Analisis de agua para su potabilidad Basado en la NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-127-SSA1-1994, "SALUD AMBIENTAL, AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO.-LIMITES PERMISIBLES DE CALIDAD Y TRATAMIENTOS A QUE DEBE SOMETERSE EL AGUA PARA SU POTABILIZACION".Analisis de agua para uso y consumo humano. Introducci6n: El abastecimiento de agua para uso y consumo humano con calidad adecuada es fundamental para prevenir y evitar la transmisién de enfermedades gastrointestinales y otras, para lo cual se requiere establecer limites permisibles en cuanto a sus caracteristicas bacteriolégicas, fisicas, organolépticas, quimicas y radiactivas Debido a que el agua tiene una extensa movilidad en la naturaleza y el ambiente, por las formas de utilizarla y de retirarla ya usada, esta se encuentra expuesta a multiples formas de contaminacién. Es dificil encontrarla libre de microorganismos, muchos de ellos no tiene interés sanitario, pero aquellos que si, tienen la oportunidad de contaminarla, por lo que resulta no apta para su consumo. Con el fin de asegurar y preservar la calidad del agua en los sistemas, hasta la entrega al consumidor, se debe someter a tratamientos de potabilizacion. Método para la determinacién de bacterias Coliformes totales, Coliformes fecales y Escherichia coli por la técnica de diluciones en tubo miltiple (Numero mas Probable 0 NMP) A « Diferenciar los organismos Coliformes totales de los microorganismos Coliformes Objetiv« fecales. + Evaluar la calidad sanitaria de muestras de agua 0 alimentos mediante la busqueda de microorganismos Coliformes totales, Coliformes fecales y Escherichia coli + Organizar e interpretar los resultados. 4 eeGENERALIDADES Debido a que un gran numero de enfermedades son transmitidas por via fecal-oral utilizando como vehiculo los alimentos y el agua, es necesario contar con microorganismos que funcione como indicador de contaminacin fecal. Estos deben de ser constantes, abundantes y exclusivos de la materia fecal, deben tener una sobrevivencia similar a la de los patégenos intestinales y debe de ser capaces de desarrollarse extraintestinalmente. EI grupo Coliforme es constante, abundante y casi exclusivo de la materia fecal, sin embargo, las caracteristicas de sobrevivencia y la capacidad para multiplicarse fuera del intestino también se observan en aguas potables, por lo que el grupo Coliforme se utiliza como indicador de contaminacién fecal en agua; conforme mayor sea el nimero de Coliformes en agua, mayor sera la probabilidad de estar frente a una contaminacion reciente. Cuando los Coliformes llegan a los alimentos, no s6lo sobreviven, sino que se multiplican, por lo que en los alimentos el grupo Coliforme adquiere un significado distinto al que recibe en el agua. En productos alimenticios que han recibido un tratamiento térmico (pasteurizacién, homeado, coccién, etc.), se utilizan como indicadores de malas précticas sanitarias. Los microorganismos Coliformes constituyen un grupo heterogéneo con hdbitat primordialmente intestinal para la mayorla de las especies que involucra. El grupo de bacterias Coliformes totales comprende todos los bacilos Gramnegativos aerobios 0 anaerobios facultativos, no esporulados, que fermentan la lactosa con produccién de gas en un lapso maximo de 48 h. a 36°C + 1°C. Este grupo esta conformado por 4 géneros principalmente: Enterobacter, Escherichia, Citrobacter y Klebsiella. El grupo de Coliformes fecales, esté constituido por bacterias Gram-negativas capaces de fermentar la lactosa con produccién de gas a las 48 h. de incubacion a44.5 + 0.1°C. Este grupo no incluye una especie determinada, sin embargo la mas prominente es Escherichia coli La demostraci6n y el recuento de organismos Coliformes, puede realizarse mediante el empleo de medios de cultivo liquidos y s6lidos con caracteristicas selectivas y diferenciales. Escherichia coli es un bacilo corto Gram negativo que se encuentra clasificado dentro de la familia Enterobacteriaceae (bacterias entéricas), existe como comensal en el intestino delgado de humanos y animales. Sin embargo, hay algunas cepas de E. coli patogenas que provocan enfermedades diarreicas. Estas E. coli se clasifican con base en las caracteristicas que presentan sus factores de Virulencia Unicos, cada grupo provoca la enfermedad por un mecanismo diferente. Las propiedades de adherencia a las células epiteliales de los intestinos grueso y delgado son codificadas por genes situados en plésmidos. De manera similar las toxinas son mediadas por plasmidos o fagos. Este grupo de bacterias se encuentra constituido por las siguientes cepas: E. coli enterotoxigénica (ETEC), E. coli enteropatogena (EPEC), E. coli enterohemorrdgica (EHEC), E. coli enteroinvasiva (EIEC), E. coli enteroagregativa (EAEC) E. coli enteroadherente difusa (DAEC). Existen otras cepas que no han sido perfectamente caracterizadas; de las cepas anteriores, las 4 primeras estan implicadas en intoxicaciones causadas por el consumo de agua y alimentos contaminados.Fundamento La determinacién de microorganismos Coliformes totales por el método del numero mas Probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo microbiano de fermentar la lactosa con produccién de dcido y gas al incubarlos a 35°C + 1°C durante 48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga sales biliares. Esta determinacion consta de dos fases: «la fase presuntiva * la fase confirmativa. En la fase presuntiva el medio de cultivo que se utiliza es el caldo lauril sulfato de sodio el cual permite la recuperacién de los microorganismos dafiados que se encuentren presentes en la muestra y que sean capaces de utilizar a la lactosa como fuente de carbono. Durante la fase confirmativa se emplea como medio de cultivo caldo lactosado bilis verde brillante el cual es selectivo y solo permite el desarrollo de aquellos microorganismos capaces de tolerar tanto las sales biliares como el verde brillante. La determinaci6n del nimero més probable de microorganismos Coliformes fecales se realiza a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se fundamenta en la capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y producir gas cuando son incubados a una temperatura de 44.5°C + 0.1°C por un periodo de 24 a 48 h. La busqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos positivos de caldo EC, los cuales se siembran por agotamiento en medios selectivos y diferenciales (Agar Mac Conkey, Agar eosina azul de metileno) y posteriormente realizando las pruebas bioquimicas basicas (IMViC) a las colonias tipicas.Pruebas Bioquimicas: Prueba de indol. Indol: Subproducto de la degradacién de! aminodcido Triptéfano por la enzima triptofanasa. El reactivo de Kovacs reacciona con el indol dando un producto de color rojo. a ee Medios de cultivo y diluyentes: - Calo lactosado concentracién doble con campana de Durham > caldo bilis verde brillante con campana de Durham - caldo EC MUG con campana de Durham Reactivos e indicadores: - _ Reactivo de Ehrlich 0 Kovac Material y equipo: - Mechero - Gradilla - Laémpara de {uz ultravioleta - Pipetas- Asa bacteriolégica = Tubos de ensayo con tapa - Baflo de agua a 44.5°C * Incubadora a 35°C - Homo para esterilizar material de vidrio : Autoclave Procedimiento. 1- Prueba presuntiva. Agregar 20m! de la muestra a los tubos con CL (2X), e incubarlos a 35 °C durante 24h. Reportar como positivo aquellos que presenten turbiedad y produccién de gas. 2- Prueba confirmativa. De cada tubo positive obtenido durante la prueba presuntiva, agregar 0.2 ml con un asa de nicromo a un tubo con caldo lactosado bilis verde brillante y a un tubo con EC-MUG. Para coliformes totales incubar a 36 °C y para coliformes fecales a 45 °C durante 24 a 48h. Reportar como positive aquellos que presenten turbiedad y produccién de gas. 3- — Identificacién bioquimica de E. coli. Finalizado el periodo de incubacl6n, irradiar los tubos con una fuente de luz UV, observar cuantos tubos presentan fluorescencia.4- Prueba de indol Los tubos que presentan fluorescencia adicionar entre 0.2 y 0.3 mi de reactivo de Kovacs, La presencia de una coloracién roja en la superficie del tubo se considera como prueba positiva para la presencia de indol. DETERMINACION DEL NMP DE COLIFORMES EN AGUA Y HIELO POTABLES = =o an vues Fy i 1m un 588 Lac deuce peetisen Taos ean 0 mL ce Leche de uns posts en ‘Tuprson 00m coe nb ae cformes’ — SaMOEC ECG ale NM caltomor ene (cate mt de moars (ecies Mon mi Semocst, iets Reaceidn- __Reaecién + Formac de una ise Formacion de una fase ‘orpinca amarila—oxginicaroja Salmonella E-call Enterobacter Proteus Klebsiella eyDeterminacion de coliformes totales por cuenta en placa. Fundamento El método permite determinar el ntimero de microorganismos coliformes presentes en una muestra, utilizando un medio selectivo (agar rojo violeta bilis) en el que se desarrollan bacterias a 35°C en aproximadamente 24 h, dando como resultado la produccién de gas y acidos orgénicos, los cuales viran el indicador de pH y precipitan las sales biliares. Medios de cultivo y diluyentes. - Agua peptonada - Agar bilis rojo violeta Material y equipo. - _ Incubadora - Contador de colonias . Bafio de agua con termémetro calibrado - Pipetas - Tubos de ensayo - Cajas PetriProcedimiento. 1- Toma de la muestra 2. — Preparacién y dilucién de la muestra 3 Realizar las diluciones decimales 4- Agregar imi de la muestra correspondiente a las cajas Petri 5- Agregar el medio a las cajas Petri y homogenizar 6 _Incubar las cajas invertidas de 350C a 370C por 24 h. 7- Reportar Realza ulones decimals empleando bos con 8. mL de A= T= 11, Y yee ie ‘Depositar 1.0 mide cada ctcién on (als de Pei estes por dupeado Adicionar de 152 20m ce ager Bits roe wow funda fnado a °C en cae paca S 2S = tomogensizta maera J SShetagernacenco ‘movimlontos rears Ineabarias as spose > ) warts ‘Contar aquellas placas que tengan aware fone Ureg emt se monata