Universidad de Los Andes

Facultad de Farmacia y Bioanálisis

Escuela de Bioanálisis
Cátedra de Parasitología

Tema 6:
Filo Stramenopile
Género Blastocystis

Prof. María Alejandra Blanco

A2018
PROCARIOTAS EUCARIOTAS

Unicelulares Pluricelulares

Núcleo verdadero
 Trematoda

Nematoda Cestoda

Helmintos Parasitología Artrópodos

Protozoarios

Amibas Flagelados Ciliados Apicomplexa

Blastocystis
 Trematoda

Nematoda Cestoda

Helmintos Parasitología Artrópodos

Protozoos Chromista

Amibas Flagelados Ciliados Apicomplexa Blastocystis

6 reinos

Wittaker → Protista Cavalier → Protozoa

Smith Chromista
Taxonomía: Seis (6) Reinos a

Reino Chromista (Cavalier-Smith, 1998)

b
a) Algas pardas, verde-amarillas y doradas
b) Diatomeas
c) Oomicetos
d) Otros relacionados (Género Blastocystis)

d
Universidad de Los Andes
Facultad de Farmacia y Bioanálisis
Escuela de Bioanálisis
Cátedra de Parasitología

Tema 6:
Filo Stramenopile
Género Blastocystis

Prof. María Alejandra Blanco

Abril de 2017
 Historia
1911 Alexieff (forma quística de un flagelado)
Blastocystis enterocola

1912 Brumpt
Blastocystis hominis
(hongo)

1967 Zierdt
Blastocystis hominis
(protozoo)
 Historia
¿Por qué Blastocystis se consideró un protozoo?
Características fenotípicas:

• Núcleo de eucariota (nucléolo y membrana celular definida)

• Presencia de membrana con poros y vesículas, mitocondrias,

aparato de golgi, retículo endoplásmico liso y rugoso

• Actividad seudopodial (seudópodos)

• Reproducción por división binaria, esquizogonia o esporulación

¿ Y las características genotípicas ?

 Taxonomía
Análisis de los genes SSUrRNA y factor de
elongación-1a (EF-1a).

NO es monofilético con las levaduras, hongos,

sarcodinos o esporozoos (Johnson y col.,1989)

El análisis del SSUrRNA lo relaciona

filogenéticamente con los Stramenopile
(Silberman y col., 1996)

Por lo tanto Blastocystis spp. es el

único miembro conocido de los
Stramenopile asociado
con patología en el humano
(Tan, 2008)
 Historia
1911 Alexieff (forma quística de un flagelado)
Blastocystis enterocola

1912 Brumpt
Blastocystis hominis
(hongo)

1967 Zierdt
Blastocystis hominis
(protozoo)

1996 Silberman
Blastocystis spp.
(Stramenopile)
 Taxonomía
Silberman et al., 1996
Hoevers et al., 2005
Reino Protista*
Subreino Chromalveolata
Superfilo Chromista**
Filo Heterokontophyta o Stramenopile***
Subfilo Bigyra****

* Wittaker (1969)
** Cavalier-Smith (2009)
*** Heterokonta: Poseen dos flagelos desiguales en tamaño y forma
**** Clado ancestral constituidos por organismos no fotosintéticos, ciliados,
flagelados y mohos
 Taxonomía

Taxonomía de Blastocystis (Tan, 2008)

Reino Chromista
Infrareino Heterokontophyta o stramenopile**
Filo Bigyra
Clase Blastocystea
Género Blastocystis
Especie B. hominis

Kevin S. W. Tan BSc (Hons), PhD, CBiol, MIBiol

Assistant Professor, Laboratory of Molecular and Cellular Parasitology
Director, National Malaria Reference Centre
NUS Graduate School for Integrative Sciences and Engineering
National University of Singapore
 Taxonomía
Blastocystis hominis n. sp. (Brumpt, 1912)

B. lapemi sp. nov. (Teow et al, 1991; Serpiente de mar)

B. geocheloni sp. nov. (Singh et al, 1996; tortuga)

B. cycluri sp. nov. (Singh et al, 1996; Iguana)

B. pythoni sp. nov. (Singh et al, 1996; Pitón o serpiente)

B. ratti sp. nov. (Chen et al 1997; Rattus norvegicus

[rata parda, rata de alcantarilla])
 Taxonomía

El género Blastocystis se clasifica en

subtipos (ST):
• 2009: 9 ST
• 2013: 8 nuevos ST
Total (2017)= 17 ST

Elevada diversidad genética

inter-ST e intra-ST

Nueve (9) subtipos detectados

en humanos
 Ameboide

Cuerpo central o vacuolar

Morfología de
Granular
Blastocystis spp.
 Morfología

Núcleo
Mitocondria

Cuerpo (vacuola) central

Citoplasma

Membrana externa

Núcleo

Tamaño variable según el estadio morfológico y el subtipo

 Morfología

Factores a considerar en la identificación:

20 µ

Pleomorfismo (morfotipos) Variabilidad de tamaño

 Morfología
Forma de cuerpo central (vacuolar):
. 6 a 15 µ de diámetro (Promedio: 80 µ)
. Forma esférica
. Presencia de vacuola central y un anillo delgado de
citoplasma hacia la periferia
. 4 núcleos ubicados hacia la periferia

Forma granular:
. 3 - 80 µ de diámetro
. Presencia de gránulos en la vacuola y/o en el citoplasma

Forma ameboide:
. 2,6 µ - 7,8 µ diámetro (Discrepancia)
. Forma oval
. 1 ó 2 pseudópodos
 Morfología
Forma multivacuolar:
. 5 - 8 µ de diámetro
. Rodeada de una cubierta externa gruesa
. Presencia de múltiples vacuolas

Forma avacuolar:
. 5 µ de diámetro
. Carece de vacuola central

Forma globular:
. Vesículas lipídicas en el citoplasma
 Morfología
Forma en división:
. Formación de pared para formar 2
células hijas
. Presencia o no de granulaciones

Forma de resistencia (infectante):

. 4 - 5 µ de diámetro
. Redonda u oval
. 1 - 4 núcleos
. Múltiples vacuolas
. Depósito lipídico o glucogénico
. Pared externa multilaminada
. Forma infectante

Formas mayormente observadas en una muestra de heces:

Cuerpo central > granular > fisión binaria > resistencia > ameboide
 Morfología

Estadios morfológicos de
Blastocystis spp. en cluster

Examen Directo Hematoxilina Férrica

Solución Yodada
 Morfología

Forma vacuolar Forma granular

Forma ameboide Forma quística

(*Pseudópodos) (4-6 µm)
 Morfología

Forma cuerpo central Forma granular Forma ameboide

Forma Globulosa Forma fisión binaria Forma resistencia

Resistencia: 2-5 µ de diámetro; ovoide o esférico; citoplasma con

1 - 4 núcleos, depósitos de glucógeno y pequeñas vacuolas (esquizonte)
 Morfología

Figure 1: Different morphological forms of Blastocystis spp. Vacuolar forms: (a) wet mount,
(b) iodine stain, (c) iodine stain with the vacuole darkly stained, (d) trichrome stain, (e)
trichrome stain with the vacuole stained red. Granular forms: (f) wet mount, (g) iodine stain,
(h) trichrome stain. Amoeboid forms: (i, j) wet mount showing pseudopodia (arrowheads).
Multivacuolar forms: (k) wet mount, (l) iodine stain. ×1000.

Abaza et al, 2014

 Morfología

Figure 2: Blastocystis spp. fecal cyst forms with loose outer coat: (a) wet mount, (b– d)
iodine stain, (e) trichrome stain, (f, g) fecal cysts stained with iodine, and (h) trichrome
stain. It is noted that (a)– (e) have loose outer coat and (f)– (h) are cysts with no loose
outer coat. ×1000.

Abaza et al, 2014

 Hábitat
Intestino
grueso

Hospedadores
 Ciclo biológico
Ciclo biológico de Blastocystis
propuesto por Tan (2008)

1) Primate-Ave-Cerdo-Humano

2) Primate-Cerdo-Humano Intestino
Ameboide

humano Vacuolar

3) Humano-Humano* Granular

Ambiente
externo
4) Roedor-Humano Quiste

5) Cerdo-Humano

6, 7) Ave-Humano

* Ciclo antroponótico
 Ciclo biológico: Subtipos
ST-1
ST-2
ANTROPONÓTICO
ST-3 90%
ST-4
ST-5
ZOONÓTICO
ST-6
ST-7
ST-8 ST1-ST9= Detectados en humanos
ST-9 ST1-ST4= 90% de los casos
ST-10
ST-11
ST-12
ST-13
ST-14
ST-15
ST-16
ST-17
 Acción Patógena
La infección humana con Blastocystis se denomina blastocistosis

I) Blastocystis spp. no invade tejido del hospedador aunque induce:

Reacción inflamatoria

Edema de la lámina propia
Moe y col., 1997

II) Mecanismos dentro del hospedador:

Degradación de la IgA secretoria

Apoptosis de enterocitos

Inducción de citoquinas pro-inflamatorias (IL-8)

III) Síntesis de CISTEÍN-PROTEASAS (Mirza and Tan, 2008):

-Asociado a la virulencia de los diferentes subtipos
-Directamente proporcional al tamaño de los parásitos (↑ tamaño = ↑ Síntesis)
 Acción Patógena

Fig 6. Model of adhesion and colonization: Blastocystis spp. are luminal, mucin binding and mucinolytic.
ST7-H is more adhesive than ST7-B and shows tissue tropism to colon. Increased adhesiveness results in better colonization
in DSS treated susceptible mice with a longer duration of shedding and increased tissue damage and inflammation.
 Acción Patógena
Tan, 2010

Degradación de la IgA

Alteración de la
barrera intestinal

Inducción de
interleucinas
proinflamatorias

Apoptosis
celular

IgA—immunoglobulin A; MLC—myosin; light-chain kinase; MLC-p—phosphorylated MLC; NF-

κB—nuclear; factor-κB; PAR-2—protease activated receptor type 2; RhoA—Rho-GTPase family
member A; ROCK—Rho-associated kinase; ZO-1—zona occludens-1
 Acción patógena y clínica

CO2
↓
Flatulencia

Ácido láctico
↓
Disminución del
pH fecal
Carbohidratos
 Clínica
Signos y síntomas: Otros síntomas:

Diarrea
Prurito anal

Dolor abdominal
Urticaria

Constipación
Pérdida de peso

Náusea

Vómito (Stenzel y Boreham, 1996)

Flatulencia

Distensión abdominal
 Clínica
Los criterios para considerar si Blastocystis spp. es un patógeno natural
en pacientes que cursan con síntomas gastrointestinales son:

1) NÚMERO: ≥ 5 parásitos por campo (400X)

El número de parásitos no guarda relación con

la sintomatología de los pacientes estudiados.

2) ESTADIO MORFOLÓGICO: Presencia de forma ameboide, globular

y/o en división en la muestra fecal analizada
(Doyle y col., 1990)
 Clínica
3) SUBTIPO:
Estudios a nivel molecular sugieren que el papel patógeno de Blastocystis
spp. es dependiente del subtipo

Patógeno: Subtipos 1, 4 y 7

Comensal: Subtipos 2 y 3
(Eroglu y col., 2009)

Subtipo 1 Subtipo 2 (Leelayoova y col., 2009)

 Epidemiología
• Parásito cosmopolita
• Mayor prevalencia: zonas tropicales y
subtropicales (95%)
• Zoonosis (animal-humano; humano-animal)
a excepción del subtipo 3
• Transmisión pasiva: agua y alimentos
contaminados
 Epidemiología molecular
HUMANO PATOGENICIDAD
• Reservorio de 9 subtipos (ST1-ST9) • Si: ST1, ST4 , ST7
• Subtipo antroponótico: ST3 • No: ST2, ST3

3,4 3,7
3,7

3,2
3,4
Diagnóstico
 Diagnóstico
Diagnóstico tradicional Examen Directo
(Salina / Yodada)

o
d ig
có

Contar el n°de parásitos

Con objetivo de 40X

0 2 3
0-3 p/c

Estadios morfológicos (cuerpo central, granular y división)

 Diagnóstico
Diagnóstico por técnicas de concentración

Vacuola con elevado

contenido de grasa, el
parásito se localiza
Grasa en la fase etérea
(éter)

Detritus
fecales

Fase
acuosa
¿ Búsqueda del parásito ?
?
Vacuola con poco
contenido de grasa,
Sedimento

el parásito se localiza
Técnica de en el sedimento
Ritchie
 Diagnóstico
TINCION PERMANENTE

Tricrómica

Giemsa

Hematoxilina Férrica
 Diagnóstico
Otras herramientas diagnósticas:
PCR-RFLP: Diagnóstico y posterior caracterización del subtipo

Clínica

Asociar subtipo

Epidemiología
 Diagnóstico
Cultivo
Medio Boeck-Drbohlav: requiere
bacterias y anaerobiosis
¿Qué se observa en los medios?
Endosimbiosis (bacterias dentro
del parásito)

Detección de coproantígenos (ELISA)

Inmunofluorescencia

ParaFlor
®
Experiencia en
el laboratorio
¿El número de Blastocystis spp. se asocia a
sintomatología gastrointestinal?
 Forma vacuolar de Blastocystis spp. (►)

MOCO

MOCO

Paciente sintomático
Diarrea aguda y dolor abdominal
0-3 Blastocystis spp. p/c

→)
Examen Directo (Solución salina; 400X). Moco (→
 Forma granular (►) y vacuolar (►) de Blastocystis spp.

►
►

►
► Paciente sintomático
Diarrea aguda y flatulencia
1-5 Blastocystis spp. p/c
(Gran tamaño: 50 µ diámetro)
Formación de Cluster

Examen Directo (Solución yodada; 400X)

Forma vacuolar y granular de Blastocystis spp.

Paciente sintomático (VIH+)

Flatulencia; Diarrea esporádica
> 60 Blastocystis spp. p/c
(Pequeño tamaño: 10 µ)

Examen Directo (Solución yodada; 400X)

 Tratamiento
Metronidazol*:
Niños: 30 a 50 mg/ Kg / día; 3 dosis por vía oral/ 10 días
Adultos: 250 mg por vía oral; Cada 8 horas/ 10 días.

Tinidazol:
Adultos: 2 g vía oral por 2 días.
No se usa en niños por su mal sabor

Teclozan (Falmonox):
Niños:
1 a 3 años: 25 mg cada 8 horas
4 a 8 años: 50 mg cada 8 horas
> 8 años: 100 mg cada 8 horas vía oral/ 5 días

Adultos: 500 mg cada 12 horas; 3 dosis

*Estudios en Malasia e Indonesia revelan resistencia al metronidazol

Tan, 2010
Tratamiento

Importante:
• Cura parasitológica varia según fármaco y el subtipo; así como las condiciones del
hospedador
• Sensibilidad-resistencia subtipo-dependiente; varia según el origen geográfico
• Bajo condiciones de estrés el parásito se reproduce como mecanismo de supervivencia
 Blastocystis spp.
¿Inocente o culpable?
RESISTENCIA A LOS
FARMACOS

APOPTOSIS DISBIOSIS
CELULAR

↑ INDUCCIÓN DEL DAÑO ENTRE INDUCCIÓN DE TNF-γ , TNF- α

LA UNION DE LOS ENTEROCITOS IL-12, GM-CSF, IL8
DEGRADACIÓN IgA

↑ PERMEABILIDAD
PARACELULAR DE LOS MODULACION
ENTEROCITOS RESPUESTA INMUNE
 PRÁCTICA:
Identificación y diagnóstico
de Blastocystis spp.
 PRACTICA
Examen Directo
• Colocar en un extremo de una
lámina portaobjeto una 1 gota de
solución yodada
o
d ig
có

• Agregar 1 gota de suspensión

fecal con estadios morfológicos de
Blastocystis spp. có
d ig
o
 PRACTICA
Examen Directo

• Homogenizar con la esquina de una

laminilla o aplicador de madera
o
d ig
có

• Cubrir con laminilla y observar las

microscopio. Enfocar con objetivo
de 10x y buscar las estructuras
parasitarias con objetivo de 40X

• NUEVA MUESTRA:
Colocar en el extremo opuesto
o
d ig
có

1 gota de solución yodada + 1 gota

de suspensión fecal
Examen directo: Solución Salina

Examen directo: Solución Yodada

A B
Blastocystis spp.: [A] forma granular en división (fisión binaria);
[B] Forma ameboide (► seudópodos ); [C] Forma globulosa
(Examen directo con Sol. Yodada)

C
 Examen directo: Solución Salina

Examen directo: Solución Yodada

 INFORMACIÓN IMPORTANTE

LVI Convención Nacional de Bioanalistas, Mérida 2016

SE ACORDÓ COLOCAR EN EL REPORTE:

Blastocystis spp. en lugar de Blastocystis hominis

Cátedra de Parasitología de la ULA:

En la muestra analizada se observaron estadios morfológicos de
cuerpo central, granulosos, en división, globulares, ameboide, en
cluster y de resistencia de Blastocystis spp. (3-4 p/c).