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PRÁCTICAS de EMBRIOLOGÍA

- Manejo de los huevos fecundados de gallina.


- Observación del desarrollo embrionario y fetal, utilizando diferentes estadios de desarrollo.
- Identificación de la edad embrionaria según los criterios de Hamburguer y Hamilton (1951)
- Identificación de los diferentes anejos embrionarios y de observación "in vivo" de la circulación
sanguínea extraembrionaria.

PRÁCTICA 2

Se abrirán huevos embrionados de pollo, incubados durante diferentes periodos de tiempo, para observar
como va evolucionando la morfología de los diferentes órganos y membranas extraembrionarias.
Para ello se utilizarán embriones de los siguientes estadios de desarrollo aproximadamente:

14-15HH = 50-55 horas de incubación.


18 HH = 3 días de incubación.
30 HH = 6.5-7 días de incubación.
HH= Estadios de desarrollo del embrión de pollo según los criterios de Hamburger y Hamilton (1951).

14-15 HH

Somitas: Entre 22 (14HH) y 24-27 (15HH).


Flexuras y rotación: La flexura craneal, el eje del cerebro anterior y posterior forma un ángulo 90º o algo
inferior. La flexura cervical forma una curva abierta. La rotación del tronco se extiende hasta las somitas
7-9 (14HH) o 11-13 (15HH).
Amnios: Se extiende hasta las somitas 7-10 (14HH) o 7-14 (15HH).
Arcos viscerales (o branquiales o faríngeos): Se distinguen los arcos viscerales y las bolsas faríngeas (o
bolsas viscerales) 1 y 2 (14HH) y 3 (15HH).
Ojo: Empiezan a invaginarse las vesículas ópticas. En el estadio 15 HH se distingue un doble contorno en
la región del iris.

Embrión de pollo de 25 somitas (Freeman and Bracegirdle, 1975)


18 HH

Miembros: Se pueden observar los esbozos de los miembros, siendo los posteriores ligeramente mayores
que los de las alas.
Somitas: 30-36.
Flexuras y rotación: La flexura del tronco se encuentra en la región lumbar. La rotación se extiende hasta
la parte posterior del cuerpo. Existe un brote que es el esbozo de la cola, que ha girado hacia la derecha
formando un ángulo aproximado de 90º.
Arcos viscerales: Los procesos maxilares ausentes o casi imperceptibles. La 4ª bolsa faríngea ausente.
Alantoides: Forman un bolsillo espeso y cerrado, todavia sin formar vesícula

Embrión de pollo de 35 somitas (Freeman and Bracegirdle, 1975)


30 HH

Embrión de pollo 30HH (Hamburger and Hamilton, 1951)

Miembros: Los tres segmentos de los miembros están claramente marcados tanto los superiores como los
inferiores. Las alas se curvan en la articulación del codo, y los miembros posteriores en la articulación de
la rodilla. Se observan surcos entre los dedos primero y segundo en el ala y entre todos los dedos de los
pies.

Arcos viscerales: El proceso mandibular se aproxima al pico, aunque la separación todo es visible. El
cuello se alarga de forma muy marcada.

Esbozos de las plumas: Dos hileras dorsales a los lados de la médula espinal en la región braquial y tres
hileras en la región de los miembros inferiores. A nivel torácico son prácticamente inexistentes.

Diamante: Se distingue como una pequeña protuberancia. El pico es más prominente que estadios
anteriores

Embrió de pollastre 30HH (Hamburger i Hamilton, 1951)

Estos embriones serán disecados para observar la evolución del aparato urogenital:
- En este estadio el mesonefros está creciendo y es el único riñon funcional.
- Las gónadas (ovarios y testículos) están totalmente desarrolladas.
PRÁCTICA 3

Se abrirá un huevo embrionado de pollo, incubado durante aproximadamente 15 días (Estadio 41HH). Se
procederá a su disección y evisceración. Se identificarán los diferentes órganos y anejos embrionarios,
para posteriormente, proceder a realizar la técnica de la tinción de su esqueleto.

41HH (Se utilizarán para realizar la técnica de tinción del esqueleto).

Miembros: Las escamas se solapan en la superficie inferior y superior de la pierna. La superficie plantar
de las falanges está cubierta por papilas totalmente desarrolladas. Alargamiento del tercer dedo del pie =
14.9 ± 0.8 mm.
Arcos viscerales: Alargamiento del pico desde el borde anterior de la nariz hasta la punta del pico = 4.0
mm.

Embrión de pollo 41HH (Hamburger and Hamilton, 1951)

Estos embriones serán disecados para observar la evolución del aparato urogenital:
- En este estadio el mesonefros está degenerando. El metanefros está totalmente desarrollado.
- El ovario derecho prácticamente ha desaparecido.
TÉCNICA DE TINCIÓN DEL ESQUELETO DE EMBRIÓN DE POLLO

Introducción
Esta técnica consiste en la coloración del tejido óseo del embrión de pollo. Para poder visualizar este tejido, una vez teñido, sin la
necesidad de aparatos especiales, se lleva a cabo la transparentación de los tejidos blandos. Este tipo de técnicas se utilizan de
manera rutinaria en los laboratorios farmacéuticos, para estudiar el efecto de los nuevos fármacos sobre el desarrollo embrionario.
Nosotros utilizaremos embriones de pollo de 14-15 días de incubación (estadio 40-41 Hamburger–Hamilton). Los embriones se
mantendrán durante todo el proceso en un recipiente de plástico de 250 ml.

Método
1. Extraeremos el embrión abriendo el huevo y depositando todo el contenido sobre una placa de petri. Retiramos las membranas
que lo envuelven y lo lavamos en una solución de PBS (phosphate buffer solution).
Composición del PBS:
Na2HPO4·2H2O ---------------- 40 g
NaH2PO4·H2O ------------------ 7,1 g
NaCl ----------------------------- 202,5 g
H2O destilada ---------------- 26 l

2. Trabajando siempre bajo la lupa binocular, retiramos la piel del embrión, procurando no dañar las estructuras. Una vez
terminado lo lavaremos en PBS.

3. Abrimos el abdomen introduciendo las tijeras por el cordón umbilical en dirección craneal. Llegando hasta la entrada del tórax,
vigilando no cortar las costillas ni el esternón. En dirección caudal abriremos hasta la cloaca.
Se extraen todas las vísceras del embrión, vaciando las dos cavidades por completo (tórax y abdomen). Lo volvemos a lavar en
PBS y lo introducimos en una solución de alcohol etílico al 70%, aquí estará un mínimo de 10 días (solución fijadora).

4. A los 10 días se lavan los embriones en agua corriente a poca presión y se pasan a una solución de hidróxido potásico al 1%
durante 1 día (solución permeabilizadora).
Composición para 100 ml de solución de KOH 1 %:
H2O destilada -------------- 100 ml
KOH -------------------------- 1g

5. Al día siguiente se lavan los embriones en agua corriente a poca presión y se ponen en una solución de rojo de alizarina. Aquí
deberán permanecer 2 días (solución colorante).
Composición para 1000 ml de solución:
Rojo de alizarina ------------ 0,006 g
KOH 1 % ---------------------- 1000 ml

6. Se extraen los embriones de la solución de rojo de alizarina, se lavan con agua corriente y se introducen en una solución de
glicerol / alcohol etílico al 70 % / alcohol benzílico, en una proporción de 2:2:1, hasta que se transparenten (solución
transparentadota).
Composición para 100 ml de solución:
Glicerol ------------------ 40 ml
Alcohol etílico 70 % ----- 40 ml
Alcohol bencílico -------- 20 ml

7. Los embriones se almacenan en una solución de glicerol / alcohol etílico al 70%, en una proporción 1:1 (solución
conservadora).
Composición para 100 ml de solución:
Glicerol ------------------ 50 ml
Alcohol etílico 70 % -----