F: ATCC ATGGTTTCAGCCTACGCCATCTCC

R: AACC ATGGAACCTCTCAGCCAAGTCACC

El Nco1 lo ocupamos porque nos va a dejar esos extremos y se

puede ver donde corta, cuando nosotros tenemos esto vamos a
tener un fragmento de ADN en nuestro plásmido, por un lado,
vamos a tener el promotor, pero vamos a tener también un ATG y la secuencia, pero del otro lado
también vamos a tener un ATG y la secuencia, esto sirve para qué estos 2 promotores RNA
polimerasa se localice bien se identifique este codón y podamos obtener nuestro RNA que
después será un RNA de doble cadena. después teniendo el RNA de doble cadena siendo 100%
complementaria híbrida llega DICER fragmenta el RNA de doble cadena llega a argonauta y forma
el complejo RISC se dirige al RNA mensajero que es compatible con RNA de silenciamiento y se
degrada RNA mensajero y con eso obtengamos la expresión de un gen.

Puede ser que en ocasiones nosotros podamos diseñar alguna sepa de algún microorganismos que
tenga la de lesión o el silenciamiento, pero también tenga una supresión del gen tío por qué no o
sea tal vez sobre expresar el gen que codifica la enzima cuatro y eso lo haremos igual vamos a
construir un vector de sobreexpresión.

Por ejemplo vamos a sobre expresar un gen en E.coli, estos vectores van a tener un marcador de
selección uno de los más clásicos es la ampicilina, lo más importante de estos vectores son las
características del promotor en este caso deben ser promotores fuertes, después de estos
promotores tenemos nuestro sitio múltiple de clonación MCS y justo ahí es donde nosotros
podemos clonar a nuestro gen y queremos sobre expresar porque va a estar bajo el control del
promotor fuerte, el sitio múltiple de clonación tiene sitios para varias enzimas de restricción,
nosotros podemos seleccionar varias de estas enzimas para poder clonar nuestro gen en ese
vector que está bajo el control del promotor fuerte o sea que tendremos altas tasas de expresión
de ese gen.

Existe otro tipo de vectores que en vez de tener ese promotor tienen ahora el promotor T7
seguido de ese promotor tenemos el operador Lac el del operón de lactosa y posteriormente
nuestro sitio múltiple de clonación.