1. ¿Quién inventó la metodología del Southern Blot?
R:Erwin southern
2. ¿Qué tipo de material genético se usa en esta metodología?
R: Utiliza DNA
3. ¿Cuáles pueden ser las aplicaciones del southern blot?
R: se puede detectar DNA genomico o DNA plasmidico, genotificar atravez de rflp, trazamiento de mapas de restriccion para enzimasy poder hacer un analisis filogenetico
4. ¿Qué metodología utiliza el Southern Blot?
R: separacion electroforetica de DNA y la hibridadacion de secuencias de DNA complementarias
5. ¿Qué se utiliza para llevar a cabo la digestión?
R: una enzima de restriccion como HINDII
6. ¿Cómo y dónde corta HINDIII? Investiga un poco más
R: reconoce la secuencia 5’AAGCTT-3 ‘de la cadena superior y 3’TTCGAA-5’ de la cadena inferior y
corta entre las dos A en ambas cadenas.
7. ¿Qué se utiliza para visualizar las bandas del gel?
R: bromuro de etidio o un flouroforo
8. ¿Por qué se tiene que desnaturalizar el gel después de haber terminado la electroforesis?
R: para tener muestra desnaturalizada por que se require DNA monocatenario
9. ¿Cómo se lleva a cabo la transferencia?
R: por capilaridad con la ayuda de un soporte que interacciona directo con el buffer ydonde se tendra un papel filtro entre el gel y que interaccione con el buffer y arriba se tendra papel filtro y capas de papel absorbente depspues una placa de vidrio con algo pesado arriba
10. ¿Cómo interacciona el DNA con la membrana?
R: con interacciones hidrofobicas
11. ¿Cómo se puede promover una unión covalente del DNA con la membrana?
R: con cross linking con ayuda de radiacion UV
12. ¿En qué consiste la pre-hibridación?
R: es donde se bloqueara la mayor parte de la membrana que nom tengan DNA
13. ¿En qué momento se agregará la sonda?
R: despues de usar el buffer de hibridacion
14. ¿Cuáles son los tipos de sondas?
R:las sondas radioactivas donde existe la presencia de isotopos y sondas con digoxigenina
15. ¿Cómo se visualizarán las bandas en la membrana?
Castillo Hernández Fernando Daniel
R: se pone una pelicula de rayos xque permitira ver las bandas
16. Investiga. ¿Cuáles son las características y riesgos del bromuro de etidio? ¿Cómo debe manipularse?
R: Nocivo en caso de ingestión ,mortal en caso de inhalación ,se sospecha que provoca defectos genéticos.
Se debe prever una ventilación suficiente. Usar ventilador se debe usar gafas de seguridad, asi como guantes de nitrile.se debe almacenarse lejos de agentes oxidantes fuertes en un lugar fresco y seco, y el contenedor debe mantenerse intacto y bien cerrado
Referencias:
Alberto Checa Rojas. (2017). Método: Digestión por enzimas de restricción. 2021, Noviembre 3, Conogasi.org Sitio web: http://conogasi.org/articulos/metodo-digestion-por-enzimas-de-restriccion/
Instituto de quimica . (2020). PROCEDIMIENTO DE OPERACIÓN PARA EL MANEJO DE BROMURO
DE ETIDIO. noviembre 03, 2021 , de iquimica.unam Sitio web: https://www.iquimica.unam.mx/images/iqseguro/004_Manejo_de_bromuro_de_etidio.pdf
