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Facultad de ingeneria de pesquera y alimentos

GUIA EXPERIMENTAL Nº13


AISLAIENTO E IDENTIFICACION DE
SALMONELLA

NOMBRE: VICTOR JUNIOR SIERRALAYA CAMPOS

CODIGO: 1514220306

CURSO: MICROBIOLOGIA PESQUERA

PROFESOR: EDGAR ZARATE SARAPURA

2017
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Victor Junior Sierralaya Campos


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INTRODUCCION
El género Salmonella pertenece a la familia Enterobacteriaceae. Son bacilos
gram negativos, de 0,7-1,5 x 2-5 µm, anaerobios facultativos, no formadores de
esporas, generalmente móviles por flagelos perítricos (excepto S. gallinarum).
Fermentan glucosa, maltosa y manitol, pero no fermentan lactosa ni sacarosa.
Son generalmente catalasa positiva, oxidasa negativa y reducen nitratos a
nitritos. Son viables en diferentes condiciones ambientales, sobreviven a la
refrigeración y congelación y mueren por calentamiento (mayor a los 70 °C). El
serotipo de Salmonella está determinado por los siguientes tres tipos de
antígenos: el antígeno somático (O), el antígeno flagelar (H) y el antígeno de
virulencia (Vi). Los antígenos somáticos son lipopolisacáridos componentes de
la pared celular y se han identificado 60 antígenos diferentes. Los antígenos
flagelares son proteínas localizadas en el flagelo móvil. El antígeno de
virulencia es un polisacárido termolábil localizado en la cápsula. Antes del 1° de
Julio de 1963 se utilizaban 3 espe cies de Salmonella: S. typhi, S. choleraesuis
y S. enteritidis y la mayoría de los serotipos pertenecían a esta última especie.
En la actualidad, todas las especies y subgrupos anteriores de Salmonella y
Arizona se consideran de la misma especie, pero pueden separarse en 6
subgrupos. La única excepción la constituye S. bongori que por estudios de
hibridación de ADN se constató que es una especie distinta. Por lo tanto,
existen 2 especies y 6 subespecies de S. entérica en el esquema actual
utilizado por el Centers for Disease Control and Prevention (CDC).

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FUNDAMENTO
La presente técnica para la detección de Salmonella en alimentos, describe un
esquema general que consiste de 5 pasos básicos:
Preenriquecimiento, es el paso en donde la muestra es enriquecida en un
medio nutritivo no selectivo, que permite restaurar las células de Salmonella
dañadas, logrando de esta manera una condición fisiológica estable.
Enriquecimiento selectivo, se logra a partir de un medio de cultivo que
conjunte dos condiciones, por un lado debe incrementar las poblaciones de
Salmonella y por otro inhibir otros microorganismos presentes en la muestra.
Selección en medios sólidos, este punto se deriva directamente del anterior y
se utilizan medios selectivos, que restringen el crecimiento de otros géneros
diferentes a Salmonella y que permitan el reconocimiento visual característico
de colonias sospechosas.
Identificación bioquímica, este paso permite la identificación genérica de los
cultivos de Salmonella y la eliminación de cultivos sospechosos falsos.
Serotipificación, es una técnica inmunológica (antígeno-anticuerpo) que
permite la identificación específica de un microorganismo.

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OBJETIVOS
El presente procedimiento tiene como objetivo describir la metodología llevada
a cabo por el Laboratorio de Microbiología para realizar la detección,
aislamiento e identificación de Salmonella spp. En muestras de alimentos.

MATERIALES

Muestras de alimentos Placas Petri


Medio de enriquecimiento Matraces
selectivo Pipetas
Medio de enriquecimiento no Mechero
selectivo Gradillas
Agar S-S Bolsa ziploc

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PROCEDIMIENTOS
Antes:
Caldo lactosa – muestra de hamburguesa
Pesar 10 gr
verter y mezclar
sembrar en cada tubo

Enriquecimiento selectivo 37°C x 24h Enriquecimiento no selectivo 42°Cx24h


Caldo selenito Caldo tetrionato Caldo selenito Caldo tetrionato

Sembrado: Sembrado: Sembrado:


NO --- SI Sembrado: NO --- SI
No ---- SI
NO --- SI

MEDIO COMPONENTES PRINCIPALES USOS

Agente inhibidor: selenito de sodio. Inhibe los Enriquecimiento de


Caldo selenito enterococos y retrasa el crecimiento de las Salmonella.
coniformes.
Inhibidores: inhiben las bacterias gram positivas Enriquecimiento de
Caldo y las coniformes que no tienen la enzima Salmonella.
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tetrationato tetrationato reductasa.


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Después:
Caldo lactosa:

Enriquecimiento selectivo 37°C x 24h Enriquecimiento no selectivo 42°Cx24h


Caldo selenito Caldo tetrionato Caldo selenito Caldo tetrionato

RESULTADOS
 Cambio de color del indicador por la variación del ph ya que hay fermentación de
lactosa.
 Formación de sedimentos en todos los medios.
 Crece en SS y TT es lactosa NEGATIVO
“ Posible presencia de Salmonella y Shıguella”

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SEMBRIO EN LA PLACA
TUBOS SEMBRADOS E INOCULADOS MEDIOS DE CULTIVO XLD –SS (cd 237°C –
42°C)

 Coger una pequeña muestra de los tubos y sembrar esa muestra en la los medios de
cultivo de la placa petri.
RESULTADOS

De las colonias que resultaron se siembran en los tubos diferenciales.


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MEDIOS DIFERENCIALES
ANTES DESPUES LECTURA
INDOL
 Positivo
 E.coli por la franja roja, si estas frente a
Salmonella no aparece esa franja roja,
mantiene su color.
ROJO DE
METILO
 Negativo
 Mantiene su color original.

TSI
 negativo
 H2S negativo
 aeróbico y anaeróbico
Es posible que haya salmonella.
CITRATO
 Negativo
 No cambia de color después de haber
sido incubado.

LIA

 Negativo porque no cambia el ph


manteniendo su color original.
 No es un organismo aeróbico

CONCLUSIONES
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 Llegamos a la conclusión que hay presencia de E. Coli por la prueba del


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indol.
 Se determina que no hay presencia de salmonella.

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