MONOGRAFÍA

LINEAMIENTOS DE POLITICAS NACIONALES EN MEDICAMENTOS

“Comparación de la capacidad atrapadora de radicales libres por el método

de DPPH y la concentración de polifenoles totales por el micro método de
Folin-Ciocalteu del aceite esencial obtenido de hojas y hojas-tallos de
Dalea strobilacea Barneby “Hierba del Chile””

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RESÚMEN

El objetivo de esta investigación fue comparar la capacidad atrapadora de radicales

libres y la cantidad de polifenoles totales entre el aceite esencial obtenido de hojas y de
hojas-tallos de Dalea strobilacea Barneby “Hierba del Chile”.

La metodología utilizada en esta investigación consistió en mediciones por colorimetría

a luz visible mediante el uso de un espectrofotómetro, en el cual, se midieron las
reacciones de cambio de color utilizando los métodos de DPPH (1,1-Difenil-2-picril-
hidrazilo al 90%) y el micro método de Folin-Ciocalteu, el porcentaje de la capacidad
atrapadora de radicales libres y la cantidad de polifenoles totales del aceite esencial
respectivamente.

Después de haber realizado los procedimientos experimentales así como la comparación

y tratamiento de datos y errores, se obtuvo que el porcentaje de la capacidad atrapadora
de radicales libres, traducida en actividad antioxidante, es mayor en el aceite esencial
obtenido de hojas (90%), que con el aceite esencial obtenido de hojas-tallos (48%) de la
referida especie, con una diferencia total de 42%. Asimismo, al determinar la
concentración de polifenoles totales la cantidad obtenida en el aceite esencial de hojas-
tallos (1278.41 mg/mL) fue mayor que en el aceite esencial de hojas (854.978 mg/mL)
de la planta, con una diferencia total de 423.43 mg/mL. Finalmente se concluye que
aunque hay mayor cantidad de polifenoles totales en el aceite esencial obtenido de
hojas-tallos, la capacidad atrapadora de radicales libres es mayor en el aceite obtenido
solo de hojas, demostrando así que los componentes presentes en las hojas son los
principales responsables de dicha actividad.

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ÍNDICE
1. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………..… 4
2. MARCO TEÓRICO……………………………………………………………..….. 5
2.1. Dalea strobilacea
Barneby………………………………………………….…5
2.2. Aceites esenciales……………………………………………...……….
…………...… 5
2.3. Extracción por arrastre de vapor…………………………………...
……………………………..………. 6
3. METODOLOGÍA…………………………………………………………………….6
3.1. Método de DPPH………………………………….….………………….
…….6
3.2. Solución de Trolox……………………………….……..….……………..
……8
3.3. Micro método de Folin-Ciocalteu……...……….………..……….
……………8
3.4. Ácido gálico……………………………………………...…………..
……..… 8
4. VARIABLES………………………….………..…….……………………………... 9
5. MATERIALES…...…………………………………………………...…….………11
5.1. Materiales……………………………………………………………….
…….11
6. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL……………………………………………12
6.1. Preparación de la muestra de ensayo………………………………...
………..12
6.1.1. Selección y preparación de la muestra vegetal………………………..12
6.1.2. Obtención del aceite esencial………………………….………..…….12
6.2. Ensayo de la capacidad atrapadora de radicales
libres……………………….12
6.2.1. Preparación de la solución de DPPH……………………….…………12
6.2.2. Disolución de los aceites esenciales de Dalea strobilacea Barneby
“Hierba del Chile”……………………..…….………..……..………..13
6.2.3. Ensayo para la capacidad de radicales libres………...…….
…………..13
7. RECOPILACIÓN Y TRATAMIENTO DE DATOS………………..………..…….14
8. TRATAMIENTO DE ERRORES…………………………………………………..18
9. CONCLUSIONES…………………..………………………………………………20
10. BIBLIOGRAFÍA……………….….………………………………………………..23
11. ANEXOS………………………….……………….………………………………..25

3
1. INTRODUCCIÓN

Las plantas son un recurso natural donde podemos encontrar una gran variedad de
propiedades medicinales que pueden ser útiles para nuestro uso diario. Debido a la
disponibilidad de la muestra en una determinada comunidad, esta se presta a un interés
científico por sus propiedades, efectos y usos que pueden contribuir a nuevos
descubrimientos científicos. La investigación de la capacidad atrapadora de radicales
libres, traducida como actividad antioxidante y la cuantificación de polifenoles totales
son tema de interés para la investigación ya que podemos conocer más acerca de las
propiedades de un determinado ejemplar vegetal. Una planta en particular de la región
de Cajamarca, Perú, es Dalea strobilacea Barneby, más comúnmente conocida como
“Hierba del Chile” que crece en las laderas del distrito de Ichocán, provincia de San
Marcos, a una altitud de 2550 a 2920 m.s.n.m.[CITATION Sán11 \l 10250 ]

Dalea strobilacea Barneby, “Hierba del Chile” es una planta de gran consumo en la
comunidad campesina, especialmente en los pueblos alejados de la ciudad de Cajamarca
donde es consumida como una infusión para la indigestión y otros trastornos digestivos.
Sin embargo no siempre conocemos que parte consumir de la planta y cuáles de ellas
son más beneficiosas, motivo por el cual se planteó la pregunta: ¿Cuáles son las
diferencias encontradas entre la capacidad atrapadora de radicales libres por el
método de DPPH y la concentración de polifenoles totales por Folin-Ciocalteu del
aceite esencial obtenido de hojas y de hojas-tallos de Dalea strobilacea Barneby
“Hierba del Chile”? La investigación tuvo como objetivo reconocer esta determinada
propiedad de la planta, así como relacionar la capacidad atrapadora de radicales libres
con la cantidad de polifenoles totales y comparando el aceite esencial obtenido de
ambas muestras.

En estudios publicados sobre Dalea strobilacea Barneby se ha comprobado que el

aceite esencial de esta especie muestra actividad antibacteriana in vitro frente a
Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus y Enterococcus faecalis. La referida

4
 actividad, así como la composición química del aceite esencial ha sido reportada en un
artículo publicado en el Boletín Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y
Aromáticas. [CITATION Ben16 \l 10250 ]. Además, en el mencionado estudio, también
se reportaron los componentes químicos del aceite esencial de la planta, con lo cual se
puede inferir que el aceite esencial de la referida especie podría tener actividad
antioxidante, misma que puede ser estudiada mediante ensayos de capacidad atrapadora
de radicales libres (método de DPPH) y la cuantificación de polifenoles totales (Micro
Método de Folin – Ciocalteu) en el aceite esencial obtenido mediante destilación por
arrastre de vapor de aguade hojas y de hojas-tallos de Dalea strobilacea Barneby
“Hierba del Chile”.
2. MARCO TEÓRICO
2.1. Dalea strobilacea Barneby

Dalea Strobilacea, conocida en la comunidad como “Hierba del Chile”, pertenece a la

familia Fabaceae y se caracteriza por ser un arbusto leñoso que crece de 50 a 140 cm de
alto, con tallos ramificados, partes aéreas glandulosas, hojas persistentes, estipuladas y
pecioladas, con una inflorescencia de flores agrupadas de color azul. La planta, que se
caracteriza por su gran aroma, es una planta endémica localizada en el sur de
Cajamarca, en las provincias de San Marcos y Namora, donde se propaga en suelos
calizos a 2900 m.s.n.m. [ CITATION Sán11 \l 10250 ]

Diversos estudios han tomado esta planta y relacionaron sus usos dentro de la
comunidad a las posibles propiedades del aceite esencial. En uno de estos estudios se
determinó la actividad antimicrobiana de Dalea Strobilacea Barneby se identificaron
sus componentes químicos (véase Anexo 1) por cromatografía de gases, en los cuales se
incluyen hidrocarburos monoterpenos y polifenoles en abundancia, según el artículo
publicado en año 2016 en el Boletín Latinoamericano y del Caribe de Plantas
Medicinales y Aromáticas. [ CITATION Ben16 \l 10250 ]

2.2. Aceites esenciales

Los aceites esenciales son sustancias de naturaleza lipídica, caracterizados por ser
altamente aromáticos y volátiles, son productos provenientes del metabolismo
secundario de algunas plantas. Los aceites esenciales pueden ser extraídos a través de
métodos oficiales tales como: extracción con disolventes, con fluidos supercríticos,
hidrodestilación entre otros. Cabe resaltar que uno de los métodos más ampliamente

5
 utilizado es el de extracción por arrastre de vapor de agua en el cual se separa el aceite
contenido en sacos y vesículas de la planta del tejido vegetal. Gracias a que los aceites
esenciales son mezclas de hidrocarburos, terpenos, alcoholes, compuestos carbonilos,
compuestos aromáticos y fenoles [ CITATION HAP09 \l 10250 ], este lo hace ideal para la
investigación ya que mediante la extracción, se obtienen todos los compuestos químicos
para el ensayo.

2.3. Extracción por arrastre de vapor

La extracción por arrastre de vapor es un método de destilación a través del cual se

produce una colección “selectiva” de los componentes volátiles (aceite) y no volátiles
(hidrolato) de la muestra vegetal. En dicho método, se usa vapor saturado, donde las
altas temperaturas adquiridas causan que el tejido de la muestra vegetal se rompa por lo
que es un método directo de extracción ya que el vapor de agua tiene contacto directo
con la muestra vegetal. Al calentar a ebullición el agua, el vapor de esta va hacia en área
donde la muestra se encuentra para luego terminar en un condensador o refrigerante,
donde se enfría la muestra y se obtiene un hidrolato de la planta así como el aceite
esencial, el cual se separa de dicho hidrolato por diferencia de densidades. Una vez
separadas ambas sustancias, se descarta el hidrolato ya que este no tiene los
componentes requeridos para el ensayo, y se guarda el aceite esencial en un frasco
ámbar ya que el mismo es altamente volátil y requiere estar protegido de la luz y en
refrigeración hasta el ensayo. [ CITATION Die10 \l 10250 ]

El método de extracción es óptimo debido a que constituye un sistema completamente

cerrado, este no pierde ningún rastro de la muestra y permite a su vez una destilación
constante de la especie vegetal, además de que es un método económico de extracción
de aceite, aunque este demore grandes periodos de tiempo en realizarse. [ CITATION
HAP09 \l 10250 ]

3. METODOLOGÍA
3.1. Método de DPPH

Los radicales libres, por definición son aquellos átomos que tienen un electrón
desapareado, por lo que son muy reactivos ya que estos electrones desapareados o
“libres” buscan estabilizar su carga electroquímica y tienden a captar un electrón de una
molécula que tiene su carga electroquímica ya estabilizada. Esto a su vez, se relaciona
con la capacidad atrapadora de radicales libres traducida en actividad antioxidante ya

6
que este es una sustancia capaz de neutralizar a dichos radicales libres mediante la
liberación de electrones los cuales son finalmente atraídos por los radicales libres.
[ CITATION JEN13 \l 10250 ]

El método de DPPH es un método de radicales libres, debido a la deslocalización de un

electrón desapareado el cual sirve para la determinación cuantitativa de la actividad
antioxidante (en este caso del aceite esencial obtenido de la planta). El reactivo DPPH
contiene el radical 1,1-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH) el cual se reduce a 1,1-difenil-1-
pricril hidracina por la presencia de una sustancia antioxidante, los cuales contienen
grupos hidroxilos que son responsables por el cambio de color entre el violeta-lila del
DPPH a un color amarillo pálido, mismo que indica un ensayo positivo.

Figura 1: obtenida de Tovar del Río, 2013: Determinación de la actividad antioxidante por DPPH y
ABTS de 30 plantas recolectadas en la ecorregión cafetera

La Figura 1 describe que el reactivo DPPH tiene el electrón desapareado en el nitrógeno

y como este cuando reacciona con la sustancia antioxidante cambia de color debido a su
apareamiento con un hidrógeno. [CITATION Bib09 \l 10250 ]. Sensible a 517 nm de
longitud de onda, cuando la solución de DPPH está en contacto con una solución
atrapadora de radicales libres, esta extrae un átomo de hidrógeno para estabilizarse a sí
misma y sufre reducción lo que causa su cambio de color de violeta claro-lila a un
característico color amarillo a medida que disminuye la concentración del radical libre

7
en la solución de DPPH. Los resultados son utilizados en la siguiente ecuación para
hallar los porcentajes de actividad antioxidante:

Donde:
A: Porcentaje de la capacidad atrapadora
de radicales libres
|( muestra )| Abs (muestra): Absorbancia de la
A ¿ 100 (1- )
|( referencia )| muestra (aceite esencial, trolox)
Abs (referencia): metanol + DPPH

3.2. Solución de Trolox

La solución de Trolox es una solución usada como estándar para comparar la actividad
antioxidante de una solución. En el ensayo con DPPH este se usa como solución patrón
y como comparación de los resultados del ensayo en términos de absorbancia.

3.3. Micro método de Folin-Ciocalteu

Relacionado con el anterior, el micro método de Folin-Ciocalteu es utilizado para la

determinación de la concentración de polifenoles totales medidos mediante
espectrofotometría y consiste en una reacción óxido reducción donde el reactivo de
Folin-Ciocalteu es el agente oxidante, es decir, la sustancia que se reduce. El reactivo de
Folin-Ciocalteu consiste de una mezcla de ácidos fosfomolíbdico y fosfotúngstico lo
cual le da un característico color amarillo. [ CITATION Ósc17 \l 10250 ] Cuando ocurre la
reacción entre el reactivo y el compuesto con componentes fenólicos, en un medio
básico, este cambia de color amarillo intenso a un color azul, el cual es determinado
mediante la absorbancia obtenida mediante el espectrofotómetro a 760 nm ya que la
muestra es más sensible a esa longitud de onda y esta medición es parte del método.

8
 Figura 2: obtenida de Tovar del Río, 2013: Determinación de la actividad antioxidante por DPPH y
ABTS de 30 plantas recolectadas en la ecorregión cafetera

3.4. Ácido gálico

El ácido gálico en el ensayo para la cuantificación de polifenoles totales es el patrón

recomendado ya que es el parámetro que nos indica la cantidad de polifenoles totales
mediante el uso de una curva de calibración con diferentes concentraciones de ácido
gálico. [ CITATION Eva15 \l 10250 ]

4. VARIABLES

VARIABLE MANIPULACIÓN DE VARIABLES

Independiente
Aceite esencial de hojas y de
hojas-tallos de Dalea
strobilacea Barneby “Hierba
del Chile”
Dependiente
Capacidad atrapadora de
radicales libres por ensayo de
Utilizando un equipo de destilación por arrastre con
vapor de agua, se llevan a cabo dos destilaciones por
separado. Primero se extrae el aceite esencial solo de
hojas de la muestra vegetal (Dalea strobilacea
Barneby “Hierba del Chile”) y de la misma manera
con una muestra de hojas-tallos de la misma especie
vegetal, sin incluir los tallos leñosos y gruesos, y sin
las flores o los capullos de estas. Se recoge cada una
de estas muestras en una pera de decantación para
separar el aceite esencial del hidrolato (nótese que el
aceite esencial se ubica en la parte superior ya que este
es menos denso que el hidrolato). Las muestras son
preservadas hasta los ensayos, en refrigeración, en
frascos de vidrio color ámbares herméticamente
cerrados.
A través del método de DPPH y el micro método de
Folin-Ciocalteu, se determinará la capacidad
atrapadora de radicales libres y la concentración de
polifenoles totales expresados en términos de ácido

9
DPPH y la concentración de
polifenoles totales por Folin-
Ciocalteu
Controlada
Misma preparación de
reactivos y soluciones de
muestra, misma cantidad de
reactivo para cada ensayo,
mismo equipo
Misma muestra vegetal
gálico respectivamente, del aceite obtenido de hojas y
hojas tallos de la referida especie vegetal.
Recolección de la muestra vegetal: Se recogen las
muestras al mediodía ya que es la hora óptima para
recolectar la muestra [ CITATION OMS17 \l 10250 ] según
las indicaciones de las buenas prácticas agrícolas. Una
vez colectada la muestra, almacenar en un ambiente
fresco hasta la extracción. (Tiempo de espera para la
destilación: 2 horas)
Para el ensayo de la capacidad atrapadora de radicales
libres, mediante el uso de la balanza analítica (
± 0.010 mg) se pesa 10 mg de DPPH y se lleva en un
matraz aforado hasta 1 litro con Metanol. Para las
muestras de aceite esencial, medir 1 mL de cada aceite
con el uso de un micro pipeta de 100 a 1000 μL y
agregar 1 mL de DMSO (Dimetil Sulfóxido) y llevar
en un matraz aforado hasta 10 mL con Metanol al
99%.
Agregar 2 mL de solución de DPPH y 1 mL de
muestra y solución estándar (trolox) en un tubo de
ensayo.
Después de preparar todas las muestras, llevar todos
los tubos de ensayo a incubación por 30 minutos a 37
°C de no haber evidenciado un viraje del color violeta
del DPPH a amarillo en caso de haber actividad
antioxidante.
Para la determinación de poli fenoles, varía la
concentración del ácido gálico, mientras que el
volúmen de reactivo de Folin-Ciocalteu permanece
constante. Con el uso de un micro pipeta se toman 20
μL de muestra del aceite de hojas y de hojas-tallos
preparados con metanol para agregar 1,58 ml de agua
destilada y 100 μL del reactivo de Folin. Finalmente
10
 agregar 300 μL de carbonato de sodio y dejar las
muestras en incubación a 20 °C por dos horas
cronológicas para luego medir la absorbancia.

5. MATERIALES
5.1. Materiales

aceite esencial obtenido de hojas y hojas-tallos de Dalea

MUESTRA DE ENSAYO strobilacea Barneby “Hierba del Chile”
REACTIVOS - Solución de DPPH (1,1-Difenil-2-picril-hidrazilo al
90%)
- Trolox (ácido 6-hidróxi-2, 5, 7,8-tetrametilcromano-
2- carboxílico al 97 %)
- Solución de DMSO (Dimetil Sulfóxido al 99%)
- Reactivo de Folin-Ciocalteu
- Carbonato de sodio anhidro (Trioxocarbonato (IV) de
Sodio)
- Ácido gálico (3, 4, 5-Trihydroxybenzoate)
- Etanol al 96 %
- Metanol al 99%
- Agua destilada

EQUIPOS - Espectrofotómetro Vernier SpectroVis® Plus

- Cubetas de plástico
- Homogenizador de muestra
- Baño María hasta 75 °C
- Refrigeradora
- Balanza analítica (± 0.010 mg)
- Balanza electrónica (± 1 g)
- Equipo de destilación de acero inoxidable para
extracción con arrastre de vapor de agua (Volúmen:
16 L)
- Micro pipeta automática de 10 a 100 μL (± 0.010 µL)
- Micro pipeta automática de 100 a 1000 μL (± 0.010
µL)

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 MATERIAL DE USO - Tubos de ensayo de 10 cm
CORRIENTE DE - Cucharas espátulas de metal
LABORATORIO - Gradilla
- Cronómetro (± 0.1 s)
- Matraces aforados de 5, 10, 25 y 100 mL
- Pera de decantación
- Frascos color ámbar c.s.p. 10 mL
- Puntas para pipetas automáticas
- Pipetas Pasteur
- Vasos de precipitación de 10, 50 y 100 mL
- Probetas de 10, 25 y 50 mL (± 1 mL)

EQUIPO DE SEGURIDAD - Mascarilla

- Guantes
- Bata de laboratorio
*Nota: Ver las normas de seguridad y precauciones para los
reactivos en Anexo 3)

6. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
6.1. Preparación de la muestra de ensayo
6.1.1. Selección y preparación de la muestra vegetal

El proceso de recolección, se llevó a cabo al mediodía ya que es considerada la hora

óptima para la recolección, se seleccionaron las hojas y hojas-tallos de Dalea
strobilacea Barneby “Hierba del Chile” en buen estado sin la inflorescencia, ni los tallos
más leñosos (gruesos) de la planta y libres del deterioro por insectos. [ CITATION
OMS17 \l 10250 ]

6.1.2. Obtención del aceite esencial

Para la extracción del aceite esencial se utilizó 2 Kg de hojas y 2 Kg de hojas-tallos de

Dalea strobilacea Barneby “Hierba del Chile” pesadas en una balanza electrónica,
después de haber seleccionado las muestras. Mediante el uso del equipo de destilación

12
se extrajo el aceite esencial por arrastre de vapor de agua. Con esta cantidad de especie
vegetal se extrajeron 5 ml de aceite esencial.

6.2. Ensayo de la capacidad atrapadora de radicales libres

El ensayo se realizó siguiendo el protocolo descrito para el reactivo de DPPH el cual se

caracteriza por su color violeta-claro en solución. Si el ensayo resulta positivo, la
solución violeta vira a un color amarillo pálido en presencia de un atrapador de radicales
libres (sustancia antioxidante presente en el aceite esencial). Este cambio de color se
mide en términos de absorbancia a una longitud de 517 nm con el uso del
espectrofotómetro. Este resultado se compara con la solución estándar de Trolox en
Metanol preparada en concentración de 10 mg/mL.

6.2.1. Preparación de la solución de DPPH

Mediante el uso de la balanza analítica se pesa 10 mg de DPPH y se lleva en una fiola

de aforo hasta 1 litro con Metanol. Agitar para homogenizar la solución.

6.2.2. Disolución de los aceites esenciales de Dalea strobilacea Barneby “Hierba del
Chile”

Para el ensayo se utilizó 1 mL de aceite esencial obtenido de hojas y hojas-tallos y 1 mL

del reactivo DMSO (Dimetil Sulfóxido) y se llevó a 10 mL con metanol en un matraz
aforado para 10 mL.

6.2.3. Ensayo para la capacidad atrapadora de radicales libres

En tubos de ensayo de 10 cm, rotulados previamente, se realizaron 4 ensayos para cada

solución. Primero, utilizando micro pipeta de 100 a 1000 μL, se agregó 2 mL de
solución de DPPH e inmediatamente se agregó 1 mL del aceite esencial de hojas y de
hojas-tallos disuelto en metanol. Se homogenizó la muestra y se llevó a incubación por
un periodo de 30 minutos a 37 °C en el Baño María. Luego de los 30 minutos, se midió
la absorbancia con el uso del espectrofotómetro a 517 nm, calibrando primero con una
muestra en blanco de metanol con 2 mL de DPPH. Este mismo procedimiento se
realizó con la solución estándar de Trolox para las muestras del ensayo.

6.3. Cuantificación de polifenoles totales en el aceite

13
 La determinación y cuantificación de los polifenoles totales se realizó a través del
micro-método de Folin-Ciocalteu utilizando diferentes concentraciones de ácido gálico
como solución estándar.

6.3.1. Preparación de Ácido Gálico (estándar) y Carbonato de Sodio

Mediante el uso de una balanza analítica se pesa 0.50 g de ácido gálico y disolver en 10
mL de etanol al 96 %. Luego, en un matraz aforado llevar a 100 mL con agua destilada.
Luego de eso, se pesa 20 g de carbonato de sodio y en un matraz aforado de 100 mL se
lleva con agua destilada para obtener una solución de concentración de 20 %.

6.3.2. Para la curva de calibración

Para preparar las diferentes concentraciones de ácido gálico para la curva de calibración
se añadieron 0, 0.1, 0.2, 0.3 0.5 y 1 mL de la solución preparada de ácido gálico y para
cada uno llevar en un matraz aforado de 10 mL con agua destilada. De esta forma se
obtienen soluciones con una concentración de polifenoles de 0, 5, 10, 15, 25 y 50 mg/L
respectivamente.

6.3.3. Medición

Agregar en tubos de ensayo, 4 ensayos para cada uno respectivamente, 20 μL de etanol,

muestras preparadas de aceite esencial y las muestras con diferentes concentraciones de
ácido gálico y agregar 1.58 mL de agua destilada y finalmente 100 μL del reactivo de
Folin-Ciocalteu y agitar. Esperar de 8 a 20 minutos para luego adicionar 300μL de la
solución de carbonato de sodio y dejar las muestras en incubación a 20 °C por dos horas
controladas con un cronómetro. Luego determinar la absorbancia de cada ensayo a 760
nm. A través del método de diferencia de cuadrados [ CITATION Sko94 \l 10250 ] hallar la
concentración de polifenoles totales en la muestra y finalmente graficar la Absorbancia
vs la Concentración.

7. RECOPILACIÓN Y TRATAMIENTO DE DATOS:

Tabla 01: Absorbancias obtenidas tras el ensayo mediante el método de DPPH

(1,1-Difenil-2-picril-hidrazilo) en el aceite esencial obtenido de hojas y hojas-tallos
de Dalea strobilacea Barneby “Hierba del Chile” y solución estándar de Trolox (5
cifras significativas)

14
 N° de Ensayo Aceite Esencial Aceite Esencial de Solución Control
hojas de Dalea hojas-tallos de estándar de (metanol +
strobilacea Barneby Dalea strobilacea Trolox DPPH)
“Hierba del Chile” Barneby “Hierba
del Chile”

Absorbancia a 517 nm
1 0.0130 0.0820 0.0050 0.1020

2 0.0120 0.0610 0.0050 0.1390

3 0.0110 0.0650 0.0050 0.1400

4 0.0130 0.0590 0.0050 0.1390

PROMEDIO 0.0120 0.0670 0.0050 0.1300

DESVIACION 0.0120 0.0105 0.0000 0.0187

ESTÁNDAR
(σ)

Gráfico 1: "Absorbancias obtenidas tras el ensayo mediante el método de

DPPH (1,1-Difenil-2-picril-hidrazilo) en el aceite esencial obtenido de hojas y
de hojas-tallos de Dalea strobilacea Barneby “Hierba del Chile” y solución
estándar de Trolox"
0.09 0.08
0.08
0.07 0.07 0.07
0.06 0.06
0.06
Absorbancia

0.05
0.04
0.03
0.02 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01
0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01
0
1 2 3 4 PROMEDIO

Ensayos

Aceite Esencial hojas de Dalea strobilacea Barneby “Hierba del Chile”

Aceite Esencial de hojas-tallos de Dalea strobilacea Barneby “Hierba del Chile”
Solución estándar de Trolox

*Nota: parece que ciertos valores de los resultados de la absorbancia salen del rango, sin
embargo estos valores están incluidos y son parte de la incertidumbre. (Fórmula de
desviación en Anexo 2

15
*Nota: Los resultados con el aceite esencial obtenido de hojas-tallos de la referida
especie son mayores a los resultados del aceite esencial obtenido de hojas y la solución
patrón Trolox. (Cada barra representa en ese orden cada ensayo.)

Tabla 02: Porcentaje de la capacidad atrapadora de radicales libres entre el aceite

esencial obtenido de hojas y de hojas-tallos de Dalea strobilacea Barneby “Hierba
del Chile”, así como solución estándar de trolox, mediante el método de DPPH
(1,1-Difenil-2-picril-hidrazilo) (5 cifras significativas)

Aceite Esencial Aceite Esencial

obtenido de hojas obtenido de Trolox
hojas-tallos
Porcentaje 90% 48% 96%
Diferencia entre los resultados del
aceite esencial obtenido de hojas y el 42%
de hojas-tallos

*Nota: la tabla describe que los resultados del porcentaje de actividad antioxidante en
hojas es mayor que el porcentaje obtenido del aceite esencial de hojas-tallos,
inversamente proporcional a las absorbancias obtenidas. (Las calculaciones se muestran
en Anexo 4)

En las tablas 1 y 2 se evidencian los resultados de la capacidad atrapadora de radicales

libres mediante los valores de absorbancia obtenida en los ensayos con el aceite esencial
y la solución estándar de Trolox con el método de DPPH. Luego se establecieron los
porcentajes de actividad antioxidante con los promedios de cada muestra. Los resultados
muestran que hay mayor absorbancia en las muestras de hojas-tallos que en las muestras
de hojas de la especie y en comparación con la solución de Trolox, ambos tienen una
mayor absorbancia. La absorbancia en este caso es indirectamente proporcional al
porcentaje ya que a menor absorbancia como el las muestras con Trolox y aceite
esencial obtenido a partir de hojas y estas muestran mayor porcentaje que el de las
muestras con aceite esencial obtenido de hojas-tallos. Además con los datos de la tabla
dos hallamos la Diferencia entre los resultados del aceite esencial obtenido de hojas y el
de hojas-tallos, en base a lo cual podemos deducir que es el valor del porcentaje de
actividad antioxidante de los tallos.

16
 Tabla 03: Absorbancias obtenidas para la cuantificación de polifenoles totales
entre el aceite esencial obtenido de hojas y hojas-tallos de Dalea strobilacea
Barneby “Hierba del Chile” mediante el micro-método de Folin-Ciocalteu (5 cifras
significativas)

N° de Ensayo Aceite Esencial Aceite Esencial

obtenido de obtenido de hojas-
hojas tallos
Absorbancia a 760 nm

1 1.1000 1.4570
2 1.1100 1.4530
3 1.1000 1.4590
4 1.1050 1.4580
PROMEDIO 1.1040 1.4570
*DESVIACIÓN
ESTÁNDAR 0.0048 0.0026
(σ)
*Nota: Como se observa en la tabla, los valores no se alejan mucho del promedio, lo
cual se comprueba con los bajos valores de desviación estándar especificados en la
tabla. Sin embargo, a medida que aumentan los valores de absorbancia, los valores de la
desviación disminuyen.

Tabla 04: Concentración de polifenoles totales de los ensayos con el aceite esencial
obtenido de hojas y de hojas-tallos de Dalea strobilacea Barneby “Hierba del
Chile” mediante el micro-método de Folin-Ciocalteu (valores expresados en
términos de mg/mL) (5 cifras significativas)

Aceite Esencial Aceite Esencial

obtenido de hojas obtenido de hojas-
tallos
Concentración de polifenoles 854.98 1278.4
totales (mg/mL)
Diferencia 423.43

*Nota: La tabla describe los resultados por la diferencia de cuadrados (ver anexo 5)
utilizando la curva de calibración de ácido gálico. Se obtiene que el aceite esencial de
hojas-tallos tiene mayor cantidad de polifenoles, con una diferencia de 423.43 con el
aceite esencial obtenido de hojas.

17
 En las tablas 3 y 4 se muestran los resultados obtenidos por el micro-método de Folin-
Ciocalteu, correspondiente a la cuantificación de polifenoles totales. Los resultados
evidencian que aunque el aceite esencial obtenido de hojas tiene mayor capacidad
atrapadora de radicales libres, el promedio para la cuantificación de polifenoles es
menor en esta muestra que en la muestra de aceite esencial obtenido de tallos y hojas, el
cual presenta un menor porcentaje de capacidad atrapadora de radicales libres.

8. TRATAMIENTO DE ERRORES

8.1 Errores porcentuales

|valor experimental−valor promedio|

error porcentual%= ∗100
valor promedio

Tabla 05: Error porcentual (%) para las absorbancias obtenidas tras el ensayo
mediante el método de DPPH (1,1-Difenil-2-picril-hidrazilo) (5 cifras significativas)

Aceite Esencial
Aceite Esencial de
hojas de Dalea
N° de hojas-tallos de Dalea Solución estándar Control (metanol
strobilacea
Ensayo strobilacea Barneby de Trolox + DPPH)
Barneby “Hierba
“Hierba del Chile”
del Chile”
1 8.3300 22.400 0.0000  21.500
2 0.0000 8.9600 0.0000  6.9200
3 8.3300 2.9900 0.0000  7.6900
4 8.3300 11.900 0.0000  6.9200
*Nota: Los errores porcentuales mostrados en la tabla aumentan a medida que los
valores de absorbancia de los ensayos (véase Tabla 01) aumentan. (Las calculaciones se
muestran en Anexo 6)

18
Tabla 06: Error porcentual (%) para las absorbancias obtenidas para la
cuantificación de polifenoles totales entre el aceite esencial obtenido de hojas y
hojas-tallos de Dalea strobilacea Barneby “Hierba del Chile” mediante el micro-
método de Folin-Ciocalteu (5 cifras significativas)

Aceite Aceite
Esencial Esencial
N° de Ensayo
obtenido de obtenido de
hojas hojas-tallos

Absorbancia a 760 nm
1  0.3600  0.0000
2  0.5400  0.2800
3  0.3600  0.1400
4  0.0900  0.0700

*Nota: la tabla muestra los errores porcentuales encontrados en el experimento. Cabe

resaltar que los errores porcentuales son proporcionales a la desviación estándar. (Las
calculaciones se muestran en Anexo 7)

8.2 Incertidumbres aleatorias porcentuales

Debido que el manual del espectrofotómetro usado para medir las absorbancias no
provee incertidumbre para las medidas, se utilizará las desviaciones estándar de las
Tablas 01 y 03 como incertidumbres para los siguientes cálculos.

incertidumbre
incertidumbre aleatoria porcentual= ∗100
valor experimental

Tabla 07: Error porcentual (%) para las absorbancias obtenidas tras el ensayo
mediante el método de DPPH (1,1-Difenil-2-picril-hidrazilo) (5 cifras significativas)

Aceite Esencial
Aceite Esencial de
hojas de Dalea
N° de hojas-tallos de Dalea Solución estándar Control (metanol
strobilacea
Ensayo strobilacea Barneby de Trolox + DPPH)
Barneby “Hierba
“Hierba del Chile”
del Chile”
1 7.3800 12.800 0.0000 18.300
2 8.0000 17.200 0.0000 13.500
3 8.7300 16.200 0.0000 13.400
4 7.3800 17.800 0.0000 13.500

19
*Nota: Las tabla muestra que el porcentaje de incertidumbre aumenta a medida que
aumenta la absorbancia obtenida para los ensayos de DPPH. (Las calculaciones se
muestran en Anexo 8)

Tabla 08: Error porcentual (%) para las absorbancias obtenidas para la
cuantificación de polifenoles totales entre el aceite esencial obtenido de hojas y
hojas-tallos de Dalea strobilacea Barneby “Hierba del Chile” mediante el micro-
método de Folin-Ciocalteu (5 cifras significativas)

Aceite Aceite
Esencial Esencial
N° de Ensayo
obtenido de obtenido de
hojas hojas-tallos

Absorbancia a 760 nm
1 0.4350 0.1810
2 0.4320 0.1810
3  0.4350 0.1800
4  0.4340 0.1800

*Nota: La tabla muestra que el porcentaje de incertidumbre disminuye a medida que

aumentan los valores de la absorbancia referidos en la Tabla 03. (Las calculaciones se
muestran en Anexo 9)

20
9. CONCLUSIONES

Basado en los resultados, conocemos que el aceite esencial obtenido de hojas y de

hojas-tallos de Dalea Strobilacea “Hierba del Chile” muestra tener gran capacidad
atrapadora de radicales libres y polifenoles totales. Sin embargo, el porcentaje de la
capacidad atrapadora de radicales libres, traducida en actividad antioxidante, es mayor
en el aceite esencial obtenido de hojas, en el cual se muestra 90%, que los resultados
con el aceite esencial obtenido de hojas-tallos los cuales muestran 48% de actividad
antioxidante (véase tabla 2). Además de esto, se incluye el valor de la diferencia entre
estos dos valores es de 42%, por lo cual inferimos que el valor corresponde al
porcentaje de actividad antioxidante de los tallos, el cual en comparación con las hojas
es menor. Así, concluimos que el aceite obtenido de hojas, en comparación con el aceite
de hojas-tallos, posee mayor capacidad de atrapar radicales libres, es decir donar un
hidrógeno para estabilizar a otra molécula. La reacción se describe a continuación:

Β-Phellandrene Β-Phellandrene
Reactivo de DPPH (1,1- (radical)
Reactivo de DPPH (1,1-
Difenil-2-picril-hidrazilo)
Difenil-2-picril-hidrazilo) (sin radical)
(Con radical libre)

Figura 3: Basada en imagen obtenida de Tovar del Río, 2013: Determinación de la actividad antioxidante
por DPPH y ABTS de 30 plantas recolectadas en la ecorregión cafetera, modificada por Carla Torres.

La Figura 3 muestra la reacción química de óxido-reducción entre el reactivo de DPPH

y Β-Phellandrene (monoterpenos en mayor porcentaje del aceite esencial de “Hierba del
Chile”, véase Anexo 1). La reacción muestra la transferencia de un hidrógeno
proveniente del B-Phellandrene al reactivo de DPPH, el cual tiene en su estructura
química un par de electrones libres presentes en el nitrógeno, ocasionando su reducción
y un viraje de color. Al igual como sucede con el estándar (Trolox), el reactivo de
DPPH cambia de color lila a un color amarillo pálido.

21
 Figura 4: Obtenida de Revista Especializada en Ciencias Químico-Biológicas de la página
web:http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1405888X17300037

La Figura 4 nos muestra la reacción entre el ácido gálico y el carbonato de Sodio, el

cual causa la ruptura del enlace entre el oxígeno y el hidrógeno en el ácido gálico.
Luego, cuando el ácido gálico que ha perdido un hidrógeno, este reacciona con el
reactivo de Folin-Ciocalteu, el cual tiene como componente principal el molibdeno.
Esto causa una reacción óxido reducción donde el molibdeno cambia de un estado de
oxidación de +6 a +5, sufriendo reducción y cambiando de color del amarillo al azul
cuando reacciona con el ácido gálico.

En la cuantificación de polifenoles totales, el aceite esencial obtenido de hojas-tallos,

con una cuantificación total en mg/mL de 1278.41, presentó mayor cantidad de
polifenoles totales que el aceite esencial obtenido únicamente de las hojas de la planta,
donde se cuantificó 854.978 polifenoles totales (véase tabla 4). Con la diferencia entre
ambos, con un total de 423.43 polifenoles, deducimos que esta es la cantidad aportada
por los tallos, sin embargo, la cantidad de polifenoles en hojas es mayor. Concluimos
así que, aunque hay mayor cantidad de polifenoles totales en el aceite obtenido de
hojas-tallos, la actividad antioxidante es mayor en el aceite obtenido únicamente de
hojas, mostrando así que las hojas son aquellas que principalmente aportan dicha
actividad.

9.1. Evaluación del procedimiento y mejoras de la investigación

El procedimiento seguido para esta investigación es válido pues permitió la

determinación de la capacidad atrapadora de radicales libres y la cuantificación de
polifenoles totales del aceite obtenido de hojas y de hojas-tallos de la especie vegetal

22
mediante la medición de la absorbancia. No obstante, puesto algunos errores
porcentuales para las muestra en este experimento son mayores que sus incertidumbres
aleatorias porcentuales correspondientes, se puede sugerir que el experimento implicó
errores sistemáticos. Se pueden considerar los siguientes errores:

- Las medidas de masa usadas en el experimento. La balanza analítica donde se

midió en reactivo de DPPH, el carbonato de sodio anhidro y el ácido gálico que
tiene una incertidumbre de ± 0.010 mg
- El espectrofotómetro no tenía incertidumbres y por la calibración del equipo los
valores se desvían del rango como los primeros valores que se alejan del
promedio en cada ensayo.
- Los micros pipetas de incertidumbres ± 0.010 µL
- La muestra vegetal usada, no toda la muestra era completamente igual y aunque
se recolectó todo a una misma hora en un mismo sitio, la muestra fue
conservada, no usada, ni destilada inmediatamente.
- El aceite esencial se separó del hidrolato del aceite en una pera de decantación,
pero es probable que parcialmente se pudo guardar algunas partículas de
hidrolato, dificultando así el ensayo y sus resultados.

Por tales errores sistemáticos y aleatorios, la investigación puede ser mejorada al

implementar una balanza analítica establecida en un solo sitio, sin estar trasladándola
para evitar su des calibración. Para obtener el aceite esencial sin el hidrolato se puede
implementar un agente desecante evitando que se mida el hidrolato respecto de la
muestra de aceite esencial. También se puede implementar la esterilización de los
equipos para tratar muestras sin contaminar, empezando por las muestras de aceite
esencial.

Además, una limitación en el experimento fue la cantidad de pruebas hechas para cada
ensayo. Se realizaron cuatro pruebas en total y no más ya que hubo una serie de factores
que limitaban los ensayos, como la cantidad de aceite esencial que se extrajo de la
muestra vegetal. Como se especifica en la parte 6.1 de la preparación de la muestra de
ensayo, se extrajo 5 mL de cada tipo de aceite esencial, es decir 5 mL de aceite esencial
de hojas y 5 mL obtenido de hojas-tallos de la planta. Estas cantidades fueron
insuficientes para realizar más pruebas para cada ensayo. Además, otro factor que limitó
el número de pruebas fue la insuficiencia de reactivos disponibles en el colegio. Los

23
reactivos tales como de DPPH (1,1-Difenil-2-picril-hidrazilo), de Folin-Ciocalteu y
metanol al 99% eran escasos, y se debió optimizar su uso para poder hacer cuatro
pruebas para cada ensayo.

9.2. Propuestas para futuras investigaciones

Esta investigación es limitada pues evalúa solo ensayos de capacidad atrapadora de

radicales libres (traducida como actividad antioxidante) y la cantidad de polifenoles
totales en el aceite esencial obtenido de hojas y de hojas-tallos de Dalea strobilacea
Barneby “Hierba del Chile”. Mediante los resultados sabemos que las hojas de la planta
son las responsables por la mayor actividad antioxidante, sin embargo el ensayo muestra
que la muestra con hojas-tallos tiene mayor cantidad de polifenoles. Para extender esta
investigación, ahora que se ha comprobado que los tallos también muestran un
determinado porcentaje de dichas propiedades, se podrían hacer dos destilaciones
correspondientes a cada parte de la planta por individual y así comparar en específico
las propiedades que contiene cada parte.

24
10. BIBLIOGRAFÍA

Skoog, D., & J. Leary, J. (1994). Análisis Instrumental. Madrid: Sanders College Publishing.

A.Muñoz-Berna, Ó. (2017). New approach to the interaction between Folin-Ciocalteu reactive

and sugars during the quantification of total phenols. -: Revista Especializada en
Ciencias Químico-Biológicas.

Benites, J., & colaboradores. (2016). Chemical composition and antimicrobial activity of
essential oil of peruvian Dalea strobilacea Barneby. Boletín Latinoamericano y del
Caribe de Plantas Medicinales y Aromáticas, 429 - 435.

ECHAVARRÍA, B. (2009). EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE Y DETERMINACIÓN

DEL CONTENIDO DE COMPUESTOS FENÓLICOS EN EXTRACTOS DE MACROALGAS DEL
CARIBE COLOMBIANO. REVISTA DE LA FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA, 126-
131.

Martinez, E. G. (2015). Determinación de polifenoles totales por el método de Folin-Ciocalteu.

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OMS. (2003). Directrices de la OMS sobre. Ginebra: OMS.

OMS. (2017). Directrices de la OMS sobre Buenas Prácticas Agrícolas y de Recolección (BPAR)
de plantas medicinales. http://apps.who.int/medicinedocs/es/d/Js5527s/4.html.

Peredo-Luna, H. (2009). Aceites esenciales: métodos de extracción. Universidad de las

Américas Puebla, 24-27.

Punina, D. O. (2010). “DESARROLLO DE UN SISTEMA DE EXTRACCIÓN DE ACEITES ESENCIALES".

ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO , 58-60.

Rio, J. T. (2013). DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE POR DPPH Y ABTS DE 30

PLANTAS RECOLECTADAS EN LA ECOREGION CAFETERA. UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA
DE PEREIRA, 15-16.

Sánchez Vega , I. (2011). Especies Medicinales de Cajamarca I. En I. Sánchez Vega , Especies

Medicinales de Cajamarca I (págs. 131-133). Cajamarca: Lumina Copper.

Sánchez Vega, I., & Galán de Mera, A. (2013). Principios de Botánica Farmacéutica. En I.
Sánchez Vega, & A. Galán de Mera, Principios de Botánica Farmacéutica (págs. 40-41).
Cajamarca: Fondo Editorial UPAGU.

Teixeira, J. C. (2013). Hydroxycinnamic Acid Antioxidants: An Electrochemical Overview.

Research Gate, 4.

25
11. ANEXOS

Anexo 1: Tabla de componentes químicos de Dalea strobilacea Barneby “Hierba del

Chile”

Fuente: [ CITATION Ben16 \l 10250 ]

Percentage composition of the essential oil isolated from Dalea strobilacea Barneby,
collected in Cajamarca, Perú

Compound RIa Relative content Identification

(%) method
Tricyclene 921 t RI, MS
α-Thujene 924 1.0 RI, MS
α-Pinene 930 17.7 RI, MS
Camphene 938 0.2 RI, MS
Sabinene 958 1.5 RI, MS
β-Pinene 963 4.5 RI, MS
Myrcene 975 5.1 RI, MS
α-Phellandrene 995 2.1 RI, MS
α-Terpinene 1002 0.2 RI, MS
p-Cymene 1003 1.2 RI, MS
1,8-Cineole 1005 t RI, MS
β-Phellandrene 1005 43.5 RI, MS
Limonene 1009 3.0 RI, MS
cis-β-Ocimene 1017 0.1 RI, MS
trans-β-Ocimene 1027 1.4 RI, MS
γ-Terpinene 1035 0.5 RI, MS
trans-Sabinene hydrate 1037 t RI, MS
Terpinolene 1064 0.2 RI, MS
Linalool 1074 1.8 RI, MS
trans-p-2-Menthen-1-ol 1099 0.2 RI, MS
cis-p-2-Menthen-1-ol 1110 0.2 RI, MS
Citronellal 1121 0.2 RI, MS
Cryptone 1143 0.2 MS
Terpinen-4-ol 1148 1.0 RI, MS
α-Terpineol 1159 0.2 RI, MS
Estragole 1163 0.1 RI, MS
cis-Piperitol 1182 t MS
trans-Piperitol 1189 0.1 MS
Citronellol 1207 0.8 RI, MS
Eugenol 1327 t RI, MS
α-Cubebene 1345 0.2 RI, MS
α-Copaene 1375 0.5 RI, MS
β-Cubebene 1385 0.1 RI, MS
β-Elemene 1388 0.1 RI, MS
β-Caryophyllene 1414 0.4 RI, MS
β-Copaene 1426 0.1 RI, MS
trans-Cadina-1(6),4- 1469 0.2 RI, MS
diene

26
 γ-Muurolene 1469 0.2 RI, MS
Germacrene-D 1474 0.7 RI, MS
Cubebol 1486 0.9 MS
α-Muurolene 1494 0.5 RI, MS
γ-Cadinene 1500 1.4 RI, MS

Anexo 2: Fórmula para calcular desviación estándar

∑ ( Xi−X ) ² Donde
√ (n−1) Xi: valor numérico
X: valor promedio
n: número de ensayos (4)

Anexo 3: Normas de seguridad y precauciones

REACTIVO RIESGOS CUIDADOS

Reactivo de DPPH Puede provocar irritación cutánea, Usar mascarilla, guantes

es mortal si es ingerido. Provoca y bata de laboratorio.
irritación en las vías respiratorias.
Solución de DMSO Si es inhalado, ingerido o entra en Trabajar bajo campana
(Dimetil Sulfóxido) contacto con la piel puede causar: extractora, usar
dolor de cabeza, náusea, mascarilla, guantes de
enrojecimiento de la piel, visión protección y bata de
borrosa, indigestión laboratorio
Reactivo de Folin- Produce fuertes irritaciones y Trabajar bajo campana
Ciocalteu quemaduras en la piel, también extractora, usar
puede causar daños respiratorios. mascarilla, guantes de
protección y bata de
laboratorio
Metanol al 99 % Produce nauseas, dolor de cabeza, Para prevenir se
vómitos, diarrea, dolor abdominal promueve el uso de
e inconciencia si es ingerido, mascarilla, guantes de
inhalado y entra en contacto con látex y bata de
la piel. laboratorio
PARA DESECHAR LOS REACTIVOS: desechar todos los reactivos en una maceta
con tierra dispuesta fuera del laboratorio para desechos químicos.

27
Anexo 4: Calculaciones del porcentaje de la capacidad atrapadora de radicales libres y
la diferencia entre el aceite esencial obtenido de hojas y de hojas-tallos de Dalea
strobilacea Barneby “Hierba del Chile”, así como solución estándar de trolox, mediante
el método de DPPH (1,1-Difenil-2-picril-hidrazilo) (5 cifras significativas)
Usando la siguiente ecuación se calculan los porcentajes mostrados en la tabla 02:

|( muestra )|
A ¿ 100 (1- )
|( referencia )|

Aceite Aceite
Esencial Esencial Trolox
obtenido de obtenido de
hojas hojas-tallos

Relación 100 (1- 100 (1- 100 (1-

0.012 0.067 0.005

) ) )
0.13 0.13 0.13

Porcentaje 90% 48% 96%

Diferencias entre los
resultados del aceite esencial 42%
obtenido de hojas y el de
hojas-tallos

Anexo 5: Curva de calibración con ácido gálico y la diferencia de cuadrados

Concentración de ácido gálico Valores de absorbancia

0.0 mL 0.0000
0.1 mL 0.1520
0.2 mL 0.3470
0.3 mL 0.4890
0.5 mL 0.7750
1 mL 1.1000

Curva de calibración con ácido gálico

1.2 1.1

1
0.78
0.8
Absorbancias

0.6 0.49

0.4 0.35

0.15
0.2
0 28
0
0.0 mL 0.1 mL 0.2 mL 0.3 mL 0.5 mL 1 mL
concentración de ácido gálico (mg/mL)
 Donde:
Ecuación : A: absorbancia de las muestras con
A=mx+b aceite esencial obtenido de hojas y de
donde se despeja variable x para hallar hojas-tallos de Dalea strobilacea
los polifenoles: Barneby “Hierba del Chile”
A−b b: intercepto de la curva de calibración
=x
m
m: pendiente de la curva de
calibración

Calculaciones para la concentración de polifenoles totales de los ensayos con el

aceite esencial obtenido de hojas y de hojas-tallos de Dalea strobilacea Barneby
“Hierba del Chile” mediante el micro-método de Folin-Ciocalteu (valores
expresados en términos de mg/mL)

Aceite Esencial Aceite Esencial

obtenido de hojas obtenido de hojas-
tallos
Concentración de polifenoles 1.457−0.379 1.100−0.379
totales (mg/mL) en términos de 0.000843 0.000843

ácido gálico

Anexo 6: Calculaciones para el error porcentual (%) para las absorbancias

obtenidas tras el ensayo mediante el método de DPPH (1,1-Difenil-2-picril-hidrazilo

Aceite Esencial de hojas-

N° de Aceite Esencial hojas de
tallos de Dalea strobilacea Control (metanol +
Ensay Dalea strobilacea Barneby
Barneby “Hierba del DPPH)
o “Hierba del Chile”
Chile”

1 ¿ ¿ ¿

29
 2 ¿ ¿ ¿

3 ¿ ¿ ¿

4 ¿ ¿ ¿

Anexo 7: Calculaciones para el error porcentual (%) para las absorbancias

obtenidas para la cuantificación de polifenoles totales entre el aceite esencial
obtenido de hojas y hojas-tallos de Dalea strobilacea Barneby “Hierba del Chile”
mediante el micro-método de Folin-Ciocalteu (5 cifras significativas)

N° de Aceite Esencial obtenido de Aceite Esencial obtenido de

Ensayo hojas hojas-tallos

1 ¿  ¿

2 ¿ ¿

3 ¿ ¿

4 ¿ ¿

Anexo 8: Calculaciones para el error porcentual (%) para las absorbancias

obtenidas tras el ensayo mediante el método de DPPH (1,1-Difenil-2-picril-hidrazilo
(5 cifras significativas)

Aceite Esencial hojas de Aceite Esencial de hojas-

N° de Dalea strobilacea tallos de Dalea strobilacea Control (metanol +
Ensayo Barneby “Hierba del Barneby “Hierba del DPPH)
Chile” Chile”

30
 0.00096 0.0105 0.0187
1 ∗100 ∗100 ∗100
0.0130 0.0820 0.1020
0.00096 0.0105 0.0187
2 ∗100 ∗100 ∗100
0.0120 0.0610 0.1390
0.00096 0.0105 0.0187
3 ∗100 ∗100 ∗100
0.0110 0.0650 0.1400
0.00096 0.0105 0.0187
4 ∗100 ∗100 ∗100
0.0130 0.0590 0.1390

Anexo 9: Error porcentual (%) para las absorbancias obtenidas para la

cuantificación de polifenoles totales entre el aceite esencial obtenido de hojas y
hojas-tallos de Dalea strobilacea Barneby “Hierba del Chile” mediante el micro-
método de Folin-Ciocalteu (5 cifras significativas)

Aceite Esencial
Aceite Esencial
N° de Ensayo obtenido de hojas-
obtenido de hojas
tallos

0.0048 0.0026
1 ∗100 ∗100
1.1000 1.457
0.0048 0.0026
2 ∗100 ∗100
1.1100 1.453
0.0048 0.0026
3 ∗100 ∗100
1.1000 1.459
0.0048 0.0026
∗100 ∗100
4 1.1050 1.458

31