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UNIVERSIDAD MAYOR REAL Y PONTIFICIA DE

SAN FRANCISCO XAVIER DE CHUQUISACA


FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGÍA

INGENIERIA QUIMICA CARRERA ACREDITADA AL


MERCOSUR
MATERIA : Fundamentos de la Ingenieria Bioquimica (PRQ-218)
TEMA : Efecto de la Resistencia a la Trasferencia de Masa por la
………………Inmovilización de Enzimas
PRACTICA : Segundo Parcial
DOCENTE : Ing. Francisco J. Camacho C.
UNIVERSITARIOS:
Flores Alvarez Lesly Jessica Ing. Química
Flores Cueto Carla Gabriela Ing. Química
Llanos Mendoza Verónica Ing. Química
FECHA DE PRESENTACION: 03 DE AGOSTO DE 2020
Sucre – Bolivia
2020
Fundamentos de Ingeniería Bioquímica PRQ-218

EFECTO DE LA RESISTENCIA A LA TRANSFERENCIA DE MASA POR LA


INMOVILIZACION DE ENZIMAS

INTRODUCCION. –

La inmovilización de enzimas es un proceso en el que se localiza a la enzima en una


región definida del espacio, obteniendo formas insolubles que retienen su actividad
catalítica y que puede ser reutilizadas repetidamente. Este proceso se realiza con el
fin de inducir modificaciones en el medio ambiente de la enzima y cambiar sus
propiedades para así poder usarlas en aplicaciones comerciales.

[CITATION Fig10 \l 3082 ]

EFECTO DE LA RESISTENCIA A LA TRANSFERENCIA DE MASA


La inmovilización de enzimas puede introducir a un nuevo problema que está
ausente en las enzimas solubles libres, y es la Resistencia de Transferencia de masa
debido al gran tamaño de partículas de la enzima inmovilizada o debido a la inclusión
de enzimas en matriz polimérica.

Sí se sigue la ruta hipotética de un sustrato desde el líquido hasta el sitio de reacción


en una enzima inmovilizada, se puede dividir en varios pasos:

Diagrama esquemático de la trayectoria del sustrato al sitio de reacción en una enzima inmovilizada

1. Transferencia del líquido a granel a un líquido relativamente sin mezclar la capa


que rodea la enzima inmovilizada.
2. Difusión a través de la capa líquida relativamente sin mezclar.
3. Difusión desde la superficie de la partícula al sitio activo de la enzima en un
soporte inerte.

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Donde los pasos (1, 2) hace hacen referencia a la transferencia de masa externa y el
paso (3) a la resistencia de transferencia de masa intrapartícula (interna).

RESISTENCIA A LA TRANSFERENCIA DE MASA EXTERNA. –

Si una enzima está inmovilizada en la superficie de una partícula insoluble, en el


camino solo se compone del primer y segundo escalón externo a la resistencia de
transferencia de masa. La tasa de transferencia de masa es proporcional a la fuerza
impulsora, la diferencia de concentración:
N s =k s∗A∗(C Sb−C s )(1.1)
Donde CSb y Cs son la concentración del sustrato en la mayor parte de la solución y
en la superficie de la enzima inmovilizada, respectivamente. El término k s es el
coeficiente de transferencia de masa (duración/tiempo) y A es el área superficial de
una partícula de enzima inmovilizada.
Durante la reacción enzimática de una enzima inmovilizada, la velocidad de
transferencia de sustrato es igual a la del consumo de sustrato. Por lo tanto, si la
reacción enzimática puede ser descrita por la ecuación de Michaelis-Menten:
r max C s
r p =k s∗a∗( C Sb−C s ) = ( 1.2 )
k m +C s
Donde:
a = Área superficial total por unidad de volumen de solución de reacción.
Esta ecuación muestra la reacción entre el sustrato concentración en la mayor parte
de la solución y que en la superficie de una enzima inmovilizada (Ec. 1.2) se puede
expresar de forma adimensional como:
1−X s β xs
= ( 1.3 )
N Da 1+ β x s
Donde:
Cs
x s=
C Sb
r max (1.4)
N Da=
k s∗a∗C Sb
C Sb
β=
km

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NDa se conoce como el número de Damkohler, que es la relación entre velocidad


máxima de reacción sobre la velocidad máxima de transferencia de masa.
Dependiendo de la magnitud de NDa (Ec. 1.3) se puede simplificar, como sigue:
 Si NDa < 1, la tasa de transferencia de masa es mucho mayor que la velocidad
de reacción y la reacción general está controlada por la reacción enzimática.
r max C Sb
r p= (1.5)
k m +C Sb
 Sí NDa > 1, la velocidad de reacción es mucho mayor que la velocidad de
transferencia de masa y la velocidad general de reacción está controlada por
ésta última que es una reacción de primer orden:
r p =k s∗a∗C Sb ( 1.6 )
Para medir el grado en que se reduce la velocidad de reacción debido a resistencia a
la transferencia de masa, podemos definir el factor de efectividad de una enzima
inmovilizada, es decir:

actual velocidad de reacción


η= (1.7 )
velocidad sí es relentizada por la difusión

La velocidad de reacción , según la transferencia de masa externa es modelo de


limitación, como se da en la ec.(1.2), la tasa que seria obtenido sin resistencia de
tramsferencia de masa en la interfaz es el mismo como la ec.(1.5) excepto que C S se
reemplazaria por CSb. Entonces el factor de efectividad queda:
r max C s β xs
k m +C s 1+ β x s
η= =¿ ( 1.8 )
r max C Sb β
k m +C Sb 1+ β

Donde el factor de efectividad es una función de x s. Si xs = 1, la concentracion en la


superficie Cs es igual a la masa de concentracion CSb.
Sustituyendo 1 por X en la ecuación anterior se obtiene 1 = 1, que indica que no hay
limitación de transferencia de masa. Por otra parte, si X s se acerca a cero, indica que

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es el caso cuando la velocidad de transferencia de masa es muy lenta en


comparación con la velocidad de reacción.
RESISTENCIA A LA TRANSFERENCIA DE MASA INTERNA. –
Si las enzimas se inmovilizan por polimerización o microencapsulamiento, la
resistencia de transferencia de masa intrapartícula puede afectar la tasa de reacción
enzimática. Para derivar una ecuación que muestre cómo la resistencia a la
transferencia de masa afecta la eficacia de una inmovilizada enzima, se hacen las
siguientes suposiciones:
 La reacción ocurre en todas las posiciones dentro de la enzima inmovilizada, y
que la cinética de la reacción es de la misma forma que observando para una
enzima libre.
 La transferencia de masa a través de la enzima inmovilizada se produce a
través de difusión molecular.
 No hay limitación de transferencia de masa en la superficie exterior de la
enzima inmovilizada.
 La enzima inmovilizada es esférica.
El modelo desarrollado por estas suposiciones se conoce como modelo distribuido.
Primero se deriva una ecuación diferencial que describe la relación entre la
concentración de sustrato y la distancia racial de una enzima inmovilizada. El
balance de materiales para la cáscara esférica con espesor dr como se muestra:
Entrada−Salida+Generación= Acumulación ( 1.9 )

d Cs d d Cs
[ ]

{
( r +dr )2 D s

−r 2 D s
d C
dr
s
+
dr dr dr ( )
+ ( r 2 dr ) r s
dr

}
=4 π r 2 dr
d Cs
dt

Ds = Difusividad del sustrato en una matriz de inmovilización.


( 1.10 )

Equilibrio del caparazón para un sustrato de una enzima inmovilizada

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Para una condición de estado estacionario, el cambio de concentración de sustrato,


dCs / dt, es igual a cero. Después de abrir los soportes y simplificar eliminando todos
los términos que contengan dr obtenemos la ecuación diferencial de segundo orden:

d2 Cs 2 d Cs
Ds (dr
2
+
r dr )
+r s=0 ( 1.11 )

Esta ecuación se puede resolver sustituyendo rs por una expresión adecuada.

Resolviendo la ecuación primeramente para los casos simples o de orden cero y las
reacciones de primer orden para la ecuación de Michaelis-Menten.

Cinética de Orden Cero: suponiendo que la tasa de sustrato el consumo es ctte.:

r s=0−k 0 Sí C s >0
(1.12)
r s=0

Ésta es una buena aproximación cuando k m < Cs para la cinética de Michaelis-


Menten, en cuyo caso k0 = rmáx.

Sustituyendo la ec. (1.12) en (1.11):

d2Cs 2 d Cs k 0
+ − =0 Para Cs>0 ( 1.13 )
dr 2 r dr D s

Las condiciones de contorno para la solución de la anterior ecuación son:

d Cs
→ 0 como r ⟶ Rc
dr
(1.14)
C s=C Sb como r=R

La ec. (1.13) se convierte:

d2 α k0 (
= r 1.15 )
dr 2 D s
Integrando dos veces con respecto r:

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1 k0 3
α= r + C1 r +C2 ( 1.16 )
6 Ds

Por lo tanto:

1 k0 2 C2
C s= r + C1 + ( 1.17 )
6 Ds r

Aplicando las condiciones de contorno (Ec. 1.14) sobre la ecuación 1.17


3
1 k 0 2 1 k 0 RC
C 1=C Sb− R− (1.18 )
6 Ds 3 Ds R

1 k0 3
C 2= R ( 1.19 )
3 Ds

Entonces la solución de la ecuación (1.13) es:


Cs k0
= ( r 2 −R 2 )−2 RC 3 1 − 1 +1 ( 1.20 )
[ ( )]
C Sb 6 C Sb D s R r

Ecuación válida sí Cs>0. El radio crítico, por debajo del cual Cs es cero, se puede
obtener resolviendo:

1 1 6C D
( R C 2−R2 )−2 RC3 ( −
R Rc )
+ Sb s =0 ( 1.21 )
k0

La velocidad de reacción real según el modelo de distribución con orden cero


es (4/3)  (R3- Rc3) k0 y la tasa sin la difusión la limitación es (4/3) R3k0. Por tanto, el
factor de eficacia, la relación de la velocidad de reacción real a la velocidad si no se
ralentiza por difusión, es

(1.22)

Cinética de primer orden: Si la tasa de consumo de sustrato es de primer orden la


reacción con respecto a la concentración del sustrato

(1.23)

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Sustituyendo la ecuación. (1.23) en la ecuación. (1.11) y convertirlo a forma


adimensional, obtenemos:

(1.24)

(1.25)

y Փ se conoce como módulo de Thiele, que es una medida de la reacción tasa


relativa a la tasa de difusión. Ec. (1.24) junto con las condiciones de borde:

(1.26)

determina la función C's (r ')


Para convertir la ecuación. (1. 24) a un formulario que se pueda resolver fácilmente,
establecemos ex = f Xs, de modo que la ecuación diferencial se convierte en

(1.27)

Ahora, la solución general de esta ecuación diferencial es:

(1.28)
(1.29)

Dado que X debe estar acotada cuando f se aproxima a cero de acuerdo con la


primera condición de contorno, debemos elegir C 1 = o. La segundo condición de
frontera requiere que C2 = 1 / sinh3ŕ, dejando

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(1.30)

que muestra cómo cambia la concentración de sustrato en función de la distancia


radial en una enzima inmovilizada.

La figura 3.4 muestra el perfil de concentración de sustrato con respecto a la


distancia radial predicha por la Ec. (1,30). Por un valor bajo de Módulo de Thiele (l /
J ~ 1), la velocidad de la reacción enzimática es lenta en comparación con la tasa de
difusión

Figura 3.4
El perfil de concentración de sustrato con respecto al radial distancia predicha por:
cinética de primer orden (líneas continuas) y Cinética de Michaelis-Menten con f3 = 5
(líneas discontinuas) para diferentes valores del módulo de Thiele (t / J)

Por lo tanto, el sustrato se difunde en el núcleo de la partícula, que da como


resultado una distribución de concentración bastante plana en toda la ubicación
radial de una partícula. Por otro lado, para valores más altos del módulo (l / J ~ 5), la
velocidad de reacción es más rápida que la velocidad de difusión, por lo que la mayor
parte del sustrato se consume cerca de la superficie de la partícula. Cuando l / J = 5,
la concentración de sustrato en t ~ 0.6 es casi cero.

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La velocidad de reacción real con la limitación de difusión sería igual a la tasa de


transferencia de masa en la superficie de un inmovilizado enzima, mientras que la
velocidad si no se ralentiza por la difusión de los poros es KCSb y por lo tanto:

(1.31)

Donde Ap y Vp son el área de superficie y el volumen de una inmovilizada partícula de


enzima, respectivamente. Por lo tanto, diferenciando la ecuación. (1,30) con respecto
a t y sustituyendo la ecuación resultante en la Ec. (1.31) cederá

(1.32)

La figura 3.5 muestra cómo el módulo de Thiele afecta la efectividad factor para
partículas esféricas inmovilizadas. Cuando l / J ~ 0.1, el factor de efectividad es casi
igual a uno, que es el caso cuando el
la velocidad de reacción no se ralentiza por la difusión. En el otro Por otro lado,
cuando (jJ ~ 0.1, el factor de efectividad es inversamente proporcional al módulo de
Thiele

Figura 3.5

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Efecto del módulo de Thiele sobre el factor de efectividad para esféricas partículas
inmovilizadas para cinética de primer orden y Michaelis-Menten cinética con f3 = 5. El
módulo de Thiele para cinéticas de primer orden es (R / 3) Jk / Ds y para cinética de
Michaelis-Menten (R / 3) Jr max / Ds Km

Cinética de Michaelis-Menten:
Si la tasa de consumo de sustrato puede expresarse mediante la ecuación de
Michaelis-Menten,
(1.33)

Sustituyendo la ecuación. (1.33) en la ecuación. (1.11) y cambiarlo a forma


adimensional, obtenemos:

(1.34)

dónde β es Csb/Km y el módulo de Thiele (Փ) se define ligeramente diferente de la


cinética de primer orden como:

(1.35)

Ec. (1.34) no se puede resolver analíticamente porque es una no lineal ecuación


diferencial. Puede ser resuelto por varios números Técnicas Nuevamente lenguaje
avanzado de simulación continua (ACSL, 1975) se puede utilizar para resolver el
problema. Dado que Ec. (3. 34) es una ecuación diferencial de segundo orden, debe
cambiarse a dos ecuaciones diferenciales simultáneas de primer orden para ser
resueltas por ACSL como:

(1.36)

(1.37)

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Las condiciones de contorno para las ecuaciones anteriores son:

(1.38)

Uno de los algoritmos más simples para resolver un problema de valor límite es el
"método de disparo". En este método, asumimos valores iniciales necesario para
convertir un problema de valor límite en un valor inicial problema. Repetimos este
proceso hasta la solución del valor inicial. El problema satisface las condiciones de
contorno. Por lo tanto, una inicial adecuada. Las condiciones para la solución del
problema anterior son:

(1.39)

Donde tenemos que adivinar los valores de R c y Xso. Al adivinar los valores de Rc y
Xso, podemos pensar en dos casos diferentes:

 Cuando Rc = 0 asumir el valor de Xso a r= 0. Este es el caso cuando la


velocidad de la reacción enzimática es lenta en comparación con la de
transferencia de masa que está representada por el bajo valor de pi. Como
resultado, el sustrato alcanza el centro de la esfera.
 Cuando Rc > 0, Xso es igual a cero en r= Rc /R. Por lo tanto, asuma El valor de
Rc. Este es el caso cuando la velocidad de reacción enzimática es rápida en
comparación con la transferencia de masa que se representa por el alto valor
de Փ Como resultado, el sustrato se consume antes de que alcance el centro
de la esfera.

La tabla 3.1 muestra el programa ACSL para la solución de la ecuación. (3. 34)
cuando Փ =2 y β = 5. Este es el caso cuando Rc=o. Por tanto, inicialmente se supone
que la concentración de sustrato es cero y se verifica ese X s = 1 y r=1 después de

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resolver el problema del valor inicial. Si no es, se estima un nuevo valor de Xs


usando la ecuación:

(1.40)

Primera solución:

Función derivada

Adivinar valores para r inicial y X cerca de R = Rc

adivinar

sol 1: Rkadap (adivinar r0, R1, N,D)

Resuelto usando método Runge - Kutta adaptive


La solución:
1ra columna: r
2da columna: X
3ra columna: dX / dt = Y

Segunda solución:

adivinar

sol 2: Rkadap (adivinar r0, r1, N, D)

Solución de la ecuación. (3.34) de MathCad.

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Difusividades efectivas en geles biológicos


El análisis de la resistencia a la transferencia de masa entre partículas requiere
conocimiento de la difusividad efectiva D s de un sustrato en un matriz inmovilizada,
como agarosa, agar o gelatina. Los geles son porosos materiales semisólidos, que
se componen de macromoléculas y agua. La estructura del gel aumenta la longitud
del camino para la difusión y, a medida que un resultado disminuye la tasa de
difusión.

Hay varias técnicas disponibles para determinar la eficacia difusividad de soluto en


gel (Itamunoala, 1988). Uno de los más técnicas confiables es el método de disco
delgado que utiliza una celda de difusión con dos compartimentos divididos por un
gel fino. Cada compartimento contiene una solución bien agitada con diferentes
concentraciones de soluto. La difusividad efectiva se puede calcular a partir del flujo
de masa frente al tiempo medición (Hannoun y Stephanopoulos, 1986). Algunos
típicos valores de las difusividades efectivas se enumeran en la Tabla 3.2

Tabla 3.2 Difusividades efectivas típicas de solutos en Geles Biológicos en Solución Acuosa

Ejemplo 3.1
Cuando la velocidad de difusión es muy lenta en relación con la velocidad de
reacción, todo el sustrato se consumirá en la capa fina cerca del exterior superficie
de la partícula esférica. Deriva la ecuación para eficacia de una enzima inmovilizada
para esta difusión limitada caso empleando los mismos supuestos que para el

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distribuido modelo. La tasa de consumo de sustrato se puede expresar por Ecuación


de Michaelis-Menten.

Solución:

Dado que todo el sustrato se consume en la capa delgada, podemos suponer que la
capa tiene una geometría plana. Considere un volumen de control definido por el
elemento en r con espesor dr, como se muestra en la Figura 3.7.

El balance de material para el volumen de control en estado estacionario da

(1.42)

Fig. 3.7 Balance de caparazón para la enzima inmovilizada limitada por difusión

Después de reemplazar rs con la ecuación de Michaelis-Menten en Ec. (1,42), es se


puede simplificar a:

(1.43)

que se puede resolver numéricamente para obtener una ecuación para el perfil de
concentración de sustrato. Sin embargo, en este problema no necesita resolver esta
ecuación. Lo que necesitamos saber para derivar una fórmula de la ecuación es
dCs / dr en r = R porque

(1.44)

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ec. (1.43) es lo mismo que

(1.45)

Por tanto, al integrar ec. (1.45) obtenemos

(1.46)

Sustituyendo la ecuación. (1.46) en la


ecuación. (1.44) y simplificando los resultados en

(1.47)

BIBLIOGRAFIA. –
Dutta, R., 2008. Inmovilizacion de Enzimas. En: Fundamentos de Ingenieria
Bioquimica. India: Springer is a part ofSpringer Science+Business Media
springer.com, pp. 53-62.

Gómez, E., 2010. es.calameo.com. [En línea]


Available at: https://es.calameo.com/read/003427279dd6f1f828b7f
[Último acceso: 23 Agosto 2020].11:29 am

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