BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA

DIRECCIÓN DE EDUCACIÓN MEDIA SUPERIOR

ACADEMIA GENERAL DE QUÍMICA

ANTOLOGÍA
CON ENFOQUE POR COMPETENCIAS

I
2020
pág. 0
DOCENTES PARTICIPANTES EN LA ELABORACIÓN:

Angelina Zenteno Flores 100527973 Gral. Lázaro Cárdenas del Río

Billy Arriaga Cardona NSS017144 Enrique Cabrera Barroso Urbana
Elizabeth García Hernández NSS337544 Enrique Cabrera Barroso Urbana
Ma. Cristina Margarita Rodríguez Lázaro 100337755 2 de octubre de 1968
María Isabel Flores Tlachino 100494633 Lic. Benito Juárez García
María Reynalda Aguila Hernández NSS017400 Gral. Lázaro Cárdenas del Río
Priscila Eunice Bravo Gómez 100322444 Lic. Benito Juárez García
Teresa Medina Medina 100260944 Lic. Benito Juárez García

pág. 1
 Contenido

Presentación .............................................................................................................. 3
Propósito ................................................................................................................... 4
Bloque I: Introducción a la Bioquímica...................................................................... 6
1.1 Referentes históricos del desarrollo de la Bioquímica, su concepto de bioquímica
y su relación con otras ciencias. ................................................................................. 6
1.2 Estructura, propiedades, funciones e interacciones físico químicas de
importancia biológica del agua, sales minerales e iones. ......................................... 10
Bloque II: Aminoácidos como precursores de Proteínas ......................................... 16
2.1 Los aminoácidos como componentes de proteínas ............................................ 16
2.2 Péptidos ............................................................................................................. 30
2.3 Proteínas como estructura de vida ..................................................................... 32
Bloque III: Compuestos Biológicos Nitrogenados.................................................... 44
3.1 Ácidos nucleicos, su estructura y su diferenciación, los procesos que realizan en
la reproducción celular de los seres vivos. ............................................................... 44
3.2 Fundamentos de técnicas de biología molecular. .............................................. 71

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 Presentación

La Antología de Bioquímica I es el resultado del trabajo colegiado de

los miembros de la Academia General de Química con el propósito
de orientar el trabajo de los docentes que imparten esta asignatura,
así como de proveer de herramientas a los estudiantes que
favorezcan la adquisición de saberes y el desarrollo competencias para su formación integral y que
contribuyan al perfil de egreso del Bachillerato General Universitario de la Benemérita Universidad
Autónoma de Puebla.

Este material está basado en el Programa de la Asignatura de Bioquímica I del Plan estudios del
Bachillerato Universitario Plan 07 y está organizado en tres bloques temáticos:
Bloque I: Introducción a la bioquímica
Bloque II: Aminoácidos como precursores de Proteínas
Bloque III: Compuestos Biológicos Nitrogenados

Finalmente, el documento contiene una serie de actividades de aprendizaje a través de las cuales
el estudiante podrá evidenciar la apropiación y movilización de los saberes establecidos en cada
Bloque temático de la asignatura.

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 Propósito

Identificar la terminología fundamental de la Bioquímica y aplicar los conocimientos

de grupos funcionales para reconocer y explicar de manera básica las propiedades,
estructura clasificación y función del agua, minerales, aminoácidos, proteínas y
ácidos nucleicos para disponer de las bases suficientes para organizar el conocimiento y
comprender la importancia de estas biomoléculas en los seres vivos, su control y relación con el
metabolismo como proceso fisiológico y el impacto de éstos en la ingeniería genética que le permita
acceder a cualquier área biológica con las bases necesarias para su buen desempeño en ella.

Competencias a desarrollar en la asignatura

Genéricas Disciplinares Básicas

4.1 Expresa ideas y conceptos mediante 4. Obtiene, registra y sistematiza información para responder
representaciones lingüísticas, matemáticas o a preguntas de carácter científico, consultando fuentes
gráficas. relevantes y realizando experimentos pertinentes.

9. Diseña modelos o prototipos para resolver problemas,

4.3 Identifica las ideas clave en un texto o discurso
oral e infiere conclusiones a partir de ellas.
satisfacer necesidades o demostrar principios científicos.
12. Decide sobre el cuidado de su salud a partir del
conocimiento de su cuerpo, sus procesos vitales y el
entorno al que pertenece.

5.1 Sigue instrucciones y procedimientos de manera

reflexiva, comprendiendo como cada uno de sus
Disciplinares Extendidas
pasos contribuye al alcance de un objetivo.
CDE. 7. Diseña prototipos o modelos para resolver
problemas, satisfacer necesidades o demostrar principios
5.3 Identifica los sistemas y reglas o principios científicos, hechos o fenómenos relacionados con las
medulares que subyacen a una serie de fenómenos. ciencias experimentales.

14. Analiza y aplica el conocimiento sobre la función de los

nutrientes en los procesos metabólicos que se realizan en
6.4 Estructura ideas y argumentos de manera clara, los seres vivos para mejorar su calidad de vida.
coherente y sintética.

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 BLOQUE I

EJE: Distingue la estructura y organización de los componentes naturales del Planeta.

Introducción a la bioquímica
Fundamentos de bioquímica y propiedades, estructura, características del agua y sales minerales
en sistemas acuosos.

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 Bloque I: Introducción a la Bioquímica

Competencias a desarrollar
4.1 Expresa ideas y conceptos mediante representaciones lingüísticas, matemáticas o gráficas.
5.3 Identifica los sistemas y reglas o principios medulares que subyacen a una serie de fenómenos.
6.4 Estructura ideas y argumentos de manera clara, coherente y sintética.

1.1 Referentes históricos del desarrollo de la Bioquímica, su

concepto de bioquímica y su relación con otras ciencias.

Aprendizaje Esperado
Identifica los referentes históricos de la bioquímica como ciencia mediante representación gráfica
para reconocer su importancia e impacto en el cuidado de la salud.

TODA LA BIOQUIMICA EN TRES PAGINAS lípidos y formar estructuras complejas

(gluconjugados), cruciales para los sistemas de
Los principales componentes estructurales del cuerpo
señalización celular y para procesos como adhesión
son las proteínas, los carbohidratos y los lípidos. celular y la inmunidad.
Las proteínas son los bloques de construcción y los
catalizadores; como unidades estructurales,
constituyen el armazón “arquitectónico” de los
tejidos; como enzimas, junto con moléculas
colaboradoras (coenzimas y cofactores), catalizan las
reacciones bioquímicas. Los lípidos, como el colesterol
y los fosfolípidos, forman la columna vertebral de las
membranas biológicas.

Los carbohidratos y los lípidos ya sean en forma de

monómeros o de polímeros relativamente simples,
constituyen nuestra fuente de energía principal.
Pueden almacenarse en los tejidos en forma de
Determinadas variables químicas como el pH, la
glucógeno y triglicéridos. Sin embargo, los
presión del oxígeno y las concentraciones de iones
carbohidratos también pueden asociarse a proteínas y
inorgánicos y de moléculas amortiguadoras definen el

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entorno homeostático en el que tiene lugar el
metabolismo. Pequeños cambios en este entorno
(p.ej., menos de dos décimas de una unidad de pH o el
cambio de pocos grados en la temperatura corporal)
pueden poner en peligro la vida.
La sangre es el medio de transporte singular que
participa en el intercambio de gases, energía,
metabolitos e información entre los tejidos. El plasma
sanguíneo es, asimismo, una “ventana” accesible al
metabolismo y sirve como fuente de información
clínica
Las membranas biológicas separan las vías
metabólicas en diferentes compartimentos celulares.
Su estructura impermeable al agua está salpicada de
“puertas y entradas” (transportadores de membrana)
y de “cerraduras” que aceptan numerosas llaves
(hormonas, citosinas y otros receptores) y generan
señales intracelulares. Desempeñan un papel crucial
en el transporte de iones y metabolitos y también en
la transducción de señales de una célula a otra y
dentro de la propia célula. El hecho de que la mayor
parte de la energía del organismo se consuma para
mantener los gradientes iónicos y de metabolitos a
través de las membranas biológicas da una idea de la
importancia de estos procesos. Además, las células de
todo el organismo tienen una dependencia crítica de
los potenciales de membrana para la transmisión
nerviosa, la contracción muscular, el transporte de
nutrientes y el mantenimiento del volumen celular
La energía liberada desde los nutrientes se
distribuye en forma de trifosfato de adenosina
La recuperación y utilización de energía en los
sistemas biológicos se realiza a través de la
fosforilación oxidativa, que tiene lugar en la
mitocondria. Este proceso implica consumo de
oxígeno, o respiración, mediante el cual el organismo
utiliza la energía de los combustibles para generar un
gradiente de protones a través de la membrana
mitocondrial y capturar esta energía en forma de
trifosfato de adenosina (ATP). Los bioquímicos llaman
al ATP la “moneda corriente del metabolismo “ya que
permite que la energía procedente del metabolismo
sea utilizada para trabajo, transporte y biosíntesis.
El metabolismo en un entramado sofisticado de
proceso químicos
Los carbohidratos y los lípidos constituyen nuestra
principal fuente de energía, pero nuestras
necesidades nutricionales también incluyen
aminoácidos (componentes de las proteínas),
moléculas inorgánicas que contiene sodio, potasio y
fosforo, y micronutrientes (vitaminas y
oligoelementos). La glucosa se metaboliza a través de
la glucólisis una vía metabólica anaeróbica (que no
requiere oxigeno) universal para producir energía. La
glucólisis transforma la glucosa en piruvato, y prepara
así el metabolismo oxidativo que tendrá lugar en la
mitocondria. También genera metabolitos, que son el
punto de partida para la síntesis de aminoácidos,
proteínas, lípidos y ácidos nucleicos.
La glucosa constituye el combustible más importante
para nuestro cerebro; así pues, para nuestra
supervivencia es esencial mantener una
concentración sanguínea normal de glucosa. El aporte
de glucosa está ligado al metabolismo de glucógeno,
que es la forma de almacenamiento a corto plazo de
glucosa. La homeóstasis de la glucosa está regulada
mediante hormonas (principalmente insulina y
glucagón) que coordinan las actividades metabólicas
entre células y órganos
El oxígeno es esencial para la producción de
energía, pero también puede ser tóxico
Durante el metabolismo aeróbico, el piruvato se
transforma en Acetil- CoA, que es el intermediario
común en el metabolismo de los carbohidratos, los
lípidos y los aminoácidos. El Acetil- CoA entra en la
maquinaria metabólica central de la célula, el ciclo de
los ácidos tricarboxílicos en la mitocondria. El Acetil-
CoA se oxida a dióxido de carbono y reduce las
importantes coenzimas nicotinamida-adenina-
pág. 7
dinucléotido (NAD+) y la flavina-adenina-dinucléotido
(FAD). La reducción de estos nucleótidos captura la
energía procedente de la oxidación de los
combustibles. Estos nucleótidos son, a su vez,
sustratos para la vía metabólica final, la fosforilación
oxidativa, en la que los electrones transportados
reducen el oxígeno molecular a través de una cadena
de reacciones de transporte de electrones aportando
la energía necesaria para la síntesis de ATP. Aunque el
oxígeno es esencial para el metabolismo, también
puede ser causa de estrés oxidativo y de graves daños
en los tejidos durante la inflamación. Para protegernos
de los efectos más perjudiciales del oxígeno estamos
dotados de poderosas defensas antioxidantes
El metabolismo mantiene un ciclo continuo entre
los periodos de ayuno y posprandial
La dirección de las principales vías del metabolismo de
los carbohidratos y los lípidos cambia en respuesta a la
ingesta de alimentos. En el estado de alimentación, las
vías metabólicas activas son la glucólisis, la síntesis de
glucógeno, la lipogénesis y la síntesis de proteínas, con
lo que se rejuvenecen los tejidos y se almacena el
exceso de combustible metabólico. En
cambio, en el estado de ayuno, la dirección del
metabolismo se invierte: los depósitos de glucógeno y
de lípidos se degradan mediante gluconeogénesis,
garantizando un suministro constante, mientras se
enlentecen otros procesos de biosíntesis. Algunos
cuadros frecuentes, como la diabetes, la obesidad, y la
ateroesclerosis, que constituyen en la actualidad
problema importantes de la salud pública, se deben al
deterioro del metabolismo el transporte de los
combustibles.
Los tejidos desempeñan funciones especializadas
Estas funciones abarcan la contracción muscular, la
conducción nervios, la formación de hueso, la
vigilancia inmunitaria, la señalización hormonal, el
mantenimiento de pH y del equilibro electrolítico la
desintoxicación de sustancias ajenas al organismo. La
organización tisular y las comunicaciones
intercelulares necesitan de compuestos
especializados, como los gluconjugados
(glucoproteínas, glucolípidos y proteoglucanos). Los
recientes adelantos en nuestros conocimientos sobre
los sistemas de señalización celular han mejorado
nuestra perspectiva del crecimiento celular y de sus
mecanismos de reparación. Su declive, dependiente
del tiempo, conduce al envejecimiento, y su fracaso
condiciona la aparición de cuadros patológicos, como
el cáncer.
El genoma es la base de todo
El genoma proporciona el mecanismo para la
conservación y la transferencia de la información
genética mediante la regulación de la expresión de los
genes constituyentes y su control de síntesis de
proteínas. La síntesis proteica está controladas
codificada en el ácido desoxirribonucleico (ADN) y
transcrita al ácido ribonucleico (ARN), que luego es
traducida en péptidos que finalmente forman las
moléculas proteicas funcionales. El espectro de
proteínas expresadas y el control de su expresión
temporal durante el desarrollo, la adaptación y el
envejecimiento son los responsables de nuestra
estructura proteica. En los últimos años la
bioinformática, los estudios de asociación del genoma
completo (Genome Wide Association Study, GWAS) y
los adelantos en los conocimientos de epigenética han
proporcionado perspectivas verdaderamente
fascinantes sobre la complejidad de los entramados
genéticos reguladores. Las aplicaciones de la
tecnología del ADN recombinante han revolucionado
de los laboratorios clínicos en la última década. La
reciente capacidad de rastrear todo el genoma y el
potencial de la proteómica crean la oportunidad de
generar nuevas ideas sobre la dinámica del control
génico de la síntesis proteica.
Referencias
John W. Baynes, M. D. (2016). Bioquímica médica.
Elsevier Saunders.
pág. 8
ACTIVIDAD de Aprendizaje:
A partir de la información de la lectura y consultando diversas fuentes elabora un ensayo en el que
expreses la importancia de la interdisciplinariedad de la Bioquímica en la generación de conocimientos
y adelantos que permitan una mejor calidad de vida.

pág. 9
 Bloque I: Introducción a la Bioquímica

1.2 Estructura, propiedades, funciones e interacciones físico

químicas de importancia biológica del agua, sales minerales
e iones.

Aprendizaje Esperado
Reconoce del agua y sales minerales su estructura y propiedades, estructurando ideas y argumentos de
manera clara, coherente y sintética para comprender su importancia fisiológica y homeostática en el
organismo.

Competencias a desarrollar
4.1 Expresa ideas y conceptos mediante representaciones lingüísticas, matemáticas o gráficas.
5.3 Identifica los sistemas y reglas o principios medulares que subyacen a una serie de fenómenos.
6.4 Estructura ideas y argumentos de manera clara, coherente y sintética.

AGUA, SU IMPORTANCIA BIOMÉDICA

El agua es el componente químico predominante de los organismos vivos. Sus

singulares propiedades físicas, que incluyen la capacidad para solvatar una
amplia gama de moléculas orgánicas e inorgánicas, se derivan de su estructura
bipolar y de su excepcional capacidad para formar enlaces de hidrógeno. La
manera en que el agua interactúa con una biomolécula solvatada influye sobre
la estructura de ambas, tanto de la biomolécula como del agua. El agua, es un
reactivo o un producto en muchas reacciones metabólicas. La regulación del
equilibrio del agua depende de mecanismos hipotalámicos que controlan la
sed, de la hormona antidiurética (ADH), de la retención o excreción de agua
por los riñones, y de la pérdida por evaporación. El agua tiene una propensión
leve a disociarse hacia iones hidróxido y protones. La concentración de
protones, o acidez, de soluciones acuosas por lo general se reporta usando la
escala de pH logarítmica.

pág. 10
 EL AGUA ES UN SOLVENTE BIOLÓGICO IDEAL1

Las moléculas de agua forman dipolos

Una molécula de agua es un tetraedro irregular,

un tanto asimétrico, con oxígeno en su centro
(figura 1). Los dos hidrógenos y los electrones no
compartidos de los dos orbitales sp3-hibridados
restantes ocupan los ángulos del tetraedro. El
ángulo de 105 grados entre los hidrógenos difiere
un poco del ángulo tetraédrico ideal, de 109.5
grados. El amoniaco también es tetraédrico, con
un ángulo de 107 grados entre sus hidrógenos. El
átomo de oxígeno fuertemente electronegativo
en el agua empuja los electrones en dirección
Figura 1. La molécula de agua tiene geometría tetraédrica
contraria a los núcleos de hidrógeno, lo que los
deja con una carga positiva parcial, mientras que
sus dos pares de electrones no compartidos Las moléculas de agua forman enlaces de
constituyen una región de carga negativa local. hidrógeno
Una molécula con carga eléctrica distribuida de
manera asimétrica alrededor de su estructura se Un núcleo de hidrógeno parcialmente desprotegido,
unido de manera covalente a un átomo de oxígeno o
denomina un dipolo. La constante dieléctrica alta
de nitrógeno que extrae electrón, puede interactuar
del agua depende de su dipolo fuerte. Como se
con un par de electrones no compartidos sobre otro
describe de manera cuantitativa mediante la ley
átomo de oxígeno o nitrógeno para formar un enlace
de Coulomb, la fuerza de la interacción F entre de hidrógeno. Las moléculas de agua tienen estas dos
partículas que tienen carga opuesta es características, la formación de enlaces de hidrógeno
inversamente proporcional a la constante favorece la auto asociación de moléculas de agua
dieléctrica ε del medio circundante. La constante hacia disposiciones ordenadas (figura 2). La formación
dieléctrica para un vacío es la unidad; para el de enlaces de hidrógeno ejerce una profunda
hexano es 1.9; para el etanol, 24.3, y para el agua, influencia sobre las propiedades físicas del agua, lo
78.5. Por ende, el agua disminuye mucho la fuerza que explica su viscosidad, tensión superficial y punto
de atracción entre especies cargadas y polares en de ebullición excepcionalmente altos.
comparación con ambientes libres de agua que
tienen constantes dieléctricas más bajas. Su
fuerte dipolo y constante dieléctrica alta permiten
al agua disolver grandes cantidades de
compuestos cargados, como las sales.

1
Murray,R., Bender, D., Botham, K., Kennelly, P., Rodwell, B., Weil, P. (2012). Harper Bioquímica Ilustrada. McGrawHill. Educación: México

pág. 11
 hidrógeno. Los alcoholes, los ácidos carboxílicos y las
aminas pueden servir como aceptores de hidrógeno y
como donadores de átomos de hidrógeno
desprotegidos para formación de enlaces de
hidrógeno (figura 3).

Figura 2. Izquierda: asociación de dos moléculas de agua dipolares

mediante un enlace de hidrogeno (línea punteada).
Derecha: agrupación de cuatro moléculas de agua con enlaces de
hidrógeno. Note que el agua puede servir de manera simultánea como
donador y como aceptor de hidrogeno.

La formación de enlaces de hidrógeno permite al agua

disolver muchas biomoléculas orgánicas que
contienen grupos funcionales que pueden participar
en la formación de enlaces de hidrógeno. Los átomos
de oxígeno de aldehídos, cetonas y amidas, por Figura 3. Los grupos adicionales polares participan en la formación de
ejemplo, proporcionan pares solitarios de electrones enlaces hidrogeno. Se muestran los enlaces de hidrógeno formados entre
alcohol y agua, entre dos moléculas de etanol, y entre el péptido carbonilo
que tienen la capacidad de servir como aceptores de oxígeno y el péptido nitrógeno hidrógeno de un aminoácido adyacente.

LA INTERACCIÓN CON AGUA INFLUYE SOBRE LA ESTRUCTURA DE BIOMOLÉCULAS

Los enlaces covalentes y no covalentes estabilizan Cuadro 1. Energías de enlace para átomos de importancia
biológica.
moléculas biológicas

El enlace covalente es la mayor fuerza que mantiene

juntas a las moléculas (cuadro 1). Las fuerzas no
covalentes, aunque son de menor magnitud, hacen
contribuciones importantes a la estructura,
estabilidad y competencia funcional de
macromoléculas en las células vivas. Estas fuerzas, que
pueden ser de atracción o de repulsión, comprenden
interacciones tanto dentro de la biomolécula como
entre la misma y el agua, que es el principal
componente del ambiente circundante.

pág. 12
Las biomoléculas se pliegan para colocar a grupos de hidrógeno favorables desde el punto de vista
polares y cargados sobre sus superficies energético.

Casi todas las biomoléculas son anfipáticas; esto es,
poseen regiones con alto contenido de grupos
funcionales cargados o polares, así como regiones con
carácter hidrofóbico. Las proteínas tienden a plegarse
con los grupos R de aminoácidos con cadenas laterales
hidrofóbicas en el interior. Los aminoácidos con
cadenas laterales de aminoácidos cargadas o polares
(p. ej., arginina, glutamato, serina) por lo general están
presentes sobre la superficie en contacto con agua. Un
modelo similar prevalece en una bicapa de
fosfolípidos, donde los grupos con cabeza cargada de
fosfatidil serina o fosfatidil etanolamina tienen
contacto con agua, mientras que sus cadenas laterales
de ácido (acilo) graso hidrofóbicas se agrupan juntas y
excluyen el agua. Este modelo maximiza las
oportunidades para la formación de interacciones de
carga-dipolo, dipolo-dipolo, y formación de enlaces de
hidrógeno, favorables desde el punto de vista
energético entre grupos polares sobre la biomolécula
y el agua. También minimiza contactos desfavorables
desde el punto de vista energético entre el agua y
grupos hidrofóbicos.
Interacciones electrostáticas
Las interacciones entre grupos cargados ayudan a dar
forma a la estructura biomolecular. Las interacciones
electrostáticas entre grupos con carga opuesta dentro
de biomoléculas o entre las mismas se denominan
puentes de sal, los cuales tienen fuerza comparable a
la de los enlaces de hidrógeno, pero actúan en
distancias mayores; por ende, a menudo facilitan el
enlace de moléculas y iones cargados a proteínas y
ácidos nucleicos.
Fuerzas de van der Waals
Surgen por atracciones entre dipolos transitorios
generados por el movimiento rápido de electrones de
todos los átomos neutros. Las fuerzas de van der
Waals, mucho más débiles que los enlaces de
hidrógeno, pero abundantes, disminuyen en términos
de la sexta potencia de la distancia que separa a los
átomos (figura 2-4). De este modo, actúan en
distancias muy cortas, por lo general de 2 a 4 Å.

Interacciones hidrofóbicas

El término “interacción hidrofóbica” (o hidrófoba)

alude a la tendencia de compuestos no polares a
autoasociarse en un ambiente acuoso. Tal
autoasociación no está impulsada por atracción mutua
ni por lo que a veces es denominado de manera
incorrecta como “enlaces hidrofóbicos”. La
autoasociación minimiza la disrupción de
interacciones desfavorables desde el punto de vista
energético entre las moléculas de agua circundantes.
Dado que los hidrógenos de grupos no polares —como Figura 4. La fuerza de las interacciones de van der Waals varia con la
los grupos metileno de hidrocarburos— no forman distancia, R, entre especies que interactúan. La fuerza de interacción entre
especies que interactúan aumenta con la distancia decreciente hasta que
enlaces de hidrógeno, afectan la estructura del agua son separadas por la distancia de contacto de van der Waals (véase la
que los rodea. Las moléculas de agua adyacentes a un flecha marcada con A). A continuación, sobreviene repulsión debida a la
interacción entre los electrones de cada átomo o molécula. Si bien las
grupo hidrofóbico tienen restricción en cuanto al
interacciones de van der Waals son en extremo débiles, el efecto
número de orientaciones (grados de libertad) que les acumulativo es considerable para
permiten participar en el número máximo de enlaces macromoléculas como DNA y proteínas con muchos átomos en contacto
estrecho.

pág. 13
Las moléculas de agua muestran una tendencia estadística. Declarar que la probabilidad de que un
leve pero importante a disociarse hidrógeno exista como un ion es de 0.01 significa que,
en cualquier momento dado en el tiempo, un átomo
La capacidad del agua para ionizarse, si bien es leve,
de hidrógeno tiene 1 probabilidad en 100 de ser un
tiene importancia fundamental para la vida. Dado que ion, pero 99 probabilidades en 100 de formar parte de
el agua tiene la capacidad de actuar como un ácido y
una molécula de agua. La probabilidad real de que un
como una base, su ionización puede representarse
átomo de hidrógeno en agua pura exista como un ion
como una transferencia de protón intermolecular que
hidrógeno es de alrededor de 1.8×10-9. De este modo,
forma un ion hidronio (H3O+) y un ion hidróxido (OH– la probabilidad de que forme parte de una molécula
):
de agua es de casi la unidad. Dicho de otra manera, por
cada ion hidrógeno y cada ion hidróxido en agua pura,
hay 1.8 mil millones o 1.8×109 moléculas de agua. Sin
embargo, los iones hidrógeno y los iones hidróxido
El protón transferido en realidad se relaciona con una
contribuyen de manera importante a las propiedades
agrupación de moléculas de agua. Los protones
del agua. Para la disociación del agua:
existen en solución no sólo como H3O+, sino también
como multímeros tipo H5O2+ y H7O3+. Sin embargo, el
protón se representa de manera sistemática como H+,
aun cuando de hecho está muy hidratado. Dado que
los iones hidronio e hidróxido se recombinan de
manera continua para formar moléculas de agua, es
donde los corchetes representan concentraciones
imposible declarar que un hidrógeno u oxígeno
molares y K es la constante de disociación. Puesto que
individual está presente como un ion o formando
un mol de agua pesa 18 g, 1 litro (L) (1 000 g) de agua
parte de una molécula de agua. En un instante es un
contiene 1000÷18=55.56 mol. Así, el agua pura es
ion, pero al siguiente forma parte de una molécula de
55.56 molar. Dado que la probabilidad de que un
agua; de modo que no se consideran iones o
hidrógeno en agua pura exista como un ion hidrógeno
moléculas individuales. En lugar de eso, se hace
es de 1.8×10-9, la concentración molar de iones H+ (o
referencia a la probabilidad de que en cualquier
de iones OH-) en agua pura es el producto de la
instante en el tiempo un hidrógeno estará presente
probabilidad, 1.8×10-9 veces la concentración molar de
como ion o como parte de una molécula de agua. Dado
agua, 55.56 mol/L. El resultado es 1.0 × 10–7 mol/L.
que 1 g de agua contiene 3.46×1022 moléculas, la
ionización del agua puede describirse de manera

ACTIVIDAD de Aprendizaje:
De forma individual elabora en tu libreta un mapa conceptual que explique la importancia del agua y
su interacción con las biomoléculas, considerando su composición química y propiedades.

Referencias
Murray, R.K., Kennelly, P. J., Bender, D.A., Rodwell, V.W., Botham, K.M., & Weil. (2013). Harper
Bioquímica ilustrada. Mc GrawHill , Interamericana Editores.

pág. 14
 BLOQUE II

EJE: Relaciona las aportaciones de la ciencia al desarrollo de la humanidad

Aminoácidos como precursores de

Proteínas
Aminoácidos, péptido y proteínas

pág. 15
 Bloque II: Aminoácidos como precursores de Proteínas

Competencias a desarrollar en el Bloque

4.1 Expresa ideas y conceptos mediante representaciones lingüísticas, matemáticas o gráficas.
4.3 Identifica las ideas clave en un texto o discurso oral e infiere conclusiones a partir de ellas.
5.1 Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva, comprendiendo como cada uno de sus
pasos contribuye al alcance de un objetivo.

2.1 Los aminoácidos como componentes de proteínas

Aprendizaje Esperado
Identifica la composición y estructura de los aminoácidos y los clasifica mediante representación gráfica
para reconocer su importancia en la conformación de biomoléculas en los seres vivos.

ACTIVIDAD de Aprendizaje:
Cuestionario de conocimientos previos
1. ¿Qué es un aminoácido?

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______________________________________________________________________________________________

2. ¿Cuántos aminoácidos conforman las proteínas animales?

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3. ¿Cómo se clasifican los aminoácidos de acuerdo al tipo de cadena lateral (R)?

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4. Menciona los aminoácidos que conformas las proteínas animales.

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______________________________________________________________________________________________

5. La clasificación de los aminoácidos en “esenciales y no esenciales” se debe a:

______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________________

6. Dibuja la estructura (formula general) de un aminoácido indicando los grupos funcionales.

pág. 17
Aminoácidos
El papel de los aminoácidos en la vida como material
para la construcción de proteínas se aprecia
fácilmente en las tiendas de comida energética. De
hecho, sus estantes están repletas de aminoácidos en
polvo que se utilizan como suplemento a la dieta, lo
que permite a los fisicoculturistas intensificar el
crecimiento muscular. Sin embargo, los aminoácidos,
por sí solos, son compuestos clave en bioquímica.
Algunos aminoácidos funcionan como moléculas
señal, como, por ejemplo, neurotransmisores, y todos
los aminoácidos son precursores de otras
biomoléculas, como, por ejemplo, hormonas, ácidos
nucleicos, lípidos y, como acabamos de mencionar,
proteínas. En este bloque vamos a estudiar las
propiedades químicas fundamentales de los
aminoácidos.
Las biomoléculas se representarán de dos
formas distintas
Las proteínas, como todas las sustancias químicas en
general, deben su asombrosa variedad de funciones a
la capacidad para formar estructuras tridimensionales.
¿Cómo se ven estas biomoléculas en páginas
bidimensionales? En este bloque, las moléculas se
representan de dos formas distintas, dependiendo del
aspecto de la molécula que se quiera resaltar.
Cuando visualizar los átomos que constituyen la
molécula (como los carbonos y los hidrógenos) es más
importante que observar la forma de la molécula,
utilizamos una representación denominada
proyección de Fisher. En una proyección de Fisher,
cada átomo está identificado y los enlaces al átomo de
carbono central se representan mediante líneas
horizontales y verticales. Por convección, se considera
que los enlaces horizontales se proyectan hacia fuera
de la página, hacia el espectador, y que los enlaces
verticales se proyectan hacia dentro de la página,
alejándose del espectador.
Cuando el énfasis recae en la función de una molécula,
es más importante visualizar la forma de la molécula.
En estos casos, se utilizan las representaciones
estereoquímicas porque transmiten una visión
inmediata de la estructura de la molécula y, por tanto,
dan indicios sobre su función. Las representaciones
estereoquímicas también simplifican el gráfico,
haciendo así que la función de la molécula se intuya de
forma más clara. Los átomos de carbono y de
hidrógeno no se muestran de forma explícita a menos
que resulten importantes para la actividad de la
molécula. De esta forma es más fácil identificar los
grupos funcionales.
Para ilustrar la estereoquímica correcta de los átomos
de carbono tetraédricos, se utilizan cuñas para indicar
la dirección del enlace, bien hacia dentro o bien hacia
fuera de la página. Una cuña sólida indica un enlace
que sale del plano de la página hacia el observador.
Una cuña discontinua indica un enlace que se aleja del
observador por detrás del plano de la página. Los dos
enlaces restantes se representan mediante líneas
rectas. (Figura 2.1)
Figura 2.1. Estereoquímica de átomos de carbono de
aminoácidos
Las proteínas se construyen a partir de un repertorio
de 20 aminoácidos
Los aminoácidos son los materiales de construcción de
las proteínas. Un α-aminoácido consta de un átomo de
carbono central, denominado carbono α, unido a un
grupo amino, unido a un grupo ácido carboxilo, a un
átomo de hidrógeno y a una cadena lateral, denomina
grupo R. Cada tipo de aminoácido posee un grupo R
distinto.
pág. 18
La mayoría de los aminoácidos se presentan en dos Todos los aminoácidos presentan al menos dos
formas que son imágenes especulares entre sí. grupos cargados
Con cuatro grupos distintos enlazados al átomo de A pH neutro, los aminoácidos libres en disolución
carbono α tetraédrico, los α-aminoácidos son quirales: se encuentran mayoritariamente en forma de
pueden existir en cualquiera de las dos formas que son
iones dipolares (también denominados
imágenes especulares entre sí y que se denominan
zwitteriones). En forma dipolar, el grupo amino
isómero L e isómero D, (Figura 2.2)
está protonado (NH3+) y el grupo carboxilo está
desprotonado (COO-). El estado de ionización de
un aminoácido varía con el pH (Figura 2.3). En
disoluciones ácidas (por ejemplo, a pH 1), el grupo
amino está protonado (NH3+) y el grupo carboxilo
no está disociado (-COOH). A medida que se eleva
el pH, el ácido carboxílico es el primer grupo que
cede un protón, porque su pKa está cercano a 2.
La forma dipolar persiste hasta que el pH se
Figura 2.2. Isómero L e Isómero D de un aminoácido acerca a 9, momento en el que el grupo amino
protonado pierde un protón. En condiciones
fisiológicas, los aminoácidos se encuentran en la
Solo los aminoácidos L forman parte de las forma dipolar.
proteínas. ¿En que se basa la preferencia por los
aminoácidos L? No se conoce la respuesta, pero
existen evidencias de que los aminoácidos puros
(L o D) son ligeramente más solubles que un cristal
DL estable. Por tanto, si por simple azar hubiese
un pequeño exceso de aminoácidos L, esta
pequeña diferencia de solubilidad podría haberse
simplificado a lo largo del tiempo de forma que el
isómero L acabase siendo el predominante en
disolución.

Figura 2.3. Estado de ionización en función del pH

Los aminoácidos contienen una amplia gama de grupos funcionales

Generalmente, en las proteínas se pueden encontrar veinte tipos de cadenas laterales que varían en
tamaño, forma, carga, capacidad para formar puentes de hidrógeno, carácter hidrofóbico y reactividad
química. Muchas de estas propiedades se deben a los grupos funcionales. Los grupos funcionales de los
aminoácidos incluyen alcoholes, tioles, tioéteres, ácidos carboxílicos, carboxamidas y diversos grupos
básicos. La mayoría de estos grupos son químicamente reactivos.

pág. 19
Todas las proteínas de todas las especies –bacterias, arqueobacterias y eucariotas- se construyen a partir
del mismo conjunto de 20 aminoácidos aunque hay unas pocas excepciones. Este alfabeto fundamental
para la construcción de proteínas tiene varios miles de millones de años de antigüedad. El extraordinario
abanico de funciones medidas por proteínas es resultado de la diversidad y versatilidad de estos 20
materiales de construcción. (Figura 2.4)

Figura 2.4.

Aunque hay muchas formas de clasificar los aminoácidos, dividiremos estas moléculas en cuatro grupos,
en base a las características químicas generales de sus grupos R:
1. Aminoácidos hidrofóbicos con grupos R no polares
2. Aminoácidos polares con grupos R neutros cuya carga no está distribuida de manera uniforme.

pág. 20
 3. Aminoácidos cargados positivamente con grupos R que presentan una carga positiva a pH
fisiológico (pH= 7.4).
4. aminoácidos cargados negativamente con grupos R que presentan una carga negativa a pH
fisiológico.

Los aminoácidos hidrofóbicos contienen principalmente cadenas laterales hidrocarbonadas

Los aminoácidos que contienen cadenas laterales formadas únicamente por hidrógeno y carbono son
hidrofóbicos. El aminoácido más sencillo es la glicina, que tiene un único átomo de hidrógeno en su cadena
lateral. Con dos átomos de hidrógeno unidos al átomo de carbono α, la glicina es el único aminoácido
aquiral. La alanina, el siguiente aminoácido más sencillo, pose un grupo metilo (-CH3) en su cadena lateral
(Figura 2.5). Las abreviaturas de tres letras y los símbolos de una letra que aparecen debajo de los nombres
de los aminoácidos.

Figura 2.5. Aminoácidos apolares

En los aminoácidos ramificados valina, leucina e isoleucina se encuentran cadenas alifáticas de mayor
tamaño. La metionina contiene una cadena lateral fundamentalmente hidrofóbica que incluyen un grupo
tioéter (-S-). Las distintas formas y tamaños de estas cadenas laterales hidrocarbonadas les permiten
empaquetarse juntas para dar lugar a estructuras compactas con poco espacio libre. La prolina también
tiene una cadena lateral alifática, pero se diferencia del resto de los aminoácidos en que su cadena lateral

pág. 21
está unida al carbono α y al átomo de nitrógeno. La prolina afecta considerablemente a la arquitectura de
la proteína porque su estructura en forma de anillo hace que, desde el punto de vista conformacional.
Tenga más restricciones que los demás aminoácidos.
Hay dos aminoácidos con cadenas laterales aromáticas sencillas que también se clasifican como
hidrofóbicos. La fenilalanina, tal y como indica su nombre, contiene un anillo fenilo ocupando el lugar de
uno de los átomos de hidrógeno del grupo metilo de la alanina. El triptófano tiene un anillo indol unido a
un grupo metileno (-CH2-); el grupo indol consta de dos anillos fusionados que contienen un grupo NH.
Los aminoácidos hidrofóbicos, particularmente los alifáticos y aromáticos de mayor tamaño, tienden a
agruparse en el interior de la proteína, lejos del entorno acuoso de la célula. Esta tendencia de los grupos
hidrofóbicos a agruparse se denomina efecto hidrofóbico y es la fuerza motriz para la formación de la
estructura tridimensional única para cada proteína soluble en agua. Las distintas formas y tamaños de estas
cadenas laterales hidrocarbonadas les permiten empaquetarse en grupo para dar lugar a estructuras
compactas con poco espacio libre.

Los aminoácidos polares tienen cadenas laterales que presentan un átomo electronegativo
El siguiente grupo de aminoácidos que estudiaremos son aquellos que, en conjunto, son neutros pero que,
sin embargo, son polares porque el grupo R contiene un átomo electronegativo que acapara los electrones.
Hay tres aminoácidos, serina, treonina y tirosina que contienen un grupo hidroxilo (-OH) (Figura 2.6)
Los electrones del O-H son atraídos por el átomo de oxígeno, haciéndolo parcialmente negativo, lo que, a
su vez, convierte el hidrógeno en parcialmente positivo. Se puede considerar la serina como una versión de
la alanina que tiene un grupo hidroxilo unido al grupo metilo, mientras que la treonina parece una valina
en la que un grupo hidroxilo ocupa el lugar de uno de los grupos metilo de la valina. La tirosina es parecida
a la fenilalanina pero contiene un grupo hidroxilo hidrofílico unido al gran anillo aromático. Los grupos
hidroxilos de la serina, treonina y tirosina los hacen más hidrofílicos (les gusta el agua) y reactivos que sus
respectivos homólogos no polares alanina, valina y fenilalanina. La cisteína es, desde el punto de vista
estructural, similar a la serina pero contiene un grupo sulfhidrilo, o tiol (-SH-), en lugar del grupo hidroxilo.
El grupo sulfhidrilo es mucho más reactivo que un grupo hidroxilo y ha pH ligeramente básico puede perder
un protón para formar un grupo tiolato reactivo. Una pareja de grupos sulfhidrilos que se encuentren muy
cerca puede formar enlaces disulfuro –enlaces covalentes que resultan particularmente importantes a la
hora de estabilizar algunas proteínas. Además, el conjunto de aminoácidos polares incluye la asparagina y
el glutamato, que contienen una carboxamida terminal.

pág. 22
 Figura 2.6. Aminoácidos polares. Pearson (2009) Tomado de:
https://slideplayer.es/slide/1126891/3/images/7/Copyright+%C2%A9+2009+by+Pearson+Educaci%C3%B3n%2C+Inc..jpg

Los aminoácidos cargados positivamente son hidrofílicos

Centramos ahora nuestra atención en los aminoácidos que contienen cadenas laterales cargadas
positivamente que hacen que estos aminoácidos sean muy hidrofílicos (Figura 2.7). La lisina y la arginina
poseen largas cadenas laterales que terminan en grupos que están cargados positivamente a pH neutro. La
lisina acaba en grupo amino y la arginina en grupo guanidinio. Observe que los grupos R de la lisina y la
arginina presentan características duales-las cadenas carbonadas constituyen un esqueleto
hidrocarbonado parecido al del aminoácido leucina, pero la cadena termina con una cadena positiva. Esta
combinación de características contribuye a la gran variedad de propiedades químicas de estos
aminoácidos.

Figura 2.7. Aminoácidos polares hidrofílicos

pág. 23
La histidina contiene un grupo imidazol, un anillo aromático que también puede estar cargado
positivamente. Con un valor de pKa cercano a 6, el grupo imidazol de la histidina es único en el sentido de
que en las proximidades del pH neutro puede estar sin carga o cargado positivamente, en función de su
entorno local. De hecho, la histidina se encuentra frecuentemente en los centros activos de las enzimas,
donde el anillo imidazol puede unir o liberar protones en el transcurso de las reacciones enzimáticas.
Los aminoácidos cargados negativamente presentan cadenas laterales ácidas
Los dos aminoácidos que pertenecen a este grupo, el ácido aspártico y el ácido glutámico, poseen cadenas
laterales ácidas que habitualmente se encuentran cargadas negativamente en condiciones intracelulares
(Figura 2.8). A menudo, estos aminoácidos se denominan aspartato y glutamato para enfatizar la presencia
de la carga negativa en sus cadenas laterales. En algunas proteínas, estas cadenas laterales aceptan
protones, lo que neutraliza la carga negativa. A menudo, esta capacidad es importante desde el punto de
vista funcional. El aspartato y el glutamato están relacionados con la asparagina y a la glutamina ya que, en
estos últimos, la carboxamida ocupa el lugar que en la primera pareja ocupan los grupos carboxílicos.

Figura 2.8. Estructura de los aminoácidos que tiene grupo R con carga negativa

Las cadenas laterales ionizables incrementan la reactividad y la formación de enlaces

Siete de los 20 aminoácidos-tirosina, cisteína, arginina, lisina, histidina, ácido aspártico y ácido glutámico-
presentan cadenas laterales fácilmente ionizables. Estos siete aminoácidos son capaces tanto de formar
enlaces iónicos como de donar o aceptar protones para facilitar las reacciones. La capacidad de donar o
aceptar protones se denomina catálisis ácido-base y es una importante reacción química para muchas
enzimas. Veremos la importancia de la histidina como catalizador ácido-base cuando estudiemos la
quimotripsina, una enzima que digiere proteínas. (Figura 2.9)

pág. 24
Figura 2.9. Tabla de valores de los pK de los grupos ionizables de las proteínas

pág. 25
Los aminoácidos esenciales deben obtenerse a partir de la dieta
La mayoría de los microorganismos pueden sintetizar el conjunto básico completo de 20 aminoácidos,
mientras que los seres humanos solo pueden fabricar 11 de ellos. Los aminoácidos que no se pueden
generar en el organismo deben ser suministrados por la dieta y se denominan aminoácidos esenciales. El
resto se denominan aminoácidos no esenciales (Tabla 1). Esta denominación hace referencia a un
organismo en unas condiciones concretas. Por ejemplo, un ser humano adulto puede sintetizar suficiente
arginina como para satisfacer sus necesidades, pero un niño en crecimiento necesita más arginina que la
que su cuerpo es capaz de suministrar para satisfacer las demandas de la síntesis de proteínas durante el
crecimiento rápido.

Tabla 1. Tabla de aminoácidos esenciales y no esenciales,

pág. 26
 ACTIVIDAD de Aprendizaje:
Resuelve los siguientes problemas sobre aminoácidos
1. Mensaje oculto. Traduzca la siguiente secuencia de aminoácidos al código de una letra:
Glu-Leu-Val-Ile-Ser-Ile-Ser-Leu-Ile-Val-Ile-ASn-Gly-Ile-Asn-Leu-Ala-Ser-Val-Glu-Gly-Ala-Ser.

2. Identificar: Examine los siguientes cuatro aminoácidos. ¿Cuáles son sus nombres, sus abreviaturas
de tres letras y sus símbolos de una letra?

3. Propiedades: En relación con los aminoácidos mostrados en el problema dos, ¿a cuál o a cuáles se
les puede atribuir las siguientes características?
a. Cadena lateral hidrofóbica
b. Cadena lateral básica
c. Tres grupos ionizables
d. pKa aproximado de 10 en proteínas
e. Versión modificada de la fenilalanina.

pág. 27
4. Emparéjelos. Empareje cada aminoácido de la columna de la izquierda con el tipo de cadena
lateral que le corresponde en la columna de la derecha.
(a) Leu ( ) contiene un grupo hidroxilo
(b) Glu ( ) ácida
(c) Lys ( ) básica
(d) Ser ( ) contiene azufre
(e) Cys ( ) no polar, aromática
(f) Trp ( ) no polar, alifática

5. Solubilidad. En cada una de las siguientes parejas de aminoácidos identifique cuál de ellos sería
más soluble en agua:
(a) Ala, Leu;
(b) Tyr, Phe;
(c) Ser,Ala;
(d) Trp, His.

6. Carga y pH. ¿Cuál es la carga neta del aminoácido glicina a pH 7? ¿Y a pH 12?

7. Punto isoeléctrico. El punto isoeléctrico (pI) es el pH al cual la molécula no tiene carga neta. El
aminoácido glicina tiene dos grupos ionizables:
a. Un grupo carboxilo con un pKa de 2.2 y (2) un grupo α-amino con un pKa de 9.60. Calcule el
punto isoeléctrico (pI) de la glicina.

8. R positiva ¿Qué aminoácidos tienen grupos R cargados positivamente a pH 7?

pág. 28
 9. Crucial o no crucial. ¿Qué diferencia hay entre un aminoácido esencial y uno no esencial?
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________

10. Aromático, o no romántico. ¿Cuáles aminoácidos tienen componentes aromáticos en sus cadenas
laterales?
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________

ACTIVIDAD de Aprendizaje:
El alumno elabora un modelo de la estructura tridimensional de la secuencia de cinco
aminoácidos (pentapéptido), utilizando los colores de la nomenclatura orgánica:
carbono= negro; oxígeno= rojo, hidrógeno = blanco, Nitrógeno= azul, azufre= amarillo;
geometría molecular, símbolos de los aminoácidos una y tres letras) y explica las partes del modelo.

Referencias
Tymoczko, J. L., Berg, J. M., & Stryer, L. (2014). Bioquímica. Barcelona, España: Reverté.

pág. 29
 Bloque II: Aminoácidos como precursores de Proteínas

2.2 Péptidos

Aprendizaje Esperado
Analiza la composición, estructura y función de los péptidos y los clasifica mediante
una representación gráfica para reconocer su importancia en la formación de
estructuras.

2.1 CONCEPTO DE PEPTIDOS

Por convenio, el extremo amino libre (N-terminal) de la cadena peptídica se escribe a la izquierda y el extremo
carboxilo libre (C-terminal) a la derecha. Por consiguiente, todas las secuencias de aminoácidos se leen desde el
extremo N-terminal hasta el extremo C-terminal del péptido. La unión de muchos aminoácidos a través de enlaces
peptídicos produce una cadena no ramificada denominada polipéptido. Cada aminoácido componente de un
polipéptido se denomina «residuo» porque es la porción del aminoácido que queda después de que se pierdan los
átomos de agua en la formación del enlace peptídico. Cuando se nombra un polipéptido, se cambian los sufijos de
todos los residuos de aminoácido (-ina, -ano, -ico o -ato) a -ilo, con la excepción del aminoácido C-terminal. Por
ejemplo, un tripéptido compuesto por una valina N-terminal, una glicina y una leucina C-terminal se denomina valil-
glicil-leucina.

2.2 ENLACE PEPTÍDICO, FORMACIÓN COMPOSICIÓN Y CARACTERÍSTICAS

1.-El enlace peptídico tiene un carácter parcial de doble enlace, es decir, que es más corto que un enlace sencillo y
es rígido y planar (fig. …). Esto impide la rotación libre alrededor del enlace entre el carbono carbonilo y el nitrógeno
del enlace peptídico. Sin embargo, los enlaces entre los carbonos α y los grupos α-amino y α-carboxilo pueden rotar
libremente (aunque están limitados por el tamaño y el carácter de los grupos R). Esto permite a la cadena
polipeptídica adoptar una variedad de configuraciones posibles.

2.-El enlace peptídico es casi siempre un enlace trans (en vez de cis), en gran parte debido a la interferencia estérica
de los grupos R cuando están en posición cis.

3. Polaridad del enlace peptídico: como todas las uniones amida, los grupos –C=O y–NH del enlace peptídico no están
cargados y no aceptan ni liberan protones a lo largo del intervalo de pH comprendido entre 2 y 12. Por tanto, los
grupos cargados presentes en los polipéptidos consisten únicamente en el grupo N-terminal (α-amino), el grupo C-
terminal (α-carboxilo) y todos los grupos ionizados presentes en las cadenas laterales de los aminoácidos
constituyentes. Los grupos –C=O y –NH de los enlaces peptídicos son, sin embargo, polares y están involucrados en
enlaces de hidrógeno (p. ej., en hélices α y láminas β)

pág. 30
 Figura 2.10. Enlace Peptídico. Imagen tomada de: https://image.slidesharecdn.com/enlacepeptdico-091029153416-phpapp02/95/enlace-peptdico-1-
728.jpg?cb=1256830681

2.3 Clasificación de péptidos

Los polímeros de aminoácidos se diferencian de acuerdo con sus pesos moleculares o el número de residuos que
contienen. Las moléculas con pesos moleculares entre varios miles y varios millones de dalton (D) se denominan
polipéptidos.

Aquellas con pesos moleculares bajos, que constan de menos de 50 aminoácidos, se denominan péptidos. El término
proteína describe las moléculas con más de 50 aminoácidos. Cada proteína consta de una o varias cadenas
polipeptídicas. La distinción entre proteínas y péptidos es con frecuencia imprecisa. Por ejemplo, algunos
bioquímicos definen a los oligopéptidos como polímeros que constan de dos a diez aminoácidos, y polipéptidos a los
que tienen más de diez residuos. Con esta visión, las proteínas tienen pesos moleculares mayores de 10 000 Dalton.
Además, los términos proteína y polipéptido frecuentemente se emplean de forma intercambiable.

pág. 31
 Bloque II: Aminoácidos como precursores de Proteínas

2.3 Proteínas como estructura de vida

Aprendizaje Esperado
Distingue la composición, estructura y clasificación de las proteínas con base en su función y explica los
factores que estabilizan sus estructuras mediante el diseño y elaboración de modelos o prototipos para
reconocer su importancia y aplicación en el funcionamiento del organismo en los procesos metabólicos
que se realizan en los seres vivos para mejorar su calidad de vida.

ACTIVIDAD de Aprendizaje:
Para iniciar revisaremos lo que sabes acerca de las proteínas en tu cuerpo, para esto deberás
indicar en la siguiente figura cuáles proteínas están presentes en los órganos que se presentan
en la imagen. Puedes agregar o dibujar estructuras del cuerpo humano que contiene proteínas e
indicar por cual(es) están constituidas.

pág. 32
2.3.1 ESTRUCTURA PRIMARIA, SECUNDARIA: ALFA HÉLICE Y BETA PLEGADA, TERCIARIA Y
CUATERNARIA DE LAS PROTEÍNAS
ESTRUCTURA PRIMARIA

La secuencia de aminoácidos de una proteína se denomina

estructura primaria de la proteína. Entender la estructura
primaria de las proteínas es importante, porque muchas
enfermedades genéticas provocan la síntesis con secuencias
anómalas de aminoácidos que causan un plegamiento
inadecuado y la pérdida o el deterioro de la función normal.

Si se conocen las estructuras primarias de las proteínas normales

y las proteínas mutadas, puede utilizarse esta información para
diagnosticar o estudiar la enfermedad.
Figura 2.11. Estructura Primaria de Proteína

ESTRUCTURA SECUNDARIA DE LAS PROTEÍNAS

El esqueleto peptídico no adopta una estructura tridimensional aleatoria, sino que, en general, forma ordenaciones
regulares de aminoácidos que están localizados cerca unos de otros en la secuencia lineal. Estas disposiciones
constituyen la denominada estructura secundaria del polipéptido. La hélice α, la lámina β y los giros β son ejemplos
de estructuras secundarias que se encuentran comúnmente en las proteínas.

Hélice α

En la naturaleza se encuentran varias hélices polipeptídicas diferentes, pero la hélice α es la más común. Es una
estructura espiral con un esqueleto peptídico enrollado, estrechamente empaquetado, en el cual las cadenas
laterales de los aminoácidos se extienden hacia fuera del eje central para evitar interferir estéricamente entre sí (fig.
2.12). Un grupo muy diverso de proteínas contiene hélices α. Por ejemplo, las queratinas son una familia de proteínas
fibrosas estrechamente relacionadas cuya estructura es casi por completo α-helicoidal. Son el componente principal
de tejidos como el pelo y la piel, y su rigidez está determinada por el número de puentes disulfuro entre las cadenas
polipeptídicas que las forman. Al contrario que la queratina, la mioglobina o globina, cuya estructura es también muy
α-helicoidal, es una molécula globular flexible.

1. Puentes de hidrógeno: una hélice α está estabilizada por gran cantidad de puentes de hidrógeno establecidos
entre los oxígenos carbonilo y los hidrógenos amida del enlace peptídico, que son parte del esqueleto peptídico. Los
enlaces de hidrógeno se extienden hacia arriba y en paralelo a la espiral desde el oxígeno carbonilo de un enlace
peptídico al grupo –NH de una unión peptídica cuatro residuos por delante en el polipéptido. Esto asegura que todos
los componentes de un enlace peptídico, salvo el primero y el último, estén unidos entre sí a través de puentes de
hidrógeno. Los enlaces de hidrógeno son débiles individualmente, pero en conjunto sirven para estabilizar la hélice.

2. Aminoácidos por vuelta: cada vuelta de una hélice α contiene 3,6 aminoácidos. Por tanto, residuos de aminoácidos
situados a tres o cuatro residuos de distancia en la secuencia primaria están espacialmente juntos cuando se pliegan
en la hélice α.

pág. 33
3. Aminoácidos que alteran una hélice α: la prolina altera una hélice α porque su grupo amino secundario no es
geométricamente compatible con la espiral diestra de la hélice α. En cambio, inserta un retorcimiento en la cadena
que interfiere en la estructura helicoidal suave. Una gran cantidad de aminoácidos cargados (p. ej., el glutamato, el
aspartato, la histidina, la lisina y la arginina) también alteran la hélice mediante la formación de enlaces iónicos o
mediante repulsiones electrostáticas entre ellos. Por último, los aminoácidos con cadenas laterales voluminosas,
como el triptófano, o aminoácidos, como la valina o la isoleucina, con ramificaciones en el carbono β (el primer
carbono del grupo R, cerca del carbono α) pueden interferir en la formación de la hélice α si están presentes en
grandes cantidades.

Figura 2.12. Hélice .

a) Esqueleto helicoidal. b) Los enlaces de hidrógeno se forman entre los grupos carbonilo y N-H a lo largo del eje de la hélice.

Lámina β

La lámina β es otra forma de estructura secundaria en la cual todos los componentes del enlace peptídico intervienen
en puentes de hidrógeno (fig. 2.13). Las superficies de las láminas β aparecen plegadas y, por esta razón, estas
estructuras suelen denominarse «láminas β plegadas». Cuando se ilustra la estructura de las proteínas, las cadenas
β suelen visualizarse como flechas anchas.

Láminas paralelas y antiparalelas: una lámina β puede estar formada por dos o más cadenas polipeptídicas o
segmentos de cadenas polipeptídicas independientes que están dispuestas en sentido antiparalelo unas a otras (con
los extremos N- terminal y C-terminal de las cadenas β alternados;) o bien en paralelo entre sí (con todos los extremos
N-terminales de las cadenas β juntos). Cuando se forman enlaces de hidrógeno entre los esqueletos polipeptídicos
de cadenas polipeptídicas separadas, se denominan puentes intercatenarios. Una lámina β también puede formarse
plegándose sobre sí misma una cadena peptídica única. En este caso, los puentes de hidrógeno son puentes
intracatenarios. En las proteínas globulares, las láminas β tienen siempre un bucle, o un giro, a la derecha cuando se
observan a lo largo del esqueleto peptídico. [Nota: las láminas β retorcidas suelen formar parte del núcleo de las
proteínas globulares.]

pág. 34
 Figura 2.13. Lámina plegada 

Dos formas de lámina plegada  :antiparalela y paralela. Los enlaces de hidrógeno están representados por líneas puntadas.

ESTRUCTURA TERCIARIA DE LAS PROTEÍNAS GLOBULARES

La estructura primaria de una cadena polipeptídica determina su estructura terciaria. La palabra «terciario» se refiere
al plegamiento de los dominios (las unidades básicas de estructura y función) y a la disposición final de los dominios
en el polipéptido. La estructura de las proteínas globulares en disolución acuosa es compacta y tiene una elevada
densidad (empaquetamiento muy próximo) de los átomos en el centro de la molécula. Las cadenas laterales
hidrófobas están enterradas en el interior, mientras que los grupos hidrófilos suelen encontrarse en general en la
superficie de la molécula.

La estructura tridimensional exclusiva de cada polipéptido viene determinada por su secuencia de aminoácidos. Las
interacciones entre las cadenas laterales de los aminoácidos guían el plegamiento del polipéptido para formar una
estructura compacta. Los cuatro tipos de interacciones siguientes cooperan para estabilizar las estructuras terciarias
de las proteínas globulares.

1. Puentes disulfuro: un puente disulfuro es un enlace covalente formado entre el grupo sulfhidrilo (–SH) de cada
uno de dos residuos de cisteína para producir un residuo de cisteína. Las dos cisteínas pueden estar separadas entre
sí por muchos aminoácidos en la secuencia primaria de un polipéptido o incluso pueden estar localizadas en dos
cadenas polipeptídicas diferentes. El plegamiento de las cadenas polipeptídicas acerca los residuos de cisteína y
permite la formación de un enlace covalente de sus cadenas laterales. Un puente disulfuro contribuye a la estabilidad
de la forma tridimensional de la molécula proteica y evita que se desnaturalice en el ambiente extracelular. Por

pág. 35
ejemplo, se encuentran muchos puentes disulfuro en proteínas como las inmunoglobulinas que son segregadas por
las células.

2. Interacciones hidrófobas: los aminoácidos con cadenas laterales no polares tienden a estar localizados en el
interior de la molécula polipeptídica, donde se asocian con otros aminoácidos hidrófobos (fi. Por el contrario,
aminoácidos con cadenas laterales polares o cargadas tienden a estar localizados en la superficie de la molécula, en
contacto con el disolvente polar.

3. Puentes de hidrógeno: las cadenas laterales de los aminoácidos que contienen hidrógeno unido a oxígeno o
nitrógeno, como en los grupos alcohol de la serina y la treonina, pueden formar puentes de hidrógeno con átomos
ricos en electrones, como el oxígeno de un grupo carboxilo o el grupo carbonilo de un enlace peptídico La formación
de los enlaces de hidrógeno entre los grupos polares de la superficie de las proteínas y el disolvente acuoso

potencian la solubilidad de las proteínas.

4. Interacciones iónicas: los grupos con carga negativa, como el grupo carboxilo (–COO–) de la cadena lateral del
aspartato o del glutamato, pueden interaccionar con los grupos cargados positivamente, como el grupo amino (–
NH3+) de la cadena lateral de la lisina.

Figura 2.14. Interacciones que mantiene la estructura terciaria

pág. 36
ESTRUCTURA CUATERNARIA DE LAS PROTEINAS

Muchas proteínas consisten en una cadena polipeptídica única y se definen como proteínas monómeros. Sin
embargo, otras pueden constar de dos o más cadenas polipeptídicas que pueden ser estructuralmente idénticas o
no tener ninguna relación. La disposición de estas subunidades polipeptídicas se denomina estructura cuaternaria de
la proteína. Las subunidades se mantienen juntas principalmente mediante interacciones no covalentes (p. ej.,
puentes de hidrógeno, enlaces iónicos e interacciones hidrófobas). Las subunidades pueden funcionar
independientemente unas de otras o pueden actuar en cooperación, como en la hemoglobina, en la cual la unión del
oxígeno a una subunidad, el tetrámero aumenta la afinidad de las otras subunidades por el oxígeno.

2. 3.3 CLASIFICACION DE LAS PROTEINAS DE ACUERDO A SU FUNCION

De todas las moléculas que se encuentran en los seres
vivos, las proteínas son las que tienen las funciones
más diversas, como sugiere la siguiente relación:
4. Defensa. Una extensa variedad de proteínas son
1. Catálisis. Las enzimas son proteínas que dirigen y
aceleran miles de reacciones bioquímicas en
procesos como la digestión, la captura de energía
y la biosíntesis. Estas moléculas tienen
propiedades notables. Por ejemplo, pueden
aumentar la velocidad de reacción por factores
comprendidos entre 106 y 1012 .Pueden realizar
esta proeza en condiciones de pH y temperatura
suaves, dado que pueden inducir o
estabilizar intermediarios de reacción
forzados.
2. Estructura. Algunas proteínas proporcionan
5.
protección y sostén. Las proteínas estructurales
suelen tener propiedades muy especializadas.
Por ejemplo, el colágeno (el componente
principal de los tejidos conjuntivos) y la fibroína
(proteína de la seda) poseen una fuerza mecánica
significativa. La elastina, una proteína semejante
a la goma que se encuentra en las fibras elásticas,
se encuentra en varios tejidos del organismo (p.
ej., los vasos sanguíneos y la piel) que para operar
adecuadamente deben ser elásticos.
3. Movimiento.Las proteínas participan en todos los
movimientos celulares.
Por ejemplo, la actina, la tubulina y otras
6. Transporte. Muchas proteínas actúan como
proteínas forman el citoesqueleto. Las proteínas
del citoesqueleto son activas en la división
celular, la endocitosis, la exocitosis y el
movimiento meboide de los leucocitos.
protectoras. Entre los ejemplos que se
encuentran en los vertebrados están la queratina,
la proteína que se encuentra en las células de la
piel y que ayuda a proteger al organismo contra
los daños mecánicos y químicos. Las proteínas de
la coagulación de la sangre, fibrinógeno y
trombina, impiden la pérdida de sangre cuando
los vasos sanguíneos se lesionan. Las
inmunoglobulinas (o anticuerpos) las producen
los linfocitos cuando organismos ajenos, como las
bacterias, invaden un organismo. La unión de los
anticuerpos a un organismo invasor es el primer
paso para su destrucción.
Regulación. La unión de una molécula hormonal
o un factor de crecimiento a receptores en sus
células diana modifica la función celular. Entre los
ejemplos de hormonas peptídicas se encuentra la
insulina y el glucagón, ambos regulan la
concentración de glucosa en sangre. La hormona
del crecimiento estimula el crecimiento celular y
la división. Los factores de crecimiento son
polipéptidos que controlan la división y la
diferenciación de las células animales. Entre los
ejemplos están el factor de crecimiento derivado
de las plaquetas (PDGF) y el factor de crecimiento
epidérmico (EGF).
moléculas transportadoras de moléculas o iones

pág. 37
 a través de las membranas o entre las células.
Entre los ejemplos
de proteínas de membrana están la Na'-K' ATPasa
y el transportador de glucosa.
Otras proteínas transportadoras son la
hemoglobina, que lleva el O2 a los tejidos desde
los pulmones, y las lipoproteínas LDL y HDL, que
transportan los lípidos desde el hígado y el
intestino a otros órganos. La transferrina y la
ceruloplasmina son proteínas séricas que
transportan, respectivamente, hierro y cobre.
7. Almacenamiento. Determinadas proteínas
actúan como reserva de nutrientes esenciales.
Por ejemplo, durante el desarrollo la
ovoalbúmina de los huevos de las aves y la
caseína de la leche de los mamíferos son fuentes
abundantes de nitrógeno orgánico. Las proteínas
vegetales, como la zeína, realizan una función
semejante en las semillas que germinan.
8. Respuesta a las agresiones. La capacidad de los
seres vivos para sobrevivir a diversos agresores
abióticos está mediada por determinadas
proteínas. Entre los ejemplos se encuentran el
citocromo P450, un grupo diverso de enzimas que
se encuentran en los animales y las plantas que
normalmente convierten a un gran número de
contaminantes orgánicos tóxicos en derivados
menos tóxicos, y la metalotioneína, una proteína
intracelular con abundante cisteína que
virtualmente se encuentra en todas las células de
los mamíferos y que se une a los metales tóxicos
como el cadmio, el mercurio y la plata, y los
secuestra.
2. 3.3.1 PROTEÍNAS SIMPLES U HOLOPROTEÍNAS
2. 3.3.2 PROTEÍNAS CONJUGADAS O
HETEROPROTEÍNAS
De acuerdo con su composición, las proteínas se
clasifican en simples o conjuga-
das. Las proteínas simples, como la albúmina sérica
y la queratina, contienen sólo aminoácidos. Por el
contrario, cada proteína conjugada consta de una
proteína simple combinada con un componente no
proteico, que se denomina grupo prosté-
tico. (Una proteína sin su grupo prostético se
denomina apoproteína. Una molécula proteica
combinada con su grupo prostético se denomina
holoproteína.) Los grupos
prostéticos desempeñan un papel importante, a
veces crucial, en la función de las proteínas. Las
proteínas conjugadas se clasifican de acuerdo con la
naturaleza de su
grupo prostético. Por ejemplo, las glucoproteínas
contienen un componente hidrato de carbono, las
lipoproteínas contienen moléculas de lípidos, y las
metaloproteínas contienen iones metálicos. De
manera semejante, las fosfoproteínas contienen
grupos fosfato y las hemoproteínas poseen grupos
hemo.
2. 3.3.4 PROTEÍNAS ENZIMÁTICAS, ACCIÓN Y
CLASIFICACIÓN
En la primera época de la bioquímica, las enzimas se
denominaban según el capri-
cho de sus descubridores. Con frecuencia, los
nombres de las enzimas no proporcio-
naban indicaciones sobre su función (p. ej., tripsina),
o se utilizaban varios nombres
para la misma enzima. Las enzimas solían nombrarse
añadiendo el sufijo -asa al nombre del sustrato. Por
ejemplo, la ureasa cataliza la hidrólisis de la urea.
Para eliminar la confusión, la Unión Internacional de
Bioquímica (UIE) instituyó un es-quema de
denominación sistemática para las enzimas. Cada
enzima se clasifica en la actualidad de acuerdo con la
clase de reacción que cataliza. En este esquema, a
cada enzima se le asigna una clasificación de cuatro
números y un nombre con dos partes denominado
nombre sistemático. Además, la UIB sugiere para el
uso diario una versión más corta del nombre
sistemático denominada nombre recomendado. Por
ejemplo, la alcohol deshidrogenasa: NAD+
oxidorreductasa (E. e. 1.1.1.1) se denomina
habitualmente alcohol deshidrogenasa. (Las letras
pág. 38
E.e. son una abreviatura de Enzyme Commission,
Comisión de enzimas.) Debido a que muchas enzimas
se descubrieron antes de instituirse la nomenclatura
sistemática, muchos de los nombres antiguos ya
establecidos se han conservado.
Las seis categorías principales de enzimas son
las siguientes:
1. Oxidorreductasas. Las oxidorreductasas
catalizan reacciones de oxidación-reducción.
Entre las subclases de este grupo se
encuentran deshidrogenasas, oxidasas,
oxigenasas, reductasas, peroxidasas e
hidrolasas.
2. Transferasas. Las transferasas catalizan
reacciones en las que hay una transferencia de
grupos de una molécula a otra. Entre los
ejemplos de estos grupos están amino,
carboxilo, carbonilo, metilo, fosforilo y acilo
(RC=O). Los nombres comunes triviales suelen
incluir el prefijo trans. Entre los ejemplos
están transcarboxilasas, transmetilasas y
transaminasas.
En el Cuadro se proporciona un ejemplo de cada clase de enzima.
3. Hidrolasas. Las hidrolasas catalizan
reacciones en las que se produce la rotura de
enlaces por la adición de agua. Entre las
hidrolasas están esterasas, fosfatasas y
peptidasas.
4. Liasas. Las Iiasas catalizan reacciones en las
que se eliminan grupos (p. ej.,H20, CO2 y NH3)
para formar un doble enlace o se añaden a un
doble enlace. Los ejemplos son liasas,
descarboxilasas, hidratasas, deshidratasas,
desaminasas y sintasas.
5. Isomerasas. Se trata de un grupo
heterogéneo de enzimas. Las isomerasas
catalizan varios tipos de reordenamientos
intramoleculares. A las epimerasas catalizan la
inversión de átomos de carbono asimétricos.
Las mutasas catalizan transferencia
intramolecular de grupos funcionales.
6. Ligasas. Las ligasas catalizan la formación
de un enlace entre dos moléculas de
sustrato. La energía para estas reacciones la
aporta siempre la hidrólisis del ATP.
Otras ligasas se denominan carboxilasas.
pág. 39
 Figura 2.15. Clasificación de Enzimas.
Tomado de: https://slideplayer.es/slide/13633407/83/images/53/Clasificaci%C3%B3n+de+las+enzimas+%28I%29.jpg

2. 3.4 DESNATURALIZACION DE LAS PROTEÍNAS

Considerando las pequeñas diferencias de energía libre de las proteínas plegadas y desplegadas, no es
sorprendente que la estructura proteica sea especialmente sensible a los factores del entorno. Muchos
agentes físicos y químicos pueden romper la conformación nativa de una proteína. El proceso de destrucción
de la estructura se denomina desnaturalización. (La desnaturalización normalmente no incluye la ruptura de
los enlaces peptídicos.) Dependiendo del grado de desnaturalización, la molécula puede perder parcial o
totalmente su actividad biológica. La desnaturalización con frecuencia da lugar a cambios observables de las
propiedades físicas de las proteínas. Por ejemplo, la albúmina de huevo (clara de huevo) soluble y
transparente se hace insoluble y opaca tras calentarla. Como muchas desnaturalizaciones, freír huevos es un
proceso irreversible.

Las principales condiciones desnaturalizantes son las siguientes:

1. Ácidos y bases fuertes. Los cambios de pH dan lugar a la protonación de algunos grupos laterales de la
proteína, lo cual altera los patrones de enlace del hidrógeno y los puentes salinos. Al acercarse la proteína a
su punto isoeléctrico. Ésta se hace insoluble y precipita la disolución.

pág. 40
 2. Disolventes orgánicos. Los disolventes orgánicos hidrosolubles, como el etanol, interfieren con las
interacciones hidrófobas, ya que interaccionan con los grupos R apolares y forman enlaces de hidrógeno con
el agua y los grupos polares la proteína.

3. Detergentes. Estas moléculas anfipáticas rompen las interacciones hidrófobas, haciendo que se
desplieguen las proteínas en cadenas polipeptídicas extendidas.

(Las moléculas antipáticas contienen simultáneamente componentes hidrófobos e

hidrófilos.)

4. Agentes reductores. En presencia de reactivos como la urea, los agentes reductores, como el f3-
mercaptoetanol, convierten los puentes disulfuro en grupos sulfhidrilos. La urea rompe los enlaces de
hidrógeno y las interacciones hidrófobas.

5. Concentración salina. La unión de iones salinos a los grupos ionizables de una proteína disminuye la
interacción entre los grupos de carga opuesta sobre la molécula proteica. Las moléculas de agua pueden
entonces formar esferas de solvatación alrededor de estos grupos. Cuando se añaden grandes cantidades de
sal a una proteína en disolución se forma un precipitado. El gran número de iones salinos puede competir de
forma eficaz con la proteína por las moléculas de agua, es decir, se eliminan las esferas de solvatación que
rodean a los grupos ionizados de la proteína. Las moléculas proteicas se agregan y luego precipitan. Este
proceso se denomina salting out. Debido a que el «salting out» es reversible, suele emplearse como un
primer paso en la purificación de proteínas.

6. Iones metálicos pesados. Los metales pesados, como el mercurio (Hg 2) y plomo (Pb2) afectan de varias
maneras a la estructura proteica. Pueden romper los puentes salinos al formar enlaces iónicos con los grupos
con carga negativa. Los metales pesados también forman enlaces con los grupos sulfidrilo, un proceso que
puede dar lugar a cambios significativos de la estructura y función proteica. Por ejemplo, el Pb+2 se une a los
grupos sulfhidrilo de dos enzimas de la ruta de síntesis del hemo El descenso de la síntesis de hemoglobina
que se produce da lugar a una anemia grave. (En la anemia disminuye por debajo de lo normal el número de
eritrocitos o la concentración de hemoglobina). La anemia es uno de los síntomas que se mide con mayor
facilidad en el envenenamiento por plomo.

7. Cambios de temperatura. Al aumentar la temperatura, aumenta la velocidad de vibración molecular.

Finalmente, se rompen las interacciones débiles como los enlaces de hidrógeno, y la proteína se despliega.
Algunas proteínas son más resistentes a la desnaturalización por el calor, y este hecho puede utilizarse en
los procedimientos de purificación.

9. Agresión mecánica. Las acciones de agitación y trituración rompen el delicado equilibrio de fuerzas que
mantiene la estructura proteica. Por ejemplo, la espuma que se forma cuando se bate vigorosamente la clara
de huevo contiene proteína desnaturalizada.

pág. 41
 ACTIVIDAD de Aprendizaje:
Formen equipos de cuatro personas para elaborar un modelo tridimensional o maqueta que represente
cada una de las estructuras de las proteínas (primaria, secundaria, terciaria y cuaternaria) en el que señales
sus componentes básicos y los diferentes tipos de enlaces.

ACTIVIDAD Integradora

Organízate de acuerdo a las instrucciones de tu profesor y elabora una infografía de las proteínas más importantes
en tu cuerpo.

Referencias

Ferrier, D. R. (2001). Bioquímica. Pennsylvania: Wolters Kluwer.

T. (2003). Trudy McKee, James R. McKee. Salamanca: Mc Graw Hill.

pág. 42
 BLOQUE
III
EJE: Distingue la estructura y organización de los componentes naturales del Planeta.

Compuestos Biológicos Nitrogenados

Ácidos Nucleicos y Síntesis de proteínas

pág. 43
 Bloque III: Compuestos Biológicos Nitrogenados

Competencias a desarrollar en el Bloque

4.1 Expresa ideas y conceptos mediante representaciones lingüísticas, matemáticas o gráficas.
5.3 Identifica los sistemas y reglas o principios medulares que subyacen a una serie de fenómenos.
6.4 Estructura ideas y argumentos de manera clara, coherente y sintética.

3.1 Ácidos nucleicos, su estructura y su diferenciación, los procesos que

realizan en la reproducción celular de los seres vivos.

Aprendizaje Esperado

Analiza las estructuras de los ácidos nucleicos mediante la identificación, explicación, y diseño de los
procesos de transcripción, traducción y replicación, para comprender su importancia en el desarrollo de
los procesos vitales de la reproducción celular.

INTRODUCCIÓN. realizaron muchos estudios donde se encontraron que

Durante muchos siglos no se entendían los patrones
de la herencia, mecanismos que trasmitían rasgos
físicos de padres a hijos. En 1866 Gregorio Mendel
público su trabajo sobre las leyes de la herencia,
Friedrich Miescher extrajo por primera vez en 1869 un
material llamado nucleina, la cual era una sustancia
acida y albuminoide rico en fosforo que combinada
con una base nitrogenada le llamo protamina, la
nucleina era una nucleoproteína, de ahí su nombre,
del hecho de ser sustancias acidas y haberse
encontrado por primera vez en los núcleos (ácidos
nucleicos).
En 1889 Richard Altmann obtuvo el primer material
libre de proteína al que le llamo ácido nucleico, se
estas sustancias también contenían guanina e
hipoxantina, todo esto recuperado después de
muchas décadas se consideró, eran genes.
En 1944 los experimentos de Oswal y colaboradores
demostraron que el ADN es el portador de la
información genética, a principios de la década de los
cincuentas Alfred Mirsky y Roger Vendrely
demostraron que todas las células de los distintos
tejidos de un organismo contienen la misma cantidad
de DNA, la diferencia solo radicaba en los gametos,
estos tienen la mitad de ADN por célula que otras
células del mismo organismo. En 1953 James Watson
y Francis Crick determinan la estructura de la doble
hélice del ADN, explicando las propiedades del gen,
que era su capacidad de reproducirse exactamente, de

pág. 44
trasmitir información y de sufrir mutación. En 1957
Arthur Kornberg y sus colegas aislaron la enzima DNA
polimerasa de bacterias.
El conocimiento de la estructura de los ácidos
nucleicos permitió poner en claro el código genético
descifrado por Marshall Nirenberg, en 1961 Francis
Crick expuso los argumentos matemáticos y biológicos
en favor de un código genético triple, tres bases de
nucleótidos adyacentes llamado codón. Por lo que
para 1970 ya se había desarrollado la tecnología del
ADN recombinante, secuenciando el ADN en 1957 por
Frederick Sanger, e inventándose en 1983 la técnica de
la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) por Kary
Mullis.
En 1990 se inicia el proyecto del Genoma humano
(PGH) por Francis Collins, se comercializan genes
sintéticos que en 2003 completaron el proyecto del
genoma humano.
Todo lo anterior fueron acontecimientos y trabajos
que revolucionaron a las ciencias, avances que
transformando y desarrollaron la investigación
científica y que actualmente es la genética.
se clasifican en dos tipos: ácido desoxirribonucleico
ADN (polímero de desoxirribonucleótidos) y ácidos
ribonucleicos ARN (polímero de ribonucleótidos), se
diferencian por los nucleótidos que las constituyen, el
tipo de pentosa y las bases nitrogenadas,
características de cada una de ellos, los dos tipos de
ácidos nucleicos están presentes simultáneamente en
todas las células vivas. Hay muchos tipos distintos,
tanto de RNA como de DNA que difieren en base a sus
funciones metabólicas y detalles estructurales.
Una propiedad química que diferencia el ADN del ARN
es la sensibilidad a la hidrolisis, el ADN es estable en
medio alcalino y solo se hidroliza en medio acido, en
cambio el ARN puede hidrolizar tanto en medio acido
como alcalino.
Los ácidos nucleicos se forman por la unión de
unidades nucleotídicas mediante enlaces éster-fosfato
donde reacciona el ácido fosfórico unido al carbono
5´de la pentosa de un nucleótido y el hidroxilo del
carbono 3´ de la pentosa de otro nucleótido, conocido
como puente o enlace fosfodiéster.

Al final se identificó el ADN como el portador de la

información genética

3.1.1.1 Generalidades (bases nitrogenadas,

azúcares y grupo fosfato)
Los ácidos nucleicos son moléculas complejas
(macromoléculas), mayores que las de casi todas las
proteínas (elevado peso molecular), son biomoléculas
que contienen carbono, oxigeno, hidrogeno,
nitrógeno y fosforo, portadoras de la información
genética de los organismos, por lo que son
responsables de la trasmisión hereditaria y la síntesis
de proteínas, están formados por subunidades de
polímeros lineales de nucleótidos, cada uno con una
base nitrogenada , una azúcar de cinco carbonos y
ácido fosfórico, estos nucleótidos son centenares de
millones unidos por enlaces éster de fosfato, en una
sola estructura covalente, de elevado peso molecular, Figura 3.1 Estructura de una cadena de ADN

pág. 45
Siempre que los nucleótidos se van uniendo mediante
un puente fosfodiéster el dinucleótido formado tendrá
libre 5´ fosfato que puede reaccionar con el grupo
hidroxilo 3´ de otro nucleótido y un grupo hidroxilo 3´
libre que puede reaccionar con el grupo 5´fosfato de
otro nucleótido, de esta forma mediante puentes
fosfodiéster se enlazan gran cantidad de nucleótidos
para formar largas cadenas lineales que siempre
tendrán en un extremo un grupo 5´fosfato libre y en el
otro extremo un grupo hidroxilo 3´ libre, formando
cadenas polonicleótidicas que contienen miles de
unidades monoméricas unidos por puentes
fosfodiéster.
Figura 3.2
Cuando se realiza la hidrólisis completa de los ácidos
nucleicos, se obtienen tres tipos de componentes
principales: azúcar (pentosa), bases nitrogenadas
(purinas y pirimidinas) y ácido fosfórico.
Los dinucleótidos importantes en los procesos
metabólicos se les denomina coenzimas, son
cofactores necesarios para el funcionamiento de
ciertos sistemas enzimáticos y son: NAD (dinucleótido
de niacina-adenina) es de gran importancia como
electrón primario y aceptor de hidrogeno en las
reacciones de oxidación celulares. El NAD es
transformado a partir de enzimas deshidrogenasas
que eliminan electrones e hidrogeno de moléculas
como las del ácido láctico. El NADP (dinucleótido de
niacina-adenina-fofato), es un aceptor de electrones
e hidrogeno para otras enzimas, es igual al NAD pero
con un tercer grupo de fosfato unido a la ribosa del
nucleótido de adenina. El FAD (dinucleótido de
adenina –flavina) se forma de rivoflavina-ribitol-
fosfato-ribosa-adenina, sirve como aceptor de
hidrogeno y electrones para otras deshidrogenasas.
Los nucleótidos y las coenzimas están relacionados
estructuralmente con los ácidos nucleicos, sin
embargo, tienen papales diferentes en la función
celular, como el ATP (trifosfato de adenosina),
compuesto por una azúcar pentosa (ribosa), una base
púrica (adenina) y tres fosfatos, la mayor parte de la
energía química de la célula es almacenada en los
enlaces fosfatos del ATP, para ser liberada cuando el
grupo de fosfatos es transferido a otra molécula. Otros
ejemplos son: el GTP (trifosfato de guanosina), sus
requerimientos son específicos en algunas etapas de
la síntesis de proteínas. El UTP (trifosfato de uridina),
se requiere específicamente en ciertas etapas del
metabolismo de los carbohidratos, como en la síntesis
de glucógeno y el CTP (trifosfato de citidina),
necesaria específicamente para ciertas etapas de la
síntesis de grasas y fosfolípidos. Todos estos
trifosfatos nucleótidos son necesarios para la síntesis
de RNA y los trifosfatos nucleótidos desoxirribosa se
necesitan para la síntesis del DNA (dATP, dGTP, dCTP y
d TTP).
pág. 46
Ácido ribonucleico. ARN o RNA (ribose nucleic acid)

En células eucarióticas el RNA se encuentra en el núcleo, especialmente en el nucléolo, en los ribosomas y en

cantidades menores en otras partes de la célula.

El RNA es un polímero de ribonucleótidos, actúa en el citoplasma, se forma por una azúcar (pentosa) que es la D-
ribosa, las bases nitrogenadas que son purinas: adenina, guanina, y pirimidinas: citosina y uracilo, y ácido fosfórico.
El uracilo toma el lugar de la timina en el ADN.

Hay tres tipos de ARN con funciones distintas y específicas en la síntesis de proteínas y otros procesos celulares, los
cuales son los siguientes:

a) ARN mensajero (mRNA o ARNm).

Transporta el mensaje genético del ADN a los ribosomas, para dirigir la síntesis de proteínas, representa el 5%
del ADN total.

b) ARN ribosomal (rRNA o ARNr).

Lleva este nombre porque forma parte de la estructura de los ribosomas, está formado por un grupo de
moléculas que se clasifican en base a sus coeficientes de sedimentación, los cuales son 23s, 16s y 5s en
procariontes, 28s, 17s, 7s y 5s en eucariontes. Es el de mayor proporción ya que constituye el 80% del total,

c) ARN de transfrencia (tRNA o ARNt).

Es una familia de moléculas más pequeña de los ácidos nucleicos, su función es acoplar la información del
RNAm con los aminoácidos, constituye el 15% restante del total del ARN.

En el núcleo existe un grupo heterogéneo de moléculas de ARN denominadas hnRNA que cumplen funciones
catalíticas en diversos procesos.

Acido desoxirribonucleico ADN o DNA (deoxyribonucleic acid)

Se encuentra en el núcleo celular específicamente en secuencia de bases es un gen que se requiere para
los cromosomas, en cantidades menores está codificar polipéptidos o moléculas de ARN.
presente en las mitocondrias y en el estroma de los
La orientación antiparalela de las dos cadenas
cloroplastos. Está formado por dos cadenas
polinucleótidas permite que se formen puentes de
polinucleotidas enrolladas un alrededor de la otra
hidrogeno en pares específicos complementarios,
(escalera en espiral) para formar una doble hélice
entre las bases nitrogenadas que están orientadas
dextrógira, cada monómero nucleotídico se forma por
hacia el interior de la hélice.
una azúcar (pentosa) que es la 2-desoxi-D-ribosa, una
base nitrogenada ya sea púricas: adenina y guanina, y Existen dos clases de pares de bases en el ADN la
pirimidínicas citosina, timina y ácido fosfórico. adenina que es una purina se empareja con la timina
que es una pirimidina (AT) y la guanina que es una
El ADN dirige el funcionamiento de las células y se
purina se empareja con la citosina que es una
transmite a la descendencia, la información contenida
pirimidina (GC), cada par de bases es perpendicular al
en esta molécula esta codificada por la secuencia de
eje largo de la hélice.
bases púricas y pirimidínicas, la información de una

pág. 47
Esta doble hélice contiene dos cadenas de azúcar- BASES PÚRICAS.
fosfato en el exterior de la molécula, mientras que en
Son derivadas de la purina, se obtienen por adición de
la parte interna las bases nitrogenadas están
diferentes grupos funcionales en distintas posiciones
enlazadas por puentes de hidrogeno, formando pares
de los anillos de la purina o de la pirimidina (fusión de
de tamaños casi idénticos, aunque las bases son de
un anillo pirimidínico y uno de imidazol) y las más
forma irregular, la molécula puede adoptar una
abundantes son dos: adenina (6-aminopurina) y
conformación helicoidal regular.
guanina (2-amino-6-hidroxipurina)
La secuencia de bases constituye la información
genética, y las variaciones en la secuencia entre los
diferentes individuos dan lugar a la asombrosa
complejidad de los organismos.

I. BASES NITROGENADAS.

Forman parte de los ácidos nucleicos, son compuestos

aromáticos heterocíclicos derivados de las bases
orgánicas purina y pirimidina, los dobles enlaces
conjugados de sus anillo le dan el carácter aromático,
su conformación espacial es casi planar, los nitrógenos
presentan pares de electrones no compartidos con BASES PIRIMIDÍNICAS.
disposición a atraer protones por lo que tiene un
carácter débilmente básico, son insolubles en agua y Son derivadas de la pirimidina y son tres las más
pueden presentan interacciones hidrófobas entre abundantes en los ácidos nucleicos: timina (2,6-
ellas, estas interacciones estabilizan la estructura dihidroxi-5-metilpirimidina ó 5-metiluracilo), la
tridimensional de los ácidos nucleicos: citosina (2-hidroxi-6-aminopirimidina) y uracilo (2,6-
dioxipirimidina).

Algunos virus presentan otras bases nitrogenadas

púricas, como la hipoxantina, xantina, 2-metiladenina,
6-metil-aminopurina y pirimidínicas como la 5-
metilcitocina y la 5-hidroximetil citosina. La proporción de las bases nitrogenadas son
diferentes en los distintos organismos por lo que
Las bases nitrogenadas absorben luz en el rango
Chargaff propuso reglas para la doble hélice del ADN:
ultravioleta (250-280 nm) dicha propiedad es
importante para su estudio y cuantificación.

pág. 48
 • La proporción de Adenina (A) es igual a la de
Timina (T). A=T. La relación entre Adenina y
Timina es igual a la unidad (A/T=1)
• La proporción de Guanina (G) es igual a la de
Citosina (C). G=C. La relación entre Guanina y
Citosina es igual a la unidad (G/C=1)
• La proporción de bases púricas (A+G) es igual
a la de las bases pirimidínicas (T +C). (A +G) =
(T+C). La relación entre (A+G) y (T+C) es igual
a la unidad (A+G) / (T+C) = 1
• Sin embargo, la proporción entre (A + T) y (G +
C) era característica de cada organismo,
pudiendo tomar, por tanto, diferentes valores
según la especie estudiada. Este resultado
indicaba que los ácidos nucleicos no eran la
repetición monótona de in tetranucleótido.
Existía variabilidad en la composición de bases
nitrogenadas.
II. AZÚCARES.
Los azúcares son pentosas del ARN y ADN, solubles en
agua y se encuentran en la forma cíclica de furanosa,
lo que implica que sean casi planas. Los carbonos de
las pentosas se enumeran con números prima (5´, 3´)
para no confundirlos con la nomenclatura de los
carbonos de las bases nitrogenadas
III. GRUPO FOSFATO.
El fosfato es un derivado del ácido fosfórico, en los
nucleótidos es responsable de su carácter ácido y gran
parte de la solubilidad, participa en la formación de los
enlaces éster que mantienen unidos los nucleótidos y
el tipo de ácido que se encuentra en los nucleótidos es
el ácido ortofosfórico (H3PO4).
3.1.1.2 NUCLEÓSIDOS: (pentosa + base
nitrogenada).
Definición.
Un nucleósido se forma por la unión entre un
monosacárido, que es una pentosa (D-ribosa o 2-
desoxi-D-ribosa) y la base nitrogenada, esta unión se
lleva a cabo a través del carbono 1 de la pentosa
(ribosa o desoxirribosa) y los nitrógenos de las
porciones 1 (pirimidinas) o 9 (purinas) de las bases
nitrogenadas mediante un enlace N-glucosídico con
configuración beta, este enlace glucosídico es sencillo,
las bases presentan dos conformaciones diferentes
anti (el plano de la base está alejado del plano del
azúcar) y syn (cuando las bases están sobre el plano
del azúcar): la siguientes imágenes representan el
nucleosido de adenina en conformación syn y de
citosina en conformación anti:
pág. 49
Estructura.
Existen dos tipos de nucleósidos, si hablamos de ARN
estamos hablando de ribonucleosidos (contienen
Beta-D-ribosa como componente glucosidico) y si
hablamos de ADN hablamos de
desoxirribonucleosidos (contienen B-D-desoxirribosa).
Para nombrar a los nucleosidos se añade la
terminación osina al nombre de la base nitrogenada si
esta es púrica, y si es pirimidínica se añade la
terminación idina, anteponiendo el prefijo desoxi si
son desoxirribonucleosidos.
3.1.1.3 NUCLEÓTIDOS: (pentosa + base
nitrogenada + ácido fosfórico).
Definición.
Los nucleótidos son moléculas que se pueden
presentar libres en la naturaleza o polimerizadas,
forman parte de los ácidos nucleicos, pero también de
otras moléculas que no son ácidos nucleicos como
moléculas portadoras de energía o coenzimas.
Participan en una amplia gama de procesos
bioquímicos.
Es la unión de un nucleósido con el ácido fosfórico a
través de un enlace de tipo éster (fosfodiéster) entre
Existen otros nucleótidos trifosfato como GTP, CTP, y UTP que pueden llegar a sustituir al ATP en este proceso.
el grupo OH del carbono 5´ de la pentosa
(monosacárido) y el ácido fosfórico, en esta unión se
libera una molécula de agua, generalmente es en la
posición 5´, los nucleósidos son los 5´ fosfatos de los
correspondientes nucleósidos, el grupo fosfato que se
encuentra ionizado a pH de 7 les confiere a los
nucleótidos un carácter acido.
Los mononulceótidos están unidos mediante enlaces
3´, 5´- fosfo-diéster, estos enlaces unen el grupo
hidroxilo 5´de la desoxirribosa de un nucleótido con el
grupo hidroxilo 3´del azúcar de otro nucleótido
mediante un grupo fosfato.
Además de que los nucleótidos forman parte de la
estructura de los ácidos nucleicos pueden presentar
otras funciones, entre las cuales podemos citar que el
nucleósido Adenosina tiene funciones de
neurotransmisor. El trifosfato de adenosina (ATP)
actúa en todas las células transportado energía, en
procesos metabólicos que la liberan y en aquellos que
la requieren, ya que los enlaces anhidro que unen los
grupos fosfato adicionales de los nucleótidos di y tri
fosfato son enlaces ricos en energía, necesitan aporte
energético para formarse y liberar la energía cuando
se hidrolizan, para que puedan actuar como
transportadores de la misma, otros nucleótidos o
derivados de ellos pueden actuar como coenzimas
(FAD, NAD, NADP), entre otros .
pág. 50
Si hablamos de ADN hablamos de Los nucleótidos se clasifican en dos tipos:
desoxirribonucleotidos, si hablamos de ARN hablamos ribonucleótidos y desoxirribonucleótidos según la
de ribonucleotidos. azúcar que contengan, para nombrarlos se identifican
las tres letras mayúsculas, la primera de ellas es la
Los nucleótidos se unen entre sí para formar largas
inicial de la base nitrogenada, la segunda indica si el
cadenas de polinucleótidos, esta unión entre
nucleótido es mono, di o trifosfato, y la tercera es la
monómeros nucleótidos se lleva a cabo mediante
inicial del grupo fosfato, en el caso de los
enlaces fosfodiéster entre los carbonos de las
desoxirribonucleótidos se antepone una “d”
posiciones 3´ del nucleótido con la 5´del siguiente. Se
minúscula.
liberan mediante hidrolisis controlada y están
formados por tres moléculas una base nitrogenada,
monosacárido y un grupo fosfato. BASE INIC NUCLEÓSI NUCLEOTIDO
NITROGENA IAL DO
DA
Adenina A Adenosina Adenosin-5´-
Estructura. monofosfato (AMP)
Los nucleótidos son las unidades estructurales Guanina G Guanidina Guanosin-5´-
monofosfato (GMP)
(monómeros) de los ácidos nucleicos utilizadas para
Citosina C Citidina Citidin-5´-
construir largas cadenas de polinucleótidos
monofosfato (CMP)
Klein y Thannhauser obtuvieron Uracilo U Uridina Uridin-5´-
monofosfato (UMP)
desoxirribunucleótidos estableciendo que cada
Timina T Timidina Ribotimidim-5´-
nucleótido está unido por un enlace fosfodiéster del monofosfato (dtMP)
hidroxilo 5’ al hidroxilo 3’.

Cada nucleótido se forma por una desoxirribosa, una

base púrica o pirimidínica y un grupo fosfato, pueden
tener 1, 2 o 3 grupos fosfato unidos al carbono 5´ de la
pentosa, por lo que sería nucleótidos 5´monofosfato,
nucleótidos 5´difosfato y nucleótidos 5´trifosfato, en
algunos casos el ácido fosfórico se une a la pentosa por
el carbono 3´por lo que serían nucleótidos
3´monofosfato, difosfato o trifosfato de acuerdo al
número de grupos fosfato que contenga.

Figura 3.3

Otra forma para nombrarlos es anteponer la palabra

“acido” y añadir la terminación “ilico”.

pág. 51
Estructura primaria de los ácidos nucleicos.
Los ácidos nucleicos se forman cuando el grupo
fosfato de un nucleótido se une al OH de 3´del azúcar
de otro nucleótido mediante un enlace éster, esta
unión de nucleótidos depende de dos enlaces éster
con una misma molécula de fosfato por lo tanto se
designa enlace diéster de fosfato o fosfodiéster,
obteniendo una cadena denominada polinucleótido,
estos varían desde los 70 nucleótidos (tRNA) hasta
cientos de millones (DNA), estas cadenas presentan
dos extremos distintos, en el extremo 5´, la posición
del azúcar no participa en enlace con ningún otro
nucleótido y el extremo 3´ en el que el carbono del
nucleótido se encuentra libre, por lo que se
acostumbra a representar las cadenas de nucleótidos
en dirección 5´a 3´ de izquierda a derecha.
La secuencia de las bases se representa en forma
abreviada con letras mayúsculas A=AMP (Adenosin-5´-
monofosfato), G=GMP (Guanosin-5´-monofosfato),
C=CMP (Citidin-5´-monofosfato), U=UMP (Uridin-5´-
monofosfato) y T=TMP (timidim-5´-monofosfato).
Cuando se nombran desoxirribonucleótidos se
antepone una d, dA=desoxi AMP (Desoxiadenosin-5’-
monofosfato) que pertenece al nucleósido
desoxiadenosina de la adenina del DNA. Las
secuencias se deben de escribir con el extremo 5´a la
izquierda distinguiendo a los fragmentos de DNA y
RNA por la “d” que se antepone a los desoxinuclótidos,
o bien por la Uridina y Timina que se encuentran en el
RNA y DNA respectivamente.
Estructura secundaria de los ácidos nucleicos.
Se forma por la complementariedad de las bases
púricas y pirimídicas y está dada por el número y
posición de los puentes de hidrogeno que pueden
formar dos entre A y T y tres entre G y C.
La estructura secundaria del RNA está formada por
una sola cadena de nucleótidos que pueden presentar
zonas de doble hélice. La estructura secundaria del
RNAt se le conoce como hoja de trébol, se forma por
un tallo con tres o cuatro brazos, tres brazos son
constantes y el cuarto es variable, en el tallo están los
extremos terminales, el 3´corresponde al sitio de
unión del aminoácido, los brazos se enumeran del I al
III a partir del extremo 5´,, el brazo II es el “asa del anti
codón”, en esta asa se encuentra la secuencia de
nucleótidos que forma el anti codón complementario
del codón del RNAm, los brazos I y III se encuentran en
posiciones equivalentes algunos nucleótidos
modificados, el brazo IV tiene un número de
nucleótidos variable y algunos RNAt no lo presentan.
Estructura terciaria de los ácidos nucleicos.
El DNA tiene una longitud que excede el tamaño de la
célula por lo que la molécula se pliega, su estructura
compacta se puede acomodar dentro del núcleo de la
célula, en las células eucariotas este plegamiento
depende de la interacción del DNA con proteínas para
formar la cromatina, las histonas son las proteínas de
condensación más abundante, son pequeñas con gran
cantidad de lisina y arginina, son aminoácidos con
carga positiva que interactúan con las cargas negativas
del fosfato del DNA. El grado de condensación de la
cromatina depende de la región del genoma, las partes
que no se expresan están más compactas.
La primera parte de compactación del genoma es la
formación de los nucleosómas, por lo que la cadena
del DNA debe dar dos vueltas, donde se encuentran
146 pares de bases alrededor de un núcleo formado
por cuatro tipos de histonas (H2A, H2B, H3 y H4) ya
que H1 mantiene la integridad del nucleosóma, la
siguiente imagen representa la estructura del
nucleosóma con una vista frontal seguida de una vista
lateral.
Los nucleosómas están separados entre sí por 60 pares
de bases del DNA y se pueden compactar más
formando un selenoide con 6 nucleosómas por vuelta
de aproximadamente 30 nm de diámetro.el túbulo
formado por el selenoide se pliega formando asas
ancladas en una matriz de proteínas no histónicas, se
sigue plegando para formar una espiral con 18 asas en
cada vuelta, estas estructuras forman las minibandas
de los cromosomas.
pág. 52
3.1.1.4 ESTRUCTURA Y FUNCIÓN BIOLÓGICA DEL ADN
El ADN es un participante importante en la vida de la iguales y que también lo son las cantidades de guanina
célula, cada hélice es un polímero conformado por y citosina. Entre adenina y timina se forman dos
millones de nucleótidos los cuales son los monómeros, enlaces de hidrogeno y entre guanina y citosina se
las dos cadenas de ADN son anti paralelas y se unen forman tres enlaces de hidrogeno, cada uno de ellos
entre sí a través de puentes de hidrógeno que se con diferentes dimensiones:
forman entre las bases complementarias (A-T y G-C)
de las dos hebras del ADN, formando la estructura de
doble hélice, una cadena corre en dirección 5´a 3´ y la
otra lo hace de 3´a 5´, las cadenas giran alrededor de
un eje común formando una espiral llamada doble
hélice, las cadenas se mantienen unidas por
interacciones hidrófobas entre las bases que al ser
planas se apilan una sobre otra en el interior de la
hélice, las cadenas se unen por enlaces de hidrogeno
entre pares específicos de purinas y pirimidinas , los
puentes de hidrogeno aseguran la
complementariedad (las bases nitrogenadas :purinas y
pirimidinas de los nucleótidos se encuentran
orientadas hacia el interior de la hélice), y tienen los
grupos fosfato terminales en extremos opuestos de la
doble hélice (los grupos fosfato y las desoxirribosas
(azúcares) lo hacen hacia el exterior) formando los
esqueletos fosfodiéster de cada hélice.

Si tomamos en cuenta que la estructura del ADN es
una escalera imaginaria, las moléculas de azúcar y
fosfato de las cadenas de nucleótidos constituyen las
barandillas de la escalera y los peldaños están
formados por las bases nitrogenadas mantenidas
juntas por enlaces de hidrogeno, (De acuerdo al
modelo molecular de Watson y Crick las
combinaciones adenina-timina y guanina-citosina
encajaban en el espacio disponible, mientras que otras
combinaciones no encajaban), cada peldaño cruzado
debe contener una purina y pirimidina, el espacio
disponible con la periodicidad de 2.0 nm acomodaría
una purina y una pirimidina, pero no dos purinas, que
serían demasiado grandes, ni dos pirimidinas que no
se unirían lo bastante para formar enlaces de
hidrogeno apropiados. Debido a este emparejamiento
de bases específicas Chargaff estableció reglas
indicando que las cantidades de adenina y timina
existentes en cualquier molécula de DNA son siempre
Figura 3.4 Estructura del DNA: Dimensiones de los pares de
bases AT y GC
Todas las estructuras secundarias del DNA conservan
las características generales del modelo de Watson y
Crick, la doble hélice da un giro completo a la derecha
abarcando 3.32 nm (sentido de las manecillas del reloj)
cada diez pares de bases (10 nucleótidos), recorriendo
una distancia de 3.4 nm de largo, con un diámetro de
ancho de 2.37 nm.
La diferencia en el número de puentes de hidrogeno
de los pares A-T y G-C influye en la desnaturalización
del DNA, que consiste en la separación de las cadenas
de la doble hélice para quedar como hebras sencillas,
su temperatura de fusión del DNA permite que se
desnaturalice al 50%, va aumentando si hay mayor
cantidad de pares G-C

pág. 53
La función de los ácidos nucleicos es de
almacenamiento, expresión y replicación de la
información biológica, todas las moléculas de ADN
tienen una configuración similar. El ADN de una
determinada especie de organismos tiene una
secuencia de bases propia, su estructura primaria esta
agrupada en unidades funcionales llamadas genes, la
información de esta secuencia presenta diversas
funciones, los genes estructurales codifican para
enzimas, proteínas estructurales y proteínas
reguladoras, en cambio otro tipo de genes codifican
para moléculas de ARN que no especifican la
estructura primaria de un polipéptido.

Los pares de nucleótidos se encuentran separados

entre sí por 3.4 A°, cada diez pares de nucleótidos (34
A°) alcanza una vuelta de la hélice.

El modelo de Watson y Crick explicaba como el ADN

llevaba las funciones necesarias para ser el portador
de la función hereditaria,

La diferencia entre el ADN que forma el material

genético de los seres vivos es la secuencia de los
millones de estos cuatro tipos de nucleótidos con sus
bases (A, G, T, C) en cada molécula de ADN.

Constituyen el depósito de información de todas las

secuencias de aminoácidos de las proteínas de las
células
Figura 3.5 Ácido Desoxirribonucleico (ADN.
Existe una correlación entre ácidos nucleicos y Tomado de: https://www.genome.gov/es/genetics-
proteínas y es a lo que se llama código genético, a una glossary/Nucleotido
secuencia de tres nucleótidos en un ácido nucleico
corresponde un aminoácido en una proteína.

Para la a distribución de los ácidos nucleicos en las

células eucariotas es el 95% del ADN se encuentra en
el núcleo, el resto en las mitocondrias y cloroplastos,
el 20% del ARN se encuentra en el núcleo y el resto en
el citoplasma.

La secuencia ordenada de los nucleótidos y las

características polinucleótidas proporcionan las bases
físico-químicas para que estas macromoléculas
almacenen y transmitan la información genética en el
proceso de reproducción de los seres vivos, lo que
establece su función biológica primordial.

pág. 54
 ACTIVIDAD de Aprendizaje:
Completa la siguiente tabla comparativa de la estructura y función de los ácidos nucleicos:

Características ADN ARN

Estructura de la cadena

Localización en las células

Bases púricas

Bases pirimídicas

Azúcar (pentosa)

Función

Uniones de las bases

nitrogenadas

Tipos de ácidos nucleicos

pág. 55
3.1.1.5 ESTRUCTURA Y FUNCIÓN BIOLÓGICA DEL ARN.
Además de sus funciones bien conocidas en la síntesis
de proteínas, los RNA son moléculas con una gran
versatilidad que realizan funciones antes consideradas
exclusivas de las proteínas. Son ejemplos la regulación
de la expresión génica, la diferenciación celular y la
catálisis. Las propiedades funcionales de los RNA se
deben a su estructura. La estructura primaria de los
polirribonucleótidos es similar a la de sus contrapartes
de DNA, pero existen varias diferencias:
notable de actividad de ribozima es la formación de
enlaces peptídicos dentro de los ribosomas. Suele
requerirse un ion magnesio como cofactor para la
catálisis por RNA, porque el Mg +2 estabiliza los
estados de transición.
ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL RNA.

1. El azúcar del RNA es ribosa en lugar de la DNA

desoxirribosa.La presencia del grupo 2 ´- OH de la
ribosa hace al RNA más reactivo que el DNA.

2. Las bases nitrogenadas del RNA se diferencian en

cierta medida de las que se observan en el DNA. En
lugar de timina, las moléculas de RNA utilizan uracilo,
además, las bases de algunas moléculas de RNA son
modificadas por enzimas (p.ej., metilasas, tiolasas y
desaminasas).

3. A diferencia de la doble hélice del DNA, el RNA es

monocatenario. Por tal razón, el RNA puede enrollarse
sobre sí mismo y formar estructuras tridimensionales
singulares y con frecuencia bastante complejas. La
forma de estas estructuras la determina el
Figura 3.6. En las moléculas del RNA se producen muchos tipos
emparejamiento de bases complementarias de diferentes de estructuras secundarias. Las horquillas se forman
secuencias específicas del RNA, asi como el cuando existen al menos cuatro bases que forman pares. Las asas
apilamiento de bases y las interacciones que ocurren internas se forman cuando ambos lados de un segmento doble no
entre regiones de doble cadena (formadas a partir de pueden formar pares de bases

regiones monocatenarias de la misma molécula o

entre regiones monocatenarias de moléculas vecinas)
y lazos de RNA libres. Enlas regiones de doble cadena
se aplican las reglas del emparejamiento de bases,
donde se unen A-U, G-U y G-C. Las regiones de RNA
en lazo o de cadena individual (ssRNA) contienen
varias bases modificadas en las moléculas de RNA
maduro no mensajero.
4. Las moléculas de RNA tienen propiedades catalíticas
debido a que pueden formar estructuras
tridimensionales complejas con endiduras de unión.
La mayoría de las moléculas de RNA catalítico, que se
conocen como ribozimas, catalizan auto escisión o la
rotura de otros RNA. Sin embargo, el ejemplo más
Estructura y función Biológica del ARN
Esté ácido nucleico se encuentra constituido por una
cadena sencilla de nucleótidos (un grupo fosfato, un
azúcar pentosa de cinco carbonos llamada ribosa y una
base nitrogenada), que puede doblarse sobre sí misma
mediante la formación de pares de bases en alguna
sección de la molécula. Aquí esta puede enlazarse
sobre sí misma y formar una estructura en horquilla
hasta parecer una doble hélice. Presenta además una
forma de apilamiento de una sola cadena que suele
llamarse hélice de una sola cadena.

pág. 56
A veces existen en la molécula de RNA ciertas regiones
con secuencias complementarias que son capaces de
aparearse y dar lugar a estructuras de doble hélice o
terciarias como en el caso de los virus llamados
retrovirus.
La molécula de RNA presenta una estructura primaria
igual que el DNA, es decir se refiere a la secuencia de
las bases nitrogenadas unidas por enlaces y dadas por
el código genético. Es de menor tamaño que en el
DNA.
Las bases nitrogenadas con las que copia al RNA son
adenina(A), uracilo (U), guanina (G) y citosina (C). La
adenina se une con el uracilo y viceversa y la guanina
con la citosina.
El RNA se puede localizar en el nucléolo, núcleo,
citoplasma y en los ribosomas de la célula eucarionte,
así como en el citoplasma y ribosomas de las células
procariontes, incluso el RNA puede ser el único
material genético con el que cuenta cierto tipo de
virus. El RNA es un polímero muy versátil que presenta
en nuestras células tres tipos de moléculas, cada una
con funciones específicas.
Tipos del ARN
Los principales RNA presentes en todos los tipos de
células son el RNA mensajero (mRNA), el RNA de
transferencia (tRNA) y el RNA ribosomal (rRNA). En el
E. coli, las cantidades relativas aproximadas de cada
uno son 2% de mRNA, 16% de tRNA y 82% rRNA. Como
estimación aproximada, una distribución similar es
aplicable a todas las células en general. Los tres tipos
son estructuras de una sola cadena formadas durante
el proceso de transcripción de genes específicos del
DNA. Una vez formados todos participan en el proceso
de biosíntesis de proteínas llamada traducción. Cada
una de estas clases tienen de RNA tienen un tamaño y
función característicos, descritos por su velocidad de
sedimentación en una ultra centrifugación (S,
unidades Svedberg) o por su número de bases (nt,
nucleótidos, o kb, kilobases).
Mientras que el RNA ribosómico (rRNA) de las
procariotas está formado por 3 tamaños diferentes de
RNA, el rRNA de los eucariotas puede tener hasta 4
tamaños. Estos RNA interactúan uno con otro, así
como con las proteínas, para formar un ribosoma (la
máquina básica en la que ocurre la síntesis de
proteínas).
El RNA ribosómico es la forma más abundante de RNA
en las células vivas, tiene una estructura de
complejidad extraordinaria. Aunque existen
diferencias entre la especie en la secuencia primarios
de nucleótidos de rRNA, la estructura tridimensional
global de esta clase de molécula esta conservada.
Como sugiere su nombre, rRNA es un componente de
los ribosomas.
Los RNA de transferencia (tRNA) están formados por
una sola clase de tamaño de 65-110 nt de largo;
funcionan como transportadores de aminoácidos y
como moléculas de reconocimiento que identifican la
secuencia de nucleótidos del mRNA y traducen esa
secuencia en la secuencia de aminoácidos.
Debido a que cada una de estas moléculas se une a un
aminoácido específico, las células poseen al menos
una clase de tRNA para cada uno de los 20
aminoácidos estándar. La estructura tridimensional de
las moléculas de tRNA, que se asemeja a una hoja de
trébol alabeada, es consecuencia en primera instancia
de un gran emparejamiento de bases intracatenario.
pág. 57
Figura 3.7. RNA DE TRANSFERENCIA. (a) Estructura Tridimesnsional de una molécula de tRNA. (b) Representación esquemática de una
molécula de tRNA. Se indican las posiciones de las bases que no varía y de las bases que varían con poca frecuencia.

Los RNA mensajeros (mRNA) representa la clase más heterogénea de los RNA que se encuentran en las células. El
tamaño oscila entre 500 nt hasta aproximadamente, 6 kb (algunos mRNA poco frecuentes pero muy importantes
tienen un tamaño mayor a 100 kb). Los mRNA son portadores de información genética, definen la secuencia de las
proteínas de la célula y son la copia de trabajo del genoma.

MOLÉCULAS DEL ARN

TIPO FUNCIÓN

ARN mensajero Copia fielmente la información contenida en el

DNA, para llevarla fuera del núcleo celular a
través de los poros de su membrana hacia los
ribosomas, donde se efectuará la síntesis de
proteínas.

ARN ribosómico Componente principal de los ribosomas.

ARN de transferencia Transportar aminoácidos a los ribosomas para

la síntesis de proteínas.

pág. 58
 ACTIVIDAD de Aprendizaje:
En equipo realiza una exposición sobre los mecanismos de replicación, transcripción y traducción.
REPLICACIÓN DEL DNA
También llamado autor replicación, duplicación o auto
duplicación. La replicación del DNA es un proceso que
forma parte de la síntesis del DNA, y consiste en el
emparejamiento complementario de bases de purina
y pirimidina entre una cadena original y la nueva que
se sintetiza. Tiene lugar antes de cada división celular,
el mecanismo por el que se producen las copias de
DNA es semejante en todos los seres vivos.
La separación de la doble cadena, “fusión” permite
que las secuencias de bases se copien formando dos
hélices hijas, en esencia idénticas, las moléculas de
DNA progenitoras originales, esta es la base de la
replicación de los sistemas biológicos. Una vez
separadas las dos cadenas cada una de ellas se utiliza
como molde para la síntesis de una cadena
complementaria, las enzimas que catalizan la
replicación del DNA se llaman DNA polimerasas.
El DNA en la vida de un organismo está sujeto a daños
que pueden ser provocados por diversos agentes,
lesiones que pueden provocar que la célula muera, un
cambio en el genoma, así como también a mutaciones
espontaneas y que puede transferirse a la siguiente
generación.
EL modelo de la estructura del DNA propuesto por
Watson y Crick con dos hebras de
polidesoxirribonulceotido enlazada por puentes de
hidrogeno entre las bases complementarias, indican
como pueden copiarse las cadenas de DNA, existen
dos posibles mecanismos de replicación:
1.- Un mecanismo conservador en el que la
molécula hija del DNA está formada por dos nuevas
hebras,
2.- Un mecanismo semiconservador en el que cada
hebra del DNA progenitor se cambian con una
hebra hija recién sintetizada
De acuerdo al experimento de Matthew Meselson y
Franklin Stahl se considera que el mecanismo
semiconservador es el correcto, donde una molécula
de DNA se duplica, las dos cadenas se separan y cada
una forma una nueva cadena, complementaria de ella.
Así se establecen dos nuevas cadenas. Los nucleótidos
de la nueva cadena se unen en un orden especifico,
porque cada purina o pirimidina de la cadena original
forma enlaces de hidrogeno con la pirimidinas o
purina complementaria del nucleótido trifosfato del
medio y las alinea en un orden complementario. Se
forman enlaces de fosfato éster debido a la reacción
de la enzima polimerasa DNA para unir los nucleótidos
adyacentes en la cadena, resultando una nueva
cadena de polinuclóetidos. La cadena nueva y la
original se enrollan entre sí, y se forman dos nuevas
moléculas de DNA, cada una de ellas idéntica a la
original.
Este proceso conocido como duplicación
“semiconservadora”
DNA polimerasas.
Se encuentran en los procariontes y existes de tres
tipos, la DNA polimerasa I de E. coli es una sola cadena
de polipétido, contiene un átomo de cinc por
pág. 59
molécula, esta enzima solo puede catalizar la
polimerización en la dirección 5´a 3´ ya que la adición
de un mononucleótido a partir de una
desoxirribonuclétidio 5´- trifosfato se verifica en el
oxidrilo 3´ de la cadena del DNA.
Todas las DNA polimerasas de procariontes también
muestran actividad exonucleasa, es decir pueden
hidrolizar el DNA eliminando los
desoxirribonucleotidos terminales. Estas enzimas
tienen dos tipos de actividad exonucleasa:
1.- Pueden hidrolizar el DNA de una sola hebra a partir
del extremo 3´de la cadena en la dirección 3´a 5´
(actividad exonucleasa 3´a 5´)
2.- pueden hidrolizar el DNA de doble hebra desde el
extremo 5´ (actividad exonucleasa 5´a 3´). La DNA
polimerasa II de E.coli se asemeja a la I pero no tiene
actividad exonucleasa.
La DNA polimerasa III está formada por siete
subunidades α, β, ꭉ, Ꞓ, las siete son esenciales para la
actividad máxima.
Síntesis de DNA en los procariotas. -
La replicación de DNA en E. coli, consta de tres pasos
principales, en donde se requieren actividades
enzimáticas:
1.- Helicasas de desenrollamiento de DNA. Son
proteínas motoras que requieren ATP y que
separan a las cadenas unidas del DNA bicatenario,
entre las cuales tenemos a la DnaB, es una de las
principales de E. coli, siendo un hexámero de forma
anular que abre la doble hélice.
2.- Síntesis de cebadores. Para que inicie la
replicación del DNA se requiere la formación de
segmentos cortos de RNA complementarios a un
molde de DNA monocatenario llamados
cebadores, la síntesis de cebadores es catalizada
por la enzima primasa que es una RNA polimerasa
3.- Síntesis de DNA. La síntesis de una cadena de
DNA complementaria en dirección 5´a 3´ por la
formación de enlaces fosfodiéster entre los
nucleótidos apareados a una cadena molde es
catalizada por grandes complejos multienzimaticos
que se denominan polimerasas de DNA
Primasa. Es un polipetido de 60 KD producto del
gen dnaG, se denomina primosoma a un complejo
multienzimatico que contiene primasa y varias
proteínas auxiliares.
Proceso de replicación de los eucariotes.
La replicación comienza con el ensamblaje secuencial
del complejo de replicación de preiniciación (preRC)
Cuando la célula se divide cada una de las dos células
hijas recibe una copia exacta del código, igualmente
en cada generación celular puede hacerse una o más
transcripciones del código, mediante las cuales se usa
la información genética para regular el montaje de una
célula especifica u otra proteína. Este proceso se lleva
a cabo en dos etapas, la primera el código de cuatro
letras de los nucleótidos en el DNA de los genes es
transcrito en un código similar de cuatro letras
compuesto de la serie lineal de cuatro ribonucleótidos,
A, U, C, G, esta copia de RNA llamada RNA mensajero
es llevada a los ribosomas, estructuras de la célula en
las que se unen aminoácidos formando enzimas y
otras proteínas. En otros procesos, los aminoácidos
son activados y agregados a otra clase de RNA
denominado RNA de trasferencia. Este contiene una
serie de tres nucleótidos, llamado anti codón, que
enlaza la combinación aminoácido-RNA de
transferencias al codón apropiado del RNA mensajero.
TRANSCRIPCIÓN DEL DNA
En cualquier sistema exitoso que se fundamente en
información las instrucciones que se requieren para
producir un tipo determinado de organización (p.ej.,
las direcciones para construir una o para reproducir un
ser vivo) deben almacenarse de forma estable, para
preservar su exactitud y garantizar su disponibilidad
para que el sistema pueda utilizarlas. La información
también debe ser convertida a una forma en la que
pág. 60
pueda ser utilizada. Los seres vivos han dividido estas cambios de expresión génica. Como con todos los
funciones de la siguiente manera: aspectos de la función de los ácidos nucleicos, la
síntesis de las moléculas de RNA es un proceso muy
El DNA es una molécula relativamente estable con
complejo en él participan diversas enzimas y
características estructurales que maximizan el
proteínas. Recuérdese que las moléculas de RNA se
almacenamiento de información y facilitan la
transcriben a partir de los genes de la célula. Conforme
replicación. La molécula de RNA, más reactivas que las
procede la síntesis de RNA, la incorporación de
de DNA, tienen numerosas funciones en la síntesis de
ribonucleótidos es catalizada por la RNA polimerasa,
proteínas y en la regulación de la expresión génica.
que algunas veces se denomina RNA polimerasa
Aunque el DNA contiene la información genética que
dependiente de DNA, o la holoenzima RNAP.
impulsa los procesos biológicos, no controla la forma
directa los procesos celulares. La decodificación de las TRANSCRIPCIÓN EN PROCARIOTAS
secuencias de bases del DNA requiere de maquinaria
En este proceso participan las moléculas de DNA,
molecular, constituida en gran medida por proteínas e
ribonucleotidos trifosfatados de adenina, citosina,
impulsada por recursos energéticos celulares. Estas
guanina y uracilo; RNA polimerasas y cofactores.
máquinas doblan, tuercen, despliegan y separan el
DNA durante la replicación y la transcripción. Los
ácidos nucleicos DNA y RNA son polinuleotidos que
codifican la información genética utilizada para
construir y mantener a los organismos vivos. El DNA
dirige el funcionamiento de las células y se transmite
a la progenie. La información contenida en el DNA está
codificada en la forma de la secuencia de bases púricas
y pirimídicas. La síntesis de DNA, conocida como
replicación, implica el emparejamiento
complementario de bases de purina y pirimidina entre
la antigua cadena original y la nueva cadena que se
sintetiza. El funcionamiento fisiológico y genético del
DNA requiere la síntesis de copias libres de errores. En
consecuencia, la mayoría de los organismos emplean Figura 3.8. La RNA polimerasa de E.coli esta formada por dos
varios mecanismos de reparación del DNA. subunidades α2 y una de cada una de las subunidades β y β´. La
unión transitoria de la subunidad σ permite la unión de la enzima
El mecanismo por el cual se descodifica la información central a las secuencias de DNA adecuadas.
genética y se utiliza para dirigir los procesos celulares
comienza con la síntesis de otra clase de ácido
nucleico, el ácido ribonucleico (RNA). La síntesis de La RNA polimerasa de E. coli cataliza la síntesis de
RNA, llamada transcripción, implica el todas las clases de RNA. La enzima central (α2,β y β´)
emparejamiento complementario de las bases de los cataliza la síntesis de RNA. Otra proteína, la subunidad
ribonucléotidos con las bases de una molécula de ῳ, promueve el ensamblaje de la holoenzima RNAP. La
DNA. Cada molécula de RNA recién sintetizada es un unión transitoria del factor σ (sigma)a la enzima
transcrito (cadena de RNA recientemente producida central le permite unirse tanto a la cadena molde
por el proceso de transcripción en el núcleo celular). correcta y al sitio adecuado para iniciar la
transcripción. El proceso de transcripción consta de
La transcripción, que es la creación de copias en RNA
tres fases: iniciación, elongación y terminación.
de secuencias de DNA, es un proceso sumamente
regulado que transforma señales ambientales en

pág. 61
El inicio de la transcripción comienza con la unión de
la RNA polimerasa a un promotor, una secuencia
reguladora de DNA que se localiza en el extremo 5´del
polinucleótido de un gen. Aunque los promotores son
variables en tamaño, hay dos secuencias cortas que se
transcribe una de las dos cadenas complementarias de
DNA, que se denomina cadena molde (-). El RNA
transcrito tiene una secuencia idéntica a la cadena no
molde (+) o codificadora, excepto por la sustitución de
U por T
Figura 3.9. Iniciación de la transcripción en E.coli.
(a) Al desenrollarse un segmento corto de DNA, se forma
una burbuja de transcripción. AL avanzar la transcripción
se forma n hibrido RNA-DNA. La burbuja se mueve para
mantener la transcripción en tanto se desenrolla el DNA
por delante de ella y se vuelve a enrollar por detrás.
(b) Se forma superenrollamiento positivo por delante de la
burbuja y superenrollamiento negativo por detrás de la
burbuja.
La RNA polimerasa se desliza a lo largo del DNA hasta
que alcanza una secuencia promotora. Los
promotores varían ampliamente en cuanto a la
eficiencia con la que se unen de modo productivo a la
RNA polimerasa. Las velocidades de inicio de la
transcripción pueden variar hasta en un factor de 1000
entre promotores “fuertes” y promotores “debiles”.
La holoenzima RNAP se unen a la región promotora.
Luego, un segmento corto de DNA se desenrolla
mientras las subunidades σ y β´rompen los enlaces de
hidrógeno en un tramo. Puesto que ahora están
separadas las cadenas de DNA se dice que el complejo
enzima- promotor está abierto. La transcripción inicia
con la unión del primer nucleósido trifosfatado (ATP O
GTP) al complejo de la RNA polimerasa.La RNAP
procede a catalizar la formación de enlaces
fosfodiester adicionales entre ribonucleotidos
apareados con la cadena molde de DNA dentro del
promotor. Para que la fase de inicio concluya de
manera exitosa, la cadena creciente de RNA debe
alcanzar una longitud aproximada de 10 nt. Suelen
fallar varios intentos de despeje del promotor y los
transcritos truncados se liberan y degradan. Cuando la
secuencia transcrita alcanza una longitud de 10
nucleótidos, la conformación del complejo RNA
polimerasa cambia, se libera el factor σ y finaliza la
fase de iniciación. Tan pronto como una RNA
polimerasa se desplaza más allá del sitio promotor,
puede entrar otra RNA polimerasa, unirse al sitio y
comentar otra ronda de síntesis de RNA.
Una vez que el factor σ se desprende y disminuye la
afinidad del complejo de la RNA polimerasa por el sitio
promotor, comienza la fase de elongación. La RNA
polimerasa central se convierte en un complejo de
transcripción activo uniéndose a varias proteínas
accesorias. A medida que la síntesis de RNA procede
en la dirección 5´ 3´. El DNA se desenrolla por delante
de la burbuja de transcripción. El sitio activo del
complejo enzimático yace entre las subunidades β´y β
.Cuando el dsRNA entra en la enzima y se separa en
dos cadenas, la cadena molde pasa al sitio activo a
través de un conducto. La otra cadena es desviada del
sitio activo y viaja por su propio conducto. Cuando
ambas cadenas emergen de sus conductos separados,
pág. 62
vuelven a formar una doble hélice.Mientras tanto, el
transcrito de RNA creciente sale por su propio
conducto. La acción de desenrollamiento de la RNA
polimerasa crea superenrollamientos positivos por
delante de la burbuja de transcripción y negativos por
detrás de la burbuja, que deshacen la topoisomerasas.
A medida que la burbuja se mueve hacia 3´. La
incorporación de ribonucleótidos continúa hasta que
se alcanza una señal de terminación.
En las bacterias existen dos tipos de terminación de
transcripción: terminación intrínseca y terminación
dependiente. En la terminación intrínseca la síntesis
de RNA termina porque se transcribe la secuencia de
terminación que consiste en una secuencia de
repetición invertida seguida de seis a ocho adeninas.
Cuando se transcribe la secuencia de terminación, la
repetición invertida forma una horquilla estable que
TERMINACIÓN INTRÍNSECA
Figura 3.11
hace que la RNA polimerasa se haga más lenta o se
detenga. El transcrito de RNA se libera entonces, en
virtud de que el híbrido RNA-DNA se disocia, debido a
las débiles interacciones de pares de bases entre las
adeninas, en una secuencia corta de poliadelilato que
sigue a la repetición invertida y los U complementarios
en el transcrito. En la terminación dependiente no se
forman horquillas fuertes y la terminación requiere la
ayuda de una proteína conocida como factor ρ, una
helicasa dependiente de ATP. El factor ρ se une a una
secuencia de reconocimiento específica en la cadena
de mRNA naciente localizada hacia arria del sitio de
terminación. Entonces procede a desenrollar la hélice
RNA-DNA para liberar el transcrito y separar la
polimerasa.
pág. 63
TERMINACIÓN DEPENDIENTE DE ρ
Figura 3.12
TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS.
En eucariotas el proceso de transcripción difiere del
proceso procarionte desde el inicio. Esto se debe a que
en los eucariontes los genes no se encuentran
adyacentes como en las bacterias. En el DNA
eucarionte, los genes están constituidos por intrones
(zonas que no contienen codones codificantes para un
gen) y exones (zonas que contienen la información del
gen)de forma alternada.
La transcripción se lleva a cabo en el núcleo celular y
no esta acoplada al proceso de replicación. Mientras
que en los procariones la replicación y transcripción se
están acopladas y se lleva a cabo en el citoplasma
bacteriano. En el núcleo de los eucariontes, el DNA no
se encuentra de manera laxa como en las bacterias,
sino que se encuentra superenrollado y empaquetado
a manera de cromatina. La forma de la cromatina
transcripcionalmente activa es la eucromatina porque
no está compactada, mientras que la
heterocromatina, no puede llevar a cabo la
transcripción hasta que se libere su interacción con las
histonas. Estos factores permiten que la transcripción
en los eucariontes esté muy regulada para prevenir la
síntesis de mRNA y proteínas en un momento no
indicado. En los eucariontes existen tres RNA
polimerasas: RNA polimerasa I,II,III .La RNA Polimerasa
I realiza entre el 50-70% de la transcripción celular , se
localiza en el nucleólo y transcribe principalmente a
los rRNA; la polimerasa II es nuclear y sintetiza a los
RNA heterogéneos que son los precursores de los
mRNA y finalmente la polimerasa III , que realiza
aproximadamente el 10 % del total de la transcripción,
se encuentra en el núcleo y sintetiza a los tRNA. La
transcripción eucriota ocurre en las siguientes fases:
Iniciación de transcripción
El DNA está formado por dos cadenas; sin embargo, en
la transcripción de un gene solo una sirve de molde.
Algunos genes dentro de un mismo cromosoma se
trascriben de una de las cadenas y otro de la cadena
opuesta. Para que las RNA polimerasas inicie la
transcripción de un gene en la secuencia y cadena
adecuada se requiere:
a) Una secuencia señal en el DNA: el promotor.
b) Una o varias proteínas que reconozcan esta
señal y “guíen” a ella a la RNA polimerasa.
En los eucariontes, en la iniciación la RNA polimerasa
II es la que lleva a cabo la transcripción. Se une en una
región promotora que consta de dos secuencias
consenso (CAAT y TATA), también llamadas cajas.
pág. 64
Estas se localizan antes del punto de inicio de la
transcripción. Durante la elongación, el proceso de
síntesis continua en la dirección 5´-3´. Al cabo de 30
nucleótidos transcritos se añade una estructura
conocida como caperuza o cubierta de metil-guanosin
trifosfato al extremo 5´. Esta estructura permite que el
mRNA no sea degradado por las núcleasas que se
encuentran fuera del núcleo. La etapa de finalización
también requiere de una secuencia señal en el DNA y
proteínas que reconozcan esta señal e induzcan la
separación del mRNA y de la RNA polimerasa del DNA
molde. La secuencia de terminación presenta una
región rica en bases C Y G seguida de una rica en A y T.
Está relacionada con una secuencia TTATTT presente
en el DNA.La enzima PoliA polimerasa añade al
extremo 3´del transcrito una capa de
aproximadamente 200 ribonucleótidos de adenina,
conocidos como cola de la PoliA, que también sirven
para proteger el mensaje de la degradación por
nucleasas. La maduración del transcrito de mRNA lo
realiza una proteína llamada ribonucleoproteína
pequeña nuclear. En este proceso se realiza la excisión
de intrones y la posterior unión de exones con el
mensaje completo del gen.
Figura 3.13. La información genética contenida en el DNA
es convertida en la secuencia lineal de aminoácidos de
polipéptidos en un proceso en dos fases. Durante la
transcripción, se sintetizan moléculas de RNA a partir de una
cadena de DNA mediante emparejamiento de bases
complementarias entre las bases del DNA y las bases de
moléculas de ribonucleósidos trifosfatados libres.
El flujo de información genética puede resumirse en la
siguiente secuencia, llamada dogma central:
Este diagrama ilustra que la información genética
codificada en las secuencias de bases de DNA fluye del
DNA, una molécula que se replica durante la división
celular (como indica la flecha circular), al RNA, que
especifica la estructura primaria de las proteínas.
Como se concibió en un principio, el dogma central
afirmaba que la información genética fluía en una sola
dirección: del DNA al RNA y a las proteínas. Sin
embargo, hace algunos años se descubrió una
importante excepción al dogma central. Algunos de los
virus que poseen genomas de RNA también tienen una
actividad enzimática que se denomina
transcriptasainversa. Una vez que uno de estos virus
ha infectado una célula hospedadora, la transcriptasa
inversa copia el RNA viral para formar una copia de
DNA. El DNA viral se inserta entonces en un
cromosoma del hospedador. Uno de estos virus es el
VIH.
3.1.1.6 Traducción del RNA.
La transcripción se define como la síntesis de una
molécula de ácido ribonucleico (RNA) utilizando como
molde el ácido desoxirribonucleico (DNA). Esta
definición relativamente simple describe una serie de
complicados procesos enzimáticos que origina la
trasferencia de la información genética almacenada
en el DNA de doble hebra en una molécula de RNA
mono hebra que la célula utilizará para dirigir la
síntesis de sus proteínas, un proceso que se conoce
como traducción. La traducción requiere de la acción
coordinada de cientos de moléculas: ribosomas.
Enzimas, factores solubles, el mRNA y la molécula que
traduce los codones en aminoácidos: tRNA. La
traducción se realiza por la interacción codón (mRNA)-
anticodón (tRNA) y por la activación específica de cada
tRNA con el aminoácido correspondiente a ese codón.
pág. 65
En los procariontes la transcripción y traducción están Terminación de la traducción.
acopladas, es decir, el mRNA empieza a traducirse
Esta está dada por señales de terminación, los
conforme se transcribe. En los eucariontes la
codones UAA, UGA y UAG así como por proteínas o
transcripción se realiza en el núcleo y la traducción en
factores de terminación. No hay tRNAs con
el citoplasma.
anticodones complementarios a los codones de
Iniciación de la traducción terminación; de manera que la terminación se realiza
por l interacción de esos codones con proteínas
En la iniciación de la traducción, como en la iniciación
específicas.
de la replicación y la transcripción, se requiere de
secuencias específicas de iniciación y moléculas que En la terminación, la proteína se separa del ribosoma
las reconozcan. La señal de iniciación en el mRNA y el ribosoma se disocia en sus dos subunidades para
incluye una secuencia homóloga a una secuencia iniciar otro ciclo de traducción.
presente en el rRNA y el codón de iniciación AUG o
GUG. Estas señales son reconocidas, la primera por el
rRNA de la subunidad pequeña del ribosoma y la
segunda por la met-tRNA (metionina unida a su tRNA).
En las bacterias, la síntesis de proteínas se inicia con
formil-metionina (f-met-tRNA); en los eucariontes con
met-mRNA. La formación del complejo f-met-tRNA-
mRNA-30S o met-tRNA-mRNA-40S requiere GTP y tres
proteínas o factores de iniciación. Posteriormente se
une la subunidad grande de ribosoma para formar el
complejo de iniciación. El aa-tRNA iniciador ocupa el
sitio del ribosoma.

Elongación de la traducción

La adición de cada nuevo aminoácido se lleva a cabo

en 3 pasos: a) Unión del aa-tRNA al codón
correspondiente; este aa-tRNA ocupa el sitio
ribosomal A (aminoacil); b) formación de la unión
peptídica en el sitio A; c) translocación al sitio P. La
elongación requiere también GTP y tres factores de
elongación FE-Tu,FE-TS y FE-G. El primero une el aa-
tRNA al sitio A; el segundo favorece la reutilización de
FE-Tu y el tercero cataliza la translocación durante la
elongación. Un mRNA une 1 ribosoma por cada 80-90
bases; este complejo mRNA –ribosomas se llama
poliribosoma o polisoma. En los eucariontes algunos
ribosomas están libres en el citoplasma mientras que
otros están unidos al sistema membranal llamado
retículo endoplásmico rugoso. Los ribosomas unidos a
este retículo sintetizan las proteínas celulares de
exportación y a la mayoría de las proteínas
membranales.
Figura 3.14. Durante la traducción, las moléculas de mRNA
se unen a ribosomas constituidos por rRNA y proteínas
ribosómicas. Complejos RNA se transferncia- aminoacilo
colocan la carga de aminoácidos en el sitio catalítico del
interior del ribosoma, en un proceso que implica el
emparejamiento de bases complementarias entre los
tripletes de bases de mRNA llamados codones y tripletes de
bases de tRNA llamados anticodones. Cuando los
aminoácidos se colocan de manera correcta dentro del sitio
catalítico, se forma un enlace peptídico. Después de que la
molécula de mRNA se mueve respecto al ribosoma, un nuevo
codón ingresa en el sitio catalítico de éste y aparea sus bases
con las del anticodón apropiado en otro complejo
aminoacilo-tRNA. Cuando un codón de terminación en el
mRNA entra en el sitio catalítico, el polipéptido recién
formado se libera del ribosoma.

pág. 66
Código genético.

En la síntesis de una proteína, la información que se transfiere del DNA al mRNA debe traducirse como una secuencia
de aminoácidos. El mRNA que se produce en el núcleo se desplaza a un ribosoma, en el citoplasma en donde hay
tRNA disponible para transformar la secuencia del nucleótido en la secuencia de aminoácidos de una proteína. Para
comprender la síntesis de proteínas es necesario entender los diferentes procesos de traslación comenzando por el
código genético. El código genético es una serie de tripletes de bases en el mRNA que se llaman codones y codifican
a determinado aminoácido. Todos los codones del mRNA se han determinado en la actualidad como se indica en la
tabla siguiente:

Código genético.

AAA es el código para la lisina y CCC es el código de la prolina. En la mayoría de los casos hay varios codones que
codifican al mismo aminoácido, por esta característica, se dice que el código genético es degenerado. A los codones
que codifican para el mismo aminoácido se les llama codones sinónimos. La mayoría de los codones sinónimos
difieren solamente en la última base del triplete. Dos codones AUG Y GUG también indican el inicio de una cadena
de un péptido. Tres de los codones, UAG, UAA Y UGA no codifican a ningún aminoácido; sirven para indicar el final
de la síntesis de la proteína.

Las moléculas de RNA de transferencia son los adaptadores necesarios para la traducción del mensaje genético. Cada
tipo de tRNA transporta un aminoácido específico y tiene una secuencia de tres bases llamada anti codón. El
apareamiento de bases codón- anti codón son antiparalelos, ambas secuencias se dan en dirección 5´- 3 ´. Por
ejemplo, el codón UGC se une al anticodón GCA.

Los aminoácidos necesarios para producir una proteína no reconocen directamente la secuencia de bases en el
mRNA. Por tanto, el tRNA debe recoger al aminoácido indicado y llévalo a los ribosomas, en donde lo coloca en la
cadena de péptidos. Hay tres tRNA diferentes para los 20 tipos distintos de aminoácidos; todos los tRNA tienen
estructura parecida. Cada tRNA existe como una cadena única formada por 70 a 90 nucleótidos. Cerca de la mitad de
los nucleótidos de la cadena forman puentes de hidrógeno con las bases nitrogenadas complementarias en otra parte

pág. 67
de la misma cadena, por lo cual el tRNA tiene forma similar a una hoja de trébol. En un extremo del tRNA hay un sitio
de unión de bases (CCA) que se enlazan con el aminoácido para el tRNA específico. En el anillo central, llamado anillo
de anticodón, hay tres bases no apareadas que son complementarias para un codón del mRNA.

SÍNTESIS DE PROTEÍNAS
Las proteínas son la clase más dinámica y variada de biomoléculas. La singularidad de cada tipo celular se debe casi
por completo a las proteínas que produce. Por lo tanto, no es sorprendente que una gran cantidad de energía celular
se utilice en la síntesis proteínica. Debido a su importancia estratégica en la economía celular. La síntesis de proteínas
es un proceso regulado. Aunque el control es también de importancia fundamental en el nivel de la transcripción, la
regulación de la traducción de los mensajes genéticos permite otras oportunidades de regulación. Esto es en especial
verdadero en los organismos eucariotas multicelulares, cuyos estilos de vida complejos requieren diversos
mecanismos de regulación. La síntesis proteínica es un proceso demasiado complejo en el que la información
genética codificada en los ácidos nucleicos se traduce en el “alfabeto” de los 20 aminoácidos estándar de los
polipéptidos. Además de la traducción, también puede considerarse que la síntesis de proteínas incluye los procesos
de modificación y de direccionamientos posteriores a la traducción.

En este proceso las moléculas de mRNA se convierten en secuencia de aminoácidos. Se lleva a cabo en el citoplasma
celular y lo dirigen los ribosomas. La activación de los aminoácidos es el proceso por el cual cada uno de los
aminoácidos que participarán en la síntesis de proteínas se asocia a un tRNA específico. Estos aminoácidos están
listos para incorporarse por el proceso de traducción a la cadena polipeptídica. Los aminoácidos unidos a su tRNA se
les denominan aminoacil-tRNA y su formación depende de la enzima aminoacil tRNA-sintetasa.

PROCARIONTES.

La iniciación en estos organismos los procesos de replicación, transcripción y traducción se llevan a cabo
simultáneamente. Incluso la traducción de un mRNA se puede iniciar cuando la molécula no ha sido transcrita por
completo. Los mRNA se une a la subunidad menor de los ribosomas gracias a una secuencia de iniciación en el mRNA.
Esta secuencia se localiza en la zona 5´y lleva el nombre de sus descubridores; secuencia de Shine-Dalgarno. Cuando
se forma este complejo las Moléculas de tRNA se unen al mRNA gracias a que posee anticodones que corresponden
con la información de los codones en el mRNA. A este complejo se une la subunidad mayor de los ribosomas y forma
el complejo activo. El complejo activo está listo para iniciar la traducción cuando posee dos sitios determinantes en
la síntesis de las cadenas polipeptídicas; El sitio A o aceptor; que es el sitio donde se unen los tRNA; y el sitio P o
peptidil donde se inicia la síntesis. El primer triplete o codón que se traduce es el AUG que codifica para metionina.
Posteriormente se van agregando uno a uno los demás aminoácidos. Regularmente la metionina, se retira de la
proteína ya terminada.

EUCARIONTES.

Después de que se sintetiza el mRNA, migra fuera del núcleo hacia el citoplasma, donde se une a los ribosomas, que
son los encargados de producir proteínas dentro de la célula. Un ribosoma normal contiene proteínas, rRNA y sitios
de enlace para el mRNA.

pág. 68
La traslación del mRNA para la síntesis de una proteína se inicia cuando un ribosoma recoge un mRNA. El primer
codón del mRNA, que generalmente es AUG, uno de los codones que da inicio a la proteína, se coloca en el sitio de
enlace 1. Un tRNA que lleva metionina se enlaza al codón usando las bases complementarias en el anillo del anti
codón.

A continuación, se traduce el siguiente codón del mRNA. Otro tRNA trae un segundo aminoácido al mRNA en el
ribosoma. Supóngase que el segundo codón es UCC que codifica a la serina. Un tRNA con un anti codón AGG trae
serina al ribosoma y la une en el sitio de enlace 2. Una vez que los dos aminoácidos se encuentran en los sitios de
enlace una enzima cataliza la formación del enlace peptídico. El primer tRNA sale entonces del ribosoma y el segundo
tRNA con el péptido se desplaza al sitio de enlace 1. Otro tRNA puede ahora traer a un aminoácido para el nuevo
codón que se encuentra en el sitio de enlace 2.

El proceso de traslación continúa a medida que el ribosoma o varios ribosomas se desplazan a lo largo del mRNA, un
codón a la vez. En cada codón un tRNA con el aminoácido correcto se une al mRNA. Se forma un enlace peptídico
entre el nuevo aminoácido y el último aminoácido de la cadena de péptido en crecimiento. El polipéptido sigue
creciendo a medida que el ribosoma se desplaza a lo largo de los codones del mRNA.

La síntesis de proteínas termina cuando el ribosoma llega al codón que indica que se detenga el proceso. Después se
libera la proteína terminada y el ribosoma queda disponible para iniciar la síntesis de otra proteína.

A medida que la cadena de péptido de la proteína se forma en el ribosoma, también se forma enlaces cruzados de
tipo secundario y terciario. Cuando la proteína se libera asume esas mismas estructuras que le proporcionan actividad
biológica en la célula. En el caso de estructuras cuaternarias, los mRNA distintos produce en forma simultánea
subunidades que se combinan tan pronto como son liberadas del ribosoma.

Inhibidores de la síntesis de proteínas

En las bacterias, la síntesis de proteínas se inhibe con un gran número de antibióticos: cloranfenicol, eritromicina,
estreptomicina, espectinomicina, kanamicina etc. En los eucariontes el inhibidor más utilizado es la cicloheximida.
Un inhibidor interesante en eucariontes es la toxina de la bacteria que produce la difteria; esta toxina inactiva al
factor de elongación equivale al FE-G de bacterias y con ello bloquea el paso de translocación.

pág. 69
3.1.2 IMPORTANCIA DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS EN REPRODUCCIÓN HUMANA.

El desarrollo, funcionamiento y reproducción de cualquier organismo depende de las instrucciones codificadas que
se encuentran en estas largas cadenas de nucleótidos. Toda cualidad que exhibe un ser viviente tiene su origen en el
orden en el que se encuentran los nucleótidos de estas cadenas. Esta disposición es única en cada especie del planeta
y constituye el llamado código genético. Su importancia radica en lo siguiente:

• Contienen las instrucciones para controlar todos los procesos vitales.

• Contienen la información genética de cada individuo.

• Dirigen y controlan la síntesis de proteínas.

Los ácidos nucleicos son vitales para el funcionamiento de la célula y por lo tanto para la vida. Los dos ácidos nucleicos
hacen un seguimiento de la información hereditaria de una célula de modo que puedan mantenerse, crecer, crear
descendencia y realizar las funciones especializadas que se supone que debe hacer.

pág. 70
 Bloque III: Ácidos nucleicos y síntesis de proteínas.

3.2 Fundamentos de técnicas de biología molecular.

Aprendizaje Esperado
Identifica las principales técnicas de bilogía molecular mediante la lectura de artículos científicos de su aplicación
para comprender su importancia en perfeccionamiento genético y las características de especies que impactan en la
mejora de su calidad de vida.

ACTIVIDAD de Aprendizaje:
1. Llena las dos primeras columnas del cuadro CQA con información relacionada con “técnicas de
biología molecular”.

C Q A

pág. 71
 ACTIVIDAD de Aprendizaje:
Analiza el siguiente texto:

Técnicas de biología molecular.2

La biología molecular es un área de la biología referida al proceso de la transcripción del gen para rendir el ARN, la
traslación del ARN en las proteínas y el papel juego de esas proteínas en la función celular. Desde hacía 1960, los
biólogos moleculares han desarrollado métodos para determinar, para aislar, y para manipular componentes
moleculares en células incluyendo la DNA, el ARN, y las proteínas.

Varias técnicas usadas en el campo de la biología molecular son descritas más abajo.

• Reacción en cadena de polimerasa (PCR) - éste es una de las técnicas más importantes usadas en biología
molecular y se utiliza básicamente para copiar la DNA. La polimerización en cadena permite que una única
serie de la DNA sea amplificada en millones de moléculas de la DNA. La polimerización en cadena se puede
también utilizar para introducir mutaciones dentro de la DNA o para introducir sitios especiales de la enzima
de la restricción. Además, la polimerización en cadena se utiliza para determinar si cierto fragmento de la
DNA existe en una biblioteca del cDNA. Diversos tipos de polimerización en cadena incluyen la polimerización
en cadena reversa de la transcripción (RT-PCR) para la amplificación del ARN y la polimerización en cadena
cuantitativa (QPCR) para medir la cantidad de presente del ARN o de la DNA.
• Reproducción de la expresión - esta técnica ayuda a científicos a entender la función de la proteína. La DNA
que cifra para una proteína determinada se reproduce o se copia usando la polimerización en cadena en un
vector de la expresión llamado un plásmido. El plásmido se introduce a una célula animal o a una célula
bacteriana. Este plásmido tiene elementos del promotor que puedan estimular la alta expresión de la
proteína deseada para poder entonces examinar su actividad enzimática.
• Electroforesis del gel - ésta es otra técnica importante usada en biología molecular para separar la DNA, el
ARN, y las proteínas basadas en su talla aplicando un campo eléctrico pues la DNA se funciona con a través
del gel de la agarosa.
• Matrices o los microarrays de una DNA o la viruta de la DNA es una colección de sitios de la DNA montados
en una superficie sólida tal como una diapositiva del microscopio que se pueda utilizar para cuantificar
simultáneamente niveles de la expresión de la proteína a través de un gran número de genes. La técnica se
puede también utilizar a diversas regiones del genotipo.

2
Fuente: Mandal, A (2019). Técnicas de biológica molecular. News Medical Life Sciences. Recuperado de: https://www.news-
medical.net/life-sciences/Molecular-Biology-Techniques-(Spanish).aspx

pág. 72
FUNDAMENTOS DE TÉCNICAS DE BIOLOGÍA de extracción adecuados. Con objeto de evitar los
MOLECULAR falsos negativos debidos a la presencia de inhibidores
de la PCR en la muestra, se recomienda vivamente
Estas técnicas de manipulación genética se originan a
efectuar un experimento de control de la inhibición de
partir de los conocimientos de los ácidos nucleicos,
la PCR, que suele hacerse mediante PCR específica de
métodos que se han desarrollado desde 1960 para
vegetales (eucariotas o cloroplastos) o de la especie.
determinar, aislar y manipular componentes
Los contaminantes capaces de inhibir el análisis PCR
moleculares en células como ADN, ARN y proteínas.
son:
Estas técnicas de biología molecular son importantes
en el aislamiento de ADN y amplificar una región en
una enorme cantidad de moléculas, son utilizados con
fines diagnósticos, como trasplantes, enfermedades
infecciosas, patologías genéticas y no genéticas, en la
biotecnología para la construcción de organismos
genéticamente modificados.

Las siguientes son algunas técnicas de biología

molecular:

• Enzimas de restricción
• Separación electroforética de moléculas de Dada la gran variedad de métodos de extracción y
DNA (electroforesis) purificación de ácidos nucleicos existentes, la elección
• Secuenciación de DNA por el método de de la técnica más adecuada suele efectuarse conforme
Sanger (secuenciación del genoma) a los criterios siguientes:
• Detección de secuencias específicas de DNA
(Southern Blot) • Ácido nucleico diana.
• Organismo fuente.
• Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
• Material inicial (tejido, hoja, semilla, material
• DNA recombinante
transformado, etc.).
• Resultados deseados (rendimiento, pureza,
tiempo que requiere la purificación).
MÉTODOS DE EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE
• Uso posterior (PCR, clonación, etiquetado,
ÁCIDOS NUCLEICOS.
transferencia, RT-PCR, síntesis de ADNc, etc.).
Introducción La extracción y purificación de ácidos
nucleicos constituye la primera etapa de la mayoría de
los estudios de biología molecular y de todas las Métodos de extracción.
técnicas de recombinación de ADN. En este caso, los
Para extraer los ácidos nucleicos del material biológico
métodos de extracción permiten obtener ácidos
es preciso provocar una lisis celular, inactivar las
nucleicos purificados a partir de diversas fuentes para
nucleasas celulares y separar los ácidos nucleicos de
después realizar análisis específicos de modificaciones
los restos de células. El procedimiento de lisis idóneo
genéticas mediante la reacción en cadena de la
suele consistir en un equilibrio de técnicas y ha de ser
polimerasa (PCR). La calidad y la pureza de los ácidos
suficientemente fuerte para romper el material inicial
nucleicos son dos de los elementos más importantes
complejo (un tejido, por ejemplo), pero
en ese tipo de análisis. Si se desea obtener ácidos
suficientemente suave para preservar el ácido
nucleicos muy purificados, que no contengan
nucleico diana. Entre los procedimientos usuales de
contaminantes inhibidores, es preciso aplicar métodos

pág. 73
lisis figuran los siguientes: rotura mecánica
(trituración, lisis hipotónica, etc.); tratamiento
químico (detergentes, agentes caotrópicos, reducción
con tioles, etc.); digestión enzimática (Proteinasa K,
etc.). Es posible romper la membrana celular e
inactivar las nucleasas intracelulares al mismo tiempo.
Por ejemplo, una misma solución puede contener
detergentes que solubilicen las membranas celulares
y sales caotrópicas fuertes que inactiven las enzimas
intracelulares. Tras la lisis celular y la inactivación de
las nucleasas, los restos de células se eliminan
fácilmente por filtración o precipitación.
Métodos de purificación.
Los métodos empleados para purificar los ácidos
nucleicos de extractos celulares suelen ser
combinaciones de dos o más técnicas de las siguientes:
extracción/precipitación, cromatografía,
centrifugación y separación por afinidad. A
continuación, se definen de manera breve
Extracción/precipitación: A menudo se efectúa una
extracción con disolventes para eliminar los
contaminantes de los ácidos nucleicos. Por ejemplo,
suele emplearse una combinación de fenol y
cloroformo con objeto de eliminar las proteínas. Para
concentrar los ácidos nucleicos suele realizarse una
precipitación con isopropanol o etanol. Si la cantidad
de ácido nucleico diana es escasa, puede añadirse a la
mezcla un portador inerte (como el glucógeno) para
favorecer la precipitación. También puede realizarse
una precipitación selectiva con concentraciones
salinas elevadas (precipitación salina) o una
precipitación de las proteínas mediante cambios del
pH.
Cromatografía.
Pueden emplearse diversas técnicas cromatográficas
de separación: permeación sobre gel, intercambio
iónico, adsorción selectiva o unión por afinidad. La
permeación sobre gel aprovecha las propiedades de
las partículas porosas del gel para tamizar moléculas.
Se emplea una matriz con poros de tamaño definido,
que dejan pasar las moléculas más pequeñas por
difusión, pero no las más grandes, que quedan eluidas
en el volumen vacío. Así pues, las moléculas quedan
eluidas por orden de tamaño decreciente. La
cromatográfica de intercambio iónico es otra técnica,
que se basa en la interacción electrostática de la
molécula diana con un grupo funcional de la matriz en
columna. Los ácidos nucleicos (polianiones lineales
con fuerte carga negativa) pueden eluirse de las
columnas de intercambio iónico con simples
Tampones salinos. En la cromatografía de adsorción,
los ácidos nucleicos se fijan selectivamente en sílice o
vidrio, en presencia de determinadas sales (por
ejemplo, sales caotrópicas), mientras que otras
moléculas biológicas no se fijan. A continuación, los
ácidos nucleicos pueden eluirse con agua o un tampón
hiposalino y se obtiene una muestra que puede
emplearse directamente en las aplicaciones
posteriores.
Centrifugación.
La centrifugación selectiva constituye un método de
purificación eficaz. Así, por ejemplo, la ultra
centrifugación en gradientes autogenerados de CsCl
con fuerzas g elevadas se lleva empleando mucho
tiempo para purificar plásmidos. La centrifugación
suele asociarse a otros métodos, como la
cromatografía de columna centrifugada, en cuyo caso
se combina la permeación sobre gel y la centrifugación
para separar el ADN o ARN de contaminantes más
pequeños (sales, nucleótidos, etc.), intercambiar
tampones o seleccionar según el tamaño. Algunos
procedimientos combinan la adsorción selectiva en
matriz cromatográfica (véase el apartado anterior
«Cromatografía») y la elución por centrifugación para
purificar de forma selectiva un tipo de ácido nucleico.
Separación por afinidad.
En los últimos años, cada vez son más los métodos de
purificación que combinan la inmovilización por
afinidad de ácidos nucleicos y la separación
magnética. Por ejemplo, los ARNm poli A + pueden
pág. 74
unirse a partículas magnéticas revestidas de
estreptavidina mediante oligo dT marcados con
biotina, y el complejo de partículas puede eliminarse
de la solución (y de los contaminantes libres) con un
imán. Esta técnica en fase sólida simplifica la
purificación de los ácidos nucleicos, pues permite
sustituir las etapas de centrifugación, extracción
orgánica y separación de fases por una operación de
separación magnética, única y rápida.
Método de extracción y purificación con CTAB.
El protocolo del método del bromuro de cetil-trimetil
amonio (CTAB) fue elaborado por Murray y Thompson
en 1980 (Murray y Thompson, 1980) y publicado
posteriormente, en 1987, por Wagner y sus
colaboradores (Wagner et al., 1987). El método es
adecuado para extraer y purificar ADN de vegetales y
alimentos derivados de vegetales y está
especialmente indicado para eliminar los polisacáridos
y los compuestos polifenólicos, que, de otro modo,
alterarían la pureza del ADN y, por tanto, su calidad.
Este procedimiento se ha aplicado con frecuencia en
genética molecular de los vegetales y ha sido probado
en ensayos de validación para detectar OGM (Lipp et
al., 1999; 2001). Se han elaborado algunas variantes
adicionales para adaptar el método a una amplia gama
de matrices de alimentos transformados o sin
transformar.
Principios del método del CTAB: lisis, extracción y
precipitación.
Las células vegetales pueden lisarse con el detergente
iónico bromuro de cetiltrimetil amonio (CTAB), que
forma un complejo insoluble con los ácidos nucleicos
en medio hiposalino. De ese modo, los polisacáridos,
los compuestos fenólicos y los demás contaminantes
permanecen en el sobrenadante y pueden eliminarse
por lavado. El complejo de ADN se solubiliza
aumentando la concentración salina y se precipita con
etanol o isopropanol. En esta sección se describirán los
principios de las tres etapas principales: la lisis de la
membrana celular, la extracción del ADN genómico y
su precipitación. Lisis de la membrana celular: Tal
como se ha mencionado anteriormente, la primera
etapa de la extracción del ADN es la rotura de la
membrana celular y nuclear, para lo cual la muestra
homogeneizada se trata primero con el tampón de
extracción, que contiene EDTA, Tris-HCl y CTAB. Todas
las membranas biológicas presentan la misma
estructura general, integrada por moléculas de lípidos
y de proteínas, unidas por interacciones no
covalentes.
Figura 3.16. Ampliación de la membrana celular igual a la
membrana nuclear
Tal como muestra la figura, las moléculas lipídicas
están ordenadas en una doble capa continua, en la
que las moléculas proteínicas están «disueltas». Las
moléculas lipídicas están formadas por extremos
hidrófilos, denominados «cabezas», y extremos
hidrófobos, denominados «colas». En este método, el
detergente (CTAB) contenido en el tampón de
extracción provoca la lisis de la membrana. Dado que
la composición de los lípidos y del detergente es
similar, el componente de CTAB del tampón de
extracción captura los lípidos que integran la
membrana celular y nuclear. La siguiente figura ilustra
el mecanismo de solubilizarían de los lípidos con un
detergente.
Figura 3.17. Solubilización de lípidos
pág. 75
Se libera el ADN genómico cuando el detergente
captura los lípidos y las proteínas al entrar en contacto
la membrana celular y el tampón de extracción con
CTAB. Con una concentración salina (NaCl)
determinada, el detergente forma un complejo
insoluble con los ácidos nucleicos. El EDTA es un
componente quelante, que se une al magnesio, entre
otros metales. El magnesio es un cofactor de la
desoxirribonucleasa. Al unir el magnesio al EDTA, la
actividad de la desoxirribonucleasa presente
disminuye. El Tris-HCl confiere a la solución la
capacidad de amortiguar el pH (un pH inferior o
superior daña el ADN). Es importante señalar que,
como los ácidos nucleicos se degradan fácilmente en
esta fase de la purificación, debe reducirse al mínimo
el tiempo transcurrido entre la homogeneización de la
muestra y la adición de la solución tampón con CTAB.
Una vez que se han roto las membranas de la célula y
de los orgánulos (como los que se encuentran
alrededor de las mitocondrias y los cloroplastos), se
purifica el ADN.
Figura 3.18. Rotura de la membrana celular y extracción de
DNA genómico.
Extracción - En esta etapa, se separan los complejos
formados por los ácidos nucleicos y el CTAB de los
polisacáridos, los compuestos fenólicos, las proteínas
y los demás lisados celulares disueltos en la solución
acuosa. Es especialmente importante eliminar los
polisacáridos y los compuestos fenólicos, pues pueden
inhibir numerosas reacciones enzimáticas. En
concentraciones hiposalinas (NaCl < 0,5 M), los
contaminantes de los complejos de ácidos nucleicos
no precipitan y pueden eliminarse extrayendo la
solución acuosa con cloroformo. El cloroformo
desnaturaliza las proteínas y facilita la separación de
las fases acuosa y orgánica. La fase acuosa suele
constituir la fase superior. No obstante, si dicha fase
es densa debido a la concentración salina (> 0,5 M),
formará la fase inferior. Además, si el pH de la solución
acuosa no se ha equilibrado debidamente (pH 7,8 –
8,0), los ácidos nucleicos tenderán a repartirse en la
fase orgánica. Si es preciso, la extracción con
cloroformo se realizará dos o tres veces, con objeto de
eliminar por completo las impurezas de la capa
acuosa. Para perfeccionar la extracción de los ácidos
nucleicos, puede retroextraerse la fase orgánica con
una solución acuosa, que se añade a continuación al
extracto anterior. Una vez purificados los complejos
de ácidos nucleicos, puede procederse a la
precipitación, última etapa del procedimiento.
Precipitación - En esta última etapa se separan los
ácidos nucleicos del detergente, para lo cual la
solución acuosa se trata primero con una solución de
precipitación compuesta por una mezcla de CTAB y
NaCl en concentración elevada (NaCl > 0,8 M). Una
alta concentración salina es necesaria para que se
forme un precipitado de ácidos nucleicos. Puede ser
preferible emplear acetato de sodio en lugar de NaCl
por su capacidad tampón. En estas condiciones, el
detergente, que es más soluble en alcohol que en
agua, puede eliminarse por lavado, mientras que los
ácidos nucleicos precipitan. El posterior tratamiento
con etanol al 70 % permite una mayor purificación o
elución de los ácidos nucleicos de la sal residual.
pág. 76
CUANTIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS.
La biología molecular se dedica a la investigación de la
estructura de los genes y al procesamiento de la
información genética, dichas investigaciones son
procesos por los cuales los seres vivos organizan y
procesan la información genética.
Los ácidos nucleicos absorben eficientemente luz
ultravioleta debido a la presencia de bases aromáticas
nitrogenadas a lo largo de las cadenas de DNA. La
absorción de Uv de DNA es una característica de la
molécula, que es usada eficientemente para
determinar su concentración. Cada una de las bases
tiene su propio y único espectro de absorción y por lo
tanto contribuye de manera diferente a la propiedad
total de absorción de UV de una molécula de DNA,
esto es muy significativo cuando se trata de
oligonucleótidos y deben ser consideradas si se
requiere determinar correctamente la concentración.
Cuantificación del ADN mediante espectrofotometría
El ADN, el ARN, los oligonucleótidos e incluso los
mononucleótidos pueden cuantificarse directamente
en soluciones acuosas, en forma diluida o sin diluir,
midiendo la absorbancia A (o densidad óptica, DO) de
luz ultravioleta (también puede hacerse en el intervalo
visible). Si la muestra es pura, es decir, no contiene
cantidades significativas de contaminantes como
proteínas, fenol o agarosa, la medición
espectrofotométrica de la irradiación ultravioleta
absorbida por las bases es sencilla y exacta. En este
método, los tampones acuosos con escasa
concentración iónica (por ejemplo, tampón TE)
resultan idóneos. La concentración de ácidos nucleicos
suele determinarse midiendo a 260 nm y comparando
con un blanco. La interferencia de contaminantes
puede determinarse calculando un «cociente». Dado
que las proteínas absorben a 280 nm, se emplea el
cociente A260/A280 para calcular la pureza de los
ácidos nucleicos. Los cocientes respectivos del ADN y
el ARN puros son aproximadamente de 1,8 y 2,0. Una
absorción a 230 nm significa que la muestra está
contaminada con hidratos de carbono, péptidos,
fenoles, compuestos aromáticos u otras sustancias. El
cociente A260/A230 de las muestras puras es de 2,2
aproximadamente. Cuando la cantidad disponible de
ácidos nucleicos es escasa, puede emplearse el
método de la placa de agarosa con bromuro de etidio.
Permite calcular la cantidad de ácidos nucleicos a
partir de la intensidad de la fluorescencia emitida por
el bromuro de etidio irradiado con luz UV,
comparándola con unos patrones de concentración.
Principios de la cuantificación de ADN por
espectrofotometría El espectrofotómetro se funda en
la transmisión de la luz a través de una solución para
determinar la concentración de un soluto presente en
la misma. El aparato funciona conforme a un principio
sencillo: se irradia una muestra con una radiación
luminosa de longitud de onda conocida y se mide la
energía luminosa transmitida con una célula
fotoeléctrica situada detrás de la muestra. Tal como
muestra la figura 4, el espectrofotómetro de haz único
consta de una fuente luminosa, un prisma, un
recipiente con la muestra y una célula fotoeléctrica.
Los distintos elementos están conectados a los
sistemas eléctricos o mecánicos adecuados para
controlar la intensidad luminosa y la longitud de onda
y para convertir en variaciones de tensión la energía
recibida en la célula fotoeléctrica. Las variaciones de
tensión se miden en un contador o se registran en un
ordenador para su posterior análisis.
Figura 3.19. Representación esquemática de la transmisión
de la luz.
Cada molécula absorbe la energía radiante a una
longitud de onda específica, a partir de la cual es
posible extrapolar la concentración de un soluto en
una solución. Con arreglo a la ley de Lambert-Beer,
existe una relación lineal entre la absorbancia A
pág. 77
(también denominada densidad óptica, DO) y la reconocen una secuencia particular en el DNA
concentración de la macromolécula, conforme a la (secuencia determinada de nucleótidos), lo cortan,
ecuación siguiente: extraen del resto de la cadena, cuando reconocen un
patrón de secuencia específica, generando
A = DO = εlc (1)
fragmentos de ADN conocidos como fragmentos de
Donde ε es el coeficiente de extinción molar, c es la restricción, esta cadena llamada RLPM (Restruction
concentración y l es el paso de luz de la cubeta. Las Fragmente Lenght polymopism) puede volver a
proteínas y los ácidos nucleicos absorben la luz en el colocarse con ayuda de enzimas llamadas ligasas, las
intervalo ultravioleta, a longitudes de onda enzimas de restricción (restrictasas) ayudan a que se
comprendidas entre los 210 y los 300 nm. Tal como se corte el ADN y la ligasas permiten que se vuelva a
ha señalado anteriormente, la absorbancia máxima de pegar, por lo que si se quita un gen se puede colocar
las soluciones de ADN y ARN corresponde a 260 nm y otro en su lugar, hay hidrolisis en el esqueleto de
la de las soluciones de proteínas, a 280 nm. Dado que azúcar, fosfato, este esqueleto se rompe entre dos
las soluciones de ADN y ARN absorben parcialmente la bases específicas en una hebra.
luz a 280 nm y las que contienen proteínas hacen lo
Existen muchas enzimas de restricción, pertenecen a
propio a 260 nm, el cociente de los valores obtenidos
este grupo una gran diversidad de
a 260 nm y a 280 nm (A260/A280) proporciona una
endodesoxirribonluceasas, algunas enzimas
estimación del grado de pureza de los ácidos
reconocen una secuencia de seis pares de bases, y
nucleicos. Los cocientes A260/A280 respectivos del
otras una secuencia de cuatro bases, La importancia
ADN y el ARN puros son aproximadamente de 1,8 y
de las enzimas de restricción radica en su gran
2,0. Con un paso de luz de 10 mm y una longitud de
especificidad para reconocer una secuencia corta de
onda de 260 nm, una absorbancia A = 1 corresponde
DNA bicatenario e hidrolizar un enlace fosfodiéster
aproximadamente a 50 µg/ml de ADN bicatenario, 37
(cortan el enlace) en cada hebra, siempre en la misma
µg/ml de ADN monocatenario, 40 µg/ml de ARN o 30
posición. Cada enzima se caracteriza, por su sitio o
µg/ml de oligonucleótidos. Si la muestra también
secuencia de reconocimiento o de restricción, llamado
contiene proteínas, el cociente A260/A280 será
también secuencia diana, los fragmentos de DNA
considerablemente inferior a dichos valores y no
resultantes son útiles, la enzima de restricción tipo II
podrá determinarse con exactitud la cantidad de
es utilizada como herramienta en el campo de la
ácidos nucleicos. Debe precisarse que la
biología molecular en el área de genética molecular,
espectrofotometría no permite identificar de forma
ya que rompen el ADN en sitios específicos para
fiable impurezas de ARN presentes en las soluciones
recuperar secuencias conocidas, sus aplicaciones
de ADN. Puede emplearse la absorbancia a 325 nm
pueden ser para iniciar la clonación celular o acelular,
para poner de manifiesto la presencia de restos en la
para el análisis del DNA, para elaborar mapas físicos de
solución o la suciedad de la cubeta.
restricción o para la detección de polimorfismos, y son
el avance clave en la tecnología del DNA
recombinante, actualmente se comercializan con
UTILIZACIÓN DE ENZIMAS DE RESTRICCIÓN. elevada especificidad, estabilidad y pureza.
Las enzimas de restricción son endonucleasas de
restricción, también llamadas nucleasas de restricción
y restrictasas, producidas por bacterias , cada especie
bacteriana tiene una enzima de restricción que
reconoce una secuencia diferente, y en algunos casos
tiene más de una enzima de restricción, estas enzimas

pág. 78
Las secuencias de reconocimiento de las enzimas de restricción tienen una simetría palindrómica, es decir, las
secuencias se leen igual en ambas cadenas del DNA en dirección 5´-3´.

Figura 3.20

Las diversas enzimas de restricción se agrupan en tres
familias de acuerdo con sus propiedades Tipo I (posee
tres subunidades, pero la restricción no ocurre en el
sitio de reconocimiento, ocurre al azar en sitios
distantes al del reconocimiento) Tipo II (la restricción
ocurre en el sitio de reconocimiento) y Tipo III (es
similar al tipo I rompiendo el DNA más allá de sitio de
reconocimiento).
En la siguiente tabla se indica con una flecha el lugar
donde la enzima corta el DNA:
por un numero romano que las identifica cuando en
una misma variante se hayan encontrado varias
enzimas con distinta especificidad (más de una
endonucleasa aislada en esa misma especie). Una de
las primeras enzimas de restricción identificadas fue
aislada de la cepa R de Escherichia coli y se denominó
Eco RI.
La siguiente sin enzimas de restricción y la bacteriana
de donde son extraídas:

Se nombran con tres letras del género y especie de la

bacteria de la que se aislaron originalmente, a veces
seguida por otra letra que identifica el serotipo
(variante antigénica de la bacteria), posteriormente

pág. 79
En el siguiente link puede verse un video que ilustra el un plásmido) y los abra. Tras hibridar los extremos
proceso de las enzimas de restricción: cohesivos del plásmido con los del DNA donador, una
https://www.youtube.com/watch?v=yDGA8n1oJ5Q DNA ligasa une de forma covalente las dos moléculas.
Después, el vector recombinante se inserta en las
células hospedadoras.
CLONACIÓN MOLECULAR.

En la clonacion molecular un trozo de DNA aislado de

una célula donadora se introduce en un vector. Un
vector es una molécula de DNA capaz de replicarse
que se utiliza para transportar una secuencia ajena de
DNA, a menudo un gen, al interior de una célula
hospedadora.

La elección del vector depende del tamaño del DNA

donador. Por ejemplo, se suelen utilizar plásmidos
bacterianos para clonar pequeños trozos de DNA (15
kb). Los fragmentos un poco más grandes (24 kb) se
incorporan a vectores bacteriófagos λ, mientras que se
utilizan vectores cósmidos para fragmentos de DNA de
hasta 50 kb. El bacteriófago λ puede utilizarse como
vector debido a que una porción sustancial de su
genoma no codifica la producción del fago y por lo
tanto puede eliminarse. El DNA viral eliminado puede
sustituirse por DNA ajeno. Los cósmidos son vehículos
de clonación que contienen sitios cos del bacteriófago
λ incorporados en secuencias de DNA del plásmido con
uno o varios marcadores selectivos. Los sitios cos
permiten su entrega a la célula hospedadora en una
cabeza del fago, el DNA del plásmido facilita la
replicación independiente de la unidad recombinada y
los marcadores de selección permiten la detección de
Figura 3.21. Construcción de un DNA recombinante.
los recombinantes que tenido éxito. Puede insertarse
trozos aún mayores en cromosomas artificiales En algunas circunstancias. La introducción de un
bacterianos y en cromosomas artificiales de levaduras. vector de clonación en una célula hospedadora es un
Los cromosomas artificiales bacterias (BAC), que proceso trivial. Por ejemplo, los vectores de fagos se
proceden de un plásmdo de E. coli denominado factor diseñan de tal forma que introduce el DNA
F, se utilizan para clonar secuencias de DNA de hasta recombinante en un proceso infeccioso que se
300 kb. Los cromosomas artificiales de levaduras denomina transfección y algunas bacterias captan los
(YAC), que pueden acomodar hasta 1000 kb, se plásmidos sin ayuda. Sin embargo, para que capten el
construyen utilizando secuencias de DNA de levaduras DNA ajeno, la mayoría de las células hospedadas
que se replican de forma autónoma (p.ej., contienen deben ser inducidas. Se utilizan varios métodos. En
un origen de replicación de DNA eucariota). algunas células procariotas y en algunas eucariotas la
adición de Ca +2 al medio promueve la captación. En
La formación de un DNA recombinante requiere una
otras, se utiliza un proceso que se denomina
enzima de restricción que corte el DNA vector (p.ej.,

pág. 80
electroporación, en el que las células se tratan con una
corriente eléctrica. Uno de los métodos más eficaces
para transformar células animales y vegetales es la
microinyeccón directa de material genético. Por
ejemplo, los animales transgénicos se crean mediante
la microinyeccion de un DNA recombinante en óvulos
fertilizados. Una vez que se introduce, cada clase de
célula replica el DNA recombinante junto con su
propio genoma. Obsérvese que los vectores
recombinantes deben contener regiones reguladoras
que sean reconocidas por las enzimas de la célula
hospedadora. Al proliferar las células hospedadoras
que han sido transformadas con éxito, ellas amplifican
con rapidez el DNA recombinante. Por ejemplo, en
condiciones favorables de disponibilidad de nutrientes
de temperatura, un único plásmido recombinante
introducido en una célula de E.coli puede replicase
1000 millones de veces en unas 11 horas. Sin embargo,
las células transformadas y sin transformar suelen
verse exactamente iguales. Por consiguiente, los
investigadores suelen diseñar protocolos de clonación
que utilizan ectores con genes marcadores de
selección (genes cuya presencia puede detectarse),
para facilitar la identificación de las células
transforadas. Por ejemplo, usualmente se incorporan
genes.
Figura 3.22. Clonación del DNA: En este proceso, cada clon
se produce introduciendo una molécula recombinante en
una célula hospedadora, que a su vez replica el vector junto
con su propio genoma. La misma enzima de restricción se
usa para crear el vector lineal y los fragmentos de DNA.
2.6 Hibridación, amplificación, secuenciación.
Hibridación.
La hibridación es u método de secuenciación, se
utilizan microarrays de oligonucleótidos, con
posibilidad de identificar el genotipo de un individuo.
Amplificación.
Los científicos forenses utilizan la PCR y otras
tecnologías para amplificar el DNA de una escena de
crimen a fin de generar el perfil genético único que
distingue a un individuo de los demás
Secuenciación.
Se basa en la capacidad de replicar DNA invitro con el
fragmento de Klenov de la DNA polimerasa I, la
adición de DNA polimerasa I a un molde hidrolizado y
al cebador, en presencia de las cuatro bases de
nucleótidos, iniciara de inmediato la síntesis de ADN,
La secuenciación de DNA debe producir un conjunto
de fragmentos de longitud creciente, estos
fragmentos empiezan todos en el mismo punto y
varían en longitud, los extremos fe los fragmentos
tienen la misma base ya sea guanina, adenina, citosina
y timina.
Existen dos métodos para secuenciar el DNA, químico
y enzimático.
1.-Método químico.
La molécula de ARNr se marca con una molécula de 32P
en un extremo, se utilizan nucleasas para hacer
digestiones de la molécula de ARN marcado en
distintos lugares. La RNAsa T1 corta las guaninas, la
RNAsa U2 corta las adeninas y una hidrólisis alcalina
rompe todos los enlaces fosfodiéster. Se utiliza un gel
de acrilamida para separar los fragmentos de estos
tres tipos de ruptura, lo que permite determinar el
orden de las guaninas, adeninas y pirimidinas de una
molécula de ARN ribosomal. A diferencia del método
enzimático, en el que se puede usar un iniciador
pág. 81
marcado para generar los fragmentos que serán puede hacer introduciendo una marca de 32P en el
secuenciados, el método químico requiere que la extremo 5’ de la molécula con una cinasa T4, o en el
molécula de ARN sea marcada directamente, esto se extremo 3’ con una ligasa T4.

2.- Método enzimático.

Para la secuenciación de una molécula de mARN de casi 200 pb, se utilizaron un iniciador marcado con 32P y la
transcriptasa reversa. Usando reacciones similares a las del método de Sanger, se generaron fragmentos de cADN
con una terminación específica dada por ddNTPs, se determinó el orden de los fragmentos de ADN generados en un
gel de acrilamida, cuanto mayor es la cantidad de ARN viral usado como templado, menor es la resolución obtenida
en el gel de acrilamida debido a que las bandas son anchas, se obtuvo la mejor resolución utilizando 0.4 µg (0.75
pmol) de ARN como templado. En una reacción de secuenciación de rARN, se obtuvo la mejor resolución empleando
10 veces menos ARN, es decir, solamente 0.13 pmol.

El método enzimático es un método directo porque el templado es una molécula de ARN. La marca se puede
incorporar a los fragmentos de ADN de maneras alternativas a la usada por Brownlee y Cartwright en 1977. El uso de
ddNTPs marcados tiene la ventaja de que los fragmentos que sufren una terminación prematura no se detectan ni
interfieren con la interpretación de la secuencia. La terminación prematura suele ser un problema más común en la
secuenciación de ARN por la formación de estructuras secundarias que interfieren con la actividad de la transcriptasa
reversa. Además, la síntesis de fragmentos de ADN a 37 ºC carece de las ventajas de las altas temperaturas que se
pueden usar con otras enzimas (polimerasa Taq).En la siguiente tabla se indican algunas de las enzimas que han
tenido un papel importante en el desarrollo de los métodos de secuenciación de ácidos nucleicos.

pág. 82
REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR).
La Ingeniería genética es conocida como la tecnología
del ADN recombinante in vitro, la técnica de la
Reacción en Cadena de la Polimerasa ha
revolucionado el conjunto de técnicas de la Biología
molecular. El producir muchas copias de una molécula
especifica de ADN mediante un proceso químico
utilizando una enzima ADN polimerasa y
oligonucleótidos que funcionan como primers se
expuso en 1971 por Kleppe y sus colegas, pero en 1985
el químico Kary Mullis desarrollo la técnica de PCR,
quien obtuvo el premio nobel de química en 1993 por
el invento de esta tecnología , la cual es un método
bioquímico donde la reacción permite la amplificación
exponencial de una molécula de ADN, esta reacción
es catalizada por una enzima en la cual pequeñas
cantidades de cualquier segmento “blanco” del DNA
se multiplican logarítmicamente, se producen in vitro
grandes cantidades de una secuencia de ADN, ya que
de un fragmento se generan millones de copias, sin
necesidad de recurrir a vectores o replicación en
bacterias. Inicialmente se hizo uso de la polimerasa de
la bacteria de Escherichia coli, remplazándola
posteriormente por la bacteria de Thermus aquaticus,
la polimerasa de esta bacteria es denominada Taq
polimerasa, actuando entre 75 y 80°C, resistiendo más
de dos horas a 98°C, posteriormente hubo necesidad
de que los ciclos de la reacción fueran más
rápidamente y se realizaron mediante equipos
automatizados. Los nuevos equipos y las avanzadas
técnicas de secuenciación y programas de
computación para la manipulación de datos
permitieron el desarrollo de mejores ensayos de PCR,
así como la comparación de secuencias en el mundo.
Para 1990 se alcanzó la primera amplificación y
detección simultanea de las secuencias específicas de
DNA usando un colorante fluorescente, y en 1991 se
adquieren los derechos y las patentes mundiales de la
PCR.
Técnica de la Reacción en Cadena de la Polimerasa
(PCR).
La Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo
real, es una técnica muy sensible y se basa en el
principio del método desarrollado por Kary Mullis,
combina la amplificación y detección en un mismo
paso, posee alta especificidad, amplio rango de
detección ( de 1 a 107 equivalentes genómicos de la
secuencia blanco), rapidez en la visualización del
producto Los oligonucleótidos son el punto de inicio
desde un extremo 3´ libre, aquí es el punto para la
adición de nucleótidos y para copiar la cadena molde
en el PCR, una vez que el oligonucleótido se une, la
polimerasa de ADN puede seguir extendiendo la hebra
complementaria. El segmento de ADN que sirve de
molde no requiere estar necesariamente en estado
puro (puede ser una mezcla compleja de materiales
biológicos). Él número de copias del fragmento de
ADN que se encuentra entre los dos oligonucleótidos
se amplifica con varios ciclos de reacción, cada ciclo de
una reacción de PCR se lleva a cabo en tres pasos, la
repetición de este ciclo unas 40 veces permite obtener
millones de copias del fragmento en estudio.
Taq ADN polimerasa.
Cuando se desarrolló el método de secuenciación de
Sanger, se usó el fragmento Klenow de la polimerasa I
de E. coli para hacer la síntesis de los fragmentos de
ADN con una terminación específica. En 1957, se aisló
la Polimerasa I y durante muchos años se pensó que
era la única polimerasa que tenía E. coli. De hecho, su
actividad es tan grande que enmascara la actividad de
las otras polimerasas de esta bacteria, y hasta que se
obtuvo una mutante que no producía la polimerasa I
(polA), fue que se pudieron detectar las otras enzimas.
El uso de esta enzima tiene algunas desventajas, en
comparación con las polimerasas que se aislaron de
otros organismos. La reacción de síntesis de ADN
reportada por Sanger en 1977, es de un solo paso, y en
esta se tienen que sintetizar todas las posibles
combinaciones de fragmentos de ADN necesarios para
determinar la secuencia de un templado. La razón por
la que la síntesis se realiza en un solo paso se debe a
que la temperatura óptima para la actividad de
pág. 83
Klenow es alrededor de 37 ºC (temperatura óptima de
crecimiento de E. coli). Por lo tanto, al elevar la
temperatura para desnaturalizar los híbridos o
estructuras secundarias del ADN, se inactiva la
Klenow, y es necesario añadir más enzima para hacer
un segundo ciclo de síntesis de fragmentos de ADN,
este método se remplazó con otras polimerasas más
estables, aisladas de organismos termófilos. Una de las
polimerasas más conocidas, fue aislada de Thermus
aquaticus, y se le dio el nombre de Taq. Debido a que
esta enzima es resistente a altas temperaturas, fue
posible automatizar la reacción de PCR, sin necesidad
de añadir enzima nueva en cada ciclo de reacción. La
temperatura de extensión de las cadenas de ADN se
realiza a 72 ºC, en lugar de 37 ºC. Al hacer el
alineamiento de los oligonucleótidos a una
temperatura más elevada, se obtiene una mayor
especificidad y homogeneidad en los fragmentos
generados para la reacción. Existen polimerasas
purificadas que pueden sintetizar hasta 1500 bases de
ADN por minuto, y que mantienen su actividad en un
intervalo amplio de temperaturas elevadas (70-80 ºC).
Por lo que fue posible obtener fragmentos uniformes
de ADN de hasta 1000 bases y se pudo determinar una
secuencia de este tamaño.
El uso de la Taq ADN polimerasa fue uno de los
impulsos más importantes que se dio en la tecnología
de la PCR. Esta enzima se obtuvo de forma
recombinante, por lo que se eliminaron funciones no
deseadas de la enzima original, el mejoramiento del
uso de los buffers también incremento la actividad y la
estabilidad de las polimerasas, para 1990 ya se
contaba con buffers de forma comercial entre ellos se
encuentra los siguientes: dNTPs, MgCl2, además de
Taq polimerasa.
La siguiente imagen representa la polimerasa.
Para llevar a cabo la técnica de PCR en tiempo real se
requiere
Pasos del ciclo de la reacción:
1.- Desnaturalización de las hebras de ADN.
En este paso se separan las cadenas de ADN por
ruptura de los enlaces de hidrogeno. Para que el
oligonucleótido se pueda unir es necesario que el
templado (fragmento de ADN que se desea amplificar)
sea de cadena sencilla. Además, en este paso se
deshace cualquier tipo de estructura secundaria
formada entre los segmentos complementarios de los
oligonucleótidos y que pudiera interferir con su
habilidad de unirse al templado.
De acuerdo a la técnica la desnaturalización del ADN
se realiza incubando la reacción a una temperatura de
94-95°C por 30 segundos, o 97°C por 15 segundos, se
ha considerado que temperaturas más altas pueden
ser apropiadas para templados ricos en G + C.
Las desnaturalizaciones incompletas o bien
temperaturas demasiado altas, pueden provocar poco
rendimiento del producto y pérdida de la actividad de
la enzima respectivamente.
2.- Temperatura de alineamiento (hibridación).
Esta temperatura y el tiempo requerido para el
alineamiento de los primers (oligonucleótidos
iniciadores o primers) tiene que ver con las
características de los oligonucleótidos que serán
utilizados, como son composición, tamaño y
concentración de los primers amplificadores, estos
fragmentos complementarios se van a unir a cada una
de las dos cadenas separadas del templado de ADN.
Esta reacción consiste en la hibridación de los primers,
pág. 84
las condiciones de temperatura facilitan la unión de las
primers a las cadenas.
Para que se forme el complejo templado-primers es
importante que la temperatura de hibridación o
temperatura melting (Tm) sea la óptima, entre 50 y
60°C.
En la siguiente tabla se encuentran las características
de los oligonucleótidos que deben ser utilizados:
La temperatura de alineamiento óptima es de 5°C por
debajo de la temperatura de los primers. Las DNA
polimerasa son activas en un amplio rango de
temperaturas, la extensión de los primers ocurre a
bajas temperaturas, así como el paso de alineamiento
3.- Extensión de la cadena de ADN.
En este tercer paso del ciclo de reacción de PCR la
temperatura es a 72°C para la extensión de primer,
temperatura óptima para que la polimerasa de ADN
lleve a cabo su acción, insertando los diferentes
nucleótidos complementarios en el orden que le va
indicando la cadena que actúa como molde.
El tiempo de incubación y extensión depende del
tamaño del segmento (longitud) que se desea
amplificar, normalmente la polimerasa puede
sintetizar 1,000 bases por minuto, un tiempo de
extensión de un minuto es considerado suficiente para
productos de hasta 2 kb de longitud, en esta reacción
se llevan a cabo de 30 a 40 ciclos de estos tres pasos
para lograr la amplificación deseada.
La extensión de las cadenas es en dirección de la
síntesis el ADN es decir 5´a 3 ´
Los productos de la PCR llamados amplicones son
analizados en geles de agarosa para confirmar si la
reacción fue exitosa por medio de electroforesis, que
consiste en la separación de grandes moléculas como
los ácidos nucleicos a través de una matriz sólida que
funciona como un filtro para separar las moléculas en
un campo eléctrico de acuerdo a su tamaño y carga
eléctrica, utilizando un buffer o tampón, en el caso de
los ácidos nucleicos el grupo fosfato les proporciona la
carga negativa, por lo que durante la electroforesis
migran hacia el polo positivo
En esta imagen los amplicones se representan
mediante las bandas, y se comparan con un marcador
de peso molecular conocido para determinar la
especificidad de la reacción, donde PB indica el
número de pares de bases.
La siguiente tabla indica la relación entre
Cantidad de DNA y el número de ciclos:
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Termociclador.

La primera compañía que desarrolló la

instrumentación necesaria para llevar a cabo el RT-
PCR fue Applied Biosystems (PCR en tiempo real
Applied Biosystems) en el año 1996, y desde entonces
otras compañías como BioGene, Bioneer, Bio-Rad,
entre otras han desarrollado nuevos equipos. Una
parte importante de estas máquinas se utilizan en
investigación académica. El termociclador es un
aparato que permite llevar a cabo de forma
automática y reproducible la sucesión de ciclos de
temperatura necesarios para la PCR, existen muchos
modelos, pero deben de tener las características
necesarias para ajustes de temperaturas y
programación de tiempos, se encarga de transformar
la energía eléctrica en energía térmica para variar la
temperatura en cada etapa de reacción del
experimento.

Están diseñados para establecer un sistema

homogéneo en donde las condiciones de temperatura
y tiempo necesarios no se modifiquen en cada uno de
los ciclos, debe ser lo suficientemente rápido en la
transición de temperaturas de una etapa a otra
(desnaturalización del ADN molde, alineamiento de
los oligonucleótidos y síntesis)

También puedes consultar:

Angarita Merchán, Maritza, Torres Caicedo, María Inés, &
Díaz Torres, Andrea Katherine. (2017). Técnicas de Biología
Molecular en el desarrollo de la investigación. Revisión de la
literatura. Revista Habanera de Ciencias Médicas, 16(5),
796-807. Recuperado en 29 de noviembre de 2019, de
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S17
29-519X2017000500012&lng=es&tlng=es.

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 ACTIVIDAD de Aprendizaje:
1. Retomando el cuadro CQA elaborado al inicio, llena la tercera columna.

ACTIVIDAD de Aprendizaje:
1. A partir de la discusión con tus compañeros, genera un organizador gráfico sobre las
técnicas cas de la biología molecular y su aplicación actual.

ACTIVIDAD Integradora:
Realiza un ensayo sobre la aplicación de técnicas de Biología molecular

Referencias
De Erice Zuñiga, E. V. (2012). Biología la ciencia de la vida. México D.F: Mc Graw Hill.
De Necochea Campion, R. (5 de Enero de 2020). Obtenido de
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/secuenciacion_acidos_nucleicos.pdf
Mckee, T. (2014). Bioquímica Las bases moleculares de a vida. Mexico, D.F.: McGraw Hill Education.
Peña Díaz , A. (2011). Bioquímica. México: Limusa.
Pérez Granados, A. (2007). Biología Pre-Universitaria. México,D.F: Santillana.
Smith, C. (1991). Biología molecular y biotecnología. México: Iberoamericana.
Somma.M. (10 de enero de 2020). Obtenido de Organización Mundial de la Salud: https://gmo-
crl.jrc.ec.europa.eu/capacitybuilding/manuals/Manual%20ES/Sesion4.pdf
Timberlake, K. (s.f.). Química Introducción a la química general, a la orgánicay a la bioquimica. Universidad
Iberoamericana.
Ville, C. (1981). Biología. México: interamericana.

pág. 87