Universidad del Valle de Guatemala
Facultad de Ciencias y Humanidades
Botánica II
Cultivo de tejidos vegetales
Introducción
El cultivo de tejido vegetal fue desarrollado a
partir de la investigación de botánicos y fisiólogos
vegetales desde 1950. Actualmente se ha
convertido en una herramienta internacional
importante en la selección, cruzamiento, control
de enfermedades y producción en masa de
cultivos de cosecha e involucra diferentes plantas
en agricultura, horticultura, forestales y frutales
(Morgan 2009).
La ciencia del cultivo de tejidos vegetales debe su
origen a la investigación sobre hormonas que
controlan el crecimiento y desarrollo vegetal. Este
conocimiento se combinó con las técnicas básicas
de microbiología por las cuales microorganismos
se hacen crecer en medios estériles para la
producción de microorganismos e identificación.
Desde estas dos fuentes provino la tecnología por
la cual las plantas u órganos de plantas se pueden
multiplicar en gran número, o su crecimiento
individual controlado, haciendo crecer pequeños
trozos de tejido vegetal sobre una receta precisa de
nutrientes en un recipiente estéril (Morgan 2009).
Plasticidad y totipotencialidad
Los conceptos de plasticidad y totipotencialidad
son fundamentales para entender el cultivo y de
células vegetales y la regeneración de plantas
completas (Slater et-al 2008).
Muchos de los procesos involucrados en el
crecimiento y desarrollo de las plantas se adaptan
a las condiciones ambientales. Esta plasticidad les
permite a las plantas alterar su metabolismo,
crecimiento y desarrollo para adaptarse mejor a su
ambiente. De particular importancia para el
cultivo de tejidos es la habilidad de poder iniciar
la división celular de casi cualquier tejido de la
planta y regenerar órganos perdidos. Cuando las
células vegetales y tejidos se cultivan in vitro,
generalmente exhiben un alto grado de
plasticidad, permitiendo que un tipo de tejido u
órgano se cree a partir de otro tipo. De esta forma
plantas enteras pueden ser regeneradas (Slater et-
al 2008).
Arturo José Monterroso García
Carné #06082
La regeneración de organismos completos
depende del concepto que todas las células de una
planta pueden, dados los estímulos correctos,
expresar todo el potencial genético de la planta
parental. Este mantenimiento del potencial
genético recibe el nombre de “totipotencia” (Slater
et-al 2008).
El entorno de cultivo
Cuando las células vegetales se cultivan in vitro
todas sus necesidades, químicas y físicas, deben
ser satisfechas por el medio de crecimiento y el
ambiente externo (luz, temperatura, etc.). El
medio de crecimiento debe proveer todos los iones
minerales esenciales necesarios para el
crecimiento y el desarrollo. En algunos casos
también debe proveer suplementos orgánicos
adicionales, como aminoácidos y vitaminas
(Slater et-al 2008).
Muchos de los cultivos de células vegetales
necesitan la adición de una fuente permanente de
carbono en forma de azúcar (comúnmente
sacarosa), ya que esas células no son
fotosintéticas. Otro componente vital que debe ser
provisto es el agua, el solvente biológico
principal. Factores físicos como la temperatura, el
pH, el ambiente gaseoso, la duración y cantidad
de luz y la presión osmótica también deben
mantenerse dentro de rangos aceptables (Slater et-
al 2008).
Medios de cultivo de células vegetales
Los medios utilizados para el cultivo in vitro de
células vegetales están conformados por tres
componentes básicos (Slater et-al 2008):
1. Elementos esenciales (iones minerales)
provistos como una mezcla de sales.
2. Un suplemento orgánico que brinde
vitaminas y/o aminoácidos.
3. Una fuente permanente de carbono,
usualmente sacarosa.
Para propósitos prácticos, los elementos
esenciales se subdividen en las siguientes
categorías (Slater et-al 2008):
1. Macroelementos (o macronutrientes).
2. Microelementos (o micronutrientes).
3. Una fuente de hierro.
Componentes del medio
Macroelementos
Esta solución stock provee los elementos que la
planta requiere en grandes cantidades para su
crecimiento y desarrollo. El nitrógeno, fósforo,
potasio, magnesio, calcio y azufre (y carbono, que
se agrega por separado) son comúnmente
considerados como macroelementos. Estos
elementos constituyen al menos el 0.1% del peso
seco de las plantas (Slater et-al 2008).
Microelementos
Estos elementos se requieren en pequeñas
cantidades para el crecimiento y desarrollo de la
planta y juegan muchos y diferentes papeles. El
manganeso, yodo, cobre, cobalto, boro,
molibdeno, hierro y zinc comúnmente conforman
los microelementos, aunque en otras recetas se
incluyen otros elementos como el níquel y el
aluminio (Slater et-al 2008).
Suplementos orgánicos
Solamente dos vitaminas, tiamina (vitamina B1) y
mioinositol (considerada como una vitamina B)
son consideradas esenciales para el cultivo de
células vegetales in vitro. Sin embargo, otras
vitaminas se agregan al medio por razones
históricas (Slater et-al 2008).
Algunos aminoácidos también se agregan
comúnmente al suplemento orgánico. El utilizado
más frecuentemente es glicina, pero en muchos
casos su inclusión no es esencial. También se
utilizan la arginina, asparagina, ácido aspártico,
alanina, ácido glutámico, glutamina y prolina
(Slater et-al 2008).
Fuente de carbono
La sacarosa es barata, tiene amplia disponibilidad,
es asimilada con facilidad y es relativamente
estable, por lo que es la fuente de carbono más
utilizada. Otros carbohidratos como la glucosa,
maltosa, galactosa y sorbitol también pueden
utilizarse, y en algunas circunstancias especiales
pueden ser superiores a la sacarosa (Slater et-al
2008).
Agentes gelificantes
El medio para el cultivo de células vegetales
puede ser utilizado en forma líquida o sólida,
dependiendo del tipo de cultivo. Para muchos
tipos de cultivos que requieren que las células o
tejidos vegetales crezcan en la superficie del
medio, este debe ser solidificado, o mejor dicho
gelificado. Para esto se utiliza comúnmente agar o
agarosa (Slater et-al 2008).
Reguladores de crecimiento
Los reguladores de crecimiento son componentes
críticos del medio que determinan la ruta de
desarrollo de las células vegetales. Los
reguladores utilizados más frecuentemente son
hormonas de plantas o sus análogos sintéticos
(Slater et-al 2008).
Hay cinco clases principales de reguladores de
crecimiento utilizados en el cultivo de células
vegetales (Slater et-al 2008):
1. Auxinas: promueven ambos la división y
el crecimiento celular.
2. Citoquininas: promueven la división
celular.
3. Giberelinas: están involucradas en el
alargamiento celular y son importantes
agronómicamente al determinar la altura
de la planta y el inicio del desarrollo y
maduración de los frutos.
4. Ácido abscísico (ABA): inhibe la
división celular y es utilizado
frecuentemente en cultivo de tejidos
vegetales para promover diferentes rutas
de desarrollo, como la embriogénesis
somática.
5. Etileno: este es un regulador
comúnmente asociado con el control de
la maduración de los fruto. Algunos
cultivos producen etileno; si este se
acumula puede llegar a inhibir el
crecimiento y desarrollo del cultivo.
Las auxinas y Citoquininas son los reguladores de
crecimiento utilizados más frecuentemente y son
utilizados en conjunto; la relación de auxina a
citoquinina determina el tipo de cultivo
establecido o regenerado. Una relación alta de
auxina a citoquinina favorece la formación de
raíces, mientras que una relación alta de
citoquinina a auxina favorece la germinación; una
relación intermedia favorece la producción de un
callo, como se muestra en la Fig 1 (Slater et-al
2008).
Fig 1. Efecto de la relación de auxina a citoquinina en el
crecimiento de un cultivo (Slater et-al 2008).
Tipos de cultivo
Los cultivos son iniciados, generalmente, a partir
de partes estériles de una planta completa. Estas
partes se denominan “explantes” y pueden ser
partes de órganos, como hojas o raíces, o pueden
ser tipos específicos de células, como polen o
endospermo. Las características del explante
afectan la eficiencia de la iniciación del cultivo.
Generalmente un tejido joven de crecimiento
rápido (o tejido que se encuentre en un estado
temprano de desarrollo) es más efectivo (Slater
et-al 2008).
Callo
Un callo es un cultivo que se inicia con una
relación igual de auxina y citoquinina,
produciendo una masa amorfa de células no
diferenciadas. Este tipo de cultivo se puede hacer
en la oscuridad, ya que las células no son
fotosintéticas. Por esto mismo necesitan la adición
de vitaminas y otros nutrientes para mantenerlo en
buen estado (Slater et-al 2008).
La manipulación de la relación de auxina a
citoquinina puede ser utilizada para producir
raíces, estimular la germinación o producir
embriones somáticos de los que se puede producir
plantas enteras. Los cultivos de este tipo también
pueden ser utilizados para iniciar suspensiones
celulares, que son utilizadas en una variedad de
estudios de transformación de plantas (Slater et-al
2008).
Suspensiones celulares
Los callos pueden ser de dos tipos, compactos y
frágiles. Los compactos tienen las células
empacadas de forma muy densa, mientras que los
frágiles las tienen asociadas débilmente. Los
callos frágiles se pueden colocar en el mismo
medio del que están hechos, pero líquido, para dar
origen a una suspensión de células, ya que al
colocarlo allí grupos de células se desprenden
(Slater et-al 2008).
Protoplastos
Estas son células vegetales cuya pared celular ha
sido eliminada, regularmente por aislamiento
enzimático. Este consiste en utilizar enzimas
como celulasa y pectinasa para eliminar la pared
sin dañar el protplasto. Los protoplastos
resultantes son ideales para ser manipulados
utilizando una variedad de medios (Slater et-al
2008).
Cultivo de raíces
Este tipo de cultivo se puede establecer in vitro a
partir de explantes de la punta de la raíz primaria o
de raíces laterales en un medio sencillo. El cultivo
de raíces es potencialmente ilimitado, ya que se
trata de órganos indeterminados (Slater et-al
2008).
Cultivo de brotes y meristemos
Las puntas de los brotes, que contienen el
meristemo apical, pueden ser cultivadas in vitro,
produciendo grupos de brotes. Este método puede
ser utilizado para propagación clónica. Este tipo
de cultivo es una alternativa potencial para la
regeneración de cereales (Slater et-al 2008).
Cultivo de embriones
Los embriones pueden ser utilizados como
explantes para generar callos o embriones
somáticos. Ambos embriones, maduros e
inmaduros, pueden ser utilizados como explantes.
El uso de callos derivados de embriones es el
método más popular para regenerar plantas
monocotiledóneas (Slater et-al 2008).
Cultivo de microsporas
Este tipo de cultivo se utiliza para producir tejidos
haploides a partir de polen (que contiene las
microsporas) o anteras (que contiene polen) como
explantes (Slater et-al 2008).
Los tejidos haploides también pueden producirse a
partir del gametofito femenino, el óvulo; en
algunos casos este método es más eficiente que el
uso de polen o anteras (Slater et-al 2008).
Regeneración de plantas

Existen dos métodos para la regeneración de

plantas que son utilizados ampliamente: la
embriogénesis somática y la organogénesis (Slater
et-al 2008).

Embriogénesis somática

En este tipo de embriogénesis somática (asexual),

estructuras similares a embriones se desarrollan en
plantas completas, en forma análoga a como lo
hacen los cigotos normales. Estas estructuras están
formadas a partir de tejidos somáticos directa o
indirectamente (Slater et-al 2008).

En la embriogénesis directa, el embrión se forma

directamente a partir de una célula o un pequeño
grupo de células sin la intervención de un callo.
En la indirecta primero se produce un callo a
partir del explante, a partir del cual se pueden
producir embriones o una suspensión celular y
luego producir el embrión (Slater et-al 2008).

Organogénesis

La organogénesis consiste en la producción de

órganos, ya sea directamente a partir de un
explante o de un callo. Hay tres métodos de
regeneración de plantas utilizando la
organogénesis, los primeros dos dependen de la
formación de órganos a partir de un callo o
directamente de un explante (Slater et-al 2008).

Literatura citada

W.M. Morgan. 2009. Cultivo de tejido vegetal.

International Plant Laboratories. UK.

A. Slater, N. Scott, M. Fowler. 2008. Plant

biotechnology. Oxford University Press. USA.