9.

Límite de detección y cuantificación

El límite de detección (LoD por sus siglas en ingles) consiste en la menor cantidad
de analito en una muestra que puede ser detectada e identificada de forma fiable,
pero no necesariamente cuantificada, en las condiciones experimentales
establecidas del método analítico.
Es decir, el LDD sería la concentración mínima obtenida a partir de la medida de
una muestra (que contiene el analito) que seríamos capaces de discriminar de la
concentración obtenida a partir de la medida de un blanco, es decir, de una
muestra sin analito presente
también, el LoD se define como la concentración más baja que se distingue del
ruido. El término "límite de detección" no está ampliamente aceptado, aunque se
utiliza en algunas directrices actuales.
En general, este parámetro debería evaluarse para las pruebas de límite de
impurezas y el análisis de elementos traza.
Sin embargo, en la literatura, es muy común observar el LoD como un parámetro
analítico parámetro analítico evaluado en los métodos de ensayo, por ejemplo,
ensayo del analito y productos farmacológicos.
10. el LoD puede estimarse mediante tres criterios diferentes: evaluación visual,
relación señal/ruido (S/N) y basándose en los parámetros de la curva analítica.
El método visual se emplea para analizar muestras con concentraciones
conocidas y decrecientes del analito.
Así, la LoD se asocia a la concentración más baja en la que se distinguen el ruido
y la señal analítica.
Este método se diseñó inicialmente para el análisis cualitativo, en el que el
resultado se expresa como positivo (se detecta el analito) o negativo (no se
detecta el analito).
Otro enfoque utilizado para estimar la LoD es mediante el cálculo de la relación
señal-ruido, donde se realiza una comparación de la medición de la señal del
analito en la matriz con una muestra en blanco (matriz sin el analito). La
concentración correspondiente a la LoD es la concentración del compuesto que
tiene una relación señal-ruido de 3:1 o 2:1.
El tercer criterio de evaluación de la LoD se basa en los parámetros de la curva
analítica. Este enfoque puede estar expuesto a errores si el rango de
concentración no está adecuadamente limitado, a pesar de ser considerado el
criterio de evaluación más robusto.
El LoD se calcula mediante la siguiente ecuación
LoD = 3.3 × SD / S
donde SD es la desviación estándar de los interceptos de la curva de calibración o
la desviación estándar residual de la curva y S es la media de la pendiente del
gráfico de linealidad.
Para esta prueba, las curvas analíticas deben realizarse en la matriz que contiene
el compuesto de interés y el rango de concentración debe ser el más cercano al
LoD.
La SD suele adquirirse en condiciones de repetibilidad de la adquisición. Sin
embargo, para obtener la SD más representativa, el analista debe adquirir las
curvas analíticas en condiciones de precisión intermedia. Además, el número de
réplicas debe ser suficiente para garantizar una estimación fiable y evitar una gran
variación aleatoria.
pueden ser de 6 a 15 réplicas dependiendo la directriz analítica que se usara.
Cuando la DQO se obtiene por cálculo o extrapolación según la ecuación 2, esa
estimación debe confirmarse mediante análisis independientes de un número
adecuado de muestras preparadas a una concentración cercana a ese valor.
11. El límite de cuantificación (LoQ) se define como la menor cantidad de analito
en una muestra que puede medirse cuantitativamente con la exactitud y precisión
adecuadas en las condiciones experimentales establecidas para el método
analítico.
Al igual que el LoD, el LoQ se expresa como concentración.
Al igual que en el caso de la LoD, se pueden utilizar varios enfoques para
establecer la LoQ, siendo la relación S/N y la relación entre la desviación estándar
de la respuesta y la pendiente de la curva las más utilizadas.
Además, la evaluación de los criterios utilizados en el LoQ debe estar
adecuadamente respaldada.
12. En la literatura, se suele realizar la determinación del LoQ mediante la relación
S/N, en la que se requiere un valor S/N de al menos 10.
debido a la limitación de la relación S/N en algunas técnicas analíticas el enfoque
más sugerido es el cálculo a través de los parámetros de la curva analítica,
utilizando la ecuación siguiente:

LoQ = 10 × SD / S
donde SD es la desviación estándar de los interceptos de la curva de calibración o
la desviación estándar residual de la curva y S es la media de la pendiente del
gráfico de linealidad.
Todos los enfoques relevantes para el límite de detección deben considerarse
también para el límite de cuantificación.
La determinación del LoQ como parámetro de validación analítica se recomienda
para los ensayos de cuantificación de impurezas y cuando se realizan mediciones
en muestras con bajos niveles de analito.
13. Exactitud
La exactitud es el parámetro que se encarga de evaluar la concordancia entre el
resultado hallado por el método analítico evaluado y el valor que se acepta como
verdadero o como referencia.
Preferiblemente, la evaluación de la exactitud debe realizarse tras la confirmación
de la especificidad/selectividad, la determinación del rango lineal y la
determinación de la precisión del método.
14. La exactitud debe verificarse utilizando un mínimo de nueve determinaciones,
considerando el rango especificado del método analítico. Así, al menos tres
determinaciones a la concentración correspondiente al punto medio del del
intervalo (normalmente el 100%) y tres determinaciones adicionales para las dos
concentraciones extremas del intervalo de cuantificación (inferior y superior).
Además, es fundamental que todas las réplicas de las muestras se preparen de
forma independiente desde el inicio del proceso, evitando las diluciones en seri
Se pueden utilizar varios procedimientos para demostrar la precisión de un método
analítico.
La elección puede depender del tipo de muestra, la técnica analítica, la
disponibilidad de materiales de referencia o los métodos de referencia.
Cuando se dispone de él, se puede utilizar un material de referencia certificado
(MRC) para determinar la exactitud comparando los valores medidos del método
analítico (errores relativos y normalizados) con el valor de referencia certificado.
Los MRC son materiales caracterizados por un procedimiento metrológicamente
válido para una o más propiedades especificadas, acompañados de un certificado
que proporciona el valor de la propiedad especificada, su incertidumbre asociada y
una declaración de trazabilidad metrológica
El porcentaje de recuperación determinado por la relación entre la media
experimental y el valor certificado, incluidos los intervalos de confianza, también
puede utilizarse para expresar la exactitud.
En general, se dispone de un CRM para sustancias puras, pero se limita a
productos complejos como como los medicamentos
23.Un método analítico debe ser validado antes de su aplicación en una rutina de
control de calidad. El procedimiento de validación es esencial para garantizar un
rendimiento fiable y preciso del método.
Uno de los primeros pasos durante el proceso de validación es definir su propósito
y detallar las condiciones en las que se aplicará para conseguir un método fiable y
veraz. Es importante señalar que el proceso de validación es continuo y debe
mantenerse durante toda la vida del método.
Si un método analítico experimenta cambios más allá de los rangos operativos
cubiertos durante la validación analítica, entonces es necesaria la revalidación.