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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS


LABORATORIO DE BIOQUIMICA I
INFORME #5
EFECTO [S] SOBRE LA VELOCIDAD DE LA REACCION
CATALIZADA SOBRE LA ENZIMA UREASA.

AUTORES:

 Franco Bravo Gustavo

 Reyes Sosa Yajaira

 Carriel Angie

 Ramon Sandy

GRUPO: G1-B

DOCENTE: Msc. Nilda Cedeño Albán

FECHA: 01/08/2017

CICLO:
2017-2018

1. Titulo

Efecto [s] sobre la velocidad de la reacción catalizada sobre la enzima ureasa.


2. Marco teórico

Ureasa

La ureasa, cuyo nombre sistemático es amidohidrolasa de urea, tiene un peso


molecular de 483 000 Dalton. La ureasa consta de 6 subunidades estructurales
iguales. Es una enzima muy específica, que existe en varios tipos de vegetales,
por ejemplo, en el frijol de soya. La ureasa se utiliza mucho como agente catalítico
para la medición cuantitativa de urea. El hidróxido de amonio que se forma puede
titularse y puede relacionarse, estequiométricamente, con la cantidad de urea
presente en una muestra. Aunque la ureasa no es muy común en la naturaleza,
esta enzima ha tenido más importancia en el desarrollo de la enzimología
moderna que ninguna otra. Las investigaciones sobre la ureasa han permitido
deducir el principio importante en las reacciones enzimáticas: la función de los
grupos SH (sulfhídrico) en la catálisis. La ureasa posee 3 o 4 grupos activos, es
una representante de un gran número de enzimas cuya actividad depende de la
existencia de grupos SH, intactos, procedentes de cisteínas que forman parte de
la cadena poli peptídica de la enzima.

Reacción catalizada por la ureasa:


La ureasa, de acuerdo con la clasificación internacional de enzimas, pertenece al
grupo de las hidrolasas un ejemplo es el anterior.

Indicador de pH: Rojo fenol, a) acido: color amarillo, pH 6.8 b) alcalino: color
rosado rojo, pH 8.4 El indicador de iones hidrogeno rojo fenol muestra la
producción de ureasa por los miembros de la subfamilia Protege mediante la
demostración disminuida de la concentración de iones hidrogeno a causa de la
formación de dos moléculas de amoniaco.

Para inhibir la acción de la ureasa, se utiliza el cloruro de mercurio (II). En el sitio


catalítico, la ureasa presente presenta grupos –SH (sulfhídrico), provenientes del
aminoácido cisteína que forma parte de su cadena peptídica. El cloruro de
mercurio se une irreversible a los grupos –SH, los inactiva y así, se detiene la
actividad enzimática de la ureasa

Las enzimas son proteínas que aceleran la velocidad de la reacción química en


nuestro organismo, con excepción de los ribosomas (que son poli nucleótidos con
actividad catalítica). La actividad enzimática, definida como cantidad de producto
formado o cantidad de sustrato degradado por unidad de tiempo, es afectada por
una serie de factores tales como:

 Temperatura
 El pH
 La concentración de sustrato
 La concentración de enzima

Efecto de la temperatura sobre la actividad de la ureasa


Para toda enzima una temperatura optima de actividad, a la cual la velocidad de
reacción es máxima. A temperaturas debajo de esta temperatura, la frecuencia de
choques entre la enzima y el sustrato es baja y, por tanto, la velocidad de reacción
también lo es. Conforme se incrementa la temperatura, aumenta la frecuencia de
choques y se favorece la velocidad de reacción (la formación del producto). Pero
si la temperatura es muy elevada, pueden romper la estructura de Vander Waals y
los puentes de hidrogeno que estabilizan la estructura terciaria y cuaternario de las
enzimas, como consecuencia, se produce su desnaturalización y la perdida de la
actividad enzimática.
Efecto del pH sobre la actividad de la ureasa
La estructura tridimensional de una enzima de origen proteico determina su sitio
catalítico y, por lo tanto, su actividad. Dicha estructura se encuentra estabilizada
por una serie de enlaces no covalentes (hidrofóbicos, puentes de hidrogeno,
atracciones electrostáticas) y covalentes (puentes de disulfuro) que existen entre
los grupos R de los aminoácidos que no son neutros (como el aspartato, la lisina,
la arginina y el glutamato), e interfieren con las atracciones electrostáticas y su
estabilidad estructural tridimensional, lo que provoca una pérdida total o parcial de
la actividad enzimática.
Para cada enzima existe un pH óptimo en relación con la actividad, el cual varía
según la región celular en que se encuentre dicha enzima: por ejemplo, el pH
dentro del lisosoma o en el estómago es alrededor de 2 (y ese es el pH óptimo de
las enzimas allí localizadas), mientras que las enzimas presentes en el plasma o
en el duodeno tienen un pH óptimo de actividad entre 7.0 y 8.0.
La ureasa actúa en los compuestos a nivel de los puentes C-N excepto en
aquellos que contiene puentes peptídicos. El pH óptimo para la actividad de la
ureasa es de 7.
Efecto del tiempo de reacción en la cantidad de urea hidrolizada
En toda reacción enzimática, la enzima no es consumida ni sufre modificación
alguna, de manera que puede continuar transformando otra molécula de sustrato
en producto. Por lo tanto, si se garantiza que la concentración de sustrato no será
un elemento limitante (es decir, que no se agotará), a mayor tiempo de reacción,
mayor será la formación del producto o de la degradación del sustrato.
Efecto de la concentración de enzima sobre la actividad enzimática
En todas reacciones enzimáticas, si se incrementa la concentración de enzima, se
forma mayor cantidad de productos por unidad de tiempo. EL incremento en la
velocidad de reacción es directamente proporcional al incremento en la
concentración de enzima, siempre y cuando la cantidad de sustrato no sea
limitante, es decir, que el sustrato no llegue a agotarse.
CINÉTICA ENZIMÁTICA: EL COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO.
Los enzimas actúan de acuerdo con los mismos principios generales que los
demás catalizadores: aumentan la velocidad de las reacciones químicas
combinándose transitoriamente con los reactivos de manera que estos alcanzan

un estado de transición con una energía de activación menor que el de la reacción


no catalizada. Hay que destacar sin embargo que los enzimas son mucho más
eficaces que cualquier catalizador artificial conocido. Se ha podido comprobar que
los aumentos de velocidad que producen son de entre 107y 1014 veces la
velocidad de la reacción no catalizada. La actividad molecular (número de
moléculas de sustrato transformadas por una sola molécula de enzima por minuto)
de distintos enzimas oscila entre unos pocos miles y varios millones de moléculas
de sustrato por minuto. Cabe preguntarse pues, cómo consiguen los enzimas
aumentos tan espectaculares en la velocidad de las reacciones químicas que
catalizan.

3. Fundamento de la práctica.

La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por


enzimas. Estos estudios proporcionan información directa acerca del mecanismo de
la reacción catalítica y de la especificad del enzima. La velocidad de una reacción
catalizada por un enzima puede medirse con relativa facilidad, ya que en muchos
casos no es necesario purificar o aislar el enzima. La medida se realiza siempre en
las condiciones óptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc., y se
utilizan concentraciones saturantes de sustrato. En estas condiciones, la velocidad
de reacción observada es la velocidad máxima (Vmax). La velocidad puede
determinarse bien midiendo la aparición de los productos o la desaparición de los
reactivos.

4. Objetivo general
 Determinar la velocidad de la reacción catalizada por el enzima ureasa.
5. Objetivos específicos
 Analizar los efectos al colocar diferentes volúmenes durante la reacción
catalizada por la enzima ureasa.

 Calcular la constante de Constante de Michaelis-Menten (Km).


6. Procedimiento

Sustrato (urea
0,1 0,2 0,3 0,4 0,6 0,8 1,0 ------
0,25M)
Buffer (7,2) 0,9 0,8 0,7 0,6 0,4 0,2 ----- 1.0ml
MEZCLAR – BAÑO 37° C / 3min
Ureasa 50 50 50 50 50 50 50 50ml
MEZCLAR – BAÑO 37° C / 5min
Fenol 1 1 1 1 1 1 1 1ml
Hipoclorito 1 1 1 1 1 1 1 1ml
MEZCLAR – BAÑO 37° C / 5min
Retirar los tubos del baño y añadir a todos los tubos 2ml H2O, Mezclar,
leer las Abs, a 540nm frente al blanco.

7. Resultados

Datos para elaboración de la curva de Michealis-Menten

TUBOS ABSORVANCIA [s] mmol/L


Tubo1 0,118 0.025
Tubo2 0.206 0,05
Tubo3 0.222 0,075
Tubo4 0.301 0.100
Tubo5 0.341 0,150
Tubo6 0.402 0,200
Tubo7 0,476 0,250

Linealización de la curva Lineweaver-Burk


Donde:

8. Conclusión:
Podemos concluir que la velocidad de la reacción catalizada por la enzima ureasa
varía dependiendo de la cantidad de sustrato y enzima que se agregue teniendo
en cuenta que la temperatura y pH son factores principales.

9. Aprendizaje:

Aprendimos a calcular la acumulación de sustrato que se necesita para alcanzar la


velocidad máxima con la fórmula de Km.
También aprendimos a elaborar la curva de velocidad enzimática de Michealis-
Menten y a linealizarla mediante el teorema de Lineweaver-Burk.

10. Anexos:

11. Bibliografía:

http://bioquimicarps.blogspot.com/2015/02/ureasa.html

http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz22.htm

http://www.bionova.org.es/biocast/documentos/tema14.pdf

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