materia orgánica y de materiales orgánicos adicionados a éste,

la fijación de N2 atmosférico, la descomposición de minerales primarios, la mineralización del

N-orgánico (nitrificación), la solubilización de P, la oxidación de S, la producción de antibióticos,


la formación de asociaciones simbióticas para mejorar la captación de nutrientes por parte de las

plantas, la protección de plantas contra patógenos,

la descomposición de contaminantes (biorremediación), etc.

4. MÉTODOS DE IDENTIDICACIÓN MICROBIANA

Los métodos más utilizados para la identificación microbiana, los podemos clasificar en:

• Métodos basados en criterios morfológicos


• Métodos basados en tinción diferencial
• Métodos basados en pruebas bioquímicas
• Métodos basados en tipificación con fagos
• Métodos basados en pruebas serológicas
• Métodos basados en detección molecular

Para desarrollar la identificación de microrganismos para esta práctica de laboratorio se usará el


Método basado en criterios morfológicos.

Métodos basados en criterios morfológicos


Los rasgos morfológicos (estructurales) han ayudado a los taxonomistas por muchos años a
clasificar organismos. Los organismos superiores tienen rasgos anatómicos tan diferentes que
pueden ser fácilmente utilizados en su clasificación, pero con respecto a los microorganismos,
éstos lucen bajo el microscopio tan similares que se dificulta su clasificación. Es decir, que estos
microorganismos que se ven tan parecidos bajo un microscopio, pueden diferir en propiedades
bioquímicas, fisiológicas y/o serológicas. Sin embargo, aun cuando la morfología celular dice
poco sobre las relaciones filogenéticas, sigue siendo útil para la identificación bacteriana. Por
ejemplo: la presencia de endosporas y su localización resulta de mucha utilidad en la
identificación de bacilos esporulados.

5. MEDIOS DE CULTIVO DE MICROORGANISMOS

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en
condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son
esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación,
preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los
resultados obtenidos.
En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden
ser preparados en forma líquida o en forma sólida. Usualmente para preparar un medio sólido, se
parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la
sílicagel.

COMPONENTES DE UN MEDIO DE CULTIVO


Los componentes de un medio de cultivo dependen del microorganismo que se pretende cultivar
y de la finalidad del cultivo.

• AGUA

Suele utilizarse destilada. En ocasiones específicas puede utilizarse agua corriente, pero debe
evitarse porque ciertos cationes (como Ca2+ o Mg2+) pueden formar sales insolubles con otros
componentes del medio (como los fosfatos) sobre todo, durante la esterilización.

• SUSTANCIAS ORGÁNICAS

Se pueden utilizar sustancias puras o mezclas de sustancias orgánicas Como sustancias puras más
comunes se encuentran los azúcares: Frecuentemente son utilizados como fuente de carbono y
energía por los microorganismos.

• PEPTONAS

Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y sales minerales, que se obtienen
por digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja caseína carne, etc.).
Las peptonas son muy ricas en pépticos y aminoácidos, pero pueden ser deficientes en
determinadas vitaminas y sales minerales.

• SUSTANCIAS INORGÁNICAS

Sus funciones en un medio de cultivo pueden ser poco específicas, (como el NaCl para ajustar la
osmolaridad del medio) o pueden ser requeridas específicamente en el metabolismo (como las
sales de K+, Mg2+, Ca2+, Fe3+, etc.).

• AGENTE SOLIDIFICANTES: AGAR-AGAR

Se añaden para preparar medios de cultivo sólidos y semisólidos. El agar-agar es el agente


solidificante más común. El agar-agar es un polisacárido de galactosa y galactomanano que se
obtiene de las algas rojas (Echema, Gelidium, Gracilaria). Contiene un 70% de agarosa y un 30%
de agaropectina. El agar-agar es el agente solidificante más utilizado. Su composición química es
indefinida y solidifica con mayor dificultad a medida que desciende el pH. Es insoluble en agua
fría, pero se funde y solubiliza en agua hirviendo y solidifica a 45°C. Forma geles transparentes
muy estables y es degradado por muy pocas bacterias.
CLASIFICACIÓN
Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en:

✓ Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen


animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adición de minerales
y otras sustancias. En ellos

no se conocen todos los componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.

✓ Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una composición química
definida cualitativamente y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de
investigación.

De acuerdo al uso del medio de cultivo, éstos se clasifican en:

✓ Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el crecimiento de un


tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número de
microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustancias inhibidoras
del crecimiento de los microorganismos con excepción de los que se quieren cultivar.
✓ Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser
medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos específicos.
✓ Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos derivados
de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningún tipo de
sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar características fisiológicas
de los microorganismos.

6. MEDIOS DE CULTIVO USADOS EN LA PRÁCTICA DE LABORATORIO

AGAR MACCONKEY: Es uno de los medios de cultivo más utilizados en laboratorio


de microbiología debido a la variedad de bacilos Gram negativos que crecen en este medio
expresan características fenotípicas que ayudan a un diagnóstico presuntivo de la especie en
cuestión. Por ejemplo, el tamaño, color, consistencia y olor de las colonias, son algunas de las
características que pueden orientar.

En este medio las especies de Escherichia coli, Klebsiella sp y Enterobacter sp producen


colonias rosadas fuertes, rodeadas de una zona de bilis precipitada.

Clasificación:
1. Consistencia Sólida
2. Medio Complejo: Composición de sales biliares y cristal violeta.
3. Selectivo y diferencial: Es un medio selectivo porque permite el aislamiento
exclusivo de bacilos Gram negativos. Y es también diferencial porque permite
distinguir entre bacilos fermentadores y no fermentadores de la lactosa.

RELACIÓN DEL AGAR MCCONKEY CON EL COMPORTAMIENTO


MICROBIANO

El fundamento de este medio y su relación con los comportamientos microbianos parte de la


descripción de sus componentes, pues cada uno posee una finalidad que determina una propiedad
del mismo.

Sales biliares y cristal violeta

Estos elementos se encargan de inhibir el crecimiento de bacterias Gram positivas y algunos


bacilos Gram negativos exigentes. A su vez favorece el desarrollo de los bacilos Gram negativos
que no son afectados por estas sustancias. Por ello es un medio selectivo.

Peptonas, polipectonas y lactosa

La lactosa es el punto clave para que el medio sea un medio diferencial, pues los microorganismos
que poseen la capacidad para fermentar la lactosa desarrollaran colonias rosadas fuertes.

Algunas bacterias pueden fermentar la lactosa lentamente o débilmente, desarrollando colonias


color rosado pálido y siguen siendo lactosa positiva.

Las que no fermentan la lactosa utilizan las peptonas como fuente de energía, produciendo
amoníaco, alcalinizando el medio. Por ello las colonias que se originan son incoloras o
transparentes.

Indicador de pH

La fermentación de la lactosa genera la producción de ácidos mixtos. Los mismos acidifican el


medio a un pH por debajo de 6,8. Esto hace que el indicador de pH vire hacia a una tonalidad
rosada intenso. La intensidad del color puede variar dependiendo el pH final.

Agua destilada, cloruro de sodio y agar


Por otra parte, contiene agua destilada y cloruro de sodio que le dan la hidratación y equilibrio
osmótico al medio. Finalmente, el medio contiene agar, que es la base que proporciona la
consistencia de medio sólido.

El medio agar MacConkey preparado debe tener un pH final ajustado a 7,1 ± 0,2

Agar Mac Conkey. Recuperado de: https://www.lifeder.com/agar-macconkey/

AGAR DE RECUENTO EN PLACA (Plate-Count-Agar): se utiliza para la


determinación de los recuentos en placa de microorganismos a partir de muestras. Este medio fue
formulado y descrito por Buchbinder et al. El agar para recuento en placa también es adecuado
para determinar el recuento bacteriano. La triptona proporciona aminoácidos y otras sustancias
nitrogenadas complejas y el extracto de levadura aporta complejos de vitamina B para el
crecimiento de microorganismos. La dextrosa es una fuente de carbono y energía. El agar es un
agente solidificante. APHA recomienda la técnica de vertido en placa. Las muestras se diluyen y
las diluciones apropiadas se colocan en placas de Petri. Se añade medio fundido estéril (enfriado
a 45ºC) a estas placas y las placas se giran suavemente para asegurar una mezcla uniforme de la
muestra con el medio.

AGAR SABOURAUD: Se utiliza para el aislamiento y cultivo de hongos. Las peptonas en


Sabouraud Glucose Agar son fuentes de factores de crecimiento nitrogenoso, la glucosa aporta
una fuente de energía para el crecimiento de microorganismos. La alta concentración de glucosa
presenta una ventaja para el crecimiento de hongos (estables osmóticamente), mientras que la
mayoría de las bacterias no tolera la alta concentración de azúcar. Además, el bajo pH es óptimo
para los hongos, pero no para muchas bacterias.

MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIALES Y EQUIPO DE LABORATORIO

MATERIALES
IMAGEN REFERENCIAL NOMBRE UTILIDAD

SIRVEN PARA DOSIFICAR


PIPETAS
LÍQUIDO CON PRESICIÓN
PARA CONTENER,
FIOLAS DE 1L ALMACENAR Y MEDIR
LÍQUIDOS

RECIPIENTE NO HERMÉTICO
PLACA PETRI PARA OBSERVACIÓN DE
MUESTRAS

PARA CALENTAR SUSTANCIAS


MECHERO BUNSEN
Y ESTERILIZAR

BOTELLAS DE VIDRIO RECIPIENTE

EQUIPO

RECIPIENTE HERMÉTICO,
PARA REACCIONES, COCIÓN
AUTOCLAVE
O ESTERILIZACIÓN A PRESIÓN
ALTA

PARA SECAR Y ESTERILIZAR


ESTUFA
DIFERENTES RECIPIENTES DE
VIDRIO O METAL
PARA MEDIR LA MASA DE
BALANZA
LOS OBJETOS

REACTIVOS

PROCEDIMIENTO
1. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO AGAR MACCONKEY
• Para 600 ml de Agar MacConkey se debe pesar 30g del medio deshidratado. Para cada
fiola.

• Se vierte lo pesado en un matraz grande o una fiola de un litro de capacidad, en total se


deben verter 600 ml de agua destilada para los 30g de agar. Primero se vierte 500 ml de
agua, y agitamos.
• Después de agitar por unos minutos, agregamos los restantes 100 ml de agua destilada
con la finalidad de limpiar la boca estrecha de la fiola y toda la mezcla quede en lo más
hondo y completa.

• Taponamos la boca de fiola con algodón enrollado. Y cubrimos con papel para su
posterior esterilización.

• Se coloca la fiola en la autoclave y se esteriliza hasta llegar a 121°C, por unos 15 a 20


minutos. Luego la temperatura baja pero aún sigue estando bastante caliente, se
mantiene a uno 60°C como mínimo, todo el proceso de subida, proceso de esterilización
y bajada de temperatura tomó al menos una hora y treinta minutos.
• Para su posterior uso, se deja enfriar ligeramente en baño maría hasta los 45°C al
cálculo, no bajarle más la temperatura porque empieza a solidificarse.

PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO AGAR DE RECUENTO EN PLACA

• Para 600 ml de Agar Recuento se debe pesar 13.5g del medio deshidratado. Para cada
fiola.

• Se vierte lo pesado en un matraz grande o una fiola de un litro de capacidad, en total se


deben verter 600 ml de agua destilada para los 13.5g de agar. Primero se vierte 500 ml
de agua, y agitamos.
• Después de agitar por unos minutos, agregamos los restantes 100 ml de agua destilada
con la finalidad de limpiar la boca estrecha de la fiola y toda la mezcla quede en lo más
hondo y completa.

• Taponamos la boca de fiola con algodón enrollado. Y cubrimos con papel para su
posterior esterilización.

• Se coloca la fiola en la autoclave y se esteriliza hasta llegar a 121°C, por unos 15 a 20


minutos. Luego la temperatura baja pero aún sigue estando bastante caliente, se
mantiene a uno 60°C como mínimo, todo el proceso de subida, proceso de esterilización
y bajada de temperatura tomó al menos una hora y treinta minutos.
1. Para su posterior uso, se deja enfriar ligeramente en baño maría hasta los 45°C al
cálculo, no bajarle más la temperatura porque empieza a solidificarse.

PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO AGAR SABUORAUD

• Para 600 ml de Agar Recuento se debe pesar 39g del medio deshidratado. Para cada
fiola.

• Se vierte lo pesado en un matraz grande o una fiola de un litro de capacidad, en total se


deben verter 600 ml de agua destilada para los 39g de agar. Primero se vierte 500 ml de
agua, y agitamos.
• Después de agitar por unos minutos, agregamos los restantes 100 ml de agua destilada
con la finalidad de limpiar la boca estrecha de la fiola y toda la mezcla quede en lo más
hondo y completa.

• Taponamos la boca de fiola con algodón enrollado. Y cubrimos con papel para su
posterior esterilización.

• Se coloca la fiola en la autoclave y se esteriliza hasta llegar a 121°C, por unos 15 a 20


minutos. Luego la temperatura baja pero aún sigue estando bastante caliente, se
mantiene a uno 60°C como mínimo, todo el proceso de subida, proceso de esterilización
y bajada de temperatura tomó al menos una hora y treinta minutos.
• Para su posterior uso, se deja enfriar ligeramente en baño maría hasta los 45°C al
cálculo, no bajarle más la temperatura porque empieza a solidificarse.

2. PREPARACION DE CULTIVOS CON LAS MUESTRAS DE SUELO

• Se reparten las 10 muestras de suelo, una a cada estudiante para realizar los cultivos.

MUESTRAS DE SUELO
LUGAR AYACUCHO PUCALLPA
AY04 19CA
AY40 10CA
CÓDIGO AY24 4CA
AY46 8CA
AY01 6CA

INDICACIONES PREVIAS
• Se dan las indicaciones para realizar la práctica con cada muestra.
✓ Pesar 10gr de cada muestra.
✓ Mezclar los 10 gr de tierra con 90ml de agua peptonada en una botella
(𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎: 10−1 ).
✓ Extraer 10ml de la mezcla anterior y verter en 90ml de agua contenidos en un nuevo
recipiente.
✓ Seguir el procedimiento hasta lograr una concentración de la muestra inicial de 10−4 .

✓ Se hará uso de 6 placas Petri, cada par destinado a cada medio (2 para el agar
MacConkey, 2 para el agar Recuento y dos para el agar Sabouraud).

✓ Para cada medio solo se van a usar muestras de concentración 10−1 y 10−4 .

ROTULACIÓN DE INSTRUMENTOS

• Después de las indicaciones generales se procede a marcar códigos en los instrumentos


(botellas de mezcla y placas Petri) con el fin de diferenciarlos entre sí. Para las botellas
se considera el código de cada muestra se suelo y la concentración de la mezcla y para
las placas se hace referencia a la muestra de suelo, el tipo de medio y la concentración
de la mezcla.

MUESTRA PRINCIPAL A
AY01
CARGO
MACCONKEY MC
CÓDIGO DE TIPO DE
RECUENTO RTO
AGAR
SABOURAUD AS

BOTELLAS
PLACAS PETRI

PRODUCCIÓN DE CULTIVOS
• Después de tener todos los recipientes rotulados, se pasa a realizar la mezcla de cada
muestra de suelo con 90ml de agua.
• Luego después de dejar un tiempo de reposo, se extrae 10ml de la mezcla AY01 10−1 y
se mezcla con otros 90ml de agua (𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎: 10−2 ), así sucesivamente hasta
lograr una concentración de la muestra dentro de la mezcla de 10−4 .

• Se pasa a seleccionar solo las botellas AY01 10−1 Y AY0110−4 , y con ayuda de una pipeta
se llenan las placas con 3ml de cada muestra de acuerdo con lo indicado anteriormente (código).
• Después de terminar el procedimiento para las 10 muestras de suelo, se organizaron las placas en
3 grupos de acuerdo al tipo de agar (20 placas por cada tipo).

• Se llenan los medios de cultivo a cada placa (20 ml aprox. Por cada placa), comenzando con el
agar MacConkey.
• Luego se pasa a llenar las placas destinadas al medio Recuento.

• Finalmente se llenas las placas correspondientes al agar Sabouraud

• Después de terminar con el proceso, se organizan las placas, se envuelven y se dejan en reposo
un mínimo de 3 días, las que corresponden a MacConkey y Sabouraud ingresan a la estufa de
laboratorio, y las correspondientes al agar Recuento se dejan a temperatura ambiente.
Nota:
Todo el procedimiento debe llevarse a cabo bajo esterilización y desinfección constante para
evitar la contaminación de los cultivos. Agentes empleados:
- Alcohol
- Calor (fuente: mechero)

3. CONTEO Y RECONOCIMIENTO DE MICROORGANISMOS

ORGANIZACIÓN DE DATOS
• Después del tiempo necesario de reposo,
se procede a desenvolver las placas y se
ordenan de acuerdo al código de la
muestra, el medio de cultivo y la
concentración de la muestra.

Observación: Durante el proceso de organización de las placas, no se


encontraron algunos cultivos, debido a esto faltaran algunos datos en
la tabla de conteo.

• Se comienza a realizar el conteo de


unidades formadoras de colonia “ufc” usando las siguientes técnicas:
✓ Conteo por cuadrantes: En el caso de que la cantidad de ufc sea alta pero observable
(puede ser en 10−1 o 10−4 ), se divide la placa en 4 cuadrantes y se cuenta uno de
ellos, dicha cantidad se multiplica por 4.
✓ Conteo en la placa 10−1: Si existen pocas ufc, se considera el número de ufc que se
cuentan; si la cantidad es un poco mayor se puede usar el conteo por cuadrantes.
✓ Conteo en la placa 10−4 : El conteo, es más sencillo, debido a que las ufc se forman en
menor cantidad por la concentración de la muestra, se cuentan las ufc y se multiplica
por la inversa(104 ).
• Después de realizar el conteo, se organiza la siguiente tabla:

Código de Descripción
LUGAR MC RTO AS
muestra general
Bacillus
AY04 ND 1,8 × 106 40
Actinomycetos
AREQUIPA
Bacillus
AY40 ND 2,264 × 107 350
Actinomycetos
No hay
AY24 6 × 105 1,2 × 105 Aspergillus
muestra
Aspergillus
AY46 ND 2,04 × 106 4 × 104 Rhizopus
penicillium
Actinomycetos
No hay Sarcinas
AY01 1,2 × 106 0,4 × 105
muestra Bacillus
Aspergillus
Sarcinas
Aspergillus
19CA 190 9 × 104 1,32 × 103
Actinomycetos
Rhizopus
10CA 940 2,9 × 105 104 Aspergillus
Aspergillus
No hay
PUCALLPA 4CA 1 × 107 9 × 104 Rhizopus
muestra
Bacillus
Aspergillus
Bacillus
8CA 510 1,06 × 106 850
Actinomycetos
penicillium
6CA 740 3,6 × 105 4 × 104 Sarcinas
Observaciones:

ND: NO DETERMINADO, no se puede contar.

No hay muestra: placas faltantes

CLASIFICACIÓN DE MICROORGANISMOS DE ACUERDO AL MEDIO DE CULTIVO

• Los tres medios de cultivo están condicionados para la formación de colonias de cierto
tipo de microrganismo en específico, debido esto con algo de orientación es más
sencillo reconocer que tipo de microorganismo estamos observando:

✓ Agar MacConkey: coliformes


✓ Agar Recuento: bacterias totales (gérmenes)
✓ Agar Sabouraud: hongos y levaduras

ANÁLISIS DE DATOS

AREQUIPA
• A continuación, la distribución de datos de cada tipo de microorganismo de las
muestras de Arequipa
AREQUIPA
TOTAL DE
MUESTRAS COLIFORMES BACTERIAS TOTALES HONGOS Y LEVADURAS MICROORGANISMOS
POR MUESTRA
AY04 ND 1800000 40 1800040
AY40 ND 22640000 350 22640350
AY24 NO HAY MUESTRA 600000 120000 720000
AY46 ND 2040000 40000 2080000
AY01 NO HAY MUESTRA 1200000 40000 1240000
TOTAL ND 28280000 200390 28480390

Para las siguientes gráficas:

1 BACTERIAS TOTALES
2 HONGOS Y LEVADURAS
Nota: no se consideran coliformes, debido a que no hay datos precisos.

MUESTRA 1: AY04

TOTAL DE MICROORGANISMOS: 1800040


COLIFORMES:ND

BACTERIAS TOTALES: 1,8 × 106


HONGOS Y LEVADURAS: 40

AY01-MICROORGANISMOS TOTALES
En la muestra AY04 las
bacterias representan casi el
100% de microorganismos
100% 1 existentes, en tanto a los hongos
2 no representan una cantidad
0%
significativa del total.

MUESTRA 2: AY 40
AY40-MICROORGANISMOS
TOTAL DE MICROORGANISMOS:
22640350 TOTALES
COLIFORMES:ND 22640000;
100%
BACTERIAS TOTALES: 2,264 × 107 1
2
HONGOS Y LEVADURAS: 350
350; 0%

En la muestra AY40 las bacterias


representan casi el 100% de microorganismos existentes, en tanto a los hongos no representan
una cantidad significativa del total.
MUESTRA 3: AY24
TOTAL DE MICROORGANISMOS: 720000

COLIFORMES:ND

BACTERIAS TOTALES: 6 × 105

HONGOS Y LEVADURAS: 1,2 × 105


AY24-MICROORGANISMOS
TOTALES

En la muestra AY24 las bacterias


1
representan el 83% de microorganismos 83% 17%
existentes, en tanto a los hongos 2
representan el 17% del total.

MUESTRA 4: AY46
TOTAL DE MICROORGANISMOS: 2080000

COLIFORMES:ND

BACTERIAS TOTALES: 2,04 × 106

HONGOS Y LEVADURAS: 4 × 104

AY46-MICROORGANISMOS En la muestra AY46 las bacterias


TOTALES representan el 98% de microorganismos
existentes, en tanto a los hongos
1
representan el 2% del total.
98%
2% 2

MUESTRA 5: AY 01
TOTAL DE MICROORGANISMOS: 1240000

COLIFORMES:ND

BACTERIAS TOTALES: 1,2 × 106


HONGOS Y LEVADURAS: 0,4 × 105

AY01-MICROORGANISMOS
En la muestra AY01 las bacterias
TOTALES representan el 97% de microorganismos
existentes, en tanto a los hongos
3% representan el 3% del total.
1
2
97%

RESULTADO 01
TOTAL DE LAS MUESTRAS DE AREQUIPA

BACTERIAS TOTALES-AREQUIPA

6 28280000

5 1200000
MUESTRAS

4 2040000

3 600000

2 22640000

1 1800000

0 5000000 10000000 15000000 20000000 25000000 30000000


UFC BT/GSE

HONGOS Y LEVADURAS EN LAS MUESTRAS DE SUELO DE AREQUIPA

HONGOS Y LEVADURAS-AREQUIPA

6 200390

5 40000
MUESTRAS

4 40000

3 120000

2 350

1 40

0 50000 100000 150000 200000 250000


UFC HL/GS
RESULTADO 03

PUCALLPA

• A continuación, la distribución de datos de cada tipo de microorganismo de las


muestras de Pucallpa.

PUCALLPA

TOTAL DE
MUESTRAS COLIFORMES BACTERIAS TOTALES HONGOS Y LEVADURAS MICROORGANISMOS POR
MUESTRA

19CA 190 90000 1320 91510


10CA 940 290000 10000 300940
4CA 0 10000000 90000 10090000
8CA 510 1060000 850 1061360
6CA 740 360000 40000 400740
TOTAL 2380 11800000 142170 11944550

Para las siguientes gráficas:

1 COLIFORMES
2 BACTERIAS TOTALES
3 HONGOS Y LEVADURAS

MUESTRA 1: 19CA

TOTAL DE MICROORGANISMOS: 91510

COLIFORMES: 190

BACTERIAS TOTALES: 9 × 104

HONGOS Y LEVADURAS: 1,32 × 103

19CA-MICROORGANISMOS TOTALES
En la muestra 19CA las
bacterias representan el 98%
aproximadamente del total, en
0%
2%
1 tanto a los hongos representan el
2 2% aproximado del total y los
coliformes, no representan un
3
98% porcentaje significativo.
MUESTRA 2: 10CA
TOTAL DE MICROORGANISMOS: 300940

COLIFORMES: 940

BACTERIAS TOTALES: 2,9 × 105

HONGOS Y LEVADURAS: 104

10CA-MICROORGANISMOS
En la muestra 10CA las bacterias
TOTALES
representan el 97%
aproximadamente del total, en tanto
0%
3% 1
a los hongos representan el 3%
aproximado del total y los
2
coliformes, no representan un
97% 3 porcentaje significativo.

MUESTRA 3: 4CA

TOTAL DE MICROORGANISMOS: 10090000

COLIFORMES: NO HAY MUESTRA

BACTERIAS TOTALES: 1 × 107

HONGOS Y LEVADURAS: 9 × 104


4CA-MICROORGANISMOS
En la muestra 4CA las bacterias TOTALES
representan el 99% del total, en tanto a
los hongos representan el 1% del total, 1%
0% 1
se consideró 0 en coliformes debido a 2
que no había la muestra. 99% 3

MUESTRA 4: 8CA
TOTAL DE MICROORGANISMOS: 1061360

COLIFORMES:510

BACTERIAS TOTALES: 1,06 × 106


HONGOS Y LEVADURAS: 850
8CA-MICROORGANISMOS TOTALES
En la muestra 8CA las
bacterias representan el
100% aproximadamente del
0%
1 total, en tanto a los hongos y
2 los coliformes, no
representan un porcentaje
3
100% significativo del total.

MUESTRA 5: 6CA
TOTAL DE MICROORGANISMOS: 400740

COLIFORMES: 740

BACTERIAS TOTALES: 3,6 × 105

HONGOS Y LEVADURAS: 4 × 104

6CA-MICROORGANISMOS TOTALES
En la muestra 6CA las
bacterias representan el
90% aproximadamente
0%
10%
1 del total, en tanto a los
2
hongos representan el
10% aproximado del total
3
90% y los coliformes, no
representan un porcentaje
significativo del total.

MUESTRAS TOTALES DE PUCALLPA


COLIFORMES EN LAS MUETRAS DE SUELO DE PUCALLPA

COLIFORMES -PUCALLPA
6
5
MUESTRAS

4
3
2
1

0 500 1000 1500 2000 2500


UFC C/GS
BACTERIAS TOTALES EN LAS MUESTRAS DE SUELO DE PUCALLPA

BACTERIAS TOTALES -PUCALLPA

5
MUESTRAS

0 2000000 4000000 6000000 8000000 10000000 12000000 14000000


UFC BT/GS

HONGOS Y LEVADURAS EN LAS MUESTRAS DE SUELO DE PUCALLPA

HONGOS Y LEVADURAS-PUCALLPA

5
MUESTRAS

0 20000 40000 60000 80000 100000 120000 140000 160000


UFC HL/GS
RESULTADOS Y DISCUCIÓN

RESULTADO 01

En las 5 muestras de Arequipa no se pueden determinar la existencia de coliformes, en tanto a


los microorganismos que más abundan son las bacterias, debido a que superan por mucho al
número de hongos que existen en las muestras.

22640000
MUESTRAS DE AREQUIPA

2040000
1800000

1200000
600000
120000

40000

40000
350
40
0

0
AY04 AY40 AY24 AY46 AY01

En Arequipa existe un promedio de bacterias totales de:

• 5656000 ufc bt/gs

En Arequipa existe un promedio de hongos y levaduras totales de:

• 40078 ufc hl/gs

UFC/GS-AREQUIPA
1.2

0.8

0.6

0.4

0.2

0
RESULTADO 02

En 4 muestras de 5 de las muestras que pertenecen a Pucallpa se pudo verificar la existencia de


coliformes, si bien no representan un porcentaje, esto indica contaminación suelo y problemas
de salubridad local. En tanto al porcentaje de bacterias, estas son las que mas abundan en todas
las muestras, seguidas por los hongos, los cuales se encuentran en un porcentaje más bajo.

MUESTRAS DE PUCALLPA

10000000

1060000

360000
290000
90000

90000

40000
10000
1320
190

510
940

850

740
19CA 10CA 4CA 8CA 6CA

En Pucallpa existe un promedio de coliformes totales de:

• 595 ufc CL/gs

En Pucallpa existe un promedio de bacterias totales de:

• 52360000 ufc bt/gs

En Pucallpa existe un promedio de hongos y levaduras totales de:

• 28434 ufc HL/gs

UFC/GS-PUCALLPA
6000000

5000000

4000000

3000000

2000000

1000000

0
UFC CL/GS EN UFC BT/GS UFC BT/GS UFC HL/GS UFC HL/GS
PUCALLPA EN AREQUIPA EN PUCALLPA EN AREQUIPA EN PUCALLPA
RESULTADO 03

MEDIO DE
LUGAR MICROORGANISMO PROMEDIO
CULTIVO
MACCONKEY COLIFORMES 0
BACTERIAS 5656000 ufc bt/gs
RECUENTO
AREQUIPA TOTALES
HONGOS Y 40078 ufc hl/gs
SABOURAUD
LEVADURAS
595 ufc CL/gs
MACCONKEY COLIFORMES
BACTERIAS 52360000 ufc bt/gs
PUCALLPA RECUENTO
TOTALES
HONGOS Y 28434 ufc HL/gs
SABOURAUD
LEVADURAS

COLIFORMES

COLIFORMES Pucallpa tiene la existencia


de coliformes en sus
700 muestras de suelo, en tanto
600 en Arequipa no se determina
500 la existencia de estos
400 microorganismos, a lo se
300 puede deducir que el
200 Pucallpa no hay buen
100
manejo de las aguas
residuales.
0
UFC CL/GS EN AREQUIPA UFC CL/GS EN PUCALLPA

BACTERIAS TOTALES

Existe una mayor


BACTERIAS TOTALES cantidad de bacterias
6000000 en las muestras de
suelo de Arequipa, se
5000000
puede decir por tanto
4000000 que el suelo de
Arequipa tiene una
3000000
mayor calidad de
2000000 nutrientes que el suelo
Pucallpa.
1000000

0
UFC BT/GS EN AREQUIPA UFC BT/GS EN PUCALLPA
HONGOS Y LEVADURAS

HONGOS Y LEVADURAS El suelo de Arequipa


tiene una cantidad mayor
45000
de hongos y levaduras en
40000
su suelo, lo que
35000
representa una mejor
30000
mineralización del suelo.
25000
20000
15000
10000
5000
0
UFC HL/GS EN AREQUIPA UFC HL/GS EN PUCALLPA

DISCUSIÓN SOBRE LOS POSIBLES MICROGANISMOS PRESENTES EN LAS


MUESTRAS DE SUELO DE AREQUIPA Y PUCALLPA.

COLIFORMES PRESENTES EN EL SUELO

Se puede encontrar principalmente coliformes fecales.


El agar Mac Conkey es un agar selectivo para algunas bacterias gran negativas y se pueden
distinguir las bacterias que fermentan lactosa y las que no. Este medio incluye peptonas digeridas,
sales biliares, lactosa, rojo neutro y violeta cristal, las sales biliares y el violeta cristal inhiben las
bacterias gran positivas.

Las bacterias que fermentan lactosa producen ácidos que precipitan las sales biliares y provocan
un color rojo del indicador rojo neutro.
Se sabe que, en el Agar Mac Conkey, las especies de Escherichia coli, Klebsiella
sp y Enterobacter sp producen colonias rosadas fuertes, rodeadas de una zona de bilis
precipitada.

Ilustración 3 E. COLI EN AGAR Ilustración 2KLEBSIELLA EN AGAR Ilustración 1ENTEROBACTER EN AGAR


MACCONKEY MACCONKEY MACCONKEY

BACTERIAS PRESENTES EN EL SUELO

Los Actinomycetos (nocardia,Arthrobacter, streptomycetos) son los más abundantes en el suelo,


resisten condiciones secas y pueden sobrevivir en suelos desérticos. En la rizosfera, que es la
región del suelo donde abundan las raíces de las plantas, también están presentes los rhizobium y
pseudomonas.

PRINCIPALES HONGOS Y LEVADURAS PRESENTES EN EL SUELO


Especies de los géneros Absidia, Cunninghamella, Gongronella, Mucor, Mortierella o Rhizopus
son muy comunes en el suelo y se encuentran en casi todos los estudios de hongos de suelo.

AREQUIPA
Tipo de 𝟏𝟎−𝟏 𝟏𝟎−𝟒 Posibles
Muestras Descripción
Microorganismo Microrganismos

Antibiosis

Actinomycetos
AY04
bacillus

BACTERIAS
TOTALES

Actinomycetos Antibiosis
AY40
bacillus
NO HAY FOTO
AY24 NO HAY FOTO REFERENCIAL
REFERENCIAL

AY46 Actinomycetos

Pequeños puntos muy redondeados


Sarcinas color perla
AY01
Actinomycetos Producen Antibiosis

AY04 Arpergillus
(penicillum)

Penicillium es un amplio género de


hongos, que se encuentran
AY40 Arpergillus habitualmente en los suelos, son de
(penicillum) crecimiento rápido algunos de ellos
contaminan alimentos y frutas.

HONGOS Y Arpergillus
LEVADURAS AY24 NO HAY FOTO REFERENCIAL (penicillum)

Penicillium es un amplio género de


hongos, que se encuentran
Arpergillus
AY46 habitualmente en los suelos, son de
(penicillum)
crecimiento rápido algunos de ellos
contaminan alimentos y frutas.

Arpergillus
AY01

PUCALLPA
Tipo de 𝟏𝟎−𝟏 𝟏𝟎−𝟒 Posible
Muestras Descripción
Microorganismo Microrganismo
Las colonias de Enterobacter son similares pero
Enterobacter
19CA NO HAY FOTO REFERENCIAL un poco más mucoides. Las colonias de
Klebsiella Klebsiella son grandes y muy mucoides

Enterobacter Colonias violetas


10CA NO HAY FOTO REFERENCIAL
Klebsiella Colonias de color rojo

COLIFORMES 4CA

8CA Enterobacter Colonias de color rojo

Enterobacter
6CA Colonias violetas
Klebsiella

19CA actinomiycetos

10CA NO HAY FOTO REFERENCIAL NO HAY FOTO REFERENCIAL


4CA NO HAY FOTO REFERENCIAL NO HAY FOTO REFERENCIAL

BACTERIAS
TOTALES Bacillus
8CA
actinomycetos

6CA actinomiycetos

Penicillium es un amplio género de hongos, que


Arpergillus se encuentran habitualmente en los suelos, son
HONGOS Y 19CA
(penicillum) de crecimiento rápido algunos de ellos
LEVADURAS
contaminan alimentos y frutas.

10CA NO HAY FOTO REFERENCIAL NO HAY FOTO REFERENCIAL


Penicillium es un amplio género de hongos, que
Arpergillus se encuentran habitualmente en los suelos, son
4CA
(penicillum) de crecimiento rápido algunos de ellos
contaminan alimentos y frutas.

No se logra
8CA
observar

No se logra
6CA
observar

Coliformes: se sabe que en el Agar Mac Conkey, las especies de Escherichia coli, Klebsiella
sp y Enterobacter sp producen colonias rosadas fuertes, rodeadas de una zona de bilis
precipitada.

Ilustración 6 E. COLI EN AGAR Ilustración 5KLEBSIELLA EN AGAR Ilustración 4ENTEROBACTER EN AGAR


MACCONKEY MACCONKEY MACCONKEY
CONCLUSIONES

• La especies o géneros que mas abundan en los suelos de Arequipa y Pucallpa, según lo
que se ha podido identificar son los Actinomycetos, los Bacillus, Rhizopus y
aspergillus, lo que representa un ecosistema rico en nutrientes y minerales, a su vez se
identifico en menos proporción bacterias coliformes, las muestras solo fueron de
Pucallpa, lo que indica que sus suelos sufren de algún tipo de contaminación.

• Los microrganismos que mas abundan en el suelo son las bacterias, representan un
porcentaje muy alto de los microrganismos totales que se pudieron encontrar.

• Los microorganismos también se relaciones ya sea de forma antagonista o simbiótica,


todo esto con la finalidad de equilibrar el ecosistema donde habitan, debido a la gran
diversidad de microrganismos que existen en el suelo, gran parte, por no mencionar la
totalidad de seres vivos, resulta beneficiado de forma directa o indirecta.
BIBLIOGRAFIA

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