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La memoria espacial, y los niveles de BDNF en el

hipocampo, disminuyen en ratas adolescentes deprimidas


farmacológicamente con reserpina1

Paul Ruiz2 , Aldo Calliari3, Patricia Genovese4, Ricardo Pautassi5


Universidad de la República-Uruguay,2,3,4, Instituto de Investigación Médica M.
y M. Ferreyra-Argentina2,5

Los cuadros depresivos en humanos cursan con significativas alteraciones en la memoria


espacial. Este trabajo estudió esta función en un modelo animal de depresión. Ratas Wistar
(n=28), machos y hembras, fueron administradas con reserpina (0.0 o 1.0 mg/kg/cada 2 días
por cuatro días). Luego del tratamiento se evaluó la función motora a través de la prueba de
la barra y la respuesta de ansiedad a través de un laberinto elevado en cruz. Posteriormente,
los animales fueron entrenados durante una semana (en sesiones diarias de 5 minutos) en
un laberinto de múltiples T que indaga la memoria espacial. Luego se repitió la evaluación
en el laberinto elevado en cruz y los animales fueron sacrificados para disecar el hipocampo
y medir los niveles de BDNF a través de western blot. En la prueba de la barra los animales
tratados con reserpina tuvieron una respuesta motora con igual agarre, pero menor movi-
lidad, que los controles. En ambas tomas del laberinto elevado en cruz los animales tratados
con reserpina pasaron significativamente menos tiempo en los brazos abiertos y exhibieron
una latencia más elevada para entrar por primera vez en los brazos cerrados. Los animales
tratados con reserpina tardaron significativamente más tiempo en resolver el laberinto de
múltiples T que los controles, y cometieron más errores, efecto que estuvo asociado a niveles
menores de BDNF en el hipocampo. Estos resultados sugieren que la reserpina indujo una

1
La investigación que da origen a los resultados presentados en esta publicación recibió
fondos de la Agencia Nacional de Investigación e Innovación (ANII) bajo el código POS_
EXT_2014_1_105 877, y de la Comisión Sectorial de Investigación Científica de la Universidad
de la República (CSIC-UdelaR). Agradecemos a los estudiantes Mario Lopez y Lucas Maidana
(FVet-UdelaR) por la colaboración en la desgrabación de videos.
2
PhD en Psicología. Docente en Universidad de la República, Montevideo, Uruguay. Direc-
ción postal: Universidad de la República. Lasplaces 1550, C.P 11600, Montevideo, Uruguay.
Contacto: paulruiz@fvet.edu.uy. https://orcid.org/0000-0003-3180-9614
3
PhD en Fisiología. Docente Universidad de la República, Uruguay. Dirección postal:
Universidad de la República. Lasplaces 1550, C.P 11600, Montevideo, Uruguay. Contacto: aldo-
calliari@gmail.com. https://orcid.org/0000-0002-3581-347X
4
MSc. Docente Universidad de la República, Uruguay. Dirección postal: Universidad de la
República. Lasplaces 1550, C.P 11600, Montevideo, Uruguay. Contacto: patriciagenovese@
gmail.com. https://orcid.org/0000-0001-8876-2015
5
PhD en Biología. Docente Universidad Nacional de Córdoba, Argentina. Dirección postal:
Instituto de Investigación Médica Mercedes y Martín Ferreyra (INIMEC-CONICET),
Friuli 2434, Córdoba, C.P 5016, Argentina. Contacto: rpautassi@gmail.com. https://orcid.
org/0000-0003-1876-2321

https://doi.org/10.18800/psico.202101.002
Revista de Psicología, Vol. 39 (1), 2021, pp. 35-57 (ISSN 0254-9247)

depresión experimental, sin compromiso motor, que estuvo asociada a déficits en la adqui-
sición de información espacial.
Palabras clave: Memoria espacial, BDNF, ratas, reserpina.

Spatial memory, and hippocampal BDNF levels, decrease in adolescent reserpine


depressed rats.
Depression is associated with significant deficits in spatial memory. The present study
assessed spatial memory in an animal model of depression. Wistar rats (n=28), males and
females, were administered reserpine (0.0 or 1.0 mg/kg/every 2 days for 4 days). At termi-
nation of the treatment the rats were tested for motor function (bar test) and for anxiety
response (elevated plus maze). The animals were then trained for a week (daily sessions of 5
min) in a multiple T-maze, which assesses spatial memory. The elevated plus maze test was
then repeated and subsequently the animals were sacrificed and the hippocampus dissected
to measure BDNF levels through a Western blot. In the bar test, the reserpine-treated rats
exhibited similar grasping, yet reduced mobility, when compared to vehicle-treated peers.
Reserpine-treated rats exhibited, in both elevated plus maze tests and when compared to
control counterparts, significantly less time spent in the open arms, and significantly greater
latency to enter, for the first time, in the closed arms. They also spent significantly more
time to complete the multiple T-maze and made more performance errors than controls in
this test, a profile that was associated with lower levels of BDNF at the hippocampus. These
results suggest that reserpine induced a depression-like phenotype, without gross motor
alterations, which was associated with spatial memory deficits.
Keywords: Spatial memory, BDNF, rats, reserpine.

Memória espacial e níveis de BDNF no hipocampo diminuem em ratos adolescentes


deprimidos farmacologicamente com reserpina.
Depressão em humanos apresenta depressão alterações significativas na memória espacial.
Este trabalho estudou essa função em um modelo animal de depressão. Ratos Wistar (n =
28), machos e fêmeas, foram administrados com reserpina (0.0 ou 1.0 mg / kg / a cada 2 dias
por quatro dias). Após o tratamento, a função motora foi avaliada através do teste de bar e da
resposta de ansiedade através de um labirinto cruzado elevado. Posteriormente, os animais
foram treinados por uma semana (em sessões diárias de 5 minutos) em um labirinto multi-T
que investiga a memória espacial. Na avaliação foi repetida no labirinto elevado em cruz e
os animais foram sacrificados para dissecar o hipocampo e medir os níveis de BDNF através
de western blot. No teste de barra, os animais tratados com reserpina tiveram uma resposta
motora com a mesma aderência, mas menor mobilidade, que os controles. Em ambas as
entradas do labirinto elevado na cruz, os animais tratados com reserpina gastaram significa-
tivamente menos tempo nos braços abertos e exibiram uma maior latência para entrar nos
braços fechados pela primeira vez. Os animais tratados com reserpina levaram significativa-
mente mais tempo para resolver o labirinto multi-T do que os controles, e cometeram mais
erros, um efeito que foi associado com níveis mais baixos de BDNF no hipocampo. Esses
resultados sugerem que a reserpina induziu uma depressão experimental, sem comprometi-
mento motor, associada a déficits na aquisição de informações espaciais.
Palavras-chave: Memória espacial, BDNF, ratos, reserpina.

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La memoria espacial y los niveles de BDNF en el hipocampo / Ruiz et al.

Mémoire spatiale et niveaux de BDNF dans l’hippocampe, diminution chez les rats ado-
lescents déprimés pharmacologiquement avec la réserpine
Dépression chez l’homme présentent des altérations importantes de la mémoire spatiale.
Ce travail a étudié cette fonction dans un modèle animal de dépression. Des rats Wistar (n
= 28), mâles et femelles, ont été administrés avec de la réserpine (0.0 ou 1.0 mg / kg / tous
les 2 jours pendant quatre jours). Après le traitement, la fonction motrice a été évaluée par
le test des barres et la réponse anxieuse par un labyrinthe croisé surélevé. Par la suite, les ani-
maux ont été entraînés pendant une semaine (par sessions quotidiennes de 5 minutes) dans
un labyrinthe multi-T qui étudie la mémoire spatiale. Ensuite, l’évaluation a été répétée
dans le labyrinthe en croix et les animaux ont été sacrifiés pour disséquer l’hippocampe et
mesurer les taux de BDNF par Western blot. Lors du test des barres, les animaux traités
à la réserpine présentaient une réponse motrice avec la même adhérence, mais avec une
mobilité moindre, que les témoins. Dans les deux prises du labyrinthe surélevé dans la croix,
les animaux traités à la réserpine ont passé beaucoup moins de temps dans les bras ouverts
et ont montré une plus grande latence pour entrer dans les bras fermés pour la première
fois. Les animaux traités avec de la réserpine ont mis beaucoup plus de temps à résoudre
le labyrinthe multi-T que les témoins et ont commis plus d’erreurs, un effet associé à des
niveaux inférieurs de BDNF dans l’hippocampe. Ces résultats suggèrent que la réserpine a
induit une dépression expérimentale, sans compromis moteur, associée à des déficits dans
l’acquisition d’informations spatiales.
Mots clés: mémoire spatiale, BDNF, rat, réserpine.

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El estado anímico refleja el momento afectivo y emocional de un


individuo, siendo más duradero y menos específico que la respuesta a
una situación concreta. Cuando es anormalmente bajo se llama depre-
sión y cuando es anormalmente alto se llama manía, existiendo otros
posibles estados como la ciclotimia y la bipolaridad. Estos cuadros son
agrupados y llamados Trastornos de estado de ánimo (CIE-10-OMS)
siendo de particular interés dada la prevalencia en la población humana
y los inconvenientes que acarrea para la salud, el bienestar y el desa-
rrollo de los individuos. Dentro de estos trastornos la depresión es el de
mayor prevalencia, además de ser la enfermedad crónica que más com-
promete la salud (Moussavi et al., 2007). Los resultados sobre la carga
mundial de las enfermedades (Global Burden of Disease) efectuado por
la Organización Mundial de la Salud demostraron que la depresión
unipolar es la principal causa de años de vida perdidos por discapacidad
(Gómez-Restrepo et al., 2004).
Diferentes funciones cognitivas (e.g. atención, memoria, funciones
ejecutivas y toma de decisiones; Chamberlain & Sahakian, 2004, 2006;
Goodale, 2007) estan alteradas en humanos afectados por dichos tras-
tornos, y también en modelos preclínicos. Los modelos animales de
depresión no recrean todo el espectro de la patología y han recibido
críticas relevantes (Leite & Perez-Acosta, 2001), pero son utiles para
poder determinar etiopatogenia (Escorihuela, Fernandez-Terual, 1998;
Overmier, 2007; Laborda, 2009), así como consecuencias y even-
tuales tratamientos (Deussing, 2006; Healy, 1987; Nestler & Hyman,
2010). Específicamente hablando de la memoria, y dentro de ella de la
memoria espacial, numerosos reportes muestran que en humanos y ani-
males deprimidos esta función se encuentra alterada, e incluso sugieren
que memoria espacial y estado de ánimo compartirían el mismo sus-
trato neurobiológico (Held et al., 2007; Sun & Alkon, 2005).
En lo que respecta a la neurobiología de estos trastornos, uno de
los aspectos que se ha estudiado más es qué tipos de n ­ eurotransmisores

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La memoria espacial y los niveles de BDNF en el hipocampo / Ruiz et al.

se encuentran alterados. La dopamina se ha visto implicada en la


depresión y en la manía, viéndose disminuída en la primera y aumen-
tada en la segunda (Diehl & Gershon, 1992; Ruiz, Calliari, Genovese
et al., 2018). Junto con la teoría dopaminérgica sobre la etiología de
los trastornos de estado de ánimo, se ha también involucrado al factor
neurotrópico derivado del cerebro (BDNF, por sus siglas en inglés).
La variación de dicho factor podría tener un papel relevante en el desa-
rrollo de estos trastornos, viéndose alterado en estructuras como el
hipocampo, responsable del almacenamiento de información y apren-
dizaje (Armas et al., 2010; Duncan et al., 2009; Frey et al., 2006; Jiang
et al., 2005).
La depresión se puede modelar en animales de laboratorio
de varias formas, a través de la inducción de estrés crónico, físico o
social (Krishnan & Nestler, 2011), empleando de cepas de roedores
criadas selectivamente por expresar o no rasgos asociados a la depresión
(Overstreet et al., 2007), o mediante la administración de fármacos que
disminuyen los niveles de monoaminas en el sistema nervioso central,
como la reserpina (RES; Czeh et al., 2016; Ikram & Haleem, 2017;
Khadrawy et al. , 2017; Ruiz, Genovese et al., 2018). Esta droga ha
demostrado ser útil para generar comportamientos depresivo en ratas
reproduciendo muchas de las variables conductuales y neuroendócrinas
vistas en humanos deprimidos. Por ejemplo, en nuestro laboratorio
hemos recientemente observado que ratas tratadas crónicamente con
RES expresaban actividad reducida en la prueba de campo abierto,
menor actividad motora y respuesta ansiogénica en el laberinto ele-
vado en cruz y la caja de luz/oscuridad, menor consumo de solución
azucarada, niveles de dopamina insular disminuidos, así como mayor
consumo de alcohol que ratas tratadas con vehículo (Ruiz et al., 2017;
Ruiz, Genovese et al., 2018).
El objetivo de este trabajo fue estudiar como se ve afectada la
memoria espacial en un modelo farmacológico de depresión a través
de la administración de RES. y analizar si este modelo animal repro-
duce lo visto en humanos con este trastorno. Para esto tratamos un
grupo de ratas, hembras y macho, con reserpina y estudiamos como

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Revista de Psicología, Vol. 39 (1), 2021, pp. 35-57 (ISSN 0254-9247)

afecta la actividad motora, la respuesta ansiosa, la memoria espacial y


los niveles de BDNF en el hipocampo.
El tratamiento y las evaluaciones se realizaron en el período 30-40
días postnatales, el cual representa el periodo de la adolescencia en la
rata (Spear, 2000), momento de importante flexibilidad neurocognitiva
(Hauser et al., 2015). La importancia de estudiar la depresión durante
la adolescencia es que, de manera similar a los trastornos de ansiedad,
esta patología usualmente surge durante la adolescencia (McGorry
et al., 2011). En el presente trabajo, asimismo, emplearemos hembras
y macho con el objetivo de describir potenciales dimorfismos sexuales
en los fenómenos bajo análisis. Las mujeres son más propensas a ser
diagnosticadas con depresión, particularmente luego del inicio de la
pubertad (Rocha et al., 2013).

Método

Diseño experimental y procedimientos


Se empleó un diseño factorial 2 (tratamiento farmacológico: RES,
vehículo) x 2 (sexo: macho, hembra), con 7 sujetos en cada uno de
los 4 grupos. La Figura 1 presenta un esquema del procedimiento
experimental empleado. Más en detalle, el procedimiento implicó la
administración de RES (1.0 mg/kg/cada 48 horas, IP, por un total de
4 administraciones) o vehículo (VEH) durante los días postnatales
(DP) 30 a 36. Luego del tratamiento se evaluó la función actividad
motora a través de la prueba de la barra (DP 37) y, 24 horas más tarde,
la respuesta de ansiedad mediante el laberinto elevado en cruz. Poste-
riormente, los animales fueron entrenados durante 7 días (en sesiones
diarias de 5 minutos, DPs 39 a 45) en un laberinto de múltiples T.
La evaluación en el laberinto elevado en cruz fue repetida el DP 46 y el
DP 47 los animales fueron sacrificados y se disecó el hipocampo para
medir los niveles de BDNF a través de western blot.

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La memoria espacial y los niveles de BDNF en el hipocampo / Ruiz et al.

Figura 1. Secuencia temporal de procedimientos experimentales realizados


para la evaluación del modelo de depresión inducido por la administración
de reserpina, desde el día postnatal (DP) 30, donde se inició el experimento,
al día postnatal 47 donde los animales fueron sacrificados. La dosis
administrada fue de 0.0 o 1.0 mg/k de reserpina, en los DPs 30, 32, 34, y
36. Posteriormente los animales fueron evaluados en la prueba de la barra,
en el laberinto elevado en cruz (en dos ocasiones) y en el laberinto de
múltiples T.

Animales
Se empleó un total de 28 ratas Wistar adolescentes (14 machos, 14
hembras), criadas en la Unidad de Reactivos Biológicos de la Facultad
de Medicina de la Universidad de la República (URBE-Fmed-UdelaR).
Se hospedaron en cajas separadas por sexo en un cuarto con tempe-
ratura, humedad y luz controlada (12 horas luz, 21±1 °C, 80%).
La reserpina (Sigma-Aldrich, USA) fue vehiculizada en solución fisio-
lógica y administrada de manera intraperitoneal a un volumen de
0.01 ml por gramo de peso corporal (0,01 ml/g) (Ruiz et al., 2017).
El protocolo experimental fue aprobado por la Comisión de Ética en
Uso de Animales de la Facultad de Veterinaria de UdelaR [(CEUA-
FVet-UdelaR) Exp n°111130-000658-13].

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Pruebas de comportamiento aplicadas


Prueba de la barra
La prueba fue aplicada el DP 37 con el objetivo de estudiar como
RES afectaba la actividad motora. Se empleó una barra de madera de
2.5 cm de diámetro a 70 cm del piso. Los animales se colocaron sobre la
barra durante 1 minuto y fueron evaluados por dos personas entrenadas,
con la siguiente escala (adaptado de Rosso et al., 2010); (1) movilidad
normal y buen agarre; (2) reducida movilidad y buen agarre; (3) reducida
movilidad y agarre medio; (4) ninguna movilidad y el agarre débil; (5)
alteración de pie, sin agarre. Las sesiones se realizaron en la tarde, en una
habitación iluminada con luz artificial blanca y aislada acústicamente.

Laberinto elevado en cruz (LEC)


El propósito fue confirmar la acción depresiva de la reserpina a
nivel comportamental. El test de LEC es ampliamente usado para medir
respuesta ansiosa (tiempo en brazos) y motora (entradas a brazos), la
cual está asociada a la patología depresiva.
El aparato era una plataforma en forma de cruz, elevada a 50 cm del
suelo, con dos brazos abiertos de 50x10 cm y dos cerrados de 50x10 con
paredes de 40 cm de altura y descubierta en la parte superior. En cada
sesión los animales se pusieron de manera individual en el centro del
laberinto, enfrentando un brazo abierto. Los animales se retiraron del
laberinto después de 5 minutos de exploración libre, limpiándose el
laberinto entre animales. Las sesiones se realizaron en la tarde en una
habitación iluminada con luz artificial blanca y aislada acústicamente.
Las pruebas se grabaron por medio de una cámara de video ubicada en
el techo de la habitación. Posteriormente, los archivos de video fueron
evaluados, registrándose los siguientes patrones comportamentales: a)
Frecuencia de entradas a brazos abiertos y cerrados; b) tiempo en cada
uno de los brazos y en el centro; c) latencia para ingresar a brazos cerrados.
El laberinto fue aplicado dos veces con el objetivo de evaluar la con-
tinuidad del efecto de la reserpina a través de los días teniendo en cuenta
el efecto de habituación a la prueba (Carobrez & Bertoglio, 2005).

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La memoria espacial y los niveles de BDNF en el hipocampo / Ruiz et al.

Laberinto en múltiple T
Con el objetivo de investigar memoria espacial se aplicó un entre-
namiento y posterior evaluación en un laberinto en múltiple T. Este es
un test que desafía las habilidades de navegación y memoria espacial,
consta de tres pasajes en forma de T unidas por un extremo, quedando
un brazo como callejón y otro abierto donde el animal puede pasar a
la próxima T para salir del laberinto. La caja meta del laberinto esta
equipada con comida (100 g aproximadamente. Los animales fueron
expuestos a 16 horas de ayuno de comida antes de cada sesión para
motivar la perfomance, luego de cada sesión fueron dejados en cajas
con comida ad libitum hasta el inicio del ayuno registrándose el peso.
Cada sesión duró 5 minutos, se realizó una vez por día durante siete
días (DPs 39 al 45) en la tarde y comenzó con la introducción del
animal en la primera de las T. La prueba se filmó y luego se registraron
el número de errores de ejecución (i.e., cuando el animal se equivoca de
brazo, asumiendo como correcto el camino más directo hacia la salida,
o retrocede sobre sus pasos y vuelve a un brazo ya visitado) y el tiempo
de ejecución (i.e., se considera que un ensayo ha finalizado cuando
el animal tiene contacto con la comida) (Voicu & Schmajuk, 2002).
El laberinto fue limpiado luego del pasaje de cada animal.

Análisis molecular por western blot


El factor neurotrófico BDNF se midió en el hipocampo de 12
ratas seleccionadas aleatoriamente, en igual proporción de tratamientos
y sexos, a través de western blot a partir de geles de poliacrilamida.
Los animales fueron decapitados y se obtuvo los encéfalos posnecropsia
para aislar el hipocampo. Este se homogeneizó y sus muestras fueron
corridas en geles de poliacrilamida. Todas las electroforesis (SDS-
PAGE) fueron realizadas en minigeles de acrilamida-bis acrilamida y
transferidos eléctricamente a un soporte de nitrocelulosa (0.22µm, Bio-
Rad) por medio de la aplicación de 300 mA durante 75 minutos en
un medio conteniendo Tris-KCl 25 mM, glicina 192mM y metanol
10%v/v (Towbin et al., 1979). Las membranas fueron ­incubadas con

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anticuerpo anti-BDNF (Santa Cruz Biotechnology), el sistema de


detección utilizado fue de quimioluminiscencia para ser registrado
sobre placas radiográficas. Las bandas de expresión obtenidas fueron
cuantificadas por densitometría con el programa ImageJ (NIH).

Análisis de datos
Para el análisis de datos se usó el software Statistica 8.0®. En una
primera instancia se realizaron ANOVA factoriales considerando como
factores independientes, entre grupos, a Sexo y Tratamiento. Estos
ANOVA indicaron la ausencia de efectos significativos de Sexo o de
interacciones significativas Sexo x Tratamiento. Así entonces, los datos
fueron colapsados por sexo, y las variables registradas en el laberinto
elevado en cruz y en la densitometría de bandas del western blot fueron
analizadas de forma independiente mediante prueba t de Student.
Los datos obtenidos en las las 7 sesiones del laberinto en múltiple T
se analizaron mediante ANOVA de medidas repetidas (factor entre
grupos: Tratamiento; factor de medidas repetidas: sesión). Los efectos
significativos principales y las interacciones significativas fueron explo-
radas mediante la prueba post hoc de Fisher. Las variables categóricas
registradas en la prueba de la barra fueron analizadas mediante X2.
El alfa fue de 0.05 y los resultados se expresan como media ± SEM.

Resultados

Prueba de la barra y peso.


Las calificaciones observadas fueron la categoría 1 (movilidad
normal y buen agarre) y la 2 (reducida movilidad y buen agarre), no
obteniéndose ningún registro de las otras categorías. Se realizó un aná-
lisis de proporciones mediante X2 para determinar si los grupos, tratados
y no tratados diferían significativamente en la asignación de estas catego-
rías. Los tratados con reserpina tuvieron más valores 2 (93%), mientras
los controles tuvieron significativamente más valores 1 (64%) y la aso-
ciación entre valor y grupo fue significativa (X2=9.96, p<0.05) lo que

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La memoria espacial y los niveles de BDNF en el hipocampo / Ruiz et al.

evidencian un efecto de la reserpina en la movilidad, pero sin afectar el


agarre. Observaciones informales indicaron que ninguno de los animales
se cayó de la barra y que todos, los tratados con reserpina y los controles,
exhibían un equilibrio adecuado. Estos resultados son coherentes con
trabajos previos donde la actividad motora de animales tratados con
reserpina se vio disminuida en un campo abierto (Ruiz et al., 2017), y
en el laberinto elevado en cruz como se explica a continuación.
No se encontraron diferencias significativas en el peso de los
grupos, ni al finalizar el tratamiento ni en al momento del sacrificio; lo
que evidencia que la reserpina no afecto el desarrollo de los animales.

Tabla 1
Peso, prueba de la barra y laberinto elevando en cruz (LEC)

    Reserpina Control  
  M E.E M E.E t
  Peso al finalizar tratamiento 114.2 22.6 111.1 23.5 ns
Latencia para ingresar a brazos cerrados (segs) 24.6 22.4 6.5* 3.9 2.86*
Tiempo en brazos abiertos (segs) 4.6 9.5 28.1* 32.4 2.6*
Tiempo en brazos cerrados (segs) 260.4 28.9 254.3 21.1 ns
LEC toma 1
Tiempo en el centro (segs) 14.5 23.3 14.8 15.15 ns
Frecuencia de entradas en brazos cerrados 3.6 2.3 6.3* 3.1 2.63*
Frecuencia de entradas en brazos abiertos 0.5 0.7 2.1* 1.6 3.45*

Latencia para ingresar a brazos cerrados (segs) 7.7 5.9 3.0* 1.7 2.9*
Tiempo en brazos abiertos (segs) 50.5 26.7 57.6 26.7 ns
Tiempo en brazos cerrados (segs) 158.1 41 145.1 30.4 ns
LEC toma 2
Tiempo en el centro (segs) 69.6 29.3 86.4 32.5 ns
Frecuencia de entradas en brazos cerrados 7.2 2.7 9.1* 2.3 2.08*
Frecuencia de entradas en brazos abiertos 4.8 2.1 6.0 4.1 ns
  Peso al sacrificio 164.1 31.5 154.3 38.5 ns

*p<0.05
Nota: Medias y errores standard para pesos corporales y variables registradas en el laberinto
elevado en cruz (LEC) y en la prueba de la barra, en animales tratados con reserpina y controles.
Los datos se presentan colapsados por sexo (macho, hembra). Análisis preliminares indicaron la
ausencia de efectos significativos de sexo, o de interacciones significativas sexo x tratamiento, sobre
las variables registradas en el LEC y en la prueba de la barra.

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Laberinto elevado en cruz


En la primera toma los animales tratados con reserpina tardaron
significativamente más tiempo en entrar a los brazos cerrados, perma-
necieron significativamente menos tiempo en los brazos abiertos, y
exhibieron significativamente menos entradas a los brazos cerrados y
abiertos. Mientras que en la segunda toma se mantuvo la diferencia
entre grupos en la latencia para ingresar a los brazos cerrados, y en los
ingresos a los mismos brazos. La descripción de todas estas variables se
encuentra en la tabla 1.
Estos resultados evidencian una ralentización en la actividad
motora y una alteración en la respuesta a situaciones de riesgo, pro-
ducto de la administración de reserpina. Estos resultados mantienen
coherencia con los encontrados en trabajos previos en el campo abierto
y en la prueba de la caja de luz oscuridad (Ruiz et al., 2017).

Laberinto en múltiple T
Los ANOVA arrojaron efectos principales significativos de sesión
y de tratamiento, sobre el tiempo [F(6,138)=26.64, p<0.05 y F(1,23)=8.41,
p<0.05), respectivamente] y sobre los errores de ejecución [F(1, 15)=7.69,
p<0.05 y F(6, 138)=9.27, p<0.05, respectivamente]. Los análisis post-hoc
indicaron que la latencia y el tiempo de ejecución fueron bajando
progresiva y significativamente desde la primera a la tercera sesión,
para posteriormente elevarse significativamente en las sesiones 4 y
6, las cuales no difirieron entre sí (datos descriptivos no mostrados).
Más importante para los objetivos de nuestro trabajo, y como se grafica
en la Figura 2, las ratas tratadas con reserpina tardaron significativa-
mente más tiempo en resolver el laberinto [F(1, 25)=8.94, p<0.05] y
cometieron más errores [F(1, 25)=6.94, p<0.05] que los controles en el
promedio general de las sesiones.

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La memoria espacial y los niveles de BDNF en el hipocampo / Ruiz et al.

Figura 2. Tiempo (segundos) (A), y errores cometidos (B), para completar


el laberinto en múltiple T en animales tratados crónicamente con reserpina
(RES) y en controles tratados con vehículo.. Los animales dosificados con
reserpina exhibieron significativamente más tiempo y más errores para
completar la prueba, en comparación con el grupo control. Los signos “#”
denotan estas diferencias significativas. Los datos se presentan colapsados
por sexo (macho, hembra) y por sesión de entrenamiento. Análisis
preliminares indicaron la ausencia de efectos significativos de sexo, o de
interacciones significativas sexo x tratamiento, sobre las variables registradas
en el LEC y en la prueba de la barra. Por favor referirse al texto para un
detalle de los efectos significativos encontrados. Los valores expresan las
medias±error estándar del promedio entre las sesiones.

Niveles de BDNF en el hipocampo


El análisis de la densidad de las bandas (i.e, cociente BDNF/
actina) mostró una tendencia a la disminución del BDNF en animales
tratados con reserpina, la cual no alcanzo significancia estadística [t=-
1.76, p=0.1].

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Revista de Psicología, Vol. 39 (1), 2021, pp. 35-57 (ISSN 0254-9247)

Figura 3.. Datos recogidos mediante Western blot de hipocampos, en ratas


tratadas con reserpina o en controles tratados con vehículo (A). El análisis
de la densidad de las bandas (BDNF/actina ratio, panel B) mostró una
tendencia no significativa a la disminución del BDNF en animales tratados
con reserpina, sin verse diferencias entre sexos. Los datos se presentan
colapsados por sexo (macho, hembra). Análisis preliminares indicaron la
ausencia de efectos significativos de sexo, o de interacciones significativas
sexo x tratamiento. Los valores expresan las medias±error estándar del
BDNF/actina ratio (B).

Discusión

El resultado principal de este trabajo es que la inducción expe-


rimental de depresión en ratas adolescentes induce alteraciones en
el almacenamiento de la memoria espacial, que se correlaciona con
alteraciones no significativas del factor de crecimiento BDNF en hipo-
campo. La efectividad de RES para inducir depresión fue confirmada
mediante las mediciones realizadas en el LEC, las cuales indicaron que
las ratas tratadas con RES exhibían conductas indicativas de ansiedad

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La memoria espacial y los niveles de BDNF en el hipocampo / Ruiz et al.

(e.g. menos tiempo pasado en los brazos abiertos) y de depresión dada


la disminución de cruces entre brazos. Comparando las dos tomas del
LEC se observo que en la segunda no se ven diferencias significativas
entre grupos en las entradas y permanencia en los brazos cerrados, esto
se puede explicar por la disminución en el tiempo del efecto de RES
o por la habitación a la prueba como muestran otros estudios que ven
este efecto en las mismas variables que nosotros (Carobrez & Bertoglio,
2005).
La prueba de la barra, asimismo, indicó un enlentecimiento motor
sin compromiso de fuerza muscular. Basado en la literatura epidemio-
lógica, podía esperarse una exacerbación de estos efectos de RES, que
sugieren alteraciones emocionales o hedónicas compatibles con un
modelo de depresión experimental, en las hembras. Sin embargo, el
perfil de resultados fue similar en machos y en hembras. A continuación
discutiremos en detalle cada uno de estos resultados y sus implicancias.
El laberinto en múltiple T es una prueba clásica, análoga al Water
Morris Maze, para investigar la adquisición de memoria espacial en
roedores (Voicu & Schmajuk, 2002). La administración de RES altero
la perfomance en esta prueba, aumentando el tiempo para completarla
y, lo que es más importante, la cantidad de errores cometidos ante de
llegar a la meta, resultados análogos a los encontrados en humanos con
diagnóstico de depresión (Cunha et al., 2010; Erickson et al., 2012).
Podría sugerirse, como hipótesis alternativa, que el deterioro en
la memoria espacial de los animales tratados con RES obedece a pro-
blemas musculares o a una alteración en el desarrollo inducida por la
droga, en lugar de a un proceso depresivo (i.e., emocional o afectivo)
concomitante. Sin embargo, no se observaron diferencias de peso ni
diferencias en el agarre (i.e., en la prueba de la barra) que sugieran
alteraciones graves del desarrollo o de la masa o fuerza muscular. Tam-
poco se observaron problemas de coordinación: los animales tratados
con RES podían caminar en la barra, exhibiendo un equilibrio normal
(Deacon, 2013). Más bien, los resultados sugieren que RES generó
un enlentecimiento motor, probablemente resultado de alteraciones
hedónica-emocionales, característico de los estados depresivos. Este

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enlentecimiento motor es consistente con resultados previos en los que


se observó que ratas tratadas con RES exhibían menor distancia reco-
rrida en la prueba de campo abierto (Ruiz et al., 2017), y también
con los resultados obtenidos en el LEC, en el presente estudio. En este
último laberinto la reserpina indujo conductas indicativas de un estado
ansiogénico (menor tiempo pasado en brazos abiertos, en comparación
con controles) y también de elentecimiento motor (mayor latencia a
entrar por primera vez en los brazos cerrados).
Existe bibliografía que liga alteraciones en funciones cognitiva, y
particularmente en memoria espacial, con los niveles hipocampales de
BDNF. en el hipocampo (Egan et al., 2003). Esta última estructura esta
especializada en el almacenamiento de información espacial. La dismi-
nución de BDNF hipocampal esta asociada, tanto en humanos como
en animales, a déficits en el almacenamiento de la memoria espacial
(Erickson et al., 2012; Mizuno et al., 2000). A su vez, BDNF está
asociado con la neurogenesis en el hipocampo, y esta última se ha visto
alterada en la depresión y se ha convertido en un objetivo terapéutico
para los nuevos antidepresivos (Sahay & Hen, 2007). Los niveles de
monoaminas hipocampales también están asociados con la memoria
espacial y los antidepresivos que mejoran los niveles de BDNF y sero-
tonina hipocampales mejoran el almacenamiento de información
espacial (Kiss et al., 2012). Esta asociación entre monoaminas y BDNF
es coherente con resultados previos donde la reserpina bajaba los niveles
de dopamina en la corteza insular (Ruiz et al., 2017, 2018). Basados
en estos antecedentes, nuestra expectativa era que las alteraciones de
memoria espacial inducidas por RES se asociaran con una menor
expresión de BDNF hipocampal. Los resultados observados estuvieron
en esa dirección, pero las diferencias observadas estuvieron lejos de
ser estadísticamente significativas. Una posibilidad es que el diseño
experimental no haya sido lo suficientemente poderoso, en términos
de tamaño de muestra o administración de RES, para detectar efectos
significativos. Esto es ciertamente posible, sin embargo debe notarse
que los datos fueron colapsados por sexo, lo que aumentó la potencia
estadística de los análisis realizados.

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La memoria espacial y los niveles de BDNF en el hipocampo / Ruiz et al.

Por último, es importante resaltar que en las variables estudiadas


no se vio efecto del sexo. Existen trabajos que muestran que en humanos
las mujeres son más propensas a la depresión (Rocha et al., 2013), y que
en ensayos de navegación hombres y mujeres deprimidos tienen desem-
peños diferentes (Cornwell et al., 2010), además de haberse encontrado
una disminución del volumen hipocampal en mujeres con historial de
depresión (Sheline et al., 1999). En este trabajo no se encontraron dife-
rencias, viendo que para las variables estudiadas RES no tiene efecto
diferencial por sexos.
Los resultados obtenidos deben considerarse en el marco de
importantes limitaciones. Solamente empleamos una dosis de RES, lo
que limita la generalidad de los resultados obtenidos. Empleamos, asi-
mismo, un diseño intrasujeto, en el cual los mismos animales fueron
evaluados en diferentes tests, lo que abre la posibilidad que al menos
parte de los resultados estén afectados por efectos interactivos entre
tests. Finalmente, la droga utilizada (RES) es relativamente pro-
miscua farmacológicamente, depletando los niveles centrales de todas
las monoaminas, como demostramos en Ruiz et al. (2017, 2018).
Los estudios futuros deberían emplear drogas que afecten de manera
específica uno u otro sistema de neurotransmisión, como es el caso de
DL-P-chlorophenylalanina (PCPA), un inhibidor selectivo de la sín-
tesis de serotonina (Vitalis et al., 2007).
Más allá de estas limitaciones, los resultados obtenidos muestran
similitudes entre los efectos de la reserpina en nuestro modelo animal
y las alteraciones cognitivas vistas en humanos deprimidos. El trata-
miento con reserpina generó consecuencias a nivel anímico (laberinto
elevado en cruz) y cognitivo (laberinto de múltiple T), tanto en machos
como en hembras, mostrando ser un modelo potencialmente útil para
investigar esta problemática que afecta a humanos y evaluar potenciales
tratamientos que inhiban esta condición.

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Revista de Psicología, Vol. 39 (1), 2021, pp. 35-57 (ISSN 0254-9247)

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Recibido: 29/05/2019
Revisado: 22/01/2020
Aceptado: 23/01/2020

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