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UNIVERSIDAD ESTATAL DE BOLIVAR

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES DEL


AMBIENTE
CARRERA DE AGROINDUSTRIAS

TALLER DE CLASE SEMANA No. 2

Asignatura: Bioingeniería

Docente: Ing. Carlos Jácome Pilco

Integrantes: Miguel Angel Ortega, Sara Aurora Pupiales, Luis Riquelme Talahua,

Carmen Alicia Tamami

Ciclo: Octavo

Fecha: 1/12/2021

Periodo académico: Noviembre 2021 – Marzo 2022

Tema: Medios de cultivo y esterilización


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Diseño

La preparación de medios para el desarrollo de procesos de fermentación es una etapa fundamental


para asegurar la productividad de los mismos, para realizar una fermentación usamos biorreactores
en estos equipos se realiza el proceso de cultivo también comúnmente denominado “fermentador”,
sea en estado sólido o líquido, su diseño debe ser tal que asegure homogeneidad entre los
componentes del sistema y condiciones óptimas para el crecimiento microbiano y la obtención del
producto deseado. Es importante tomar en cuenta los problemas de transferencia de calor y oxígeno
sobre la cama de sustrato, los cuales dependen de las características de la matriz que se esté
utilizando para la fermentación, siendo éste, uno los principales factores que afectan el diseño y
las estrategias de control, los criterios más importantes para el diseño de un biorreactor pueden
resumirse del siguiente modo dependiendo del tipo de biorreactor y la fermentación a utilizar.

✓ El tanque debe diseñarse para que funcione asépticamente durante numerosos días, para
evitar la aparición de contaminantes en las operaciones de bioprocesos de larga duración.
✓ Debe permitir una mayor área de contacto entre las fases biótica y abiótica del sistema, es
decir, se debe proporcionar un sistema adecuado de aireación y necesidades agitación para
cubrir las necesidades metabólicas de los microorganismos.
✓ El consumo de energía debe de ser el mínimo posible.
✓ Entradas para la adición de nutrientes y el control de pH.
✓ El crecimiento microbiano es generalmente exotérmico, por lo que, el biorreactor debe
facilitar la transferencia de calor, del medio hacia las células y viceversa, a medida que se
produce el crecimiento celular, además de mantener estable la temperatura deseada.
✓ Mantener las células uniformemente distribuidas en todo el volumen de cultivo.
✓ Suministrar oxígeno a una velocidad tal que satisfaga el consumo.
✓ El diseño debe ser tal que permita mantener el cultivo puro una vez que todo el sistema ha
sido esterilizado y posteriormente inoculado con el microorganismo deseado. (Ruíz, 2016)
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Requerimientos nutricionales

Los requerimientos nutricionales están determinados por el tipo de metabolismo celular, ya sea
autotrófico, que corresponde a los microorganismos que obtienen el carbono del CO2 y los
heterotróficos que necesitan compuestos orgánicos como fuente de carbono. Otro factor esencial
está determinado por las condiciones del cultivo, si es aerobio o anaerobio. El O2 es uno de los
oxidantes más comunes en el metabolismo energético. En la ausencia del O2 , el NO3 o SO4 son
utilizados como aceptores de electrones. El K LA es una medida de la capacidad que posee un
biorreactor para suministrar O2 y el rango de valores usuales está comprendido entre 50 h−1 y
1000 h. El K LA depende del diseño del biorreactor, de las condiciones de operación (caudal de aire,
agitación) y de la viscosidad del cultivo. A mayor viscosidad menor K LA .Otro requerimiento
nutricional se encuentra constituido por las fuentes de nitrógeno que pueden ser de naturaleza
inorgánica u orgánica, el nitrógeno es utilizado para la biosíntesis de proteínas, ácidos nucleicos y
polímeros de la pared celular, para la síntesis de proteína se requieren en general L-aminoácidos,
aunque también son necesarios algunos aminoácidos de la serie D como D-alanina y D-aspártico
para su incorporación a la pared de las células. (Gonzáles, 2017)

Disponibilidad de los componentes

Aparte de su presencia en el medio de cultivo, los nutrientes deben estar disponibles para ser
usados por la célula. Es importante mencionar la disponibilidad correspondiente a iones metálicos
cuya concentración es modificada por que, ya que muchos constituyentes del medio y productos
del metabolismo actúan como agentes complejantes o precipitantes, por ejemplo, aminoácidos,
hidroxiacidos, hidróxidos, y los aniones fosfato y carbonato. Por lo tanto, con el objeto de controlar
su concentración y prevenir la precipitación de los iones metálicos, es necesario o esencial que el
ion mediante algún agente agregado, como el EDTA o ácido cítrico.

Los componentes comunes a casi cualquier tipo de biorreactor son:

Barreras físicas que garantizan la contención biológica (filtros, empaques, sellos, trampas de
vapor, etc.).
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Sistema de transferencia de oxígeno (difusor de gases e impulsor), sistema de transferencia de


energía calorífica o calor para esterilización y/o enfriamiento (chaqueta o serpentín)

Sistema de transferencia de momentum para mantener la homogeneidad (impulsores,


deflectores y difusores de gases).

Puertos para la inoculación, la toma de muestra, la adición de reactivos (nutrimentos,


antiespumante, base, ácido) y la inserción de dispositivos y sensores de medición, y mirillas y
equipo de seguridad (válvulas de alivio, discos de ruptura). Además, los biorreactores tienen
múltiples conexiones a instrumentación y equipo de medición para control del bioproceso.

Materias primas fundamentales

Las materias primas es importante considerar diferentes aspectos como el costo de los mismos,
la disponibilidad y la estabilidad en su composición química. Si llega a entender el costo de
los nutrientes representa un costo total considerable de muchos productos obtenidos por
fermentación, se disminuir el costo de los medios. Las materias primas más importantes
corresponden a fuentes de carbono y de nitrógeno. Las fuentes de carbono pueden ser:

➢ Hidratos de carbono como glucosa o dextrosa, sacarosa, lactosa, almidón, dextrina.


➢ Alcoholes como el glicerol y manitol.
➢ Hidrocarburos como hexadecano, octadecano y otros.

Son muy importantes también por su disponibilidad y costo reducido otras materias primas que
contienen hidratos de carbono como granos, melazas, celulosas, suero de queso, etc. También
se pueden emplear otros subproductos o efluentes de industrias estos son:

Fuentes de carbono

Las principales fuentes de carbono utilizadas para la formulación de medios de cultivo de


microorganismos son los carbohidratos, contenidos en las melazas, extractos de maltas y jugos
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azucarados, aunque también se utilizan otras fuentes complementarias como los aceites
vegetales, etanol y alcanos.

Las melazas, subproducto de la industria azucarera, son una de las fuentes más baratas de
carbohidratos y por ese motivo se utilizan muy frecuentemente como aportadores de carbono.
Además, las melazas contienen también sustancias nitrogenadas, vitaminas y elementos traza.
Un inconveniente de las melazas es que su composición varía en función de la materia prima
usada para la obtención del azúcar, las condiciones climáticas, la localidad y el proceso usado
en la industria azucarera.

El extracto de malta contiene también sustancias nitrogenadas entre las que se incluyen
péptidos, proteínas, aminoácidos, purinas, pirimidinas y vitaminas.

Otras fuentes de carbono son el almidón y dextrinas, los que pueden ser metabolizados
directamente por los organismos productores de amilasas. En particular el almidón ha
adquirido importancia en la producción de etanol. Se utilizan también los líquidos sulfíticos de
las papeleras. Se trata de productos residuales de la industria del papel que contienen azúcar.

Otra fuente de carbono que está siendo cada vez más utilizada, debido a su gran disponibilidad
y bajo costo es la celulosa, que proviene de la paja, restos de mazorcas, turba y papel. Sin
embargo, a menudo este sustrato no puede ser utilizada directamente como fuente de carbono,
por lo que se deberá someter a hidrólisis previa, ya sea química o enzimática, convirtiéndola
en el jarabe de glucosa, que se usa en la producción de etanol, butanol, acetona e isopropanol.

Nitrógeno

Las fuentes de nitrógeno de naturaleza inorgánica más comunes son el amoniaco o las sales de
amonio. Las orgánicas están representadas por varios productos, como ser:

1) Hidrolizados de proteínas (Peptonas) que son obtenidas por hidrólisis ácida o


enzimatica de distintas fuentes proteicas como carne de diferentes órganos y animales,
pescado, caseina, gelatina, harina de soja, algodón, girasol, etc
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2) Extracto de carne, que se obtiene por extracción acuosa y concentración posterior


variando su tipo de acuerdo a la calidad de carne, tiempo de extracción y temperatura
de la misma.
3) Extracto de levadura, que es disponible en forma de pasta o polvo, y puede ser obtenida
mediante autó1isis o plasmó1isis de la levadura, es básicamente una mezcla de
aminoácidos, péptidos, vitaminas solubles.
4) Extracto de malta, que es el extracto soluble en H2O de la malta de la cebada.

También se utiliza el líquido de maceración del maíz, que es un subproducto de la producción


de almidón a partir del maíz. El extracto concentrado tiene un 4% de Nitrógeno y numerosos
aminoácidos, como son: Ala, Arg, Glu, Ile, Tre, Val, Fenil Alanina, Met y Cis. Otra fuente
muy utilizada es el extracto de levaduras, que resulta excelente para muchos microorganismos.
Se produce a partir de levaduras de panificación, induciendo su autólisis a 50 – 55º C o por
plasmólisis en alta concentración de NaCl. Contiene aminoácidos, péptidos, vitaminas solubles
en agua y carbohidratos. El glucógeno y la triohalosa se hidrolizan a glucosa durante la
producción del extracto. (Collado, 2016 )

Formulación

La formulación tiene que ver con los aspectos cuantitativos de los medios, es decir debe establecer
las concentraciones de cada componente a ser utilizadas.

Una primera aproximación con respecto a las cantidades a utilizar de las diversas fuentes lo da el
conocimiento de la composición de biomasa del microorganismo a ser empleado. Una
composición elemental y típica de la biomasa es (en % de peso seco): Carbono, 46-48; Nitrógeno,
7-12; Fósforo, 1-3; Azufre, 0.5-1.0; Mg, 0.5-1%. Es decir, que si queremos formular un medio
para producir una determinada cantidad de biomasa debemos proveer las distintas fuentes que
aseguren como mínimo las cantidades de elementos que deben ser suministrados, la composición
de un medio mínimo basado en este principio, que además tiene en cuenta los requerimientos de
las fuentes de energía.
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En la misma forma se pueden establecer balances de materia para otras reacciones que incluyan
productos y deducir de las mismas cantidades de biomasa y productos que se pueden obtener a
partir de una determinada cantidad de fuentes de carbono y de nitrógeno.

Aplicando este criterio podemos establecer entonces que, para obtener una determinada
concentración de biomasa, por ejemplo 30 gl, debemos formular el medio como mínimo con 60
g|-' de fuentes de carbono asimilable, que es en el caso anterior la sacarosa. Con respecto a las
fuentes de nitrógeno, ésta debe estar en concentración tal como para satisfacer la ecuación anterior,
que es 0.61 moles de NH3 o sea 10.37 g de amoníaco, lo que representa 8.54 g de N2 . Ya tenemos
por lo tanto la cantidad de la otra fuente fundamental a ser agregada, del conocimiento de la
composición centesimal de otros componentes menores podemos establecer así las cantidades a
agregar.

Optimización

En la Optimización pueden ocurrir situaciones en las cuales sea imperativo la optimización de los
medios de cultivo, entre ellas podemos destacar las siguientes:

1) No existencia de información respecto a coeficientes de rendimiento de macro y micro


elementos para el cultivo del microorganismo determinado.

2) Existencia de limitaciones nutricionales ocultas, especialmente de micro elementos y factores


de crecimiento.

3) Uso de medios de cultivo conteniendo elementos en exceso respecto de los requerimientos


nutricionales del microorganismo en cuestión, que pueden causar inhibición del crecimiento.

4) Ensayo de sustancias estimulantes, activadoras e inhibidoras del crecimiento y formación del


producto.

5) Empleo de fuentes nutricionales no convencionales, la metodología más elemental consiste en


realizar experimentos, en los cuales se varía la concentración del componente a ensayar
manteniéndose constante las concentraciones de los demás ingredientes, para organismos aerobios
generalmente se utiliza como sistema de cultivo erlenmeyers agitados.
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ESTERILIZACION

La palabra esterilización significa la eliminación de toda forma de vida de un medio o material, lo


que se lleva a cabo generalmente por medios físicos o productos químicos.

La palabra desinfección se aplica a la remoción o de destrucción por cualquier vía de organismos


vivos que pueden causar daño particular o infección. No significa por lo tanto la destrucción de
todos los microorganismos, sino solamente de aquellos que pueden producir un resultado no
deseado.

Un antiséptico es un desinfectante, o sea un agente químico usado para destruir microorganismos


dañinos. Se utiliza en general para agentes a ser aplicados en animal o humanos.

METODOS DE ESTERILIZACION

Los métodos térmicos de esterilización son comúnmente los más utilizados para eliminar los
microorganismos, incluyendo las formas más resistentes como lo son las endosporas.

Los métodos de esterilización pueden ser de 3 tipos:

a) Por destrucción total de microorganismos


b) Por muerte o inactivación
c) Por eliminación con medio físico

CINETICA DE LA ESTERILIZACION POR CALOR

La cinética de la esterilización por calor húmedo, que es la única que consideraremos en esta
monográfica por su aplicación a la esterilización de medios de fermentación, esta caracterizada
bastante aproximante por una reacción cinética de primer orden.

Una esterilización segura con calor húmedo requiere temperaturas mayores a las del punto de
ebullición del agua. Estas temperaturas son comúnmente alcanzadas por el vapor bajo presiones
elevadas en un autoclave. Cuando la presión de un gas aumenta, la temperatura del gas aumenta
proporcionalmente. Como el vapor de agua es un gas, aumentar su presión en un sistema cerrado
aumenta su temperatura.
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CONSERVACION DE LA CALIDAD NUTRIENTE

Los medios de fermentación utilizados en la industria son casi siempre complejos y a menudo con
solidos en suspensión, de manera tal que los cambios que es producen durante la esterilización
pueden ser importante.

La conservación de los alimentos también puede incluir procesos que inhiban el deterioro visual,
como la reacción de pardeamiento enzimático en manzanas después de que se cortan durante la
preparación de alimentos.

Muchos procesos diseñados para conservar los alimentos implican más de un método de
conservación de alimentos.

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