ASIGNATURA: QUÍMICA ANALÍTICA 3

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS
QUÍMICAS SECCIÓN DE QUÍMICA
ANALÍTICA
INFORME DE LABORATORIO
PRÁCTICA No. 8.
CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS DE ALTA RESOLUCIÓN
(C.L.A.R.) DETERMINACIÓN DE CAFEÍNA EN MUESTRAS
DIVERSAS
GRUPO: 1651 A/C FECHA DE ENTREGA: 17/11/2021 CARRERA: Ingeniería Química.
NOMBRE: Centeno Palma Erick Sebastián.

R E S U L T A D O S

Considere que se pesaron 25 mg del estándar de Cafeína (pureza 99 %) y se llevaron a un aforo de 50

mL y posteriormente se realizó una dilución de 1 mL en 25 mL (stock).

Tabla 1. Resultados de la curva de calibración. Considere que en todos los sistemas se aforan en 10 mL.
mL de mL
sistema stock problema tr w1/2 Concentración (ppm) Área Altura

1 1 0 2.13 4.9 1980.04 41063 7705

2 2 0 2.12 4.9 3960.08 110915 20575

3 3 0 2.11 5 5940.12 192892 35910

4 4 0 2.11 4.9 7920.16 234407 43626

5 5 0 2.12 4.9 9900.20 290053 54221

Problema

Pepsi 0.4 2.12 4.9 70283 13188

Puntos que debe incluir el reporte.

1. Indique la diferencia entre CLAR normal y fase reversa.
En CLAR la muestra se disuelve en un solvente líquido, este solvente va a acarrear la muestra a
través de un material fijo, por lo tanto, la muestra se va a distribuir entre el disolvente y el material
fijo. Tanto esta fase como en fase reversa el tiempo de retención y la polaridad se pueden alterar
modificando la polaridad de la columna o del eluyente.
Cuando el HPLC se encuentra en su fase normal, la parte estacionaria será más polar que el
eluyente, por lo tanto, los componentes se van a eluir acorde a su polaridad.
En la fase reversa la fase estacionaria es menos polar que la fase movil, entonces los
componentes se van a eluir empezando desde el más polar, en esta fase el poder de elución va a
incrementarse con la polaridad.
 2. Determina la concentración del estándar stock de cafeína.
Considere que se pesaron 25 mg del estándar de Cafeína (pureza 99 %) y se llevaron a un aforo
de 50 mL. (PM= 194.19 g/mol).
(0.025 g)(10)(99 % ) 1mL
CM=
(50 mL)(194.19
g
)
=( 2.5491 x 10−3 M )
25 mL ( )
=1.01964 x 10−4 M
mol

3. Determina la concentración de cada sistema.

Para determinar la concentración de cada sistema se debe tomar en cuenta el volumen de stock
en cada sistema.
Sistema 1.

1.01964 x 10−4 M ( 101mLmL )=(1.01964 x 10 −5 mol

mL )(
194.19
g
mol )( 10001 gmg )( 10001 LmL )=1980.04 ppm
Sistema 2.

1.01964 x 10−4 M ( 102mLmL )=(2.03928 x 10 −5 mol

mL )(
194.19
g
mol )( 10001 gmg )( 10001 LmL )=3960.08 ppm
Sistema 3.

1.01964 x 10−4 M ( 103 mLmL )=(3.05892 x 10 −5 mol

mL )(
194.19
g
mol
1000 mg
)(
1g )( 10001 LmL )=5940.12 ppm
Sistema 4.

1.01964 x 10−4 M ( 104 mLmL )=( 4.07856 x 10 −5 mol

mL )(
194.19
g
mol )( 10001 gmg )( 10001 LmL )=7920.16 ppm
Sistema 5.

1.01964 x 10−4 M ( 105 mLmL )=(5.0982 x 10 −5 mol

mL )(
194.19
g 1000 mg
mol )(
1g )( 10001 LmL )=9900.20 ppm

4. Presente el gráfico de concentración contra Área y determine pendiente, ordenada

al origen y R2.
Tabla 2. Concentración en ppm y área.
Concentracio
n [ppm] Área
1980.04 41063
3960.08 110915
5940.12 192892
7920.16 234407
9900.2 290053
 Concentracion vs Area
350000

300000
f(x) = 31.39 x − 12575.6
250000 R² = 0.99

200000
Area
150000

100000

50000

0
1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 10000 11000
Concentracion

m=31.387
b=−12576
R2=0.9871

5. Determine la concentración con la curva de calibración y determine el contenido de

cafeína en mg por 100 mL de muestra.
[ A x] [A ]
=F s
[X] [S]
[ Ax ] [X]
De la ecuación y=mx donde → =F
[ As] [S]
F=31.387 S=1.01964 X 1 0−4 [ A S ]=70283 y=173866
Por lo tanto [ X ] =590.10259

Para los 100 ml se consideran los mismos 25mg de cafeína

(0.025 g)(10)(99 % )
CM= =( 1.27452 x 10−3 M )
g
(10 0 mL)(194.19 )
mol