INFORME DE LABORATORIO PRÁCTICA 3 DETERMINACIÓN DE BENZODIACEPINAS ² TRANQUILIZANTES MENORES

Cristian Alexander Guzmán Santofimio. Cristian Alberto Triana Basabe. Andrea Vivian Ortegón Vergara Liseth Katherine Velásquez Martínez

Docente Edgar Hernán Beltrán

UNIVERSIDAD COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO TOXICOLOGIA LABORATORIO BOGOTÁ D.C 2010

. Describir el uso benzodiacepinas. después de su administración. metabolización y forma de excreción. 2.OBJETIVOS Determinar la presencia de tranquilizantes menores. su mecanismo de acción. farmacológico y terapéutico de las 3. Objetivos específicos 1. específicamente de Benzodiacepinas (Lorazepam) en la muestra biológica adecuada para esta prueba. Conocer el fundamento y aplicar la técnica de Cromatografía en Capa Fina para la determinación de benzodiacepinas (Lorazepam) en Orina. Comprender la estructura química de las Benzodiacepinas y el efecto causante en el organismo.

salvo el clorazepato que es una prodroga y se descarboxila rápidamente en el jugo gástrico a Ndesmetildiazepam (o nordiazepam) y luego se absorbe por completo.). insomnio. el grado de unión a proteínas plasmáticas y el porcentaje de aclaramiento y eliminación. La alta unión a proteínas plasmáticas también influencia en la cantidad de droga captada por el cerebro. Generalmente. DISTRIBUCIÓN . en caso de ser necesaria la vía parenteral. así la concentración de droga libre en plasma refleja la concentración cerebral. y convulsiones. MECANISMOS DE ACCION EFECTOS FARMACOLOGICOS Las BZ son agentes GABA agonistas indirectos (GABA: ácido gamma amino butírico) es decir que potencian o amplifican la neurotransmisión gabaérgica inhibitoria. mientras que la acción ansiolítica estará mediada por receptores que contengan la subunidad 2. Las BZ son transportadas por la circulación sistémica a la circulación cerebral capilar. contracturas musculares. el comienzo de acción después de una dosis oral refleja el grado de absorción gastrointestinal (aproximadamente 30 min. por lo que producen relajación o sensación de calma. ansiedad. síntomas de nerviosismo. Se utilizan para tratar cuadros de pánico. Son muy lipofílicas.m. por lo que cabe esperar de ellas todo el abanico de efectos. Cuando se administran por vía oral a los 30minutos aparecen los efectos ansiolíticos o hipnóticos. albúmina principalmente y debido a su escasa fracción libre pasan poco al líquido cefalorraquídeo. Solo la fracción libre es farmacológicamente activa y es la que difunde a través de las membranas biológicas.MARCO TEÓRICO ² PRE-LABORATORIO BENZODIACEPINAS Grupo de fármacos que producen enlentecimiento de las funciones nerviosas. la de elección es la i. pero no por receptores que contengan la subunidad 3. La absorción por vía i. FARMACOCINETICA DE LAS BENZODIACEPINAS ABSORCIÓN Se absorben rápido y completamente por vía oral. es irregular. El volumen de distribución aparente es amplio (1-2 litros/kg). estos agentes tienen alto grado de unión a proteínas plasmáticas 80-95%. requiriéndose la activación de receptores que contengan la subunidad 1 para conseguir el efecto sedante. debido a que estas drogas luego de concentrarse en el cerebro sufren una redistribución tisular periférica sobre todo en lípidos y músculo. la duración de acción demuestra el porcentaje de distribución en tejidos periféricos. El midazolam es el compuesto más liposoluble y el flumazenil el menos liposoluble. Que las BZ necesitan una transmisión gabaérgica (sin inhibidores) intacta para producir sus acciones farmacológicas están mediados por la activación de subtipos de receptores tipo A del GABA. es un polialcohol muy irritante que hace precipitar la BZ en el tejido muscular y por lo tanto se absorbe mal la droga. El GABA es el neurotransmisor inhibitorio más importante del SNC de los mamíferos y se estima que entre el 30 y 50% de las sinapsis del cerebro son gabaérgicas. el solvente que poseen es el polietilenglicol. Las BZD clásicas interaccionan de forma indiscriminada con todos los tipos de receptores. ESTRUCTURA: Las benzodiacepinas están compuestas por un anillo bencénico (A) unido a un anillo diazepinico (B).v.

son más susceptibles a los efectos depresores y pueden presentar además síndrome paradojal y síndrome confusional. En los ancianos debe disminuirse la dosis a la mitad. La intensidad de los efectos depende de las dosis utilizadas y son más importantes en personas con alteraciones hepáticas y en ancianos porque al disminuir su metabolismo aumenta mucho su semivida plasmática. diarrea o estreñimiento. prurito. alteraciones de la visión y audición. cefalea. no con otros depresores) como intento de suicidio. En casos de intoxicación aguda mantener libres las vías aéreas. el diazepam es el agente de elección ya que controla el insomnio y la . desorientación. En la mayor parte de los casos. dermatitis. -En pacientes con porfiria se puede producir un ataque agudo. puede haber acumulación de BZ. fase II). depresión. Están indicadas en enfermedades orgánicas donde la ansiedad es un componente (úlcera. Los ancianos. baclofeno. amnesia anterógrada (dificultad para recordar hechos recientes) y dificultad de concentración. En el asma severa. En alteraciones neuromusculares se comprobó que el diazepam es superior a cualquier otro relajante muscular como por ejemplo cari soprodol. tensión emocional. En la insuficiencia hepática. Frecuentemente aparece: sedación. Es por eso que una sobredosis de Bz (pura. La miastenia es otra contraindicación de las BZ. somnolencia. disfasia o disartria (alteración del lenguaje). neurodermitis) o importante factor etiológico como las alteraciones psiconeuróticas que cursan con ansiedad. clormezanona. en el glaucoma de ángulo estrecho (medicado o no) y en pacientes con glaucoma en ángulo abierto no medicado.  EFECTOS SECUNDARIOS El perfil toxicológico de las benzodiacepinas ansiolíticas es muy parecido. ataxia. La eliminación se realiza por filtración y secreción tubular principalmente metabolitos glucuronoconjugados y en menor cantidad los oxidados. Puede prolongarse la vida media y producirse acumulación. enfermedad pulmonar obstructiva crónica. En la abstinencia alcohólica aguda. Pueden producir incoordinación motora con riesgo de caída. También alivia las contracturas musculares. Aproximadamente la mitad de los pacientes presentan en mayor o menor grado somnolencia durante los primeros días de tratamiento. las reacciones adversas son una prolongación de la acción farmacológica y afecta al SNC. aunque la frecuencia y gravedad de las reacciones puede variar de unas a otras. monitorear signos vitales y administrar el antagonista flumazenil. insomnio. A diferencia de los barbitúricos no son potentes inductores enzimáticos hepáticos.  CONTRAINDICACIONES: están contraindicadas (teratogénicas. alteraciones urinarias. raramente es mortal y cuando lo es seguramente la BZ se asoció a otra droga (ejemplo: alcohol). La mayoría de las BZ deben ser primero oxidadas (metabolitos activos. ictericia. urticaria. sufriendo oxidación microsomal (fase I) y luego glucuronoconjugación (fase II).  TOXICOLOGIA Las BZ poseen amplio margen terapéutico es decir que la dosis efectiva 50 y la dosis letal 50 están muy distanciadas una de otra. Excepcionalmente: hepatitis. por ejemplo. Ocasionalmente: mareos. discrasias sanguíneas.BIOTRANSFORMACIÓN ELIMINACIÓN En general las BZ son metabolizadas primariamente por enzimas microsomales hepáticas.  USOS TERAPEUTICOS Las BZ son agentes sintomáticos y solos son útiles en tratamientos a corto plazo debido al desarrollo de tolerancia de sus acciones farmacológicas (EJ: efecto hipnotico). fase I) y luego conjugadas (metabolitos inactivos. cambios en la libido. debido al peligro de producir apneas nocturnas y por la relajación muscular que producen las BZ podría disminuirse la capacidad ventilatoria. Los pacientes con insuficiencia renal son más sensibles a los efectos depresores del SNC. temblor. el dolor discal de las lesiones de la columna y también el tétanos. También en la hipersensibilidad a la droga. Los metabolitos oxidados son activos y pueden ligarse o unirse al receptor de BZ (aunque en general poseen menos actividad que la droga madre). pueden producir síndrome de abstinencia neonatal) en el embarazo y lactancia (pasan por la leche materna). sedación. debido al efecto miorrelajante que producen.

Están indicadas en el insomnio sobre todo cuando es debido a mioclonos. pero no insomnio rebote. cannabinoides. flurazepam y nitrazepam poseen acción prolongada. Estas últimas comprenden un gran número de reacciones químicas llevadas a cabo sobre la muestra con reactivos relativamente asequibles (por ejemplo la de Trinder para salicilatos. etc). Muchos psicofármacos pueden realizarse por polarización de fluorescencia (FPIA) y multiplicación enzimática (EMIT) y existen ´casettesµ con anticuerpos para los grupos de drogas usualmente encontrados en comas o accidentes (benzodiacepinas.). se realizó una hidrólisis ácida. TECNICAS DE DETERMINACION Existen tres grandes grupos de técnicas analíticas: las inmunológicas. en la medicación preanestésica y en anestesiología combinadas con otros agentes (midazolam+ fentanilo por ejemplo). Contrariamente a las técnicas anteriores el primer paso es una preparación o ´clean upµ de la muestra. Fujiwara para hidrocarburos halogenados) y si bien han prestado y prestan un gran servicio a la toxicología de urgencia y de recursos limitados su baja especifidad y sensibilidad no permite recomendarlas para esta determinación. una extracción líquido-líquido y finalmente se procedió a realizar la cromatografía en capa fina para determinar benzodiacepinas en una muestra de Orina Falsear la Mx con 6 gotas de ATIVAN Tomar 10 ml de Orina sin centrifugar HIDRÓLISIS ÁCIDA Colocar en baño de maría por 15min entre 6070º C Colocar tubo de reflujo y agitar Realizar una hidrólisis ácida con 3 ml de HCL concentrado Marcar el Erlenmeyer y cápsula de porcelana Enfriar los tubos y pasar el hidrolizado a un Erlenmeyer . Las BZ son útiles en todo tipo de convulsiones. por su acción rápida y vida media corta (5 horas) evitando el efecto residual matinal. fallecimiento de un ser querido. También son útiles para evitar o controlar el síndrome de abstinencia alcohólica (delirium tremens). Las técnicas cromatográficas. antidepresivos tricíclicos. cocaína. opiodes. El triazolam se prefiere en pacientes que les cuesta conciliar el sueño. por otra parte.. Las técnicas inmunológicas se basan en la reacción antígeno-anticuerpo y comprenden el mismo conjunto de técnicas empleadas en química clínica. El flunitrazepam. producen sedación matinal. se basan en la distinta solubilidad de los componentes de una muestra frente a una fase móvil y permiten la separación de todos esos componentes para su posterior identificación.agitación. que tiene por objeto a la vez concentrar las sustancias buscadas y eliminar las interferencias producidas por otros componentes de la orina PROCEDIMIENTO Se falseó la Muestra.. especialmente los enzimoinmunoensayos competitivos. las cromatográficas y las colorimétricas. o secundario a otra medicación o en el insomnio por dolor o stress (cambio de trabajo.

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requiere de un eluyente compuesto por tolueno 20: 1 acetona.   4 RF=___1___ = 0. Este procedimiento.14285714 7 . El RF es específico para cada analito y para la fase móvil. También es factible que el problema estuviera en el revelado de la placa. Allí la muestra de orina se falseó con la adición de 8 gotas de Ativán. Después de la adición del Ativán. 1 2 RF= Distancia recorrida por la muestra Distancia recorrida por el solvente ANÁLISIS DE RESULTADOS En la obtención de resultados se tuvieron algunos problemas. se realizó con el fin de que nuestra muestra sea positiva para benzodiacepinas partiendo del supuesto de que era completamente libre de estas inicialmente. se adicionan a la placa por medio de un frasco aspersor. se realiza el protocolo de la cromatografía en capa fina con sus correspondientes reactivos. por lo que los resultados no fueron muy claros.RESULTADOS Para la determinación de benzodiacepinas en orina. nitrito de sodio (NaNO2) más NEDA (Neftilendiamina) con el fin de observar manchas o complejos de color morado-rosado. Finalmente. lo que indica que es positivo para benzodiacepinas. El resultado que obtuvimos fue negativo a pesar de que se falseo la muestra. se utilizó el método de cromatografía en capa fina. El resultado del RF se tomó en base a los resultados de la mesa 3. en la cual el frente de corrido fue igual a 7 cm y la distancia recorrida por el analito fue de 1 cm. La última parte de este método. Las muestras mayormente no mostraron resultados positivos o no de manera muy clara. como se debía esperar y para esto se determinaron dos posibles causas: Es factible que se agregara muy baja proporción de ativán (benzodiacepina patrón) a la muestra inicial. o porque la cantidad dispersada sobre la placa no fue la adecuada. sea por que los reactivos (NEDA y Nitrito de Sodio) estuvieran contaminados o alterados de alguna manera.

DEBILIDADES Mala distribución del tiempo durante la práctica al procesar la muestra para determinación de benzodiacepinas. Reorganización del material de trabajo aplicando el adecuado procedimiento para cualquier determinación.ar/catedras/farmacologia/temas_farma/volumen5/2_benzo diaz. es de gran importancia saber realizar las técnicas para la determinación de esta en la muestra biológica mas adecuada.pdf http://www. X BIBLIOGRAFÍA Documentos web disponibles en: o o http://www. SUGERENCIAS A CADA DEBILIDAD. pdf http://med.sertox.portalfarma. anticonvulsivantes.com/2007/05/benzodiazepinas.  La cromatografía de capa delgada corresponde a un sistema analítico que permite separar los diferentes componentes de una muestra problema.CONCLUSIONES  Los medicamentos benzodiacepinas poseen importantes acciones farmacológicas.wordpress.com/pfarma/taxonomia/general/gp000042. Actuando en gran medida sobre el sistema nervioso central. en este caso la orina. hipnóticos y relajantes musculares.nsf/voDocum entos/66FD0F16FCE04F02C125725D003A8CC8/$File/DOSSIER%20BENZODIAZEPINAS.unne.pdf o o o .ni/enfermeria/doc_inter/benzodiacepinas.minsa.files. debido a su metabolización. propiedades toxicológicas y aplicaciones terapéuticas como anestésicos. AUTOEVALUACIÓN LOGROObjetivos cumplidos SI NO FORTALEZAS Dominio de los conceptos básicos utilizados en toxicología y diferenciación entre los tranquilizantes menores y tranquilizantes mayores.pdf http://bernirey80.ar/retel/n04/004.  Debido a las propiedades toxicológicas de las benzodiacepinas. sedantes.edu.gob.com. ansiolítico.pdf http://www. con el fin de identificarlos y/o cuantificarlos. ya que en toxicología de urgencias se reportan casos de intoxicación por este fármaco cuando es administrado en uso delictivo.

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