ANÁLISIS QUÍMICO.

ANA SOFIA MEJIA RESTREPO

MARÌA CAMILA VALENCIA PARRA

DOCENTE: LINA MARIA LONDOÑO GIRALDO.

UNIVERSIDAD LIBRE

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA DE NUTRICIÒN Y DIETÉTICA

SECCIONAL PEREIRA
 RELACIÓN ENTRE ABSORCIÓN Y CONCENTRACIÓN.

Calibración: Primeramente, llena una cubeta con 3 mℓ de agua, introdúcela en el

espectrofotómetro, ajusta la longitud de onda a 405 nm y pulsa el botón “A=0”. Saca
la cubeta y vacíala.
Diseño del experimento: Utilizando el para-nitrofenol (pNF) y agua, prepara 3
muestras en sendas cubetas, que contienen distintos volúmenes de pNF y siempre
un volumen total de 3 ml.

1 ml de pNF y 2 ml de agua.
2 ml de pNF y 1 ml de agua
3 ml de pNF y 0 ml de agua
Análisis cualitativo de resultados: Observa la relación entre el color de las
cubetas y el valor de absorbancia. Comparando las 3 medidas, ¿observas alguna
dependencia entre el valor de absorbancia y la mayor o menor concentración de
pNF en la cubeta
· La absorbancia está directamente relacionada con la concentración; bien
sabemos que el espectrofotómetro nos va a permitir determinar la
concentración de un analito por medio de la luz. Por ello es claro afirmar
que la absorbancia corresponde al valor en escala logarítmica.

El para-nitrofenol es usado principalmente como un indicador de pH, aunque cabe

aclarar que no muestra color a un pH muy bajo. Cuando se encuentra en un pH por
debajo de 5,4 es incoloro, pero cuando su pH está por encima de 5,4 es amarilla
pero, ¿a qué se debe el color amarillo? Esta propiedad se debe a un máximo de
absorbancia a una longitud de onda de 405 nm.

Se debe tener en cuenta que este químico puede causar: irritación en los ojos, piel y
tracto respiratorio, además que puede ocasionar inflamación en las partes
nombradas anteriormente.
 CUBETA 1 CUBETA 2 CUBETA 3

Compuesta por 1 ml de Compuesta por 2 ml de Compuesta por 3 ml de

para-nitrofenol y 2 m de para-nitrofenol y 1 ml de para-nitrofenol, presenta
agua, presenta un valor agua, presenta un valor un valor de absorbancia
de absorbancia de 0.530 de absorbancia de 1.076 de 1.615

En relación a lo anterior, se tiene como conclusión que a mayor contenido de

para-nitrofenol mayor va a ser el valor de absorción, por tal motivo la cubeta 3 posee
un mayor valor de absorción en comparación con la cubeta 1 y 2.

La ecuación de esta línea es y=0,0205 x – 0,018 y su R2 = 0,9998.

En el gráfico se ve claramente como hay una dependencia directa entre la

absorbancia y la concentración, ya que a mayor concentración, mayor absorbancia.
Actividad 2.

Calibración: Introduce la primera cubeta (que sólo contiene el reactivo de Bradford)

en el espectrofotómetro, ajusta la longitud de onda a 595 nm y pulsa el botón “A=0”.
Esta muestra se denomina el "tubo blanco" o "blanco de reactivos" y sirve para que
el color propio del reactivo no se considere en la determinación de proteínas.
2 ml de reactivo de Bradford y 1 ml de proteína
1 ml de reactivo de Bradford y 2 ml de proteína
3 ml de proteína

CUBETA 1 CUBETA 2 CUBETA 3

Compuesta por 1 ml de Compuesta por 2 ml de Compuesta por 3 ml de

proteínas y 2 ml de proteínas y 1 ml de proteínas, presenta un
reactivo de Bradford, reactivo de Bradford, valor de absorbancia de
presenta un valor de presenta un valor de 0.533
absorbancia de 0.173 absorbancia de 0.355
El método de Bradford es un método de naturaleza colorimétrica, es decir, los
resultados son analizados en torno a los colores y la concentración de proteínas.

Se basa principalmente en la variación de absorbancia. La forma catiónica del

colorante es roja, la cual su longitud de onda se encuentra entre 465 y 47º nm,
mientras que la forma anicónica corresponde a la forma desprotonada y su longitud
de onda es de 595 nm, como en este caso.

Según los resultados, nos damos cuenta que entre menos reactivo Bradford más es
la absorción, ya que el pico más alto fue en la cubeta 3, con un valor de 0,533,
mientras la cubeta uno obtuvo 0,173 y la cubeta 2 obtuvo 0,355.
Actividad Hb1

Cubeta 1:

cubeta 2:
cubeta 3:

Análisis cualitativo: Es la relación que existe entre a mayor concentración de

hemoglobina, mayor es el valor de la absorbancia; según el análisis en la cubeta 1
tenemos un valor de absorbancia 0,084 a una concentración de 200 ml por litro,
mientras que en la cubeta 3 tenemos un valor de absorbancia de 0,044 a una
concentración 66,66.
Segunda medida:

Análisis cuantitativo:
Al analizar los resultados obtenemos que cambia la ecuación; cuando se habla de
estar en 450nm sus valores son y= 0,001x -0,0112 con R²= 0,9996 y cuando se
habla de la absorbancia a 520 se tiene y= 0,0004x -0,0043 con R²= 0,9969, con lo
cual se puede se puede afirmar que el máximo de absorbancia obtenido fue a 450
nm; por lo cual da una mejor y mayor sensibilidad, específicamente en este caso
que hablamos de hemoglobina.
Actividad HB 2.

Espectro de absorción en las diversas formas redox de la hemoglobina.

Desoxi Hb.
oxi Hb
meta Hb
Carboxi Hb
Cianmenta Hb

Al analizar cada tipo de hemoglobina se puede concluir que la de menor absorción

es la desoxiHb, la cual presenta una absorbancia de 0,28 nm, mientras que la que
tiene mayor absorbancia es la cianmenta Hb con un valor de 0,41 nm.