S2.

Tipos de Microscopios ópticos (16/09/2019)

Unidades: micro 10-6

nano 10-9
Armstrong 10-10

Magnificación: amplificación
Límite de Resolución (D): depende de la naturaleza de la luz y de las propiedades de las
lentes
D = limite de resolución

0.61 λ
D=
n Sen a

c
n=
v

a = apertura que permite la entrada de luz, cuanto mayor la apertura de luz, mejor la
resolución

- la velocidad de la luz depende del medio que haya

- las longitudes de ondas pequeñas penetran poco (la luz roja tiene mucho poder
de penetración)

Microscopio óptico convencional

- Imagen invertida (imagen al revés)

- Bajar el condensador en la posición más bajas
- Poner la platina debajo de todo (eje z), en la posición más bajas
- Está prohibido utilizar el tornillo cuando es de 40x o 100x

Microscopio óptico invertido

- Imagen real (no invertida) – facilita la utilización

- Podemos acceder a la preparación, porque no hay el revolver con los objetivos

Microscopio de campo oscuro

Microscopio de luz polarizada

- Sustancias birrefringentes que cambian el plan de la luz

Microscopios basados en la interferencia

- Disminución de la velocidad de la luz, se retrasa porque tiene que hacer más

ciclos
- Cuanto mayor el índice de refracción la amuestra que se está analizando, mas se
retrasa
- Luz: dos ondas en la misma fase
- Oscuridad: dos ondas defasadas (hay interferencia)

Microscopio de contraste de fase

- Halos de difracción
- Escala de grises

Microscopio de tipo Nomarski (DIC) (Interferencia de constraste diferenciado)

- Imagen con sentido tridimensional (sensación de volumen de la célula)

- Interferencia de la luz polarizada

Microscopio de fluorescencia

- Solo se ve con algo fluorescente, sino se ve oscuro

- Tiene que usar sustancias fluorescentes: fluorocromos

Técnica de FRET (Transferencia de Energía por Resonancia de Förster mediante

Fluorescencia)

- Detecta la interacción de las proteínas dentro de las células

Microscopio confocal

- Microscopio de fluorescencia
- La luz toma forma biconica
- Aquí se restringe la luminiscencia de un plano
- Tienes que hacer distintos planos

Microscopio de dos Fotones

- Se ilumina solo en dos pontos

Microscopios de campos cercanos (Nanotecnología)

- Ejemplo: Microscopio de efecto túnel: STM

- Es muy complejo
S3. Microscópicos electrónicos (24/09/2019)

Límite de Fondo Tipo de luz Característica Óptimo para

resolución s
Óptico 0.3 claro Blanca (de Imagen Examinar
convencional micrometro abajo) invertida cultivos,
en aire preparos
0,2
micrometro
en aceite
Invertido 0,3 claro Blanca (de Imagen real Muestra está
micrometro arriba) viva
s
Campo 0,3 oscur Luz Rayos llegan Sustancia muy
oscuro o difractada obliquos refrigente
Luz 0,3 oscur Luz Sustancias
polarizada o polarizada fibrosas
Contraste de 0,3 oscur Luz Amostras con
fase o defasada células vivas
Nomarski 0,3 oscur Imagen 3D Optimo para
o se puede pinchas células
ampliar para
amuestrar
mayores
Fluorescenci Depende oscur Ultraviolet Óptimo porque
a del o a permite
fluorocromo identificar
Con focal moléculas
0,3
Confocal oscur Luz Aumenta el Óptimo para
o bicónica contraste realizar
Se puede reconstrucione
obtener s
imágenes 3D

- Microscopio electrónico de transmisión

 Los electrones atraviesan la amuestra

 Imagen plana

- Microscopio electrónico de barrido

 Los electrones no atraviesan la amuestran y rebotan

 Imagen con sensación de volumen
- MET/TEM

 Mayor resolución (claridad, permite distinguir mejor)

 Partes: fuente luminosa, condensador, muestra, lente/objetivo, lente ocular,
imagen observada
 Hay que tener una carcaza que mantenga el vacío para protección
 Hay que tener cuidado con movimientos
 La muestra tiene que estar seca y fina (fijar la amuestra, se hace después un
proceso de deshidratación, luego se embebe en una resina para permitir cortar
esa amuestra en pedazos muy finos)
 Se obtiene imágenes/manchas circulares en colores blanco (más denso, cuando
los electrones atraviesan esa zona, no chocan con el fondo) y negro (habrá
electrones que pueden llegar y otros no)
 Tinción negativa: imagen negativa (coge la molécula ya la recubre, la parte que
no hay muestra es oscura, y la parte que hay muestra es clara)
 Sombreado metálico: se puede utilizar esa técnica en el microscopio electrónico
de transmisión o de barrido
 El oro que permite detectar una molécula determinada con el MET (oro coloidal,
que permite identificar ese agujero)
 Utilización para médicos: para diagnosticar y detectar problemas

- Microscopio electrónico de barrido (MEB)

 Los electrones chocan con la muestran y rebotan, y por lo tanto nos dan una
imagen
 Tiene que estar en vacío (tiene una bomba de vacío para mantener el vacío)
 Vemos una imagen como se fuese tridimensional, nos da una sensación de
volumen
 Para preparar la muestra: hay que hacer un molde para llevar hasta el
microscopio de barrido (el interior no es utilizado, solo el exterior de la muestra)
 Se obtiene la sensación de tener la muestra completa (si comparado con el
microscopio de interferencia, ya que ese parece que algo se está saliendo e la
pared)
 Utilización: hacer diagnósticos
 Criofractura (para conseguir ver o interior)
 Criofractura con grabado
Introducción: células procariotas y eucariotas 26/09/2019

- Membrana interna: permite un controle en la célula, una regulación muy fina,

regular sus actividades
- Célula procariota: no tiene membrana circundando el nucleo
- Célula eucariota: tiene membrana circundando el nucleo
- Membrana plasmática: permite el contacto de la célula con el medio
extracelular, permite la entrada y salida de sustancias, permite una grande
potencialidad para las células eucariotas

Membrana plasmática

- Estructura en bicapa: lipídica

 50% son lípidos, 40% son proteínas, 10% son hidratos de carbono
 Proteínas
 Lípidos:
o Fosfolípidos: fosfoglicéridos y esfingolípidos
o Glucolípidos
o Colesterol (da rigidez a la membrana)

Fosfolípidos

- Siempre tienen el grupo fosfato

- La cadena insaturada da fluidez a la membrana

Glucolípidos

- Se pone siempre en la cara externa de la célula, mirando hacia la cara externa de

la célula

Colesterol

- Es una molécula hidrofóbica

- Disminuye la permeabilidad y la fluidez de la membrana
- Aumento de la rigidez de la membrana

Distribución asimétrica de los fosfolípidos y glucolípidos

- Si la estructura no está correcta, es un señal para las células como macrófagos

- Todas las interacciones funcionan mediante la membrana

Proteínas de la membrana plasmática

- Sirven como canales iónicos, que permite la interacción de la célula con las
células vecinas, permite un cambio de las funcionalidades de la célula
- Funciones de las proteínas: transportadoras (transportan sustancias), enzimas
(reacciones catalíticas), receptoras (reaccionan a la aparición de alguna sustancia
 que produce cambios en la célula), permite la interacción entre dos membranas
plasmáticas, une a lo citoesqueleto (que mantiene toda la estructura de la célula)
Estructura de moisaco fluido

- No hay cambios tipo flip flop

- Permite la fluidez de la membrana

Citoesqueleto

- Da forma a la célula
- Participa de todo trafico en la célula
- Las proteínas permiten la anclaje entre el citoesqueleto y la membrana (que
permite mantener la estructura de la célula)

Membrana

- Delimita a la célula
- Permite intercambio de iones y moléculas
- Señalización celular
- Reconocimiento celular
- Comunicación intercelular

1) Intercambio de iones y moléculas

- Difusión simple (pasiva) – a favor de un gradiente de concentración

- Difusión mediada por proteínas: transporte pasivo (no requiere energía),
transporte activo (requiere energía)

2) Señalización celular

3) Reconocimiento celular: glucocálix

27/09/2019

Reconocimiento celular: glucocálix

- Funciones glucocálix: reconocimiento celular y adhesión, actua como filtro de

barrera y de protección
- Funciones Lámina basal: estructura, barrera selectiva, diferenciación celular,
regeneración celular
- Composición bioquímica de la lámina basal: laminina, colágeno IV, elastina
(proteína elástica)

La mielina

- Vaina de mielina
- La capa va a ser más gruesa cuanto mayor sea la rapidez para transmitir la
información de un sitio a otro
- Células de schawn: encargadas de formas esas vainas alrededor del axón
 - Capa de mielina: sirve de aislante

Citoplasma:

- Citosol: formado abundantemente por agua, proteínas, ARNs, todos los

componentes necesarios para el metabolismo de la célula

- Inclusiones citoplasmasticas:

 El glucógeno: polímero de glucosa, se acumulan para portar energía cuando lo

es necesario (glucógeno: sintasa y fosforilasa)
 Las inclusiones lipídicas o gotas lipídicas: monocapas de fosfolípidos que se
acumulan las gotas de grasa, se separan y se quedan flotando en el citoplasma de
la célula
 Inclusiones cristalinas

Ribosomas

- Procedimiento pos traduccional

- Proteínas chaperonas (se unen, se plegan)

30/09/2019 (clase 105) - atrasada

Mitocondrias

- Tienen membrana doble

- Utilizan de los microtúbulos para viajar por la célula
- Encontramos en las células que requieren mucha energía pues generan ATP
- Fisiología mitocondrial:
 Membrana mitocondrial es permeable
 Piruvato y ácido graso son interiorizados y entran en el ciclo cítrico o ciclo de
Krebs
 Producción de una molécula de poder reductor NADH
 Conversión de agua
 Transformar la energía de los electrones para sacar protones de la matriz
mitocondrial (se cria un diferencial de potencial eléctrico, un gradiente
electroquímico)
 ATP sintasa
 Citocromo C (importante porque permite que funcione la cadena de electrones y
la síntesis de ATP, va a salir de la mitocondria hasta el citoplasma generando la
muerte celular)
- Teoría más aceptada de la origen de la mitocondria: de una célula procariota
- Hay proteínas que regulan algunos procesos en las mitocondrias
- Enfermedades relacionadas con las mitocondrias
Peroxisoma

- No tiene doble membrana y requiere oxígeno

- Aparencia circular
- Contienen urato oxidasa
- Se encarga de eliminar de sustancias peligrosas a la célula
- Detoxifica la célula y se elima oxígeno
- Beta oxidación de los ácidos grasos (obtiene moléculas con poder reductor que
utiliza la célula para varios procesos bioquímicos)
- Acetil CoA
- Origen de los peroxisomas: retículo endoplasmatico
- Enfermedades relacionadas con los peroxisomas

03/09/2019 Clase 105

Bloque 2. Orgánulos membranosos

T4 – Mecanismos moleculares de transporte de membrana

- Vesículas revestidas de clatrina

- Vesículas recubiertas de COPI y COPII
- Dirección de transporte vesicular: proteínas SNARE, proteínas Rab y
fosfoinostiol fosfatos

Lecturas recomendadas:
Utilizó Cooper 5 Ed. Capítulo 13

Vesículas de transporte

- Reconocer la proteína para llevarla a otro sitio

- Producción de una gema para transportar las proteínas
- Los filamentos del citoesqueleto son utilizados para hacer el transporte
(microtúbulos)
- Las vesículas pierden la cubierta
- Las vesículas se fusionan con la membrana diana
- Hay un ciclo que se renueva para hacer el proceso de transporte (reciclo para no
ocurrir na pérdida de material)

Tipos de cubiertas

- Clatrina
- COPI
- COPII

- Cada dirección tiene una cubierta específica para saber de dónde viene y a dónde
va
Vesículas con cubierta de clatrina

- Están formadas por cadena pesada y ligera

- Trisquelion: se engajan y dan lugar a una estructura tipo cesta, en que otros
trisquelion se juntan con otros
- Série de proteínas que van marcando que zona de la membrana va a ser
producido la vesícula
 ARF1: clatrina y COPI (ARF1 está de forma inactiva por estar junto con el
GDP, recibe una señal para convertir en GTP, la activación se da mediante otra
proteína llamada ARF-GEF para generar la molécula de GTP)
 GEF (Guanine – Exchange – Factor)
 Clatrina está participando del proceso del complejo de Golgi hacia fuera

Gemación de vesículas con clatrina

- Función de la clatrina: formación de la yema y generar la vesícula (una vez ya

producido, ya no la necesito, ella va a ser recuperada para otro proceso de
formación)
- En la célula nada se pierde, todo va a ser reciclado

Escisión de las vesículas recubiertas de clatrina

- La dinamina va a hacer el estrangulamiento para extinguir la membrana con la

vesícula

Vesículas con cubierta de COP II

- Star1-GTP está inactiva y va a ser activada para ir del citosol hacia el retículo
endoplásmico

Fusión de las vesículas

- Son transportados por los microtúbulos del citoesqueleto

- Tienen que ser activadas por proteínas (son señales)

- Vesícula sin cubierta para ir hasta la membrana diana

- Rab-GTP y v-SNARE (Reconocimiento)
- Se acerca de la membrana diana
- T-SNARE (Reconocimiento)
- Primero Reconocimiento: Rab y su efector
- Hay un Rab que está en el citosol que está unido a una proteína que permite la
unión
- Hay un Rab-GEF que está en la membrana diana
- El efector que está en el Rab de la vesícula va a se unir con el efector que está en
el Rab de la membrana diana
- v-SNARE y t-SNARE son específicas de cada vesícula, y ellas se enrollan para
producir la fusión

Recuperación de las SNAREs

- Para desenrollarlas hay proteínas acesorias y el factor NSF, para así poder
reciclar la v-SNARE y t-SNARE
- NSF participa en procesos de fusión de vesículas idénticas

Papel de los fosfatidilinositoles fosfato

- Intervienen en los procesos de secreción

- Son importantes para crear dominios de membrana
- Se pueden fosforilar en hasta 3 posiciones, creando dominios específicos
- En cada dominio diferente hay fosfatidilinositoles diferentes mediante la
fosforilación en diferentes posiciones

04/09/2019 Clase 105

Tema 5 – Reticulo Endoplasmático

Conceptos que se aprenderán:

- Estructura
- Función

Retículo Endoplásmico

- Red que se extiende por la mayor parte del citoplasma

- Se divide en:
 Liso (REL): sacos aplanados (porque no hay ribosomas)
 Rugoso (RER): hay gránulos que son los ribosomas

REL

- Serie de vesículas y sacos que tienen doble membrana

- Funciones:
 Sintesis de lípidos
 Detoxificación de compuestos liposolubles
 Almacenamiento de iones Calcio (importante en la respustas de la contracion
muscular)
 En la utilización de glucógeno en determinadas condiciones
Síntesis de lípidos

- Ácido graso en el citoplasma

- Proteínas se unen al ácidos graso
- La unión de esos dos se pegan en la monocapa del RE
- Después de una serie de sucesivas reacciones, se obtiene un fosfolípido
- En células que se hace la síntesis de lípidos, como por ejemplos hormonas
esteroideas, habrá una gran cantidad de REL

Detoxificación

- Hay enzimas en el REL que intentan solubilizar los lípidos, conjugan con un
compuesto, reciben un señal para eliminar eso

Almacenamiento de iones de calcio

- Importante en el proceso de contracción muscular

- Retículo Sarcoplásmico (nome especial del REL en la célula muscular)
- Sarcomero (filamentos de actina y miosina)
- Miofibrilas: conjunto de sarcomeros (rodeado del Retículo Sarcoplásmico, y ese
por su vez rodeado por la membrana)
- Triada (túbulo T + miofribilas + RS)
- Liberación de calcio al citoplasma, que será un señal para el proceso de
contracción muscular
- Utiliza el calcio para liberar calcio, para que salga mucho más calcio

Participación del REL en la utilización del glucógeno

- El glucógeno que esta en la célula, cuando necesitado, va a ser fosforalizado

RER

- Funciones:
 Síntesis de proteínas
 Modificaciones post traducciones de las proteínas
 Control de la calidad de esas proteínas sintetizadas

Importación de proteínas

- Proceso de traducción
Translocación co-traduccional

- Cadena polipetidica sintetizada va a ser reconocida por una partícula

- Ocurre la anclaje de esas moléculas
- Van a el RE
- Receptor en la membrana del RE
- Va a ser liberado para ser utilizado para la síntesis de otras moléculas
- Una vez sintetizada toda la proteína, pasa al lumen del RE

Translocación post-traduccional

- Se sintetiza en el citoplasma
- Chaperonas en el citoplasma evita que se plieguen
- Chaperona va a ser reconocida por el translocón
- Chaperona se une a cadena polipetídica y impide que esa cadena va al
citoplasma
- Cadena polipeptídica se queda dentro del citoplasma

Síntesis de proteínas solubles y transmembrana

- Tipo I: amino terminal está dentro del RE

- Tipo II: está en el citosol
- Tipo III: muchos dominios transmembranas (cadenas alifáticas)
- Tipo I:
 Traducción ocurre a la vez de la translocación
- Tipo II:
 N terminal fuera y C terminal dentro
- Tipo III:
 En la traducción hay dominios en que los polipéptidos se quedan en la
membrana

Modificaciones postraduccionales

- Adicción de azúcar: glicosilación

- Hace con que haya una variedad muy grande de proteínas en la célula
 N-glicosilación: el azúcar que anade a la glucosa en el grupo N
 Interviene un lípido que está en la membrana del RE (dolicol)
 O-glicosilacion: el azúcar que anade a la glucosa en el grupo O
 09/09/2019 Clase 105

Funciones del RER

Control de calidad

- Chaperona
- Calreticulina: chaperona que se encuentra en el lumen del RER
- Calnexina: actua de manera similar a la calreticulina, está anclada en el RER (en
el citosol)
- Chaperona tiene la función de plegar bien el polipétido (proteína). Si no se
pliega bien, va a ser expulsado
- Si la proteína no es bien plegada, la proteína va a ser degradada (ubiquitina)
- Cuando hay muchas proteínas mal plegadas, es desencandenado un estrés en el
RER, pues las chaperonas no consiguen estar plegando todas esas proteínas
- Mecanismos de respuesta a proteínas mal plegadas (estrés del RER):
 antes de la célula llegar a la apoptosis, ocurrirá una síntesis de mas chaperonas,
 activando factores que van a hacer la traducción de proteínas

Complejo de Golgi

- apilamiento de cisternas (dictiosomas)

- Cara cis es más cerca del nucleo (aporta todas vesículas que forman las cisternas
aplanadas) y cara trans es mas cerca de la membrana plasmática (aporta las
proteínas)
- Cada parte del Golgi ocurre una etapa diferente de la otra
- Destinos de los productos del Golgi:
- Transporte del RE hasta Golgi:
 Va a formar vesículas el en RE
 Formacion del ERGIC: cisterna que forma mediante fusión de varias cisternas
que vienen del RE y va a ser pasada hacia el Golgi
 ERGIC: compartimento intermedio que no es RE y no es Golgi
 Transporte de proteínas que van a salir del Golgi a través de la cara trans para ir
a distintos destinos
- En la región cis:
 Síntesis de lípidos
 O-glicosilación de proteínas
 Procesar la cadena de polisacáridos para regenar una cadena específica de
proteínas
- En la región intermedia
 Eliminación
 Otras etapas
- Región trans
 Eliminacion
- N-glixosilacion empieza en el RER y termina en el Golgi
- Fosforilacion de enzimas lisosómicas:
 Marcación del lisosoma
 Todo que ourre en la célula hay que tener señales o receptores para permitir
realizar algún proceso
- Transporte a la membrana plasmática de las células polarizadas

Formación del Golgi

- Fusión de vesículas del mismi tipo van a formar las cisternas (NSF va a actuar
en ese proceso)
- Vía anterógrada: de RE al Golgi
- Vía retrógrada: devuelve proteínas al RER

10/10/2019 Clase 105

Bloque 3 – Citoesqueleto, procesos y movimientos celulares

Citoesqueleto

- Microtúbulos: más gruesos (son mas rígidos)

- Filamentos de actina: más finos (están cambiando constantemente)
- Filamentos intermedios (para aguantar fuerzas/presiones, son los más estables,
más fijos)
- Dependiendo del tipo celular, habrá más de uno que de otro en la célula
- Polaridad de la célula: aplican y basal (haz con que la célula se organize)
- El citoesqueleto permite localizar los orgánulos en la célula y permite su
movimiento
- Los filamentos intermedios van a fijar, estabilizar la célula
- El citoesqueleto va a dirigir em movimiento celular y interviene en el procesos
de división celular (huso mitótico, movimiento de los cromosomas)

Microtúbulos

- Estructura formada por cadenas de tubulina

- Dos tipos de tubulina: alfa y beta (se diferencian por la cadena de aminoácidos).
Ambas tiene la molécula de GTP formando parte de la tubulina
- Protofilamento = tubulina alfa + tubulina beta, formando así una cadena
- 3 Filamentos circulamente formando el microtúblo
- Formación de los microtúblos
 A partir de las tubulinas
 Crecimiento se produce con la unión de dimeros de tubulina
 Polaridad de los microtúbulos (unión del GTP de las moléculas de tubulina alfa
y beta)
- Inestabilidad dinámica de los microtúbulos
- El microtúbulo se adapta a la condición del medio
- Recambio rotario del microtúbulo
- Controle del crecimiento del microtúbulo: proteínas se asociam al microtúbulo
(Gama tubulina: se une al extremo negarivo del microtubulo, y le fija)
- Ni todos microtubulos de la célula parte de los centrosomas (en una célula
circular sí)
- Proteínas asociadas a microtúbulos (MAPs0
 Gama-tubulina (permite anclar en punto negativo haciendo cortar solo en el
punto positivo)
 Tau
 MAP2
- Proteínas sin actividad motora que se unen a los extremos de los microtúbulos
 Quinesina-13: aumentando catástrofes
- Proteínas que se unen a los microtúbulos con actividad motora
 Quinesinas: transporta hacia el polo positivo
 Dineinas: transporta hacia el polo negativo

Papel fisiológico y distribución

- Forma celular
- Transporte intracelular
- Transporte axoplásmico: transporte de vesículas por la célula, ese transporte se
da por los microtúbulos