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Ecotoxicología
https://doi.org/10.1007/s10646-018-02012-y

Apareamiento bajo la influencia: los peces luchadores siameses machos prefieren

hembras expuestas a EE2

1
Rebecca A. Cram1 • Jaslynn M. Lawrence1 • Teresa L. Dzieweczynski

© Springer Science+Business Media, LLC, parte de Springer Nature 2019

Abstracto

Existen innumerables productos farmacéuticos y químicos disruptores endocrinos (EDC, por sus siglas en inglés) en el mercado y cada día se agregan
más. Muchos de estos compuestos no se eliminan durante el proceso de tratamiento de aguas residuales y entran a los cuerpos de agua en su forma activa.
Se sabe que los EDC tienen efectos fisiológicos y de comportamiento en los organismos expuestos. Se ha descubierto que la exposición al estrógeno
sintético 17ÿ etinilestradiol (EE2), un EDC común que se encuentra en las píldoras anticonceptivas, conduce al colapso de la población después de solo
unas pocas generaciones en algunas especies de peces. Los mecanismos identificados como posibles fuerzas impulsoras del colapso incluyen la
feminización de los machos y la alteración de la fecundidad en ambos sexos. Sin embargo, una forma adicional en la que EE2 podría conducir al colapso
de la población es alterando el comportamiento de cortejo, lo que podría cambiar las preferencias de apareamiento y disminuir las oportunidades de
apareamiento. El estudio actual tuvo los siguientes objetivos: determinar si exponer a las hembras de pez luchador siamés, Betta splendens, a EE2 cambia
la elección de pareja en los machos; evaluar si la dosis y la duración de la exposición femenina son importantes; y examinar si exponer a los machos a
EE2 influye en sus preferencias de apareamiento. Tanto los machos no expuestos como los expuestos se presentaron con parejas de hembras que
diferían en la dosis de EE2 y la duración de la exposición. Los resultados indican que los machos respondieron más a las hembras expuestas a EE2 que
a las hembras no expuestas, siendo los machos más sensibles a las hembras expuestas a la dosis baja que a la alta. Además, los hombres expuestos
respondieron menos en general que los hombres no expuestos. Si la concentración de EE2 aumenta en el medio ambiente, la probabilidad de un
apareamiento exitoso podría disminuir y, por lo tanto, podría generar impactos adversos en la población.

Palabras clave Sustancias químicas disruptoras endocrinas • Elección de pareja • 17ÿ-etinilestradiol • Cortejo

Introducción las instalaciones de tratamiento carecen de la capacidad para detectar,

Los humanos usan cientos, si no miles, de productos farmacéuticos y de
cuidado personal (PPCP) cada año en todo el mundo.
A medida que las poblaciones crecen y envejecen, es probable que
aumente el uso de PPCP (La Farre et al. 2008; Blair et al. 2013; Gaw et
al. 2014). Si bien los humanos usan PPCP, los organismos no objetivo
enfrentan los efectos de la exposición, ya que muchos de estos PPCP
están diseñados para tener un efecto en pequeñas dosis y permanecer en
su estado activo incluso después de excretarse (Frye et al. 2012; Arnold
et al. 2013). El estradiol se excreta en forma conjugada e inactiva, pero
luego vuelve a su forma biológicamente activa durante el proceso de
tratamiento de aguas residuales (Ternes et al. 1999). Además, la mayoría
de las aguas residuales
* Teresa L. Dzieweczynski
tdzieweczynski@une.edu
1
Departamento de psicología, Universidad de Nueva Inglaterra, 11 Hills
Beach Road, Biddeford, ME 04005, EE. UU.
diluir o degradar adecuadamente los PPCP antes de que se liberen en los
efluentes a los cuerpos de agua circundantes (Baronti et al. 2000; Arnold
et al. 2013). Esto significa que los PPCP a menudo ingresan al medio
ambiente en forma activa donde afectan negativamente a la vida silvestre
expuesta. Tal vez, la clase de PPCP más estudiada y prevalente son las
sustancias químicas disruptoras endocrinas (EDC), que actúan imitando o
inhibiendo el funcionamiento normal de las hormonas esteroides (Gleason
y Nacci 2001; Sumpter 2005). A través de esta interferencia, los EDC
pueden afectar a cualquier organismo dentro de un entorno expuesto,
aunque la gravedad y el mecanismo específico de los efectos requieren
un mayor estudio.
La exposición a los EDC ha producido cambios morfológicos,
fisiológicos, conductuales e incluso genéticos en los organismos acuáticos
(Kime 1998; Tyler et al. 1998). Debido a que muchos de los EDC que se
encuentran en el medio ambiente tienen propiedades que imitan al
estrógeno (Kime 1998), la mayor parte de los estudios realizados sobre
los efectos de la exposición a estos compuestos se han centrado en los
cambios reproductivos. Las consecuencias negativas de la exposición
incluyen la producción de vitelogenina durante todo el año
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(Purdom et al. 1994), fertilización reducida y éxito de eclosión (Länge et al.
2001), y ocurrencia de intersexualidad en machos de peces y reptiles (Guillette
et al. 1995; Jobling et al. 1998) , así como disminuciones en el cortejo y
agresión en machos expuestos (Bell 2001). Cambios observados en el
comportamiento de los machos, como jerarquías sociales alteradas (Coe et al.
2008), capacidad disminuida para adquirir parejas (Saaristo et al. 2009),
construcción de nidos retrasada (Saaristo et al. 2010) y estatus social reducido
( Colman et al. 2009), es probable que produzcan consecuencias a nivel de
población. De hecho, la exposición a uno de los EDC más frecuentes, el
imitador de estrógenos 17ÿ etinilestradiol (EE2), ha llevado al colapso de la
población en múltiples especies de peces (Nash et al. 2004; Kidd et al. 2007;
Palace et al. 2009). Dado que EE2 reduce los comportamientos de cortejo en
los machos, los cambios en la preferencia de pareja que resultan de estas
reducciones en el cortejo podrían ser un mecanismo potencial que contribuya
a estos colapsos.
EE2 es un estrógeno sintético que es el componente activo de los
anticonceptivos orales y se usa comúnmente en muchos tipos de terapias de
reemplazo hormonal. Las concentraciones de EE2 en los ecosistemas acuáticos
suelen estar entre 1 y 10 ng/L, pero se han encontrado concentraciones de
hasta 50–60 ng/L en áreas densamente pobladas del mundo (Larsson et al.
1999; Kolpin et al. 2002; Muller et al. 2008; Ciocan et al. 2010).
EE2 se une con mayor afinidad a los receptores de estrógeno y se degrada a
un ritmo más lento que los esteroides naturales, lo que hace que los organismos
expuestos sean muy susceptibles a sus efectos (Shore et al. 1993). Debido a
estas propiedades, EE2 puede bioacumularse y se ha encontrado en peces
expuestos a niveles hasta 300 veces mayores que los que se encuentran en el
medio ambiente (Länge et al. 2001; Lai et al. 2002). Por lo tanto, dada la lenta
degradación, la alta afinidad de unión y el potencial de bioacumulación de EE2,
representa una seria amenaza para los organismos que viven en los
ecosistemas acuáticos donde está presente EE2.
Está bien establecido que las hembras de todos los taxones eligen
machos en función de rasgos relacionados con su aptitud (Andersson 1994;
Stapley 2008; Hunt et al. 2009). Por lo tanto, si la exposición a EE2 influye en
el cortejo y la agresión en los machos, puede alterar las decisiones de
apareamiento y la dinámica social de las hembras. Mientras que las hembras
tienden a ser el sexo más selectivo, los machos también pueden preferir
hembras con algunas variantes de rasgos sobre aquellas con variantes
diferentes. El grado de preferencia de los machos puede relacionarse con el
grado de inversión de los machos, por ejemplo, si los machos están
construyendo nidos o están involucrados en el cuidado de las crías. Las
preferencias masculinas pueden cambiar si los atributos físicos de cualquier
sexo se ven afectados por la exposición a EE2. Esto, a su vez, podría reducir
el número de apareamientos dentro de una población o elección de pareja
alternativa. Por ejemplo, el espinoso de tres espinas macho corteja a las
hembras con el abdomen distendido con más vigor que las hembras con el
abdomen menos distendido (Rowland 1982) y los gobios del desierto macho
ajustan sus esfuerzos de cortejo en función del tamaño de la hembra (Lehtonen
et al. 2011). Estudiar cómo cambia la elección de pareja después de la
exposición a EE2 podría ser especialmente
RA Cram et al.
importante ya que proporcionaría una causa de comportamiento para el colapso
de la población incluso si los individuos expuestos parecen no haber cambiado
morfológicamente.
El pez luchador siamés, Betta splendens, es una especie modelo que se
usa ampliamente en entornos de laboratorio, en parte debido a las exhibiciones
de apareamiento y agresión ritualizadas que se usan para comunicarse con
miembros de ambos sexos (Simpson 1968). El trabajo reciente en esta especie
se ha centrado en estas manifestaciones (p. ej., Jaroensutasinee y
Jaroensutasinee 2001; Clotfelter et al.
2006; Verbeek et al. 2008), cómo pueden variar dentro y entre individuos (p.
ej., Dzieweczynski et al. 2010; Dzieweczynski y Hebert 2013), y si se ven
afectados por la red social (p. ej., Doutrelant y McGregor 2000; Matos y Schlupp
2005). Además, durante la última década, se descubrió que la exposición a
varios EDC influye en el comportamiento, la reproducción y la neurología de
esta especie (Clotfelter et al. 2010; Stevenson et al. 2011; Dzieweczynski et al.
2014). Se ha trabajado mucho sobre cómo EE2 altera el comportamiento social
en esta especie. Por ejemplo, los machos suprimen los comportamientos
dirigidos por las hembras después de la exposición a EE2 en una escala aguda
o crónica (Dzieweczynski y Hebert 2013; Dzieweczynski et al. 2014), las
hembras evitan a los machos expuestos a EE2 (Dzieweczynski y Kane 2017)
y los machos están menos atentos a los machos que han estado expuestos a
EE2, especialmente cuando ellos mismos han estado expuestos (Dzieweczynski
y LaMonica 2016). Estos estudios brindan más apoyo a la utilidad de esta
especie como modelo de los efectos de los EDC en los comportamientos
reproductivos que pueden tener consecuencias a nivel individual o poblacional
en la naturaleza.
Con el fin de examinar si los cambios en la elección de pareja pueden ser
un factor en el colapso de la población después de la exposición a EE2,
permitimos que tanto peces luchadores siameses machos expuestos como no
expuestos vieran hembras que diferían en su nivel de exposición a EE2 (0, 5 y
10 ng/ L). Presentamos machos con hembras que habían estado expuestas
durante 1 y 2 semanas para determinar si la duración de la exposición influía
en la elección del macho.
Ambas dosis utilizadas en este estudio se encuentran dentro del rango de
niveles de EE2 que se encuentran en la naturaleza. Con base en estudios
previos que han encontrado una disminución en el comportamiento de cortejo
de los machos, incluido el ensanchamiento de las branquias, la extensión de
las aletas y el golpe de la cola, después de la exposición a EE2 (Dzieweczynski
et al. 2014), predijimos que los machos expuestos realizarían menos
comportamientos de cortejo dirigidos por las hembras . en general que los machos no expuestos
También predijimos que estos machos expuestos expresarían una preferencia
más débil que los machos no expuestos debido a la falta de motivación de
cortejo, ya que la exposición a EE2 debería reducir los niveles de testosterona
(Adeel et al. 2017), disminuyendo así los comportamientos típicos de los
machos. La exposición a EE2 ha llevado a reducciones en una amplia gama
de comportamientos típicos de los machos, incluida la agresión en los piscardos
de cabeza gorda (Salierno y Kane 2009), la construcción de nidos en los gobios
de arena (Saaristo et al. 2009) y el espinoso de tres espinas (Brian et al. 2006),
y cortejo y
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Apareamiento bajo la influencia: los peces luchadores siameses machos prefieren hembras expuestas a EE2
éxito reproductivo en guppies y gobios de arena (Kris tensen et al.
2005; Saaristo et al. 2010). En términos de la preferencia masculina
hacia las mujeres que experimentan los tres niveles diferentes de
exposición a EE2, planteamos la hipótesis de que los hombres
preferirían las mujeres expuestas a las no expuestas. Esto se planteó
como hipótesis porque las ratas hembra expuestas tienen una mayor
receptividad después de una afluencia de estrógeno (Asarian y Geary
2002). Además, el aumento de estrógeno puede conducir a la
producción de más huevos, un rasgo que los machos prefieren y
evalúan a través del tamaño de la hembra (Doyle et al. 2013). No
hubo una predicción específica sobre la respuesta de los machos a
las hembras expuestas a una dosis más alta o más baja de EE2 o si
la duración de la exposición tendría un efecto, ya que estos aspectos
no se habían estudiado previamente.
Métodos
Asignaturas
Peces luchadores siameses machos y hembras (machos: 66,43 ±
7,97 mm, 1,84 ± 0,56 g; hembras: 52,67 ± 5,27 mm, 1,44 ± 0,27 g),
B. splendens, que eran sexualmente maduros pero nunca se habían
apareado, se compraron en un comercio distribuidor y luego se dejó
aclimatarse a las condiciones del laboratorio (26,7 °C; ciclo de
luz:oscuridad de 16:8 h) durante un mínimo de dos semanas antes
de la prueba. Los peces se compraron en dos momentos diferentes
(enero de 2016: 60 machos; 100 hembras; septiembre de 2016: 20
machos; 60 hembras). Se utilizaron un total de 80 sujetos masculinos
(40 de control; 40 expuestos a EE2) y 160 mujeres (50 de control;
110 expuestos a EE2). Los machos se alojaron en recipientes opacos
de 475 ml para evitar que observaran a sus congéneres que pudieran
provocar un comportamiento agresivo.
Sin embargo, debido a que las hembras de pez luchador siamés
normalmente forman cardúmenes, se alojaron en recipientes
transparentes de 475 ml para que pudieran ver a otras hembras. Los
machos y las hembras se alojaron en estanterías separadas que les
impedían verse unos a otros fuera de las pruebas experimentales.
Todos los peces fueron alimentados con gusanos de sangre
liofilizados Hikari Bio-Pure © ad libitum diariamente y recibieron
cambios de agua del 100% diarios durante la prueba.
Exposición a 17ÿ-etinilestradiol
Los sujetos masculinos fueron asignados al azar a uno de los dos
grupos: los que recibieron exposición a EE2 durante la prueba y los
que no se expusieron. Para administrar EE2, primero se creó una
solución madre de EE2 disolviendo EE2 (98 % de pureza; Cayman
Chemical Company; CAS 57-63-6) en 95 % de etanol (Bell 2001 para
la metodología). Luego, los machos expuestos recibieron 5 µL de
esta solución en sus recipientes domésticos después del cambio de
agua diario para alcanzar una concentración total de 5 ng/L. Los
machos en el grupo no expuesto tenían agua diaria
cambios pero no EE2, solo etanol, agregado a sus contenedores
domésticos. Esta exposición se realizó diariamente durante un
período de prueba de 2 semanas. Las hembras se asignaron a uno
de los tres grupos de exposición: control (0 ng/L), dosis baja (5 ng/L)
o dosis alta (10 ng/L), y la exposición de las hembras se realizó de
manera idéntica a que para los sujetos masculinos a lo largo del
período experimental de 2 semanas. Se usaron exposiciones a dosis
bajas y altas para determinar si los distintos grados de exposición
tenían un efecto en la preferencia masculina. Ambas concentraciones
utilizadas caen dentro del espectro de niveles en la naturaleza. La
dosis baja está dentro del rango que se encuentra en el ambiente
acuático (p. ej., Baronti et al. 2000) y la dosis alta, aunque más alta
que la cantidad encontrada en la mayoría de las áreas, es una dosis
comúnmente utilizada en estudios de ecotoxicología (Frye et al.
2012). Además, la dosis alta es una dosis farmacológicamente
relevante y podría verse con mayor frecuencia en cuerpos de agua
dulce en el futuro debido al mayor uso de EE2 y al crecimiento de la
población. Las concentraciones de EE2 en los contenedores de
almacenamiento se verificaron tomando muestras de agua
recolectadas justo antes de los cambios diarios de agua en los días
1, 6 y 13 de un subconjunto de control seleccionado al azar, hembras
con dosis baja, hembras con dosis alta y machos expuestos (n = 5
cada grupo). El EE2 se extrajo de las muestras de agua a través de
cartuchos de fase sólida C18 (cartuchos Sep-pack Plus C18) y luego
se usó GC-MS para analizar las muestras para determinar las
concentraciones de EE2 (control: por debajo de los límites detectables;
dosis baja: 4,8 ± 0,6 ng/L; dosis alta: 10,2 ± 1,1 ng/L; hombres
expuestos: 4,7 ± 0,8 ng/L).
Montaje y procedimiento experimental
La configuración experimental consistió en un tanque de 37,9 litros
(51 × 25 × 30 cm) centrado entre dos tanques de 20,5 litros (43 × 23
× 28 cm) a cada lado (Fig. 1). Al macho se le permitió nadar
libremente en el tanque experimental mientras que las hembras
estaban confinadas en contenedores dentro de sus tanques.
para que estas hembras estuvieran siempre a una distancia
determinada del tanque focal. Este diseño permitió que el macho
observara e interactuara fácilmente con las hembras mientras evitaba
que las hembras se vieran entre sí y mantenía a ambas hembras en
ubicaciones estandarizadas debido a la distancia entre los tanques.
y la colocación de los contenedores femeninos. El tanque
experimental se dividió visualmente en diferentes áreas: una zona
neutra (tercio medio del tanque) y dos zonas preferenciales al final
del tanque (dos longitudes de pescado desde el compartimiento que
contiene a la hembra en el tanque adyacente).
Para comenzar una prueba, primero se colocaron particiones
opacas entre el tanque experimental y los dos tanques femeninos
adyacentes. Luego se colocaron un macho y dos hembras en los
tanques apropiados. Después de un período de aclimatación de 5
min y después de que el macho hubiera nadado en la zona neutral del
tanque experimental, las particiones opacas que separan el
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tanque femenino
Zona neutral
Preferencia
Zona
Fig. 1 Diagrama de configuración del tanque experimental. El tanque de prueba en el medio contenía al sujeto masculino, mientras que los dos tanques a los lados eran
donde se presentaban las hembras. Se quitaron los divisores opacos entre los tanques al comienzo de una prueba
Se retiraron los tanques y comenzó la prueba de 5 min. Todos los ensayos
fueron grabados con una videocámara digital Sony HandyCam colocada frente a
la configuración experimental para que los tres tanques estuvieran a la vista.
Cuando se completó la prueba, se reemplazaron las particiones opacas y el macho
comenzó el siguiente período de aclimatación.
Se usaron cinco combinaciones diferentes de visualización de mujeres (HL =
exposición alta + baja; HH = exposición alta + alta; LC = baja + control; CC =
control + control; y HC = alta + control) para examinar si el comportamiento
masculino cambiaba como resultado. subproducto de la exposición femenina a
EE2. Para reducir el riesgo de habituación debido a pruebas repetidas, las
exposiciones de video se dividieron de modo que un macho tuviera tres
combinaciones de hembras 1 día y las otras dos combinaciones en el segundo día
de prueba. Cada semana, se seleccionó un grupo de 10 machos para la prueba.
Se tomaron medidas para controlar el sesgo lateral y los efectos de orden, como el
orden de combinación aleatorio y el lado en el que se presentó una hembra de un
tipo de exposición determinado. Además, los machos nunca vieron a la misma
hembra más de una vez. La prueba duró 2 semanas y los machos vieron a las
hembras que habían estado expuestas a EE2 durante 1 semana durante la primera
semana de prueba y luego las hembras expuestas durante dos semanas la segunda
semana. Esto se hizo para determinar si el
la cantidad de tiempo que las hembras estuvieron expuestas afectó las preferencias
de los machos.
Comportamientos medidos
Los comportamientos se calificaron utilizando el programa de registro de eventos,
Event-PC. Se midieron cinco comportamientos hacia una hembra dada: tiempo
pasado dentro de una zona de preferencia, tiempo orientándose hacia una hembra,
seguimiento del tiempo, cantidad de tiempo dedicado a abrir las branquias,
RA Cram et al.
tanque femenino
Preferencia
Zona
y número de golpes de cola a una hembra. Como había dos
hembras dentro de cada combinación de visualización, estos cinco comportamientos
se codificaron para cada hembra, para un total de 10 medidas en cada prueba. El
tiempo en una zona de preferencia se definió por estar un hombre dentro de dos
longitudes corporales de una mujer. El tiempo dedicado a orientarse hacia una
mujer se definió como un hombre dentro de una zona de preferencia frente a la
mujer.
El tiempo dedicado al seguimiento (siguiendo a la hembra mientras se orienta
hacia y dentro de la longitud del cuerpo de esa hembra), el tiempo dedicado al
aleteo branquial (extensión de las aletas operculares) y el número de latidos de la
cola (golpes deliberados de la cola dirigidos a un congénere) fueron solo contados
cuando un macho estaba en una zona de preferencia.
Se ha encontrado que estos comportamientos son medidas adecuadas de elección
de pareja en esta especie (Jaroensutasinee y Jaroensutasinee 2001; Clotfelter et
al. 2006; Dzie weczynski et al. 2013). Para minimizar el sesgo del observador, se
utilizaron métodos ciegos cuando RAC y JML puntuaron todos los datos de
comportamiento.
Análisis estadístico
Primero, se realizó una serie de análisis de varianza de medidas repetidas de tres
vías (RMANOVA) en rangos con tratamiento (tipos de presentación de estímulo),
exposición masculina (control y expuesta) y duración de la exposición femenina
(semana 1 y semana 2) como factores. correr. Esto se hizo para examinar si el
sesgo lateral afectaba la cantidad total de respuesta o la diferencia en la respuesta
de una mujer frente a la otra (p. ej., tiempo de la mujer a la izquierda, tiempo de la
mujer a la derecha). A continuación, examinamos si la fuerza de la preferencia por
una hembra frente a otra variaba entre los cinco tratamientos. En otras palabras, si
la respuesta del macho a una hembra difiere según el tipo de hembra que
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Apareamiento bajo la influencia: los peces luchadores siameses machos prefieren hembras expuestas a EE2

fue presentado con. Para hacer esto, se ejecutaron dos series diferentes
de ANOVA de tres vías en rangos con el tratamiento, la exposición de
los machos y la duración de la exposición de las hembras como factores
y todos los posibles efectos de interacción. Una serie se ejecutó sobre
exposición F4,799
0,33,
0,86
p=
= F4,799
0,31,
0,87
p=
= F4,799
0,14,
0,97
p=
= F4,799
0,61,
0,66
p=
= F4,799
0,51,
0,73
p=
=

la cantidad total de comportamiento dentro de un ensayo y la otra se

ejecutó sobre las puntuaciones de diferencia. La cantidad total de
comportamiento, independientemente de a qué hembra se dirigió el
comportamiento (por ejemplo, tiempo de orientación a la hembra A +
tiempo de orientación a la hembra B), se calculó para cada individuo en
cada tratamiento y luego ANOVAs en rangos con pruebas post hoc de
Tratamiento
exposición
duración
Duración
×
× 0.34 0.18 0.14 F1,799
0.06,
p=
= 0.81 0,64
Wilcoxon y Se realizaron correcciones de Bonferonni en estas puntuaciones.
Además, se calcularon las puntuaciones de diferencia para cada macho
en cada tratamiento (p. ej., tiempo por hembra de alta exposición-tiempo
por hembra de baja exposición) y se realizaron las mismas pruebas
estadísticas con estas puntuaciones. Por estas diferencias
puntuaciones, la hembra A siempre fue la hembra con la mayor
concentración de exposición (por ejemplo, alta exposición-control). En
F1.799
F4.799
0,93,
2,60,
0,03
p=
=
p=
= 0.0001
los tratamientos en los que ambas hembras tenían el mismo nivel de
exposición (p. ej., alta exposición y alta exposición), la hembra A
siempre era la hembra del lado izquierdo del tanque de prueba y la
hembra B estaba del lado derecho del tanque.

Resultados
Tratamiento
exposición
duración
× F4,799
=0,612
0,67,
p=

sesgo lateral

El sesgo lateral no influyó significativamente en ninguna de las medidas

dependientes (tratamiento: F4799 ÿ 1,18, p ÿ 0,32; duración: F1799 ÿ
3,22, p ÿ 0,07; exposición masculina: F1789 ÿ 3,89, p ÿ 0,06; tratamiento
Exposición 0,0004,
F1,799
=0,98
p= p=
=
p=
= F1.799
F4.799
F4.799
1,79,
F1.799
2,35,
0,06
0,35,
0,85
0,16,
0,69
=
p=
= p=
× duración: F4799 ÿ 2,47, p ÿ 0,12; tratamiento × exposición masculina:
F4799 ÿ 1,95, p ÿ 0,10; tratamiento × duración × exposición masculina:
F4799 ÿ 1,92, p ÿ 0,11). Esto significa que si una hembra en particular
se presentó en el lado izquierdo o derecho del tanque, no afectó
ninguno de los comportamientos medidos.

Duración 0,0001,
F1,799
0,99
p=
= 0,0002,
F1,799
0,99
p=
= =
p=
= F1799
F4799
2,23,
F4799
0,16,
0,14
F1799
0,57,
=
p=0,68
F1799
1,08,
0,30
3,67,
0,06
=
p=p=
=
p= = 12,29,
F4799
F4799
F1799
0,20,
F1799
0,94
2,79,
0,10
0,98,
0,32
=
p=
=
p=
=
p= p< =
p=
= =
p= F1799
F4799
0,22,
F4799
1,18,
F1799
F1799
6,74,
0,01
0,09,
0,77
=
p= 0,32
1,26,
0,28
p=
=
p=
Puntuaciones de diferencia

Una puntuación de diferencia positiva indica que se dirigió más

comportamiento a la hembra de mayor exposición, una puntuación de
diferencia negativa muestra que los machos responden más a las
hembras de menor exposición, y una puntuación de diferencia cercana
a cero demuestra que hay poca diferencia en el comportamiento
hacia las dos hembras en una condición de observación. El tratamiento
Tratamiento F4.799
56,13,
p<
= 0.0001 0.0001

comportamientos
presentación
puntuaciones
RMANOVA
diferentes
hembras
diferencia
(tiempo
medidos
resultados
ejecutan
dentro
hacia
cada
cinco
por
tipo
dos
una
tres
los
las
de
Los
en
los
se
de
de de
un
el
de
las
de
vías
tuvo un efecto significativo en las puntuaciones de diferencia (Beha
viorFemaleA ÿ BehaviorFemaleB) para el tiempo pasado dentro de la
zona de preferencia (F4,799 = 121.65, p < 0.0001); sin embargo, debido
Branquia resplandeciente

a que se encontró un efecto de interacción tratamiento × exposición del

ensanchar
branquias
hembra,
Tabla
ala
a hembra)
dirigidos
dedicado
orientarse
ynúmero
dedicado
hembra
hembra,
golpes
dedicado
tiempo
1hembra,
tiempo
hacia
seguir
tiempo
hacia
las
la
alacola
una
de
a 121,65,
Tiempo
F4,799
0,0001
por
=p< Orientación
108,26,
F4,799
0,0001
=p< Seguimiento
F4,799
0,0001
54,75,
p<
= F4,799
Latidos
30.97,
cola
de
=p< Las
la
se
de
elEE2
hacia
a
laun
en
de simultáneamente
comportamiento
hembras
exposición
obtuvieron
mayor
restando
hembra
hacia
menordel
de
con
ese
de
conlase
la la
el ese
nivel
de
se
dela
la
la femenina
hacia
Cuando
mismo
hembra La
el
de
la
de significativos
comportamiento
interacción.
(Tratamiento)
RMANOVA,
presentación
comportamiento
(Exposición),
incluyeron
exposición
(Duración)
posibles
femenina
exposición
masculinaefectos
negrita
efectos
duración
exposición,
presentaron
exposición.
tipo
restó
hacia
cantidad
diferencia dedefactores
izquierda.
comportamiento
cantidad
hembra
tratamiento
derecha
puntuaciones
hembra los
en
la
yla están
fueron
todos
Los
en
los
de
yse

macho (F4,799 = 2.60, p = 0.03), este factor no puede analizarse por

separado (Tabla 1). Las puntuaciones de diferencia para los hombres
no expuestos en el tratamiento de alta exposición + baja exposición
fueron más negativas que todos los demás tratamientos por exposición femenina
Machine Translated by Google
a
Automóvil club británico a expuesta a la hembra control (Z ÿ 6.08, p < 0.0001).
B
B macho (tratamiento: F4,799 ÿ 56,13, p < 0,0001; tratamiento × exposición: F4
B B
C
D
Fig. 2 Diferencias en las puntuaciones (BehaviorFemaleA ÿ BehaviorFemale B)
para el tiempo empleado por las hembras en los cinco emparejamientos diferentes
de hembras que recibieron los machos: control + control (CC), alta exposición +
alta exposición (HH), baja exposición + control (LC), exposición alta + control (HC)
y exposición alta + exposición baja (HL) tanto para los machos de control como
para los expuestos. Las diferencias significativas se denotan con letras diferentes.
Las barras de error representan ± 1 SEM y ÿ = 0.05
combinaciones de dosis para el tiempo de permanencia en la zona de
preferencia (Z ÿ 2,61, p ÿ 0,001; fig. 2). Esto significa que los machos de control
pasaron más tiempo cerca de la hembra expuesta a la concentración más baja
de EE2 que a la concentración más alta cuando se encontraron con ambos
simultáneamente. Los machos expuestos tuvieron más puntajes de diferencia
negativa en este mismo tratamiento que todos los demás tratamientos por
combinaciones de exposición con la excepción de los machos no expuestos en
el tratamiento de alta exposición + baja exposición (Z ÿ 5.14, p ÿ 0.0001). Los
puntajes de diferencia para el tiempo pasado en la zona de preferencia fueron
los más altos en los tratamientos de baja exposición + control y alta exposición
+ control, independientemente de si los machos estuvieron o no expuestos a
EE2, lo que significa que los machos prefirieron a las hembras expuestas (Z ÿ
5.01 , p ÿ 0,0001, figura 2). Las puntuaciones de diferencia en los tratamientos
en los que los machos recibieron hembras del mismo nivel de exposición (p.
ej., control + control) fueron cercanas a cero, lo que indica que los machos
dirigieron cantidades similares de comportamiento a ambas hembras.
El tratamiento afectó las puntuaciones de diferencia para el tiempo dedicado
a la orientación, así como la cantidad de tiempo dedicado al seguimiento
(F4,799 ÿ 54,75, p < 0,0001; Tabla 1). Las puntuaciones de diferencia dentro
del tratamiento de exposición alta + exposición baja fueron más negativas que
las encontradas en los otros cuatro tratamientos para ambos comportamientos,
lo que sugiere que se prefirió una hembra de exposición baja a una de
exposición alta (Z ÿ 6.04, p < 0,0001). Además, las puntuaciones de diferencia
para el tiempo dedicado a la orientación y el tiempo dedicado al seguimiento
fueron las más positivas en el control de baja exposición + y en el de alta
exposición.
RA Cram et al.
+ tratamientos control, lo que significa que los machos prefirieron la hembra
Para la diferencia entre la cantidad de tiempo que los machos dedicaron a
ensanchar las branquias a una hembra frente a la otra hembra, tanto el
tratamiento como la interacción entre el tipo de tratamiento y la exposición del
,799 ÿ 12.29, p < 0.0001, Tabla 1) influyó. Las puntuaciones de diferencia
fueron las más negativas para los machos no expuestos en el tratamiento de
hembras de alta exposición + hembras de baja exposición (Z ÿ 4,22, p < 0,0001;
Fig. 3a). El segundo puntaje de diferencia más negativo se encontró para los
machos expuestos en este mismo tratamiento (Z ÿ 2.00, p ÿ 0.046).
Las puntuaciones de diferencia para el ensanchamiento branquial fueron las
más positivas para los machos no expuestos en los tratamientos de baja
exposición + control y alta exposición + control, lo que significa que tanto los
machos expuestos como los no expuestos prefirieron a las hembras de baja
exposición sobre las de alta exposición (Z ÿ 3.63, p ÿ 0.003 ; Fig. 3a) y las
siguientes puntuaciones de diferencia más altas ocurrieron cuando los machos
expuestos estaban en estos mismos dos tratamientos, lo que muestra que el
aleteo branquial aumentó cuando las hembras estuvieron expuestas a
cualquiera de los tratamientos con EE2 (Z ÿ 3,35, p < 0,001). Nuevamente, las
puntuaciones de diferencia fueron cercanas a cero tanto para los machos de
control como para los expuestos en los tratamientos de alta exposición + alta
exposición y control + control.
Las puntuaciones de diferencia para los latidos de la cola se vieron influidas
por la exposición de los machos, el tratamiento y una interacción entre la
exposición y el tratamiento de los machos (exposición: F1799 ÿ 6,74, p = 0,01;
tratamiento: F4799 ÿ 30,97, p < 0,0001; exposición × tratamiento: F4 ,799 ÿ
2,78, p = 0,03, tabla 1). Los machos de control en los tratamientos de alta
exposición + control y baja exposición + control tuvieron las puntuaciones de
diferencia más altas en el número de golpes de cola que dieron a las dos
hembras (Z ÿ 2.52, p < 0.01; Fig. 3b).
Los machos expuestos en estos mismos dos tratamientos tuvieron las
siguientes puntuaciones de diferencia más altas, lo que indica que las hembras
tratadas con EE2 fueron preferidas tanto por los machos expuestos como por
los no expuestos (Z ÿ 2,04, p ÿ 0,04). Finalmente, las puntuaciones de diferencia
más negativas se encontraron en el tratamiento de alta exposición + baja
exposición, lo que significa que las hembras de baja exposición provocaron
más golpes de cola que las hembras de alta exposición (Z ÿ 2.76, p ÿ 0.006; Fig. 3b).
Respuestas totales totales
El tipo de exposición de los machos (control frente a expuestos a EE2) y la
combinación de visualización de las hembras influyeron en la cantidad total de
tiempo que los machos pasaron en las zonas de preferencia (exposición:
F1.799 = 99,80, p < 0,0001; tratamiento: F4.799 = 9,23, p < 0.0001; Tabla 2).
Los machos expuestos pasaron menos tiempo en general en las zonas de
preferencia que los machos no expuestos (Z = 9,99, p < 0,0001). Los machos
pasaron menos tiempo en las zonas de preferencia cuando estaban presentes
las hembras del mismo nivel de exposición (es decir, control + control) en
comparación con las hembras que diferían en los niveles de exposición de EE2
(Z ÿ 2,52, p ÿ 0,01). La exposición masculina, el tratamiento y un efecto de
interacción entre estos
Machine Translated by Google
Apareamiento bajo la influencia: los peces luchadores siameses machos prefieren hembras expuestas a EE2
a)
Y
Y
D D
C
C C C
B
a
Fig. 3 Diferencias en los puntajes para a la cantidad de tiempo que los machos dedicaron a
abrir las branquias y b la cantidad de golpes de cola dirigidos a las hembras en los cinco
tratamientos: control + control (CC), alta exposición + alta exposición (HH), baja exposición +
control (LC), exposición alta + control (HC) y exposición alta + exposición baja (HL). La
respuesta de un macho a la hembra con el nivel más bajo de exposición siempre fue
dos factores, afectaron la cantidad total de tiempo que los machos dedicaron
a orientarse hacia las hembras (exposición: F1.799 = 133,36, p < 0,0001;
tratamiento: F4.799 = 9,47, p < 0,0001; exposición × tratamiento: F4.799 =
3,22, p = 0,01 (tabla 2). En general, los machos expuestos pasaron menos
tiempo orientándose que los machos no expuestos, independientemente
del tipo de tratamiento (Z ÿ 5,27, p ÿ 0,0001; Fig. 4). Además, los machos
expuestos pasaron menos tiempo orientándose hacia las hembras cuando
las hembras tenían el mismo nivel de exposición a EE2 frente a diferentes
niveles (p. ej., control + control frente a alta exposición + control; Z ÿ 3,02, p
ÿ 0,003).
La cantidad total de tiempo que los machos dedicaron al seguimiento
estuvo influenciada por la duración de la exposición de las hembras a EE2
y el tipo de tratamiento (Tabla 2). Los machos pasaron menos tiempo
rastreando cuando las hembras habían estado expuestas a EE2 durante 2
semanas en comparación con 1 semana (Z = 3,77, p = 0,0002). Esto sugiere
que las mujeres pueden comportarse de manera diferente cuanto más
tiempo estén expuestas a EE2. Los machos también dedicaron más tiempo
al seguimiento cuando estaban presentes hembras con diferentes niveles
de exposición a EE2 que cuando estaban presentes hembras con la misma
cantidad de exposición a EE2 (Z ÿ 2,10, p ÿ 0,04). El tiempo que los machos
dedicaron a abrir las branquias se vio afectado por la duración de la
exposición de la hembra y la exposición del sujeto, pero no por otros
factores (duración: F1799 = 5,14, p = 0,02; exposición: F1799 = 153,62, p <
0,0001; Tabla 2). Los machos dedicaron menos tiempo a abrir branquias a
las hembras expuestas a EE2 durante 2 semanas que las expuestas durante
1 semana (Z = 2,27, p = 0,02). Los machos expuestos también pasaron
(Persaud
menos tiempo abriendo branquias que los machos de control (Z = 12,39, p < 0,0001). y Galefel total
Finalmente,
B)
a a
B B
C C C C
D D
restado de la respuesta a la hembra con el mayor nivel de exposición. Cuando la pareja
experimentó cantidades equivalentes, el comportamiento de la hembra de la derecha se restó
al de la hembra de la izquierda.
Las diferencias significativas se denotan con letras diferentes. Las barras de error representan
± 1 SEM y ÿ = 0.05
el número de golpes de la cola se vio afectado por la exposición de los
machos (F1,799 = 50,45, p < 0,0001; Tabla 2). Como ocurre con la mayoría
de los comportamientos medidos, los machos expuestos batieron menos la
cola que los machos no expuestos (Z = 7,10, p < 0,0001).
Discusión
La presencia del imitador de estrógeno EE2 en los ecosistemas acuáticos
tiene efectos fisiológicos y de comportamiento conocidos en los organismos
que viven en estas aguas (Frye et al. 2012). La mayor parte de la
investigación en esta área se ha centrado en los cambios en los machos y
las hembras reciben poca atención. En este estudio, examinamos si la
exposición a EE2 afectó a las hembras de una manera que pudiera influir
en la preferencia de los machos. Para abordar esto, se examinaron los
cambios en el comportamiento de los machos hacia las hembras como
medidas indirectas del comportamiento alterado de las hembras y/o la
fisiología reproductiva. Recientemente se ha descubierto que las hembras
evitan a los machos que han estado expuestos a EE2 (Dzieweczynski y
Kane 2017). Por lo tanto, al examinar cómo la exposición a EE2 produce
cambios en el comportamiento reproductivo masculino y femenino, podemos
obtener una imagen más completa de cómo este compuesto afecta los
sistemas de apareamiento. Los resultados sugieren que los peces luchadores
siameses machos en realidad prefieren a las hembras que han estado
expuestas a EE2, quizás porque la adición de estrógeno aumenta la
receptividad de las hembras. Una mayor preferencia por los machos podría
ser beneficiosa para las hembras si disminuye la agresión durante el cortejo
Machine Translated by Google

RA Cram et al.

un aa
a
a

B B
B

exposición F4,799
0,34,
0,86
p=
= F4,799
0,31,
0,87
p=
= F4.799
1,22,
0,30
p=
= F4,799
0,75,
0,56
p=
= F4.799
1,26,
0,28
p=
=

F1,799
1,66,
0,20
p=
= F1.799
1,99,
0,16
p=
= F1.799
2,40,
=0,12
p= F1,799
0,01,
0,94
p=
= F1,799
0.03,
p=
= 0.86

F4.799
2,36,
=0,06
p= F4.799
3,22,
0,01
p=
= F4.799
2,04,
0,09
p=
= F4,799
0.39,
p=
= 0.82 F4,799
0.60,
p=
= 0,66

Fig. 4 La cantidad total de tiempo que los machos dedicaron a orientarse hacia las hembras
(es decir, BehaviorFemaleA ÿ BehaviorFemale B) fue influenciado por un
efecto de interacción entre la combinación de mujeres que vieron: (control
+ control (CC), alta exposición + alta exposición (HH), baja
exposición + control (LC), alta exposición + control (HC) y alta
exposición + baja exposición (HL)) y su propio nivel de exposición. Las
diferencias significativas se indican con letras diferentes. Las barras de
×
×Tratamiento
Tratamiento
exposición
exposición
duración
Duración
duración
× F4,799
0,85,
0,50
p=
= F4.799
1,33,
0,26
p=
= F4,799
0.69,
p=
= 0,60 0.43
error representan ± 1 SEM y ÿ = 0,05

2005; Dzieweczynski et al. 2013) o si brinda oportunidades para que las

hembras accedan a parejas de mayor calidad
(Edward y Chapman 2011). Los machos prefieren las hembras
expuestos a una dosis más baja de EE2 que los expuestos a una
mayor concentración, lo que indica que, son todas las mujeres en un
la población está expuesta, puede haber un punto en el que
Exposición p<0,0001
133,36,
F1.799
= F1,799
0,54,
0,46
p=
= 153,62,
F1.799
p<
= 0.0001

las hembras expuestas ya no son más atractivas. Niveles de

El EE2 en ecosistemas acuáticos puede alcanzar hasta 50 ng/L
(Ciocan et al. 2010), una concentración en la que es poco probable
los machos mostrarían una preferencia por las hembras, ya que
estar completamente feminizado. Además, la exposición EE2 ha
consecuencias reproductivas negativas en los machos, incluyendo
tasas de cortejo reducidas y menor viabilidad de los espermatozoides (p. ej.,
Duración = F4.799
0,0001
F1.799
99,80,
F1.799
1,07,
0,07,
0,79
0,37
=
p<
=
p= p= F1,799
0,08,
0,78
p=
=
Kristensen et al. 2005; Dzieweczynski y Kane 2017).
Dado que tanto los hombres como las mujeres simultáneamente
experimentar una exposición a EE2 en la naturaleza, los efectos generales
de la exposición en la reproducción es probable que sean negativos
como disminución de los intentos de cortejo de los machos y alteración
receptividad en las mujeres.
Puntuaciones de diferencia y capacidad de respuesta total
Tratamiento F1.799
F4.799
5,14,
0,02
1,45,
0,22
p=
=
p=
= demostrar que los machos alteran su comportamiento hacia las hembras
comportamiento
tratamiento
RMANOVA
Resultados
hembras
ejecución
dirigido
ambas
dentro
sobre
total
vías
tres
un
de
de
de
el
de
laa

basado en si las mujeres habían experimentado o no EE2

exposición. Los machos realizaron más conductas de cortejo al

Tabla
2 Tiempo
F4,799
0,0001
9,23,
por
p<
= Orientación
F4,799
0,0001
9,47,
p<
= Seguimiento
=F1,799
14.21,
F4,799
0.0002
0.002
4.38,
=
p=p= Ensanchamiento
branquial = F4,799
F1,799
50.45,
F1,799
0.96,
F4,799
Golpes
0.01
2.71,
=
p=0.10
0.26,
0.90
cola
=
p=
de p=
=
p= tipo
de
La
el delos
la
yla interacción.
(Tratamiento)
RMANOVA,
presentación
(Exposición),
incluyeron
exposición
(Duración)
posibles
femenina
exposición
masculina
efectos
femenina
duración
factores
fueron
todos
los
de
yse
en significativos
efectos
negrita
están
Los
en
expuesta que la hembra no expuesta en una pareja, reflejada por
mayores puntuaciones de diferencia positiva. Además, los machos
hembras preferidas expuestas a una dosis más baja de EE2 más
que las mujeres expuestas a una dosis más alta cuando los dos estaban
presentado simultáneamente. Preferencia masculina cuando un bajo
Machine Translated by Google
Apareamiento bajo la influencia: los peces luchadores siameses machos prefieren hembras expuestas a EE2
la presencia de una hembra de exposición y una hembra de alta exposición
fue mayor que cuando se presentaron juntas una hembra no expuesta y una
hembra expuesta. Esto indica que los machos tienen preferencias más fuertes
cuando pueden evaluar simultáneamente a las hembras expuestas a diferentes
concentraciones de EE2.
Cuando estuvieron presentes mujeres con niveles idénticos de exposición, los
hombres respondieron de manera similar hacia ambas mujeres, lo que indica
que las preferencias observadas se debieron a la diferencia en la concentración
de EE2 en lugar de algunas diferencias inherentes.
entre las mujeres en el estudio.
Si los machos experimentaron o no la exposición a EE2, también influyó
en el comportamiento reproductivo.
Si bien tanto los machos no expuestos como los expuestos exhibieron
preferencias similares, estas preferencias fueron más débiles en los machos
expuestos. Los machos expuestos pueden tener más dificultades para evaluar
las diferencias entre las hembras porque se ha descubierto que la exposición
a EE2 afecta la capacidad de reconocimiento y la atención en otras especies
expuestas (Zala y Penn 2004; Mills y Chichester 2005; Peterson et al. 2017).
Lo que es más importante, y no sorprendente, los hombres expuestos
respondieron menos que los hombres que no estuvieron expuestos a EE2, lo
que respalda aún más el cuerpo de literatura existente sobre las reducciones
en los comportamientos típicos de los hombres después de la exposición.
Es posible que la exposición a EE2 en las hembras haya aumentado la
receptividad de las hembras, causando cambios morfológicos o de
comportamiento que fueron evidentes para los machos pero que los
observadores humanos no detectaron. Las hembras de pez luchador siamés
muestran barras receptivas a lo largo de sus costados cuando se preparan
para la cópula (Simpson 1968) y el aumento de estrógeno puede haber
causado cambios sutiles en la aparición de este patrón de barras.
No hubo diferencia en el número de mujeres que mostraron estas barras con
los tres niveles de exposición, pero la intensidad de la coloración de la barra o
la duración de la expresión pueden haber diferido de una manera que fue
perceptible para los sujetos masculinos pero no perceptible para los
observadores. El tamaño y la masa del cuerpo femenino a menudo se
correlacionan positivamente con los niveles de estrógeno, así como con la
preferencia masculina (Doyle et al. 2013); sin embargo, estos factores se
controlaron en este estudio, por lo que no pueden ser responsables de las
diferencias en la preferencia masculina entre los tratamientos. Lamentablemente,
pocos estudios han evaluado los efectos de EE2 en la receptividad femenina
(pero véase Dzieweczynski y Kane 2017). EE2 en dosis bajas estimula la
producción de huevos, pero cantidades más altas disminuyen la fertilidad en
el pez cebra hembra (Silva et al. 2012; Söffker et al.
2012). La exposición temprana a EE2 aumenta el comportamiento de habitar
en el fondo, pero no tiene ningún efecto sobre los comportamientos sociales o
reproductivos en la edad adulta de las hembras guppies (Volkova et al. 2012).
Por lo tanto, determinar los cambios morfológicos y/o conductuales precisos
que ocurren en las hembras después de la exposición a los EDC que luego, a
su vez, alteran las elecciones de los machos es un área importante para
futuros estudios.
Para cerrar, este estudio demuestra que los machos prefieren a las
hembras expuestas a EE2, como se refleja tanto en general
respuestas y diferencia de puntuaciones. Sin embargo, hay un límite a esta
preferencia ya que, cuando las hembras que recibieron dosis altas y bajas
estuvieron presentes, los machos dirigieron más comportamiento a la hembra
con la exposición más baja. Estos resultados sugieren que las alteraciones en
la elección de pareja pueden ser un mecanismo potencial por el cual la
exposición a EE2 podría conducir a cambios en la estructura de la población
y/o al colapso de la población. La exposición crónica a una dosis baja de EE2
condujo rápidamente al colapso de la población de pececillos de cabeza gorda
(Kidd et al. 2007) y pez cebra (Nash et al. 2004) al alterar la ovogénesis en las
hembras y producir intersexualidad en los machos. Tanto los machos como
las hembras influyen en la reproducción y es probable que experimenten la
exposición en la naturaleza al mismo tiempo, aunque pueden diferir en la
cantidad de exposición que encuentran. A medida que crece el tamaño de la
población humana, los niveles de EDC en todo el mundo seguirán persistiendo
y probablemente aumentarán (Adeel et al. 2017; Gaw et al. 2014).
Por lo tanto, incluso si la exposición a EE2 no es directamente perjudicial
para las hembras expuestas, aún podría tener implicaciones negativas porque
EE2 disminuye los comportamientos típicos de los machos necesarios para
una reproducción exitosa (Peterson et al. 2017).
En otras palabras, incluso si los machos no expuestos prefieren a las hembras
expuestas en nuestro sistema, se espera que cualquier beneficio de esto sea
mínimo por dos razones; primero, EE2 disminuye los comportamientos típicos
de los machos (Peterson et al. 2017) y, segundo, porque se ha demostrado
que las hembras evitan a los machos expuestos a EE2 (Dzieweczynski y Kane
2017). Los resultados actuales demuestran aún más los efectos negativos que
EE2 tiene en los machos porque los machos expuestos, aunque mostraban
preferencias similares a los machos no expuestos, tenían preferencias más
débiles y respondían menos a las hembras en general. Por lo tanto, EE2
podría contribuir al colapso de la población incluso si los individuos expuestos
aún son fisiológicamente capaces de aparearse. Los estudios futuros deberían
examinar el comportamiento de apareamiento y examinar la viabilidad de la
descendencia después de la exposición. En el diseño del estudio actual, los
machos y las hembras estaban separados entre sí y, por lo tanto, solo podían
interactuar a través de medios visuales. Debe examinarse el papel de la
información feromonal en las interacciones de apareamiento dentro de esta
especie, ya que también podría verse influenciado por la exposición a EE2. Al
comprender cómo los comportamientos reproductivos, como la elección de
pareja, se ven afectados por la exposición a los EDC, podemos obtener una
imagen más precisa de las consecuencias a largo plazo de la exposición.
Disponibilidad de datos
Todos los datos analizados durante este estudio están disponibles a través de
Open Science Framework (osf.io/e3qj9).
Agradecimientos Los autores desean agradecer a Haley LaMonica por su ayuda en la
realización de ensayos conductuales. También agradecen a Jessica Kane, Kelley Portrais,
Megan Stevens y dos revisores anónimos por sus comentarios sobre una versión anterior de
este manuscrito. Amy Keirstead y Molly Wright jugaron un papel decisivo en la creación de la
solución EE2 y el análisis de EE2 en muestras de agua.
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Cumplimiento de normas éticas
Conflicto de intereses Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses.
Aprobación ética Se siguieron todas las pautas internacionales, nacionales y/o
institucionales aplicables para el cuidado y uso de animales.
Los protocolos de cuidado y experimentación animal fueron aprobados por la UNE
IACUC y amparados bajo el protocolo UNE-20130910DZIET.
Consentimiento informado Todos los autores han aprobado esta versión del trabajo.
Nota del editor: Springer Nature se mantiene neutral con respecto a los reclamos
jurisdiccionales en mapas publicados y afiliaciones institucionales.
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