FIEBRE HEMORRÁGICA ARGENTINA

Prof. Dr. José Raúl Oubiña

Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Asignatura: Microbiología y Parasitología II
OBJETIVOS
• Recapitular las bases esenciales de la patogénesis de
la enfermedad.
• Adquirir destrezas indispensables para el diagnóstico
etiológico.
• Deducir las implicancias de la epidemiología de la
virosis.
• Comprender las bases de la profilaxis activa y el
tratamiento.
 Fiebre hemorrágica argentina
• Historia
• Manifestaciones clínicas
• El virus Junín: estructura y relaciones
filogenéticas
• Patogénesis de la infección
• Diagnóstico
• Epidemiología
• Profilaxis y tratamiento
En 1943 comienzan a registrarse en el
Htal. “Julio de Vedia” de 9 de Julio casos
de una extraña gripe con muy alta fiebre
asociada a un 60 % de mortalidad en
pacientes de áreas rurales aledañas…

Rodolfo Arribalzaga describe el cuadro

clínico completo en 1955…

“Problema de Salud Pública” en 1958…

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Fuente: Enfermedades infecciosas: clínica y epidemiología. Libonatti EJ & Tchoulamjan S. López Libreros Eds. S.R.L.1971.

Gripón
o
Mal de los rastrojos
o
Mal de O´Higgins
o
Fiebre hemorrágica argentina
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 Maizal

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 Ratón maicero o
Calomys musculinus

Cortesía de la Dra. S. Merani

Akodon azarae

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 Armando Parodi
Profesor Titular
Cátedra de
Microbiología
Descubridor del
Virus Junín en 1958

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 Virus Junín: estructura

Grant et al. Viruses 4:.2317-39, 2012

JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
 Fiebre hemorrágica argentina
Historia
• Manifestaciones clínicas
• El virus Junín: estructura y relaciones
filogenéticas
• Patogénesis de la infección
• Diagnóstico
• Epidemiología
• Profilaxis y tratamiento
Fuente: Enfermedades infecciosas: clínica y epidemiología. Libonatti EJ & Tchoulamjan S. López Libreros Eds. S.R.L.1971.

15-20 % de mortalidad
si no se administra
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología tratamiento
Fuente: Enfermedades infecciosas: clínica y epidemiología. Libonatti EJ & Tchoulamjan S. López Libreros Eds. S.R.L.1971.

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Fuente: Enfermedades infecciosas: clínica y epidemiología. Libonatti EJ & Tchoulamjan S. López Libreros Eds. S.R.L.1971.

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JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
 Fiebre hemorrágica argentina
Historia
Manifestaciones clínicas
• El virus Junín: estructura y relaciones
filogenéticas
• Patogénesis de la infección
• Diagnóstico
• Epidemiología
• Profilaxis y tratamiento
Virus Junín: estructura

Grant et al. Viruses 4: 2317-39, 2012

 GP 1 Espícula

GP 2 RNP
RNA
N
A RNA bisentido

N
Ribosoma
N
RNP

Z: proteína de matriz:
favorece brotación
L: RNA polimerasa
Z y nucleasa
L N: señuelo para caspasa 3,
Inhibe apoptosis
Actividad de nucleasa
De “Virología Médica”
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología Carballal - Oubiña, 2015.
 Distribución de arenavirus
en el mundo
Virus de reptiles

Virus de peces

Viejo
mundo
Virus de mamíferos
Clado C

Clado B
Nuevo
mundo
Clado D (tentativo)

Clado A

• * Patógenos para el humano

• # Pueden enfermar animales Fuente: Brisse ME, Ly H. Front Immunol Mar 13;10:372.2019.
 Fiebre hemorrágica argentina
Historia
Manifestaciones clínicas
El virus Junín: estructura y relaciones
filogenéticas
• Patogénesis de la infección
• Diagnóstico
• Epidemiología
• Profilaxis y tratamiento
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Fuente: Enfermedades infecciosas: clínica y epidemiología. Libonatti EJ & Tchoulamjan S. López Libreros Eds. S.R.L.1971.

JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología

Fuente: Enfermedades infecciosas: clínica y epidemiología. Libonatti EJ & Tchoulamjan S. López Libreros Eds. S.R.L.1971.

Replicación inicial en pulmones, y diseminación a tejido hemopoyético, hígado y riñón.

Afectación del RER con expresión de Ag virales.

Afectación grave de la hematopoyesis (necrosis linfoide).

Hemorragias: por alteración cuantitativa y funcional de plaquetas y alteraciones de la hemostasia

(↓ Factor VIII, IX y plasminógeno). Compromiso endotelial: ↑ ICAM y VCAM y mediador vaso activo
NO, ↑ factor von Willebrand y ↓ liberación de prostaglandina I 2 (PGI2) y DAF (decoy accelerating
factor)

Compromiso neurológico: inmunocomplejos en endotelio capilar .

↑ TNF-α e IFN –α . ↓ de Linfocitos T CD4+: inmunodepresión transitoria.

Sobreinfecciones bacterianas. JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
 Cofactores
para ingresar:
DC-SIGN / L-SIGN,
Voltage-gated calcium channels,
y Dyn2/EPS15.

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 Tropismo del virus Junín
en el humano
Células dendríticas
Macrófagos
LMN de sangre periférica:
Monocitos: Sí
Linfocitos: No
Megacariocitos

Células parenquimatosas: pulmón,

riñón, hígado, SNC
 Cuadro hemorrágico en el
cobayo inoculado con
virus Junín

Carballal G et al, J Infect Dis, 143:7-14.1981.

Carballal G et al, J Infect Dis, 143:7-14.1981.
Carballal G et al, J Infect Dis, 143:7-14.1981.
 El virus Junín induce la autofagia para
promover su multiplicación
Lisosoma
Imágenes
Membrana de Autofagosoma (AP) fusionadas
aislamiento (IM)

no infectado
Inducción

Control
Formación y terminación
Fusión

Autolisosoma
(AL)
Degradación
Virus Junín

Microscopía confocal*.
El virus Junín (verde) induce la expresión de la
proteína LC3-B (rojo) –marcadora de la formación de autofagosomas-,
la que colocaliza (amarillo) con antígenos de la proteína N del virus.

Western blot*

*Pérez Vidakovis MLA, Ure AE et al.

PLoS ONE 14(6): e0218730, 2019.

Roldan JS et al. J Virol 93: e02307-18, 2019.

Una visión global…
Inducción de IFN Vía de señalización del IFN

Meyer B & Ly H.
J Virol 90:3810 –3818, 2016.
Meyer B & Ly H.
J Virol 90:3810 –3818, 2016.
 Rol de las citoquinas en la patogénesis

Luego de la inducción inicial de IFN,

¡hay un cambio hacia una respuesta
proinflamatoria!
↑ ↑ ↑ IFN-alfa
↑ ↑ ↑ TNF-alfa
↑ IL-6, IL-8 e IL-10
 Fiebre de Lassa (África)

Fiebre hemorrágica argentina

Fuente: Brisse ME, Ly H. Front Immunol Mar 13;10:372, 2019.

 Fiebre hemorrágica argentina
Historia
Manifestaciones clínicas
El virus Junín: estructura y relaciones
filogenéticas
Patogénesis de la infección
• Diagnóstico
• Epidemiología
• Profilaxis y tratamiento
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología

RT-PCR Anticuerpos
Aislamiento anti-Junín (Nt)
ELISA para Ag N
Viremia
Enfermedad
clínica Anticuerpos anti-Junín
o anti-N (IFI / ELISA)

0 10 20 30 Días Meses Años

2da.
Infección Incubación muestra Fuente: “Virología Médica”
Carballal G & Oubiña JR.,
1ra. Conversión serológica Editorial Corpus. 4ta.
Edición. 2015.
muestra
 inmunofluoresencia
Actualmente reemplazados por la detección de RNA viral mediante RT-PCR
o de la proteína N mediante ELISA.

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Prueba de ELISA (Enzyme linked-immunosorbent assay)

Para detectar la proteína N del virus Junín

Lozano et al, J Clin Microbiol 33:1327-1332,1995.
Detección del RNA del virus Junín
mediante amplificación por RT-PCR

Los productos de la RT-PCR obtenidos con cebadores específicos para

virus Junín, fueron resueltos mediante electroforesis en gel de agarosa al 2%.

M: marcador de tamaño molecular (indicado en pb a la izquierda).

1. Stock de virus Junín preparado en cerebro de ratón lactante
a partir de un paciente infectado
2. Stock de virus Junín preparado en modo análogo a 1, a partir de
otro paciente infectado.
3. Sobrenadante de células BHK infectadas con el stock mostrado en 1.
4. Sobrenadante de células BHK infectadas con el stock mostrado en 2.
5. Sobrenadante de células BHK no infectadas.
6. Sedimento de células BHK infectadas con el stock mostrado en 1.
7. Sedimento de células BHK infectadas con el stock mostrado en 2.
8. Sedimento de células BHK no infectadas.

Lozano et al, J Clin Microbiol 33:1327-1332,1995.

Diagnóstico indirecto
 Detección de anticuerpos mediante:

Neutralización
Inmunofluorescencia indirecta

Búsqueda de la conversión serológica

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ACP por Junín JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Neutralización de la ACP por
Junín: presencia de Acs
específicos en el suero del
paciente.

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 IFI sobre células BHK infectadas con
virus Junín persistentemente:
Detección de anticuerpos anti-Junín
presentes en el suero de un paciente con FHA.
Carballal G et al, Intervirology 14:173-9, 1980.

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 Fiebre hemorrágica argentina
Historia
Manifestaciones clínicas
El virus Junín: estructura y relaciones
filogenéticas
Patogénesis de la infección
Diagnóstico
• Epidemiología
• Profilaxis y tratamiento
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología

1985 - 2006
Cosecha manual del maíz.
 Año 2018
Año 1979

 Población humana
expuesta:
≈5.000.000
personas.
 Casos
notificados: 239.
 Casos
confirmados: 7.

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A trabajadores rurales del área endémica

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JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
 FHA: 2012 – 2019
Año Casos
confirmados
2012 21
2013 25
2014 21
2015 15
2016 10
2017 9
2018 7 Fuente: Ministerio de Salud
2019 14 y Desarrollo Social de la Nación
 Fiebre hemorrágica argentina
Historia
Manifestaciones clínicas
El virus Junín: estructura y relaciones
filogenéticas
Patogénesis de la infección
Diagnóstico
Epidemiología
• Profilaxis y tratamiento
 Profilaxis activa Dr. Julio Isidro
Maiztegui
Dr. Julio Barrera Oro
Vacuna atenuada Candid #1
Estudios que la avalan:

Inoculación Nº de Tuvieron FHA

voluntarios
Vacuna 3255 1
Placebo 3245 22
Eficacia de la 95,5% P= 0,0000028
vacuna

Maiztegui JI, et al. J Infect Dis. 177: 277-83, 1998.

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 J Virol 85: 10404–8, 2011

Dominio de transmembrana de G2:

Mutación F427I = ¡¡¡atenuación!!!
 Vacuna atenuada Candid 1
• A partir de los 15 años,
se debe administrar una única dosis
“a residentes o trabajadores con riesgo ocupacional
en zona de riesgo y que no hayan recibido anteriormente
la vacuna”*.
• En 2019, se administraron 185.000 dosis.

* Según el Calendario Nacional de vacunación de la República Argentina.

Atenuación y estabilidad de la vacuna
Candid #1 de 2da. generación

Stable signal
peptide: SSP
F427I
K33S

York & Numberg, J Virol 92(1). pii: e01682-17, 2017.

 Tratamiento
Dr. Julio Isidro Maiztegui

Plasma inmune humano proveniente de

convaleciente de FHA:
¡Disminuye la mortalidad de la enfermedad desde ≈20% a <1%!

3500 Unidades terapéuticas (UT) / kg de peso

dentro de los 8 días de iniciada la enfermedad
UT: ∑ (peso x título de cada unidad) / peso corporal

Complicación: síndrome neurológico tardío

Enría DA, et al. Lancet 2:255-6, 1984.

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Mahmutovic et al.,
Cell Host & Microbe
18: 705–713, 2015.
 Fiebre hemorrágica argentina:
Síntesis
 Enfermedad hemorrágica causada por el virus Junín, un
arenavirus transmitido por roedores del campo.
 El diagnóstico presuntivo de FHA se asocia a leuco-
plaquetopenia y a células redondas en orina.
 El diagnóstico etiológico puede realizarse por métodos
directos durante la fase virémica (por ej., RT-PCR para
detectar RNA viral o ELISA para la proteína N) o indirectos
(conversión serológica entre muestras pareadas).
 Existe una vacuna atenuada (Candid 1) eficaz.
 El tratamiento con plasma inmune de convaleciente de
FHA es eficaz para disminuir la mortalidad si se administra
dentro de los 1ros. 8 días de enfermedad.
Peter Doherty y Rolf Zinkernagel descubrieron la restricción genética de la
respuesta T mediante brillantes experimentos in vitro con el arenavirus LCM.
Recibieron el Premio Nobel de Medicina o Fisiología en 1996.

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 “Lo que hace más importante
a tu rosa, es el tiempo que
has perdido con ella”.*

“Lo esencial es invisible a los ojos”.*”

*Antoine Jean-Baptiste
Marie Roger
de Saint-Exupéry