Phytothérapie (2008) 6: 160–164

© Springer 2008
DOI 10.1007/s10298-008-0307-1

Article original

Pharmacognosie

Étude de six huiles essentielles : composition chimique

et activité antibactérienne1
J. Kaloustian 1 , J. Chevalier 2 , C. Mikail 1 , M. Martino 2 , L. Abou 1 , M.-F. Vergnes 1
1
Laboratoire de chimie analytique, qualitologie, nutrition, Faculté de Pharmacie, Université de la Méditerranée, 27, boulevard Jean-Moulin,
F-13385 Marseille Cedex 05, France ; UMR INSERM 476 – INRA 1260 « Nutrition humaine et lipides », F-13385 Marseille, France ; Université de la
Méditerranée (Aix-Marseille 2), Faculté de médecine, IPHM-IFR 125, F-13385 Marseille, France
2
UMR-MD-1, Facultés de médecine et de pharmacie, Université de la Méditerranée, 27, Boulevard Jean-Moulin, F-13385 Marseille Cedex 05, France
Correspondance : e-mail : Jacques.Kaloustian@pharmacie.univ-mrs.fr

Résumé : Les huiles essentielles sont utilisées en médecine
traditionnelle pour leurs activités antiseptiques. Au cours
de travaux précédents, le genre Thymus avait montré de
bons résultats comme antifongique. L’étude a été pour-
suivie sur l’activité antibactérienne. Six huiles essentielles
(Lavandula angustifolia, Lavandula latifolia, Origanum
vulgare, Rosmarinus officinalis, Thymus vulgaris chémo-
type carvacrol, Thymus zygis chémotype thymol) ont été
testées sur deux souches : Escherichia coli et Staphylococ-
cus aureus. Pour la souche Escherichia coli, les huiles
essentielles d’origan et de thym à thymol sont les plus
efficaces.
Pour la souche Staphylococcus aureus, on note une
moindre efficacité ; l’huile essentielle d’origan est la plus
active. Ce sont les phénols présents dans les huiles essentielles
qui présentent une bonne activité antibactérienne.
Mots clés : CPG-SM – Origan – Thym – Escherichia coli –
Staphylococcus aureus
Study of six essential oils: chemical
composition and antibacterial activity
Abstract: Essential oils are used in traditional medicine for
their antiseptic action. During previous studies, the Thymus
genus had shown good results as an antifungal. Research
continued into its antibacterial activity. Six essential oils
(Lavandula angustifolia, Lavandula latifolia, Origanum
vulgare, Rosmarinus officinalis, Thymus vulgaris chemotype
carvacrol, Thymus zygis chemotype thymol) were tested on
two strains: Escherichia coli and Staphylcoccus aureus.
Essential oils of oregano and thyme with thymol were most
effective with respect to the strain Escherichia coli. For the
strain Staphylococcus aureus we observed little effect:
essential oil of oregano was the more active. Phenols present
in essential oils have a good antibacterial activity.
Keywords: GC-MS – Oregano – Thyme – Escherichia coli –
Staphylococcus aureus
Introduction
Il est connu depuis l’Antiquité que les huiles essentielles
(HE) présentent une activité antiseptique non négligeable.
Elles sont utilisées dans de nombreux domaines : pharma-
cie, cosmétique, agro-alimentaire... À la fin du XIXe et au
début du XX e siècle, plusieurs travaux scientifiques
relataient de l’action antiseptique de plusieurs HE [3, 4,
5, 22]. Le terme d’aromathé rapie apparaı̂t en 1937 [9].
L’aromatogramme est une méthode de mesure in vitro du
pouvoir antibactérien des huiles essentielles. C’est l’équi-
valent d’un antibiogramme où les antibiotiques sont
remplacés par les HE [2, 14]. Plusieurs HE présentent un
pouvoir antibactérien élevé [2] : origan d’Espagne, thym
(Thymus vulgaris), cannelle (Cinnamomum zeylanicum),
sarriette (Satureia montana), girofle (Eugenia caryophyl-
lata), par rapport à d’autres qui ont une activité moyenne :
pin (Pinus sylvestris), cajeput (Melaleuca leucadendron),
eucalyptus (Eucalyptus globulus), lavande (Lavandula
officinalis), myrthe (Myrtus communis), géranium rosat
(Pelargonium graveolens). Les HE sont connues pour leur
activité antibactérienne, notamment dans les maladies
respiratoires mais également contre Escherichia coli,
Salmonella enterica... [1, 6-8, 16, 26, 27, 30-32]. Les HE
présentant une bonne activité antibactérienne sont aussi
de bons antifongiques et antimycosiques [24, 25].

1
Communication présentée au 9ème Symposium International d’Aromathérapie et Plantes Médicinales, 16-18 mars 2007, Grasse

Certains d’entre nous avaient démontré l’activité anti-
fongique de plusieurs huiles essentielles, notamment celles qui
proviennent du genre Thymus, en synergie avec l’amphoté-
ricine B vis-à-vis de Candida albicans [10-13]. Cette étude a été
poursuivie par l’évaluation de l’activité antibactérienne.
Six huiles essentielles (Lavandula angustifolia, Lavandula
latifolia, Origanum vulgare, Rosmarinus officinalis, Thymus
vulgaris chémotype carvacrol, Thymus zygis chémotype
thymol) ont été testées sur deux souches : Escherichia coli
(bactérie Gram négative) et Staphylcoccus aureus (bactérie
Gram positive). Au préalable, les différents échantillons ont
été analysés par chromatographie en phase gazeuse couplée à
la spectrométrie de masse (CPG-SM), selon le protocole
développé précédemment [15, 17-19] afin de déterminer la
composition chimique exacte. Cette technique est très utilisée
dans l’analyse qualitative et quantitative des HE ; la RMN
donne également de bons résultats [21, 23, 28, 29].
Matériel et méthodes
Huiles essentielles
Les huiles essentielles de lavande (Lavandula angustifolia
et Lavandula latifolia), d’origan (Origanum vulgare) et de
thym (Thymus vulgaris et Thymus zygis) ont été fournies
par les producteurs locaux de la région Provence-Alpes-
Côte d’Azur (Paca). Elles ont été obtenues dans le courant
de l’année 2005 à partir de plantes cultivées dans la région
Paca et conservées à + 4 ˚C. Les études ont été menées
dans le courant de l’année 2006.
E´talons de terpènes et solvant
Les étalons de terpènes utilisés présentent une très grande
pureté (le plus souvent supérieure à 99 %) : linalol
(Fluka), acétate de linalyle (Extra Synthèse), 1-8 cinéole
(Merck), camphre (Merck), carvacrol (Aldrich), a-pinène
(Acros), camphène (Aldrich), p-cymène (Aldrich), g-ter-
pinène (Aldrich), thymol (Carlo Erba). L’alcool absolu
provient de Carlo Erba.
Conditions opératoires de la CPG-SM
Nous avons utilisé un appareil GC Varian 3400, MS Saturn à
ion trap, avec les librairies commerciales disponibles Wiley®,
Tableau 1. Composition chimique des six huiles essentielles étudiées
Huiles essentielles Principaux composés
Lavandula angustifolia Linalol 50,2 % ; acétate de linalyle 47,4 %.
Lavandula latifolia 1-8 cinéole 18,8 % ; linalol 71,4 % ; camphre 9,3 %.
Origanum vulgare Carvacrol 98,3 %.
Rosmarinus officinalis a-pinène 20,8 % ; camphène 5,1 % ; 1-8 cinéole 36,9 % ; camphre 34,2 %.
Thymus vulgaris (chémotype carvacrol) p-cymène 10,6 % ; g-terpinène 13,5 % ; carvacrol 73,7 %.
Thymus zygis (chémotype thymol) p-cymène 9,7 % ; g-terpinène 2,3 % ; linalol 1,4 % ; thymol 84,9 %.
(*) Somme des terpènes identifiés dans les huiles essentielles.
161
Nist®, TR®, et équipé d’une colonne DB5-MS (25 m* 0,32 mm
diamètre interne* 1,0 mm épaisseur de film). La température
initiale de 60˚C est maintenue pendant 1 min, puis on réalise
un chauffage à 3 ˚C/min jusqu’à 200 ˚C ; cette température
finale est maintenue 15 min. Les températures de l’injecteur et
du détecteur sont respectivement de 250 et 285 ˚C. Le gaz
vecteur hélium est à 138 kPa en tête de colonne. La quantité
injectée de chaque huile essentielle en solution dans l’éthanol
à 1 g/L est de 1 mL en mode splitless. Le dosage a été fait par
normalisation interne (rapport des surfaces de chaque
terpène étudié/totalité des terpènes) pour les 6 échantillons
d’HE. Seuls les composés identifiés et supérieurs à 1 % seront
mentionnés dans le tableau 1.
Activité antibactérienne
Le choix des bactéries s’est porté sur deux souches de
bactéries fréquentes en pathologie humaine, appartenant
à deux catégories différentes (Gram positive et Gram
négative). L’efficacité des produits testés ainsi que leur
modalité de pénétration dans la bactérie sont différentes.
Les souches bactériennes utilisées sont :
– bactérie Gram négative (Escherichia coli) ;
– bactérie Gram positive (Staphylococcus aureus).
Ces deux espèces bactériennes sont responsables souvent
d’infections nosocomiales qui constituent un problème
majeur de santé publique. L’émergence de la multirésistance
chez ces bactéries est une des principales causes d’échec
thérapeutique. Les huiles essentielles sont préparées en
solution aqueuse stérile d’agar noble à 1 ‰ (m/v) [20].
L’inoculum bactérien standardisé titre 2 à 6.105 cellules. La
méthode utilisée concerne la détermination des concentra-
tions minimales inhibitrices (CMI) par dilution en bouillon
Mueller Hinton. La lecture macroscopique se fait après
18 heures d’incubation à 37 ˚C. La CMI est la plus faible
concentration en huile essentielle ne donnant pas de
croissance visible à l’œil nu.
Résultats et discussion
La composition chimique des six huiles essentielles est
présentée dans le tableau 1. L’identification a été réalisée
à plus de 97 %. De nombreux composés à moins de 0,5 % sont
présents dans ces huiles et sont pour la plupart identifiés.
Total*
97,6 %
99,5 %
98,3 %
97,0 %
97,8 %
98,3 %
162

Cependant, pour éviter de surcharger ce texte, seuls les
composés ayant une teneur supérieure à 1 % seront mention-
nés dans le tableau de la composition chimique. L’identifi-
cation est réalisée grâce à la spectrométrie de masse (deux
librairies sur les trois disponibles et à 80-90 % de probabilité)
et la comparaison des spectres de masse ainsi que des temps
de rétention observés d’une part sur les échantillons à
caractériser et d’autre part sur les étalons disponibles.
Les résultats de l’activité antibactérienne sont présentés
dans le tableau 2. Pour les deux souches testées, les HE de
L. angustifolia, L. latifolia et O. vulgare présentent une
activité moyenne, par opposition aux HE de O. vulgare,
T. vulgaris et T. zygis.
Dès 1973, J. Pellecuer [24, 25] avait démontré les propriétés
pharmacologiques des huiles essentielles obtenues à partir de
quelques labiées (thym, sarriette, romarin). En 1974,
P. Belaiche [2] avait décrit également les propriétés d’autres
huiles essentielles issues de la cannelle et du clou de girofle, ne
contenant pas de phénols mais des aldéhydes aromatiques,
pour leurs propriétés antibactériennes. Nous constatons
que pour la souche Escherichia coli, les huiles essentielles
d’origan et de thym à thymol et à carvacrol sont les
plus efficaces (CMI = 1 000 mg/mL). Pour la souche
Staphylococcus aureus, on note une moindre efficacité pour
le thym (CMI = 2 000 mg/mL) ; l’huile essentielle d’Origan est
la plus active.
Il a été démontré que, en phase gazeuse, dans le cadre de
thérapie par inhalation [16], l’activité antibactérienne de
l’huile essentielle de thym à phénol (thymol ou carvacrol) est
meilleure que celle de la lavande sur les bactéries S. aureus et
E. coli. L’huile essentielle de thym sauvage (renfermant plus de
80 % de carvacrol) est efficace sur les souches S. aureus et
E. coli, à la concentration de 12,5 mg/l d’air, alors que l’huile
essentielle de lavande vraie (renfermant 30 % de linalol et
37 % d’acétate de linalyle) est efficace respectivement à 100 et
à plus de 1 600 mg/l d’air. En solution aqueuse [1], les huiles
essentielles de labiées, notamment l’orégon, sont efficaces sur
les bactéries S. aureus et E. coli, pour une concentration
inférieure ou égale à 1 pour 1 000, soit comparable à nos
résultats obtenus.
Nous avons par ailleurs testé des hydrolats obtenus
après entraı̂nement à la vapeur pour la production de
l’huile essentielle et séparation avec l’huile essentielle non
miscible. Les résultats sont négatifs (CMI> 5 000 mg/mL).
En revanche, nous avons observé pour les phénols testés à
l’état pur une activité similaire pour les deux souches :
thymol 200 mg/mL et carvacrol 400 mg/mL.
Les phénols (thymol et carvacrol) purs présentent une
meilleure activité que les HE pures. La présence de traces
d’autres terpènes dans les HE pourrait expliquer cette
différence d’activité. Mais lorsque la notion de bio et de
naturalité est en pleine progression, on peut parfaitement
imaginer l’utilisation de ces HE, composés naturels et bio,
dans les produits issus de l’industrie agro-alimentaire,
mais également dans les produits cosmétiques, en tant
qu’antiseptiques et/ou d’antioxydants (ou conservateurs).
De nouvelles perspectives peuvent être envisagées par une
étude plus poussée de l’activité antibactérienne, non
seulement sur les HE utilisées seules, mais également en
mélange, permettant ainsi une éventuelle synergie.

Tableau 2. Activité antibactérienne pour les six huiles essentielles étudiées

Souche: Escherichia coli ATCC 10536

Concentration (mg/mL) 5 000 4 000 3 000 2 000 1 000 800 400 200 100 50
L. angustifolia - - - - + + + + + +
L. latifolia - - - - + + + + + +
O. vulgare - - - - - + + + + +
R. officinalis - - + + + + + + + +
T. vulgaris - - - - - + + + + +
T. zygis - - - - - + + + + +
Thymol - - - - - - - - + +
Carvacrol - - - - - - - + + +

Souche: Escherichia coli ATCC 6538

Concentration (mg/mL) 5 000 4 000 3 000 2 000 1 000 800 400 200 100 50
L. angustifolia - - - +/– + + + + + +
L. latifolia - - +/– + + + + + + +
O. vulgare - - - - - + + + + +
R. officinalis - +/– + + + + + + + +
T. vulgaris - - - - + + + + + +
T. zygis - - - - + + + + + +
Thymol - - - - - - - - + +
Carvacrol - - - - - - - + + +
Lé gende : (+ croissance; +/– faible croissance; – absence)

Conclusion
L’analyse chimique de la composition d’une huile essen-
tielle est optimisée si on utilise la technique de la
chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectro-
métrie de masse. Cette analyse a été effectuée sur
six échantillons d’huiles essentielles obtenues à partir de
plantes cultivées dans la région Provence-Alpes-Côte
d’Azur : lavande (Lavandula angustifolia et Lavandula
latifolia), origan (Origanum vulgare) et thym (Thymus
vulgaris et Thymus zygis). À plus de 97 %, les composants
de ces huiles ont été identifiés grâce à la comparaison des
temps de rétention avec des étalons analysés dans les
mêmes conditions et grâce à leur spectre de masse.
L’analyse quantitative a été réalisée par normalisation
interne. Parmi les huiles essentielles testées de lavande,
d’origan, de romarin et de thym, seuls l’origan et le thym
présentent la meilleure activité antibactérienne vis-à-vis
des souches Escherichia coli (bactérie Gram négative) et
Staphylcoccus aureus (bactérie Gram positive). Cette étude
confirme que ce sont les phénols (thymol et carvacrol)
qui donnent à l’huile essentielle le caractère antibactérien.
Les premiers travaux scientifiques publiés datent d’une
trentaine d’années. Il serait intéressant de continuer
ces travaux notamment sur de nouvelles souches de
bactéries. Ces premiers résultats que nous avons obtenus
permettront une étude systématique de nombreux échantil-
lons d’huiles essentielles sur des bactéries pathogènes
présentant une résistance accrue vis-à-vis des antibactériens
classiques, notamment en milieu hospitalier. L’utilisation de
produits naturels à la place de certains conservateurs ou
antioxydants de synthèse pourrait être envisagée dans le
domaine de l’industrie agro-alimentaire et de la cosmétique.
Remerciements à C. Borrely et L. Bollo pour leur
participation technique.
Bibliographie
1. Baydar H, Sagdic O, Ozkan G, Karadogan T (2004) Antibacterial activity
and composition of essential oils from Origanum, Thymbra and Satureja
species with commercial importance in Turkey. Food Control 15: 169-72
2. Belaiche P (1979) Traité de phytothérapie et d’aromathérapie. Maloine,
tome 1, d’après http://fr.wikipedia.org/wiki/Aromatogramme
3. Bertrand G (1893) Le goménol. Bull Gén de Thér Ann Inst Pasteur,
d’après http://fr.wikipedia.org/wiki/Aromatogramme
4. Bonnaure F (1919) Essais sur les propriétés bactéricides de quelques
HE. Thèse de médecine, Lyon 1919, et Parfumerie moderne 12: 151
5. Chamberland M (1887) Les essences au point de vue de leurs
propriétés antiseptiques. Ann Inst Pasteur 1: 153-4
6. Chang ST, Chen PF, Chang SC (2001) Antibacterial activity of leaf
essential oils and their constituents from Cinnamomum osmo-
phloem. J Ethnopharmacol 77: 123-7
7. De Feo V, Bruno M, Tahiri B, Napolitano F (2003) Chemical
composition and antibacterial activity of essential oils from Thymus
spinulosus. J Agric Food Chem 51: 3849-53
8. Friedman M, Henika PR, Levin CE et Mandrell RE (2004)
Antibacterial Activities of Plant Essential Oils and their Components
163
against Escherichia coli and Salmonella enterica in Apple Juice.
J Agric Food Chem 52: 6042-8
9. Gattefossé R M (1937) L’Aromathérapie – Les HE hormones
végétales. Librairie des sciences Girardot, Paris
10. Giordani R, Régli P, Kaloustian J, Portugal H, Buc J (2003) In vitro
synergistic effect of a mixture of Hevea Brasiliensis latex and
essential oil from Thymus vulgaris with amphotericin B against
Candida Albicans growth. J Mycol Med 13: 87-91
11. Giordani R, Regli P, Kaloustian J, et al. (2004) Antifungal effect of
various essential oils against Candida albicans. Potentiation of
antifungal action of amphotericin B by essential oil from Thymus
vulgaris. Phytother Res 18: 990-5
12. Giordani R, Regli P, Kaloustian J, Portugal H (2006) Potentiation of
Antifungal Activity of Amphotericin B by Essential Oil from
Cinnamomum cassia. Phytother Res 20: 58-61
13. Giordani R, Kaloustian J (2006) Action anticandidosique des huiles
essentielles : leur utilisation concomitante avec des médicaments
antifongiques. Phytothérapie 3: 121-4
14. Girault M, Bourgeon J (1971) Les cahiers de biothérapie. N˚29,
d’après http://fr.wikipedia.org/wiki/Aromatogramme
15. Hadef Y, Kaloustian J, Chefrour A, et al. (2007) Chemical
composition and variability of the essential oil of Thymus numidicus
Poir. From Algeria. Acta Bot Gallica 154: 265-74
16. Inouye S, Takizawa T, Yamagushi H (2001) Antibacterial activity of
essential oils and their major constituents against respiratory tract
pathogens by gaseous contact. J Antimicrob Chemother 47: 565-73
17. Kaloustian J, Pauli AM, Pastor J (2000) Evolution of Camphor and
others components in the essential oils of two labiate species during
the biological cycle. Analusis (European Journal of Analytical
Chemistry) 28: 308-15
18. Kaloustian J, Portugal H, Pauli AM et Pastor J (2002) Chemical,
Chromatographic and Thermal Analysis of Rosemary (Rosmarinus
officinalis). J Appl Polym Sci 83: 747-56
19. Kaloustian J, Abou L, Mikail C, Amiot-Carlin MJ et Portugal H
(2005) Southern French thyme oils – Chromatographic study of
chemotypes. J Sci Food Agric 85: 2437-44
20. Lens-Lisbonne C, Crémieux A, Maillard C, Balansard G (1987)
Méthodes d’évaluation de l’activité antibactérienne des huiles
essentielles: application aux essences de thym et de cannelle.
J Pharm Belg 42: 297-302
21. Liu K, Rossi PG, Ferrari B, Berti L, et al. (2007) Composition, irregular
terpenoids, chemical variability and antibacterial activity of the
essential oil from Santolina corsica. Phytochemistry 68: 1698-705
22. Martindale W H (1910) Essential oils in relation to their antiseptic
powers as determined by their carbolic coefficient. Perfumery and
Essential Oil Research 1: 266-96
23. Masoudi S, Monfared A, Rustalyan A, Chalabian F (2005) Composi-
tion and Antibacterial Activity of the Essential Oils of Semenovia
dichotoma, Johreniopsis sesloides and Bunium cylindricum. J Essent
Oil Research 17: 691-4
24. Pellecuer J, Roussel JL, Andary C (1973) Propriétés antifongiques
comparatives des essences de trois Labiées méditerranéennes : romarin,
sarriette et thym. Travaux de la Société de pharmacie de Montpellier 3: 584
25. Pellecuer J, Allegrini J, De Buochberg S (1974) Étude in vitro de
l’activité antibactérienne et antifongique de l’essence de Satureia
montana. J Pharm Belg 2: 137-44
26. Prabuseenivasan S, Jayakumar M, Ignacimuthu S (2006) In vitro
antibacterial activity of some plant essential oils. Complement Altern
Med 6: 39
27. Saenz MT, Tornos MP, Alvarez A, et al. (2004) Antibacterial activity
of essential oils of Pimenta racemosa var. terebinthina and Pimenta
racemosa var. grisea. Fitoterapia 75: 599-602
28. Skocibusic M, Bezic N, Dunkic V et Radonic A (2004) Antibacterial
activity of Achillea clavennae essential oil against respiratory tract
pathogens. Fitoterapia 75: 733-6
164
29. Sonboli A, Salehi P, Ebrahimi SN (2005) Essential Oil Composition
and Antibacterial Activity of the Leaves of Stachys schtschegleevii
from Iran. Chemistry of Natural Compounds 41: 171-4
30. Suschke U, Geiss HK, Reichling J (2006) Antibacterial activity of the
essential oils of catnip and lemon balm against clinical isolates from
the respiratory tract. Planta Med 72: issue 11. 54th Annual Congress
on Medicinal Plant Research (Helsinki – Finlande), P027
31. Viuda-Martos M, Ruiz-Navajas Y, Fernandez-Lopez J, Perez-Alvarez JA
(2008) Antibacterial activity of different essential oils obtained from
spices widely used in Mediterranean diet. International Journal of Food
Science and Technology 43: 526-31
32. Yasuo T, Hiroe K, Nobuji N (2003) Antibacterial Activity of Essential
Oils against Pathogens Bacteria in Upper Airway Respiratory Tract.
Terupen Oyobi Seiyu Kagaku 47: 303-5