Determinación cuantitativa de colesterol CHOD-POD Enzimático colorimétrico

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

CECyT 6 "Miguel Othón de Mendizábal"

“QUÍMICA CLINICA”

“Actividad 7”
COLESTEROL

SECCION B

PROF: Patricia Bermejo.

ALUM: Mario Valles Cortes.
Determinación cuantitativa de colesterol CHOD-POD Enzimático colorimétrico

Colesterol CHOD-POD

Reactivos

R1 Tampon Pipes pH 6,9 90 mmol/L, Fenol 26 mmol/L

R1 Enzimas colesterol esterasa (CHE) 300 U/L, Colesterol oxidasa 300

U/L, Peroxidasa (POD) 1250 U/L, 4-Aminofenazona (4-AF) 0,4
mmol/L

Cholesterol cal: Patrón primario acuoso de colesterol 200 mg/dL,

Triton X-114 10-15%

El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado

Ésteres cólesterol H 2 O CHE Cólesterol+ ácidos grasos

→

Cólesterol +O 2 CHOD 4 Colestenona+ H 2 O 2

→

2 H 2 O 2 + Fenol+ 4−aminofenazaCPOD Quinonimina+ 4 H 2 O

→

Muestras

Suero o plasma
Determinación cuantitativa de colesterol CHOD-POD Enzimático colorimétrico

SI Estabilidad de la muestra 7 días a 2-8⁰C y

¿Almacenar? 3 meses en congelación a -20⁰C

NO

Condiciones del ensayo

Longitud de onda 505 nm

Cubeta 1cm paso de luz

Temperatura 37⁰C/15-25⁰C.

Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada

Reactivo de trabajo (RT)

Disolver el contenido de un vial de R2 Enzimas en 1 frasco de R 1

Tampón. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido
Determinación cuantitativa de colesterol CHOD-POD Enzimático colorimétrico

…………………Blanco……Patrón……Muestra…

RT (mL) 1 1 1
Patrón (µL) -- 10 --
Muestra (µL) -- -- 10

Mezclar e incubar 5 minutos a 37⁰C

o 10 min. a temperatura ambiente.

Leer la absorbancia (A) del Patrón

y la muestra, frente al Blanco de
reactivo
Determinación cuantitativa de colesterol CHOD-POD Enzimático colorimétrico

A Muestra− A Blanco
Cálculos x 200 conc . patrón
A Patrón−A Blanco

Factor de conversión mg/dL x 0,0258= mmol/L

Valores de Referencia

Evaluación de riesgo

Menos de 200 mg/dL normal

200-239 m/dL moderado

≥ 240 mg/dL alto

FIN
 Determinación cuantitativa de colesterol CHOD-POD Enzimático colorimétrico

Resumen

C27H46O
Determinación cuantitativa de colesterol CHOD-POD Enzimático colorimétrico
Determinación cuantitativa de colesterol CHOD-POD Enzimático colorimétrico