CENTRIFUGACIÓN

Se habla de centrifugación cuando tenemos partículas de distinto tamaño en un medio acuoso, éstas sedimentan hacia el fondo a una velocidad que depende de su peso. Este efecto podría utilizarse para separar componentes de distinto peso si no fuera porque las velocidades de sedimentación son pequeñísimas, por lo que el sistema no es útil. Así, pues lo que se hace es aumentar dichas velocidades de sedimentación haciendo girar muy rápidamente la mezcla. En este caso, la fuerza centrípeta hace el papel de la gravedad (peso) y puede ser mucho mayor que éste haciendo girar muy rápido la mezcla: este es el principio de la centrifugación y de la ultracentrifugación. Se coloca la mezcla en un aparato que la haga girar a velo cidad angular constante muy elevada. Una vez está girando, la mezcla experimenta una aceleración centrípeta que puede llegar a ser, en ultracentrifugadoras de laboratorio, unas 500000 veces la aceleración de la gravedad. Esta fuerza empuja a sedimentar, a distinta velocidad, a las partículas de distinta masa de la mezcla, creándose distintos estratos con las partículas de cada clase. Este método es muy utilizado en biología y medicina.

Centrifugación
La centrifugación es un método por el cual se pueden separar sólidos de líquidos de diferente densidad mediante una fuerza rotativa , la cual imprime a la mezcla con una fuerza mayor que la de la gravedad, provocando la sedimentación de los sólidos o de las partículas de mayor densidad. Este es uno de los principios en los que la densidad: Todas lículas, por posa, sectadas por cualquier y una extensa variedad de técnicas derivadas de esta. Donde la fuerza es mayor a la gravedad.

Fundamento teórico
El objetivo de la centrifugación es separar sólidos insolubles(de particulas muy pequeñas dificiles de sedimentar)de un liquido. Para ello, se aplica un fuerte campo centrífugo, con lo cual las partículas tenderán a desplazarse a través del medio en el que se encuentren con la aceleración G. E=velocidad angular2 x radi

Tipos de centrífuga
Los aparatos en los que se lleva a cabo la centrifugación son las centrífugas. Una centrífuga tiene dos componentes esenciales: rotor (donde se coloca la muestra a centrifugar) y motor. Existen dos tipos de rotores:
y

De ángulo fijo: Los tubos se alojan con un ángulo fijo respecto al eje de giro. Se usa para volúmenes grandes.

y Basculante: t l i tí l i i t t t i ií l t tí t i l t tí it t i l i h ll t t i li t i t j l tí tí l l i i t i ti t t l l l l l t l i ti í ll t l ti i i i t l li 4ºC i i t t t it Analíticas: C i t i Preparativas: C ti : y l í " lt tí tí : t t " A il h t í l t l ti l l l l i i t íl ii l t H 4 ti tí De mesa: Al i t i 1 000-15 000 5 000 i H ti tili lt l i t l ti i it l i l i i t ll ti l l l lt 4 6 lit t i i ll y De alta capaci ad: Al h t 6 000 De alta vel cidad: i 5 000 Ultracentrí ugas: i ti y y l t h t 100 000 i i t Tipos de centri ugaci n y y y Centri ugaci n di erencial: l i i l i l l t i i l tí l i i il l l i i j t t t i íi l ti ti t l l j l it i l til l Centri ugaci n isopícnica: tí l l i i i t i t i l i i t i i A N h i Centri ugaci n zonal: tí l l i l i i t i l i i t l i i t i tí l tí l i t i ti t l i t l l ti t i l l i l i t l .

g) d2 ( s=. CENTRIFUGACION Técnicas de separaci n de partículas.g 18. todas las mol culas podrían sedimentar en el fondo del tubo.. Útil : partículas grandes (células. ribosomas y microsomas) y biomol culas.y densidad según su masa. de sobremesa o clínicas: pequeñas. precipitados de sales insolubles. y p- m) Coeficiente de sedimentaci n : variable según condiciones experimentales ! s de la partícula en un medio estándar ! agua pura a 20ºC ! s 20. COEFICIENTE DE SEDIMENTACIÓN: velocidad a la que se desplaza una partícula en el campo centrífugo unidad (1. Base : distinta velocidad de desplazamiento de las partículas en un medio líquido al ser sometidas a un campo centrífugo. IV.(eppendorf ->+ velocidad) Motor crea la fuerza centrífuga. el caso de macromoléculas :valores del orden de 10-13 segundos ! el Svedberg. Velocidades altas : > de 10. Conocer su comportamiento en centrifugaci n ! facilita el diseño de métodos para su aislamiento. Se debe tener en cuenta el tiempo de centri ugaci n ya que si se excede. sin refrigeraci n. INSTRUMENTACIÓN: centri uga .De baja velocidad. etc. densidad y forma. . 1S = 10-13 segundos.w Informaci n obtenida con s : Caracterizar a la partícula y obtener informaci n sobre su tamaño.000 rpm y tubos muy cortos->volúmenes muy peq. símbolo S. d2: volumen de la partícula p: densidad de la partícula m : densidad del medio g: fuerza centrifuga relativa : la viscosidad s: velocidad sedimentaci n Dimensiones: de tiempo a pesar de ser una vel. porque varia en f(x)del medio. Utili a rotores (fijos o de columpio) y sistemas de monitoreo. está acoplado al rotor q tiene celdillas donde se coloca la muestra en tubos. el más común de ellos mediante luz Uerfresones.tipos en f(x) velocidad: 1. máxima velocidad : 5.) Micrófugas : variante de las anteriores.000 rpm. Ultracentri ugaci n: Permite estudiar las características de sedimentaci n de estructuras subcelulares (lisosomas. Existen diferentes maneras de monitorear la sede las partículas en la ultracentrifugaci n.

Ultracentrífugas: velocidad máxima : 50. Insuficientes : ribosomas.000 . problema es caro. son ligeros. Elección depende : tipo de rotor. macromoléculas. sistemas auxiliares : sistema de refrigeración.. 3. tipo de muestra.-verticales: rotores macizos con celdillas esculpidas paralelas al eje. datos obtenidos no tan precisos Rotores: la pieza q sufre el giro y sobre la cual colocamos la muestra. pequeño tamaño. problema q tiene una vida media corta. a más se rompen y Vidrio Corex : hasta 25. S S S dietilpirocarbonato fenol . se corroe.-oscilantes. para controlar mejor la tº. Tienen que ser materiales ligeros y resistentes a las altas velocidades. porque evita el rozamiento.000 . volumen y tipo de fraccionamiento. Materiales : Vidrio: ventaja es transparente.2. el AND se pega a sus paredes y Hasta 3000 g. virus. 3. los tubos tienen q estar perfectamente balanceados.80. q no interaccionen con la muestra y resistentes para q no se deforme a altas velocidades. estimaciones cuantitativas de S. flotantes o basculantes: las celdillas no están ancladas de 2. algunas con sistemas de vacío.25. tipos: 1.000 rpm. Tipos : y Analíticas : obtención datos precisos propiedades de sedimentación (s. duraderos y caros. macromoléculas). sistema de alto vacío (obligatorio). PM). y Inerte.De alta velocidad: velocidad máxima : 18. virus.000 rpm . Útil : fracciones celulares. y Preparativas :aislamiento de partículas de bajo S (microsomas. Tubos: condiciones : inertes.-de ángulo fijo: celdillas con una inclinación.000 g Soluciones solventes alcalinas Policarbonato S Plásticos.. La mayoría son aleaciones de Al. o fibra de carbón. refrigeradas para evitar el calentamiento del rotor por rozamiento con el aire . Alternativa Titanio.

abundaran las de mayor s ->no hay pureza.. y min. max. Útil : aislamiento de células y orgánulos subcelulares Para evitar la baja resolución podemos colocar la muestra en una banda estrecha. la dmax es menor q la dmedia de las partículas.C. DIFERENCIAL: La muestra se distribuye homogénea. R R R S R R R R . 2. así todas las partículas parten de un mismo pto-> fraccionamiento. Separación en función del coeficiente de sedimentación (s).C. Útil : separación partículas con " s por " tamaño y forma.transparen Polisulfano No muy trasparente Polipropileno y polialomero eppendorf S: sensible R: resistente TIPOS DE CENTRIFUGACION: 1. en el rango de las densidades de las partículas a separar. Separación de las partículas en función de su s. Separación de los componentes de la muestra en bandas o zonas 3.por todo el tubo.C. Método de equilibrio-> la partícula se detiene cuando p= m . EN GRADIENTE DE DENSIDAD: Muestra : parte superior como una fina banda. va de la parte superior con la d min hasta el fondo con la d max ->variación gradual de la densidad en el medio. ZONAL EN GRADIENTE DE DENSIDAD: El valor de densidad de las partículas. Función del gradiente : estabilizar el medio.. ya q como se distribuyen por todo el tubo en el pellet habrá de todas las partículas. no está incluido en el gradiente de densidad empleado.-C. Tiempo parámetro a controlar.Velocidad de centrifugación mucho más alta que en la centrifugación zonal.. porque influye en la distancia q recorre. reorganización del líquido -> evita usando gradientes de densidad. No dependencia del tiempo . ISOPICNICA: Gradiente de densidad. Capacidad de separación pobre. pero con densidades similares 4. Se pueden producir corrientes de convección .

pureza.C. alta viscosidad Util : fraccionamiento orgánulos celulares y virus Ficoll Sacarosa polimerizada (PM 400.No difusible 6. > densidad con sacarosa.Aplicación de la muestra : no es relevante. inerte. ahí se coloca la muestra.Fácilmente separable de la muestra 5. Útil para la separación de cél sanguíneas.Valores mínimos de viscosidad 4. neutros : metrizamida y Nycodenz .No provocar modificaciones biológicas en la muestra 2. iónicos : metrizoato. aún con tamaños similares.. Centrífuga sobre una disolución homogénea más densa q la d de las cel a aislar.Bajo coste. afecta al movimiento de la particula Útil : partículas grandes (células y orgánulos celulares) *Derivados iodados del ácido benzoico Derivados ácido triodobenzoico (sustituciones para ! solubilidad) Biológicamente inertes.000). Más estable Inconveniente : ! viscosidad. Utilidad : partícula de " densidades. GRADIENTES DE DENSIDAD: y Características necesarias : 1.No interacción con el método de detección (visible -UV) 3. densidad max. 5. Sacarosa y glicerol Ventajas: coste. COLCHON: busca diferencias en las d de el componente a separar y el contaminante. carácter no iónico Desventajas: activos osmóticamente.

bromuro de etidio *Otras sales : Trifluoracetato de cesio ! separar topoisómeros de ADN Rubidio : similar al cesio. Inconvenietes : coste. fácil formación. 2. Útil : separación de ADN ! distamicina. Útil para macromoléculas resistentes a la fuerza iónica ! ácidos nucleicos. < densidad max. las otras precipitan. corrosión.8 M.Densidad máxima : 1. mem . interferencia con UV afecta a la absorvancia Percoll suspensiones de partículas (5. Muy corrosivas->ojo rotores Sulfato de cesio (más usadas) densidad max.01 g/cm3. TIPO Y FORMACION DE GRADIENTES En f(x) de la variación de la densidad: y Discontinuos y y Comenzando por la disoluci n más densa (³overlaying´) Comenzando por la disoluci n menos densa (³underlaying´) B) Continuos .. elevada fuerza iónica.91 g/cm3 .4 g/cm3. . variación de densidad del ADN por % G+C. virus.cel.15 nm) de ácido silícico con Revestimiento de polivinilpirrolidona (PVP) Útil : partículas grandes (tamaño de las partículas coloidales y sensibles osmóticamente) *Sales de metales alcalinos pesados : cesio y rubidio Altas concentraciones : 6 . gran estabilidad. Útil para estructuras sensibles a la fuerza iónica. Inconvenientes : coste. Capaz de bandear RNA Cloruro de cesio (más usadas) densidad max : 1.

. 2 casos: *centrifugación diferencial (verde): muestra distribuida homogénea-. Obs. proteínas) y Seguimiento actividad enzimática y Por marcaje radioactivo.tras cent. de centrifugación Evitar la inversión del gradiente Métodos : y Extracción directa del contenido del tubo y Perforación . Extracción directa de la banda y Por desplazamiento de ³abajo a arriba´ y Por desplazamiento de ³arriba a abajo´ y Por corte del tubo Detección de la muestra : y Espectofotométrica (ácidos nucleicos. y CI : necesario densidad! directamente con picnómetro o índice de refracción Manera fija al eje de la centrífuga-> móvil Inconveniente si la centrífuga no esta bien balanceadaa oscilación del tubo es incontrolada se puede perder la muestra. Hay sobrenadante y pellet. Condiciones : y y y Evitar turbulencias y distorsiones del gradiente Recomendable mantener la temperatura del tubo = temp.y y y Por di usi n Utilizando formadores de gradientes Por centrifugación : gradientes autogenerados FRACCIONAMIENTO Y ANALISIS DE LOS GRADIENTES.

Si en una separación sólido . La Centrifugación en la industria químico farmacéutica Ing. la fuerza centrifuga que se genera en un recinto que gira.*gradiente de densidad (rojo):muestra no homogénea.lí uido nuestro objeti o es lograr un efluente puro libre de partículas sólidas estamos ante un proceso de LARI I A I . El contenido es impulsado por la fuerza de la centrífuga y se dispone perpendicular a la dirección del eje de giro.Farmacéutica. SEDIME TA I Por su parte. no siendo necesaria la existencia de una diferencia de densidades entre el sólido el lí uido. Jesús García 2.sólido sólo puede basarse en la diferencia de densidades entre los lí uidos estos con el posible sólido presente. li . El pellet se coloca en el ext inferior del tubo + alejado del eje de giro.lí uido la lí uido . el contenido del tubo no sufre reorganización tubo vuelve su posición. uando en una separación lí uido . en el caso de centrifugación diferencial (1ºdibujo) En gradiente de densidad la muestra queda paralela al eje de giro (2º y 3º dibujo) Malos para sedimentar . proceso al cual se le denomina ILTRA I E TRI A. en cambio tambi n puede basarse en la diferencia de densidades encontrarnos ante la denominada E TRI A. gradiente de densidad: cuando comienza y acaba la fuerza centrífuga se reorganiza el líquido -> mecanismo para iniciar y acabar la centrifugación. el pellet se dispone en la superficie del tubo más alejada al eje de giro (1º dibujo) *C. Este proceso utiliza. al igual que la filtración es una operación ampliamente utilizada en la Industria Químico . la separación sólido . *C. §©¨ ¤  paraci La separación sóli o .lí uido . tubo provoca mov de las particulas x gradiente d. denominamos al proceso P RI I A I pesada libre de fase li era lo denominamos O E TRA I . lo q sufre un cambio de posición es el contenido del tubo. para lograr la separación deseada.1 . Cuando la fuerza acaba el contenido recupera su posición.lí uido nuestro objeti o es obtener la fase li era libre de cuando lo interesante es aislar la fase fase pesada.INTRODUCCION La centrifugación. cambio de posición del. diferencial: reorientación del líquido. Si lo ue se desea es obtener        ¥               ¥                       ¨¤      ¨   § ©¨ ¨ ¦ ¡ ¢ § ¡  ©¨ ¤  ©¨ ¦ § ¦ ¢ ¨ ¨ § ¡ ¡ § § ¦ ¡¢ § § ¡ ¢ ¤ ¥ £ ¢¡   La t if i i cibl aci aplicabl a la paraci con o in la presencia e sóli os.lí i a la lí i .lí i o puede basarse en la retención de las partículas en un edio filtrante.

una suspensión pero con mayor contenido de sólido nos referiremos a un proceso de ESPESAMIE TO. El ACTOR O se expresa como: CE TRI & ) & 0 ' ( ) & ' ( & donde: C = actor centrífugo. .2. 2.2. g = aceleración de la gravedad = 9. = uerza centrífuga Kg. % $ #" $ # " ! Esta fuerza se conoce como ERZA CE TRI donde: m = masa del cuerpo. m = masa del cuerpo Kg. . el cual nos permite evaluar la eficiencia de una centrífuga operada bajo estas condiciones al compararla con el proceso regulado a gravedad.81 m/ seg . ue tiende a alejar el cuerpo del centro de giro. 1 2 1 2 2 ) & ' ( 2 & ' 1 A y su valor vendrá expresado por: . c. 2 1 1 & 2 & & P = Peso del objeto o partícula Kg. El número de veces ue la fuerza centrífuga supera a la fuerza de gravedad se denomina ACTOR CE TRI O. .1 . .PRINCIPIOS Y TEORÍAS DE LA CENTRIFUGACIÓN Como se conoce Ver ig. todo cuerpo sometido a un movimiento giratorio según una trayectoria circular de radio R con una velocidad angular W experimenta una fuerza c. w = velocidad angular radianes/ seg.

6 8 . 8 7 6 6 5 En la figura 2.2B se presentan nomogramas para calcular el actor Centrífugo a altas revoluciones. planteando ue tal o mas cual centrífuga genera un campo centrífugo de tantas " ". 3 4 5 Para el cálculo aproximado puede utilizarse la expresión: Debemos destacar ue el actor Centrífugo se denomina tambi n como " " ó "Z".R = Radio de giro m). = RPM.2A se presentan nomogramas para calcular el actor Centrífugo a bajas revoluciones. En la figura 2.

para realizar una filtración centrífuga. .2 ) y ultra centrífugas 3 ).Carga. Esto será estudiado con mayor detalle en el punto 2. Sobre esta pared perforada se coloca un medio filtrante el cual retendrá las partículas sólidas contenidas en la suspensión a procesar.1 . Todo líquido o sólido cuyo radio sea inferior a Rb rebosará por encima del aro superior.Rs). súper centrífugas 4 . sobre la cual queda una capa de líquido retenido.4.4 podemos observar el corte de un cesto filtrante de radio Rc. En la figura 2. labio.Escurrido inicial.RL). de espesor Rs . F E D BBB B @ C BBB B BBB @ 9 C BBB BB @ A C BBB BB H A Al igual que el proceso de separación por filtración empleando un filtro. requerimos de un recinto denominado cesto filtrante.En dependencia de la magnitud del actor Centrífugo. o espalda que determina el máximo espesor de sólido o líquido retenible en la centrífuga. La dimensión Rc . G H . en el que se a retenido una torta de espesor Rc . el proceso de filtración por centrifugación puede ser dividido en las siguientes etapas: . el cual posee perforaciones en su superficie cilíndrica. El líquido que atraviesa el medio filtrante abandonará el rotor a través de la perforaciones del cesto.Lavado. .3.Rb corresponde al ancho del borde superior del cesto. 2.2. . .Escurrido final. las centrífugas se clasifican en: centrífugas -4 ).Descarga.Filtraci n Centrí uga Como se observa en la ig.2. también conocido como aro superior.

2.El caudal de alimentación . y detenida la suspensión de suspensión.2 .2. lo cual invertirá un tiempo determinado conocido como tiempo de escurrido tei). pero sólo son aplicables después que la torta ha sido depositada y durante el flujo de filtrado claro o lavado a través de dicha torta. será necesario desplazar el líquido sobrenadante.1.Los principios técnicos de la filtración a presión constante pueden ser modificados para su aplicación a la filtración centrífuga.1 La Carga Por lo antes expuesto. así como la disminución de la presión de la columna de líquido.4) . el caudal de alimentación debe ser tal que en todo momento RL sea ligeramente mayor a Rb para evitar el rebose del cesto y la consiguiente pérdi a de sólido y d suspensión.La superficie del cesto = 2 P Rc h = S Ec. El tiempo de carga necesario para que el sólido alcance un punto entre Rc y Rb dependerá de: .2. 2. Durante la carga. ) .2. el tiempo de carga necesario para que el sólido retenido alcance Rs tendrá que ser estimado experimentalmente ya que el cálculo teórico se dificulta por la variación del espesor de la torta y su permeabilidad. 2.Rb )h Ec.El contenido de sólidos en la suspensión a procesar.El escurrido inicial Una vez formado el espesor de torta deseado. 2.La capacidad del cesto = P Rc . Q P I I 2 2 I .

si se asume que la caída de presión de la acción centrífuga se iguala con el arrastre del líquido que fluye a través de la torta./m ). 2. r = densidad del líquido Kg.seg.). Rm = resistencia del medio filtrante m ).8) (m ). El tiempo de escurrido inicial será el tiempo necesario para que el volumen de líquido sobrenadante atraviese la torta al **** volumétrico calculado según la ecuación anterior. Al = área media logarítmicas de la torta = 2Ph Rc . a = resistencia específica de la torta m/ Kg. podemos obtener la siguiente expresión: donde: q = velocidad de flujo volumétrico m /seg.).Si se desprecian los efectos de la fuerza de gravedad y los cambios de energía cinética del líquido. Por ende: R R 2 3 -1 2 donde: VL = Volumen de líquido sobrenadante en el cesto = P(RL .).7) m 2 ).Rs)h q = velocidad de flujo de filtración en M /seg. 3 R R R R R R R 3 R R R . m = viscosidad del líquido Kg. que el flujo de líquido es laminar. que la torta está completamente llena de líquido.Rs))/l n(Rs/Rc) (Ec.2. mt = masa de la torta retenida en el cesto Kg. que la resistencia del medio filtrante es constante y que la torta es prácticamente incompresible.). Aa = área media aritmética de la torta = Rs + Rc) P h Ec. /m . S = superficie filtrante del cesto m ).

tales como: características y destino del sólido.2). 2.1.2. período en el cual la resistencia al desplazamiento del líquido es variable. Por ende. el tiempo de escurrido final corresponderá a la suma del tiempo de escurrido previo del líquido de lavado (teol) retenido en la centrífuga y del tiempo de escurrido final del líquido de lavado (t fl).2. . mecánico..1. El volumen de lavado y por ende el tiempo empleado para ello (tl) se determinará experimentalmente (ver punto 2.1.6 TIEMPO TOTAL DE UN CICLO A los tiempos anteriores por lo general hay que adicionarle los tiempos de aceleración (t ) y a frenado (tf) del equipo a menos que la centrífuga esté diseñada para su descarga en movimiento. su estimación dependerá en primera instancia de la experiencia del ingeniero o de los resultados experimentales. habilidad del operador.4 ESCURRIDO FINAL El tiempo de escurrido final (tef) se inicia cuando el nivel de líquido alcanza rs y concluye cuando RL = Rc.1.11 2. el tiempo de escurrido inicial podrá estimarse según la siguiente expresión: donde: rs = densidad aparente del sólido = MT /(P(Rc .Rs )h Ec. .11 y 2.2.3 El Lavado Por lo general la etapa de lavado es optativa y de realizarse se iniciará inmediatamente al concluir el escurrido inicial (cuando RL llega a RS) para evitar rajaduras de la torta que generen canalizaciones.3.2.. automático). método empleado (manual.5 Descarga El tiempo de descarga (td ) del sólido depende de varios factores. Estos tiempos se e calcularán empleando las ecuaciones 2. 2.tei = tiempo de escurrido inicial en minutos. etc. Este tiempo se puede calcular según la siguiente expresión: S Debe tenerse en cuenta que cuando se ha realizado el lavado. 2. Si despreciamos la resistencia del medio. 2.12 y utilizado los valores de la viscosidad y claridad del líquido de lavado.

Coeficiente de sedimentaci n (s) La velocidad de sedimentación de una partícula depende del campo centrífugo aplicado.14 Los procesos de centri ugado Existen dos métodos de separación en centrifugación: A. de la densidad del medio y del coeficiente de fricción. Para lograr la separación. que depende a su vez de la forma de la partícula. . B. Es una técnica muy útil. El coeficiente de sedimentación(s) es directamente proporcional a la masa de la partícula (m) e inversamente proporcional al coeficiente de fricción (f) de la misma. el tubo de centrífuga se llena con una mezcla uniforme problema.13 lavado. el ciclo de centrifugación será: T = ta + tc + tlo + tef + tf + td Cuando optemos por incluir el ec. (S) 1 S= 10-13 seg. Es un tipo de separación logrado en base al tamaño de las partículas. Tras la centrifugación se obtienen dos fracciones: un pellet que contiene el material sedimentado y un sobrenadante con el material no sedimentado. el tiempo total se calcula como: T = ta + tc + tlo + tl + teol + tefl + tef + tf + td ec. S La unidad se denomina Svedberg..Centrifugación en gradiente de densidad. Esta técnica consiste en someter a una muestra heterogénea de partículas a fuerzas de centrifugación crecientes por períodos de tiempo crecientes.. sobre todo para aislamiento de células y orgánulos subcelulares.Centrifugación diferencial. Los precipitados obtenidos luego de cada centrifugación estarán enriquecidos en una determinada partícula. Ésta depende de la masa y densidad de la partícula. los coeficientes de sedimentación de las partículas deben diferir en al menos un factor de tres (moléculas con s mayores precipitan primero).Por ende. 2. en H2O a 20 ºC m/f La centrifugaci n diferencial En este método. Se define coeficiente de sedimentación (s) como la velocidad de sedimentación por unidad de fuerza centrífuga. Es un parámetro útil para caracterizar una partícula y puede ser determinada en una ultracentrífuga.. 2.

La separación de los componentes de la muestra se presenta como diferentes bandas o zonas. las partículas . La condición fundamental es que la densidad máxima del gradiente final debe siempre exceder a la densidad de las partículas. La centrifugación de equilibrio en gradiente o isopícnica La centrifugación de equilibrio en gradiente separa las partículas con base en sus densidades diferentes. La centrifugación de equilibrio en gradiente permite que las especies sedimentantes se muevan por el gradiente hasta que alcanzan un punto donde su densidad y la del gradiente son idénticas. Existen dos variaciones dentro de la centrifugación en gradiente de densidad: y y Centrifugación de equilibrio en gradiente o isopícnica Centrifugación zonal Estas técnicas permiten la separación de partículas y moléculas que difieren en masa o densidad. por lo cual también se le llama centrifugación isopícnica. En esta técnica la muestra es disuelta en una solución isocrática y bajo la fuerza centrífuga el soluto forma el gradiente al distribuirse en el tubo durante la centrifugación. La muestra se sitúa en la parte superior del gradiente como una fina banda. cuya densidad aumenta desde la zona superior a la inferior. El gradiente se consigue con un soluto preferiblemente de baja masa molecular en un solvente en el que la muestra a analizar pueda ser suspendida.La centrifugaci n en gradiente de densidad El método de gradiente de densidad implica la utilización de un soporte fluido. En este punto no se producirá una sedimentación posterior debido a que flotan sobre un "colchón" de material que posee una densidad superior que la suya propia de tal manera que aunque se prolongue el tiempo de centrifugación. se denominan autoformados.

Moléculas con una alta proporción de G y C poseen mayor densidad como consecuencia de los tres puentes H formados. Frecuentemente se usa CsCl. En general se usan rotores de tipo swing-out. La migración depende de: el tamaño y forma de las partículas. La siguiente ecuación relaciona el % de G+C con la densidad (?) de la molécula: % (G+C)= [(?. bajo grado de ionización. Por otro lado el Cs+ se une a los fosfatos del DNA y RNA y a los grupos OH.85 g/ml. del DNA 1. Frecuentemente se usan con este propósito gradientes de sacarosa. Se requieren las siguientes características en los solutos usados para formar el gradiente: bajo PM (de manera que el tiempo requerido para lograr el equilibrio sea corto).1. otros medios usados con este fin son: glicerol.1.3 g/ml. y no su densidad. por ser un ión compacto. y el ión Ag+ se une a G y C). baja viscosidad y alta densidad. Los gradientes de densidad impiden que las bandas de cada componente se ensanchen por efecto de corrientes convectivas y se mezclen durante la aceleración y desaceleración del rotor. y ser buen solvente para las moléculas que se intentan resolver. La densidad de la partícula en ese punto se conoce como ³buoyant density´. Las muestras son centrifugadas lo suficiente como para separar las moléculas de interés. la fuerza centrífuga aplicada. Bajo fuerza centrífuga las partículas comenzarán a sedimentar a través del gradiente.1.7 g/ml y del RNA es 1.de las ribosas de manera que la densidad de las moléculas de RNA se incrementa más que la del DNA. tales como ácidos nucleícos.02 g/ml. así como diferentes orgánulos celulares. Ficoll.66)/0. Percoll. Esto es cierto para moléculas. La propiedad física sobre la que se fundamenta la separación es la masa de las partículas. transparencia a la luz UV. moviéndose cada partícula a diferentes velocidades dependiendo de su masa. la densidad máxima del gradiente no debe exceder la de las partículas a separar.no van a ir al fondo del tubo. si la centrifugación se prolonga en el tiempo las partículas se recuperan en el pellet. Esta técnica se emplea para separar partículas similares en tamaño pero distintas en densidad. como se muestra en el siguiente gráfico: .6 . el Cs+. El agregado de compuestos intercalantes como el bromuro de etidio permiten separar moléculas de DNA de distinta conformación aunque tengan la misma composición de bases. con el propósito de aumentar las diferencias entre las densidades de las moléculas (a pH neutro el Hg++ se une a T y A.098] 100 La centrifugación zonal La muestra a analizar se deposita en la parte superior de un gradiente de densidad preformado. A diferencia de lo que ocurre en la centrifugación isopícnica. más densos en el fondo que en la parte superior del tubo. sedimenta lentamente en los altos campos gravitacionales aplicados durante la centrifugación y se establece un gradiente con la mayor concentración en el fondo del tubo (el ión Cl. La densidad aproximada en CsCl de proteínas es 1.75 . Los gradientes de CsCl permiten separar moléculas cuyas densidades difieren en por lo menos 0. y la densidad y viscosidad del medio. En los medios de separación suelen incluirse también Hg++ o Ag+.lo sigue de manera de mantener la neutralidad de las cargas).

Productos. es una empresa con la misión de proporcionar servicios de calibración y calificación de la más alta calidad a equipos e instrumentos. haga contacto directo con ICLAB para solicitar mayor información sobre servicio de calibración de equipos. A. en cuanto a revoluciones por minuto y a tiempo de centrifugado. cumpliendo con los requerimientos de normas y recomendaciones nacionales e internacionales. cuenta con personal calificado para verificar y calibrar este tipo de equipos Instrumentos Científicos y de Laboratorio S. . (ICLAB).. V. Conozca el Perfil.Diagrama de representación de la velocidad de la centrifugación zonal e isopicnica 1: Densidad boyante de partículas de menos densidad 2: Densidad boyante de partículas de más densidad Con la finalidad de obtener separaciones adecuadas de los componentes de las mezclas es necesario que la velocidad y el tiempo de centrifugado sea el adecuado para lo cual el equipo en el cual se llevará a cabo el proceso deberá estar debidamente calibrado. Dirección y Teléfono de ICLAB. O bien. para lo cual Instrumentos Científicos y de Laboratorio (ICLAB). de C.

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