Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
DESCUBRIENDO EL MICROSCOPIO
Principios básicos , clasificación y funcionamiento de un microscopio.
Tipos de microscopios.
Ventajas y desventajas.
EL MICROSCOPIO EN LA ACTUALIDAD
Terminología práctica de la microscopía óptica y caracterizar correctamente un microscopio.
Mantenimiento preventivo.
Errores en la práctica.
Selección de refacciones y accesorios.
DESCUBRIENDO EL MICROSCOPIO
INTRODUCCIÓN
Veremos sus progresos hasta llegar a la perfección que a adquirido durante los siglos, así mismo se dará una
descripción lo más clara y detallada de todas sus partes y lo delicado de cada una de sus componentes.
Sabremos que partes podemos remover y cuales se recomienda no quitar, para lograr un mejor
aprovechamiento de este instrumento, además de la prevención de futuros problemas en su
mantenimiento y cuidado.
Daremos una información clara, sencilla y sin complicadas formulas ópticas, con lo que se pretende dar una
guía tanto de la operatividad del microscopio como para futuras adquisiciones.
LA HISTORIA DEL MICROSCOPIO
Sir John Layard descubrió una lente plana convexa de cristal de roca durante sus excavaciones
en Ninive, en el periodo de 705 a 721 a.C. observó sus propiedades para quemar materiales
suaves tales como hojas de papel, piel de insectos etc.
El Microscopio se invento, hacia 1610, por Galileo, según los italianos, o por Jansen, en
opinión de los holandeses.
La palabra microscopio comenzó a usarse por los componentes de la "Accademia dei Lince",
sociedad científica a la que pertenecía Galileo y que publicaron un trabajo sobre la
observación microscópica del aspecto de una abeja.
El primero en utilizar la palabra microscopium fue Atanasio Kircher (1601-1680), en su libro
"Ars magna Lucis et Umbra".
Galileo participó en el desarrollo de espejuelos y espejos convexos. Campini descubrió que era
posible pulir lentes a dimensiones determinadas.
Boreli, en Italia fue el primero que uso el microscopio para estudiar tejido animal.
Las primeras publicaciones dela microscopia aparecen en 1660 y 1665 cuando Malpighi
prueba la teoría de Harvey sobre la circulación sanguínea al observar al microscopio los
capilares sanguíneos y El ingles Robert Hooke, publicó su “Micrographia” describiendo la
estructura de los tejidos, secciones de arterias y venas y muchos otros objetos y formas.
LA HISTORIA DEL MICROSCOPIO
Antonio Van Leeuwenhoek (holandés), a mediados del siglo XVII, utilizando microscopios
simples de fabricación propia describió por primera vez protozoos, bacterias,
espermatozoides y glóbulos rojos.
Leeuwenhoc; Observó y escribió acerca de innumerables cosas, pequeños pedazos de fruta
o legumbres, la perfección de la cabeza de una mosca, el pie de una pulga, ojos de algunos
insectos etc. En 1723., descubrió pequeñísimos organismos en una gota de agua como
también en saliva humana y en casi todos los objetos que estudiaba, que más tarde guió a
las famosas investigaciones de Pasteur y de Koch e indudablemente fue el comienzo sobre
el cual se fundo la ciencia de la medicina moderna.
En el siglo XVIII el microscopio sufrió diversos adelantos mecánicos que aumentaron su
estabilidad y su facilidad de uso aunque no se desarrollaron mejoras ópticas.
Ha principios del siglo XIX, el microscopio compuesto, con objetivo y oculares ofrecía más
posibilidades para la solución de los problemas que estaban siendo investigados por los
científicos.
En 1825 el Dr. C.L. Chevalier en Francia, crea la primera firma de manufactura de
microscopios Chavalier e Hijo en París.
La casa Carl Zeiss de Jena, Alemania, fue fundada en 1846, y por poco más o menos 50
años, su principal producto fue el microscopio.
En 1886 el famoso profesor Abbe, de la Universidad de Jena, se asocio con Zeiss, y dedico
su gran talento a la teoría de diseño científico óptico. En su “teoría de la forma de la
imagen microscópica” demostró la importancia de considerar los efectos de difracción al
usar el microscopio.
LA HISTORIA DEL MICROSCOPIO
Actualmente existe una gran diversidad de equipos, los requisitos que se plantean a los
microscopios de investigación evolucionan vertiginosamente en el campo de la microscopia.
Todos los elementos de los microscopios son de acceso y manejo fácil. Los tubos binoculares
complementan el tipo de construcción ergonómicamente ventajosa del microscopio, gracias a
la altura regulable y separación interpupilar de los oculares, al ángulo de observación
individualmente graduable al campo visual para un trabajo eficiente y libre de cansancio.
TIPOS DE MICROSCOPIOS
Existen microscopios monoculares, microscopios binoculares, microscopios estereoscópicos,
microscopios con sistema invertido, (metalográfico), microscopios con sistema de captura
digital de imágenes, microscopios para cirugía.
Es necesario preparar las muestras debidamente antes de poder estudiarlas, el objeto tiene
que ser muy delgado para que este suficientemente transparente y así permita el paso de
luz, de lo contrario la observación del objeto no será la correcta.
Las preparaciones secas tienen posibilidad muy limitada para sus estudios, generalmente
se estudia con aumentos bajos iluminándolos desde arriba, es decir como objetos opacos,
de nuevo se recomienda los microscopios estereoscópicos.
El proveedor de microscopios deberá saber cual será la aplicación del equipo y así
ofrecer el producto adecuado a su cliente, en caso de ser de enseñanza, de laboratorio
de investigación, quirúrgico entre otros.
Es muy importante verificar la capacidad del soporte técnico de la casa vendedora, para
el posible crecimiento del microscopio, ya que ahora existen estas ventajas de ir
adaptando los equipos y complementándolos de acuerdo a las necesidades.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS
Es muy común escuchar que la iluminación es flexible según Kohler, que se cuentan con
objetivos ICS, que algunos objetivos son compatibles con otros microscopios, otros nos
dicen que son totalmente automatizados para algunas aplicaciones, objetivos
apocromaticos y de campo plano, cosas que de verdad son posibles solo que algunos las
dicen en sus manuales pero no las cumplen, y esto es algo que sobre todo en cuestiones
de la óptica si es difícil de probar que el equipo lo este cumpliendo.
Se identificará la causa del problema al observar algo de color en los bordes de las
imágenes que se analizan, o al no enfocar bien con un ocular y con el otro si, o en ambos
oculares a la vez; ya que está problemática suele suceder frecuentemente en los equipos.
EL MICROSCOPIO EN LA ACTUALIDAD
Óptica ICS
La óptica ICS (Infinity Color-corrected System) quiere decir: Imágenes luminosas, con corrección cromática y
contrastes fuertes. Por esta razón, los objetivos ICS forman una parte muy importante en el microscopio para
el trabajo diario de laboratorio.
Revolver portaobjetivos
El revolver portaobjetivos debe garantizar la visión libre y clara de las muestras de observación así como
una marcha suave y se enclave con precisión con cada uno de los objetivos.
Procedimientos de valoración
Procedimientos para valorar objetivos plan acromático 4 ò 5X, 10X, 40X y 100X. Los objetivos
plano acromáticos serán sometidos a la prueba de la “Estrella” para observar.
a) Campo plano
1.- Tomar un substrato con pin-holes.
Este substrato puede ser fabricado depositando polvo o mejor pequeñas micro esferitas en un porta objeto
y luego aluminisarse en una campana de vacío, o utilizar polvo blanco como objetos corpusculares en el
porta objeto. El tamaño de estas micro estructuras deben de ser tal que no puedan ser resueltas por
cuestiones de difracción por el objetivo a evaluar de un microscopio.
2.- Enfocar los pin-holes con el objetivo de evaluar y seleccionar de estos los que presenten un patrón de
difracción más cercano al de un disco de Airy y por lo tanto que el objetivo no pueda resolver su estructura.
Es necesario comprobar que los pin-holes seleccionados sean lo mas circulares posibles por lo que es
necesario verlos con un instrumento que garantice que lo son. (Puede ser utilizando otro microscopio que
se este seguro de su calidad de imagen).
3.- Realizar una observación de todo el campo visual.
4.- La presencia de un campo plano estará dada por un enfoque uniforme y obtención de nitidez total en
todo el campo visual, sin necesidad de hacer continuos ajustes con el mando micrométrico.
5.- Para que presente campo plano los pin-holes de las orillas y del centro deben de estar ambos
enfocados.
PRUEBAS EN USO
b) Acromatismo (corrección de color, ausencia de color en las imágenes del microscopio)
Nota: Es conveniente utilizar filtros de luz en esta prueba, en caso de que existan
aberraciones cromáticas, con el fin de evaluar las aberraciones geométricas, para una longitud
de onda.
8.- Estas pruebas son cualitativas, más no subjetivas. La prueba de la estrella es adecuada
para determinar si existe o no aberraciones en un sistema óptico.
CARACTERIZACIÓN DE UN MICROSCOPIO
Oculares
Su función es magnificar más el aumento del objetivo, y colocar las imágenes
que ha formado el juego óptico en un punto focalde poco más o menos tres o
cuatro milímetros del lente superior del ocular.
Existen varios tipos de oculares, los Huygens, los Ramsden los de punto focal
largo, los de campo ancho (especiales para patología).
El microscopio compuesto forma una imagen real amplificada del objeto por
medio de una lente llamada objetivo y luego se observa esta imagen por
medio de una lupa a la que se le llama ocular.
La imagen se observa invertida debido a la inversión del objetivo. Como la
pupila del ojo tiene un diámetro pequeño, es necesario colocarla sobre el
plano en que todos los rayos cruzan el área circular mínima, a fin de que todos
los rayos penetren en el. Esta área es una imagen real de la abertura del
objetivo, y se domina pupila de salida.
Este sistema tiene dos desventajas: la pupila de salida esta muy alejada del
ocular, y el ocular debe tener un diámetro mayor que el de la imagen real.
Se pueden evitar mediante el uso de una lente convergente sobre el plano de
la imagen, a la que llaman lente de campo. Esta lente dobla el haz
acercándolo al eje óptico sin cambiar la imagen, conservando así la misma
amplificación el microscopio. Al conjunto formado por el ocular y la lente de
campo se le llama en forma general simplemente ocular.
CARACTERIZACIÓN DE UN MICROSCOPIO
Objetivos
MANTENIMIENTO PREVENTIVO
El microscopio es un instrumento de precisión construido de valiosos y delicados materiales, con
un buen mantenimiento y cuidado tal instrumento durara muchos años, pero solo bastara un
descuido en la perdida
de cualquiera de sus elementos puede arruinarlo y dejarlo inservible, si vamos a mover
constantemente
nuestro equipo es conveniente tomarlo de las partes que nos indica el proveedor generalmente
es del brazo o cuello del microscopio, estando frío por supuesto esto evitara que se fundan los
focos de iluminación, el lugar de almacén del deberá ser lo mas limpio del polvo, humedad, o
exceso de calor en anaqueles estables y fijos.
a) Se comienza removiendo los oculares ya que son los que generalmente siempre
están más sucios, es necesario iniciar una buena limpieza empezando con aire, ya
sea con la jeringa pera o aire comprimido y luego con un cotonete humedecido
de la solución de 60% de acetona y 40% de éter en un despachador de solventes
para que este no se evapore, sé dará una pasada sobre la lente ocular y en un
sentido tratando de pasar por toda la lente se tira el cotonete y se toma otro y se
realiza la misma operación viendo que quede limpia la superficie, cuando la grasa
y polvo adherido desaparecen. Se inspeccionara la parte posterior del ocular,
siempre sin desarmar ya que el ensamble de los oculares de fábrica vienen libres
de impurezas internas y es Imposible que se penetre el polvo a menos que lo
dejemos en lugares húmedos por lo pronto NO se deberá abrir nunca un
componente óptico que sabemos que esta sellado ya que se puede perder la
alineación óptica de nuestras lentes.
b) Se revisará que el cabezal del microscopio gire los 360° alrededor del cuerpo y
ver que tenga un ajuste de giro. Revisando el tornillo opresor que sé vera en el
cuello de giro.
g) Una vez que el microscopio esta sin sus partes ópticas principales quedará el cuerpo
del microscopio, el cual también deberá ser limpiado, se comienza verificando el mando
de enfoque que traslada la portaplatina, la cual esta situado de manera funcional, se
manejará fácilmente, mientras que las manos están apoyadas en la mesa de trabajo.
El mando con engranaje de rodamiento permite enfocar todas las preparaciones de
manera exacta y segura sin requerir mantenimiento y reajustándose automáticamente.
En el caso de aumentos bajos, la muestra se enfoca fácilmente, con el mando
macrométrico. El mando micrométrico recorre toda la carrera.
Los componentes del mando están protegidos por limitadores en las posiciones finales.
Mando micrométrico equivale 1 vuelta= a 0,2mm de desplazamiento. Mando
macrométrico equivale a 1 vuelta= a 2mm de desplazamiento , la carrera total es de
25mm que los mandos macro y micro deberán estar operando suave y sin ningún
problema de vibración externa, para detectar si el equipo necesita grasa el tipo de grasa
es de silicona esta dura varios años sin que sea necesario remover ya que por sus
propiedades no-suelta absolutamente nada de escurrimientos de aceites o de otros
materiales y se adhiere en las cremalleras de avance por lo que es inmediato ya que el
movimiento macro o micro se endurece y esto nos indica que algo anda mal ya que
siempre estos movimientos son suaves y cómodos de operar.
MANTENIMIENTO PREVENTIVO
b) El usuario del microscopio nunca deberá usar maquillaje en los ojos ni mucho menos
máscara de pestañas durante la operación, esto deteriora en gran medida la lente
ocular del sistema, ya que se trabaja demasiado cerca de la misma y esto con el
tiempo puede provocar rayas en la película antirreflectora.
c) Con los objetivos se debe tener extremo cuidado ya que algunos microscopios no
tienen un tope de seguridad, el cual para evita lastimar la lente del objetivo, al subir
al máximo la platina del objeto a observar.
Se recomienda buscar el tope de seguridad del microscopio que se encuentra en la
parte interior del cuello del microscopio cerca del revolver de oculares y fijarlo, pero si
no se encontrará este tope en el microscopio se deberá tener mucho cuidado cuando
se acerca el objetivo a la platina, no lastimar al objetivo.
MANTENIMIENTO PREVENTIVO
El objetivo que en la mayoría de los casos será 100x, y el de inmersión, deberán limpiarse con el
algodón en forma de cotonete humedecido en la solución de acetona con éter, si por alguna razón se
llegará a rayar la superficie del ocular, se podrá pulir levemente la superficie con fieltro para pulir
óptica y con pulidor de 3 micras que puede ser Cerite, Barnesita o Opalin, estos son pulidores para
óptica de precisión, con lo que fueron seguramente fabricados las ópticas del microscopio.
d) El condensador tiene como misión condensar la luz que viene del foco a un punto más o
menos de un milímetro y medio arriba de la superficie (de la platina del microscopio) es decir,
aproximadamente en el lugar donde va a ser puesto el objeto el cual esta colocado sobre el
porta objetos que tiene un espesor de 9 décimas de milímetro.
Algunos condensadores están provistos de un diafragma iris para controlar la cantidad de luz
que va a emitir, como también el ángulo de los rayos de iluminación.
f) También algunos condensadores están marcados con el ángulo de abertura numérica que nos
marcara diferentes aberturas del diafragma iris, de manera es fácil de saber de no cerrarlo a un
punto menor de la abertura numérica con el cual este marcado el objetivo que se este usando.
Si aun entra demasiada luz para ver el objeto claramente, esta luz de sobra deberá eliminarse
por medio de filtros de color colocados en los porta filtros del microscopio.
www.cio.mx