L6 Microscopio GRUPO5

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA 1
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA Y TEXTIL

BIOSEGURIDAD/ESTERILIZACIÓN
Microscopio
Microscope
Cano Diaz, Joel
Reyes Silva, David
Vargas Reyes, Demi
Facultad de Ingeniería Química y Textil, Universidad Nacional de Ingeniería
PI721A: Laboratorio de Bioquímica y Microbiología
Dra. Jessica I. Nieto y MSc. Janet Rojas
10 de Noviembre, 2021
Índice
Objetivos 3
Fundamento teórico 3
Parte experimental 6
Materiales, equipos y reactivos 6
Procedimiento experimental 8
Discusión de resultados 13
Conclusiones 15
Cuestionario 15
Referencias Bibliográficas 18
Objetivos
Conocer las partes, los cuidados necesarios y el correcto manejo del microscopio,
además de la observación microscópica a algunas muestras biológicas in vivo e in vitro
posterior a su preparación.
Fundamento teórico
Un microscopio es un aparato o mecanismo que nos permite obtener una mejor visión
de los elementos u objetos de menor tamaño, como resultado tenemos una imagen aumentada
de los mismos. Caracterizado por aumentar la imagen hasta el nivel de la retina para así poder
captar mucho mejor la información.
Esta herramienta está compuesta por unos lentes que se encargan de ampliar las imágenes
pequeñas que se están enfocando y que a simple vista por el ojo humano no se puede apreciar.
Se clasifican en:
1. Microscopio óptico, su fuente de iluminación es la luz.
a. Simple: Solo tiene una lente, habitualmente utilizado por estudiantes o
aficionados a la microscopía, no es cómo cuando se analizan muestras durante
horas.
b. Compuesto: Se utilizan dos o más lentes para obtener la imagen aumentada, es
de tipo elemental comprende:
i. Microscopio de campo luminoso; es el más utilizado para microscopía
de rutina, la luz pasa directamente sobre la muestra viéndose la
muestra oscura y el campo se ve claro.
ii. Microscopio de campo oscuro; similar al anterior pero la luz no pasa
directamente sobre la muestra sino oblicuamente, se ve la muestra
brillantemente iluminada sobre un campo o fondo oscuro.
iii. Microscopio de fluorescencia; compuesto por una fuente de luz UV y
varios filtros, usado para examinar muestras teñidas con colorantes
fluorescentes, permite identificar de manera rápida algunos
microorganismos.
iv. Microscopio de contraste de fases; se observa la muestra con diferentes
grados de brillo y oscuridad, permite observar células sin colorear y
resulta especialmente útil para células vivas.
2. Microscopio electrónico, usa electrones en lugar de fotones o luz visible.

a. De barrido (SEM): Utiliza una haz de electrones en lugar de una haz de luz
para formar una imagen ampliada de la superficie de un objeto, permite la
observación y caracterización superficial de sólidos inorgánicos y orgánicos.
b. De transmisión (TEM): Es una técnica usada para estudiar la estructura de
pequeñas moléculas como las proteínas o los virus, así como otras partículas
en ciencia material.
Generalmente, se utiliza tres tipos de objetivos diferentes:
1. Bajo aumento (10x), usado para una inspección general.
2. Alto aumento (40x), usado para estudiar microorganismos como parásitos y hongos.
3. De inmersión en aceite (100x), usado para observar bacterias, levaduras y detalles
morfológicos de los organismos mayores.
Parte experimental
Materiales, equipos y reactivos
Tabla 1.
Materiales y equipos utilizados.
Materiales y Equipos
Portaobjetos Papel absorbente
Cubreobjetos Cerillos de fósforo
Asa de siembra Cuchillo

2 lunas de reloj Tijera
1 pipeta pasteur de goma Pincel
1 jeringa esteril Piseta
Pinzas microscopio compuesto

Tabla 2.
Reactivos.
Reactivos
Azul de metileno Lugol
Tabla 3.
Muestras para analizar.
Muestras
Yogurt Elodea
Cebolla Mucosa bucal
Pan
Procedimiento experimental
Inicialmente, se limpia el portaobjeto y cubreobjeto con algodón impregnado de
alcohol, luego se etiqueta en la parte del borde y atrás del portaobjeto, y finalmente, se
colocan las muestras.
Yogurt
Con ayuda de una pipeta Pasteur, se coloca una gota de la muestra en el centro de un
portaobjeto limpio y se cubre con un cubreobjeto, evitando que se forman burbujas de
aire.
Pan
En el centro de un portaobjeto, se coloca una gota de agua destilada con la ayuda
de la pipeta Pasteur, luego se toma con el asa de siembra, en forma de ángulo recto y
en condiciones asépticas, una pequeña porción del hongo y se suspende en la gota de
agua. El asa de siembra se debe calentar al rojo vivo sobre la flama del mechero antes
y después de la preparación de la muestra. Finalmente, se coloca el cubreobjeto sobre
la preparación.
Cebolla
Se corta por la mitad y se desprende con una pinza la epidermis, que es una tela
delgada y transparente. Se coloca una gota de agua en el centro de un portaobjeto y
sobre ella se extiende la epidermis evitando que se enrosquen. Luego, se cubre la

muestra con un cubreobjeto para su posterior análisis. En otro portaobjeto, se extiende
nuevamente la epidermis y se agrega una o dos gotas de reactivo de azul de metileno
hasta que la muestra esté totalmente cubierta. Se deja reaccionar por 5 minutos para
que la muestra se tiña y luego, con la ayuda de la pipeta Pasteur, se enjuaga con agua
destilada hasta que no suelte colorante para retirar el exceso de tinción. Finalmente, se
coloca una gota de agua sobre la piel de la cebolla, y se cubre con un cubreobjeto.
Elodea
Se remueve una hoja de la planta acuática con la yema de la mano y se coloca en la
parte central de un portaobjeto limpio, se agrega una gota de agua de su propio medio
y finalmente, se cubre con un cubreobjeto.

Mucosa bucal
Se coloca una gota de agua destilada en el centro de un portaobjeto con la ayuda de la
pipeta Pasteur, se raspa con un hisopo o palillo la mucosa interna de la mejilla de la
boca de un voluntario y se deposita el producto extraído en la gota de agua. Se realiza
una extensión uniforme con la ayuda de un palillo y, con la ayuda de una pinza, se
calienta suavemente el portaobjeto pasándolo por la llama del mechero hasta la
desecación de la extensión, de manera que queda fijada al portaobjeto.
Se coloca el portaobjeto sobre una luna de reloj y se adiciona gotas de azul de
metileno sobre la extensión. Luego de 5 minutos, se lava con chorros de agua
destilada hasta decoloración y se retira el exceso de agua con un papel absorbente,
dejando que empape con el agua sin arrastrar. Finalmente, se coloca el portaobjeto
con la muestra preparada en la platina del microscopio para su posterior análisis.
Limpieza, manejo y uso del microscopio

Inicialmente, se debe verificar que el microscopio presenta alguna irregularidad (mal
estado del cable, falta de objetivos, etc.) y si fuera el caso, se notifica al docente
encargado. Luego, se comprueba que las lentes del ocular y de los objetivos estén
limpios; de lo contrario, se limpia cuidadosamente con papel especial para óptica o un
bulbo inyector de aire, evitando tocar las lentes con los dedos y, finalmente, se limpia
la parte mecánica con un pincel de cerdas gruesas. Una vez limpio el microscopio,
este se conecta a la toma de corriente con el objetivo de menor aumento en posición
de empleo, se coloca la preparación de la muestra sobre la platina, se sujeta con las
pinzas y se enfoca de la siguiente manera:
Se acerca al máximo la lente del objetivo a la preparación de muestra, empleando para
ello el tornillo macrométrico, esta operación no se realiza mirando por el ocular, pues
se corre el riesgo de “clavar” el objetivo en la preparación con el consiguiente
destrozo de ambos. Luego, se gira el tornillo micrométrico observando por el ocular
hasta obtener un enfoque nítido de la imagen. Una vez enfocada la imagen, se pasa al
objetivo de mayor aumento, se sube ligeramente el condensador. La imagen debe estar
casi enfocada, se afina el foco con el tornillo micrométrico. Si la imagen no está ni
medianamente enfocada, es preferible volver a un enfoque con el objetivo de menor
aumento.
Empleo del objetivo de inmersión (100x)
Se gira el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste
y el objetivo de 40x, se coloca una gota de aceite de inmersión sobre el cubreobjetos;
si la muestra es un extendido fijado, se coloca la gota de aceite directamente sobre la
lámina. Se termina de girar el revólver hasta la posición del objeto de inmersión
(100x), asegurándose de que éste no toque la preparación y se enfoca cuidadosamente

con el tornillo micrométrico recordando que la distancia entre el objetivo y la
preparación es mínima. Una vez que se ha puesto el aceite de inmersión sobre la
preparación de la muestra, ya no puede volver a colocar los objetivos de menor y
mayor aumento (10x, 40x) sobre ese campo. Por lo tanto, si se desea enfocar otro
campo, se debe retirar el objetivo de inmersión girando el revólver hacia el objetivo
de menor aumento, seleccionando otro campo y empezando a enfocar desde este
último. Al finalizar la observación de la preparación, y antes de retirarla de la platina,
se debe colocar el objetivo de menor aumento. Nunca se debe retirar la preparación
con el objetivo de inmersión en posición de observación. Finalmente, se retira la
preparación y se limpia el objetivo de inmersión cuidadosamente con un papel
especial para óptica, se comprueba también que el objetivo de 40x está limpio.
Discusión de resultados
- ¿Qué forma tienen las células?
Por lo general se observa que las células no tienen una forma definida, por ejemplo
hay células que tienen formas similares a la de un rectángulo, como la cebolla. Si se
hablara del yogurt, éste posee cocos y bacilos los cuales difieren de ser casi
circunferenciales (cocos) y de forma de varilla (bacilos). Mientras que, en el caso de
la mucosa bucal no se logra distinguir una forma específica.
- ¿Qué partes de la célula alcanzan a distinguirse?
En todas las células se logra distinguir el citoplasma. En el caso del yogurt, cebolla,
mucosa bucal y trozo de pan con hongos, no se logra distinguir sus núcleos. En todos
los casos se logra ver también su pared celular.
- ¿Cómo están organizadas las células?
Para el caso de yogurt, trozo de pan con hongos y mucosa bucal, se logra ver que las
células no obedecen ninguna organización en específico, están dispersas. Pero, en el
caso de la elodea y cebolla, su organización obedece un patrón en específico, todas
juntas, similar a una pared de ladrillos, cada uno superpuesto a otro y juntos.
- ¿Cuál es la diferencia de las células observadas (en tamaño, forma, estructura,
etc.)?
Las diferencias con respecto al tamaño, forma y estructura ya se mencionaron en las
preguntas anteriores. Se puede mencionar, además que, sólo en el caso de la elodea y
cebolla, se observó una conformación multicelular. En el caso de la elodea, conforme

se agregaba sal, la estructura celular se reducía, mientras que con agua se expandía, lo
que indicaría que la elodea es capaz de absorber agua.
- ¿Qué pasa cuando se tiñe la muestra?, ¿mejora la imagen?, ¿para qué sirve?
Cuando se tiñe una muestra, se pueden apreciar mejor sus imágenes y percibir mejor
la estructura celular de estas, tal como se observa en el caso de la cebolla. La tinción
de las muestras sirve para mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio,
revelar su forma y tamaño y/o mostrar la presencia de estructuras internas y externas.
Conclusiones
- Es importante conocer las partes y el uso adecuado del microscopio para obtener la
mejor calidad en la imagen de una muestra.
- Se logró adquirir conocimientos con respecto al correcto uso del equipo de
microscopio.
Cuestionario
1) Describa el funcionamiento de un microscopio electrónico y una aplicación
práctica.
El microscopio electrónico funciona con un haz de electrones generados por un cañón
electrónico, acelerados por un alto voltaje y focalizados por medio de lentes
magnéticas que forman una imagen sobre una placa fotográfica. Estos tienen una
longitud de onda mucho más corta que la luz visible, por lo que se consigue una
resolución más alta en el rango de las estructuras atómicas. Por ejemplo el
Microscopio electrónico de barrido (REM) puede ser aplicado para el fotografiado de
muestras a alta resolución o análisis de composición química elemental.
2) ¿Qué es un objetivo de inmersión, de un ejemplo?
Es aquel objetivo que requiere que, entre la preparación o muestra y la lente frontal
del objetivo, se coloque una sustancia líquida, la cual puede ser agua, glicerina o un
aceite de inmersión. Por ejemplo, los objetivos de inmersión son utilizados en
aplicaciones donde se requiere un gran poder de aumento y alta resolución.
3) Explique, ¿por qué el número de aumentos de un microscopio óptico es limitado?
Debido a la difracción de la luz, los microscopios ópticos están limitados a un
aumento máximo de 1500x. En términos físicos esta limitación es una consecuencia
de la longitud de onda de la luz. Las combinaciones de objetivo y ocular que generen
un aumento superior a 1500x resultará en un aumento vacío, es decir, sin ganancia de
resolución y, por lo tanto, sin añadir detalles a la imagen.

Referencias Bibliográficas
Pérez, M. (19 de febrero de 2014). Microscopio. Concepto-Definición.
https://conceptodefinicion.de/microscopio/
El microscopio óptico. (n.d.). Mundo Microscopio.
https://www.mundomicroscopio.com/
Jeyashree, S. (26 de febrero de 2019). Preparación de la muestra en TEM.
News-Medical.net.
https://www.news-medical.net/life-sciences/Sample-Preparation-in-TEM-(Spanish).aspx
SEM. (n.d.). Pontificia Universidad Catolica de Valparaiso.
https://www.pucv.cl/uuaa/asistencia-tecnica-y-capacitacion-instituto-de-quimica/sem
INTRODUCCIÓN A LA MICROSCOPÍA Y CLASIFICACIÓN DE LAS PLANTAS.
(n.d). Aulavirtual.
https://aulavirtual.agro.unlp.edu.ar/pluginfile.php/60757/mod_folder/content/0/TP%201%20
MICROSCOPIA%20Y%20CLASIFICACION.pdf?forcedownload=1
Naik, A. (s.f.). Fundamentos del microscopio electrónico y su aplicación en la
investigación textil.

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Cano Diaz, Joel

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PI721A: Laboratorio de Bioquímica y Microbiología

Dra. Jessica I. Nieto y MSc. Janet Rojas

además de la observación microscópica a algunas muestras biológicas in vivo e in vitro

captar mucho mejor la información.

1. Microscopio óptico, su fuente de iluminación es la luz.

a. Simple: Solo tiene una lente, habitualmente utilizado por estudiantes o

aficionados a la microscopía, no es cómo cuando se analizan muestras durante

de tipo elemental comprende:

i. Microscopio de campo luminoso; es el más utilizado para microscopía

de rutina, la luz pasa directamente sobre la muestra viéndose la

muestra oscura y el campo se ve claro.

ii. Microscopio de campo oscuro; similar al anterior pero la luz no pasa

directamente sobre la muestra sino oblicuamente, se ve la muestra

brillantemente iluminada sobre un campo o fondo oscuro.

iii. Microscopio de fluorescencia; compuesto por una fuente de luz UV y

varios filtros, usado para examinar muestras teñidas con colorantes

fluorescentes, permite identificar de manera rápida algunos

iv. Microscopio de contraste de fases; se observa la muestra con diferentes

grados de brillo y oscuridad, permite observar células sin colorear y

resulta especialmente útil para células vivas.

2. Microscopio electrónico, usa electrones en lugar de fotones o luz visible.

para formar una imagen ampliada de la superficie de un objeto, permite la

observación y caracterización superficial de sólidos inorgánicos y orgánicos.

b. De transmisión (TEM): Es una técnica usada para estudiar la estructura de

Generalmente, se utiliza tres tipos de objetivos diferentes:

1. Bajo aumento (10x), usado para una inspección general.

morfológicos de los organismos mayores.

Materiales, equipos y reactivos

Materiales y equipos utilizados.

Portaobjetos Papel absorbente

Cubreobjetos Cerillos de fósforo

Asa de siembra Cuchillo

2 lunas de reloj Tijera

1 pipeta pasteur de goma Pincel

1 jeringa esteril Piseta

Pinzas microscopio compuesto

Azul de metileno Lugol

Muestras para analizar.

Cebolla Mucosa bucal

Inicialmente, se limpia el portaobjeto y cubreobjeto con algodón impregnado de

portaobjeto limpio y se cubre con un cubreobjeto, evitando que se forman burbujas de

En el centro de un portaobjeto, se coloca una gota de agua destilada con la ayuda

en condiciones asépticas, una pequeña porción del hongo y se suspende en la gota de

y después de la preparación de la muestra. Finalmente, se coloca el cubreobjeto sobre

delgada y transparente. Se coloca una gota de agua en el centro de un portaobjeto y

sobre ella se extiende la epidermis evitando que se enrosquen. Luego, se cubre la

nuevamente la epidermis y se agrega una o dos gotas de reactivo de azul de metileno

Se remueve una hoja de la planta acuática con la yema de la mano y se coloca en la

y finalmente, se cubre con un cubreobjeto.

Se coloca una gota de agua destilada en el centro de un portaobjeto con la ayuda de la

pipeta Pasteur, se raspa con un hisopo o palillo la mucosa interna de la mejilla de la

boca de un voluntario y se deposita el producto extraído en la gota de agua. Se realiza

calienta suavemente el portaobjeto pasándolo por la llama del mechero hasta la

desecación de la extensión, de manera que queda fijada al portaobjeto.

Se coloca el portaobjeto sobre una luna de reloj y se adiciona gotas de azul de

metileno sobre la extensión. Luego de 5 minutos, se lava con chorros de agua

destilada hasta decoloración y se retira el exceso de agua con un papel absorbente,