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Comparación de Bacteria, Archaea y Eucarya

Propiedad Bacteria Archaea Eucarya

Núcleo rodeado de membrana Ausente Ausente Presente Presente


con nucléolo Orgánulos
membranosos Ausente Ausente Sin ácido murámico
internos complejos
Pared celular Casi siempre tienen un peptidoglicano Diversos tipos, sin ácido Tienen ácidos grasos de cadena
que contiene ácido murámico murámico Tienen cadenas recta con enlaces éster
Lípidos de membrana Tienen ácidos grasos de cadena alifáticas ramificadas Ausentes Timina presente
recta con enlaces éster con enlaces éter
Vesículas de gas RNA de Presentes Presentes Sin timina en el
transferencia Timina presente en la mayoría de brazo T o Metionina transportada por
los tRNA Tv|/C del tRNA el tRNA iniciador
Ausente Presente
/V-formilmetionina transportada Metionina transportada por Presente
por el tRNA iniciador el tRNA iniciador
mRNA policistrónico Presente Ausente Presente Ausente
Intrones de mRNA Ausente Ausente
Maduración por corte y
empalme, adición de la
capucha y adición de poli-A
Ribosomas
Tamaño 70S 70S 80S (ribosomas citoplasmáticos)
Factor de elongación 2 No reacciona con la toxina diftérica Reacciona Reacciona
Sensibilidad al cloranfenicol
y a la kanamicina Sensible Insensible Insensible
Sensibilidad a la anisomicina Insensible Sensible Sensible
RNA polímeras;! dependiente
del DNA
Número de enzimas Una Varias Tres
Estructura Patrón subunitario simple Patrón subunitario complejo similar Patrón subunitario complejo
(cuatro subunidades) a las enzimas de eucariotas (8-12 (12-14 subunidades)
subunidades)
Sensibilidad a la rifampicina Sensible Insensible Insensible
Promotores de polimerasas
tipo II Ausentes Presentes Presentes
Metabolismo
ATPasa similar No Sí Sí
Metanogénesis Ausente Presente Ausente
Fijación del nitrógeno Presente Presente Ausente
Fotosíntesis basada en Presente Ausente Presente"
la clorofila
Quimiolitotrofía Presente Presente Ausente
a
Presente en los cloroplastos (de origen bacteriano). (repetida como Tabla 19.8)
Premios Nobel por investigaciones en Microbiología
Fecha Científico" Investigación Fecha Científico" Investigación

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1952 S. A. Waksman (EE.UU.) Descubrimiento de la electrónico cristalográfico, y
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1954 J. F. Enders (EE.UU.) Cultivo del poliovirus en tejidos de los virus y otros compiejos
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1957 D. Bovet (1) Descubrimiento del primer 1984 C. Milstein (UK) Desarrollo de la técnica para la
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1958 G. W. Beadle (EE.UU.) Trabajos sobre genética N. K. Jeme (D) monoclonales (Milstein y
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J. Lederberg (EE.UU.) inmunología (Jeme)
1959 S. Ochoa (EE.UU.) A. Descubrimiento de las enzimas que 1986 E. Ruska (UK) Desarrollo del microscopio
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1962 F. H. C. Crick (UK) Descubrimientos relativos a la 1988 J. Deisenhofer, R. Huber, Cristalización y estudio del
1965 J. D. Watson (EE.UU.) centro de reacción fotosintética de
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Jacob (F) Desarrollo de fármacos para
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( )
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paludismo e infecciones virales
1966 J. ivionoa \r) F. P. Descubrimiento de virus 1989 J. M. Bishop (EE.UU.) H. Descubrimiento de oncogenes
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1975 (EE.UU.) R. Porter (UK) H. la síntesis de DNA-dependiente de 1993 R. J. Roberts (EE.UU.) P. de genes interrumpidos
Temin (EE.UU.) D. RNA por A. Sharp (EE.UU.) P. C. Descubrimiento de los
Baltimore (EE.UU.) Doherty (AU) R. M. mecanismos por los que los
Zinkernagel (S) linfocitos T reconocen las

R. Dulbecco (EE.UU.) virus RNA tumorales; 1997 S.Prusiner (EE.UU.) células infectadas por virus
multiplicación de virus DNA Descubrimiento de los priones
tumorales

a
Los laureados con el premio Nobel fueron ciudadanos de los siguientes países: Alemania (A), Australia (AU), Bélgica (B), Dinamarca (D), Estados Unidos (EE.UU.), Francia (F), Italia (I), Japón (J), Reino Unido
(UK), Rusia (R), Sudáfrica (SA) y Suiza (S).
quinta edición

LANSING M. PRESCOTT
Augustana College

JOHN P. HARLEY Eastern


Kentucky University

DONALD A. KLEIN Colorado


State University

Traducción
Carlos Gamazo de la Rasilla
Universidad de Navarra

Iñigo Lasa Uzcudum


Universidad Pública de Navarra

MADRID • BUENOS AIRES • CARACAS • GUATEMALA • LISBOA • MÉXICO NUEVA


YORK • PANAMÁ • SAN JUAN • SANTA FE DE BOGOTÁ • SANTIAGO • SAO
AUCKLAND • HAMBURGO • LONDRES • MILÁN • MONTREAL • NUEVA DELHI • PARÍS
SAN FRANCISCO • SYDNEY • SINGAPUR • ST. LOUIS • TOKIO • TORONTO
MICROBIOLOGÍA

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McGRAW-HILL-INTERAMERICANA DE ESPAÑA, S. A. U.
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a
c/ Basauri, 17,1. planta
28023 Aravaca (Madrid)

ISBN: 84-486-0525-X
Depósito legal: M. 528-2004

Traducido de la quinta edición en inglés de la obra:


MICROBIOLOGY
de Lansing M. Prescott, John P. Harley y Donald A. Klein

ISBN: 0-07-232041-9 (Edición original)

Copyright © 2002 por The McGraw-Hill Companies, Inc.

Compuesto en: FER Fotocomposición, S. A.


Impreso en: GRAFO, S.A.
Impreso en España - Printed in Spain
PARTE I Introducción a la microbiología 26 Algas 614
27 Protozoos 628
1 Historia y ámbito de la microbiología 1
2 Estudio de la estructura microbiana: microscopía PARTE VIII Ecología y simbiosis
y preparación de muestras 18
3 Estructura y función de la célula procariota 43 28 Interacciones microbianas y ecología microbiana 641
4 Estructura y función de la célula eucariota 78 29 Microorganismos en ambientes acuáticos 682
30 Microorganismos en ambientes terrestres 719
PARTE II Nutrición, crecimiento y control
microbiano PARTE IX Respuesta inmunitaria y resistencia
5 Nutrición microbiana 99
inespecífica del huésped
6 Crecimiento microbiano 118 31 Microbiota normal y resistencia inespecífica
7 Control de microorganismos por agentes físicos del huésped 751
y químicos 145 32 Inmunidad específica 785
33 Inmunología médica 822
PARTE III Metabolismo microbiano
8 Metabolismo: energía, enzimas y regulación 163
PARTE X Enfermedades microbianas y
9 Metabolismo: liberación y conservación su control
de la energía 184 34 Patogenicidad de los microorganismos 849
10 Metabolismo: uso de la energía en la biosíntesis 219 35 Quimioterapia antimicrobiana 869
36 Microbiología clínica 892
PARTE IV Biología molecular y genética 37 Epidemiología de las enfermedades infecciosas 915
microbiana 38 Enfermedades humanas causadas por virus 941
11 Genes: estructura, replicación y mutación 243 39 Enfermedades humanas causadas por bacterias 973
12 Genes: expresión y regulación 279 40 Enfermedades humanas causadas por hongos
13 Recombinación microbiana y plásmidos 313
y protozoos 1021

PARTE V Tecnología del DNA y genómica PARTE XI Microbiología de los alimentos


e industrial
14 Tecnología del DNA recombinante 343
15 Genómica microbiana 371 41 Microbiología de los alimentos 1043
42 Microbiología industrial y biotecnología 1075
PARTE VI Los virus
16 Los virus: introducción y características generales 389 APÉNDICES
17 Los virus: bacteriófagos 411
18 Los virus: virus de eucariotas 429
Apéndice I Revisión de la química de las moléculas
biológicas 111.3
PARTE VII La diversidad del mundo
Apéndice II Rutas metabólicas comunes 1125
Apéndice III Clasificación de procariotas de acuerdo
microbiano
con la primera edición del Bcrgey's Manual
19 Taxonomía microbiana 455 qf Systematic Bacteríology 1135
20 Archaea 487 Apéndice IV Clasificación de procariotas de acuerdo
21 Bacterias: deinococos y Gram negativas con la segunda edición del Bergey's Manual
no proteobacterias 504 qf Systematic Bacteriology 1140
22 Bacterias: las proteobacterias 525
23 Bacterias: Gram positivas con bajo contenido Apéndice V Clasificación de los virus 1149
en G + C 558
24 Bacterias: Gram positivas con alto contenido Glosario 1155
en G + C 578
25 Hongos (Eumycota), mohos mucosos y mohos Créditos 1189
acuáticos 595
índice 1195
ZZZULQFRQPHGLFRVPII\FRP
CONTENIDO

Prefacio xix 3.3 La matriz citoplasmática 52


Al estudiante xxix Cuerpos de inclusión 52
Ribosomas 55
3.4 Nucleoide 55
3.5 La pared de las células procariotas 57
PARTE I Estructura del peptidoglicano 59
Pared celular de las bacterias Gram positivas 59
Pared celular de las bacterias Gram negativas 61
Introducción a la microbiología Mecanismo de la tinción de Gram 64
La pared celular y protección osmótica 64
1 Historia y ámbito de la microbiología 3.6 Componentes externos a la pared celular 65
Cápsulas, «sume» y capas S 65
1 Pili y fimbriae 66
1.1 El descubrimiento de los microorganismos 2 Flagelos y movilidad 66
1.2 La polémica sobre la generación espontánea 2 3.7 Quimiotaxis 70
1.3 El papel de los microorganismos en la enfermedad 7 3.8 Endospora bacteriana 72
Reconocimiento de la relación entre microorganismos
y enfermedades 7
Desarrollo de las técnicas para estudiar los patógenos 4 Estructura y función de la célula
microbianos 8 eucariota 78
Estudios inmunológicos 9 4.1 Resumen de la estructura de la célula eucariota 80
1.4 Microbiología industrial y ecología microbiana 11 4.2 Matriz citoplasmática, microfilamentos, filamentos
1.5 Miembros del mundo microbiano 12 intermedios y microtúbulos 80
1.6 Ámbito y relevancia de la microbiología 12
4.3 Retículo endoplasmático 83
1.7 El futuro de la microbiología 14
4.4 Aparato de Golgi 83
4.5 Lisosomas y endocitosis 85
2 Estudio de la estructura microbiana: 4.6 Ribosomas de eucariotas 87
microscopía y preparación de muestras 18 4.7 Mitocondrias 87
2.1 Lentes y desviación de la luz 19 4.8 Cloroplastos 89
2.2 Microscopio óptico 20 4.9 Núcleo y división celular 90
Microscopio de campo claro 20 Estructura nuclear 90
Resolución de un microscopio 21 Nucléolo 91
Microscopio de campo oscuro 23 Mitosis y meiosis 91
Microscopio de contraste de fases 23 4.10 Envolturas externas celulares 93
Microscopio de contraste de interferencia diferencial 26 4.11 Cilios y flagelos 93
Microscopio de fluorescencia 26 4.12 Comparación entre las células procariotas
2.3 Preparación y tinción de muestras 28 y eucariotas 95
Fijación 28
Colorantes y tinción simple 28
Tinción diferencial 29

2.4
Tinción de estructuras específicas 30
Microscopía electrónica 32
PARTE II
Microscopio electrónico de transmisión 32
Preparación de la muestra 32 Nutrición, crecimiento y
Microscopio electrónico de barrido 35 control microbiano
2.5 Nuevas técnicas en microscopía 36
Microscopía confocal 36
Microscopía con sonda de barrido 38 5 Nutrición microbiana 99
5.1 Requerimientos nutritivos esenciales 100
5.2 Requerimientos de carbono, hidrógeno y oxígeno 100
3 Estructura y función de la célula 5.3 Tipos nutricionales entre los microorganismos 101
procariota 43 5.4 Necesidades de nitrógeno, fósforo y azufre 102
3.1 Resumen de la estructura de la célula procariota 44 5.5 Factores de crecimiento 103
Tamaño, forma y agolpamiento 44 5.6 Captación celular de nutrientes 104
Organización de la célula procariota 47 Difusión facilitada 104
3.2 Membrana de la célula procariota 48 Transporte activo 106
Membrana plasmática 48 Translocación de grupo 108
Sistemas internos de membrana 51 Captación de hierro 109

IX
X Contenido

5.7 Medios de cultivo 109


Medios sintéticos o definidos 110 PARTE III
Medios complejos 110
Tipos de medios 111 Metabolismo microbiano 8
5.8 Aislamiento de cultivos puros 112
Siembra en placa por extensión
y en estrías 112 Metabolismo: energía,
Siembra en profundidad 112 enzimas y regulación 163
Morfología y crecimiento de colonias 114
8.1 Energía y trabajo 164
8.2 Leyes de la termodinámica 165
6 Crecimiento microbiano 118 8.3 Energía libre y reacciones 166
6.1 Curva de crecimiento 119 8.4 Papel del ATP en el metabolismo 167
8.5 Reacciones de oxidación-reducción y transportadores
Fase de latencia (Lag) 119
de electrones 168
Fase exponencial 120
8.6 Enzimas 170
Fase estacionaria 121
Estructura y clasificación de las enzimas 171
Fase de muerte 121 Mecanismo de las reacciones enzimáticas 172
Expresión matemática del crecimiento 121 Efecto del ambiente sobre la actividad enzimática 174
6.2 Determinación del crecimiento microbiano 124 Inhibición enzimática 175
Determinación del número de células 124 8.7 Naturaleza y significado de la regulación metabólica 176
Determinación de la masa celular 125 8.8 Canalización metabólica 176
6.3 Cultivo continuo de microorganismos 127 8.9 Control de la actividad enzimática 177
Quimiostato 127 Regulación alostérica 177
Turbidostato 128 Modificación covalente de enzimas 179
6.4 Influencia de los factores ambientales Inhibición por retroalimentación 180
en el crecimiento 128
Solutos y actividad del agua 128
pH 131 9 Metabolismo: liberación y conservación
Temperatura 132 de la energía 184
Concentración de oxígeno 135
9.1 Descripción general del metabolismo 185
Presión 137 Radiación 137 9.2 Degradación de la glucosa a piruvato 188
6.5 Crecimiento microbiano en ambientes naturales 139 Vía glucolítica 189
Limitación del crecimiento por factores Vía de las pentosas fosfato 189
ambientales 139 Vía de Entner-Doudoroff 11
Recuento de formas vegetativas viables pero 9.3 Fermentaciones 192
no cultivables de procariotas 140 9.4 Ciclo de los ácidos tricarboxílicos 194
Quorum sensing y poblaciones 9.5 Transporte de electrones y fosforilación oxidativa 196
microbianas 141 Cadena transportadora de electrones 196
Fosforilación oxidativa 198
Producción de ATP en la glucólisis y en la respiración
7 Control de microorganismos por agentes aerobia 199
físicos y químicos 145 9.6 Respiración anaerobia 203
9.7 Catabolismo de hidratos de carbono y de polímeros
7.1 Definición de los términos más frecuentes 146 de reserva intracelulares 204
7.2 Cinética de muerte microbiana 147 Hidratos de carbono 204
7.3 Condiciones que influyen sobre la eficacia Polímeros de reserva 205
de la actividad de un agente 9.8 Catabolismo de lípidos 205
antimicrobiano 148 9.9 Catabolismo de proteínas y aminoácidos 206
7.4 Control microbiano por métodos físicos 149 9.10 Oxidación de moléculas inorgánicas 206
Calor 149 9.11 Fotosíntesis 209
Bajas temperaturas 152 Reacción luminosa en eucariotas
Filtración 152 y cianobacterias 209
Radiación 154 Reacción luminosa en bacterias verdes
7.5 Control microbiano por agentes químicos 155 y púrpuras 214
Compuestos fenol icos 156
Alcoholes 156
Halógenos 157 10 Metabolismo: uso de la energía
Metales pesados 158 en la biosíntesis 219
Compuestos de amonio cuaternario 159 10.1 Principios que regulan la biosíntesis 220
Aldehidos 159 10.2 Fijación fotosintética del CO2 223
Gases esterilizantes 159 Fase de carboxilación 223
7.6 Evaluación de la eficacia de los agentes Fase de reducción 223
antimicrobianos 159 Fase de regeneración 223
10.3 Síntesis de azúcares y polisacáridos 224
Contenido XI

10.4 Asimilación de fósforo, azufre y nitrógeno 12.3 Regulación de la síntesis de mRNA 296
inorgánicos 225 Inducción y represión 296
Asimilación de fósforo 225 Control negativo 297
Asimilación de azufre 226 Control positivo 299
Asimilación de nitrógeno 226 12.4 Atenuación 299
Fijación de nitrógeno 228 12.5 Sistemas de regulación global 302
10.5 Síntesis de aminoácidos 230 Represión por catabolito 303
10.6 Reacciones anapleróticas 230 Regulación por factores sigma y control de la
10.7 Síntesis de purinas, pirimidinas y nucleótidos 232 esporulación 303
Biosíntesis de purina 233 RNA antisentido ycontrol de las porinas 304
Biosíntesis de pirimidina 234 12.6 Sistemas de fosfotransferencia de dos
10.8 Síntesis de lípidos 234 componentes 305
10.9 Síntesis del peptidoglicano 237 12.7 Control del ciclo celular 307
10.10 Patrones de formación de la pared celular 239
13 Recombinación microbiana
y plásmidos 313
PARTE IV 13.1 Recombinación bacteriana: principios generales 314
13.2 Plásmidos bacterianos 316
Biología molecular y genética Factores de ferti1idad 318
microbiana Factores de resistencia 318
Plásmidos Col 318
Otros tipos de plásmidos 319
11 Genes: estructura, 13.3 Elementos transponibles 320
replicación 13.4 Conjugación bacteriana 324
y mutación 243 Cruce F+ x F~ 325
Conjugación Hfr 326
11.1 El DNA como material genético 244 Conjugación F' 326
11.2 Estructura de los ácidos nucleicos 247 13.5 Transformación del DNA 328
Estructura del DNA 247 Estructura del RNA 249 13.6 Transducción 330
La organización del DNA en las células 249 Transducción generalizada 331
11.3 La replicación del DNA 251 Transducción especializada 331
Modelos de síntesis del DNA 251 13.7 Elaboración de mapas del genoma 335
Mecanismo de replicación del DNA 252 13.8 Recombinación y elaboración de mapas genómicos
11.4 El código genético 257 en virus 337
Establecimiento del código genético 257
Organización del código 257
11.5 Estructura de los genes 257
Genes que codifican proteínas 260
Genes que codifican tRNA y rRNA 261
PARTE V
11.6 Mutaciones y su base química 262
Mutaciones y mutagénesis 263
Tecnología del DNA y
Mutaciones espontáneas 264 genómica
Mutaciones inducidas 265
La expresión de las mutaciones 266
11.7 Detección y aislamiento de mutantes 269
14 Tecnología del DNA recombinante 343
Detección de mutantes 269 14.1 Perspectivas históricas 344
Selección de mutantes 270 14.2 DNA sintético 348
Estudios de carcinogenicidad 271 14.3 La reacción en cadena de la polimerasa 349
11.8 Reparación del DNA 273 14.4 Preparación del DNA recombinante 352
Reparación por escisión 273 Aislamiento y clonación de fragmentos 352
Eliminación de las lesiones 274 Sondas de genes 353
Reparación posreplicación 275 Aislamiento y purificación de DNA clonado 355
Reparación por recombinación 275 14.5 Vectores de clonación 357
Plásmidos 358 Fagos 358
12 Genes: expresión y regulación 279 Cósmidos 359
12.1 Transcripción del DNA o síntesis del RNA 280 Cromosomas artificiales 359
Transcripción en los procariotas 280 14.6 Inserción de genes en células eucariotas 360
Transcripción en los eucariotas 282 14.7 Expresión de genes foráneos en bacterias 361
12.2 Síntesis de las proteínas 284 14.8 Aplicaciones de la ingeniería genética 363
RNA de transferencia y activación Aplicaciones médicas 363
de los aminoácidos 285 Aplicaciones industriales 365
El ribosoma 287 Aplicaciones en agricultura 365
Iniciación de la síntesis proteica 288 14.9 Impacto social de la tecnología del DNA
Elongación de la cadena polipeptídica 289 recombinante 367
Terminación de la síntesis proteica 292
Plegamiento proteico y chaperonas moleculares 293
Procesamiento de las proteínas 295
XII Contenido

15 Genómica microbiana 371 Síntesis y ensamblaje de las cápsides víricas 438


15.1 Introducción 372 Liberación de los viriones 439
15.2 Determinando las secuencias de DNA 372 18.3 Infecciones citocidas y daño celular 442
15.3 Secuencias al azar de genomas completos 373 18.4 Infecciones por virus persistentes, latentes
15.4 Bioinfbnnática 375 y lentos 442
15.5 Características generales de los genomas 18.5 Virus y cáncer 443
18.6 Virus de plantas 444
microbianos 375
Morfología de los viriones 444
15.6 Genómica funcional 381
Taxonomía de los virus de plantas 445
Localización de genes en el genoma 381
Reproducción de los virus de plantas 445
Evaluación del nivel de expresión génica a nivel
Transmisión de los virus de plantas 446
de RNA 381
18.7 Virus de hongos y algas 447
Evaluación del nivel deexpresión génica a nivel
18.8 Virus de insectos 447
de proteína 383
18.9 Viroides y priones 448
15.7 El fuluro de la eenómica 385

PARTE VI PARTE VII


Los virus La diversidad del mundo
microbiano
16 Los virus: introducción y características 19 Taxonomía microbiana 455
generales 389
19.1 Introducción y descripción general 456
16.1 Desarrollo inicial de la virología 390
19.2 Evolución y diversidad microbianas 457
16.2 Propiedades generales de los virus 392
19.3 Rangos taxonómicos 459
16.3 Cultivo de virus 392
19.4 Sistemas de clasificación 460
16.4 Purificación y análisis de virus 394
Clasificación fenética 461
Purificación de virus 394
Taxonomía numérica 461
Análisis de virus 395
Clasificación filogenética 462
16.5 Estructura de los virus 397
19.5 Principales características utilizadas
Tamaño del virión 398
en taxonomía 463
Propiedades estructurales generales 398
Características clásicas 463
Cápsides helicoidales 399
Características moleculares 464
Cápsides icosaédricas 399
19.6 Evaluando la filogenia microbiana 468
Ácidos nucleicos 402
Cronómetros moleculares 468
Envolturas y enzimas de los virus 403
Arboles filogenéticos 469
Virus con cápsides de simetría compleja 405
rRNA, DNA y proteínas como indicadores
16.6 Principios de taxonomía de virus 406
de la filogenia 469
Taxonomía polifásica 471
17 Los virus: bacteriófagos 411 19.7 Las principales divisiones de los seres vivos 471
Dominios 471
17.1 Clasificación de los bacteriófagos 412
Reinos 474
17.2 Multiplicación de los fagos DNA bicatenarios:
19.8 Manual de Bergey de sistemática bacteriana 476
el ciclo lítico 413
La primera edición del Manual Bergey 476
El experimento de multiplicación en un
Lasegunda edición del Manual Bergey 477
paso 413
19.9 Descripción general de la filogenia y la diversidad
Adsorción del fago a la célula huésped
bacterianas 478
y penetración 414
Síntesis de los ácidos nucleicos y las proteínas
del fago 415
Ensamblaje de los viriones 416 20 Archaea 487
Liberación de los viriones 418 20.1 Introducción a Archaea 488
17.3 Multiplicación de los fagos DNA inonocatenarios 418 Paredes celulares de las arqueas 488
17.4 Multiplicación de los fagos RNA 420 Lípidos y membranas de las arqueas 489
17.5 Bacteriófagos atemperados y lisogenia 421 Genética y biología molecular 490
Metabolismo 491
Taxonomía de Archaea 491
18 Los virus: virus de eucariotas 429 20.2 Phylum Crenarchaeota 494
18.1 Clasificación de los virus de animales 430 20.3 Phylum Euryarchaeota 495
18.2 Multiplicación de los virus de animales 430 Los metanógenos 496
Adsorción de los viriones 430 Las halobacterias 497
Penetración y decapsidación 434 Los termoplasmas 499
Replicación y transcripción en los virus DNA 435 Termófilos extremos metabolizadores de S" 501
Replicación y transcripción en los virus RNA 437 Arqueas reductoras de sulfato 501
Contenido xiii

21 Bacterias: deinococos y Gram negativas 24.7 Suborden Propionibaclerineae 588


24.8 Suborden Streptomycineae 589
no proteobacterias 504 24.9 Suborden Streptosporangineae 590
21.1 Aquificae y Thermologae 505 24.10 Suborden Frankineac 591
21.2 Deinococcit.s-Thenmt.s 505 24.11 Orden Bifidobacteriaks 592
21.3 Bacterias fotosintéticas 506
Phylum Chloroflexi 508
Phylum Chlorobi 508 25 Hongos (Eumycota), mohos mucosos
Phylum Cyanobacteria 509 y mohos acuáticos 595
21.4 Phylum Planctomycetes 515
21.5 Phylum Chlamydtae 515 25.1 Distribución 597
21.6 Phylum Spirochaetes 517 25.2 Importancia 597
21.7 Phylum Baaewidetes 520 25.3 Estructura 597
25.4 Nutrición y metabolismo 599
25.5 Reproducción 599
22 Bacterias: las proteobacterias 525 25.6 Características de las divisiones de los hongos 602
División Zygomycoia 603
22.1 Clase Alphaproteobacteria 526 División Ascomycota 603
Bacterias púrpura no del azufre 527 División Basidiomycota 604
Rickettsia y Coxiella 528 División Deuteromycota 607
Caulobacteraceae e Hyphomicrobiaceae 529 División Chytridiomycota 607
Familia Rhizobiaceae 531 Bacterias nitrificantes 533 25.7 Mohos mucosos y mohos acuáticos 608
22.2 Clase Betaproteobacteria 534 División Myxomycota (hongos mucosos
Orden Neisseriales 534 acelulares) 608
Orden Burkholderiales 535 División Acrasiomycota (mohos mucosos
Orden Nitrosomonadales 537 celulares) 608
Orden Hydrogenophilales 537 D iv i s i ón Oomycola 610
22.3 Clase Gammaproteobacteria 539
Bacterias púrpuras del azufre 539
Orden Thiotrichales 539
Orden Methylococcciles 541
26 Algas 614
Orden Pseudomonadales 542 26.1 Distribución de las algas 615
Orden Vibrionales 545 26.2 Clasificación de las algas 616
Orden Enterobacteriales 546 26.3 Ultraestructura de la célula de alga 617
Orden Pasteurellales 547 26.4 Nutrición de las algas 617
22.4 Clase Deltaproteohacteria 550 26.5 Estructura del talo de las algas (forma vegetativa) 618
Órdenes Desulfovibrionales, Desulfobacterales 26.6 Reproducción de las algas 618
y Desulfuwmonadales 551 26.7 Características de las divisiones de las algas 619
Orden Bdellovibrionales 551 Chlowphyta (algas verdes) 619
Orden Myxococcales 553 Charophyla (algas pétreas/algas quebradizas) 620
22.5 Clase Epsilonproteobacleria 555 Euglenophyta (euglenoides) 621
Chrysophyta (algas pardo-doradas y amarillo-verdosas;
diatomeas) 621
Phaeophyta (algas pardas) 623
23 Bacterias: Gram positivas con bajo contenido Rhodophyla (algas rojas) 623
en G + C 558 Pyrrhophyta (dinoflagelados) 624
23.1 Clase Mollicutes (los micoplasmas) 560
23.2 Bacterias Gram positivas con bajo contenido en G + C
en el Manual Bergey 562 27 Protozoos 628
23.3 Clase Closliidia 565 27.1 Distribución 629
23.4 Clase Bacilli 566 27.2 Importancia 629
Orden Baállales 567 27.3 Morfología 630
Orden Laclobacillales 571 27.4 Nutrición 631
27.5 Enquistamiento y desenquistamiento 631
27.6 Orgánulos locomotores 631
24 Bacterias: Gram positivas con alto contenido 27.7 Reproducción 631
en G + C 578 27.8 Clasificación 632
27.9 Tipos representativos 633
24.1 Propiedades generales de los actinomicetos 579
Phylum Sarcomastigophora 633
24.2 Bacterias Gram positivas con alto contenido en G + C
Phylum Labyrinlhomorpha 636
en el Manual Bergey 580
Phylum Apicomplexa 636
24.3 Suborden Aclinomycineae 582
24.4 Suborden Mlcrococcineae 582 Phylum Microspora 637
24.5 Suborden Corynebacterineae 584 Phylum Ascetospora 637
24.6 Suborden Micromonosporineae 587 Phylum Myxoioa 637
Phylum Ciliophora 637
XIV Contenido

30.3 Microorganismos y la formación de diferentes tipos


PARTE VIII de suelos 723
Suelos tropicales y de regiones calientes 724
Ecología y simbiosis Suelos en zonas frías y húmedas 725
Suelos en desiertos 725
Suelos geotérmicos hipertermales 726
28 Interacciones microbianas y 30.4 Asociaciones entre los microorganismos del suelo
ecología y las plantas vasculares 726
Microorganismos que crecen sobre la superficie
microbiana 641 de las plantas 726
28.1 Fundamentos de ecología microbiana 642 Microorganismos que crecen en el interior
28.2 Interacciones microbianas 642 de las plantas 727
Mutualismo 644 Asociaciones tripartitas y tetrapartitas 737
Protocooperación 651 30.5 Suelos, plantas y nutrientes 738
Comensalismo 653 30.6 Suelos, plantas y atmósfera 739
Predación 654 30.7 Microorganismos y descomposición de plantas 743
Parasitismo 656 30.8 La biosfera del subsuelo 744
Amensalismo 656 30.9 Microorganismos del suelo y salud humana 746
Competición 657 30.10 Comprensión de la diversidad microbiana del suelo 747
Simbiosis en sistemas complejos 658
28.3 Interacciones en los ciclos de los nutrientes 658
Ciclo del carbono 658
Ciclo del azufre 662
Ciclo del nitrógeno 663
PARTE IX
Ciclo del hierro 664
Ciclo del manganeso 665
Respuesta inmunitaria y resistencia
Otros ciclos y ciclos interconectados 665 inespecifica del huésped
Microorganismos y toxicidad de metales 666
28.4 El entorno físico 668
El microambiente y nicho 668
31 Microbiota normal y resistencia inespecífica
Biofilms y tapetes microbianos 668 del huésped 751
Microorganismos yecosistemas 670
31.1 Animales gnotobióticos 752
Movimiento de microorganismos entre
31.2 Distribución de la microbiota normal del cuerpo humano 753
ecosistemas 672
Distribución de la microbiota normal 754
Estrés y ecosistemas 673
Relación entre la microbiota normal y el huésped 759
28.5 Métodos en ecología microbiana 674
31.3 Esquema general de la resistencia del huésped 759
31.4 Células, tejidos y órganos del sistema inmunitario 760
29 Microorganismos en ambientes Células del sistema inmunitario 760
Órganos y tejidos del sistema inmunitario 763
acuáticos 682 31.5 Barreras físicas y químicas en la resistencia
29.1 Ambientes acuáticos y microorganismos 683 inespecífica 764
Gases y microorganismos acuáticos 684 Barreras físicas y mecánicas 765
Nutrientes en los ambientes acuáticos 686 Barreras químicas 768
Ciclos de los nutrientes en los ambientes 31.6 Inflamación 768
acuáticos 687 Inflamación crónica 771
29.2 La comunidad microbiana 689 31.7 El sistema del complemento 771
29.3 Ambientes marinos 694 31.8 Fagocitosis 774
29.4 Ambientes de agua dulce 698 31.9 Citocinas 777
Lagos 698 lnterferones 778
Arroyos y ríos 699 Fiebre 778
Microorganismos en aguas dulces heladas 700 31.10 Células asesinas naturales 779
29.5 Transmisión de enfermedades por el agua 700
Patógenos de transmisión hídrica y depuración
del agua 701 32 Inmunidad específica 785
Análisis sanitario del agua 704 32.1 Esquema de la inmunidad específica 786
29.6 Tratamiento de aguas residuales 707 Tipos de inmunidad adquirida 786
Determinación de la calidad del agua 708 32.2 Antígenos 788
Procesos en el tratamiento del agua 708 Haptenos 789 Superantígenos 790
29.7 Calidad de las aguas subterráneas y sistemas domésticos Antígenos de diferenciación asociados a
de tratamiento 713 células (CDs) 790
32.3 Anticuerpos 790
30 Microorganismos en ambientes Estructura de las inmunoglobulinas 790
Función de las inmunoglobulinas 793
terrestres 719 Clases de inmunoglobulinas 793
30.1 Los suelos como ambiente para los microorganismos 720 Diversidad de los anticuerpos 796
30.2 Microorganismos en los ambientes del suelo 721
Contenido XV

Especificidad de los anticuerpos 799 34.3 Patogénesis de la enfermedad bacteriana 854


Fuentes de anticuerpos 799 Mantenimiento de un reservorio de la bacteria
Hibridomas 801 patógena 854
32.4 Biología de las células T 802 Transporte de la bacteria patógena hasta
Receptores de las células T 802 el huésped 854
Complejo principal de histocompatibilidad Fijación y colonización por la bacteria patógena 854
(MHC) .802 Invasión de la bacteria patógena 855
Tipos de células T 906 Crecimiento y multiplicación de la bacteria
32.5 Biología de las células B 810 patógena 855
Unión antígeno-anticuerpo 811 Abandonando el huésped 856
Activación de las células B 811 La naturaleza clonal de las bacterias patógenas 856
32.6 Acción de los anticuerpos 814 Regulación de los factores de virulencia
Neutralización de toxinas 814 bacterianos 857
Neutralización de virus 814 Islas de patogenicidad 857
Inhibición de la adherencia 814 Toxigenicidad 857
IgE e infecciones parasitarias 815 34.4 Mecanismos microbianos para escapar de las defensas
Opsonización 815 del huésped 865
Formación e inmunocomplejos 816 Evasión de las defensas del huésped por virus 865
32.7 La vía clásica del complemento 816 Evasión de las defensas del huésped por bacterias 865
32.8 Tolerancia inmunitaria adquirida 818
32.9 Resumen: el papel de los anticuerpos y linfocitos
en la resistencia 818 35 Quimioterapia antimicrobiana 869
Inmunidad frente a infecciones víricas 818
35.1 El desarrollo de la quimioterapia 870
Immunidad frente a infecciones bacterianas 819
35.2 Características generales de los fármacos
antimicrobianos 871
33 Inmunología médica 822 35.3 Determinación del nivel de actividad antimicrobiana 873
Pruebas de sensibilidad por dilución 873
33.1 Vacunas e inmunizaciones 823 Pruebas de sensibilidad por difusión en agar 874
Tipos de vacunas y sus características 826 Determinación de la concentración de fármacos en
33.2 Desórdenes inmunitarios 827 sangre 875
Hipersensibilidades 828 35.4 Mecanismos de acción de los antimicrobianos 875
Enfermedades autoinmunitarias 831 35.5 Factores que influyen sobre la eficacia de los fármacos
Rechazo de trasplantes (de tejidos) 833 antimicrobianos 876
Immunodeficiencias 834 35.6 Fármacos antibacterianos 877
33.3 Interacciones antígeno-anticuerpos in vitro 835 Sulfonamidas o fármacos sulfa 877
Aglutinación 835 Quinolonas 878 Penicilinas 879
Fijación del complemento 835 Cefalosporinas 881 Tetraciclinas 882
Pruebas inmunoenzimáticas 836 Aminoglucósidos 882
Citometría de flujo y fluorescencia 839 Eritromicina y otros macrólidos 882
Immunoblotnng (Western Blot) 840 Inmunodifusión 840 Vancomicina y teicoplanina 883 Cloranfenicol 883
Inmunoelectroforesis 841 35.7 Resistencia a fármacos 883
Inmunofluorescencia 842 Mecanismos de resistencia a fármacos 883
Inmunoprecipitación 843 Liposomas 843 Origen y transmisión de la resistencia a
Neutralización 844 fármacos 885
Radioinmunoensayo 845 Serotipado 845 35.8 Antimicóticos 886
35.9 Antivirales 887

PARTE X 36 Microbiología clínica 892


36.1 Muestras 893
Enfermedades microbianas y Toma de muestras 893
su control Manipulación 895
Transporte 897
36.2 Identificación de microorganismos en las muestras 897
34 Patogenicidad de los microorganismos 849 Microscopía 898
34.1 Relación entre el huésped y el parásito 850 Características de cultivo y bioquímicas 898
34.2 Patogénesis de la enfermedad viral 853 Métodos rápidos de identificación 906
Entrada, contacto y replicación primaria 853 Técnicas inmunológicas 909
Proliferación viral y tropismo celular 853 Tipificación con bacteriófagos 909
Daño celular y enfermedad clínica 853 Métodos moleculares y análisis de los productos metabólicos 910
Respuesta inmunitaria del huésped 854 36.3 Pruebas de sensibilidad 911
Restablecimiento de la infección 854 Liberación del virus 854 36.4 Sistemas informáticos en microbiología clínica 912
XVI Contenido

37 Epidemiología de las enfermedades 38.4 Enfermedades transmitidas por alimentos


y por el agua 965
infecciosas 915 Gastroenteritis (viral) 965
37.1 Terminología epidemiológica 916 Hepatitis A 966 Hepatitis
37.2 Determinación de la frecuencia: las herramientas E 966 Poliomielitis 966
de los epidemiólogos 917 38.5 Enfermedades por virus lentos y priones 966
37.3 Epidemiología de las enfermedades infecciosas 918 38.6 Otras enfermedades 968
37.4 Identificación de una enfermedad infecciosa Verrugas 969
en una población 918
Sistemas de detección remotos y de información
geográfica: esquema de las enfermedades 39 Enfermedades humanas causadas
infecciosas 919
por bacterias 973
Correlación con un único agente causal 919
37.5 Identificación de una epidemia 919 39.1 Enfermedades transmitidas por el aire 974
37.6 El ciclo de la enfermedad infecciosa: historia Difteria 975
de una enfermedad 922 Enfermedad de los legionarios y fiebre
¿Qué patógeno provocó la enfermedad? 922 de Pontiac 975
¿Cuál fue la fuente o el reservorio Meningitis 976
del patógeno? 923 Neumonía por Mycobacterium avium-
¿Cómo se transmitió el patógeno? 923 M. intracellulare 977
¿Por qué fue el huésped susceptible Tos ferina 977
al patógeno? 927 Enfermedades estreptocócicas 978
¿Cómo abandonó al huésped el patógeno? 927 Tuberculosis 981
37.7 Virulencia y mecanismo de transmisión 927 39.2 Enfermedades transmitidas por artrópodos 984
37.8 Patógenos y enfermedades infecciosas emergentes Erliquiosis 984
y reemergentes 928 Tifus epidémico (transmitido por piojos) 984
Razones para el aumento de enfermedades infecciosas Tifus endémico (murino) 985
emergentes y reemergentes 930 Enfermedad de Lyme 985
37.9 Control de las epidemias 932 Peste 987
El papel del sistema de salud pública: guardián Fiebre Q 987
epidemiológico 932 Fiebre manchada de las Montañas Rocosas 989
37.10 La amenaza emergente del bioterrorismo 932 39.3 Enfermedades por contacto directo 989
37.11 Los viajes por el mundo y consideraciones sobre Carbunco 989
la salud 934 Vaginosis bacteriana 990
Viajes al espacio 935 Enfermedad por arañazo de gato 990
37.12 Infecciones nosocomiales 936 Chancroide 990
Fuente 936 Control, prevención y vigilancia 936 Neumonía por clamidias 991
El epidemiólogo hospitalario 937 Gangrena gaseosa o mionecrosis por
clostridios 991
Enfermedades genitourinarias por micoplasmas 991
38 Enfermedades humanas causadas Gonorrea 991
por virus 941 Conjuntivitis de inclusión 993
Lepra 993
38.1 Enfermedades transmitidas por el aire 942 Linfogranuloma venéreo 994
Varicela y herpes zóster 943 Neumonía por micoplasma 995
Gripe (influenza) 943 Uretritis no gonocócica 995 Úlcera péptica y gastritis 995
Sarampión 945 Psitacosis (ornitosis) 996
Parotiditis 946 Enfermedades estafilocócicas 996
Síndromes respiratorios y neumonía viral 947 Sífilis 998 Tétanos 1003 Tracoma 1003
Rubéola 947 Tularemia 1004 Enfermedades de transmisión sexual 1004
Viruela 948 39.4 Enfermedades transmitidas por los alimentos
38.2 Enfermedades transmitidas por artrópodos 948 y el agua 1004
Fiebre por garrapatas del Colorado 950 Botulismo 1007
Fiebre amarilla 950 Gastroenteritis Campylobacter jejuni 1008
38.3 Enfermedades por contacto directo 950 Cólera 1008 Listeriosis 1009
Síndrome de inmunodefiencia adquirida (SIDA) 950 Salmonelosis 1010 Shigelosis 1010
Herpes labial 956 Intoxicación alimentaria estafitocócica 1010
Resfriado común 957 Diarrea del viajero e infecciones por
Enfermedades de inclusión por cilomegalovirus 958 Escherichia col i 1011
Herpes genital 958 Fiebre tifoidea 1012
Infecciones por herpesvirus 6 humano 960
Infecciones por el parvovirus B19 humano 960
Leucemia 960
Mononucleosis (infecciosa) 960
Rabia 961
Hepatitis virales 962
Contenido XVÜ

39.5 Sepsis y shock séptico 1012 Producción de bebidas alcohólicas 1065


39.6 Infecciones dentales 1013 Producción de pan 1068 Otros alimentos fermentados 1068
Placa dental 1013 41.7 Microorganismos como alimentos y suplementos
Caries dental 1014 alimenticios 1070
Enfermedad periodontal 1014

42 Microbiología industrial y
40 Enfermedades humanas causadas por hongos biotecnología 1075
y protozoos 1021 42.1 Elección de microorganismos para la microbiología
40.1 Enfermedades causadas por hongos 1022 industrial y biotecnología 1076
Micosis superficiales 1023 Búsqueda de microorganismos en la naturaleza 1077
Micosis cutáneas 1023 Manipulación genética de microorganismos 1078
Micosis subcutáneas 1025 Conservación de microorganismos 1084
Micosis sistemáticas 1026 42.2 Crecimiento de microorganismos en ambientes
Micosis oportunistas 1028 controlados 1084
40.2 Enfermedades causadas por protozoos 1031 Desarrollo del medio de cultivo microbiano 1085
Amebiasis 1031 Crecimiento de microorganismos en un sistema
Criptosporidiosis 1032 industrial 1085
Enfermedades por amebas de agua dulce 1033 42.3 Principales productos de la microbiología
Giardiasis 1033 industrial 1087 Antibióticos 1088
Paludismo (malaria) 1034 Aminoácidos 1090
Enfermedades por hemoflagelados 1036 Ácidos orgánicos 1091
Toxoplasmosis 1039 Compuestos específicos para lamedicina
Tricomoniasis 1039 y la salud 1092
Biopolímeros 1092
Biosurfactantes 1093
Procesos de bioconversión 1094
42.4 Crecimiento microbiano en ambientes complejos 1095
PARTE XI Biodegradación utilizando comunidades microbianas
naturales 1095
Microbiología de los alimentos e Cambios en las condiciones ambientales para estimular
la biodegradación 1098
industrial Adición de microorganismos a comunidades
microbianas complejas 1101
41 Microbiología de los alimentos 1043 42.5 Aplicaciones de la biotecnología 1103
Biosensores 1103
41.1 Crecimiento de los microorganismos Microarrays 1104
en los alimentos 1044 Biopesticidas 1106
Factores intrínsecos 1045 42.6 Impacto de la biotecnología microbiana 1108
Factores extrínsecos 1047
41.2 Crecimiento microbiano y descomposición
Apéndice 1: Revisión de la química de las moléculas biológicas 1113
de los alimentos 1047
41.3 Control de la descomposición de los alimentos 1051 Apéndice II: Rulas melabólicas comunes 1125
Eliminación de microorganismos mediante
filtración 1051 Temperaturas bajas 1051 Apéndice III: Clasificación de procariotas de acuerdo con la primera
Temperaturas altas 1052 edición del Bergey's Manual of Systematic Bacteriology
Disponibilidad de agua 1053 Conservación mediante agentes químicos 1053 /135
Radiación 1053 Apéndice IV: Clasificación de procariotas de acuerdo con la segunda
Inhibición mediante productos microbianos 1054 edición del Bergey's Manual of Systematic Bacteriology
41.4 Enfermedades de transmisión alimentaria 1055 1140
Infecciones transmitidas por alimentos 1055
Intoxicaciones alimentarias 1058 Apéndice V: Clasificación de los virus 1149
41.5 Detección de patógenos de transmisión alimentaria 1059
Glosario 1155 Créditos 1189 índice 1195
41.6 Microbiología de los alimentos fermentados 1060
Leches fermentadas 1060
Producción de queso 1062
Carnes y pescados 1065
PREFACIO
Los libros son los portadores de la civilización. Sin libros, la historia calla, la literatura,
enmudece, la ciencia se paraliza, y el pensamiento y la especulación se detienen. Ellos
son motores del cambio, ventanas al mundo, faros que se alzan en el mar del tiempo.
Barbara Tuchman

L a microbiología es una disciplina extraordinariamente


amplia, que abarca especialidades tan diversas como
la bioquímica, la biología celular, la genética, la taxo-
nomía, la bacteriología de patógenos, la microbiología
diversos como la microbiología clínica y la ecología micro-
biana. La Parte VIII se centra en las relaciones de los micro-
organismos con otros seres vivos y con su entorno (ecología
microbiana). Introduce además la microbiología acuática y
industrial y de los alimentos, y la ecología. Un microbiólogo terrestre. El Capítulo 28 presenta los principios generales
debe estar familiarizado con muchas disciplinas biológicas y subyacentes a la ecología microbiana y la microbiología
con los principales grupos de microorganismos: virus, bac- ambiental y con ello evita redundancias en los capítulos
terias, hongos, algas y protozoos. El equilibrio es la clave. siguientes sobre el habitat acuático y el terrestre. El capítulo
Los estudiantes ajenos al tema necesitan una introducción al describe además diversos tipos de interacciones microbianas
conjunto antes de concentrarse en aquellas partes que más que se producen en el medio ambiente, como el mutualismo,
les interesen. Este libro aporta una introducción a las áreas la protocooperación, el comensalismo y la predación. Las
más importantes de la microbiología, adecuada para estu- Partes IX y X están relacionadas con el potencial patóge-
diantes de diversa procedencia. Gracias a esta adecuación, el no, la resistencia y la enfermedad. Los tres capítulos de la
texto se adapta a asignaturas con una orientación que puede Parte IX describen la microbiota normal, la resistencia ines-
variar desde la microbiología básica hasta la microbiología pecífica del huésped, los principales aspectos de la respuesta
médica y aplicada. No sólo será útil para estudiantes de inmunitaria y la inmunología médica. La Parte X empieza
medicina, odontología, enfermería y otras ciencias de la abordando temas esenciales como el potencial patógeno, la
salud, sino también para aquellos que se dedican a la investi- quimioterapia antimicrobiana y la epidemiología. Los Capí-
gación, la docencia y la industria. Se dan por superados dos tulos 38-40 estudian después las enfermedades microbianas
cuatrimestres/semestres para biología y otros dos para quí- más importantes en el ser humano. La separación de en-
mica, y el Apéndice I aporta además unas nociones esencia- fermedades por capítulos sigue un esquema básicamente
les de química. taxonómico; mientras que dentro de cada capítulo, se han
agrupado por modo de transmisión. Este enfoque aporta fle-
xibilidad y permite al estudiante un fácil acceso a la infor-
Organización y enfoque mación relativa a cualquier enfermedad que busque. No se
trata de un simple catálogo de enfermedades, sino que éstas
El libro está organizado de manera flexible, para que los se incluyen en función de su importancia médica y su capa-
capítulos y temas puedan colocarse casi en cualquier orden. cidad para ilustrar los principios básicos de la enfermedad y
Se ha hecho lo más autosuficiente posible cada capítulo para la resistencia. La Parte XI concluye este tratado con una
facilitar esta flexibilidad. Algunos temas esenciales en introducción a la microbiología industrial y de los alimen-
microbiología han recibido un tratamiento más extenso. tos. Cinco apéndices ayudan al estudiante a repasar algunos
El libro está dividido en 11 partes. Las seis primeras conceptos químicos básicos y aportan información extra
introducen los fundamentos de la microbiología, la estructura sobre algunos temas importantes que el libro no llega a com-
de los microorganismos, el crecimiento microbiano y su pletar.
control, el metabolismo, la biología y la genética molecula- El libro está pensado como una eficaz herramienta
res, la tecnología del DNA y la genómica, y la naturaleza de didáctica. En la medida de su facilidad de lectura, así se
los virus. La Parte VII constituye un estudio del mundo presta cualquier texto a que el estudiante lo utilice. Con este
microbiano. En la quinta edición, el estudio de las bacterias objetivo en mente, se ha recurrido a un estilo de redacción
sigue de cerca la organización general de la segunda edición directo y relativamente sencillo, con muchos epígrafes de
del Manual Bergey de sistemática bacteriana (Bergey's Ma- secciones y un guión que dirige cada capítulo. El nivel de
nual of Systematic Bacteriology). Aunque se dedica mayor dificultad se ha establecido con cautela, pensando en los lec-
atención a las bacterias, los eucariotas reciben también con- tores a los que va dirigido. Durante la preparación de la
siderable cobertura. Hongos, algas y protozoos son impor- quinta edición, se ha comprobado cuidadosamente la clari-
tantes por derecho propio. La introducción a su biología en
dad de cada frase, y se ha revisado en caso necesario. Se han
los Capítulos 25-27 es esencial para comprender temas tan
seguido en la medida de lo posible los acuerdos de nomen-

xix
XX Prefacio

datura y abreviaturas del ASM Style Manual de la American Novedades que aporta la quinta edición
Societyfor Microbiology.
Los numerosos términos nuevos que se encuentran en el En la quinta edición se han efectuado muchos cambios y
estudio de la microbiología representan un escollo enorme mejoras sustanciales, entre ellos:
para los estudiantes. Este texto reduce el problema reforzan-
do el aprendizaje de vocabulario de tres modos: 1) no 1. Se ha modificado la organización general del texto
emplea ningún término nuevo sin haberlo definido clara- para ofrecer un flujo más lógico de los temas y poner
mente (a veces se aportan también palabras derivadas), es un mayor énfasis en la ecología microbiana. La
decir, el estudiante no necesita un conocimiento previo de síntesis de ácidos nucleicos y de proteínas se ha
términos microbiológicos para poder utilizar el libro; 2) los trasladado a los capítulos de genética para integrar la
términos más importantes están impresos en negrita cuando discusión de la estructura de los genes, su replicación,
aparecen por vez primera; y 3) al final se incluye un glosario expresión y regulación. La tecnología del DNA
extenso y actualizado, con referencias de paginación. recombinante constituye ahora una sección aparte que
Como las ilustraciones son fundamentales para apren- contiene además un capítulo sobre genómica
der y disfrutar de la microbiología, todas ellas son a color, y microbiana. Los tres capítulos de introducción a la
se han utilizado numerosas fotografías excelentes también a ecología microbiana se colocan ahora después del
todo color. Con ello no sólo se realza el atractivo del texto, estudio de la diversidad microbiana, acercándose así
también la eficacia didáctica de cada figura, y por tanto se ésta a la parte en que se presentan los principios
ha invertido considerable esfuerzo en los dibujos. Gran parte básicos de la microbiología. La Parte IX contiene
de los dibujos utilizados en la cuarta edición ha sido retoca- ahora una descripción de la resistencia inespecífica del
da y mejorada para su empleo en esta quinta edición. Los huésped, así como una introducción a los fundamentos
dibujos nuevos se han realizado bajo la supervisión directa de la inmunología. Se discuten las asociaciones
de un editor artístico y de los autores, en la idea de ilustrar y simbióticas en el contexto de la ecología microbiana.
reforzar determinados puntos del texto. En consecuencia, Se dedica un capítulo completo a la patogenia
cada ilustración guarda relación directa con los párrafos a microbiana, agrupado con otros aspectos de índole
los que acompaña, y se cita específicamente allí donde pro- médica en la Parte X.
cede. Se ha tenido un exquisito cuidado en situar las ilustra- 2. Asimismo se han ampliado las herramientas
ciones lo más cerca posible del lugar donde se citan, y se ha pedagógicas. Una nueva sección con dos o más
revisado la exactitud y la claridad de cada figura y de su pie Cuestiones para reflexionar sigue a la sección de
correspondiente. Preguntas para razonar y repasar. Se han numerado las
principales secciones de cada capítulo para incrementar
la precisión de las referencias cruzadas. El resumen
contiene referencias en negrita a tablas y figuras que
Temas en el libro servirán para el repaso del capítulo.
3. Se han añadido ilustraciones nuevas a prácticamente
Al menos siete temas dirigen el curso de la obra, aunque
todos los capítulos. Además, nuestro editor artístico ha
alguno de ellos pueda ser más evidente que los otros en cier-
revisado minuciosamente cada figura, y retocado
tos puntos. Estos temas son los siguientes:
muchas para mejorar su aspecto y su utilidad.
1. El desarrollo de la microbiología como ciencia. 4. Se han revisado y actualizado todas las secciones de
2. La naturaleza e importancia de las técnicas empleadas referencias bibliográficas.
para aislar, cultivar, observar e identificar los
microorganismos. Además de estos cambios generales en el texto, se han actua-
3. El control de los microorganismos y la reducción de sus lizado todos los capítulos, algunos de ellos con modificacio-
efectos perjudiciales. nes sustanciales. Algunas de las principales mejoras son las
4. La importancia de la biología molecular para la siguientes:
microbiología.
5. La importancia médica de la microbiología. Capítulo 1. Se han añadido un recuadro con los postulados
6. Las distintas maneras en que los microorganismos de Koch y una nueva sección sobre el futuro de la
interactúan con su entorno y las consecuencias prácticas microbiología.
de estas interacciones. Capítulo 2. Se describen las técnicas de microscopía de
7. Las influencias de los microorganismos y las contraste de interferencia diferencial y microscopía
aplicaciones de la microbiología en la vida cotidiana. confocal.
Capítulo 3. Se aportan más detalles sobre el mecanismo
Estos temas contribuyen a la unificación y refuerzan la de movilidad flagelar.
continuidad del texto. El estudiante llegará a encariñarse con Capítulo 5. Se describen la captación de fosfatos y los
la actividad de los microbiólogos y su repercusión en la transportadores ABC.
sociedad.
Prefacio XXI

Capítulo 6. Contiene información nueva sobre las gases atmosféricos sobre las plantas y el suelo. Existe
proteínas de la inanición, la limitación del crecimiento una sección nueva sobre la biosfera del subsuelo.
por factores ambientales, los procariotas viables pero Capítulo 31. El capítulo se ha reorganizado y describe la
no cultivables y la autoinducción (quorum sensing). microbiota normal y la resistencia inespecífica. Se han
Capítulo 8. Se han combinado las descripciones de incluido descripciones de la resistencia del huésped, y
regulación metabólica y control de la actividad de las células, tejidos y órganos que componen el
enzimática con la introducción a la energía y a las sistema inmunitario, así como una introducción a las
enzimas. vías del complemento alternativa y de la lectina. Se
Capítulo 9. Se ha reescrito la descripción general del presenta también un resumen de las propiedades y
metabolismo para facilitar su comprensión, y se han funciones de las citoquinas.
actualizado y ampliado las secciones sobre transporte de Capítulo 32. Se han traído a este capítulo todos los
electrones, fosforilación oxidativa y respiración aspectos de la inmunidad específica en aras de la
anaerobia. claridad y la coherencia. El capítulo contiene una
Capítulo 11. Este capítulo se centra en la estructura de los visión general de la inmunidad específica, una
ácidos nucleicos y de los genes, las mutaciones y la discusión sobre antígenos y anticuerpos y la acción de
reparación del DNA. Se ha añadido información nueva estos últimos, la biología de las células T y de las
sobre metilación del DNA. células B, la vía clásica del complemento y una sección
Capítulo 12. Se ha trasladado aquí la información sobre sobre tolerancia inmunitaria adquirida. Finaliza con un
expresión génica (transcripción y síntesis proteica), resumen del papel de los anticuerpos y los linfocitos en
combinada con una extensa discusión sobre la la resistencia.
regulación de la misma. Se han añadido secciones Capítulo 33. Capítulo nuevo sobre inmunología médica
nuevas, sobre sistemas de regulación global y sistemas
que contiene aspectos prácticos directamente
de fosfotransferencia de dos componentes.
relacionados con la salud y la microbiología clínica:
Capítulo 15. Capítulo nuevo que aporta una breve
vacunas e inmunizaciones, trastornos inmunitarios e
introducción a la genómica microbiana, incluyendo
interacciones antígeno-anticuerpo in vitro, que
comentarios sobre secuenciación del genoma,
previamente aparecían dispersos en tres capítulos. La
bioinformática, características generales de los
sección sobre vacunas se ha ampliado notablemente.
genomas microbianos y genómica funcional.
Capítulo 34. Se ha extendido la descripción de la
Capítulo 18. Se ha actualizado la taxonomía de los virus y
se han añadido esquemas de ciclos vitales. patogenicidad microbiana hasta constituir un capítulo
Capítulo 19. Se ha añadido material sobre taxonomía aparte. Se han ampliado o añadido varios temas:
polifásica y los efectos de la transferencia génica regulación de los factores de virulencia bacterianos e
horizontal sobre los árboles filogenéticos. Se ha islas de patogenicidad, mecanismos de acción de
revisado y actualizado la introducción a la segunda exotoxinas y mecanismos microbianos para escapar de
edición del Manual Bergey. las defensas del huésped.
Capítulos 20-24. Se han revisado a fondo los capítulos de Capítulo 37. En el capítulo de epidemiología se ha
estudio de procariotas para adaptarlos a la segunda ampliado la discusión sobre las enfermedades
edición del Manual Bergey. emergentes y se han añadido secciones nuevas sobre
Capítulo 28. Este capítulo, antaño el 40, ha sido reescrito bioterrorismo y los efectos sobre la salud de los viajes
en gran parte para abordar el tema de la simbiosis y las por el mundo.
interacciones microbianas (mutualismo, Capítulos 38-40. Se han actualizado los capítulos
protocooperación, comensalismo, predación, dedicados al estudio de las enfermedades, y las
competición, etc.). Se ha añadido un apartado sobre enfermedades bacterianas se agrupan ahora en un solo
desplazamiento microbiano entre ecosistemas, y se ha capítulo. Se ha añadido información nueva sobre herpes
ampliado la discusión sobre biofilms y tapetes genital, listeriosis, empleo terapéutico de las toxinas de
microbianos. clostridios y otros temas. Se aporta una tabla nueva que
Capítulo 29. El capítulo sobre microorganismos en el describe las enfermedades de transmisión sexual más
medio acuático incluye información nueva sobre temas habituales y su tratamiento.
como los flujos de oxígeno en el agua, el bucle Capítulo 41. La novedades relativas a microbiología de
microbiano, Thiomargarita namibiensis, los alimentos incluyen el empaquetado en atmósfera
microorganismos en agua dulce y estándares para el modificada, las toxinas de las algas, las bacteriocinas
agua corriente potable. como conservantes, la nueva variante de la
Capítulo 30. Trata de los microorganismos sobre suelos enfermedad de Creutzfeldt-Jakob, la intoxicación
de zonas frías y húmedas, suelos de desiertos y suelos alimentaria por alimentos crudos, las nuevas técnicas
geotérmicos hipertermales. Se describen con mayor para el estudio de brotes de enfermedades
extensión los efectos del nitrógeno, el fósforo y los relacionadas con los alimentos y el empleo de
probióticos en la dieta.
XX11 Prefacio

Capítulo 42. Se ha revisado el capítulo sobre metabólicas, junto a un mayor detalle de la taxonomía de
microbiología industrial y biotecnología para incluir los bacterias y virus. Para ayudar al estudiante en el terreno
últimos avances debidos a las nuevas técnicas siempre cambiante de la taxonomía de procariotas, el apén-
moleculares. Se ha añadido una sección sobre dice III ofrece la clasificación de estos seres vivos siguiendo
desarrollo y selección de microorganismos para uso la primera edición del Bergey's Manual ofSystematic Bacte-
industrial. Se han añadido o revisado de forma riology, mientras que el apéndice IV aporta la clasificación
importante temas como la síntesis de productos de de la segunda edición del mismo manual.
aplicación médica, la biodegradación de pesticidas y
otros contaminantes, la adición de microorganismos al
medio ambiente y el empleo de la tecnología de Materia! complementario
micromatrices {microarrays).
El siguiente material didáctico tan sólo está disponible en su
versión inglesa.
Ayudas para el estudiante
Las ayudas pedagógicas para el estudiante son inestimables. Para el estudiante ______________________
La más importante es la precisión, pero si el texto no es
claro, fácil de leer y atractivo, su actualización y su preci- 1. Student Study Guide
sión son gasto inútil porque el estudiante no lo leerá. Los 2. Interactive E-TEXT
estudiantes deben ser capaces de comprender el material que 3. Microbes in Motion
se les presenta, de utilizar eficazmente el texto como instru-
mento de aprendizaje, y de disfrutar con su lectura. 4. Hyperclinic
Con fines de eficacia didáctica, un texto debe presentar 5. Laboratory Exercises in Microbiology
la ciencia microbiológica con claridad. Para ello se ha recu- 6. Microbiology Study Cards
rrido a ciertas ayudas que facilitan las tareas de enseñanza y
aprendizaje. A continuación del Prefacio, la sección especial
dirigida al estudiante revisa los principios de un aprendizaje Para el profesor________________________
eficaz, entre ellos la técnica de estudio SQ4R: estudio (sur-
1. Testing CD
vey), preguntas (question) y las 4 R de lectura (read), repaso
(revise), registro (record) y revisión (review). Las ayudas 2. Transparencies
recogidas en cada capítulo se describen en la sección de 3. Visual Resource Library
Visita guiada. 4. Projection Slides
Además, el texto contiene un glosario, un índice y cinco
5. Customized Laboratory Manual
apéndices. El extenso glosario define los términos más
importantes de cada capítulo e incluye referencias de pagi- 6. PageOut, PageOut Lite y McGraw-Hill Course
nación. La mayor parte de las definiciones no se ha tomado Solutions
directamente del texto, sino que se ha escrito de nuevo para
facilitar la comprensión del estudiante. Para facilitar la con- Recursos en la red ______________________
sulta y el acceso al contenido del texto, la quinta edición está
dotada de un índice detallado y amplio. Los apéndices apor- Prescott 2002 Online Learning Center. Puede visitarse la
tan información extra sobre principios químicos y rutas dirección www.mhhe.com/prescott5

Agradecimientos Susan T. Bagley, Michigan Donald P. Durand, Iowa State


Technological University Dwight University
Los autores desean dar las gracias a los Baker, Yale University R. A. Bender, John Haré, Linfield College
revisores que aportaron sus críticas y University of Michigan Hans P. Robert B. Helling, University of
análisis detallados. Sus sugerencias han Blaschek, University Michigan-Ann Arbor Barbara
servido para mejorar enormemente el of Illinois Bruff Hemmingsen, San Diego
producto final. Dermis Bryant, University of Illinois State University R. D. Hinsdill,
Douglas E. Caldwell, University of University ofWisconsin-
Saskatchewan Arnold L. Madison John G. Holt,
Revisores para la primera y
Demain, Massachusetts Michigan State
la segunda ediciones
Ins ti tute of Technology A. S. University Robert L. Jones,
Richard J. Alperin, Community College Dhaliwal, Loyola University of Colorado State
of Philadelphia Chicago University
Prefacio XX111

Martha M. Kory, University of Akron George N. Bennett, Rice University Michael J. Lemke, Kent State
Robert I. Krasner, Providence Prakash H. Bhuta, Eastern University Lynn O. Lewis,
College Ron W. Leavitt, Washington University James L. Mary Washington
Brigham Young Botsford, New México State College B. T. Lingappa, College
University David Mardon, University ofthe Holy
Eastern Kentucky Alfred E. Brown, Auburn University Cross Vicky McKinley,
University Glendon R. Miller, Mary Burke, Oregon State University Roosevelt
Wichita State David P. Clark, Southern Illinois University Billie Jo
University Richard L. Myers, University William H. Coleman, Mello, Mount Marty
Southwest Missouri University of College James E. Miller,
State University G. A. O'Donovan, Hartford Delaware Valley
North Texas State Donald C. Cox, Miami University College
University Phillip Cunningham, Wayne State David A. Mullin, Tulane University
Pattle P. T. Pun, Wheaton College University Richard P. Penelope J. Padgett, Shippensburg
Ralph J. Rascati, Kennesaw State Cunningham, SUNY at University Richard A. Patrick,
College Albany Summit Editorial
Albert D. Robinson, SUNY-Potsdam James Daly, Parchase College, SUNY Group Bobbie Pettriess,
Ronald Wayne Roncadori, University Frank B. Dazzo, Michigan State Wichita State
of Georgia-Athens Tvan Roth, University Valdis A. Dzelzkalns, University
University of Georgia-Athens Case Western Thomas Punnett, Temple University Jo
Thomas Santoro, SUNY-New Paltz Reserve University Richard J. Anne Quinlivan, Holy Ñames
Ann C. Smith, University of Ellis, Bucknell University Merrill College
Maryland, College Parle Emmett, University of K. J. Reddy, SUNY-Binghamton
David W. Smith, University of Colorado at Denver Linda E. David C. Reff, Middle Georgia
Delaware Paul Smith, Fisher, University of College
University of South Michigan-Dearborn John Jackie S. Reynolds, Richland College
Dakota James F. Steenbergen, San Fitzgerald, University of Georgia Deborah Rochefort, Shepherd College
Diego State Harold F. Foerster, Sam Houston State Alien C. Rogerson, St. Lawrence
University Henry O. Stone, Jr., University University Michael J. San
East Carolina B. G. Foster, Texas A&M University Francisco, Texas Tech
University James E. Struble, North Bernard Frye, University of Texas at University Phillip Scheverman,
Dakota State Arlington Katharine B. Gregg, East Tennessee
University Kathleen Talaro, West Virginia University Michael Shiaris,
Pasadena City Wesleyan College Eileen Gregory, University of
College Thomas M. Terry, The Rollins College Van H. Grosse, Massachusetts at Boston Cari
University of Columbus College- Sillman, Penn State University Ann C.
Connecticut Michael J. Timmons, Georgia Maria A. Smith, University of Maryland David
Moraine Valley Guerrero, Florida W. Smith, University of
Community College John Tudor, International University Robert Delaware Garriet W. Smith,
St. Joseph's University Robert Twarog, Gunsalus, UCLA Barbara B. University of South
University of North Hemmingsen, San Diego Carolina at Aiken John Stolz,
Carolina State University Joan Duquesne University Mary L.
Blake Whitaker, Bates College Henson, Montana State Taylor, Portland State
Osear Will, Augustana College University William G. Hixon, University Thomas M. Terry,
Calvin Young, California State St. Ambrose University of
U niversity-Fullerton University John G. Holt, Connecticut Thomas M.
Michigan State Walker, University of
University Ronald E. Hurlbert, Central Arkansas Patrick M.
Revisores para la tercera y
Washington State Weir, Felician College Jí 11 M.
la cuarta ediciones
University Robert J. Williams, University of
Laurie A. Achenbach, Southern Kearns, University Glamorgan Hernán Witmer,
Illinois University Gary Armour, ofDayton University of Illinois
MacMurray College Russell C. Henry Keil, Brunel University at Chicago Elizabeth D.
Baskett, Germanna Tim Knight, Oachita Baptist Wolfinger, Meredith
Community College University Robert Krasner, College Robert Zdor,
Providence College Andrews University
XXIV Prefacio

Revisores de la Philip Johnson, Grande Prairie Ronald Porter, Pennsylvania State


quinta edición Regional College University Sabine Rech,
Duncan Krause, University of Georgia San José State
Stephen Aley, University of Texas at Diane Lavett, Georgia Institute of University Anna-Louise
El Paso Susan Technology Ed Reysenbach, Portland
Bagley, Michigan Leadbetter, University of State University Thomas
Technological Un iversity Robert Connecticut Donald Lehman, Schmidt, Michigan State
Benoit, Virginia Polytechnic University of University Linda Sherwood,
Institute and State University Delaware Montana State
Dennis Bazylinski, lowa State Mark Maloney, Spelman College University Michele Shuster,
University Richard Bernstein, Maura Meade-Callahan, Allegheny University of
San Francisco College Ruslan Medzhitov, Yale Pittsburgh
State University University Joan Slonczewski, Kenyon College
Paul Blum, University of Nebraska School of Medicine Al Mikell, Daniel Smith, Seattle University
Matthew Buechner, University of University of Mississippi Craig Moyer, Kathleen C. Smith, Emory
Kansas Mary Burke, Western Washington University James Snyder,
Oregon State University University of Louisville
University James Champine, Rita Moyes, Texas A&M University School of Medicine William
Southeast Missouri David Mullin, Tulane University Staddon, Eastern Kentucky
State University John Richard Myers, Southwest Missouri University
Clausz, Carroll College James State University Anthony John Stolz, DuQuesne University
Cooper, University of Newsome, Middle Tennessee Thomas Terry, University of
California at Santa Barbara State University Wade Connecticut James
Daniel DiMaio, Yale University Nichols, Illinois State VandenBosch, Eastern
Leanne Field, University of Texas University Michigan University

La publicación de un libro de texto requiere el esfuerzo de Bergey's Manual, por su ayuda en la preparación de esta
muchas personas además de los autores. Queremos expresar quinta edición. La revisión de la clasificación de procariotas
un agradecimiento especial a la plantilla de editorial y pro- no habría sido posible sin su ayuda. También queremos agra-
ducción de McGraw-Hill, por su excelente trabajo. En parti- decer a Amy Cheng Vollmer su aportación de cuestiones
cular, queremos dar las gracias a Deborah Alien, la editora para reflexionar a cada capítulo. Seguramente enriquecerán
del proyecto, por su orientación, su paciencia, su estímulo y mucho la experiencia de aprendizaje del estudiante. John
su apoyo. La coordinadora de nuestro proyecto, Vicki Krug, Harley recibió una gran ayuda de James Snyder en la sección
supervisó la producción de esta compleja tarea con atención de bioterrorismo. Donald Klein desea agradecer la ayuda de
y detalle encomiables. Liz Rudder, nuestra editora artística, Jeffrey O. Dawson, Frank B. Dazzo, Arnold L. Demain,
trabajó arduamente en la revisión y la mejora de todas las Frank G. Ethridge, Zoila R. Flores Bustamante, Michael P.
ilustraciones de esta edición, tanto de las nuevas como de las Shiaris, Donald B. Tait y Jean K. Whelan.
procedentes de la edición anterior. Beatrice Sussman, revi- Por último, pero en primer lugar por su importancia,
sora de pruebas desde la segunda hasta la cuarta edición, ha queremos dar las gracias a nuestras familias por su paciencia
corregido otra vez aquí nuestros errores y contribuido y su ánimo, especialmente a nuestras mujeres, Linda Pres-
inmensamente a la claridad, la coherencia y la facilidad de cott, Jane Harley y Sandra Klein. A ellas dedicamos este
lectura del texto. libro.
Cada uno de nosotros desea extender su agradecimiento
a aquellas personas que nos ayudaron a nivel individual en la Lansing M. Prescott
marcha del trabajo. Lansing Prescott quiere dar las gracias a John P. Harley Donald
George M. Garrity, editor en jefe de la segunda edición del A. Klein
Las siguientes páginas describen las
herramientas utilizadas a lo largo del texto ■ Las citas introductorias están pensadas para despertar
para facilitar el estudio de la microbiología. el interés del estudiante y ofrecer una perspectiva sobre
El índice del capítulo incluye los epígrafes el contenido del capítulo.
principales con sus secciones y números de
El prefacio del capítulo está compuesto por uno o dos
párrafos breves que brindan una visión general del
contenido del capítulo relacionándolo con el resto del texto.
El prefacio no es un resumen, pero permite al estudiante
situarse en el capítulo desde su comienzo.

página. Facilita al lector la localización rápida de


los temas de interés.

Los conceptos del capítulo resumen de manera En la mayoría de los capítulos se encuentran lecturas en
escueta los conceptos que el estudiante deberá - recuadros que describen aspectos de interés, aunque se
dominar. aparten ligeramente del hilo conductor del capítulo. Entre
estos temas se recogen áreas de investigación puntera,
aplicación práctica de la actividad microbiana, repercusión
en el campo de la medicina, anécdotas históricas y
descripciones de microorganismos extraordinarios.

XXV
XXVI Visita guiada

Las cuestiones para reflexionar contienen


problemas ideados para estimular la capacidad de
razonamiento analítico y de síntesis.

Las preguntas para razonar y repasar, al final de


cada capítulo, plantean dudas reales e interrogantes
conceptuales para ayudar al estudiante en el repaso,
la integración y la aplicación del material contenido
en el capítulo

Los resúmenes de capítulo constituyen una serie


numerada de afirmaciones breves, con el fin de
servir como guía para el estudio más que como Se aportan las lecturas suplementarias para profundizar
resumen detallado del capítulo. En el resumen se en el estudio. En su mayoría se trata de revisiones,
citan tablas y figuras relevantes al punto en monografías y artículos de Scientific American, en lugar de
cuestión. los trabajos de investigación originales. Las publicaciones
que se citan en esas revisiones conducirán al estudiante
Las palabras clave agrupan en una lista al final suficientemente motivado a la fuente original. Se han
de cada capítulo todos los términos resaltados en incluido referencias fechadas hasta principios de 2001.
negrita a lo largo del mismo, para destacar los Estas secciones se organizan por grupos temáticos que se
corresponden con las secciones principales de cada
hechos y conceptos más significativos. Cada ----
capítulo. Con ello, se facilita al estudiante el acceso directo
término se acompaña del número de la página en
a los temas concretos que le interesen.
que aparece por vez primera en el capítulo.
Visita guiada XXVH

Enmarcadas al final de las secciones más


importantes, aparece una serie de preguntas
de revisión que ayudan al estudiante a -----
incorporar la información y los conceptos
principales antes de seguir leyendo.

Los epígrafes numerados identifican los


temas fundamentales y sirven de referencia -
para búsquedas en el texto.

Para los que consulten el material complementario


(disponible sólo en inglés), se aporta en éste una guía por
capítulos, para una correlación rápida con imágenes y texto del
libro.
XXVU1 Visita guiada

Las anotaciones de referencias cruzadas remiten al


estudiante a los temas más difíciles que quizá necesite
repasar para comprender los conceptos recién explicados.
También hacen avanzar o retroceder al estudiante hacia
algún punto de interés o importancia excepcional. ----------
Normalmente se indica una referencia de sección o
paginación para que el estudiante pueda localizar la
información fácilmente.

Se destacan algunos términos en letra negrita y se definen


con claridad la primera vez que se emplean. Estos mismos
términos se recogen en una lista al final del capítulo y en su
mayoría se reúnen en el glosario.

En esta edición se han añadido figuras y tablas nuevas que


resumen la información más compleja en una forma de
presentación concisa.

Todas las referencias a figuras y tablas aparecen en el texto


destacadas en letra negrita para facilitar la correlación entre el
texto y los elementos de apoyo visual.
Uno de los factores que más contribuyen al éxito en la uni- ses es mejor leer de antemano los contenidos correspondien-
versidad, y en la asignatura de microbiología en particular, tes. Es necesaria una gran concentración durante la clase; no
es el empleo de técnicas de estudio correctas. Este texto se basta con sentarse a escuchar en una actitud pasiva. Los
ha organizado para facilitar el estudio más eficaz; pero apuntes que se tomen han de ser legibles, para poder recurrir
incluso el texto con más ayudas didácticas no será útil si a ellos más tarde. Es mejor emplear un formato esquemático
éstas no se emplean de la forma adecuada. Por eso, esta sec- o de párrafos sencillos, y también es útil el empleo de abre-
ción traza el esbozo de algunas habilidades prácticas para viaturas o algún tipo de código taquigráfico, para centrar la
facilitar el estudio de la microbiología y el empleo más pro- atención en lo que se está diciendo, ideas y conceptos prin-
ductivo del libro. Muchos estudiantes ya dominan las técni- cipales y definiciones de términos clave. No es bueno dejar
cas de estudio aquí mencionadas y no les hará falta volver de anotar cosas porque parezcan muy obvias y fáciles de
sobre ellas. Son éstas sugerencias para aquellos que aún no recordar; no siempre se recuerdan. Los diagramas, listas y
conocen enfoques como el de la técnica SQ4R para el estu- términos escritos en la pizarra casi siempre son importantes,
dio de textos. como lo es cualquier cosa que el profesor destaque por su
tono de voz. Cuando algo no se comprende bien, o si se
desea que el profesor profundice en algún aspecto, hay que
Control del tiempo y ambiente de estudio preguntar durante la clase; es muy probable que otros alum-
nos tampoco hayan entendido y simplemente no deseen
A muchos estudiantes les resulta difícil su tarea porque care- mostrar su confusión. Deben revisarse los apuntes lo antes
cen de control del tiempo y de un lugar apropiado para el posible después de acabar la clase, para estar seguros de que
estudio. El rendimiento en una determinada asignatura están completos y son inteligibles. Se consultará el libro
puede no ser óptimo si no se le dedica el tiempo suficiente cuando los apuntes planteen problemas; será la mejor manera
aparte de las clases. Para unos resultados óptimos se deben de despejar cualquier duda y de ampliar los puntos princi-
planificar entre cuatro y ocho horas de estudio por semana pales. Al revisar los apuntes para los exámenes, es importan-
para cada asignatura. La semana ha de bastar para todas las te resaltar las ideas clave con un subrayador, como se haría
asignaturas, pero es imprescindible un control del tiempo. con un libro de texto.
Lo ideal es dedicar unos minutos cada mañana a organizar la
planificación del día para el reparto de tareas. Los estudian-
tes que se organizan bien todavía encuentran tiempo de El estudio del texto
sobra para el ocio.
Un segundo factor importante es el lugar adecuado El libro de texto es una herramienta didáctica esencial para
para poder concentrarse en el estudio y aprovechar mejor cualquier asignatura, y debe utilizarse con cuidado y a con-
el tiempo. Conviene encontrar una ubicación tranquila con ciencia. Hace muchos años, Francis P. Robinson desarrolló
una mesa de trabajo e iluminación adecuada. Si es posible, una técnica de estudio muy eficaz llamada SQ3R, del inglés
lo mejor es estudiar siempre en el mismo lugar, y emplear- survey (idea de conjunto), question (preguntas), read (lectu-
lo sólo para el estudio. De este modo, al sentarse en esa ra), recite (repetición en voz alta) y review (repaso). Poste-
mesa, la mente se prepara para el trabajo. Puede elegirse el riormente, L. L. Thistlethwaite y N. K. Snouffer han amplia-
dormitorio, una biblioteca, una sala de estudio o cualquier do la técnica a SQ4R, añadiendo revise (revisión) y record
otro lugar. Lo importante es que la zona esté libre de dis- (registro) y eliminando recite; pasamos a describir aquí este
tracciones, incluyendo esos amigos que se dejan caer para método más moderno:
hacer una visita. El mejor resultado se obtiene cuando el
tiempo asignado para el estudio se dedica realmente a es- 1. Idea de conjunto. Consiste en una mirada rápida al capí
tudiar. tulo para familiarizarse con su contenido. Se deben leer
rápidamente el título, la introducción, el resumen y los
epígrafes principales, registrando mentalmente las ideas
y puntos principales tratados. Si existe alguna lista de
Obtención del máximo provecho conceptos o un sumario del capítulo, debe prestarse espe
de las clases cial atención a los mismos. Esta primera pasada debe
dejar una idea general del contenido y la forma de abor
La asistencia a clase es esencial; así lo demuestran los malos darlo del capítulo en cuestión.
resultados que suelen tener los alumnos que faltan a clase 2. Preguntas. Con cada epígrafe o subepígrafe, se puede
repetidamente. Para obtener el máximo provecho de las cla- plantear una o dos preguntas a las que la sección deberá

XXIX
XXX Al estudiante

dar respuesta. Estas preguntas previas centrarán la lectura ellas deben ser incluidas en el repaso. Se retendrá
de la sección. Es buena idea seguir formulando preguntas mayor información cuantas más veces se repase el
a medida que se va leyendo; es un hábito que promueve material.
la lectura activa y el aprendizaje.
3. Lectura. Se leerá con cuidado cada sección, comprendien
do los conceptos y puntos clave y tratando de responder a La preparación de los exámenes
las preguntas previas. Se pueden subrayar explicaciones o
términos, pero no se debe subrayar indiscriminadamente. Es crucial preparar los exámenes para evitar prisas y agobios
Especial atención merecen los puntos resaltados en negri de última hora. La lectura y la revisión de notas deben com-
ta, pues éstos son los considerados más importantes por el pletarse con bastante antelación para dedicar los días finales
autor. al repaso, no a la comprensión de los conceptos básicos. Las
4. Revisión. Tras la lectura, se revisarán las preguntas para sesiones intensivas inmediatamente antes del examen no
precisar mejor los contenidos de cada sección. Debe tra sustituyen a una preparación diaria y el repaso correspon-
tarse de preguntas conceptuales, que exijan la agrupación diente. Con un buen control del tiempo y llevando la materia
de detalles. Se pueden hacer anotaciones al margen. al día, habrá tiempo de sobra para revisar a fondo y resolver
5. Registro. Si no se ha hecho todavía, se subrayará la infor cualquier cuestión, dejando además cierto margen para el
mación en el texto que responda a esas preguntas, y tam descanso antes del examen y proporcionando confianza al
bién se pueden redactar las respuestas de una manera for estudiante. El resultado en el examen será mejor, pues tanto
mal. Este proceso proporciona material muy útil para la la forma física como la actitud general son decisivos a este
preparación de exámenes. respecto. Unas buenas técnicas de repaso también ayudan a
6. Repaso. Se repasará la información intentando respon retener la información.
der a las preguntas sin mirar el texto. Si el libro aporta Para encontrar ayudas útiles al estudio, puede consultar-
una lista de palabras clave y preguntas de estudio, todas se www.mhhe.com/prescott5 (sólo en lengua inglesa).
PARTE I CAPITULO 1
Introducción a la Historia y ámbito
microbiología
de la microbiología
Capítulo 1
Historia y ámbito de la
microbiología
Capítulo 2
Estudio de la estructura
microbiana: microscopía Louis Pasteur, uno de los
y preparación de muestras más grandes científicos
del siglo xix, mantuvo que
Capítulo 3 «La ciencia no reconoce
fronteras, porque el
Estructura y función de la conocimiento pertenece a
célula procariota la humanidad, y es la
antorcha que ilumina el
mundo».
Capítulo 4
Estructura y función de Conceptos
la célula eucariota índice
1.1 El descubrimiento de ios 1. La microbiología es la ciencia que estudia los
microorganismos 2 organismos que son normalmente demasiado
1.2 La polémica sobre la pequeños para ser vistos a simple vista por el ojo
generación espontánea 2 humano; emplea técnicas —como la esterilización
y el empleo de medios de cultivo—, necesarias
1.3 El papel de los
para aislar y cultivar estos microorganismos.
microorganismos en la
enfermedad 7 2. Los microorganismos no se originan
espontáneamente a partir de materia inanimada,
Reconocimiento de la relación sino a partir de otros microorganismos.
entre microorganismos y
3. Muchas enfermedades se producen por
enfermedades 7 Desarrollo
infecciones virales, bacterianas, fúngicas o
de técnicas para
protozoarias. Se pueden aplicar los postulados de
estudiar los patógenos
Koch para establecer una relación causal entre un
microbianos 8 Estudios
microorganismo sospechoso y una enfermedad
inmunológicos 9
determinada.
1.4 Microbiología industrial y 4. El desarrollo de la microbiología como disciplina
ecología microbiana 11 científica ha dependido de la disponibilidad del
1.5 Miembros del mundo microscopio y de la posibilidad de aislar y
microbiano 12 desarrollar cultivos puros de microorganismos.
1.6 Ámbito y relevancia de la 5. Los microorganismos son responsables de
microbiología 12 muchos de los cambios que se observan en la
1.7 El futuro de la materia orgánica e inorgánica (p. ej., la
microbiología 14 fermentación, y los ciclos del carbono, nitrógeno
y azufre que se producen en la naturaleza).
6. Los microorganismos pueden ser o contener dos
tipos de células fundamentalmente diferentes
—procariotas y eucariotas— y se distribuyen en
varios reinos o dominios.
7. La microbiología es una disciplina amplia, que
afecta en gran medida a otras áreas de la biología
y del bienestar humano general.
ZZZULQFRQPHGLFRVPII\FRP
Capítulo 1 Historia y ámbito de la microbiología

visibles. Por ejemplo, los microbiólogos estudian los mohos


En el campo de la observación, el azar favorece sólo a las mentes
del pan y las algas filamentosas, aunque se pueden ver a sim-
preparadas. .
Louis Pasteur ple vista. Se han descubierto también dos bacterias que son
visibles sin necesidad de microscopio, Thiomargarita y Epu-
lopiscium (p. 47). Debido a la dificultad para delimitar el
o se exagera al destacar la importancia de la micro- campo de la microbiología, Roger Stainer ha sugerido que se
biología. La sociedad humana se beneficia de los defina a esta ciencia no sólo respecto del tamaño de los obje-
microorganismos de muchas formas. Son necesarios para la tos que estudia, sino también teniendo en cuenta las técnicas
elaboración de pan, queso, cerveza, antibióticos, vacunas, empleadas. En general, un microbiólogo aisla primero un
vitaminas, enzimas y otros productos importantes. De hecho, microorganismo específico de una población, y luego lo cul-
la biotecnología moderna se fundamenta en principios
tiva. Por ello, la microbiología emplea técnicas —como la
microbiológicos. Los microorganismos son componentes
esterilización y el empleo de medios de cultivo— que son
indispensables de nuestro ecosistema. Gracias a ellos, se
necesarias para aislar y cultivar con éxito microorganismos.
desarrollan los ciclos del carbono, oxígeno, nitrógeno y
En los apartados que siguen a continuación se describe el
azufre, que tienen lugar en los sistemas terrestres y acuáti-
desarrollo de la microbiología como ciencia. La Tabla 1.1
cos. Son también fuente de nutrientes en la base de todas las
presenta un resumen de algunos de los acontecimientos
cadenas alimentarias y redes ecológicas.
principales de este proceso y su relación con otros sucesos
Ciertamente que los microorganismos han ocasionado
también daños a los seres humanos y alterado la sociedad en históricos.
toda su historia. Las enfermedades microbianas han desem-
peñado sin duda alguna un papel fundamental en aconteci-
mientos históricos, como la caída del Imperio Romano y la 1.1 ES descubrimiento de los microorganismos
conquista del Nuevo Mundo. En 1347, la peste o muerte
negra (véase el Capítulo 39) arrasó Europa con una fuerza Incluso antes de que pudiesen ser vistos los microorganis-
brutal. En 1351, sólo cuatro años después, la peste había mos, algunos investigadores sospecharon de su existencia y
matado a 1/3 de la población (aproximadamente, 25 millo- su responsabilidad en el desarrollo de enfermedades. Entre
nes de personas). A lo largo de los 80 años siguientes, esta otros, el filósofo romano Lucrecio (circa 98-55 a. C.) y el
enfermedad atacó una y otra vez, eliminando prácticamente médico Girolamo Fracastoro (1478-1553) propusieron que
al 75 % de la población europea. Algunos historiadores las enfermedades estaban causadas por criaturas vivas invisi-
piensan que este desastre cambió la cultura europea y prepa- bles. Se cree que las primeras observaciones microscópicas
ró el camino del Renacimiento. En la actualidad, los micro- se realizaron entre 1625 y 1630 en abejas y gorgojos, por el
biólogos y otros científicos continúan luchando contra italiano Francesco Stelluti, utilizando un microscopio, proba-
enfermedades mortales como el SIDA y la malaria. La bio- blemente de Galileo. Sin embargo, la primera persona que
logía del SIDA y su impacto (pp. 950-957). observó y describió con rigor científico microorganismos fue
En este capítulo de introducción se describe el desarro- el microscopista aficionado Antony van Leeuwenhoek
llo histórico de la microbiología y se trata su relación cbn la (1632-1723) de Delft, Holanda (Figura 1.1a). Leeuwen-
medicina y otras áreas de la biología. A continuación, se hoek se ganaba la vida como pañero y mercero (comerciante
estudia la naturaleza del mundo microbiano, para aportar de ropa y accesorios de hombres), pero pasaba la mayor
una idea general de los organismos y agentes que investigan parte de su tiempo libre construyendo microscopios sen-
los microbiólogos. Finalmente, se discuten el ámbito, la cillos, compuestos por lentes de vidrio biconvexas, que
relevancia y el futuro de la microbiología moderna. colocaba entre dos placas de plata (Figura l.lb). Sus mi-
croscopios podían aumentar de 50 a 300 veces el tamaño, y
quizás iluminase las muestras líquidas colocándolas entre
dos piezas de vidrio, enfocándolas con una luz, en ángulo de
La Microbiología se ha definido a menudo como el estudio 45° respecto del plano de la muestra. Esto podría crear una
de organismos y agentes que son demasiado pequeños para forma de iluminación del tipo «campo oscuro» (Capítulo 2)
poder observarlos con el ojo humano a simple vista —esto que permitiría observar claramente a las bacterias. Desde
es, el estudio de los microorganismos—. Como los objetos 1673, Leeuwenhoek remitió cartas a la Roy al Society de
inferiores a un milímetro de diámetro no pueden observarse Londres, describiendo con detalle sus descubrimientos. A
claramente y deben examinarse con microscopio, la micro- partir de estas descripciones, ha quedado claro que pudo ver
biología trata principalmente de organismos de este tamaño o tanto bacterias como protozoos.
inferior. Esta ciencia se ocupa del estudio de virus, bacterias,
muchas algas y hongos, y protozoos (véase la Tabla 34.1).
Sin embargo, otros miembros de estos grupos, particular- 1.2 La polémica de la generación espontánea
mente algunos de algas y hongos, son más grandes y bastante
Desde los tiempos primitivos, la gente creía en la genera-
ción espontánea —esto es, que los organismos vivos podían
1.2 La polémica de la generación espontánea 3

Tabla 1.1 Algunos acontecimientos importantes en el desarrollo de la microbiología


Fecha Acontecimiento histórico microbiológico Otros hechos históricos

1546 Fracastoro propone que las enfermedades están causadas por Copérnico publica su trabajo sobre el sistema solar heliocéntrico
organismos invisibles (1543)
1590-1608 Jansen desarrolla el primer microscopio útil compuesto Shakespeare escribe Hamlet (1600-1601)
1676 Leeuwenhoek descubre «animálculos» Nacen J. S. Bach y Handel (1685) Isaac
1688 Redi publica su trabajo sobre la generación espontánea de Newton publica Principia (1687) Linneo
gusanos publica Systema Naturae (1735) Nace Mozart
(1756)
1765-1776 Spallanzani refuta la teoría de la generación espontánea
1786 Müller describe la primera clasificación de bacterias La Revolución francesa (1789)
1798 Jenner prepara una vacuna contra la viruela humana a partir del Beethoven compone la primera sinfonía (1800)
virus de la viruela bovina Batalla de Waterloo y derrota de Napoleón (1815)
Faraday demuestra el fundamento de un motor eléctrico (1821)
1838-1839 Schwann y Schleiden desarrollan la teoría celular Inglaterra emite el primer sello de correos (1840)
1835-1844 Bassi descubre que una enfermedad del gusano de seda está
causada por un hongo y propone que muchas
enfermedades son de origen microbiano Marx publica Manifiesto comunista (1848)
1847-1850 Semmelweis demuestra que la fiebre puerperal es transmitida Fizeau mide por primera vez la velocidad de la luz (1849)
por los propios médicos e introduce el uso de antisépticos
para evitarla
Clasius define las dos primeras leyes de la termodinámica (1850)
1849 Snow estudia la epidemiología de una epidemia de cólera en Graham diferencia entre coloides y cristaloides
Londres
Melville publica Moby Dick (1851)
Otis instala el primer ascensor seguro (1854)
Bunsen presenta el mechero de gas (1855)
1857 Pasteur demuestra que la fermentación acidoláctica se debe a
un microorganismo
1858 Virchow afirma que todas las células proceden de células Darwin publica El origen de las especies (1859)
1861 Pasteur demuestra que los microorganismos no se originan por Guerra civil norteamericana (1861-1865)
generación espontánea Mendel publica sus experimentos en genética (1865)
1867 Lister publica su trabajo sobre cirugía antiséptica Se hace el tendido transatlántico del telégrafo (1865)
1869 Miescher descubre los ácidos nucleicos Dostoevski publica Crimen y castigo (1866)
1876-1877 Koch demuestra que el carbunco está causado por Bacülus Guerra franco-alemana (1870-1871)
anthracis Bell inventa el teléfono (1876)
Edison fabrica la primera bombilla eléctrica (1879)
1880 Laveran descubre Plasmodium, agente de la malaria
1881 Koch cultiva bacterias sobre gelatina Ivés produce la primera fotografía en color (1881)
Pasteur prepara la vacuna contra el carbunco
1882 Koch descubre el bacilo de la tuberculosis, Mycobacterium Edison construye la primera estación central de generación
tuberculosis eléctrica (1882) Mark Twain publica Las aventuras de
1884 Se publican por primera vez los postulados de Koch Huckleberry Finn (1884)
Metchnikoff describe la fagocitosis
Se desarrolla el autoclave
Se desarrolla la tinción de Gram
1885 Pasteur prepara la vacuna contra la rabia Daimler desarrolla los primeros vehículos de motor (1885-1886)
Escherich descubre Escherichia coli, una bacteria causante de
diarrea
1886 Fraenkel descubre Streptococcus pneumoniae, una causa de
neumonía
1887 Richard Petri diseña la placa de Petri
1887-1890 Winogradsky estudia las bacterias del azufre y las nitrificantes Hertz descubre las ondas de la radio (1888)
1889 Beijerinck aisla bacterias de los nodulos radiculares Eastman fabrica la cámara instantánea (1888)
1890 Von Behring prepara antitoxinas para la difteria y el tétanos
1892 Ivanowsky presenta pruebas de la relación causal entre un virus
y la enfermedad del mosaico del tabaco Se patenta la primera cremallera (1895)
1894 Kitasato y Yersin descubren Yersinia pestis, agente de la peste
1895 Bordet descubre el complemento Roentgen descubre los rayos X (1895)
1896 Van Ermengem descubre Clostridium botulinum, agente del
botulismo
1897 Buchner prepara un extracto de levadura que realiza la Thomson descubre el electrón (1897)
fermentación Ross demuestra que el parásito del paludismo Guerra hispano-norteamericana (1898)
es transportado
por un mosquito
1899 Beijerinck demuestra que una partícula viral causa la
enfermedad del mosaico del tabaco
4 Capítulo 1 Historia y ámbito de la microbiología

Tabla 1.1 Algunos acontecimientos importantes en el desarrollo de la microbiología (Continuación)


Fecha Acontecimiento histórico microbiológico Otros hechos históricos

1900 Reed demuestra que la fiebre amarilla es transmitida por Planck desarrolla la teoría cuántica (1900)
mosquitos
1902 Landsteiner descubre los grupos sanguíneos Se fabrica la primera máquina de escribir eléctrica (1901) Se
1903 Wright y otros investigadores descubren anticuerpos en la fabrica el primer avión eléctrico (1903)
sangre de animales inmunizados
1905 Schaudinn y Hoffmann demuestran que Treponema pallidum Einstein presenta la teoría de la relatividad (1905)
causa la sífilis
1906 Wassermann desarrolla la prueba de fijación del complemento Se fabrica el primer modelo de Ford T (1908) Peary
para detectar la sífilis
1909 Ricketts demuestra que la fiebre manchada de las Montañas y Hensen llegan al Polo Norte (1909)
Rocosas es transmitida por garrapatas
1910 Ehrlich desarrolla un agente quimioterápico frente a la sífilis Rutherford presenta su teoría sobre el átomo (1911)
1911 Rous descubre un virus que produce cáncer en pollos Picasso y cubismo (1912)
Comienza la I Guerra Mundial (1914)
1915-1917 D'Herelle y Twort descubren virus de bacterias Einstein presenta la teoría general sobre la relatividad (1916)
1921 Fleming descubre la lisozima La revolución rusa (1917)
1923 Se publica la primera edición del Manual de Bergey
1928 Griffith descubre la transformación bacteriana Lindberg realiza un vuelo transatlántico (1927)
1929 Fleming descubre la penicilina
1931 Van Niel desmuestra que algunas bacterias fotosintéticas Quiebra de la bolsa en EE.UU. (1929)
utilizan compuestos reducidos como donantes de
electrones sin producción de oxígeno
1933 Ruska desarrolla el primer microscopio electrónico de
transmisión Hitler es nombrado canciller de Alemania (1933)
1935 Stanley cristaliza el virus del mosaico del tabaco
Domagk descubre las sulfamidas
1937 Chatton clasifica los organismos vivos en procariotas y
eucariotas Krebs descubre el ciclo del ácido cítrico (1937)
1941 Beadle y Tatum establecen la hipótesis de «un gen-una enzima» Comienza la II Guerra Mundial (1939)
1944 Avery demuestra que el DNA transporta información durante la
transformación Waksman descubre la
estreptomicina Se introduce el insecticida DDT (1944)

Se lanzan sendas bombas atómicas sobre Hiroshima y Nagasa


1946 Lederberg y Tatum describen la conjugación bacteriana (1945)
Se crea Naciones Unidas (1945) Se
1949 Enders, Weller y Robbins cultivan poliovirus en cultivos de desarrolla el primer ordenador (1946)
tejidos humanos
1950 Lwoff induce bacteriófagos lisogénicos
1952 Hershey y Chase muestran que los bacteriófagos introducen Comienza la guerra de Corea (1950) Estalla la
DNA en las células huésped Zinder y Lederberg descubren primera bomba de hidrógeno (1952) Muere
la transducción generalizada Stalin (1952) Se comercializa el transistor
1953 Se desarrolla el microscopio de contraste de fases (1952)
Medawar descubre la tolerancia inmunitaria El Tribunal Supremo de EE.UU. falla en contra de los colegio
Watson y Crick proponen la estructura de doble hélice del segregados (1954)
DNA
1955 Jacob y Wollman descubren que el factor F es un plásmido
Jeme y Burnet proponen la teoría de la selección clonal Boicot del autobús de Montgomery (1955)
1959 Yalow desarrolla la técnica del radioinmunoensayo La Unión Soviética lanza el Sputnik (1957)
1961 Jacob y Monod proponen el modelo operón de regulación de genes Se comercializa la pildora anticonceptiva (1960)
1961 -1966 Nirenberg, Khorana y otros investigadores dilucidan el código Los primeros seres humanos viajan al espacio (1961)
genético Crisis cubana de los misiles (1962)
1962 Porter propone la estructura básica de la inmunoglobulina G Tratado de prohibición de pruebas nucleares (1963)
Se sintetiza la primera quinolona antimicrobiana (ácido Marcha por los derechos civiles en Washington (1963)
nalidíxico) El presidente Kennedy es asesinado (1963)
Guerra arabe-israelí (1967)
Martin Luther King es asesinado (1968)
1970 Arber y Smith descubren las endonucleasas de restricción Neil Armstrong pasea por la Luna (1969)
Temin y Baltimore descubren la transcriptasa inversa en
retrovirus
1973 Ames desarrolla un ensayo bacteriano para detectar sustancias
mutagénicas y carcinogénicas Tratado de Salt I (1972)
Cohén, Boyer, Chang y Helling uilizan plásmidos como Finaliza la guerra de Vietnam (1973)
vectores para clonar genes en bacterias
1.2 La polémica de la generación espontánea 5

Tabla 1.1 Algunos acontecimientos importantes en el desarrollo de la microbiología (Continuación)


Fecha Acontecimiento histórico microbiológico Otros hechos históricos

1975 Kohler y Milstein desarrollan una técnica para producir El presidente Nixon dimite por el encubrimiento del Watergate
anticuerpos monoclonales (1974)
Se descubre la enfermedad de Lyme
1977 Woese y Fox reconocen a las Archaea como un grupo Tratado del Canal de Panamá (1977)
microbiano distinto
Gilbert y Sanger desarrollan técnicas para la secuenciación del
DNA
1979 Se sintetiza la insulina por técnicas de DNA recombinante Secuestro de rehenes en Irán (1978) Desastre de Three
Mile Island (1979) Se comercializan los ordenadores
1980 Desarrollo del microscopio de barrido con efecto túnel domésticos (1980) Se admite por primera vez la existencia
1982 Se desarrolla una vacuna recombinante contra la hepatitis B del SIDA (1981) Se realiza el primer trasplante de corazón
1982-1983 Descubrimiento de RNA catalítico por Cech y Altman (1982) Meter redefine el desplazamiento de la luz, en
1983-1984 Gallo y Montagnier aislan e identifican el virus de la términos de distancia (1983)
inmunodeficiencia humana
Mullís desarrolla la reacción en cadena de la polimerasa Gorbachov se convierte en secretario general del Partido Comur
1986 Se aprueba el uso de la primera vacuna producida mediante (1985)
ingeniería genética (contra la hepatitis B) en humanos Caída del muro de Berlín (1989) Comienza la guerra del Golfo
contra Irak (1990) Colapso en la Unión Soviética; Boris Yeltsin
1990 Comienzan los primeros análisis en terapia génica humana se alza con el pode
(1991)

1992 Primeros ensayos en humanos mediante terapia antisentido


1995 Se aprueba la vacuna de la varicela para su uso en EE.UU.
Se secuencia el genoma de Haemophilus influenzae
1996 Se secuencia el genoma de Methanococcus jannaschii Se encuentra agua en la Luna (1998)
1997 Descubrimiento de Thiomargarita namihiensis, la bacteria más
grande conocida
El genoma de Echerichia coli es secuenciado
2000 Decubrimiento de que Vibrio cháleme contiene dos cromosomas
independientes

Figura 1.1 Antony van Leeuwenhoék. Leeuwenhoék (1632-1723) y sus


microscopios, (a) Leeuwenhoék con un microscopio, (b) Dibujo de uno de los
microscopios que muestra las lentes, a; aguja de montaje, b; y tornillos para

enfocar, c y d. (c) Dibujos de Leeuwenhoék de bacterias presentes en la boca


humana, (d) Fuente: CE. Dobell, Antony van Leeuwenhoék and his titile animáis
(1932), Russell andRussell, 1958.
6 Capítulo 1 Historia y ámbito de la microbiología

originarse a partir de materia no viva—. Incluso el gran no se había calentado. A pesar de estos experimentos, el
Aristóteles (384-322 a. C.) pensaba que los invertebrados naturalista francés Félix Pouchet afirmó en 1859 que había
más sencillos podían originarse por generación espontánea. llevado a cabo experimentos que demostraban definitiva-
Finalmente, esta opinión fue desafiada por el médico italia- mente que el crecimiento microbiano podía producirse sin la
no Francesco Redi (1626-1697), que llevó a cabo una serie contaminación del aire. Esta declaración provocó que Louis
de experimentos sobre la capacidad de la carne putrefacta Pasteur (1822-1895) zanjase este asunto de una vez por
para producir gusanos espontáneamente. Redi colocó carne todas. Pasteur (Figura 1.2) en primer lugar realizó un expe-
en tres recipientes: uno, descubierto; otro, cubierto con rimento para demostrar la función del algodón para retener
papel; y el tercero, cubierto con una gasa fina para evitar que microorganismos: filtró aire a través de un algodón y obser-
pasasen las moscas. Las moscas sólo podían depositar los vó que habían quedado atrapados partículas semejantes a
huevos en la carne descubierta, y se desarrollaban gusanos. esporas de plantas; si se colocaba un trozo de este algodón
Las otras dos piezas de carne no produjeron gusanos es- en un medio estéril, se producía crecimiento microbiano. A
pontáneamente. En consecuencia, la generación de gusanos continuación, introdujo soluciones de nutrientes en matraces
producida a partir de la carne putrefacta se produjo por la y calentó los cuellos de éstos en una llama para darles distin-
presencia de huevos de moscas y la carne no generó espon- tas formas curvadas, manteniendo el extremo de los cuellos
táneamente gusanos, como se creía hasta entonces. Experi- abiertos a la atmósfera (Figura 1.3). Luego, Pasteur hirvió
mentos similares realizados por otros investigadores refuta- las soluciones durante unos minutos y las dejó enfriar. No se
ron esta teoría en organismos de mayor tamaño.
El descubrimiento de los microorganismos por Leeu-
wenhoek renovó la controversia. Algunos investigadores
propusieron que los microorganismos se desarrollaban por
generación espontánea, aunque los organismos mayores no.
Aquéllos señalaron que a partir de extractos hervidos de
heno o carne, se desarrollaban microorganismos después de
dejarlos reposar durante un tiempo. En 1748, el sacerdote
inglés John Needham (1713-1781) publicó los resultados
de sus experimentos sobre la generación espontánea. Need-
ham hirvió caldo de cordero y luego cerró fuertemente los
matraces. Sin embargo, tras un período de incubación,
muchos de los matraces estaban turbios y contenían micro-
organismos. Este investigador pensó que la materia orgánica
poseía una fuerza vital que podía conferir propiedades
vitales a la materia muerta. Unos años más tarde, el sacer-
dote y naturalista italiano Lazzaro Spallanzani (1729-1799)
mejoró el diseño del experimento de Needham, cerrando
primero herméticamente matraces de vidrio que contenían
agua y semillas. Si estos matraces se introducían en agua
hirviendo durante 3A de hora, no se producía crecimiento
microbiano, siempre que estuviesen cerrados hermética-
mente. Propuso que el aire transportaba gérmenes al medio
de cultivo, pero también sugirió que el aire exterior podría
ser necesario para el crecimiento de los «animales» presen-
tes en el medio. De hecho, los partidarios de la generación
espontánea sostenían que el calentamiento del aire en los
matraces cerrados herméticamente destruía su capacidad
para mantener vida.
Varios investigadores intentaron refutar estos argumen-
tos. Theodore Schwann (1810-1882) dejó que entrase aire
en un matraz que contenía una solución estéril de nutrientes,
después de que el aire pasase por un tubo incandescente. El
matraz permaneció estéril. Posteriormente, Georg Friedrich
Schroder y Theodor von Dusch utilizaron matraces conte-
niendo un medio esterilizado previamente con calor, y deja-
ron que entrase aire al interior de los mismos después de
hacerlo pasar a través de un algodón estéril. En este caso, no
se produjo crecimiento alguno en el medio, aunque el aire Figura 1.2 Louis Pasteur. Pasteur (1822-1895) trabajando en su
laboratorio.
1.3 El papel de los microorganismos en la enfermedad 7

1.3 El papel de los microorganismos


en la enfermedad
La importancia de los microorganismos en el desarrollo de
enfermedades no fue tan inmediatamente obvia para la
población, transcurrieron muchos años hasta que los cientí-
ficos establecieron la conexión entre microorganismos y
enfermedades. Este reconocimiento del papel de los micro-
organismos dependió fundamentalmente del desarrollo de
nuevas técnicas para su estudio. Una vez demostrado que
algunas enfermedades podían ser causadas por infecciones
microbianas, los microbiólogos comenzaron a examinar los
mecanismos mediante los cuales los huéspedes se defienden
frente a los microorganismos, y a preguntarse cómo podían
ser prevenidas las enfermedades. Había nacido el campo de
la inmunología.

Reconocimiento de la relación
entre microorganismos y enfermedades

Aunque Fracastoro y otros investigadores habían sugerido


Figura 1.3 Experimento sobre generación espontánea. Matraces que organismos invisibles ocasionaban las enfermedades, la
con cuello de cisne utilizados por Pasteur para su experimento sobre la mayoría pensaba que éstas se debían a causas como fuerzas
generación espontánea de los microorganismos. Fuente: Aúnales
Sciences Naturelle, 4'1'Series, Vol 16, pp 1-98, Pasteur, L, ¡861, sobrenaturales, vapores venenosos denominados miasmas,
«Mémoire sur les Corpuscules Organisés qui Existent dans y desequilibrios entre los cuatro humores que se creía for-
L'Atmosphére: Examen de la Doctrine des Générations Spontanées». maban parte del cuerpo humano. La idea según la cual un
desequilibrio entre los cuatro humores (sangre, flema, bilis
amarilla [cólera] y bilis negra [melancolía]) era causa de
produjo crecimiento, aunque el contenido de los matraces enfermedad ha sido ampliamente aceptada desde la época
del médico griego Galeno (129-199). El apoyo a la teoría de
había estado expuesto al aire. Pasteur señaló que no se había
los gérmenes como causa de enfermedad comenzó a incre-
producido crecimiento microbiano porque el polvo y los
mentarse a principios del siglo xix. Agostino Bassi (1773-
gérmenes habían quedado atrapados en las paredes de los
cuellos curvados. Si se rompían los cuellos, comenzaba el 1856) reveló por vez primera que un microorganismo podía
crecimiento inmediatamente. Pasteur no resolvió únicamen- causar enfermedad al demostrar en 1835 que una enferme-
dad del gusano de seda estaba causada por una infección
te esta polémica en 1861, sino que también demostró cómo
micótica. También sugirió que muchas otras enfermedades
mantener las soluciones estériles.
El físico inglés John Tyndall (1820-1893) lanzó un podían estar originadas por infecciones microbianas. En
1845, M. J. Berkeley demostró que la roya de la patata de
golpe definitivo a la generación espontánea en 1877, al
demostrar que, efectivamente, el polvo transportaba gérme- Irlanda estaba causada por un hongo. A raíz de los resulta-
dos satisfactorios que Pasteur obtuvo con sus estudios sobre
nes y que si no había polvo, un caldo se mantenía estéril,
la fermentación, el Gobierno francés le encargó que investi-
incluso si estaba expuesto al aire. Durante el desarrollo de
sus estudios, Tyndall obtuvo pruebas de la existencia de for- gase la enfermedad de la pebrina del gusano de seda, que
estaba arruinando a la industria de la seda. Después de
mas de bacterias excepcionalmente resistentes al calor. Tra-
varios años de trabajo, demostró que esta enfermedad estaba
bajando independientemente, el botánico alemán Ferdinand
Cohn (1828-1898) descubrió la existencia de endosporas causada por un parásito protozoario. La enfermedad se con-
troló cultivando gusanos a partir de huevos de mariposas
bacterianas termorresistentes {véase el Capítulo 3).
sanas.
El cirujano inglés Joseph Lister (1827-1912) aportó
1. Describa el campo de la microbiología respecto al tamaño pruebas indirectas de que los microorganismos eran agentes
de los sujetos materiales objeto de estudio, y la naturaleza de enfermedades humanas a través de sus estudios sobre la
de sus técnicas. prevención de infecciones de heridas. Lister, impresionado
2. ¿Cómo solucionaron finalmente Pasteur y Tyndall la por las investigaciones de Pasteur sobre la participación de
polémica sobre la generación espontánea? los microorganismos en la fermentación y la putrefacción,
desarrolló un método de cirugía aséptica, con el fin de evitar
8 Capítulo 1 Historia y ámbito de la microbiología

que los microorganismos penetrasen en las heridas. Los ins- 1. El microorganismo causal debe estar presente en
trumentos se esterilizaban con calor y se trataban los venda- cada caso de enfermedad, pero ausente en los orga
jes quirúrgicos con fenol, que de vez en cuando se empleaba nismos sanos.
igualmente en aerosol para rociar el campo quirúrgico. Este 2. Hay que aislar y desarrollar en cultivo puro al micro
método tuvo resultados muy satisfactorios y transformó la organismo sospechoso.
cirugía tras la publicación de sus resultados en 1867. Al 3. Al inocular el microorganismo aislado en un hués
mismo tiempo, aportaba pruebas indirectas sobre el papel de ped sano, se debe desarrollar la misma enfermedad.
los microorganismos en las enfermedades, pues el fenol, que 4. El mismo microorganismo debe aislarse de nuevo a
destruía las bacterias, evitaba las infecciones de las heridas. partir del huésped enfermo.
Sin embargo, la primera demostración del papel de las
bacterias como agentes causales de enfermedades se debió a Aunque Koch empleó el método general descrito en los
la investigación del carbunco por el médico alemán Robert postulados durante sus investigaciones sobre el carbunco, no
Koch (1843-1910). Koch (Figura 1.4) aplicó los criterios los describió totalmente hasta su publicación sobre la causa
propuestos por su antiguo profesor, Jacob Henle (1809- de la tuberculosis, en 1884. En el Recuadro 1.2 se discuten
1885), para establecer la relación entre Bacillus anthracis y los denominados postulados «moleculares» de Koch.
carbunco, publicando sus resultados en 1876 (el Recuadro La demostración por Koch de que Bacillus anthracis
1.1 describe brevemente el «método científico»). Koch causaba carbunco, fue confirmada independientemente por
inyectó material de animales enfermos a ratones sanos, y Pasteur y sus colaboradores. Éstos observaron que después
éstos contrajeron la enfermedad. Después de transferir el de enterrar los animales muertos, las esporas del carbunco
carbunco por inoculación a través de una serie de 20 ratones, sobrevivían y eran transportadas a la superficie por gusanos
incubó una muestra de bazo, que contenía el bacilo del car- de tierra. Entonces, los animales sanos ingerían las esporas y
bunco, en suero bovino. Los bacilos se multiplicaron y for- enfermaban.
maron esporas. Cuando los bacilos aislados o esporas se
inyectaban a ratones, éstos desarrollaban el carbunco. Estos
criterios de demostración de la relación causal entre un Desarrollo de técnicas para estudiar los
microorganismo y una enfermedad específica se conocen
patógenos microbianos
como postulados de Koch, que pueden resumirse de la
siguiente forma:
Durante las investigaciones de Koch sobre enfermedades
bacterianas, se hizo necesario aislar los agentes patógenos
bacterianos sospechosos. En primer lugar, cultivó bacterias
sobre superficies estériles de patatas cortadas y hervidas.
Esto fue infructuoso porque las bacterias no crecían siempre
bien sobre patatas. Entonces, intentó solidificar los medios
líquidos habituales añadiendo gelatina. En este caso, al ino-
cular bacterias sobre la superficie sólida, cada bacteria indi-
vidual producía colonias separadas. Incluso, la muestra con-
teniendo las bacterias podía mezclarse con gelatina licuada
antes de mezclarse con el medio líquido de cultivo. A pesar
de sus ventajas, la gelatina no era un agente solidificante
ideal porque era digerido por muchas bacterias y se fundía
cuando la temperatura subía por encima de 28 °C. Fannie
Eilshemius, esposa de Walther Hesse, uno de los ayudantes
de Koch (Figura 1.5), propuso una alternativa mejor: usar
agar como agente solidificante —había utilizado este medio
desde hacía algún tiempo para hacer jaleas—. La mayoría
de las bacterias no digerían el agar y éste no fundía hasta
alcanzar la temperatura de 100 °C. Uno de los ayudantes de
Koch, Richard Petri, desarrolló la placa de petri, un reci-
piente para medios de cultivo sólidos. Estos avances permi-
tieron el aislamiento de cultivos puros que contenían sólo un
tipo de bacterias y estimularon directamente el progreso en
todas las áreas de la bacteriología. Aislamiento de bacterias y
técnicas de cultivo puro (pp. 112-115).
Koch desarrolló también medios adecuados para culti-
var bacterias aisladas del cuerpo. Debido a su semejanza con
Figura 1.4 Robert Koch. Koch (1843-1910) examinando una
muestra en su laboratorio. los líquidos corporales, se emplearon extractos de carne y
1.3 El papel de los microorganismos en la enfermedad 9

El método científico
unque los biólogos emplean diferentes enfoques para rea- forma absoluta. Simplemente, a medida que los científicos conti-

A lizar una investigación; los microbiólogos y otros biólo-


gos experimentales utilizan a menudo el enfoque general
denominado método científico. En primer lugar, se
recogen observaciones del proceso poriestudiar, para
núan realizando sus análisis, obtienen mas y más confianza en la
exactitud de las hipótesis, explicando satisfactoriamente los fenó-
menos observados.

posteriormente formular una hipótesis tentativa —suposición


razonada— para explicar dichas observaciones (véase la figura
del recuadro). Este paso es, a menudo, inductivo y creativo
porque no existe una técnica automática y detallada para plantear
la hipótesis. A continuación, se decide la cantidad de información
necesaria para analizar la hipótesis y se recoge esta información
a través de la observación o por medio de experimentos
diseñados rigurosamente. Después de recoger la información, se
decide si la hipótesis queda demostrada o rechazada. Si la
hipótesis no pasa el análisis, se rechaza y se plantea una nueva
explicación o hipótesis. Si la hipótesis original pasa el análisis, se
somete a una investigación más intensa. El procedimiento es, a
menudo, más eficiente si se plantean y analizan hipótesis
alternativas y, posteriormente, se perfecciona la hipótesis final.
Éste enfoque general se suele denominar método hipotético-
deductivo. Se deducen suposiciones a partir de la hipótesis
aceptada en vigor y se analizan. La deducción de las conclusiones
acerca de casos específicos se realiza lógicamente a partir de una
premisa general (razonamiento de «si..., entonces...»). La
inducción es lo opuesto, ya que se alcanza una conclusión general
después de considerar muchos ejemplos específicos. Los
científicos emplean ambos tipos de razonamiento.
Cuando se lleva a cabo un experimento es esencial emplear
un grupo control y otro experimental. El grupo control se trata
exactamente de la misma forma que el experimental, a excepción
de la manipulación experimental que sufre el segundo. De esta
forma, se asegura que cualquier cambio producido en el grupo
experimental se debe a la manipulación realizada en el mismo, y
no por factores que no se han considerado.
Si una hipótesis continúa superando el análisis, se puede
aceptar como teoría válida. Una teoría es un conjunto de proposi-
ciones y conceptos que ofrecen una explicación fiable, sistemáti-
Método hipotético-deductivo. Este método es el más empleado
ca y rigurosa de un aspecto de la naturaleza. Es importante desta-
en la investigación científica.
car que las hipótesis y las teorías nunca se demuestran de una

productos digeridos de proteínas como fuentes nutritivas. El Estudios inmunológicos


resultado fue el desarrollo de caldos y agar nutritivos, me-
dios que se emplean todavía en la actualidad. Durante este período se progresó en el estudio de la resisten-
En 1882, Koch empleó estas técnicas para aislar el bacilo cia de los animales frente a las enfermedades y en el desa-
que causa la tuberculosis. A continuación, siguió una época rrollo de técnicas para proteger a los seres humanos y al
dorada de 30 a 40 años, en Id que se aislaron la mayoría de ganado frente a los agentes patógenos. Pasteur y Roux,
los principales agentes patógenos bacterianos (Tabla 1.1). durante sus estudios sobre el cólera de las gallinas, observa-
El descubrimiento de los virus y su papel en las enfer- ron que incubando sus cultivos durante intervalos largos de
medades fue posible cuando Charles Chamberland (1851- tiempo entre cada transferencia, se atenuaban las bacterias,
1908), uno de los colaboradores de Pasteur, construyó un es decir, perdían su capacidad para causar la enfermedad. Si
filtro bacteriano de porcelana en 1884. El primer virus pató- se inyectaban las aves con estos cultivos atenuados, no sólo
geno que se estudió fue el causante de la enfermedad del permanecían sanas sino que, además, desarrollaban la ca-
mosaico del tabaco (véase el Capítulo 16). Desarrollo de la pacidad de resistir la enfermedad. Pasteur denominó a este
virología (pp. 390-392). cultivo atenuado vacuna [latín vacca, vaca], en honor a
10 Capítulo 1 Historia y ámbito de la microbiología

Postulados moleculares de Koch


unque los criterios que Koch desarrolló para probar una 2. La inactivación del gen o genes asociados con la supues
relación causal entre un microorganismo y una enferme- ta característica relacionada con la virulencia debería
dad determinada ha sido de trascendental importancia en disminuir sustancialmente la virulencia.
microbiología médica, no siempre es posible aplicarlos en el estu- 3. La complementación del gen mutado con el gen de la
dio de enfermedades humanas. Por ejemplo, algunos patógenos cepa salvaje debería restablecer completamente la viru
no pueden multiplicarse en cultivo puro fuera del huésped, otros lencia.
patógenos se multiplican únicamente en el hombre, no siendo 4. El gen debería expresarse en algún momento durante la
posible la experimentación animal. La identificación, aislamiento infección y evolución de la enfermedad.
y clonaje de genes responsables de la virulencia del patógeno 5. Los anticuerpos u otros productos del sistema inmunita-
(véase la p. 857) han hecho posible el desarrollo de un modelo rio dirigidos frente a los productos de dicho gen deberían
molecular de los postulados de Koch que resuelve alguna de estas proteger al huésped.
dificultades. El énfasis se centra en genes de virulencia presentes
en el agente infeccioso a estudio, más que sobre el agente per se. En cualquier caso, esta aproximación molecular no siempre
Los postulados moleculares pueden resumirse como sigue: puede ser aplicada debido a problemas tales como la ausencia de
un sistema animal apropiado de experimentación. Igualmente,
1. La característica relacionada con la virulencia en estudio será problemático utilizar el enfoque molecular cuando el pató-
debería estar más asociada con las cepas patogénicas que geno no está bien caracterizado genéticamente.
con las no patogénicas.

Edward Jenner, porque muchos años antes había empleado nuó incubándolo en un huésped no natural, el conejo. Des-
la vacunación con material de lesiones de viruela bovina pués de que los conejos infectados muriesen, extrajo y secó
para proteger a personas frente a la viruela (sección 16.1). el cerebro y la médula espinal de los animales. Durante el
Poco después, Pasteur y Chamberland desarrollaron una curso de estas investigaciones, le llevaron a su laboratorio a
vacuna atenuada frente al carbunco de dos formas: tratando Joseph Meister, un niño de 9 años a quien había mordido un
los cultivos con dicromato potásico, o mediante incubación perro con rabia. Como la muerte del muchacho estaba ase-
de las bacterias entre 42 y 43 °C. Vacunas e inmunizaciones gurada por la ausencia de tratamiento, Pasteur aceptó intentar
(pp. 823-827). la vacunación. Joseph recibió 13 inyecciones durante 10
Más tarde, Pasteur prepararía una vacuna contra la rabia días con preparados cada vez más virulentos del virus ate-
empleando un método diferente. El agente patógeno se ate- nuado, y sobrevivió.
En agradecimiento a Pasteur por el desarrollo de las
vacunas, países de todo el mundo contribuyeron a la construc-
ción del Instituto Pasteur en París, Francia. Una de las funcio-
nes iniciales de este instituto fue la producción de vacunas.
Después del descubrimiento de que el bacilo de la difte-
ria producía una toxina, Emil von Behring (1854-1917) y
Shibasaburo Kitasato (1852-1931) inyectaron la toxina inac-
tivada a conejos, induciendo así en el animal la producción
de una antitoxina, sustancia presente en la sangre que podía
inactivar la toxina y proteger al animal frente a esta enfer-
medad. A raíz de estas investigaciones se elaboró también
una antitoxina tetánica y ambas se emplearon como trata-
miento en el hombre.
El trabajo realizado con las antitoxinas ofreció pruebas de
que la inmunidad podía desarrollarse a partir de sustancias
solubles en la sangre, que se denominan en la actualidad anti-
cuerpos (inmunidad humoral). También se puso de manifiesto
que las células sanguíneas eran importantes en la inmunidad
(inmunidad celular), cuando Elie Metchnikoff (1845-1916)
descubrió que algunos leucocitos podían atrapar bacterias
Figura 1.5 Fannie Eilshemius (1850-1934) y Walter Hesse (1846-
1911). Fannie Hesse propuso por primera vez utilizar agar en los causantes de enfermedad (Figura 1.6). Llamó a estas células
medios de cultivo. fagocitos, y al proceso fagocitosis [griego phagein, comer].
1.4 Microbiología industrial y ecología microbiana 11

los azúcares a alcohol. Pasteur no estaba de acuerdo con


ellos. Se cree que Pasteur comenzó a interesarse en la fer-
mentación debido a su investigación sobre la actividad óptica
de las moléculas. Consideraba que la fermentación era
llevada a cabo por microorganismos vivos que producían
productos asimétricos, como alcohol amílico, con actividad
óptica. Había una íntima conexión entre asimetría mole-
cular, actividad óptica y vida. En aquel entonces, en 1856,
M. Bigo, un industrial de Lille, Francia, donde Pasteur había
trabajado, le solicitó su ayuda. Se dedicaba a la producción
de etanol a partir de la fermentación de azúcar de remola-
cha, pero la producción de alcohol había disminuido, e
incluso el producto final resultaba ácido. Pasteur observó
que la fermentación había disminuido porque la levadura
responsable normalmente de la formación de alcohol había
sido sustituida por microorganismos productores de ácido
láctico, en lugar de etanol. Al resolver este problema prácti-
co, Pasteur demostró que todas las fermentaciones se debían
a la actividad de levaduras y bacterias específicas y publicó
varios artículos sobre la fermentación, entre 1857 y 1860.
Sus resultados condujeron al estudio de las enfermedades
del vino, y al desarrollo de la pasteurización (véase el Capí-
tulo 7) para conservar el vino durante su almacenamiento.
Las investigaciones de Pasteur sobre la fermentación conti-
nuaron durante casi 20 años. Uno de sus descubrimientos
más importantes fue que algunos microorganismos fermen-
tadores eran anaerobios y podían vivir sólo en ausencia de
oxígeno, mientras que otros podían hacerlo tanto aerobia
como anaeróbicamente. Fermentación (pp. 192-194); El efecto
Figura 1.6 Elie Metchnikoff. Metchnikoff (1845-1916) aparece en del oxígeno sobre los microorganismos (pp. 135-137).
esta fotografía trabajando en su laboratorio. Algunos de los primeros microbiólogos decidieron in-
vestigar el papel ecológico de los microorganismos. En par-
ticular, estudiaron la participación microbiana en los ciclos
del carbono nitrógeno y azufre, que tienen lugar en los
1. Discuta las contribuciones de Lister, Pasteur y Koch a la habitat terrestres y acuáticos. Dos de los pioneros de este
teoría germen-enfermedad, y al tratamiento o la prevención empeño fueron Segei N. Winogradsky (1856-1953) y Mar-
de enfermedades. tinus W. Beijerinck (1851-1931). Ciclos biogeoquímicos
2. ¿Qué otras contribuciones realizó Koch a la microbiología? (pp. 658-667).
3. Describa detalladamente los postulados de Koch, El microbiólogo ruso Sergei N. Winogradsky realizó
los postulados moleculares de Koch, y discuta su muchas contribuciones a la microbiología del suelo. Descu-
importancia. brió que las bacterias del suelo podían oxidar hierro, azufre
4. ¿Cómo contribuyeron von Behring y Metchnikoff al y amoníaco para obtener energía, y que muchas bacterias
desarrollo de la inmunología? podían transformar CO2 en materia orgánica, de forma simi-
lar a los organismos fotosintéticos. Winogradsky aisló tam-
bién del suelo bacterias anaerobias fijadoras de nitrógeno e
investigó la degradación de la celulosa.
1.4 Microbiología industrial y ecología Martinus W. Beijerinck fue uno de los principales mi-
crobiólogos generales que hizo contribuciones fundamenta-
microbiana les a la ecología microbiana y a otras áreas. Aisló, entre
otras: la bacteria aerobia fijadora de nitrógeno Azotobacter;
Aunque Theodore Schwann y otros investigadores habían
una bacteria de los nodulos radiculares capaz también de
afirmado en 1837 que las células de levaduras eran respon-
fijar nitrógeno (denominada posteriormente, Rhizobium);
sables de la conversión de azúcares en alcohol, proceso que
y bacterias sulfatorreductoras. Beijerinck y Winogradsky
denominaron fermentación, los químicos más eminentes de
desarrollaron la técnica de enriquecimiento de cultivos y el
la época consideraban que los microorganismos no partici-
uso de medios selectivos {véase el Capítulo 5), que han teni-
paban en dicho proceso. Estaban convencidos de que la fer-
do una gran importancia en microbiología.
mentación se debía a la inestabilidad química que degradaba
12 Capítulo 1 Historia y ámbito de la microbiología

biólogos han propuesto que los organismos deberían ser


1. Describa brevemente el trabajo de Pasteur sobre las divididos en tres dominios: Bacteria (las verdaderas bacte-
fermentaciones microbianas. rias o eubacterias), Archaea1 y Eucarya (todos los organis-
2. ¿De qué manera Winogradsky y Beijerink contribuyeron al mos eucariotas). Este sistema, que será utilizado en este
estudio de la ecología microbiana? texto, y sus implicaciones, se discuten en el Capítulo 19.

1. Describa y diferencie las células procariotas de las


1.5 Miembros del mundo microbiano eucariotas.
2. Describa brevemente el sistema de los cinco reinos y las
Aunque más adelante se describirán con mayor detalle los principales características de cada uno de ellos.
reinos de los organismos y las diferencias entre células pro-
cariotas y eucariotas, en este capítulo se expone una breve
introducción sobre los organismos que estudia un micro-
biólogo. Comparación entre células procariotas y eucariotas 1.6 Ámbito y relevancia de la microbiología
(pp. 95-96).
Existen fundamentalmente dos clases de células dife- Como destacó el escritor científico Steven Jay Gould, vivi-
rentes. Las células procariotas [griego pro, antes, y karyon, mos en la Era de las Bacterias. Éstas fueron los primeros
nuez, núcleo; organismo con un núcleo primordial] tienen organismos vivos del planeta, viven prácticamente en cual-
una morfología mucho más sencilla que las eucariotas y quier lugar en que la vida es posible, son más numerosas
carecen de un núcleo delimitado por una membrana. Todas que cualquier otra clase de organismo y constituyen proba-
las bacterias son procariotas. Por el contrario, las células blemente el componente mayor de la biomasa terrestre.
eucariotas [griego eu, verdadero, y karyon, nuez, núcleo] Todo el ecosistema depende de sus actividades e influyen en
poseen un núcleo rodeado por una membrana; son más com- la sociedad humana de formas innumerables. Por ello, la
plejas y generalmente mayores que las procariotas. Las
microbiología moderna es una disciplina amplia con muchas
algas, hongos, protozoos, las plantas superiores y los anima-
especialidades diferentes; posee una enorme repercusión
les tienen células eucariotas. Las células procariotas y euca-
sobre la medicina, agronomía, ciencias de los alimentos,
riotas difieren, además, en muchos otros aspectos (véase el
ecología, genética, bioquímica y biología molecular.
Capítulo 4).
Por ejemplo, la microbiología ha sido fundamental para
La primera descripción de los organismos como plantas
el desarrollo de la biología molecular, rama de la biología
o animales era claramente demasiado simple, y durante
que trata con los aspectos físicos y químicos de la materia
muchos años los biólogos clasificaron los organismos en
viva y su función. Los microbiólogos se han involucrado
cinco reinos: Moriera, Protista, Fungí, Animalia y Plantae
con intensidad en los estudios del código genético y los
{véase el Capítulo 19). Los microbiólogos estudian princi-
palmente los miembros de los tres primeros reinos. Aunque mecanismos de síntesis del DNA, RNA y proteínas. Los
los virus no están incluidos en ninguno de estos reinos, los microorganismos se utilizaron en muchos de los primeros
microbiólogos también se ocupan de su estudio. Hongos estudios sobre la regulación de la expresión génica y el con-
(Capítulo 25); Algas (Capítulo 26); Protozoos (Capítulo 27); Intro- trol de la actividad enzimática (véanse los Capítulos 8 y 12).
ducción a los virus (Capítulos 16-18). En la década de 1970 nuevos descubrimientos en microbio-
Durante las últimas décadas se han conseguido gran- logía permitieron el desarrollo de la tecnología del DNA
des avances en tres áreas que afectan significativamente a la recombinante y la ingeniería genética. Mecanismos de la
clasificación microbiana. En primer lugar, se ha aprendido síntesis del DNA, RNA y proteínas (Capítulos 11 y 12); DNA
mucho sobre la estructura de las células microbianas gracias recombinante e ingeniería genética (Capítulo 14).
el uso del microscopio electrónico. En segundo lugar, los Un indicador de la importancia de la microbiología en
microbiólogos han descrito las características bioquímicas y el siglo xx son los Premios Nobel por trabajos en fisiología
físicas de muchos microorganismos diferentes. En tercer y medicina. Aproximadamente 'A de éstos han sido otorga-
lugar, se han comparado las secuencias de ácidos nucleicos dos a científicos que abordaban problemas microbiológicos
y proteínas de diversos organismos. Así, en la actualidad, (véase el interior de la cubierta).
está claro que existen dos grupos bien diferenciados de orga- La microbiología presenta aspectos tanto básicos como
nismos procariotas: Bacteria y Archaea. Además, los protis- aplicados. Muchos microbiólogos están interesados princi-
tas son tan diversos que puede ser necesario dividir el reino palmente en la biología de los propios microorganismos (Fi-
Protista en tres o más reinos. Por ello, muchos taxónomos
han afirmado que el sistema de cinco reinos es demasiado
Aunque se discutirá más adelante en el Capítulo 19, debe ser
simple, por lo que han propuesto varias alternativas {véase mencionado aquí que se han utilizado diversos nombres para el grupo
la sección 19.7). Las diferencias entre Bacteria, Archaea y Archaea, como archaeobacteria y archaebacteria. En este texto utiliza-
los eucariotas parecen ser tan grandes que numerosos micro- remos únicamente el nombre Archaea para mayor claridad y consis-
tencia.
1.6 Ámbito y relevancia de la microbiología 13

gura 1.7). Se pueden especializar en un grupo determinado molecular y taxonomía. Por supuesto, una persona puede
de microorganismos, de forma que pueden denominarse formarse en ambos campos (p. ej., un bacteriólogo que tra-
virólogos (virus), bacteriólogos (bacterias), ficólogos o baje en problemas de taxonomía). Muchos microbiólogos
algólogos (algas), micólogos (hongos), o protozoólogos poseen una orientación más aplicada y trabajan en proble-
(protozoos). Otros están interesados en la morfología micro- mas prácticos, en campos como microbiología médica, ali-
biana o procesos funcionales particulares y trabajan en áreas mentaria y de los productos lácteos, y salud pública (tam-
como la citología, fisiología, ecología, genética, biología bién se realiza investigación básica en estas áreas). Como

Figura 1.7 Prestigiosos microbiólogos modernos. La figura muestra algunos microbiólogos que han realizado contribuciones significativas en
diferentes áreas de la Microbiología, (a) Rita R. Colwell ha estudiado la genética y ecología de bacterias marinas como Vibrio cholerae, y ayudó a
establecer el campo de la biotecnología marina, (b) R. G. E. Murray ha contribuido extraordinariamente al conocimiento de las envolturas celulares
bacteriana y a la taxonomía bacteriana, (c) Stanley Falkow ha impulsado nuestro conocimiento de cómo los patógenos bacterianos producen
enfermedades, (d) Marta Howe ha realizado contribuciones fundamentales al conocimiento del bacteriófago Mu. (e) Frederick C. Neidhart ha
contribuido al desarrollo de la microbiología por su trabajo sobre la regulación de la fisiología y metabolismo de E. coli, y como coautor de libros de
texto especializados. (1) Jean E. Brenchley ha estudiado la regulación del metabolismo del glutamato y la glutamina, contribuyó a la creación del
Instituto Biotecnológico de la Pennsylvania State University, y actualmente está investigando en nuevas aplicaciones industriales de los
microorganismos psicrófilos.
14 Capítulo 1 Historia y ámbito de la microbiología

los distintos campos de la microbiología están relacionados los efectos de la contaminación sobre los microorganismos
entre sí, un microbiólogo especialista tiene que estar fami- es también importante debido al impacto de estos organis-
liarizado con la microbiología básica. Por ejemplo, un mos sobre el ambiente. Así mismo, los ecólogos microbia-
microbiólogo médico debe poseer un buen conocimiento de nos están utilizando microorganismos en el tratamiento bio-
taxonomía, genética, inmunología y fisiología microbianas lógico para reducir los efectos contaminantes.
para identificar y actuar adecuadamente frente al agente Los científicos que trabajan en microbiología de los ali-
patógeno en cuestión. mentos y productos lácteos intentan evitar el deterioro de los
¿Cuáles son las ocupaciones actuales de los microbiólo- alimentos y la transmisión de enfermedades alimentarias,
gos profesionales? Una de las más activas e importantes es como botulismo y salmonelosis (véase el Capítulo 39).
la microbiología médica, que trata del estudio de las enfer- También emplean microorganismos para elaborar productos
medades humanas y animales. Los microbiólogos médicos como queso, yogur, encurtidos y cerveza. En el futuro, los
identifican el agente causal de una enfermedad infecciosa y microorganismos pueden llegar a convertirse en una fuente
planifican medidas para eliminarlo. Con frecuencia, partici- nutritiva importante del ganado y de los seres humanos.
pan en el descubrimiento de nuevos agentes patógenos no En microbiología industrial, los microorganismos se
identificados, como el agente que causa la variante de la en- emplean para elaborar productos como antibióticos, vacunas,
fermedad de Kreutzfeldt-Jacob, el hantavirus o el virus res- esteroides, alcoholes y otros disolventes, vitaminas, aminoá-
ponsable del SIDA. Estos microbiólogos estudian también cidos y enzimas. Los microorganismos pueden incluso libe-
los mecanismos por los que los microorganismos causan rar minerales valiosos a partir de menas de baja calidad.
enfermedad. Enfermedad del legionario (pp. 975-976); síndro- La investigación sobre la biología de los microorganis-
me pulmonar por hantavirus (p. 949); SIDA (pp. 950-956). mos ocupa el tiempo de muchos microbiólogos y tiene tam-
La microbiología en salud pública está íntimamente bién aplicaciones prácticas. Quienes trabajan en fisiología y
relacionada con la medicina. Los microbiólogos especializa- bioquímica microbiana estudian la síntesis de antibióticos y
dos en este campo intentan controlar la extensión de las toxinas, la producción de la energía microbiana, los meca-
enfermedades transmisibles. A menudo, controlan los esta-
nismos por los que los microorganismos sobreviven bajo
blecimientos comunitarios de alimentación y de suministro
condiciones ambientales extremas, la fijación microbiana de
de agua, con objeto de mantenerlos libres de agentes causa-
nitrógeno, los efectos de los agentes químicos y físicos
les de enfermedades infecciosas.
sobre el crecimiento y la supervivencia microbiana, entre
La inmunología trata de los mecanismos por los que el
muchos otros temas.
sistema inmunitario protege al organismo frente a agentes
La genética y la biología molecular tratan de la natura-
patógenos, y de la respuesta de estos agentes infecciosos. Es
leza de la información genética y de los mecanismos por los
uno de los campos científicos que evoluciona más rápida-
mente; por ejemplo, las técnicas para la producción y uso de que regula el desarrollo y la función de las células y los
anticuerpos monoclonales se han desarrollado muy rápida- organismos. El empleo de microorganismos ha sido muy
mente. La inmunología se ocupa también de problemas valioso para comprender la función de los genes. Los gene-
sanitarios prácticos, como la naturaleza y el tratamiento de tistas microbianos desempeñan un papel importante en la
alergias y enfermedades autoinmunitarias, como la artritis microbiología aplicada, al producir nuevas cepas microbia-
reumatoide. Los anticuerpos monoclonales y su empleo (sec- nas que son más eficientes para sintetizar productos útiles.
ción 32.3 y Recuadro 36.2). Las técnicas genéticas se pueden emplear para determinar la
Muchas áreas importantes de la microbiología no tratan capacidad potencialmente cancerígena de sustancias. Más
directamente de salud pública y enfermedad, pero sí contri- recientemente, el campo de la ingeniería genética (véase el
buyen verdaderamente al bienestar humano. La microbiolo- Capítulo 14) ha surgido del trabajo realizado en genética
gía agrícola se ocupa de los efectos de los microorganismos microbiana y biología molecular, y contribuirá enormemen-
sobre la agricultura. Los microbiólogos agrónomos intentan te a la microbiología, a la biología en general, y a la medici-
combatir las enfermedades de las plantas que atacan a culti- na. Los microorganismos modificados genéticamente se
vos de alimentos importantes, trabajan con métodos que emplean para producir hormonas, antibióticos, vacunas y
aumentan la fertilidad del suelo y los rendimientos de los otros productos (véase el Capítulo 42). Así, por ejemplo, se
cultivos, y estudian el papel de los microorganismos que pueden introducir nuevos genes en plantas y animales; por
viven en el tracto digestivo de los rumiantes, como el gana- ejemplo, se pueden introducir genes fijadores del nitrógeno
do vacuno. En la actualidad, existe un enorme interés por en maíz y trigo, de forma que no sea preciso utilizar fertili-
utilizar agentes patógenos bacterianos o virales específicos zantes nitrogenados.
de insectos como sustitutos de pesticidas químicos.
El campo de la ecología microbiana trata con las rela-
ciones entre los microorganismos y sus habitat vivos y no 1.7 El futuro de la microbiología
vivos. Los ecólogos microbianos estudian las contribuciones
de los microorganismos en los ciclos del carbono, nitrógeno Las secciones precedentes han mostrado cómo la microbio-
y azufre, en el suelo y en las aguas naturales. El estudio de logía ha tenido una profunda influencia en la sociedad. ¿Qué
podemos decir sobre su futuro? El escritor sobre temas cien-
1.7 El futuro de la microbiología 15

tíficos Bernard Dixon es muy optimista sobre el futuro de la (b) degradar agentes tóxicos y contaminantes, y (c)
microbiología por dos razones. En primer lugar, la micro- ser utilizados como vectores para el tratamiento de
biología tiene una misión más clara que muchas otras disci- enfermedades y aumentar la productividad agríco-
plinas científicas. En segundo lugar, confía en su valor por la. Así mismo, existe una continua necesidad de
su significación práctica. Dixon apunta que la microbiología proteger los alimentos y cosechas de la agresión
es necesaria tanto para tratar las nuevas y emergentes enfer- microbiana.
medades humanas como para el desarrollo de una tecnología 6. La diversidad microbiana es otra de las áreas que
industrial más eficiente y ambientalmente más amable. requieren considerable investigación. En efecto, se
¿Cuáles son las áreas más importantes para el futuro de estima que menos del 1 % de la población micro
la investigación en microbiología y sus potenciales impactos biana de la Tierra ha sido cultivada in vitro. Se
prácticos? ¿Frente a qué desafíos se tendrán que enfrentar deben desarrollar nuevas técnicas para el aislamien
los microbiólogos? La siguiente lista puede darnos alguna to, e imponer una adecuada clasificación de los
idea sobre lo que nos depara el futuro: microorganismos, que incluya a aquellos que no
pueden ser cultivados en el laboratorio. Aún se
1. Nuevas enfermedades infecciosas están continua requiere mucho trabajo con respecto los microorga
mente surgiendo, y antiguas enfermedades están de nismos que viven en ambientes extremos. El descu
nuevo extendiéndose devastadoramente. SIDA, fie brimiento de nuevos microorganismos podría facili
bres hemorrágicas y tuberculosis son excelentes tar los avances en los procesos industriales y el
ejemplos de nuevas y reemergentes enfermedades control ambiental.
infecciosas. Los microbiólogos tendrán que respon 7. Las comunidades microbianas a menudo viven en
der a estos desafíos, muchos de los cuales aún no forma de biofilms, y estos biofilms tiene una gran
han sido ni siquiera reconocidos. importancia tanto en medicina como en ecología
2. Los microbiólogos deben encontrar nuevas formas microbiana. La investigación sobre los biofilms está
de impedir la extensión de las ya establecidas enfer aún en su infancia; pasarán muchos años hasta que
medades infecciosas. El incremento en la resisten nuestro conocimiento sobre su naturaleza nos per
cia a los antibióticos seguirá siendo un problema, mita utilizarlos de diferentes formas prácticas. En
particularmente la extensión de la multi-resistencia general, las interacciones microbio-microbio no
a fármacos que podría hacer que un patógeno fuera han sido extensamente exploradas.
completamente inmune a los actuales tratamientos 8. Los genomas de numerosos microorganismos ya
médicos. Los microbiólogos tienen que crear nue han sido secuenciados, y muchos más lo serán en
vos fármacos y encontrar nuevos sistemas para dis estos próximos años. Estas secuencias son ideales
minuir o prevenir la extensión de las resistencias. para conocer cómo el genoma está relacionado con
Se deben desarrollar nuevas vacunas frente a enfer la estructura celular, y cuál es el mínimo bagaje
medades como el SIDA. Será necesario el empleo génico necesario para la vida. El análisis del geno
de técnicas en biología molecular y la tecnología ma y su actividad requerirá del progreso en el
del DNA recombinante para resolver estos proble campo de la informática y la bioinformática.
mas. 9. Las futuras investigaciones sobre microorganis
3. Es necesario investigar sobre la asociación entre los mos inusuales nos permitirán un mejor entendi
agentes infecciosos y las enfermedades crónicas miento sobre las interacciones entre los microor
tales como las enfermedades autoinmunitarias y ganismos y el mundo inanimado. Entre otras, este
cardiovasculares. Pudiera ser que algunas de estas conocimiento nos debería capacitar para conseguir
afecciones crónicas se debieran parcialmente a un más efectivo control de la contaminación. Así
infecciones. mismo, resulta ya evidente que los microorganis
4. Nos encontramos únicamente en los albores de mos son compañeros esenciales de otros organis
comprender cómo los patógenos interactúan con mos superiores de una forma simbionte. Un mejor
las células huésped y se desarrollan las enferme conocimiento de esta interrelación simbionte
dades. Igualmente, hay mucho por aprender en puede ayudar a mejorar nuestra apreciación del
cómo el huésped resiste las invasiones de los pató mundo de los seres vivos. De igual forma, permiti
genos. rá mejorar la salud de plantas, animales y del
5. Los microorganismos están adquiriendo una gran hombre.
importancia en la industria y el control ambiental, 10. Debido a su relativa simplicidad, los microorganis-
y debemos aprender cómo utilizarlos en muchas mos son excelentes sujetos para el estudio de varia-
otras nuevas aplicaciones. Por ejemplo, los micro das y fundamentales cuestiones en biología. Por
organismos pueden (a) servir como fuentes de ali ejemplo, cómo las complejas estructuras celulares
mentos de alta calidad y de otros productos útiles, se desarrollan, y cómo las células se comunican
como las enzimas para aplicaciones industriales, entre sí y responden al entorno.
16 Capítulo 1 Historia y ámbito de la microbiología

11. Finalmente, los microbiólogos tendrán el constan- Es extraordinario cómo, en todo el mundo, los
te desafío de determinar las implicaciones de los microbiólogos participan en actividades tan diferentes
nuevos descubrimientos y desarrollos tecnológi- como el estudio de la estructura de los genes, el control
cos. Deberán comunicar y explicar a la sociedad de las enfermedades, y los procesos industriales
este balance entre los aspectos positivos y negati- basados en la extraordinaria capacidad de los
vos de los impactos a largo plazo de sus descubri- microorganismos de degradar y sintetizar moléculas
mientos. orgánicas complejas. La microbiología es una de las
profesiones más satisfactorias porque ofrece a sus
El futuro de la microbiología es brillante. El microbió- facultativos la oportunidad de estar en contacto con el
logo Rene Dubos ha resumido bien el entusiasmo y las pro- resto de las ciencias naturales y, por ello, de contribuir
mesas en la microbiología: de muchas maneras a mejorar la vida humana.

Resumen
1. La microbiología puede definirse en función 7. Koch estableció también las técnicas 13. Las Archaea son tan diferentes que muchos
del tamaño de los organismos y de las necesarias para el crecimiento de las microbiólogos clasifican los organismos en
técnicas empleadas. bacterias en medios sólidos, y para aislar tres dominios: Bacteria, Archaea y Eucarya.
2. Antony van Leeuwenhoek fue la primera agentes patógenos en cultivos puros. 14. A lo largo del siglo xx la microbiología ha
persona que describió los microorganismos. 8. Pasteur desarrolló vacunas contra el carbunco contribuido enormemente al progreso de las
3. Los experimentos realizados por Redi y y la rabia; von Behring y Kitasato prepararon áreas de bioquímica y genética. También, ha
otros investigadores refutaron la teoría de la antitoxinas frente a la difteria y el tétanos. ayudado al crecimiento de la biología
generación espontánea en relación con los 9. Metchnikoff observó que algunos leucocitos molecular.
organismos de mayor tamaño. podían fagocitar y destruir bacterias 15. Existe una gran variedad de campos en
4. La teoría de la generación espontánea patógenas. microbiología y muchos tienen
en relación con los microorganismos fue repercusiones importantes en la sociedad.
10. Pasteur demostró que las fermentaciones Comprenden las disciplinas de mayor
refutada por Spallanzani, Pasteur, Tyndall y estaban causadas por microorganismos y que
otros. aplicación, como microbiología médica,
algunos de éstos podían vivir en ausencia de salud pública, industrial, alimentaria y de los
5. Los argumentos de la teoría «germen- oxígeno. productos lácteos. La ecología, fisiología,
enfermedad» proceden del trabajo de Bassi, 11. El papel de los microorganismos en los bioquímica y genética microbianas son
Pasteur y Koch, entre otros. Lister presentó ciclos del carbono, nitrógeno y azufre fue ejemplos de campos de investigación básica
pruebas indirectas a partir del desarrollo de estudiado por primera vez por Winogradsky en microbiología.
la cirugía antiséptica. y Beijerinck. 16. Los microbiólogos se enfrentarán con
6. Los postulados clásicos y moleculares de 12. Las células procariotas se diferencian de las numerosos y excitantes desafíos tales como
Kocli sirven para demostrar una relación eucariotas en que aquéllas carecen de un el encontrar nuevas formas de tratar las
directa entre un agente patógeno sospechoso núcleo delimitado por una membrana, entre enfermedades, reducir la contaminación, y
y una determinada enfermedad. otras diferencias. alimentar a la población mundial.

Palabras clave
célula eucariota 12 hipótesis 9 postulados de Koch 8
célula procariota 12 microbiología 2 teoría 9
generación espontánea 2 microorganismo 2

Preguntas para razonar y repasar


¿Por qué la creencia en la generación sugerido el uso del agar? ¿Qué es un cultivo 7. Indique todas las actividades o negocios que
espontánea fue un obstáculo para el desarrollo puro? puedan tener lugar en su comunidad que
de la microbiología como disciplina científica? ¿Por qué piensa que los virus no están dependan directamente de la microbiología.
Exponga las contribuciones principales al incluidos en el sistema de cinco reinos o en el 8. Describa con sus propias palabras el método
desarrollo de la microbiología de las siguientes de los tres dominios? científico. ¿En qué se diferencia una teoría de
personas: Leeuwenhoek, Spallanzani, ¿Por qué los microorganismos son tan útiles una hipótesis? ¿Por qué es importante tener
Fracastoro, Pasteur, Tyndall, Cohn, Bassi, para los biólogos como modelos de un grupo control?
Lister, Koch, Chamberland, von Behring, experimentación? 9. ¿Cuáles cree que son las cinco áreas de la
Metchnikoff, Winogradsky y Beijerinck.
¿Cuáles fueron los descubrimientos que investigación más importantes que se deben
¿Habría evolucionado la microbiología más considera más importantes para el desarrollo seguir en microbiología? Discuta las razones
lentamente si Fannie Hesse no hubiese de la microbiología? ¿Por qué? de su elección.
Lecturas suplementarias 17

Cuestiones para reflexionar


1. Considere el impacto de los microorganismos indígenas o importados, sobre esa b. Antes de las vacunaciones frente al
en el curso de la historia. Ésta está llena de actividad. sarampión, parotiditis y varicela, ¿cuáles
ejemplos de citas o circunstancias por las que b. Discuta el efecto que los microorganismos eran los tiempos de incubación y duración
un grupo social pelea contra otro. Si las tuvieron en el devenir del ejemplo. de estas enfermedades infantiles? ¿Qué
examinamos en detalle observamos que c. Discuta si la llegada de los antibióticos, la impacto tendrían dichas enfermedades en
frecuentemente los «perdedores» tuvieron la tecnología de la conservación y las madres con varios hijos en edad escolar
desgracia de estar más expuestos, de ser más preparación de los alimentos, o la si hubieran tenido empleos fuera de casa y
susceptibles, o de ser incapaces de controlar tecnología de la esterilización, pudieran careciendo de un sustancial apoyo para su
un agente infeccioso. Debilitados físicamente haber alterado dichos acontecimientos. cuidado?
o desmoralizados por el curso de una La vacunación frente a varias enfermedades c. ¿Cuáles serían las consecuencias si una
enfermedad devastadora, fueron más infantiles ha contribuido a la incorporación de generación completa de niños (o un grupo
fácilmente vencidos por los «conquistadores» la mujer, particularmente las madres, al de niños en un país) no son vacunados
humanos. mundo laboral. frente a ninguna enfermedad? ¿Cuál sería
a. Escoja un ejemplo de una batalla u a. ¿Está este hecho apoyado por los datos — su predicción en el caso de que estos niños
otra actividad humana, como por comparando la disponibilidad y extensión fueran al colegio o pernoctaran en un
ejemplo la exploración de un nuevo de la vacunación con las estadísticas dormitorio en estrecho contacto con otros
territorio, y determine el impacto de obtenidas en lugares y tiempos diferentes? que sí que habían recibido todas las
los microorganismos, ya sean vacunas recomendadas para la infancia?

Lectoras suplementarias
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CAPITULO 2
Estudio de la
estructura microbiana:
microscopía y preparación
de muestras ■ ■
Clostridium botuünum es
una bacteria con forma
bacilar que forma
endosporas y libera la
toxina botulínica, la
causa de la intoxicación
alimentaria denominada
botulismo. En esta
imagen, obtenida
mediante contraste de
fases, la endospora
aparece como un objeto
oval, brillante, localizado
en el extremo del bacilo;
algunas endosporas se
han liberado de las
células que las formaron.

índice
2.1 Lentes y desviación Colorantes y tinción
de la luz 19 simple 28
2.2 Microscopio óptico 20 Tinción diferencial 29
Microscopio de campo claro 20 Tinción de estructuras
Resolución de un específicas 30
microscopio 21 2.4 Microscopía electrónica 32
Microscopio de campo Microscopio electrónico de
oscuro 23 Microscopio transmisión 32
de contraste Preparación de la muestra 32
de fases 23 Microscopio de Microscopio electrónico
contraste de de barrido 35
interferencia diferencial 26 2.5 Nuevas técnicas en
Microscopio de microscopía 36
fluorescencia 26 Microscopía confocal 36
2.3 Preparación y tinción Microscopía con sonda de
de las muestras 28 barrido 38
Fijación 28
2.1 Lentes y desviación de la luz 19

Conceptos
1. Los microscopios ópticos emplean lentes de vidrio para desviar y enfocar los
rayos de luz, produciendo imágenes aumentadas de objetos pequeños. La
resolución de un microscopio óptico se determina por la apertura numérica
de su sistema de lentes y la longitud de onda de la luz empleada; la
resolución máxima es de aproximadamente 0.2 u.m.
2. Los tipos más comunes de microscopios ópticos son los de campo claro,'
campo oscuro, contraste de fases y de fluorescencia. Cada uno de ellos
ofrece una imagen distintiva y pueden emplearse para observar aspectos
diferentes de la morfología microbiana. Figura 2.1 Desviación de la luz por un prisma. Las líneas
3. Como la mayoría de los microorganismos son incoloros y, por ello, difíciles normales (líneas perpendiculares a la superficie del prisma) se indican
de observar con el microscopio de campo claro, se suelen fijar y teñir antes con puntos discontinuos. Al entrar la luz en el vidrio, se desvía hacia la
de su observación. Se puede emplear una tinción simple o diferencial para primera normal (el ángulo 92 es inferior al 8,). Cuando la luz deja el
aumentar el contraste. Algunas estructuras bacterianas específicas, como vidrio y vuelve al aire, se desvía de la segunda normal (04es superior a
cápsulas, endosporas y flagelos pueden también teñirse selectivamente. 63). Como consecuencia, el prisma desvía la luz que pasa a su través.
4. El microscopio electrónico de transmisión alcanza una gran resolución
(aproximadamente, 0.5 nm), al utilizar haces de electrones de longitud de
onda muy corta, en lugar de luz visible. Aunque los microorganismos
pueden prepararse para su observación de otras formas, se suelen estudiar
cortes finos de muestras incluidas en polímeros y tratadas con metales de un medio a otro, se produce una refracción, es decir, el
pesados para mejorar el contraste.
rayo se desvía en la interfase. El índice de refracción es una
5. Se pueden apreciar características externas con gran detalle por medio del
microscopio electrónico de barrido, que genera una imagen al escanear la medida de la intensidad con que una sustancia disminuye la
superficie de las muestras con un haz fino de electrones, en lugar de velocidad de la luz, de tal forma que la dirección y la magni-
proyectar electrones a través de las mismas.
tud de la desviación se determinan por los índices de refrac-
6. Nuevos métodos de microscopía están mejorando nuestra capacidad para
observar microorganismos y moléculas. Dos ejemplos de estos nuevos
ción de los dos medios que forman la interfase. Cuando la
sistemas son la microscopía confocal de barrido por láser y la microscopía luz pasa del aire al vidrio, un medio con un índice de refrac-
con sonda de barrido. ción superior, disminuye su velocidad y se desvía hacia la
normal, línea perpendicular a la superficie (Figura 2.1). A
medida que la luz deja el vidrio para volver al aire, un medio
I Existen más animales en la suciedad de los dientes de una con un índice de refracción inferior, acelera su velocidad y
boca humana que. hombres en todo un reino. se desvía de la normal. En consecuencia, un prisma desvía la
Antony van Leeuwenhoek. luz porque ésta incide sobre la superficie del vidrio en ángu-
lo, y el vidrio tiene un índice de refracción diferente al del
aire.
Las lentes actúan como un conjunto de prismas que fun-

L a Microbiología se ocupa generalmente de organis-


mos tan pequeños que no los puede ver claramente el
ojo humano a simple vista. Debido a la naturaleza de
esta disciplina, el microscopio tiene una importancia crucial;
cionan como una unidad. Cuando la fuente de luz está aleja-
da, de forma que rayos paralelos de luz inciden sobre la
lente, una lente convexa enfocará estos rayos en un punto
la mayor parte de los conocimientos sobre los microorganis- específico, el punto focal (F, en la Figura 2.2). La distancia
mos se han descubierto con microscopios. Por ello, es fun- entre el centro de la lente y el punto focal se denomina dis-
damental comprender cómo funciona un microscopio y la tancia focal (f, en la Figura 2.2).
forma de preparar las muestras para su examen.
Este capítulo comienza con una descripción detallada
del microscopio estándar de campo claro y continúa con
otros tipos de microscopios ópticos. Seguidamente, se expo-
nen las técnicas de preparación y tinción de las muestras
para su examen con el microscopio óptico. A continuación,
se describen los microscopios de transmisión y de barrido
con haz de electrones, muy utilizados actualmente en inves-
tigación. El capítulo finaliza con una breve introducción a
dos nuevas formas de microsocopía: la microscopía con
sonda de barrido, y la microscopía confocal.

2.1 Lentes y desviación, de la luz


Figura 2.2 Función de una lente. Una lente funciona como un
Para comprender cómo funciona un microscopio óptico, es conjunto de prismas. Los rayos de luz de una fuente distante se
preciso entender la forma en que las lentes desvían y enfo- enfocan en un punto focal F. El punto focal queda a una distancia/,
can la luz para formar imágenes. Cuando un rayo de luz pasa distancia focal, del centro de la lente.
20 Capítulo 2 Estudio de la estructura microbiana: microscopía y preparación de muestras

2.2 Microscopio óptico


Los microbiólogos utilizan diversos microscopios ópticos
en su trabajo; de campo claro, de campo oscuro, de contras-
te de fases y de fluorescencia son los tipos de microscopios
más empleados. Los microscopios modernos son todos
compuestos. Es decir, la imagen aumentada que forma la
lente del objetivo es ampliada por una o más lentes adicio-
nales.

El ojo humano no puede enfocar objetos a una distancia


inferior a 25 cm, aproximadamente (Tabla 2.1). Esta limita- Microscopio de campo claro
ción se puede superar utilizando una lente convexa como
lupa de aumento simple (o microscopio) y manteniéndola El microscopio ordinario se denomina microscopio de
cerca de un objeto. Una lupa de vidrio ofrece una imagen campo claro porque forma una imagen oscura frente a un
clara a una distancia mucho más próxima y el objeto parece fondo claro. Este microscopio está formado por un cuerpo o
mayor. La potencia de una lente está relacionada con la dis- soporte de metal compacto, compuesto por una base y un
tancia focal; una lente con una distancia focal corta aumenta- brazo, donde se fija el resto de las partes (Figura 2.3). En la
rá un objeto más que otra con una distancia focal más larga. base hay una fuente de luz —espejo o iluminador eléctri-
co—. En el brazo hay dos dispositivos giratorios para enfo-
car, de ajuste fino (micrométrico) y ajuste grueso (macromé-
1. Defina refracción, índice de refracción, punto focal y trico), que pueden mover la platina o el portaobjetivos para
distancia focal. enfocar la imagen.
2. Describa la trayectoria de un rayo de luz a través de un La platina está situada hacia la mitad del brazo, donde
prisma o lente. se colocan los portaobjetos, sujetados con pinzas sencillas o
3. ¿Cómo está relacionada la potencia de una lente con la con pinzas sobre la platina mecánica. Una platina mecánica
distancia focal? permite al especialista mover un portaobjetos lentamente
durante su observación, utilizando los dispositivos de con-

Figura 2.3 Microscopio de campo claro. Partes de un microscopio de campo claro moderno. El microscopio descrito es algo más sofisticado que
los de un laboratorio de estudiantes. Por ejemplo, es binocular (tiene dos oculares) y tiene una platina mecánica, un condensador inferior ajustable y
un iluminador incorporado.
2.2 Microscopio óptico 21

trol de la platina. El condensador se monta dentro o por


debajo de la platina, y enfoca un cono de luz sobre el porta-
objetos. Su posición es a menudo fija en microscopios senci-
llos, pero puede ajustarse verticalmente en modelos más
modernos.
La parte curvada superior del brazo soporta el conjunto
del cuerpo del microscopio, al que se ajustan un portaobje-
tivos y uno o más oculares. Los microscopios más moder-
nos tienen un ocular para cada ojo y se denominan binocu-
lares. El cuerpo contiene una serie de espejos y prismas de
manera que la parte que contiene el ocular puede inclinarse Figura 2.5 Apertura numérica en microscopía. La apertura
para conseguir una mejor observación (Figura 2.4). El por- angular 6 es la mitad del ángulo del cono de luz que atraviesa una
taobjetivos sostiene de tres a cinco objetivos con lentes de lente desde una muestra, y la apertura numérica es n sen 9. A la
derecha de la ilustración, la lente tiene una mayor apertura, tanto
diferente poder de aumento, que pueden girarse para colo- angular como numérica; su resolución es superior y la distancia de
car cualquiera de los objetivos en posición de observación. trabajo inferior.
Idealmente, un microscopio debe ser parafocal —es decir,
que mantenga la imagen enfocada aunque se cambie de ob-
jetivo.
La trayectoria de la luz a través de un microscopio de Resolución de un microscopio
campo claro se muestra en la Figura 2.4. La lente del objeti-
vo forma una imagen real aumentada en el microscopio, y la La parte más importante de un microscopio es el objetivo
lente del ocular magnifica aún más esta primera imagen. que debe crear una imagen aumentada, pero además clara.
Cuando se mira por un microscopio, la imagen de la muestra Por ello, la resolución es muy importante. La resolución es
aumentada, denominada imagen virtual, parece que se en- la capacidad de una lente para separar o distinguir entre
cuentra justo detrás de la platina, a aproximadamente 25 cm. objetos pequeños que están muy próximos. La mayor parte
El aumento total se calcula multiplicando los aumentos del de la teoría óptica que fundamenta el diseño de un microsco-
objetivo y del ocular. Por ejemplo, si se utiliza un objetivo pio fue desarrollada por el físico alemán Ernst Abbé en la
de 45x con un ocular de lOx, el aumento total de la muestra década de 1870. La distancia mínima (d) requerida para
será de 450x. visualizar dos objetos como entidades separadas está deter-
minada por la ecuación de Abbé, en la que lambda (A) equi-
vale a la longitud de onda de la luz empleada para iluminar
la muestra, y n sen 9, la apertura numérica (AN).

Al disminuir d, aumenta la resolución y el detalle con el que


se distingue una muestra.
La ecuación anterior indica que la longitud de onda de
la luz empleada es un factor primordial en la resolución. La
longitud de onda debe ser inferior a la distancia entre dos
objetos, de lo contrario no se verán con claridad. En conse-
cuencia, la mayor resolución se obtiene con luz de longitud
de onda menor, la que se corresponde con el extremo azul
del espectro visible (en la gama de 450 a 500 nm). Espectro
electromagnético de radiación (p. 137).
La apertura numérica (n sen 8) resulta más difícil de
comprender. Theta se define como la mitad del ángulo del
cono de la luz que entra en un objetivo (Figura 2.5). La luz
que incide sobre un microorganismo después de atravesar un
condensador tiene forma cónica. Cuando este cono tiene un
ángulo estrecho, formará un vértice muy agudo que no se
extenderá mucho más allá después de alejarse del portaobje-
Figura 2.4 Trayectoria de la luz en un microscopio óptico. Se tos, por lo que no separará adecuadamente las imágenes de
muestran la trayectoria de la luz en un microscopio de campo claro objetos muy próximos entre sí. En este caso, la resolución es
moderno y la localización de la imagen virtual. (Véase también la baja. Por el contrario, si el cono de luz tiene un ángulo muy
Figura 2.23.)
22 Capítulo 2 Estudio de la estructura microbiana: microscopía y preparación de muestras

abierto, en este caso sí que se proyectará a más distancia


después de atravesar la muestra, permitiendo así que incluso
los objetos muy próximos aparezcan claramente separados y
puedan identificarse como independientes. El ángulo del
cono de luz que puede penetrar una lente depende del índice
de refracción (n) del medio en que se encuentra la lente del
objetivo. El índice de refracción del aire es de 1.0. Como sen 9
no puede ser superior a 1 (el máximo de 8 es 90° y el seno
de 90° es 1.0), ninguna lente que funcione en el aire puede
tener una apertura numérica superior a 1.0. La única forma Figura 2.6 Objetivo de inmersión en aceite. Marcha de rayos
de incrementarla por encima de 1.0 y conseguir, con ello, una atravesando un objetivo de inmersión en el aire, y con aceite de
resolución mayor, es aumentando el índice de refracción con inmersión.
aceite de inmersión, un líquido incoloro con el mismo índice
de refracción del vidrio (Tabla 2.2). Si se sustituye el aire
por aceite de inmersión, muchos rayos de luz que no pueden
pasar por el objetivo debido a la reflexión y refracción en las
superficies de su lente, podrán hacerlo (Figura 2.6). Con
ello, se consigue aumentar la apertura numérica y la reso-
lución. Es decir, en el mejor de los casos, un microscopio de campo
La resolución de un microscopio depende de la apertura claro puede distinguir como independientes dos puntos
numérica del condensador y del objetivo. Esto queda separados por aproximadamente 0.2 |Am (el tamaño de una
demostrado por la ecuación que define la resolución total bacteria muy pequeña).
del microscopio. Normalmente, un microscopio está equipado con tres a
cuatro objetivos, con un poder de aumentos entre x4 y x 100
(Tabla 2.2). La distancia de trabajo de un objetivo es la
distancia entre la superficie frontal de la lente y la superficie
del cubreobjetos (si se emplea) o de la muestra, cuando ésta
está bien enfocada. Los objetivos con una apertura numérica
La mayoría de los microscopios tienen un condensador con y un poder de resolución elevados tienen distancias de trabajo
una apertura numérica teórica entre 1.2 y 1.4. Sin embargo, cortas.
la apertura numérica del condensador no será muy superior El ojo humano puede detectar una mota de 0.2 mm de
a 0.9, salvo que se ponga aceite en la parte superior del con- diámetro, en consecuencia, teniendo en cuenta que el
densador hasta alcanzar el portaobjetos. Durante una obser- microscopio óptico puede distinguir objetos con un mínimo
vación sistemática con el microscopio, no se suele poner de 0.2 u.m (objetivo de inmersión, 1.25 de apertura numéri-
aceite en el condensador, quedando limitada la resolución ca), será fácil recordar que el límite eficaz de aumento es de
total, incluso con el objetivo de inmersión en aceite. alrededor 1000 veces la apertura numérica de la lente del
Los límites establecidos para la resolución de un mi- objetivo. La mayoría de los microscopios estándares poseen
croscopio óptico pueden calcularse mediante la ecuación de oculares de x 10 y un límite superior de casi x 1000 con acei-
Abbé. El poder de resolución máximo teórico de un micros- te de inmersión. Se puede emplear un ocular de x 15 con
copio con un objetivo de inmersión en aceite (apertura objetivos buenos para alcanzar un aumento de x 1500. Cual-
numérica de 1.25) y con luz azul-verdosa es de aproximada- quier aumento superior a éste no ofrece una observación
mente 0.2 |j,m. más detallada. Se puede construir un microscopio óptico

Tabla 2.2 Propiedades de los objetivos de un microscopio óptico

Objetivo
Propiedad De rastreo o lupa Bajo aumento Gran aumento De inmersión en aceite

Aumento Apertura numérica x4 0.10 40 xlO 0.25 x40-45 0.55- x 90-100


Distancia focal aproximada (/) mm 17-20 16 mm 4- 0.65 4 mm 1.25-1.4 1.8-
Distancia de trabajo Poder de mm 2.3 um 8 mm 0.9 0.5-0.7 mm 2.0 mm 0.1
resolución aproximado con luz de pm 0.35 um mm 0.18 um
450 nm (azul)
2.2 Microscopio óptico 23

Figura 2.7 Microscopía de campo oscuro. La forma más sencilla de transformar un microscopio en uno de campo oscuro es colocar (a) un
diafragma de campo oscuro debajo de (b) un sistema de lentes-condensador (Abbé). Este condensador produce un cono hueco de luz de forma que
sólo entra en el objetivo la luz que procede de la muestra.

para producir un aumento final de xlO 000, pero sería sim- reados pueden observarse simplemente cambiando la forma
plemente como aumentar un borrón. Solamente el microsco- en que se iluminan. Se enfoca un cono hueco de luz sobre la
pio electrónico ofrece una resolución suficiente para que los muestra, de manera que no penetren en el objetivo rayos no
aumentos sean eficaces. reflejados y no refractados. Solamente la luz que haya sido
Una iluminación adecuada de la muestra es también reflejada o refractada por la muestra puede formar una ima-
muy importante para determinar la resolución. Un microsco- gen (Figura 2.7). De esta forma, el campo que rodea la
pio equipado simplemente con un espejo cóncavo entre la muestra aparecerá negro, mientras que el objeto quedará
fuente de luz y la muestra, iluminaría el portaobjetos con un iluminado intensamente (Figura 2.8a,b); como el fondo es
cono de luz demasiado estrecho y tendría una apertura oscuro, se denomina microscopio de campo oscuro. Mu-
numérica pequeña. La resolución puede mejorarse con un chas estructuras internas pueden verse en microorganismos
condensador bajo la platina y una lente grande receptora de eucariotas grandes (Figura 2.8b). Incluso, este tipo de mi-
luz que proyecte un cono ancho de luz a través del porta- croscopio se emplea para identificar bacterias como Trepo-
objetos y que pase por la lente del objetivo, aumentando con nema pallidum, que presenta un diámetro tan pequeño que
ello la apertura numérica. difícilmente puede visualizarse mediante un microsocopio
de camplo claro (Figura 2.8(7).

Microscopio de campo oscuro


Microscopio de contraste de fases
Las células vivas no pigmentadas no son claramente visibles
con un microscopio de campo claro porque hay poca dife- Otra alternativa al microscopio de campo oscuro para la
rencia entre las células y el agua. Por ello, los microorganis- observación de células vivas no teñidas es el microscopio de
mos a menudo se fijan y tiñen antes de su observación para contraste de fases, que convierte diferencias pequeñas en el
aumentar el contraste y crear variaciones de color entre las índice de refracción y la densidad celular, en variaciones en
estructuras celulares. Las células y organismo vivos no colo- intensidad de luz fácilmente detectables (Figura 2.8c-e).
24 Capítulo 2 Estudio de la estructura microbiana: microscopía y preparación de muestras

Figura 2.8 Ejemplos de microscopía de campo oscuro y de


contraste de fases, (a) Treponema pallidum, espiroqueta que causa la
sífilis; microscopía de campo oscuro (x500). (b) Volvox y Spirogyra;
microscopía de campo oscuro (xl75). Obsérvense las colonias hijas
denlro de la colonia madura de Volvox (centro) y los cloroplastos
espirales de Spirogyra (izquierda y derecha), (c) Spirillum vohitans,
bacteria muy grande con haces de flagelos; microscopía de contraste
fases (x210). (d) Clostridium botulinum, bacteria responsable del
botulismo, con endosporas ovales subterminales; microscopía de
contraste de fases (x600). (e) Paramecium teñido para mostrar un
macronúcleo central grande con un micronúcleo esférico pequeño en un
lado; microscopía de contraste de fases (xlOO).
2.2 Microscopio óptico 25

El condensador de un microscopio de contraste de fases del mismo avanzando 'A de su longitud de onda, las ondas
tiene un diafragma anular, disco opaco con un anillo transpa- difractadas y no difractadas tendrán una diferencia de fase
rente fino, que produce un cono hueco de luz (Figura 2.9). de [h de la longitud de onda y se anularán entre sí cuando se
Al atravesar este cono de luz una célula, algunos rayos se junten, formándose una imagen (Figura 2.10). El fondo,
desvían debido a variaciones en la densidad y el índice de formado por luz no difractada, es claro, mientras que el
refracción de la muestra, retrasándose en casi 'A de longitud objeto no teñido aparece oscuro y bien definido. Este tipo de
de onda. La luz difractada se enfoca para formar una imagen microscopía se denomina microscopía de contraste de fase
del objeto. Los rayos de luz no difractados inciden sobre un oscura. A menudo, se emplean filtros de color para mejorar
anillo de fase en una placa cambiadora de la fase, disco ópti- la imagen (Figura 2.8c,<f).
co especial situado en el objetivo, mientras que los rayos La microscopía de contraste de fases es especialmente
difractados (porque pasaron por la muestra) no son retenidos útil para detectar componentes bacterianos como endosporas
por el anillo, atravesando la placa. Si el anillo de fase se y cuerpos de inclusión que contienen poli-(3-hidroxibutirato,
construye de tal forma que la luz no difractada pase a través polimetafosfato, azufre u otras sustancias (véase el Capítulo 3).

Figura 2.9 Microscopía de contraste de fases. Óptica de un microscopio de contraste de fase oscura.
26 Capítulo 2 Estudio de la estructura microbiana: microscopía y preparación de muestras

Figura 2.10 Producción de contraste en un microscopio de fases. Comportamiento de los rayos de luz difractados y no difractados, en un
microscopio de contraste de fase oscura. Como los rayos de luz tienden a anularse entre sí, la imagen de la muestra será oscura sobre un fondo más
claro.

Estas sustancias son claramente visibles (Figura 2.8d) porque se denomina luz fluorescente. Cualquier luz emitida por
poseen índices de refracción notablemente diferentes al del una molécula excitada tendrá una longitud de onda superior
agua. Los microscopios de contraste de fases se emplean tam- (de energía inferior) a la radiación original absorbida. La luz
bién frecuentemente para estudiar las células eucariotas. fluorescente es emitida muy rápidamente por una molécula
excitada, ya que ésta tiende a recuperar un estado más esta-
ble liberando la energía atrapada.
Microscopio de contraste de interferencia El microscopio de fluorescencia (Figura 2.12) expone
diferencial un espécimen a luz ultravioleta, violeta o azul, y forma una
imagen del objeto con la luz fluorescente emitida. Una lám-
El microscopio de contraste de interferencia diferencial para de arco de vapor de mercurio u otra fuente produce un
(CID) es similar al de contraste de fases en cuanto a que rayo intenso; la transferencia de calor debe limitarse con un
crea una imagen sobre la base de la detección de diferencias filtro especial de infrarrojos. La luz resultante pasa a través
en los índices de refracción y el espesor de la muestra. de un filtro de excitación que transmite sólo la longitud de
Mediante unos prismas se generan dos ondas de luz polari- onda deseada. Un condensador de campo oscuro crea un
zada plana en ángulo recto una respecto de la otra. Una de
ellas pasa a través de la muestra, mientras que la otra sirve
de referencia y pasa por una zona clara. Tras atravesar la
muestra, las dos ondas se combinan e interfieren entre sí for-
mando una imagen. El espécimen, que no estaba previamen-
te teñido, aparece vivamente coloreado en una imagen tridi-
mensiomal (Figura 2.11). Estructuras como las paredes
celulares, endosporas, granulos, vacuolas y el núcleo de
eucariotas aparecen claramente visibles.

Microscopio de fluorescencia

Los microscopios descritos hasta ahora producen una ima-


gen a partir de la luz que pasa a través de un espécimen. Un
objeto puede verse también porque emite realmente luz; ésta
es la base del microscopio de fluorescencia. Cuando algunas Figura 2.11 Microscopía de contraste de interferencia
moléculas absorben energía radiante, quedan excitadas y diferencial. Micrografía del protozoo Amoeba proteus. La imagen
tridimensional muestra un gran detalle; está coloreada artificialmente
posteriormente liberan la energía atrapada en forma de luz, (x!60).
2.2 Microscopio óptico 27

Figura 2.1.2 Microscopía de fluorescencia. Principios de funcionamiento de un microscopio de fluorescencia.

fondo negro frente al cual los objetos fluorescentes brillan. El microscopio de fluorescencia se ha convertido en un
Normalmente, las muestras se tiñen con moléculas colorea- instrumento esencial en microbiología médica y ecología
das, denominadas fluorocromos, que brillan intensamente microbiana. Así, se pueden identificar bacterias patógenas
bajo la exposición de la luz de una longitud de onda especí- (p. ej., Mycobacterium tuberculosis, causa de la tuberculo-
fica, pero algunos microorganismos ya contienen dichas sis) después de marcarlas específicamente con anticuerpos
moléculas, por lo que son autofluorescentes. El microscopio fluorescentes, conjugados con fluorocromos, mediante mé-
forma una imagen de los microorganismos marcados a partir todos de inmunofluorescencia. En investigaciones ecológi-
de la luz que emiten cuando brillan (Figura 2.13). Un filtro cas, la microscopía de fluorescencia se emplea para observar
de barrera colocado después de la lente del objetivo elimina microorganismos teñidos con fluorocromos como naranja
cualquier luz ultravioleta parásita sobrante, que podría dañar de acridina y DAPI (diamino-2-fenilindol, para marcar espe-
los ojos del observador, o la azul y la violeta, que podrían cíficamente el DNA), o con sondas marcadas con un fluoro-
reducir el contraste de la imagen. cromo. Los organismos teñidos de naranja o verde flúores-
28 Capítulo 2 Estudio de la estructura microbiana: microscopía y preparación de muestras

Figura 2.13 Ejemplos de microscopía de fluorescencia, (a) Escherichia coli marcada con anticuerpos fluorescentes (x 600). El material verde se
corresponde con impurezas de la muestra, (b) Paramecium tetraurelia en fase de conjugación; fluorescencia por naranja de acridina (x 125). (c)
Protozoo flagelado Crithidia luciliae marcado con anticuerpos fluorescentes para mostrar el cinetoplasto (x 1000). (d) Mezcla de Micrococcus luteus y
Bacillus cereus (bacilos). Las bacterias vivas emiten fluorescencia verde; las muertas, roja.

cente pueden detectarse en medio de otras partículas. ción las estructuras internas y externas de las células de los
Incluso es posible distinguir bacterias vivas de muertas por microorganismos. Inactiva enzimas que podrían alterar la
el color de la fluorescencia, después de tratarlas con una morfología celular y endurece las estructuras celulares, de
mezcla especial de fluorocromos (Figura 2.13d). En conse- manera que no cambian durante la tinción ni la observación.
cuencia, se pueden observar y contar directamente los Normalmente, durante la fijación se mata al microorganis-
microorganismos en un nicho ecológico relativamente no mo y se fija firmemente al portaobjetos.
modificado. Inmunofluorescencia y microbiología diagnóstica Fundamentalmente, existen dos clases de fijación dife-
(pp. 842, 897-898). rentes. 1) Los bacteriólogos fijan con calor frotis bacterianos
calentando suavemente a la llama una película de bacterias
secada previamente al aire. Este método conserva adecuada-
Enumere las partes de un microscopio óptico y sus mente la morfología general, pero no las estructuras internas
funciones. de la célula. 2) Sin embargo, para proteger la subestructura
Defina los conceptos de resolución, apertura numérica, fina y la morfología de microorganismos delicados de
distancia de trabajo y fluorocromo. mayor tamaño hay que utilizar la fijación química. .Los fija-
¿En qué medida está relacionada la resolución con la
dores químicos penetran en las células y reaccionan con
longitud de onda de la luz, el índice de refracción y la
apertura numérica? ¿Cuáles son las funciones del
componentes celulares, normalmente proteínas y lípidos,
condensador y del aceite de inmersión? para inactivarlos y convertirlos en insolubles e inmóviles.
Describa brevemente cómo funcionan los microscopios de Las mezclas comunes de fijación contienen sustancias como
campo oscuro, de contraste de fases y de fluorescencia, y la etanol, ácido acético, cloruro mercúrico, formaldehído y
clase de imagen que forman cada uno de ellos. Dé un uso glutaraldehído.
específico para cada tipo.

Colorantes y tinción simple


2.3 Preparación y tinción de las muestras Los numerosos tipos de colorantes empleados para teñir
microorganismos poseen dos características en común. 1)
Aunque los microorganismos vivos se pueden examinar Todos poseen grupos cromóforos, grupos con dobles
directamente con un microscopio óptico, a menudo hay que enlaces conjugados que dan el color al colorante. 2) Pue-
fijarlos y teñirlos para aumentar la resolución, acentuar las den unirse a las células mediante enlaces iónicos, covalen-
características morfológicas y conservarlos para su estudio tes o hidrófobo. Por ejemplo, un colorante cargado positi-
en el futuro. vamente se une a estructuras cargadas negativamente de la
célula.
Los colorantes ionizables se pueden dividir en dos cla-
Fijación ses generales, tomando como base la naturaleza de su grupo
cargado.
Las células teñidas que se observan con un microscopio
deben parecerse lo más posible a las células vivas. La fija- 1. Los colorantes básicos —azul de metileno, fucsina
ción es el proceso por el cual se conservan y fijan en su posi- básica, cristal violeta, safranina, verde malaquita—
2.3 Preparación y tinción de las muestras 29

son catiónicos o tienen grupos cargados positiva-


mente (normalmente, alguna forma de nitrógeno
pentavalente) y se comercializan generalmente como
sales de cloruro. Los colorantes básicos se unen a
moléculas cargadas negativamente, como ácidos
nucleicos y muchas proteínas. Como las superficies
de las células bacterianas están cargadas negativa-
mente, estos colorantes se emplean a menudo en
bacteriología.
2. Los colorantes ácidos —eosina, rosa de bengala y
fucsina acida— son amónicos o poseen grupos car-
gados negativamente, como carboxilos (-COOH) e
hidroxilos fenólicos (-OH). Los colorantes ácidos,
debido a su carga negativa, se unen a estructuras
celulares cargadas positivamente.

El pH puede modificar eficazmente la tinción, pues la


naturaleza y el grado de la carga de los componentes celula-
res cambian con el mismo. Por ello, los colorantes amónicos
tiñen mejor en condiciones acidas, en que las proteínas y
muchas otras moléculas poseen una carga positiva; los colo-
rantes básicos son más eficaces a valores de pH más ele-
vados.
Aunque las interacciones iónicas constituyen probable-
mente la forma más común de fijación de los colorantes,
éstos se unen también por medio de enlaces covalentes, o
bien, su acción se debe a sus características de solubilidad.
Por ejemplo, el DNA se puede teñir con el método de Feul-
gen, en el que el reactivo de Schiff se une covalentemente a
los azúcares de desoxirribosa después de un tratamiento con
ácido clorhídrico. El Sudán III (negro Sudán) tiñe selectiva-
mente los lípidos porque es liposoluble, pero no se disuelve
en las partes acuosas de las células.
Los microorganismos se pueden teñir satisfactoriamente
mediante tinción simple, esto es, utilizando sólo un colo-
rante. El valor de esta clase de tinción radica en su simplici-
dad y facilidad de empleo. El frotis, previamente fijado, se Figura 2.14 Método de tinción de Gram. Observe la importancia
cubre con un colorante durante el tiempo adecuado, se lava de la decoloración con etanol-acetona que elimina el cristal violeta de
el exceso de colorante con agua y se seca el portaobjetos. las células Gram negativas, pero no de las Gram positivas. Las primeras
adquieren un color de rosa a rojo tras la última tinción con safranina.
Los colorantes básicos como cristal violeta, azul de metile-
no y carbolfucsina se emplean con frecuencia para determi-
nar el tamaño, la forma y la organización de las bacterias.
ciana), el colorante primario. A continuación, se trata con
una solución yodada que actúa como mordiente. Esto es, el
Tinción diferencial yodo aumenta la interacción entre la célula y el colorante, de
forma que aquélla se tiñe más intensamente. Luego se deco-
Los métodos de tinción diferencial clasifican a las bacte- lora el frotis lavándolo con etanol o acetona. Este paso pro-
rias en grupos diferentes según sus propiedades de tinción. duce el aspecto diferencial de la tinción de Gram; las bacte-
La tinción de Gram, desarrollada por el médico danés rias Gram positivas retienen el cristal violeta, mientras que
Christian Gram en 1884, es el método de tinción más am- las Gram negativas lo pierden y aparecen incoloras. Final-
pliamente utilizado en bacteriología. Se trata de un método mente, el frotis se tiñe de nuevo (tinción de contraste) con
de tinción diferencial porque divide a las bacterias en dos un colorante básico de diferente color al cristal violeta. La
clases —Gram negativas y Gram positivas. Bacterias Gram safranina es el colorante de contraste más común y tiñe las
positivas y Gram negativas (pp. 57-64, 476-477). bacterias Gram negativas de rosa o rojo, dejando a las Gram
En el primer paso de esta tinción (Figura 2.14), el frotis positivas de color violeta (Figura 2.15). Estructura de la
se tiñe con el colorante básico cristal violeta (violeta de gen- pared celular y mecanismo de la tinción de Gram (p. 64).
30 Capítulo 2 Estudio de la estructura microbiana: microscopía y preparación de muestras

Figura 2.15 Ejemplos de tinción de Gram. (a) Clostridium perfringens Gram positivo (x 800). Algunos bacilos se han teñido de rosa en lugar de
morado, como ocurre a menudo cuando envejecen las células Gram positivas, (b) Staphylococcus aureus. Tinción de Gram, visto con un microscopio de
campo claro (x 1000). Los cocos Gram positivos se asocian en racimos semejantes a los de uvas, (c) Escherichia coli, tinción de Gram (x500). (d)
Neisseria gonorrhoeae. Los diplococos se encuentran a menudo dentro de leucocitos (x 1000).

La tinción de ácido-alcochol resistencia es otro Tinción de estructuras específicas


método importante de tinción diferencial. Unas pocas
especies, particularmente las del género Mycobacterium Se han desarrollado numerosos métodos de tinción a lo
{véase el Capítulo 24) no se unen fácilmente a colorantes largo de los años para estudiar estructuras bacterianas espe-
simples y hay que teñirlas con un tratamiento más fuerte: cíficas con el microscopio óptico. Uno de los más sencillos
calentando una mezcla de fucsina básica y fenol (método es la tinción negativa, técnica que revela la presencia de
de Ziehl-Neelsen). Una vez que la fucsina básica ha pene- cápsulas difusas alrededor de muchas bacterias. Se mezclan
trado en la célula con la ayuda del calor y el fenol, las las bacterias con tinta china o colorante de nigrosina y se
células ácido-alcochol resistentes no se decoloran fácil- extienden en una capa fina sobre un portaobjetos. Después
mente con una solución acidoalcohólica, permaneciendo de secarlo al aire, las bacterias aparecen como cuerpos más
de color rojo. Esto se debe al elevado contenido en lípidos claros en medio de un fondo azul oscuro, porque la tinta y
de las paredes de estas células; en particular, los ácidos las partículas de colorante no pueden penetrar ni la célula
micólicos —un grupo de lípidos hidroxílicos de cadena bacteriana ni su cápsula. La extensión de la región de luz
ramificada— parecen ser los responsables de la propiedad está determinada por el tamaño de la cápsula y por la propia
de ácido-alcochol resistencia. Las bacterias no ácido-alco- célula. Apenas se produce modificación de la forma bacte-
chol resistentes se decoloran con la solución acidoalcohó- riana y la célula se puede teñir posteriormente para conse-
lica, por lo que se tiñen de azul con azul de metileno (tin- guir incluso una mejor visibilidad (Figura 2.17). Cápsulas
ción de contraste). Este método se emplea para identificar y «slime» (pp. 65-66).
Mycobacterium tuberculosis y M. leprae (Fjgura 2.16), Las bacterias de los géneros Bacillus y Clostridium
agentes patógenos responsables de la tuberculosis y la {véase el Capítulo 23) forman una estructura de superviven-
lepra, respectivamente. cia en condiciones ambientales desfavorables, excepcional-
2.3 Preparación y tinción de las muestras 31

Figura 2.16 Tinción de ácido-alcochol resistencia. Mycobacterium Figura 2.18 Tinción de endosporas. Bacillus cereus teñidos con el
leprae. Tinción de ácido-alcochol resistencia (x38O). Obsérvense las método de Schaeffer-Fulton. Obsérvense las esporas centrales,
masas de bacterias rojas dentro de las células huésped. elípticas, de azul a verde, dentro de células rosadas (x 1000).

mente resistente durante períodos largos de tiempo. Esta tro, aproximadamente) que sólo se pueden observar direc-
estructura se denomina endospora pues se desarrolla dentro tamente con el microscopio electrónico. Para observarlos
de la célula. La morfología y la localización de las endospo- con el óptico, se aumenta su grosor cubriéndolos con mor-
ras varían con la especie y son a menudo de un gran valor dientes, como ácido tánico y alumbre de potasio, y tiñén-
para la identificación bacteriana; pueden ser esféricas a elípti- dolos con pararosanilina (método de Leifson) o fucsina
cas, con un diámetro menor o superior al de la bacteria básica (método de Gray). Los métodos de tinción de fla-
madre. Se pueden observar con el microscopio de contraste gelos ofrecen una información taxonómica importante
de fases o mediante tinción negativa. Las endosporas no se acerca de su presencia y el modelo de su distribución
tiñen bien con la mayoría de los colorantes, pero una vez teñi- (Figura 2.19; véase también la Figura 3.31). El flagelo
das, resisten intensamente la decoloración. Esta propiedad es bacteriano (pp. 66-70).
la base de la mayoría de los métodos de tinción de endospo-
ras (Figura 2.18). Con el método de Schaeffer-Fulton, las
1. Defina los conceptos de fijación, colorante, cromóforo,
endosporas se tiñen primero calentando las bacterias con colorante básico, colorante ácido, tinción simple, tinción
verde malaquita, luego se lava la preparación con agua para diferencial, mordiente, tinción negativa y tinción de ácido-
eliminar el resto de colorante y se contratiñe con safranina. alcochol resistencia.
Esta técnica revela endosporas verdes en células de color rosa 2. Describa el método de tinción de Gram y cómo funciona.
a rojo. Estructura de las endosporas bacterianas (pp. 72-75). 3. ¿De qué manera se pueden visualizar las cápsulas,
Los flagelos bacterianos son estructuras de locomo- endosporas y flagelos?
ción en forma de hilo, tan delgados (10 a 30 nm de diáme-

Figura 2.19 Ejemplo de tinción de flagelos. Spirillum volutans


Figura 2.17 Tinción negativa. Klebsiella pneumonías teñidas con mechones bipolares de flagelos (x400). (Véase también la
negativamente con tinta china para revelar las cápsulas (x900). Figura 3.31.)
32 Capítulo 2 Estudio de la estructura microbiana: microscopía y preparación de muestras

2.4 Microscopía electrónica


Durante siglos, el microscopio óptico ha sido el instrumento
más importante para estudiar microorganismos. En la actua-
lidad, el microscopio electrónico ha transformado la micro-
biología y ha aumentado enormemente nuestros conoci-
mientos. La naturaleza del microscopio electrónico y la
preparación de las muestras para su observación se descri-
ben brevemente a continuación.

Microscopio electrónico de transmisión


El mejor microscopio óptico tiene un límite de resolución de
aproximadamente 0.2 u.m. Como las bacterias tienen aproxi-
madamente un diámetro de 1 ujn, sólo se pueden ver con el
microscopio óptico la forma general y las características
morfológicas principales. La estructura interna detallada de
microorganismos de mayor tamaño tampoco se puede estu-
diar adecuadamente con este tipo de microscopio. Estas
limitaciones tienen su origen en la naturaleza de las ondas
de luz visible, no en la incapacidad del propio microscopio
óptico, como ya se explicó con anterioridad.
Recordemos que la resolución de un microscopio óptico
aumenta al disminuir la longitud de onda de la luz empleada
para iluminar. Los haces de electrones actúan como una
fuente de radiación y pueden enfocarse al igual que la luz en
un microscopio óptico. Si los electrones iluminan el espéci-
men, la resolución del microscopio aumenta considerable-
mente porque la longitud de onda de la radiación es de apro-
ximadamente 0.005 nm, aproximadamente 100 000 veces Figura 2.20 Límites de la resolución de un microscopio. Las
menor que la luz visible. El microscopio electrónico de dimensiones están indicadas en escala logarítmica (cada división
principal representa un cambio de tamaño de 10 veces). A la derecha de la
transmisión tiene una resolución práctica de aproximada- escala se indican los tamaños aproximados de células, bacterias, virus,
mente 1000 veces superior a la del microscopio óptico; moléculas y átomos.
incluso, con muchos microscopios electrónicos se pueden
distinguir puntos separados por 5 Á (0.5 nm), y el aumento
eficaz es superior a 100 000 x (Figura 2.20). El valor de este
microscopio queda demostrado comparando las fotografías dispersará más electrones (densa a los electrones) y, por
de la Figura 2.21; la morfología microbiana puede estudiar- ello, aparecerá más oscura en la imagen, pues inciden menos
se ahora con un mayor detalle. electrones en ese área de la pantalla. Por el contrario, las
Un microscopio electrónico de transmisión moderno zonas electrotransparentes aparecen más claras. La pantalla
(MET) es complejo y sofisticado (Figura 2.22), pero los puede desplazarse y capturar la imagen sobre película foto-
principios básicos de su funcionamiento pueden compren- gráfica.
derse fácilmente. Un filamento de tungsteno calentado en un
generador de electrones libera un haz de electrones que se
enfoca a continuación sobre la muestra mediante el conden- Preparación de la muestra
sador (Figura 2.23). Como los electrones no pueden atrave-
sar una lente de vidrio, se emplean electroimanes con forma La Tabla 2.3 compara algunas de las características más
de «donut», denominados lentes magnéticas, para enfocar el importantes de los microscopios óptico y electrónico. Las
haz. La columna que contiene las lentes y la muestra deben propiedades distintivas del MET limitan la naturaleza de las
estar en condiciones de vacío para obtener una imagen clara muestras que pueden observarse, y los métodos para su pre-
porque los electrones se desvían al chocar con las moléculas paración. Como los electrones se absorben y dispersan con
de aire. La muestra dispersa los electrones que pasan a su bastante facilidad por la materia sólida, solamente se pueden
través, y este haz se enfoca con lentes magnéticas para for- observar cortes extremadamente finos de muestras microbia-
mar una imagen aumentada y visible sobre una pantalla nas. La muestra debe tener un grosor de 20 a 100 nm, un diá-
fluorescente. Aquella zona de la muestra que sea más densa, metro de alrededor '/so a Vio del de una bacteria típica, y, al
mismo tiempo, debe ser capaz de mantener su estructura
2.4 Microscopía electrónica 33

Figura 2.21 Microscopía óptica y electrónica. Comparación entre la resolución de un microscopio óptico y uno electrónico, (a) Rhodospiríllum
rubrum visto con un microscopio óptico de contraste de fases (x600). (b) Corte fino de R. rubrum visto con un microscopio electrónico de
transmisión (x 100 000). (c) Micrografía del virus influenza humano (x282 000). Las partículas víricas tienen un diámetro aproximado de 100 nm,
mucho más pequeñas que las células bacterianas.

cuando se bombardee con los electrones en alto vacío. Un taraldehído o tetróxido de osmio para estabilizar la estructura
corte tan fino no puede realizarse salvo que la muestra tenga celular, se deshidrata con disolventes orgánicos (p. ej., aceto-
algún tipo de soporte, como el que ofrece un plástico. Des- na o etanol). Es fundamental conseguir una deshidratación
pués de fijar la muestra con sustancias químicas como glu- completa porque la mayoría de los plásticos empleados en la
inclusión no son hidrosolubles. A continuación, se incluye la
muestra en un plástico epoxi líquido, no polimerizado, hasta
que queda totalmente impregnado y el plástico se endurece
para formar un bloque sólido. Los cortes se realizan de este
bloque con una cuchilla de diamante o vidrio, utilizando un
instrumento especial denominado ultramicrotomo.
Al igual que en microscopía óptica, también en el caso
de utilizar MET la muestra debe ser teñida para verla con cla-
ridad. Por tanto, hay que tener en cuenta la capacidad de dis-
persar los electrones por parte de la muestra, y ésta viene
determinada por la densidad (número atómico) de los átomos
de la muestra. Las moléculas biológicas están compuestas de
átomos de número atómico bajo (H, C, N y O) y la disper-
sión electrónica es bastante constante a lo largo de la célula
no teñida. Por ello, las muestras se preparan para su obser-
vación sumergiendo los cortes finos en soluciones de sales
de metales pesados como citrato de plomo y acetato de ura-
nilo. Los iones de plomo y uranio se unen a las estructuras
celulares y las hacen más electrodensas (opacas), aumentado
el contraste. Los átomos de osmio pesado, del fijador tetró-
xido de osmio, también se utilizan para «teñir» las células y
aumentar su contraste. Finalmente, los cortes teñidos se
Figura 2.22 Microscopio electrónico de transmisión. La pistola de montan sobre rejillas finas de cobre y se observan.
electrones se encuentra en la parte superior de la columna central y las Aunque el método anterior de inclusión en plásticos y rea-
lentes magnéticas, dentro de ella. La imagen en la pantalla lización de cortes finos se emplea normalmente para revelar la
fluorescente se puede observar a través de un amplificador situado estructura interna de las células, hay otros medios para prepa-
sobre la ventana de observación. La cámara se encuentra en el
compartimiento de debajo de la pantalla. rar microorganismos y objetos pequeños para su observación.
34 Capítulo 2 Estudio de la estructura microbiana: microscopía y preparación de muestras

Figura 2.23 Funcionamiento de un microscopio electrónico de transmisión. Resumen del funcionamiento de un MET, y comparación entre éste y
uno óptico.

Una técnica muy eficaz es la tinción negativa. Se extiende la metal pesado por evaporación en un ángulo de 45° respecto
muestra formando una película fina con ácido fosfotúngstico o de la horizontal, de manera que el metal incide sobre el
acetato de uranilo. De modo análogo a la tinción negativa para microorganismo sólo desde un lado. El área cubierta con
microscopía óptica, los metales pesados no penetran la mues- metal dispersa electrones y aparece brillante en las fotogra-
tra, sino que crean un fondo oscuro, mientras que la muestra fías, mientras que el lado sin cubrir y la región sombreada
aparece brillante en las fotografías. La tinción negativa es una creada por el objeto aparece oscura (Figura 2.24). La mues-
forma excelente de estudiar la estructura de virus, vesículas de tra aparece como si la luz brillase sobre ésta proyectando
gas bacterianas, y otros materiales similares. Un microorga- una sombra. Esta técnica es particularmente eficaz para
nismo se puede observar también después de sombrearlo estudiar la morfología de virus, flagelos bacterianos y plás-
con metal. Se cubre con una película fina de platino u otro midos {véase el Capítulo 13).

Tabla 2.3 Características de los microscopios óptico y electrónico de transmisión


Características Microscopio óptico Microscopio electrónico

Aumento práctico más elevado Entre 1000 y 1500 Más de 100 000
Resolución máxima" 0.2 um 0.5 nm
Fuente de radiación Luz visible Haz de electrones
Medio de desplazamiento Aire Alto vacío
Tipo de lente Vidrio Electroimán
Fuente de contraste Absorción de luz diferencial Dispersión de electrones
Mecanismo de enfoque Se ajusta la lente mecánicamente Se ajusta la corriente a la lente magnética
Método de modificación de los aumentos Cambio del objetivo u ocular Se ajusta la corriente a la lente magnética
Montaje de la muestra Portaobjetos de vidrio Rejilla de metal (normalmente de cobre)
El límite de resolución del ojo humano es de aproximadamente 0.2 mm.
2.4 Microscopía electrónica 35

El método de criofractura permite visualizar mediante


el MET la presencia y forma de organulos en el interior de
microorganismos. Para ello, las células se congelan
rápidamente en nitrógeno líquido y luego se calientan hasta
-100 °C en una cámara de vacío. A continuación, se fractu-
ran las células congeladas con una cuchilla previamente
enfriada con nitrógeno líquido (-196 °C); estas células son
muy quebradizas y se rompen a lo largo de líneas muy débi-
les, normalmente, por la mitad de las membranas internas
(Figura 2.25). Se deja la muestra en condiciones de alto
vacío durante un minuto o más, de forma que parte del hielo
sublime y se descubra más detalle estructural (a menudo, se
omite este paso). Finalmente, las superficies expuestas se
sombrean y cubren con capas de platino y carbono para for-
mar una réplica de la superficie. Después de eliminar quími-
camente la muestra original, la réplica puede observarse con
el MET, que ofrece una vista tridimensional detallada de la
estructura intracelular (Figura 2.26). Una ventaja de esta
técnica es la minimización del riesgo de formación de arte-
factos, ya que en lugar de someterlas a una fijación química
y deshidratación, las células se congelan rápidamente.

Microscopio electrónico de barrido


(b)

Figura 2.24 Sombreado de una muestra para su observación Los microscopios descritos anteriormente crean una imagen
mediante MET. Algunos ejemplos observados con MET después de a partir de la radiación que ha pasado a través de la muestra.
sombrearlos con uranio, (a) Proteus mirabilis (x42 750). Obsérvense
los flagelos y las fimbriae. (b) Colifago T4 (x72 000).
Recientemente, se ha empleado el microscopio electrónico

Figura 2.25 Técnica de


criofractura. En los pasos (a)
y (b), se fractura una célula
eucariota congelada con una
cuchilla fría. La fractura por
sublimación se describe en (c).
El sombreado con platino y
carbono, y la formación de la
réplica, se muestran en (d) y
(e). Consúltese el texto para
más información.
36 Capítulo 2 Estudio de la estructura microbiana: microscopía y preparación de muestras

sión por éste de centelleos de luz que un fotomultiplicador


transforma en una corriente eléctrica y la amplifica. La
señal se envía a un tubo de rayos catódicos y se produce
una imagen como en la pantalla de televisión, que puede
verse y fotografiarse.
El número de electrones secundarios que alcanzan el
detector depende de la naturaleza de la superficie de la
muestra. Cuando el haz de electrones incide sobre un área
elevada, entra en el detector un número grande de electro-
nes; por el contrario, pocos electrones podrán escapar de
una depresión o «valle» llegando al detector. En consecuen-
cia, las áreas elevadas aparecen más claras en la pantalla y
las depresiones, más oscuras. Se produce una imagen tridi-
mensional realista de la superficie de un microorganismo
con una gran profundidad de campo (Figura 2.28). También
se puede examinar la localización real de los microorganis-
mos in situ, en nichos ecológicos, como la piel humana y la
pared intestinal.

1. ¿Por qué el microscopio electrónico de transmisión tiene


una resolución superior al óptico? Describa en términos
generales las funciones del MET.
2. Describa la preparación de las muestras para su
observación con el MET. ¿Cómo se tiñen normalmente los
Figura 2.26 Ejemplo de criofractura. Preparación por criofractura cortes para aumentar el contraste? ¿Qué son la tinción
de la bacteria Thiobacülus kabobis. Obsérvense las diferencias negativa, el sombreado y la criofractura?
estructurales entre la superficie externa, S; la membrana externa de la
pared celular, ME; membrana citoplasmática, MC; y el citoplasma, C. 3. ¿Cómo funciona el microscopio electrónico de barrido y en
Barra = 0.1 um. qué medida es diferente su función de la del MET? ¿Qué
aspectos morfológicos se estudian con el MEB?

de barrido (MEB) para estudiar superficies de microorga-


nismos con mayor detalle; normalmente, tienen una resolu-
ción de 7 nm o inferior. El MEB se diferencia de otros 2.5 Nuevas técnicas en microscopía
microscopios electrónicos en que produce una imagen a par-
tir de electrones emitidos por la superficie de un objeto, en Microscopía confocal
lugar de a partir de electrones transmitidos.
La preparación de muestras es sencilla y en algunos Un microscopio óptico convencional utiliza una combina-
casos, se puede examinar directamente material secado al ción de diferentes longitudes de onda como fuente lumino-
aire. Sin embargo, con mayor frecuencia, los microorganis- sa capaz de iluminar una amplia zona de la muestra, estas
mos deben primero fijarse, deshidratarse y secarse para con- condiciones le confieren una relativamente gran profundi-
servar la estructura de superficie y evitar el colapso de las dad de campo. Incluso no estando enfocada, aparecerán
células cuando se expongan a alto vacío en el MEB. Antes visibles imágenes de las bacterias en cualquier profundi-
de la observación, se montan las muestras secas y se cubren dad de la muestra, incluyendo células por encima y por
con una capa fina de metal para evitar la formación de carga debajo del plano enfocado (Figura 2.29). Sin embargo, la
eléctrica superficial, formándose una imagen de mayor ca- imagen completa será borrosa, confusa y demasiado aba-
lidad. rrotada.
El MEB realiza un escáner con un estrecho haz de La solución a este problema es el microscopio confocal
electrones en forma de prisma, de adelante hacia atrás de barrido por láser (MCBL) o microscopio confocal. Las
sobre la muestra (Figura 2.27). Cuando el haz incide sobre muestras normalmente se marcan con fluorocromos. Un haz
una zona concreta de la muestra, los átomos de la superfi-
de láser se hace incidir —enfocar— sobre un punto de la
cie emiten una nube tenue de electrones denominados elec-
muestra (Figura 2.30). La luz procedente del punto ilumina-
trones secundarios, que son atrapados por un detector
do es enfocada por la lente de un objetivo en un plano por
especial. Los electrones secundarios que entran en el
encima de éste. Gracias a una apertura situada por encima
detector inciden sobre un centelleador, causando la emi-
del objetivo quedan bloqueados los rayos que provienen de
2.5 Nuevas técnicas en microscopía 37

Figura 2.27 Microscopio electrónico


de transmisión.

aquellas áreas de la muestra que estaban por encima y por mide la iluminación de cada punto para producir una imagen
debajo del plano enfocado. Si el láser realiza un barrido de la sección. Cuando muchas secciones son escanedas, un
sobre un plano de la muestra, se denomina «barrido de haz»; ordenador puede digitalizar las imágenes y combinarlas para
pero si lo que se mueve para enfocar ese plano es el estativo, formar una imagen tridimensional. Incluso esta imagen
se denomina «barrido de estativo». Finalmente, un detector puede ser medida y analizada cuantitativamente.

Figura 2.28 Micrografías de bacterias mediante microscopía electrónica de barrido, (a) Staphylococcus aureus (x32 000). (b) Cristispira,
espiroqueta en el estilo cristalino de la ostra Ostrea virginica. Las fibrillas axiales o flagelos periplásmicos son visibles alrededor del cilindro
protoplásmico (x 6000).
38 Capítulo 2 Estudio de la estructura microbiana: microscopía y preparación de muestras

Figura 2.29 Microscopía confocal de barrido por láser: profundidad de campo y nitidez de la imagen, (a) Obsevación mediante un
microscopio óptico convencional, (b) Imagen mediante microscopía confocal de barrido por láser.

El microscopio confocal mejora la obtención de imáge- trónico de efecto túnel, inventado en 1980, es un ejemplo
nes mediante dos mecanismos diferentes: 1) la iluminación excelente de microscopio con sonda de barrido. Puede
alternativa de zonas muy puntuales reduce las interferencias alcanzar aumentos de 100 millones y permite a los científi-
de la luz dispersada por el resto de la muestra; 2) el efecto cos ver átomos en la superficie de un sólido. Los electrones
bloqueante sobre estos mismos rayos parásitos realizado por que rodean los átomos de superficie se proyectan desde el
la apertura situada por encima del objetivo. De esta forma, la borde de la superficie a una corta distancia. Este microsco-
imagen presenta un excelente contraste y gran resolución, pio tiene una sonda parecida a una aguja con una punta tan
pudiendo observarse planos de 1 |xm o incluso de menor diá- fina que a menudo sólo contiene un átomo. La sonda se
metro en gruesas preparaciones. Debe emplearse un software acerca a la superficie de la muestra hasta que su nube de
especial para crear imágenes tridimensionales de alta electrones justamente choca con la de los átomos de la
resolución de estructuras celulares y de muestras complejas superficie. Si se aplica un pequeño voltaje entre la punta y
como los biofilms (Figura 2.31). la muestra, los electrones fluyen a través de un estrecho
canal o túnel formado en las nubes de electrones. Esta
corriente de túnel, como así se denomina, es extremadamente
Microscopía con sonda de barrido sensible a la distancia y disminuye hasta casi mil veces si la
sonda se mueve hacia fuera de la superficie a una distancia
Aunque los microscopios ópticos y electrónicos se han equivalente al diámetro de un átomo.
sofisticado mucho y han alcanzado un estado avanzado de La disposición de los átomos en la superficie de una
desarrollo, todavía se construyen nuevos microscopios de muestra se determina moviendo la punta de la sonda de
poder mayor. Una nueva clase de microscopios, denomina- adelante hacia atrás sobre la superficie, mientras se man-
dos microscopios con sonda de barrido, ofrecen una medi- tiene a una altura constante ajustando la distancia de la
da de las características de superficie al mover una sonda sonda para mantener una corriente de túnel estable. Al
fina sobre la superficie de un objeto. El microscopio elec- mover la punta de arriba abajo, siguiendo el contorno de la
2.5 Nuevas técnicas en microscopía 39

Figura 2.30 Diagrama de rayos de un microscopio confocal de barrido por láser. Las líneas amarillas representan la luz láser utilizada para la
iluminación. Las líneas rojas simbolizan la luz que surge del plano enfocado, y las líneas azules representan la luz procedente de aquellas zonas de la
muestra por encima y por debajo del plano enfocado. Consúltese el texto para obtener más información.

Figura 2.31 Imágenes confocales a varias profundidades de un biofilm. (a) a 20 u.m de profundidad, (b) 40 um. Cada una de estas imágenes
confocales —que combinan imágenes fluorescentes y de reflexión— tienen una profundidad de campo de 2 um. Se pueden observar algunas bolas de
látex fluorescentes, en rojo, empleadas como trazadoras.
40 Capítulo 2 Estudio de la estructura microbiana: microscopía y preparación de muestras

superficie, se registra y analiza su movimiento en un orde-


nador para crear una imagen tridimensional precisa de los
átomos de la superficie. El mapa de la superficie puede
mostrarse en la pantalla de un ordenador o trazarse en
papel. La resolución es tan elevada que pueden observarse
átomos individuales con facilidad. Los inventores de este
microscopio, Gerd Binning y Heinrich Rohrer, compartie-
ron el premio Nobel de Física en 1986 por este trabajo,
junto con Ernst Ruska, diseñador del primer microscopio
electrónico de transmisión.
El microscopio de barrido de efecto túnel tendrá segura-
mente un gran impacto en biología. Recientemente, se ha
utilizado para ver directamente DNA (Figura 2.32). Como
este microscopio puede examinar objetos cuando se sumer-
gen en agua, puede ser especialmente útil para estudiar
moléculas biológicas.
Más recientemente, se ha desarrollado otra clase de
microscopio por sonda de barrido. El microscopio de fuer-
za atómica mueve una fina sonda sobre la superficie de una
muestra mientras que mantiene constante la distancia entre
la punta de la sonda y la superficie. Puede hacer esto si se
ejerce una fuerza muy pequeña sobre la punta, justo lo nece- Figura 2.32 Ejemplo de microscopía electrónica de efecto túnel.
Una doble hélice de DNA, mostrando aproximadamente tres vueltas
sario para mantener una distancia constante, lo suficiente (color falseado; X2Ü0Ü 000).
como para no dañar la superficie. El movimiento vertical de
la punta se controla normalmente midiendo la desviación de
un rayo láser que incide sobre la palanca que soporta la
sonda. Al contrario que el microscopio de barrido de efecto 1. ¿Cómo funciona un microscopio confocal y por qué revela
túnel, el de fuerza atómica puede emplearse para estudiar mejores imágenes de muestras gruesas que un microscopio
superficies que no conducen bien la electricidad. Este estándar?
microscopio se ha utilizado para investigar las interacciones 2. Describa brevemente el microscopio por sonda de barrido y
entre las proteínas chaperonas de E. coli GroES y GroEL, su versión más conocida, el microscopio de barrido de
hacer el mapa genético de plásmidos localizando enzimas de efecto túnel, y el de fuerza atómica. ¿Para qué se utilizan
restricción unidas a lugares específicos, y conocer el com- estos microscopios?
portamiento de células vivas.

Resumen

1. Un rayo de luz que pasa de aire a vidrio, o imagen (Figura 2.7), brillando los objetos 10. La mayoría de los colorantes son básicos,
viceversa, se desvía según un proceso sobre un fondo negro. cargados positivamente, o ácidos, cargados
denominado refracción. Las lentes enfocan 6. Un microscopio de contraste de fases negativamente, y se unen a partes ionizadas
los rayos de luz en un punto focal y amplían convierte variaciones en el índice de de las células.
las imágenes (Figura 2.2). refracción y en la densidad de las células en 11. En la tinción simple, se emplea un único
2. En un microscopio compuesto como el de cambios de intensidad de luz, haciendo colorante para teñir los microorganismos.
campo claro, la imagen primaria se forma visibles células incoloras no teñidas
12. Los métodos de tinción diferencial, como las
por una lente del objetivo, y se amplía por la (Figura 2.9).
tinciones de Gram y de ácido-alcohol
lente del ocular para crear una imagen 7. El microscopio de interferencia diferencial resistencia, emplean diferentes colorantes
virtual (Figura 2.3). utiliza dos haces de luz para crear mayor para distinguir entre grupos microbianos, al
3. Un condensador situado debajo de la platina contraste e imágenes tridimensionales de teñirlos de forma diferente.
enfoca un cono de luz sobre la muestra. muestras vivas. 13. Algunas técnicas de tinción son específicas
4. La resolución de un microscopio aumenta al 8. Un microscopio de fluorescencia ilumina para observar estructuras particulares
disminuir la longitud de onda de la radiación una muestra marcada con un fluorocromo y como cápsulas, flagelos y endosporas
empleada para iluminar la muestra. La crea una imagen a partir de la fluorescencia bacterianas.
resolución máxima de un microscopio óptico emitida (Figura 2.12). 14. El microscopio electrónico de transmisión
es de aproximadamente 0.2 (J.m. 9. Normalmente, las muestras deben fijarse y utiliza lentes magnéticas para formar una
5. Un microscopio de campo oscuro utiliza teñirse antes de observarlas con un imagen a partir de electrones que han
solamente la luz refractada para formar una microscopio de campo claro. atravesado un corte muy fino de una muestra
Cuestiones para reflexionar 41

(Figura 2.23). La resolución es grande 16. Las muestras, para observarlas con el características externas de la superficie de
porque la longitud de onda de los electrones microscopio electrónico de transmisión, se los microorganismos.
es muy corta. preparan también con tinción negativa, 18. El microscopio confocal de barrido por láser
15. Se puede aumentar el contraste de un corte sombreado con metal, o bien, mediante (Figura 2.29) se utiliza para estudiar
fino mediante tratamiento con soluciones de criofractura. muestras gruesas y complejas. Los
metales pesados como tetróxido de osmio, 17. El microscopio electrónico de barrido microscopios con sonda de barrido pueden
uranio y plomo. (Figura 2.27) se emplea para estudiar incluso visualizar moléculas, además de
células vivas.

Palabras clave

apertura numérica 21 microscopía de contraste de fase oscura 25 objetivos 21


colorantes ácidos 29 microscopio confocal de barrido por láser 36 oculares 21
colorantes básicos 28 microscopio de barrido de efecto túnel 38 parafocal 21
condensador 21 microscopio de campo claro 20 microscopio punto focal 19
criofractura 55 de contraste de fases 23 microscopio de refracción 19
distancia de trabajo 22 fluorescencia 26 microscopio de fuerza resolución 21
distancia focal 19 atómica 40 microscopio de contraste de sombreado 34
fijación 28 interferencia tinción de ácido-alcohol resistencia 30
fluorocromos 27 diferencial (CDI) 26 microscopio con tinción de esporas 31
grupos cromóforos 28 sonda de barrido 38 microscopio electrónico tinción de flagelos 31
índice de refracción 19 de barrido (MEES) 35 microscopio electrónico tinción de Gram 29
luz fluorescente 26 de tinción negativa 30
métodos de tinción diferencial 29 transmisión (MET) 32 tinción simple 29
microscopía de campo oscuro 23 mordiente 29

Preguntas para razonar y repasar

¿Cómo se producen las imágenes reales y ¿Qué etapa de la tinción de Gram puede 10. Compare los microscopios descritos en este
virtuales en un microscopio óptico? ¿Cuál eliminarse sin perder su capacidad para capítulo —de campo claro, de campo oscuro,
es la que se ve realmente? distinguir entre bacterias Gram positivas y de contraste de fases, de contraste de
Si se observa una muestra con un objetivo Gram negativas? ¿Por qué? interferencia diferencial, de fluorescencia,
de x43 en un microscopio con un ocular de ¿Por qué debe usar alto vacío y cortes muy MET, MEB, confocal y de barrido con
«15, sonda— en términos de las imágenes que
c4u.é au,nenio tendía la ¡muyen? finos para el MET?
ofrecen y los objetivos para los que suelen
¿Por qué la mayoría de los microscopios no El espécimen se incluye a menudo en emplearse.
utilizan oculares de x30 para conseguir un parafina antes de realizar los cortes para
mayor aumento? microscopía óptica. ¿Por qué no puede 11. Describa brevemente cómo funciona el
emplearse este método para preparar las microscopio de barrido con sonda. ¿Para qué
Describa los dos tipos generales de fijación. se emplea? Distinga entre los dos tipos de
¿Cuál de ellos emplearía normalmente con muestras para el MET?
microscopios de barrido con sonda, en relación
bacterias? ¿y para protozoos? En el caso de utilizar el MET, ¿en qué con su mecanismo de funcionamiento.
¿Por qué hay que esperar que los colorantes circunstancias sería ideal preparar las
muestras utilizando la tinción negativa? 12. Prepare una tabla resumen mostrando las
básicos sean más eficaces en condiciones ventajas de cada uno de los tipos de
alcalinas? ¿sombreado? ¿criofractura?
microscopio descritos en este capítulo.

Cuestiones para reflexionar

1. Si se preparó una muestra para su examen al Localice en un artículo científico un ejemplo figuras obtenidas con ese particular
microscopio óptico con la tinción de Gram, de micrografía obtenida con un microscopio microsocopio. ¿Qué otras figuras le hubiera
y no se tiñeron las muestras, haga una lista óptico, electrónico de transmisión, de barrido, gustado ver en este estudio? Esquematice los
de qué pudo haberse hecho incorrectamente. o de uno confocal. Discuta por qué se pasos que los investigadores tomaron para
incluyeron en el artículo precisamente dichas obtener dichas micrografías.
42 Capítulo 2 Estudio de la estructura microbiana: microscopía y preparación de muestras

Lecturas suplementarias
General Rawlins, D. J. 1992. Light microscopy. Philadelphia: microscopy: A student's handbook. Burlington, Vt.:
Boatman, E. S.; Berns, M. W.; Walter, R. J.; and Coronet Books. Ladd Research Industries. Wischnitzer, S. 1981.
Foster, J. S. 1987. Today's microscopy. ¡ntroduction ío electrón microscopy, 3d ed. New
BioScience 37(6):384-94. 2.3 Preparación y tinción de muestras York: Pergamon Press.
Clark, G. L. 1961. The encyclopedia of microscopy. Clark, G. L., editor. 1973. Stalningprocedures used
New York: Van Nostrand Reinhold. by the Biológica! Stain Commission, 3d ed. 2.5 Nuevas técnicas en microscopía
Gerhard, R; Murray, R. G. E.; Wood, W. A.; and Baltimore: Williams & Wilkins. Binnig, G., and Rohrer, H. 1985. The scanning
Krieg, N. R., editors. 1994. Methodsfor general Gray, Peter. 1964. Handbook ofbasic tunneling microscope. Sci. Am. 253(2):50-56.
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2.2 El microscopio óptico 2.4 Microscopía electrónica 1(3): 190-98. Perkins, G, A., and Frey, T. G.
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Microscopy, biologists, 2d ed. New York: John Wiley and News 154:268-70. Wickramasinghe, H. K.
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vol. 3, J. Lederberg, editor, 288-306. San Diego: Postek, M. T.; Howard, K. S.; Johnson, A. H.; and microscopes. Sci. Am. 261 (4):98-105.
Academic Press. McMichael, K. L. 1980. Scanning electrón
CAPÍTULO 3

Estructura y función
de la célula procariota

Las especies bacterianas


pueden diferir en los
patrones de distribución
de sus flagelos. Estas
células de Pseudomonas
tienen un único flagelo
polar que utilizan para su
locomoción.

índice Conceptos
3.1 Resumen de la estructura de la 1. Las bacterias son pequeñas y de estructura
célula procariota 44 sencilla cuando se comparan con las células
Tamaño, forma y eucariotas, incluso, a menudo, tienen formas y
agrupamiento 44 tamaños característicos.
Organización de la célula 2. Aunque poseen una membrana plasmática,
procariota 47 necesaria para todas las células vivas, las
3.2 Membranas de la célula bacterias carecen normalmente de sistemas
procariota 48 extensos y complejos de membrana.
Membrana plasmática 48 3. La matriz citoplasmática normalmente contiene
Sistemas internos de varios constituyentes que no están rodeados por
membrana 51 una membrana: cuerpos de inclusión, ribosomas
3.3 La matriz citoplasmática 52 y el nucleoide con el material genético.
Cuerpos de inclusión 52
Ribosomas 55 4. La pared celular procariótica es química y
morfológicamente compleja, y casi siempre
3.4 Nucleoide 55
contiene peptidoglicano. La mayoría de las
3.5 La pared de las células bacterias se pueden clasificar en Gram positivas o
procariotas 57 Gram negativas en función de la estructura de la
Estructura del peptidoglicano 59 pared celular y de la respuesta a la tinción de
Pared celular de las bacterias Gram.
Gram positivas 59 Pared
5. Los componentes como cápsulas y fimbriae se
celular de las bacterias
localizan fuera de la célula. Uno de éstos es el
Gram negativas 61
flagelo, que muchas bacterias utilizan como
Mecanismo de la tinción de
propulsor para desplazarse hacia las sustancias
Gram 64 La pared celular y
atrayentes o alejarse de las repelentes.
protección
osmótica 64 6. Algunas bacterias forman endosporas, formas
3.6 Componentes externos a la latentes de resistencia, para sobrevivir
pared celular 65 condiciones ambientales extremas.
Cápsulas, «slime» y capas S 65
Pili y fimbriae 66 Flagelos y
movilidad 66
3.7 Quimiotaxis 70
3.8 Endospora bacteriana 72
44 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

La época en que los científicos solían considerar q las bacterias'


como pequeñas bolsas de enzimas finalizó hace mucho tiempo.,
HowardJ. Rogers.

I ncluso un examen superficial del mundo microbiano


revelaría que las bacterias son uno de los grupos más
importantes de seres vivos, desde cualquier criterio:
número de organismos, importancia ecológica general, o
importancia práctica para los seres humanos. De hecho, la
mayor parte de nuestro conocimiento sobre los fenómenos
bioquímicos y de biología molecular proceden de la investiga-
ción con bacterias. Aunque gran parte de la investigación se
ocupa de microorganismos eucariotas, el núcleo principal
radica en los procariotas. En consecuencia, la sección sobre
morfología microbiana comienza con la estructura de los pro-
cariotas. Como se mencionó en el Capítulo 1 (véase lap. 12),
hay dos grandes grupos de procariotas bien diferenciados:
Bacteria y Archaea. Este capítulo se va a centrar principal-
mente en la morfología de Bacteria; en el Capítulo 20 se dis-
cutirá la composición y estructura celular de Archaea. Para
evitar confusiones, debe recordarse que, en sentido general,
debe emplearse el término procariota, que incluye a Bacteria
y Archaea; el término bacteria se refiere específicamente a
las células del dominio Bacteria. Eucariotas, procariotas y
composición del mundo microbiano (pp. 12; 95-96). El dominio
Archaea (pp. 487-503).

3.1 Resumen de la estructura de la célula


procariota
Como gran parte de este capítulo se va a ocupar de la des-
cripción de componentes celulares individuales, a continua-
ción se expone un resumen general sobre la célula procario-
ta en su conjunto.

Tamaño, forma y agrupamiento


Se podría esperar que organismos pequeños, relativamente
simples como las bacterias, fuesen uniformes en cuanto a
(d)
forma y tamaño. Aunque es cierto que muchas bacterias tie-
nen una morfología similar, existen importantes variaciones
(Figuras 3.1 y 3.2; véanse también las Figuras 2.8 y 2.15).

Figura 3.1 Bacterias representativas. Observación con el


microscopio óptico de bacterias teñidas, (a) Staphylococcus aureus;
obsérvense las células esféricas Gram positivas en racimos irregulares;
tinción de Gram (x 1000). (b) Enterococcus faecalis; obsérvense las
cadenas de cocos; contraste de fases (x200). (c) Bacillus megaterium,
bacteria en forma de bacilo formando cadenas; tinción de Gram
(x600). (d) Rhodospirillum rubrum; contraste de fases (x500). (e)
Vibrio cholerae; bacilos curvados con flagelos polares (x 1000).
3.1 Resumen de la estructura de la célula procariota 45

Figura 3.2 Bacterias con formas atípicas.


Ejemplos de bacterias con formas diferentes a
los tipos de bacilo y coco, (a) Actinomyces,
MEB (x21 000). (b) Mycoplasma pneumoniae,
MEB (x62 000). (c) Spiwplasma, MEB (x 13
000). (d) Hyphomicrobium con hitas y yema;
microfotografía electrónica con tinción
negativa, (e) Bacteria cuadrada de Walsby. (f)
Gallionella ferruginea con un pedúnculo.

En esta sección se describen los principales modelos morfo- los miembros del género Micrococcus se dividen a menudo
lógicos y se mencionan interesantes variantes en procariotas en dos planos para formar paquetes cuadrados de cuatro
(Capítulos 20-24). células denominados tetradas; en el género Sarcina los
La mayoría de las bacterias conocidas presentan forma cocos se dividen en tres planos, formando paquetes cúbicos
de coco o de bacilo. Los cocos son células casi esféricas. de ocho células.
Pueden existir como células individuales, pero se asocian La otra forma común bacteriana es el bastoncillo, deno-
también en agrupaciones características que son útiles fre- minado bacilo. Bacillus megaterium es el ejemplo clásico de
cuentemente para identificar a las bacterias. Los diplococos una bacteria con forma de bastoncillo (Figura 3.1c; véase
se forman cuando los cocos se dividen y permanecen juntos también la Figura 2.15a, c). Los bacilos varían considerable-
para constituir pares (Neisseria; Figura 2.15d). Cuando las mente en la proporción entre longitud y diámetro, siendo los
células después de dividirse repetidamente en un mismo cocobacilos tan cortos y anchos que parecen cocos. La forma
plano no se separan, se forman cadenas largas de cocos; este del extremo del bacilo varía a menudo entre especies; puede
modelo se observa en los géneros Streptococcus, Enterococ- ser plana, redondeada, en forma de puro o bifurcada. Aunque
cus y Lactococcus (Figura 3.1b). Las bacterias del género muchos bacilos aparecen aislados, pueden permanecer juntos
Staphylococcus se dividen en planos aleatorios para generar después de dividirse, formando parejas o cadenas (p. ej.,
racimos irregulares similares a los de las uvas (Figura 3.1a). Bacillus megaterium forma largas cadenas). Unas pocas bac-
Las divisiones en dos o tres planos consecutivos perpendicu- terias con forma de bastoncillo, los vibrios, son curvados,
lares entre sí pueden producir racimos simétricos de cocos: con forma de coma o de espiral incompleta (Figura 3.le).
46 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

A parte de estas dos formas más frecuentes, las bacterias (p. ej., miembros del género Mycoplasma) tienen aproxima-
pueden adquirir una gran variedad de formas. Los actinomice- damente 0.3 |im de diámetro, casi el tamaño de los virus
tos forman largos filamentos multinucleados característicos, o más grandes (poxvirus). Recientemente, se han publicado
hifas, que pueden ramificarse para constituir una red denomi- investigaciones sobre células incluso menores. Las nanobac-
nada micelio (Figura 3.2a). Muchas bacterias poseen una terias o ultramicrobacterias tienen un diámetro aproximado
forma semejante a bacilos largos retorcidos como espirales o de entre 0.2 |0.m y menos de 0.05 (J.m. Se han cultivado en el
hélices; se denominan espirilos si son rígidos, y espiroquetas laboratorio algunas cepas, pero la mayoría son sencillamen-
cuando son flexibles (Figuras 3.Id, 3.2c; véase también la te objetos muy pequeños similares a bacterias, que sólo se
Figura 2.8a,c). El microorganismo Hyphomicrobium, de pueden observar microscópicamente. Algunos microbiólo-
forma ovalada a pera (Figura 3.2d), produce una yema al final gos piensan que las nanobacterias son artefactos; es preciso
de la larga hifa. Otras bacterias como Gallionella forman realizar más investigaciones para aclarar la importancia de
pedúnculos (Figura 3.2/). Pocas bacterias son realmente pla- estas formas bacterianas. Escherichia coli, bacilo de tamaño
nas. Por ejemplo, Anthony E. Walsby ha descubierto bacterias medio, mide 1.1-1.5 (im de ancho y 2.0-6.0 Jim de largo.
cuadradas en charcas salinas (Figura 3.2e). Estas bacterias tie- Algunas bacterias son bastante grandes; la cianobacteria
nen una forma parecida a cajas planas, cuadradas a rectangula- Oscillatoria tiene un diámetro de casi 7 ¡im (el mismo que
res, de aproximadamente 2 x 2-4 um y sólo 0.25 |im de grosor. un eritrocito), y algunas espiroquetas pueden alcanzar oca-
Finalmente, algunas bacterias pueden presentar formas varia- sionalmente una longitud de 500 jim. Se ha descubierto una
bles (Figura 3.2b)\ se denominan pleomórficas, aunque, gene- bacteria enorme en el intestino del pez cirujano Acanthunts
ralmente, pueden tener forma bacilar, como Corynebacterium. nigrofuscus. La bacteria Epulopisciumfishelsoni presenta un
En conjunto, el grupo bacteriano también varía en ta- tamaño de 600 por 80 \xxn, algo menor que un guión impre-
maño tanto como en forma (Figura 3.3). Las más pequeñas so. Más recientemente, ha sido descubierta una bacteria aún

:itos y virus.

Figura 3.3 Tamaño de bacterias y virus. Se relacionan los tamaños aproximados de algunas bacterias con el de los eritrocitos
3.1 Resumen de la estructura de la célula procariota 47

más grande en sedimentos oceánicos, Thiomargarita nami- Organización de la célula procariota


biensis (Recuadro 3.1). En definitiva, algunas bacterias tie-
nen un tamaño incluso mayor que la media de las células Las células procariotas contienen numerosas estructuras.
eucariotas (las típicas células de plantas y animales presen- Sus funciones principales se resumen en la Tabla 3.1, y la
tan un diámetro de 10-50 |im). Figura 3.4 ilustra muchas de ellas. No están todas las

Microbios monstruosos
os biólogos han diferenciado a menudo las células procariotas de
las eucariotas por su tamaño. Generalmente, las /procariotas son
más pequeñas que las eucariotas. Las células procariotas crecen
muy rápido en comparación con la mayoría de las eucariotas, y
carecen de los complejos sistemas de transporte vesicular que
poseen las células eucariotas (véase el Capítulo 4). Se ha
asumido que deben ser pequeñas por la necesidad de una
proporción mayor entre superficie y volumen, y así, por
ejemplo, favorecer la difusión intracelular de nutrientes. Por ello,
cuando Fishelson, Montgomery y Myrberg descubrieron un
microorganismo grande, con forma de puro, en el intestino del
pez cirujano, Acanthurus nigrofuscus, propusieron en su artículo
publicado en 1985, que era un protista. Este microorganismo era
demasiado grande para ser otra cosa. En 1993, Esther Angert,
Kendall Clemens y Norman Pace emplearon técnicas para
comparar secuencias de rRNA (p. 468) que les permitieron
identificar a este microorganismo, denominado actualmente
Epulopiscium fishelsoni, como un procariota próximo al género
Gram positivo Clostridium.
E. fishelsoni [latín epulum, banquete, y piscium, pez] cuya
longitud es normalmente de 200 a 500 prn, puede alcanzar un
tamaño de 80 um por 600 um (véase la figura del recuadro).
Tiene, aproximadamente, un volumen mil veces superior al de
Escherichia coli. A pesar de su gran tamaño, este organismo
posee una estructura celular procariota. Es móvil y nada a una
velocidad de unas dos veces su longitud por segundo (aproxima-
damente, 2.4 cm/min) usando los flagelos de tipo bacteriano que
cubren su superficie. El citoplasma contiene nucleoides grandes
y muchos ribosomas, como sería necesario para una célula tan Bacterias gigantes, (a) Esta fotografía, realizada con
grande. Epulopiscium puede superar los límites de tamaño esta- pseudoiluminación de campo oscuro, muestra a Epulopiscium
blecidos para la difusión gracias a una membrana plasmática fishelsoni en la parte superior de la Figura, empequeñeciendo a los
muy plegada. Esto aumenta el área de la superficie celular y faci- paramecios que aparecen en la parte inferior (x 200). (b) Una cadena
lita el transporte de nutrientes. de células de Thiomargarita namibiensis visualizadas mediante
Parece que Epulopiscium se transmite de huésped a huésped microscopía óptica. Obsérvese la cubierta mucosa externa, así como
por contaminación fecal. La bacteria se puede eliminar dejando los glóbulos internos de azufre.
en ayunas al pez cirujano durante unos días, aunque parece ser
que los adultos son resistentes, ya que si se colocan alevines
sanos junto a adultos infectados, los alevines se contagiarán,
pero no contagiarán a otros adultos sanos. El descubrimiento de estos procariotas limita en gran medi-
En 1997, Heidi Schulz descubrió en los sedimentos oceánicos da la diferenciación entre procariotas y eucariotas en función de
de la costa de Namibia un procariota aún más grande. Thiomarga- su tamaño celular, ya que estos dos procariotas tienen un tamaño
rita namibiensis es una bacteria esférica, entre 100 y 750 p_m de mayor que una célula eucariota normal. Además, se ha descu-
diámetro, que a menudo forma cadenas. Es unas 100 veces más bierto que algunas células eucariotas son más pequeñas de lo que
grande en volumen que E. fishelsoni. Una vacuola ocupa cerca se pensaba. El mejor ejemplo es Nanochlorum eukaryotum.
del 98 % de la célula, y contiene un fluido rico en nitratos; ésta Nanochlorum tiene sólo de 1 a 2 um de diámetro, aunque es ver-
está rodeada de una capa de citoplasma de unos 0.5-2.0 u.m llena daderamente eucariota y tiene un núcleo, un cloroplasto y una
de granulos de azufre. Esta capa citoplasmática es tan fina como mitocondria. Es preciso evaluar de nuevo nuestros conocimien-
la que presentan la mayoría de las bacterias, para permitir tasas tos sobre los factores que limitan el tamaño de las células proca-
adecuadas de difusión. La oxidación del azufre la utilizan como riotas. Ya no es seguro asumir que las células grandes son euca-
fuente de energía, siendo el nitrato el aceptor de electrones. riotas y las pequeñas procariotas.
48 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

por un espacio periplásmico, se sitúa la membrana plasmáti-


Tabla 3.1 Funciones de las estructuras
ca. Esta membrana puede estar invaginada para formar
de células procariotas estructuras membranosas internas. Como la célula procario-
Membrana plasmática Barrera permeable selectiva, frontera ta no contiene orgánulos internos rodeados por membrana,
mecánica de la célula, transporte de su interior parece morfológicamente muy simple. El mate-
nutrientes y residuos, localización de rial genético se localiza en una región discreta, el nucleoide,
muchos procesos metabólicos
que no está separado del resto del citoplasma por membra-
(respiración, fotosíntesis), detección de
señales ambientales quimiotácticas nas. Los ribosomas y otros cuerpos de mayor tamaño, deno-
Vacuola de gas Hincha la célula para flotar en un medio minados cuerpos de inclusión, están dispersos por la matriz
acuático del citoplasma. Tanto las células Gram positivas como las
Ribosomas Síntesis de proteínas
Gram negativas pueden utilizar flagelos para desplazarse.
Cuerpos de inclusión Almacenamiento de carbono, fosfato y otras
sustancias
Además, muchas células están rodeadas por una cápsula o
Nucleoide Localización del material genético (DNA) capa mucosa, externa a la pared celular.
Espacio periplásmico Contiene enzimas hidrolíticas y proteínas Las células procariotas son morfológicamente mucho
de unión para la captura y transporte de más sencillas que las eucariotas. Estos dos tipos celulares se
nutrientes
Pared celular Confiere a las bacterias una forma rígida compararán cuando se repase la estructura de la célula euca-
y las protege frente a la lisis en soluciones riota (véanse las pp. 95-96).
diluidas
Cápsulas y «sume» Resistencia frente a la fagocitosis, adherencia
a superficies
Fimbriae y pili Adherencia a superficies, conjugación 1. ¿Qué formas características pueden adquirir las bacterias?
bacteriana Describa las formas en que las células bacterianas pueden
Flagelos Movimiento agruparse.
Endospora Supervivencia en condiciones ambientales 2. Dibuje una célula bacteriana y señale todas sus estructuras
adversas
importantes.

estructuras de cada género. Además, existen diferencias sig-


nificativas en la pared celular de las células Gram negativas 3.2 Membranas de la célula procariota
y Gram positivas. Sin embargo, a pesar de estas variaciones,
se puede considerar que las células procariotas son constan- Las membranas son un componente imprescindible para
tes en su estructura fundamental y en la presencia de ciertos todos los organismos vivos. Las células deben interactuar
componentes fundamentales. recíprocamente con su ambiente de forma selectiva, tanto si
Las células procariotas casi siempre están limitadas por se trata del medio interno de un organismo multicelular
una pared celular químicamente compleja. Separada de ésta
como de un medio externo, menos protegido y más variable.
Figura 3.4 Morfología de una bacteria Gram positiva. La mayoría Las células no deben ser sólo capaces de tomar nutrientes y
de las estructuras que se muestran en esta figura se encuentran en todas
eliminar residuos, sino también de mantener su interior en
un estado constante, muy organizado frente a cambios exter-
nos. La membrana plasmática rodea el citoplasma de las
células procariotas y eucariotas. Esta membrana es el punto
clave de contacto con el entorno celular y, por ello, es res-
ponsable de gran parte de su relación con el mundo exterior.
Para comprender la función de la membrana es preciso
familiarizarse con su estructura y, particularmente, con la de
la propia membrana plasmática.

Membrana plasmática

Las membranas contienen tanto proteínas como lípidos,


aunque las proporciones exactas de unas y otros varían
ampliamente. Las membranas plasmáticas bacterianas pre-
las células Gram positivas. Únicamente se ha incluido una pequeña
parte de las proteínas de la capa S para simplificar el dibujo; cuando sentan una proporción más alta de proteínas que las de euca-
existen, estas proteínas cubren toda la superficie. riotas, probablemente debido a las numerosas funciones'que
realizan; en el caso de eucariotas, dichas funciones se llevan
a cabo en membranas de orgánulos internos. La mayoría de
3.2 Membranas de la célula procariota 49

(b)

Figura 3.5 Estructura de un lípido polar de membrana. Bacteriohopanetetrol (hopanoide)


Fosfatidiletanolamina, fosfolípido anfipático, presente a menudo en las
membranas bacterianas. Los grupos R son cadenas largas de ácidos Figura 3.6 Esferoides y hopanoides de membrana. Ejemplos
grasos no polares. comunes.

los lípidos asociados a membranas son estructuralmente asi- branas bacterianas contienen moléculas pentacíclicas, tipo
métricos, con extremos polares hidrofílicos y no polares esteróles, denominadas hopanoides (Figura 3.66), presentes
hidrofóbicos (Figura 3.5), por tanto son anfipáticos. Los en gran cantidad en nuestro ecosistema (Recuadro 3.2). Los
extremos no polares son insolubles en agua y tienden a aso- hopanoides se sintetizan a partir de los mismos precursores
ciarse entre sí. Esta propiedad de los lípidos les confiere la que los esteroides. Estas sustancias, cumplirían en procario-
capacidad de formar membranas en bicapa. Las superficies tas la misma función que los esteroides en eucariotas, esta-
externas son hidrofílicas, mientras que los extremos hidrofó- bilizar la membrana.
bicos quedan inmersos en el interior, lejos del agua circun- Los componentes lipidíeos de la membrana de procario-
dante. Muchos de estos lípidos anfipáticos son fosfolípidos tas se distribuye en dos capas de moléculas ordenadas de
(Figura 3.5). Las membranas bacterianas se diferencian nor- extremo a extremo (Figura 3.7). Por el contrario, muchas
malmente de las de eucariotas en que carecen de esteróles, membranas de Archaea están conformadas por una monoca-
como colesterol (Figura 3.6a). Sin embargo, muchas mem- pa de moléculas lipídicas. Archaea (Capítulo 20).

Bacterias y combustibles fósiles

D
urante muchos años ha existido un enorme interés por el riano. Cerca del 90 % de estos materiales se encuentra en forma
origen de los combustibles fósiles, como carbón y petró- de querogeno, precursor orgánico del petróleo. Recientemente,
leo. En los océanos hay una constante sedimentación de se ha aislado del querogeno el hopanoide bacteriohopanetetrol
membranas y otros compuestos orgánicos de procariotas que se (Figura 3.6b), y aumentan las pruebas que demuestran que el
depositan en el fondo de los océanos. La formación de los com- querogeno se produce como consecuencia de la actividad bac-
bustibles fósiles comienza cuando la materia orgánica queda teriana. Quizás, las reservas de combustibles fósiles las deba-
enterrada antes de que los microorganismos puedan oxidarla a mos principalmente a las bacterias que sirven como descompo-
dióxido de carbono. Cuando la materia orgánica está enterrada nedoras finales de la materia orgánica de los organismos
profundamente y sometida a temperaturas crecientes, en condi- muertos.
ciones anaerobias, se forman con frecuencia carbón y petróleo. Se ha estimado que la cantidad total de hopanoides en los
La cantidad de materia que participa en este proceso es enorme. sedimentos es de aproximadamente 10IM2 toneladas, tanto como
Se ha estimado que la Tierra contiene aproximadamente 1016 la masa total de carbono orgánico de todos los organismos vivos
toneladas de carbono en los sedimentos. (1012 toneladas). Es posible que los hopanoides sean las moléculas
Existen cada vez más pruebas de que gran parte de la biológicas más abundantes de nuestro planeta.
materia orgánica presente en los sedimentos tiene origen bacte-
50 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

Figura 3.7 Estructura de la membrana plasmática. Este diagrama del modelo de mosaico fluido de la estructura de la membrana plasmática
bacteriana muestra a las proteínas integrales (azul) flotando en una doble capa lipidica. Las proteínas periféricas (morado) están asociadas íntimamente
con la superficie de la membrana. Las esferas pequeñas representan los extremos hidrofílicos de los fosfolipidos de membrana, y las colas onduladas,
las cadenas de ácidos grasos hidrofóbicos. Puede haber también otros lípidos de membrana, como hopanoides (rosa). Para que quede más claro, los
fosfolipidos se muestran con un tamaño proporcionalmente muy superior al que poseen en las membranas verdaderas.

Las membranas celulares son estructuras muy delgadas, La nueva imagen de la membrana celular está formada
aproximadamente de 5 a 10 nm de grosor, y sólo pueden por un sistema muy organizado y asimétrico, flexible y
verse con el microscopio electrónico. La técnica de criofrac- dinámico a la vez. Aunque, aparentemente las membranas
tura se ha empleado para romper membranas por entre la tienen un diseño básico común, existen grandes variaciones
doble capa lipidica, dividiéndola en dos partes y exponiendo en su capacidad, tanto estructural como funcional. Las
las partes ocultas. De esta forma, se ha descubierto que diferencias son tan grandes y características que la compo-
muchas membranas, incluida la plasmática, tienen una sición química de las membranas se puede utilizar en la
estructura interna compleja. Así, aparecen pequeñas partí- identificación.
culas globulares, que son proteínas que se sitúan dentro de Las membranas plasmáticas de las células bacterianas
la doble capa lipidica (Figura 2.26). Técnica de criofractura tienen que desempeñar satisfactoriamente un número in-
(p. 35). creíble de funciones. A continuación, se expondrán muchas
El modelo de estructura de membrana más aceptado de las funciones principales de la membrana plasmática,
actualmente es el modelo de mosaico fluido de S. Jona- aunque se describirán más delante de forma individual. La
than Singer y Garth Nicholson (Figura 3.7). Estos inves- membrana plasmática retiene el citoplasma, particularmen-
tigadores diferenciaron entre dos tipos de proteínas de te crítico en las células sin pared, y lo separa del medio
membrana. Las proteínas periféricas están débilmente exterior. Esta membrana actúa también como barrera selec-
conectadas a la membrana y pueden eliminarse fácilmente. tivamente permeable: permite el paso de iones y moléculas
Son solubles en soluciones acuosas, y constituyen aproxi- particulares, tanto hacia dentro como hacia fuera de la
madamente el 20-30 % del total de las proteínas de mem- célula, mientras que evita el tráfico de otras. Por ello, esta
brana. El resto, 70-80 % de las proteínas de membrana, son membrana evita la pérdida de componentes esenciales,
proteínas integrales, que no se extraen fácilmente y son mientras que permite la difusión o transporte de otras
insolubles en soluciones acuosas cuando se eliminan los
moléculas. Como muchas sustancias no pueden atravesar la
lípidos. Química de proteínas y lípidos (Apéndice I).
membrana plasmática sin ayuda, hay que facilitar este
Las proteínas integrales, al igual que los lípidos de
movimiento cuando sea necesario. Se pueden emplear sis-
membrana, son anfipáticas; sus regiones hidrofóbicas están
temas de transporte para esas actividades, como la absor-
inmersas en la fracción lipidica, mientras que las porciones
ción de nutrientes, la excreción de residuos y la secreción
hidrofílicas sobresalen de la superficie de la membrana
de proteínas. La membrana plasmática de procariotas es
(Figura 3.7). Algunas de estas proteínas atraviesan com-
también el lugar donde se desarrollan numerosos procesos
pletamente la capa lipidica. Estas proteínas pueden difun-
metabólicos: respiración, fotosíntesis, síntesis de lípidos y
dir lateralmente en la superficie hasta una nueva posición,
pero no giran. A menudo, la membrana presenta hidratos de de constituyentes de la pared celular y, probablemente, la
carbono unidos a su superficie externa, que parecen poseer segregación cromosómica. Finalmente, la membrana con-
funciones importantes. tiene moléculas receptoras especiales que ayudan a las bac-
terias a detectar y responder a sustancias químicas del
3.2 Membranas de la célula procariota 51

medio exterior. Resulta evidente que la membrana plasmá-


tica es esencial para la supervivencia de los microorganis-
mos. Osmosis (p. 64); Transporte de sustancias a través de
membranas (pp. 104-109).

Sistemas internos de membrana

Aunque el citoplasma bacteriano no contiene orgánulos


membranosos complejos como mitocondrias o cloroplastos,
se pueden observar varias clases de estructuras membrano-
sas. Una común es el mesosoma. Los mesosomas son inva-
ginaciones de la membrana plasmática, conformando vesí-
culas, túbulos o lámelas (Figura 3.8 y Figura 3.11). Se
observan tanto en las bacterias Gram positivas como en las
Gram negativas, aunque son más prominentes, en general,
en las primeras.
Los mesosomas a menudo se encuentran próximos a los
septos o tabiques que dividen las bacterias, y a veces pare-
cen unidas al cromosoma bacteriano. Por ello, se piensa que
deben participar en la formación de la pared celular durante
la división o desempeñar un papel en la replicación del cro-
mosoma y su distribución a las células hijas.
Sin embargo, actualmente, muchos bacteriólogos consi-
deran que los mesosomas son artefactos generados durante
la fijación química de las bacterias para su observación con
el microscopio electrónico. Posiblemente, representan aque-

Figura 3.9 Membranas internas bacterianas. Membranas de


bacterias mirificantes y fotosintéticas. (a) Nytrocystis oceanus con
membranas paralelas atravesando toda la célula. Obsérvese el
nucleoplasma (n) con estructura fibrilar. (b) Ectothiorhodospira
mobilis con un sistema extenso de membrana intracitoplasmática (x
60 000).

lias partes de la membrana plasmática con una composición


química diferente y que se alteran más con los fijadores.
Muchas bacterias poseen otros sistemas internos de
membrana más evidentes diferentes de los mesosomas
(Figura 3.9). Los plegamientos de la membrana plasmática
pueden ser extensos y complejos en bacterias fotosintéticas,
como las cianobacterias y las bacterias púrpuras, o en bac-
terias con una intensa actividad respiratoria, como las nitri-
ficantes {Capítulo 22). Pueden constituir agregados de vesí-
culas esféricas, vesículas aplanadas, o membranas tubulares.
Su función sería la de ofrecer una superficie amplia de
Figura 3.8 Estructura del mesosoma. Bacillus fastidiosas membrana para realizar una mayor y más rápida actividad
(x91 000). Se observa un gran mesosoma junto al nucleoide. metabólica.
52 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

Los cuerpos de inclusión orgánicos suelen contener glu-


1. Describa con un diagrama y con palabras el modelo de cógeno o poli-P-hidroxibutirato. El glucógeno es un polí-
mosaico fluido de las membranas celulares. mero de unidades de glucosa, compuesto por cadenas largas
2. Enumere las funciones de la membrana plasmática. formadas por enlaces glucosídicos a ( 1 — »4) unidos a ca-
3. Discuta la naturaleza, estructura y posibles funciones del denas ramificadas por enlaces glucosídicos a(l —»6) (véase
mesosoma. el Apéndice I). El poli-P-hidroxibutirato (PHB) contiene
moléculas de P-hidroxibutirato unidas por enlaces éster
entre grupos carboxilos e hidroxilos de moléculas adya-
centes. Normalmente, sólo hay presente uno de estos polí-
meros orgánicos en una especie, pero las bacterias fotosinté-
3.3 La matriz citoplasmática ticas tienen ambos. El poli-p-hidroxibutirato se acumula en
distintos cuerpos de inclusión, de aproximadamente 0.2 a
La matriz citoplasmática es la sustancia situada entre la 0.7 u,m de diámetro, que se tiñen fácilmente con negro
membrana plasmática y el nucleoide (p. 55). La matriz está Sudán para observarlos con microscopio óptico, y son clara-
compuesta fundamentalmente por agua (casi el 70 % de la mente visibles con el microscopio electrónico (Figura 3.11).
masa bacteriana es agua). La de las células procariotas, a El glucógeno se dispersa más uniformemente por la matriz
diferencia de la de eucariotas, carece de orgánulos limita- en forma de granulos pequeños (aproximadamente de 20 a
dos por una membrana unitaria. No posee rasgos distintivos 100 nm de diámetro) y a menudo sólo pueden verse con el
en microfotografías electrónicas, pero a menudo está com- microscopio electrónico. Si las células contienen una gran
pactada con ribosomas y se encuentra muy organizada cantidad de glucógeno, al teñirlas con una solución yodada
(Figura 3.10). Proteínas específicas se sitúan en lugares adquieren un color marrón rojizo. Los cuerpos de inclusión
particulares, como el polo celular y el punto donde la célula de glucógeno y de PHB son reservas de carbono, que apor-
bacteriana se divide; así, aunque la bacteria carezca de un tan material para obtener energía y realizar la biosíntesis.
verdadero citoesqueleto, su matriz citoplasmática presenta Muchas bacterias acumulan también carbono en forma de
un sistema proteico con esa función. La membrana plasmá- gotitas lipídicas.
tica y todo el contenido interior se denomina protoplasto; Las cianobacterias tienen dos tipos característicos de
por tanto, la matriz citoplasmática es una parte principal del cuerpos de inclusión orgánicos, granulos de cianoficina y
protoplasto.
carboxisomas. Los granulos de cianoficina (Figura 3.13a)
están compuestos por polipéptidos grandes que contienen
aproximadamente la misma cantidad de los aminoácidos
Cuerpos de inclusión arginina y ácido aspártico. Los granulos son a menudo lo
suficientemente grandes para ser visibles con el microscopio
Numerosos cuerpos de inclusión, granulos de material óptico y acumulan el exceso de nitrógeno como reserva bac-
orgánico o inorgánico, visibles a menudo con el microsco- teriana. Los carboxisomas están presentes en muchas ciano-
pio de luz, se encuentran en la matriz citoplasmática. Estos bacterias, bacterias mirificantes y tiobacilos. Son poliédricos,
cuerpos normalmente se utilizan como reserva (p. ej., de
de aproximadamente 100 nm de diámetro, y contienen la
compuestos de carbono, sustancias inorgánicas, y de ener-
enzima ribulosa-l,5-bisfosfato carboxilasa (p. 223) en una
gía), y también pueden reducir la presión osmótica mediante
disposición paracristalina. Sirven como reserva de esta enzi-
la agregación de moléculas en forma particulada. Algunos
ma, y pueden ser el lugar de fijación de CO2.
no están rodeados por una membrana y permanecen libres
Un cuerpo de inclusión orgánico realmente extraordina-
en el citoplasma —p. ej., granulos de polifosfato,
rio, la vacuola de gas, está presente en muchas cianobacte-
cianoficina y de glucógeno—. Otros cuerpos de inclusión
están rodeados por una membrana no unitaria de una sola rias (véase sección 21.3), así como en bacterias fotosintéti-
capa de aproximadamente 2.0 a 4.0 nm de grosor. Ejemplos cas púrpuras y verdes, y en algunas bacterias acuáticas,
de cuerpos de inclusión rodeados por una membrana no como Halobacterium y Thiothrix. Estas bacterias flotan en o
unitaria son los granulos de poli-P-hidroxibutirato, algunos cerca de la superficie, gracias a las vacuolas de gas que les
de glucógeno y de azufre, carboxisomas y vacuolas de gas. confieren flotabilidad. Esto se demuestra claramente con un
La composición de los cuerpos de inclusión es variable. experimento sencillo, pero eficaz. Las cianobacterias mante-
Algunos son de naturaleza proteica, mientras que otros con- nidas en un frasco lleno y cerrado herméticamente flotarán,
tienen lípidos. Debido a que algunos cuerpos de inclusión pero si se golpea el tapón con un martillo, las bacterias se
se utilizan como cuerpos de almacenamiento, su cantidad hundirán hacia el fondo. El examen de las bacterias al inicio
variará dependiendo del estado nutricional de la célula. Por y al final del experimento revela que la repentina presión
ejemplo, los granulos de polifosfato desaparecerán en hábi- provocada por el martillazo hizo colapsar las vacuolas de
tats acuáticos en donde el fosfato sea limitante. A continua- gas, eliminando la flotabilidad de los microorganismos.
ción, se expone una breve descripción de varios cuerpos de Las vacuolas de gas son agregados de un gran número
inclusión. de estructuras pequeñas, huecas, cilindricas, denominadas
vesículas de gas (Figura 3.12). La pared de las vesículas de
3.3 La matriz citoplasmática 53

Figura 3.10 Dibujo ampliado un millón de \cces de un corte


transversal de la bacteria Escherichia cali. Fu la parte siiponoi se
observan el glicocálix, el flagelo, la pared celular Cnam negativa \ la
membrana plasmática. Los ribosomas sintetizando pioleínas se
encuentran en toda la matriz citoplasmática sub\¡ícenle. F.n la parle
inferior se observa el nucleoide con su densa maraña tic l)\.\ y
proteínas asociadas.
54 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

ejemplo es el de los magnetosomas, utilizado por algunas


bacterias para orientarse según el campo magnético terres-
tre. Estos cuerpos de inclusión contienen hierro en forma de
magnetita (Recuadro 3.3).

Figura 3.11 Estructura de una célula Gram positiva típica.


Microfotografía electrónica de Bacillus megaterium (x 30 500).
Obsérvense la gruesa pared celular, PC; «el mesosoma», M; el
nucleoide, N; el cuerpo de inclusión de poli-p-hidroxibutirato, PHB; la
membrana plasmática, MP; y los ribosomas, R.

gas no contiene lípidos y está compuesta únicamente por


pequeñas proteínas. Concretamente, se trata de la repetición
de un único tipo proteico conformando un cilindro rígido
que es hueco e impermeable al agua, pero totalmente per-
meable a los gases atmosféricos. Las bacterias con vacuolas
de gas pueden regular su flotabilidad para permanecer en la
profundidad necesaria para obtener una intensidad de luz,
concentración de oxígeno y niveles de nutrientes adecuados.
La bacteria desciende tras el colapso de las vesículas, y flo-
tan hacia arriba cuando se forman otras nuevas.
Se han observado dos clases importantes de cuerpos de
inclusión inorgánicos. Muchas bacterias acumulan fosfato
como granulos de polifosfato o granulos de volutina
(Figura 3.13a). El polifosfato es un polímero lineal de orto-
fosfatos unidos por enlaces éster. Así, los granos de volutina
actúan como reservas de fosfato, un componente importante
de los constituyentes celulares, como los ácidos nucleicos.
En algunas células, actúan como reserva y fuente de energía
directa para reacciones químicas. Estos granulos se denomi-
nan a veces granulos metacromáticos porque muestran un
efecto metacromático; esto es, aparecen de un color rojo o
de una gama diferente de azul, cuando se tifien con los colo-
rantes azul de metileno o azul de toluidina. Algunas bacte-
rias acumulan también temporalmente azufre en granulos
de azufre, un segundo tipo de cuerpo de inclusión inorgáni-
co (Figura 3.13b). Por ejemplo, las bacterias púrpuras foto-
sintéticas pueden utilizar sulfuro de hidrógeno como dador
de electrones en la fotosísntesis (véase la sección 9.11) y
Figura 3.12 Vesículas de gas y vacuolas, (a) Filamentos de la
acumulan el azufre restante en el espacio periplásmico o en
cianobacteria Anabaena flos-aquae al microscopio óptico, (b)
estos granulos citoplasmáticos especiales. Preparación por criofractura de Anabaena flos-aquae (x 89 000).
Los cuerpos de inclusión inorgánicos pueden utilizarse Racimos de vesículas en forma de puro forman las vacuolas de gas.
para otros propósitos diferentes al de reserva. Un excelente Pueden observarse cortes, tanto longitudinales como transversales, de
vesículas de gas.
3.4 El nucleoide 55

son sintetizados, o bien, inmediatamenmte después de su


síntesis. La forma final de cada proteína viene determinada
por su secuencia de aminoácidos. Proteínas especializadas
denominadas chaperonas moleculares, o chaperonas, ayu-
dan a conseguir el plegamiento apropiado. La síntesis de
proteínas, incluida una descripción detallada de los riboso-
mas, se expondrá ampliamente en el Capítulo 12.
Recuerde que los ribosomas de procariotas son más
pequeños que los de eucariotas. Se denominan comúnmente
ribosomas 70S, tienen un tamaño de aproximadamente 14-
15 nm por 20 nm, un peso molecular de aproximadamente
2.7 millones y están constituidos por subunidades de 50S y
de 30S (unidades Svedberg). La unidad Svedberg es la uni-
dad del coeficiente de sedimentación, medida de la veloci-
dad de sedimentación en una centrífuga; cuanto mayor sea
la velocidad de desplazamiento de una partícula al ser cen-
trifugada, mayor será su valor Svedberg, o coeficiente de
sedimentación. Este coeficiente depende del peso molecular,
volumen y forma de la partícula {véase la Figura 16.7). Las
partículas más pesadas y compactas suelen tener normal-
mente valores de coeficiente de sedimentación o unidades
Svedberg superiores. Los ribosomas de la matriz citoplas-
mática de las células eucariotas son de 80S y con un diáme-
tro de aproximadamente 22 nm. A pesar de las diferencias
generales en tamaño, ambos ribosomas están compuestos de
forma similar, por una subunidad grande y otra pequeña.

1. Describa brevemente la naturaleza y función de la matriz


citoplasmática y de los ribosomas. ¿Qué es un protoplasto?
2. ¿Qué clases de cuerpos de inclusión poseen los
procariotas? ¿Cuáles son sus funciones?
Figura 3.13 Cuerpos de inclusión en bacterias, (a) infraestructura
de la cianobacteria Anacystis nidulans. La bacteria se está dividiendo y 3. ¿Qué es una vacuola de gas? Explique su estructura y
se ha formado parcialmente un septo, LI y LII. Pueden observarse función.
varias estructuras características, incluyendo capas de la pared celular,
Lili y LIV; la membrana plasmática, mp; granulos de polifosfato, pf;
un cuerpo poliédrico, cp; y material de cianoficina, c. Los tilacoides se
distribuyen a lo largo de la célula. Barra = 0.1 um. (b) Chromatium
vinosum, bacteria púrpura del azufre, con granulos intracelulares de 3.4 El nucleoide
azufre; campo claro (x 2000).
Probablemente, la diferencia más característica entre orga-
nismos procariotas y eucariotas es la forma de organización
del material genético. Las células eucariotas tienen dos o
Ribosomas
más cromosomas dentro de un organulo delimitado por una
membrana, el núcleo. Por el contario, las procariotas care-
Como se ha mencionado anteriormente, la matriz citoplas-
cen de un núcleo limitado por membrana. El cromosoma
mática contiene numerosos ribosomas; éstos también pue-
procariótico, casi siempre constituido por un único círculo
den encontrarse adheridos débilmente a la membrana plas-
de doble cadena de ácido desoxirribonucleico (DNA), está
mática. En microfotografías electrónicas de pocos aumentos,
irregularmente distribuido en una zona amplia denominada
los ribosomas aparecen como partículas pequeñas, sin carac-
nucleoide (se emplean también otros términos: cuerpo
terísticas distintivas (Figura 3.J 1), pero son realmente obje-
nuclear, cuerpo de cromatina, región nuclear). Normalmen-
tos muy complejos, compuestos de proteínas y de ácido
te, los procariotas contienen un único anillo de doble hebra
ribonucleico (RNA). Son el lugar de la síntesis de proteínas;
de ácido desoxirribonucleico (DNA), aunque algunos tie-
los ribosomas de la matriz citoplasmática sintetizan proteí-
nen un cromosoma linear (p. ej., Borrelia burgdorferi), y
nas destinadas a permanecer dentro de la célula, mientras
otros, más de un cromosoma (p. ej., Vibrio cholerae, Bruce-
que los ribosomas de la membrana plasmática elaboran pro-
lla y Agrobacterium, entre otros). Aunque el aspecto del
teínas que son transportadas al exterior. Los recién formados
nucleoide varía según el método de fijación y tinción, a
polipéptidos se pliegan en su forma final tan pronto como
56 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

Imanes vivos
as bacterias pueden responder a otros factores ambienta-
pirita (FeS2). Como cada partícula de hierro es un pequeño imán,
les, además de a sustancias químicas. Un ejemplo fasci-
las bacterias utilizan su cadena de magnetosomas para orientar
nante es cómo las bacterias magnetotácticas acuáticas
las direcciones norte y sur, y así nadar hacia los sedimentos ricos
se orientan por sí mismas en el campo magnético
en nutrientes o a la profundidad óptima en habitat de agua dulce
terrestre. La mayoría de estas bacterias tiene cadenas
o marinos. También se encuentran magnetosomas en la cabeza
intracelulares de partículas magnéticas (Fe3O4), o magnetosomas,
con un diámetro de aproximadamente 40 a 100 nm y rodeadas de aves, atunes, delfines, tortugas verdes y otros animales, posi-
por una membrana (véase la figura del recuadro). Algunas blemente como ayuda para la navegación. Los animales y las
especies que viven en habitat sulfurosos poseen magnetosomas bacterias comparten más características de comportamiento de lo
con greigita (Fe3S4) y que anteriormente se pensaba.

Bacterias magnetotácticas. (a) Microfotografía electrónica de


transmisión de la bacteria Aquaspirillum magnetotacticum
(x 123 000). Obsérvese la larga cadena electrodensa de partículas
de magnetita, PM. Otras estructuras: ME, membrana externa;
EP, espacio periplásmico; MC, membrana citoplasmática.
(b) Magnetosomas aislados (x 140 000). (c) Bacterias migrando
en oleadas al ser sometidas a un campo magnético.
3.5 La pared de las células procariotas 57

menudo se observan fibras en microfotografías electrónicas var membranas unidas a nucleoides aislados. Son pruebas de
(Figura 3.11 y Figura 3.14) que probablemente se traten de la unión del DNA bacteriano a las membranas celulares, que
DNA. El nucleoide es visible también con el microscopio podrían participar en la separación del DNA para su trans-
óptico, después de teñir la preparación con la técnica de misión a las células hijas durante la división celular.
Feulgen, que reacciona específicamente con DNA. Una Se han aislado nucleoides intactos y libres de membra-
célula puede tener más de un nucleoide cuando se produce nas. Análisis químicos revelan que están compuestos por
la división celular, después de duplicarse el material genéti- casi el 60 % de DNA, algo de RNA y una pequeña cantidad
co (Figura 3.14a). En bacterias que están creciendo activa- de proteínas. En Escherichia coli, célula en forma de bacilo
mente, el nucleoide presenta proyecciones que se extienden de 2 a 6 fim de longitud, el DNA circular mide aproximada-
dentro de la matriz citoplasmática (Figura 3A4b,c). Posible- mente 1400 (xm. Obviamente, éste debe estar muy enrrolla-
mente, estas proyecciones contienen DNA que está siendo do y plegado para que se adapte en el interior del nucleoide
transcrito activamente a mRNA. {véase la Figura 11.8), probablemente lo consigue gracias a
Estudios rigurosos realizados con microscopía electró- la ayuda del RNA y las proteínas del nucleoide (proteínas
nica a menudo revelan al nucleoide en contacto con el meso- diferentes de las histonas del núcleo eucariota).
soma o la membrana plasmática. También se pueden obser- Existen pocas excepciones respecto de la descripción
anterior. Dos géneros de planctomicetos poseen regiones
con DNA limitadas por membrana. Pirellula presenta una
membrana sencilla que rodea una región, pirelusoma, que
contiene un nucleoide fibrilar y partículas semejantes a ribo-
somas. El cuerpo nuclear de Gemmata obscuriglobus está
rodeado por dos membranas (véase la Figura 21.12). Es pre-
ciso seguir investigando para determinar las funciones de
estas membranas y hasta qué punto está extendido este fe-
nómeno. El ciclo y la división de la célula (pp. 307-308). DNA
procariótico y su función (Capítulos 11 y 12).
Numerosas bacterias poseen plásmidos, además de su
cromosoma. Se trata de moléculas circulares, de doble cade-
na de DNA, que pueden existir y replicarse independiente-
(a) mente del cromosoma o pueden integrarse en éste; en cual-
quier caso, son heredados por las células hijas. Sin embargo,
los plásmidos no están normalmente unidos a la membrana
plasmática, por lo que, a menudo, durante la división celular
una de las células hijas no lo adquiere. Los plásmidos no son
necesarios para el crecimiento y la multiplicación del hués-
ped, aunque pueden llevar genes que aportan a la bacteria
huésped una ventaja selectiva. Los genes plasmídicos pue-
den conferir a las bacterias resistencia a fármacos, nuevas
capacidades metabólicas, transformarlas en patógenas o
dotarlas de otras numerosas propiedades. Frecuentemente,
se produce lo que se denomina «transferencia horizontal» de
plásmidos entre bacterias, facilitándose que algunas caracte-
rísticas se extiendan fácilmente entre la población bacteria-
na, como por ejemplo la resistencia a fármacos. Plásmidos
(pp. 316-319).

1. Caracterice el nucleoide respecto a su estructura y función.


(c) 2. ¿Qué es un plásmido?
Figura 3.14 El nucleoide bacteriano, (a) Nucleoides en células de
Bacillus teñidas con HCl-Giemsa y observadas con microscopio
óptico (barra = 5 um). (b) Sección de E. coli en crecimiento activo,
inmunodetección para observar específicamente DNA, examinado con
microscopio electrónico de transmisión. La transcripción y la 3.5 La pared de las células procariotas
traducción se producen en partes del nucleoide que se extienden hacia
el citoplasma, (c) Modelo de dos nucleoides en una célula de E. coli
en crecimiento activo. Obsérvese que el nucleoide metabólicamente
La pared celular es la capa, normalmente muy rígida, que se
activo no es compacto ni esférico, sino que posee proyecciones que se encuentra justo por encima de la membrana plasmática. Es
extienden en la matriz citoplasmática. una de las partes más importantes de una célula procariota
58 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

por varias razones. Salvo algunos micoplasmas {véase la Con frecuencia, en microfotografías electrónicas, se
sección 23.1) y algunas Archaea {véase el Capítulo 20), la observa un espacio entre la membrana plasmática y la exter-
mayoría de las bacterias tienen una fuerte pared que les da na de bacterias Gram negativas, y a menudo se puede obser-
forma y protege de la lisis osmótica (p. 64); tanto la forma var un espacio similar, pero más pequeño, entre la membrana
como la integridad de la pared celular se deben fundamen- plasmática y la pared celular en bacterias Gram positivas.
talmente al peptidoglicano, como se mostrará más adelante. Este espacio se denomina espacio periplásmico. Estudios
La pared celular de muchos microorganismos patógenos tie- recientes han demostrado que este espacio está ocupado por
nen componentes que contribuyen a su patogenicidad. La el entramado de peptidoglicano. Posiblemente, se trate de un
pared puede proteger a una célula frente a sustancias tóxicas espacio ocupado por un gel, más que por un líquido. La sus-
y es el lugar de acción de varios antibióticos. tancia que ocupa el espacio periplásmico se denomina peri-
Después de que Christian Gram desarrollase la tinción plasma. Las células Gram positivas pueden presentar un
que lleva su nombre, en 1884, se comprobó que las bacterias periplasma aun cuando carezcan de un espacio como tal. El
podían clasificarse en dos grupos principales, según su res- tamaño estimado del espacio periplásmico en bacterias Gram
puesta a este método de tinción {véase la Tabla 19.9). Las negativas varía de 1 nm hasta 71 nm. Algunos estudios
bacterias Gram positivas se tiñen de color morado, mientras recientes han revelado que puede constituir entre el 20 y el
que las Gram negativas adquieren un color rosa a rojo. La 40 %, aproximadamente, del volumen total de la envoltura
diferencia estructural verdadera entre estos dos grupos se celular (30-70 nm de diámetro), pero es preciso seguir inves-
puso de manifiesto con el desarrollo del microscopio elec- tigando para determinarlo con más precisión. Cuando las
trónico de transmisión. La pared de una célula Gram positiva paredes celulares se rompen con cuidado o se extraen sin
está formada por una única capa homogénea, de 20 a 80 nm alterar la membrana plasmática subyacente, se liberan enzi-
de grosor, de peptidoglicano o mureína, situada por enci- mas periplásmicas y otras proteínas. El espacio periplásmico
ma de la membrana plasmática (Figura 3.15). Por el contra- de las bacterias Gram negativas contiene muchas proteínas
rio, la pared de la célula Gram negativa es bastante compleja. que participan en la captación de nutrientes —p. ej., enzimas
Posee una capa de peptidoglicano (2-7 nm de grosor), hidrolíticas frente a ácidos nucleicos y moléculas fosfori-
rodeada por una membrana externa (7-8 nm). Precisamente ladas, y proteínas ligadoras que participan en el transporte
debido a su gruesa capa de peptidoglicano, la pared celular de sustancias hacia el interior de la célula—. Las bacterias
de las bacterias Gram positivas es más fuerte que la de las desnitrificadoras y quimiolitoautotrofas {véanse las seccio-
Gram negativas. En ocasiones, los microbiólogos deno- nes 9.6 y 9.10) poseen a menudo proteínas transportadoras
minan envoltura o envoltura celular a todas las estructuras de electrones en su periplasma. El espacio periplásmico con-
exteriores; éstas incluyen la pared y estructuras como cáp- tiene también enzimas que participan en la síntesis del pepti-
sulas {p. 65), cuando existen. Método de tinción de Gram doglicano y en la modificación de compuestos tóxicos que
(P- 29). podrían lesionar a la célula. Es posible que las bacterias

Figura 3.15 Paredes celulares de células Gram positivas y Gram negativas. La microfotografía de la envoltura Gram positiva corresponde a
Bacillus licheniformis (izquierda), y la de la célula Gram negativa es de Aquaspirillum serpens (derecha). PG, capa de peptidoglicano o mureína;
ME, membrana externa; MP, membrana plasmática; EP, espacio periplásmico.
3.5 La pared de las células procariotas 59

Gram positivas no tengan un espacio periplásmico tan visi-


ble, ni tengan tantas proteínas periplásmicas; más bien,
secretan varias enzimas, que serían normalmente periplásmi-
cas en bacterias Gram negativas. Estas enzimas secretadas se
denominan a menudo exoenzimas. Algunas enzimas perma-
necen en el periplasma asociadas a la membrana plasmática.
El dominio Archaea se diferencia de otros procariotas
por muchos motivos (véase el Capítulo 20). Aunque tinto-
rialmente pueden ser tanto Gram positivas como Gram
negativas, sus paredes celulares son distintivas en cuanto a
estructura y composición química; carecen de peptidoglica-
no y están constituidas por proteínas, glicoproteínas o
polisacáridos.
Después de este resumen sobre la envoltura celular, se
describen a continuación la estructura del peptidoglicano y
la organización de la pared celular en las bacterias Gram
positivas y Gram negativas.

Estructura del peptidoglicano


El peptidoglicano o mureína es un gran polímero compuesto
por muchas subunidades idénticas. El polímero contiene dos
derivados de azúcar, /V-acetilglucosamina y ácido /V-acetil-
murámico (éter lactilo de A/-acetilglucosamina) y varios
aminoácidos, tres de los cuales —ácido D-glutámico, D-ala-
nina y ácido meso-diaminopimélico— no están presentes en
las proteínas. La presencia de D-aminoácidos protege frente
a la mayoría de peptidasas. La subunidad de peptidoglicano
que normalmente se encuentra en las bacterias Gram nega-
tivas y muchas de las Gram positivas se muestra en la Figu-
ra 3.16. El esqueleto de este polímero está constituido por
residuos alternantes de A/-acetilglucosamina y ácido A/-ace~ Figura 3.16 Composición de la subunidad del peptidoglicano.
Subunidad del peptidoglicano de Escherichia coli, y de la mayoría del
tilmurámico. Una cadena peptídica de cuatro aminoácidos resto de bacterias Gram negativas y de muchas Gram positivas. NAG es
D- y L- alternantes está conectada a un grupo carbóxilo del A'-acetilglucosamina; NAM es /V-acetilmurámico (NAG con ácido
ácido /V-acetilmurámico. Muchas bacterias sustituyen la L- láctico unido por un enlace éter). La cadena lateral tetrapeptídica está
compuesta por aminoácidos D- y L- alternantes; el ácido meso-
lisina de la tercera posición por otro diaminoácido, el ácido diaminopimélico está unido a través de su carbono L. NAM y la cadena
OTeso-diaminopimélico (Figura 3.17). Resumen de la química tetrapeptídica a la que está unido se representan con diferentes gamas de
de las moléculas biológicas (Apéndice I); Variaciones en la color para mayor claridad.
estructura del peptidoglicano (pp. 562-564).
Las cadenas de subunidades de peptidoglicano están
entrecruzadas por sus péptidos. A menudo, el grupo carbó-
xilo de la D-alanina terminal de una mureína está conectado
Pared celular de las bacterias Gram positivas
directamente al grupo amino del ácido diaminopimélico de
Normalmente, la gruesa pared celular de las bacterias
una mureína de otra cadena paralela, pero en otras ocasiones
Gram positivas está constituida principalmente por peptido-
se puede emplear en su lugar un interpuente peptídico
glicano, cuyas mureínas a menudo están entrelazadas por
(Figura 3.18). La mayoría de los peptidoglicanos de las
puentes peptídicos (Figura 3.20 y Figura 3.21). Sin embar-
bacterias Gram negativas carece de este tipo de puente. Este
go, estas células contienen también una gran cantidad de
entrecruzamiento produce un saco de peptidoglicano de
ácidos teicoicos, polímeros de glicerol y ribitol unidos por
gran tamaño, que realmente es una malla densa, interconec- grupos fosfato (Figuras 3.21 y 3.22). Aminoácidos como
tada (Figura 3.19). Se han aislado estas mallas en bacterias D-alanina o azúcares como glucosa están unidos a los gru-
Gram positivas y son lo suficientemente fuertes como para pos glicerol y ribitol. Los ácidos teicoicos pueden estar
mantener su forma e integridad (Figura 3.20), aunque son unidos al peptidoglicano mediante un enlace covalente con
elásticos y pueden estirarse en cierto grado, al contrario que el hidroxilo seis del ácido A/-acetilmurámico, o bien, a los
la celulosa. También, deben ser porosos, para que puedan lípidos de la membrana plasmática; en este último caso, se
atravesarlos las moléculas.
Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota
60

Figura 3.17 Diaminoácidos presentes en un peptidoglicano.


(a) L-Lisina. (b) Ácido me.so-Diaminopimélico.

denominan ácidos lipoteicoicos. Los ácidos teicoicos pare-


ce que se extienden hasta la superficie del peptidoglicano
y, como están cargados negativamente, contribuyen a dotar
a la pared celular de su carga negativa. Las funciones de
estas moléculas están todavía por aclarar, pero pueden ser
fundamentales para mantener la estructura de la pared. Los
ácidos teicoicos no están presentes en las bacterias Gram
negativas.

(b)
Figura 3.19 Estructura del peptidoglicano. Segmento de
peptidoglicano que muestra las cadenas de polisacáridos, cadenas
laterales tetrapeptídicas y puentes peptídicos. (a) Diagrama
esquemático, (b) Modelo tridimensional compacto de la mureína en una
célula Gram negativa con cuatro subunidades repetidas de
peptidoglicano en el plano del papel. Dos cadenas están ordenadas
verticalmente a este plano.

Figura 3.18 Entrecruzamientos en el peptidoglicano.


(a) Peptidoglicano de E. coli con enlace directo, típico de muchas
bacterias Gram negativas, (b) Peptidoglicano de Staphylococcus
aureus (bacteria Gram positiva) mostrando un entrecruzamiento con
puente peptídico. NAM es ácido W-acetilmurámico; NAG, N- Figura 3.20 Pared celular aislada de una bacteria Gram positiva.
acetilglucosamina; Gly, glicina. Aunque se representan las cadenas de Pared de peptidoglicano de Bacillus megaterium, bacteria Gram
polisacáridos una enfrente de otra, también puede producirse estos positiva. Las esferas de látex tienen un diámetro de 0.25 jj,m.
entrecruzamientos entre cadenas paralelas (véase la Figura 3.19).
3.5 La pared de las células procariotas 61

Figura 3.21 Envoltura de una bacteria


Gram positiva.

Pared celular de las bacterias Gram negativas constituye más del 5 al 10% de todo el peso de la pared. En
E. coli, es de unos 2 nm de grosor, y está formada sólo por
Incluso una observación rápida de la Figura 3.15 revela que una o dos capas de peptidoglicano.
la pared celular de las bacterias Gram negativas es mucho La membrana externa está situada por fuera de la capa
más compleja que la de las Gram positivas. La capa delgada fina de peptidoglicano (Figuras 3.23 y 3.24). La proteína de
de peptidoglicano, próxima a la membrana plasmática no membrana más abundante es la lipoproteína de Braun, una
pequeña lipoproteína unida covalentemente al peptidoglica-
no subyacente, e incluida en la membrana externa por su
extremo graso hidrofóbico. La membrana externa y el pepti-
doglicano están tan firmemente unidos por esta lipoproteína
que pueden aislarse como una unidad.
Otra estructura que puede dar resistencia a la pared
Gram negativa y mantener la membrana externa en su posi-
ción es el lugar de adhesión. Las membranas externa y plas-
mática parece que están en contacto directo en muchos luga-
res en la pared Gram negativa. En células plasmolizadas de
E. coli, se han observado áreas de contacto de 20 a 100 nm
entre las dos membranas. Los lugares de adhesión pueden
ser regiones de contacto directo o posiblemente, de verdade-
ras fusiones de membrana. Se ha propuesto que las sustan-
cias pueden desplazarse al interior de la célula a través de
estos lugares de adhesión, en lugar de viajar a través del
periplasma.
Posiblemente, los constituyentes más inusuales y
característicos de la membrana externa sean sus lipopolisa-
cáridos (LPS). Estas moléculas grandes y complejas con-
tienen tanto lípidos como hidratos de carbono, y están for-
madas por tres partes: 1) lípido A, 2) polisacárido central o
core, y 3) cadena lateral O. No existe una estructura de LPS
universal, el LPS que más se ha estudiado es el de Salmone-
Figura 3.22 Estructura del ácido teicoico. Fracción de ácido lla typhimurium, cuya estructura se describe en este texto
teicoico constituido por fosfato, glicerol y una cadena lateral, R. R (Figura 3.25). La región del lípido A contiene dos deriva-
puede representar D-alanina, glucosa u otras moléculas.
62 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

Figura 3.24 Modelo químico de la membrana externa y estructuras asociadas de E. coli. Corte transversal a escala. La porina OmpF tiene dos
canales en el frente (flechas negras), y uno por detrás (flecha blanca) del complejo proteico trímerico. Las moléculas de LPS pueden ser más largas
que las representadas en la figura.
3.5 La pared de las células procariotas 63

Figura 3.25 Estructura de un lipopolisacárido. (a) Lipopolisacárido de Salmonella. Este diagrama, ligeramente simplificado, ilustra una forma
de LPS. Abreviaturas: Abe, abecuosa; Gal, galactosa; Glu, glucosa; GlcN, glucosamina; Hep, heptulosa; KDO, 2-ceto-3-desoxioctulosónico; Man,
mañosa; NAG, /V-acetilglucosamina; P, fosfato; Rha, L-ramnosa. (b) Modelo molecular del lipopolisacárido de E. coli. En este modelo, el lípido A y
el core se han representado rectos; la cadena lateral O está en ángulo.

dos del azúcar glucosamina, cada uno de ellos está unido a sacárido central contiene normalmente azúcares cargados y
tres ácidos grasos y grupos fosfato o pirofosfato. El lípido fosfato (Figura 3.25). El LPS facilita la estabilización de la
A se encuentra inserto en la membrana externa, mientras estructura de la membrana. Además, el lípido A es a menu-
que el resto de la molécula de LPS sobresale de la superfi- do tóxico, como consecuencia, el LPS puede actuar como
cie. Un polisacárido central denominado core está unido al una endotoxina (véase la sección 34.3) y causar algunos de
lípido A. En Salmonella, está formado por 10 azúcares, los síntomas que se desarrollan en las infecciones por bacte-
muchos de ellos con una estructura poco corriente. La rias Gram negativas.
cadena lateral O o antígeno O es una cadena polisacarídi- Una de las funciones más importantes de la membrana
ca más o menos larga que se extiende hacia fuera del externa es servir como barrera protectora. Evita o disminuye
núcleo. Puede poseer azúcares peculiares, variando la com- la entrada de sales biliares, antibióticos y otras sustancias
posición según la cepa bacteriana. Aunque las cadenas late- tóxicas que podrían destruir o lesionar a la bacteria. Tam-
rales O son fácilmente reconocibles por los anticuerpos del bién, la membrana externa es incluso más permeable que la
huésped, las bacterias Gram negativas pueden incapacitar plasmática y permite el paso de moléculas pequeñas, como
las defensas del huésped cambiando rápidamente la natura- glucosa y otros monosacáridos. Esto se debe a la presencia
leza de sus cadenas laterales O para evitar su detección. La de proteínas porinas (Figuras 3.23 y 3.24). Se agrupan tres
interacción de los anticuerpos con el LPS, antes de alcanzar moléculas de porina y se extienden a través de la membrana
la membrana externa propiamente dicha, puede también externa para formar un canal estrecho a través del cual pue-
proteger a la pared celular frente a un ataque directo. Anti- den pasar moléculas menores de 600 a 700 dalton. Molécu-
cuerpos y antígenos (Capítulos 32 y 33). las mayores, como la vitamina B12, pueden transportarse a
El LPS es importante por varias razones, además de las través de la membrana externa mediante transportadores
ya mencionadas de defensa frente al huésped. Contribuye a específicos. La membrana externa evita también la pérdida
la carga negativa de la superficie bacteriana, ya que el poli- de constituyentes como las enzimas periplásmicas.
64 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

Mecanismo de la tinción de Gram los solutos están más concentrados que en la célula, por ello,
el agua fluye hacia fuera y el citoplasma se contrae. Este
Aunque se han propuesto varias explicaciones sobre el fun- fenómeno se denomina plasmólisis y es útil en la conserva-
damento de la tinción de Gram, parece probable que la dife- ción de alimentos, pues muchos microorganismos no pueden
rencia entre las bacterias Gram negativas y Gram positivas crecer en alimentos secos y jaleas, al no poder evitar la deshi-
se deba a la naturaleza física de sus paredes celulares. Si la dratación (véanse las pp. 128-131, Capítulo 41).
pared celular se elimina en las bacterias Gram positivas, La importancia de la pared celular en la protección bac-
éstas se convierten en Gram negativas. El peptidoglicano no teriana frente a la lisis osmótica se ha demostrado al tratarlas
se tiñe propiamente, más bien, parece que actúa como barre- con lisozima o penicilina. La enzima lisozima ataca al pep-
ra de permeabilidad para evitar la pérdida de cristal violeta. tidoglicano, al hidrolizar el enlace que une el ácido /V-acetil-
Durante el proceso, las bacterias se tiñen primero con cristal murámico con el carbono cuatro de la N-acetilglucosamina.
violeta, y luego se tratan con yoduro para favorecer la reten- La penicilina inhibe la síntesis del peptidoglicano (véase la
ción del colorante. Cuando a continuación se decoloran las sección 35.6). Si se incuban bacterias con penicilina en una
bacterias Gram positivas con etanol-acetona, se cree que el solución isotónica, las bacterias Gram positivas se convier-
alcohol contrae los poros de la gruesa capa de peptidogli- ten en protoplastos, sin pared celular, pero en medios isotó-
cano. En consecuencia, el complejo colorante-yodo no es nicos pueden continuar creciendo. Las células Gram negati-
eliminado durante la fase de decoloración y las bacterias vas conservan la membrana externa después del tratamiento
continuarán de color morado. Por el contrario, la capa de con penicilina y se denominan esferoplastos porque conser-
peptidoglicano de las bacterias Gram negativas es muy fina, van parte de su pared celular. Los protoplastos y esferoplas-
sin tantos enlaces y con poros de mayor tamaño, además, tos son osmóticamente sensibles. Si se transfieren a una
también es posible que el tratamiento con alcohol extraiga solución diluida se Usarán debido a la entrada descontrolada
suficientes lípidos de la envoltura de las células Gram nega- de agua (Figura 3.26).
tivas, como para aumentar su porosidad. Por estos motivos, Aunque la mayoría de las bacterias precisan de una
el alcohol elimina más fácilmente el complejo cristal viole- pared celular intacta para sobrevivir, algunas carecen de ella
ta-yodo en las bacterias Gram negativas. por completo. Por ejemplo, los micoplasmas no la tienen,
aunque pueden crecer en medios diluidos o ambientes
terrestres porque su membrana plasmática es más resistente
de lo normal. Se desconoce la razón exacta de ello, aunque
La pared celular y protección osmótica
la presencia de esteróles en las membranas de muchas espe-
cies puede ofrecer una resistencia añadida. Sin una pared
La pared celular es necesaria normalmente para proteger a celular rígida, los micoplasmas tienden a ser pleomórficos,
las bacterias frente a la destrucción por presión osmótica.
variables en cuanto a forma.
Los solutos están mucho más concentrados en el citoplasma
bacteriano que en la mayoría de habitat microbianos, que son
hipotónicos. Durante la osmosis, el agua se desplaza a través
1. Describa con detalle la composición y la estructura del
de membranas selectivamente permeables, como la membra- peptidoglicano, y de la pared celular de las bacterias Gram
na plasmática, desde soluciones diluidas (concentración, positivas y Gram negativas. Incluya diagramas con
mayor de agua) a soluciones más concentradas (concentra- leyendas en la respuesta.
ción menor de agua). Por ello, el agua entra normalmente en 2. Defina o describa los siguientes términos: membrana exter
las células bacterianas, y la presión osmótica puede alcanzar na, espacio periplásmico, envoltura, ácido teicoico, lipopo-
20 atmósferas (20 kg/cm2). La membrana plasmática no lisacárido y porina.
podría soportar estas presiones y la célula se hincharía, alte- 3. Explique el papel de la pared celular como protectora frente
rándose físicamente y destruyéndose, proceso denominado a la lisis, y cómo puede demostrarse experimentalmente.
lisis, sin la presencia de la pared, que resiste la hinchazón ¿Qué son los protoplastos y esferoplastos?
celular y la protege. Por el contrario, en habitat hipertónicos

Figura 3.26 Formación de un protoplasto. Formación de un protoplasto inducida por incubación con penicilina en un medio isotónico. La
transferencia a un medio diluido producirá su lisis.
3.6 Componentes externos a la pared celular 65

3.6 Componentes externos a la pared celular


Las bacterias tienen una variedad de estructuras fuera de la
pared celular que sirven para proteger a la célula, fijarla a
objetos o permitir su desplazamiento. A continuación, se
describen algunas de estas estructuras.

Cápsulas, «slime» y capas S

Algunas bacterias poseen una capa de material fuera de la


pared celular. Cuando una capa está bien organizada y no se
elimina fácilmente, se denomina cápsula. «Slime» es una
capa de material difuso, no organizado, que se puede elimi-
nar fácilmente. El glicocálix (Figura 3.27) es una red de
polisacáridos que se extiende desde la superficie de las bac-
terias y otras células (en este sentido, englobaría los térmi-
Figura 3.28 Glicocálix bacteriano. Las bacterias se conectan entre
nos cápsula y «slime»). Las cápsulas y el «slime» están sí y con la pared intestinal por sus glicocálices, redes de fibras que se
compuestos normalmente por polisacáridos, pero pueden extienden desde las células (x 17 500).
estar constituidas por otros materiales. Por ejemplo, Bacillus
anthracis posee una cápsula de ácido poli-D-glutámico. Las
cápsulas son claramente visibles con el microscopio óptico
cuando se emplean tinciones negativas o especiales para Aunque las cápsulas no son necesarias para el creci-
cápsulas (Figura 3.27a), pero se pueden estudiar también miento y multiplicación bacterianas en cultivos de laborato-
con el microscopio electrónico (Figura 3.27b). rio, confieren varias ventajas a las bacterias cuando éstas
crecen en su habitat normal. Les ayudan a resistir la fagoci-
Figura 3.27 Cápsulas bacterianas, (a) Klebsiella pneumoniae con
tosis por células fagocíticas. Streptococcus pneumoniae es
su cápsula teñida para poder observarla con el microscopio óptico (x
1500). (b) Glicocálix (gli) deBacteroides, MET (x71 250). un ejemplo clásico. Cuando carece de cápsula se destruye
fácilmente y no causa enfermedad, mientras que la variante
capsulada mata rápidamente a ratones infectados. La cápsu-
la contiene una gran cantidad de agua y puede proteger a las
bacterias frente a la desecación. Evitan los virus bacterianos
y la mayoría de los materiales tóxicos hidrofóbicos, como
detergentes. El glicocálix ayuda también a las bacterias a
fijarse a objetos sólidos en medios acuáticos, o a superficies
tisulares en huéspedes vegetales y animales (Figura 3.28).
Las bacterias deslizantes a menudo producen un «slime»
que le ayuda en su movilidad {véase el Recuadro 21.1). Re-
lación entre polisacáridos de superficie, fagocitosis y colonización
del huésped (Capítulos 31 y 34).
Muchas bacterias Gram positivas y Gram negativas tienen
una capa regularmente estructurada, denominada capa S,
(a) sobre su superficie. Las capas S son también comunes en
Archaea, en las que pueden constituir la única estructura de
pared, fuera de la membrana plasmática. La capa S tiene un
modelo estructural similar a la distribución de baldosas en
un suelo y está compuesta por proteínas y glicoproteínas
(Figura 3.29). En las bacterias Gram negativas, la capa S se
adhiere directamente a la membrana externa; en las Gram
positivas, está asociada con la superficie del peptidoglicano.
Puede proteger a la célula frente a fluctuaciones iónicas y de
pH, estrés osmótico, enzimas, o frente a la bacteria depreda-
dora Bdellovibrio (véase la sección 22.4). La capa S ayuda
también a mantener la forma y rigidez de la envoltura en, al
menos, algunas células bacterianas. Puede facilitar la adhe-
sión a superficies. Finalmente, esta capa parece que protege
66 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

gados, compuestos por subunidadés de proteínas organiza-


das helicoidalrnente, de 3 a 10 nm de diámetro, aproximada-
mente, pudiendo alcanzar varios |im de longitud. Algunos
tipos de fimbriae fijan las bacterias a superficies sólidas,
como rocas en riachuelos, y a los tejidos del huésped.
Los pili sexuales (s., pilus) son apéndices similares,
aproximadamente 1 a 10 por célula, que se diferencian de
las fimbriae por lo siguiente. Los pili sexuales son más
anchos que las fimbriae (aproximadamente, de 9 a 10 nm de
diámetro), están determinados genéticamente por factores
sexuales o plásmidos conjugativos, y son necesarios para la
conjugación bacteriana (véase el Capítulo 13). Algunos
virus bacterianos se fijan específicamente a receptores en los
pili sexuales al comienzo de su ciclo de multiplicación.

Flagelos y movilidad

Figura 3.29 Capa S. Microfotografía electrónica de la capa S de


La mayoría de las bacterias móviles se desplazan mediante
Deinococcus radiodurans después de sombrearla. flagelos, apéndices locomotores en forma de hilos que se
extienden hacia fuera de la membrana plasmática y de la
pared celular. Son estructuras delgadas, rígidas, de casi
20 nm de ancho y hasta 15-20 u.m de largo. Los flagelos
a algunos agentes patógenos frente al ataque del comple- son tan delgados que no pueden observarse directamente
mento y de la fagocitosis, contribuyendo con ello a su viru- con un microscopio de campo claro, sino que deben teñirse
lencia.
con técnicas especiales para aumentar su grosor (véase el Ca-
pítulo 2). La estructura detallada de un flagelo puede verse
solamente con el microscopio electrónico (Figura 3.30).
Pili y fimbriae Las especies bacterianas difieren a menudo claramente
por sus modelos de distribución de flagelos. Las bacterias
Muchas bacterias Gram negativas poseen apéndices cortos, monotricas (trichous significa pelo) tienen sólo un flagelo;
finos, similares a pelos, más delgados que los flagelos y que, si se sitúa al final, se denomina flagelo polar (Figura 3.31a).
normalmente, no participan en la movilidad celular. Se Las bacterias anfitricas (amphi significa «en ambos lados»)
denominan fimbriae (s., fimbria). Aunque una célula puede tienen un único flagelo en cada polo. Por el contrario, las
estar cubierta por un número de hasta 1000 fimbriae, sólo
bacterias lofotricas (lopho significa mechón) poseen un
son visibles con el microscopio electrónico debido a su
grupo de flagelos en uno o ambos extremos (Figura 3.31¿>).
pequeño tamaño (Figura 3.30). Aparecen como tubos del-
Los flagelos se distribuyen bastante uniformemente sobre
toda la superficie en las bacterias peritricas (peri significa
«alrededor») (Figura 3.31c). Los modelos de distribución de
los flagelos son muy útiles para identificar las bacterias.

Ultraestructura flagelar

Estudios con el microscopio electrónico de transmisión han


demostrado que el flagelo bacteriano está compuesto por tres
partes. 1) La parte más larga y expuesta es el filamento, que
se extiende desde la superficie celular hasta la punta. 2) El
cuerpo basal, inserto en la célula; y 3) el gancho, un seg-
mento curvado y corto, que une el filamento al cuerpo basal
y actúa como acoplamiento flexible. El filamento es un
cilindro rígido y hueco constituido por una proteína sencilla,
denominada flagelina, cuyo peso molecular varía de 30 000
Figura 3.30 Flagelos y fimbriae. Los flagelos largos y las a 60 000. El filamento acaba en una proteína «capuchón».
numerosas fimbriae cortas son evidentes en esta microfotografía Algunas bacterias tienen vainas rodeando a los flagelos,
electrónica de Proteus vulgaris (x 39 000). como en Bdellovibrio, Helicobacter pylori y Vibrio cho-
3.6 Componentes externos a la pared celular 67

lerae, cuyo flagelo polar está cubierto por una extensión de


la membrana externa.
El gancho y el cuerpo basal son diferentes estructural-
mente al filamento (Figura 3.32). El gancho, ligeramente
más ancho que el filamento, está formado por diferentes
subunidades de proteínas. El cuerpo basal es la parte más
compleja de un flagelo (Figura 3.32 y Figura 3.33). En
E. coli y la mayoría de las bacterias Gram negativas, el cuer-
po tiene cuatro anillos unidos por una vastago central. Los
anillos externos L y P se asocian con las capas de lipopolisa-
cárido y peptidoglicano, respectivamente. El anillo interno
M contacta con la membrana plasmática. Las bacterias Gram
positivas tienen sólo dos anillos en el cuerpo basal, uno
interno en comunicación con la membrana plasmática y otro
externo, unido probablemente a la capa de peptidoglicano.

Síntesis de los flagelos

La síntesis de los flagelos es un proceso complejo en el que


participan al menos de 20 a 30 genes. Además del gen de la
flagelina, 10 o más genes codifican la síntesis de las proteí-
nas del gancho y del cuerpo basal; otros genes controlan la
construcción o función de los flagelos. Se desconoce el
mecanismo por el cual la célula regula o determina la locali-
zación exacta de los flagelos.
Se pueden eliminar los flagelos bacterianos para poder
estudiar la regeneración de los filamentos flagelares. Se
piensa que las subunidades de flagelina son transportadas a
través del núcleo interno del hueco del filamento. Cuando
alcanzan la punta, las subunidades se agregan espontánea-
mente, de manera que el filamento crece por su extremo, en
lugar de por su base (Figura 3.34). La síntesis del filamento
es un ejemplo excelente de autoensamblaje. Muchas otras
estructuras se forman espontáneamente mediante la asocia-
ción de sus partes estructurales, sin la ayuda de enzimas
especiales u otros factores. La información necesaria para
construir un filamento está presente en la propia estructura
de la subunidad de flagelina.

Mecanismo del movimiento flagelar

Los flagelos de procariotas funcionan de distinta forma que


los de eucariotas. El filamento tiene forma de hélice rígida
y la bacteria se mueve cuando esta hélice gira. Numerosas
pruebas han demostrado que los flagelos actúan justo como
las hélices de un barco. Mutantes de bacterias con flagelos
rectos o con ganchos anormalmente largos (mutantes poli-
ganchos) no pueden nadar. Cuando se fijan bacterias a un
portaobjetos de vidrio usando anticuerpos frente a las pro-
teínas del filamento o del gancho, la célula gira rápidamente
sobre el flagelo inmóvil. Si se fijan esferas de poliestire-no-
Figura 3.31 Distribución de flagelos. Ejemplos de varios modelos
látex a los flagelos, éstas giran sobre el eje flagelar
de distribución de flagelos, tal como se observan con el microscopio debido a la rotación del flagelo. El motor del flagelo puede
óptico, (a) Monotrica polar (Pseudomonas). (b) Lofotrica (Spirillum). girar muy rápidamente. El de E. coli gira a 270 revolucio-
(c) Peritrica (Proteus vulgaris, x600). Barras = 5 um.
68 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

Figura 3.32 Ultraestructura de flagelos en


bacterias Gram negativas, (a) Flagelos de
Escherichia coli teñidos negativamente (x 66 000).
Las flechas indican el lugar de los ganchos y de
los cuerpos básales, (b) Vista aumentada del
cuerpo basal de un flagelo de E. coli (x485 000).
Pueden observarse los cuatro anillos (L, P, S y M)
con claridad. La flecha más superior se encuentra
en la unión del gancho con el filamento. Barra =
30 nm.

nes por segundo; el de Vibrio alginolyticus tiene una media cuando el flagelo gira en la dirección de las agujas del reloj.
de 1100 rps. Flagelos de eucariotas y movilidad (pp. 93-95). El giro del filamento helicoidal del flagelo empuja la célula
La dirección de la rotación flagelar determina la naturale- hacia adelante (Figura 3.35). Las bacterias monotricas se
za del movimiento bacteriano. En las bacterias monotricas, el paran y giran al azar, cambiando la dirección de la rotación
flagelo polar gira en dirección contraria a las agujas de un flagelar. Las bacterias flageladas peritricas actúan de forma
reloj (vistas desde fuera de la célula) durante el movimiento similar; para avanzar, los flagelos giran en dirección contraria
normal de avance, mientras que la célula rota lentamente a las agujas de un reloj. Al hacer este movimiento, se doblan

(a) (b)

Figura 3.33 Ultraestructura de los flagelos bacterianos. Cuerpo basal y gancho de un flagelo en bacterias Gram negativas (a) y Gram positivas (b).
3.6 Componentes externos a la pared celular 69

Figura 3.34 Crecimiento de los filamentos flagelares. Las subunidades de flagelina viajan a través del núcleo hueco del flagelo y se fijan al
extremo en crecimiento.

por sus ganchos para formar un haz giratorio que impulsa a Como las bacterias nadan por rotación de sus flagelos
las células hacia delante. La rotación de los flagelos en senti- rígidos, debe existir una especie de motor en su base. Un
do de las agujas de un reloj altera el haz y la célula da un giro. vastago se extiende desde el gancho hasta e] anillo M, que
puede girar libremente en la membrana plasmática (Figura
3.36). Se piensa que el anillo S está unido a la pared
celular en bacterias Gram positivas y no gira. Los anillos
P y L de las bacterias Gram negativas actuarían como
cojinetes del vastago de rotación. Algunas evidencias
apoyan la hipótesis de que el cuerpo basal es una estructu-
ra pasiva y gira dentro de un complejo proteico incluido
en la membrana, más bien como el giro del rotor de un
motor eléctrico en el centro de un anillo de electroimanes
(el estator).
El mecanismo exacto que dirige la rotación del cuerpo
basal está aún por aclarar. La Figura 3.36 nos ofrece una
imagen más detallada del cuerpo basal en bacterias Gram
negativas. La parte correspondiente al rotor estaría formada
primordialmente por el vastago, el anillo M y un anillo C
unido a él sobre la cara citoplasmática del cuerpo basal.
Estos dos anillos están compuestos de proteínas; Fli G es
particularmente importante para generar la rotación flagelar.
Las dos proteínas más importantes del estator del motor son
Mot A y Mot B. Ambas forman un canal de protones a tra-
vés de la membrana citoplasmática, y Mot B fijaría el com-
plejo Mot al peptidoglicano. Algunos experimentos sugieren
que Mot A y Fli G interactúan directamente durante la rota-
ción flagelar. La rotación flagelar en procariotas sería
dependiente del gradiente de protones o sodio, y no del ATP
Figura 3.35 Movilidad flagelar. Relación entre la rotación flagelar y como en eucariotas.
el movimiento bacteriano. Las partes (a) y (b) describen el movimiento El flagelo es un aparato natatorio muy eficaz. Desde el
de bacterias monotricas polares. Las partes (c) y (d) ilustran el
punto de vista bacteriano, la natación es casi una necesidad
movimiento de organismos peritricos.
70 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

1. Describa brevemente: cápsula, capa mucosa, glicocálix y


capa S. ¿Cuáles son sus funciones?
2. Distinga entre fimbriae y pili sexuales y explique la función
de cada uno.
3. Discuta los temas siguientes: modelos de distribución fla
gelar; estructura y síntesis de flagelos; mecanismo por el
' que los flagelos hacen mover a las bacterias.

3.7 Quimiotaxis
Las bacterias no siempre nadan sin sentido, sino que son
atraídas por nutrientes como azúcares y aminoácidos, y
repelidas por muchas sustancias peligrosas y productos resi-
duales bacterianos. (Las bacterias pueden también responder
a otras señales ambientales, como temperatura, luz y grave-
dad; Recuadro 3.3). El movimiento hacia o en contra de sus-
tancias se conoce como quimiotaxis. Este comportamiento
ofrece obviamente ventajas a las bacterias.
La quimiotaxia se puede demostrar observando las bac-
terias en un gradiente químico producido cuando se llena un
tubo fino capilar con un atrayente y se introduce en una sus-
Figura 3.36 Mecanismo del movimiento flagelar. En este diagrama
del flagelo de una bacteria Gram negativa se muestran algunos de los
pensión bacteriana. A medida que el atrayente difunde desde
componentes más importantes del mismo, así como el flujo de el extremo del capilar, las bacterias se agrupan y nadan hasta
protones que dirige la rotación. Se señalan cinco de las numerosas el tubo. El número de bacterias dentro del capilar, después de
proteínas implicadas (Mot A, Mot B, Fli G, Fli M, Fli N). un tiempo corto refleja la fuerza de atracción y el grado de
quimiotaxis. También se puede estudiar la quimiotaxis posi-
tiva y negativa con cultivos en placas de petri (Figura 3.37).
Si se colocan las bacterias en el centro de una placa de agar
porque el agua circundante les parece tan espesa y viscosa nutritivo que contiene un atrayente, aquéllas acabarán el
como la melaza. Si la actividad flagelar cesa, la célula se nutriente local y luego, nadarán hacia delante en favor del
detiene casi instantáneamente. A pesar de esta resistencia gradiente formado por la sustancia atrayente. El resultado es
ambiental al movimiento, las bacterias pueden nadar de 20 un anillo de bacterias en expansión. Cuando se coloca un
a casi 90 |im/segundo. Esto equivale a viajar a una veloci- disco con un repelente en una placa de petri que contiene
dad de 2 a más de 100 veces la longitud celular por segun- agar semisólido y bacterias, éstas nadarán en dirección con-
do. Como ejemplo, una persona de 1.80 m, excepcional- traria al repelente, creando una zona clara alrededor del
mente rápida, podría correr unas 5 veces su altura por disco (Figura 3.38).
segundo. Las bacterias pueden responder a niveles muy bajos de
Las bacterias se pueden mover por otros mecanismos sustancias atrayentes (casi 10~8 M para algunos azúcares),
diferentes a la rotación flagelar. Las espiroquetas y las bac- aumentando la magnitud de su respuesta con la concentra-
terias helicoidales se desplazan en medios viscosos, como el ción del atrayente. Normalmente, sólo detectan la presencia
fango, mediante movimientos de flexión y giro producidos de repelentes a concentraciones elevadas. Si hay un atrayente
por un filamento axial especial (véase la sección 21.6). y un repelente, la bacteria comparará ambas señales y res-
Muchas bacterias emplean tipos de movilidad muy diferen- ponderá a la sustancia química cuya concentración sea más
eficaz.
tes, como por ejemplo la movilidad por deslizamiento: cia-
nobacterias (véase la sección 27.5), mixobacterias (véase la Los atrayentes y los repelentes se detectan por quimio-
sección 22.4), citofagas (véase la sección 21.7), algunos rreceptores, proteínas especiales que se unen a sustancias
micoplasmas (véase la sección 23.1). Algunos fimbriae con- químicas y transmiten señales a otros componentes del siste-
tráctiles y otras estructuras no bien determinadas podrían ma quimiosensor. De momento, se han descubierto unos 20
estar involucrados en estos tipos alternativos de movilidad, quimioatrayentes y 10 quimiorrepelentes. Estas proteínas
que permiten velocidades de deslizamiento por superficies quimiorreceptoras pueden estar situadas en el espacio peri-
sólidas de hasta 3 |im/segundo. Mecanismo de la movilidad plásmico o en la membrana plasmática. Algunos receptores
por deslizamiento (Recuadro 21.1). participan en las fases iniciales del transporte de azúcares al
interior de la célula.
3.7 Quimiotaxis 71

terias tienden a moverse aleatoriamente. Es decir, se produ-


ce una secuencia aleatoria de carreras seguidas de giros. Si
una carrera se produce en un sentido que mejora las condi-
ciones, se suprimen los giros por lo que la bacteria correrá
hacia esa favorable condición ambiental. Se dice que es una
trayectoria basada en el azar pero que en suma va hacia
agentes atrayentes y escapa de repelentes. En definitiva, las
células individuales no escogen una particular dirección,
sino que deciden si continuar o no en la misma dirección.
Se han realizado numerosos trabajos sobre el mecanis-
mo de la quimiotaxis en Escherichia coli. Recuérdese que el
movimiento hacia delante se debe a la rotación del flagelo
en dirección contraria a las agujas de un reloj, mientras que
los giros se producen por la rotación en dirección de las agu-
jas del reloj. Las bacterias deben ser capaces de responder a
gradientes, de tal forma que se agrupen en regiones con
nutrientes y de un nivel adecuado de oxígeno, mientras que
deben evitar materiales tóxicos. E. coli posee cuatro quimio-
rreceptores diferentes que reconocen serina; aspartato y
maltosa; ribosa y galactosa; y dipéptidos, repectivamente.
Estos quimiorreceptores se denominan a menudo proteínas
de quimiotaxis metilaceptoras (PQM). Parece ser que en
Figura 3.37 Quimiotaxis bacteriana positiva. Se puede demostrar la
quimiotaxis sobre un medio de cultivo sólido conteniendo varios bacterias bacilares como E. coli se localizan en los extre-
nutrientes. A la izquierda, quimiotaxia positiva de Escherichia coli. El mos. Las PQM no influyen directamente sobre la rotación
anillo exterior está constituido por bacterias que consumen serina. El flagelar, sino que actúan a través de una serie de proteínas.
segundo anillo se ha formado por E. coli consumidoras de aspartato,
una sustancia con menor poder quimiotáctico. La colonia situada en la
parte superior derecha está constituida por mutantes móviles, pero no
quimiotácticos. La colonia de la parte inferior derecha está formada por
bacterias no móviles.

El comportamiento quimiotáctico de las bacterias se ha


investigado con el microscopio de seguimiento (trazado),
microscopio con una pantalla móvil que permite automáti-
camente mantener en observación una bacteria individual.
En ausencia de un gradiente químico, E. coli y otras bacte-
rias se mueven al azar. Una bacteria se desplaza en línea
recta o ligeramente curva, carrera, durante unos segundos;
luego, para y gira. Este último movimiento continúa con
una carrera en otra dirección (Figura 3.39). Cuando se
expone una bacteria a un gradiente atrayente, gira con
menos frecuencia (o realiza carreras más largas) cuando se
desplaza a favor del gradiente, pero lo hace con una frecuen-
cia normal si se mueve en contra del gradiente. En conse-
cuencia, la bacteria se mueve a favor del gradiente. El com-
portamiento bacteriano depende de cambios temporales en
la concentración química: la bacteria compara su medio
actual con el experimentado momentos antes; si la concen-
tración del atrayente es superior, se suprimen los giros y la
carrera es más larga. La respuesta opuesta se produce con un
Figura 3.38 Quimiotaxis bacteriana negativa. Quimiotaxis negativa
gradiente repelente. El movimiento de giro disminuye (la
de E. coli como respuesta al repelente acetato. Los discos claros son de
carrera se alarga), por consiguiente, la bacteria se desplaza agar conteniendo acetato, colocados en la placa de petri con agar diluido
en dirección contraria al gradiente del repelente. inoculado con E. coli. La concentración de acetato aumenta desde cero,
Aunque la quimiotaxis bacteriana, movimiento dirigido, en la parte superior derecha, hasta 3 M, en la parte superior izquierda.
Obsérvese la correlación entre el aumento de acetato con el incremento
parece una acción deliberada, debemos tener presente que del diámetro de las zonas libres de bacterias. Las bacterias han migrado
no lo es. Cuando el entorno ambiental es constante, las bac- durante 30 minutos.
72 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

1. Defina quimiotaxis, carrera y giros.


2. Explique de forma general la manera en que las bacterias
son atraídas por sustancias como nutrientes, y repelidas por
materiales tóxicos.

3.8 Endospora bacteriana


Diversas bacterias Gram positivas pueden formar una estruc-
tura latente, de especial resistencia, denominada endos-
pora. Las endosporas se desarrollan dentro de células bac-
terianas vegetativas de tan sólo algunos géneros como:
Bacillus y Clostridium (bacilos), y Sporosarcina (cocos).
Estas estructuras son extraordinariamente resistentes a
(b) situaciones estresante ambientales, como calor, radiación
ultravioleta, desinfectantes químicos y desecación. De
Figura 3.39 Movimiento dirigido en bacterias, (a) Movimiento al
hecho, algunas endosporas han permanecido viables durante
azar de una bacteria en ausencia de un gradiente de concentración. La
frecuencia de giros es bastante constante, (b) Movimiento en un unos 100 000 años, habiéndose recuperado vivas endos-
gradiente atrayente. La frecuencia de giros se reduce cuando la bacteria poras de actinomicetos (que no son auténticas endosporas),
se mueve a favor del gradiente. Por ello, las carreras en favor de un después de haber estado enterradas en el barro durante 7500
atrayente en aumento son más largas.
años. Debido a su resistencia y al hecho de que varias espe-
cies de bacterias formadoras de endosporas son agentes
patógenos peligrosos, las endosporas tienen una gran
Todo el proceso es tan eficiente que un estímulo puede dis- importancia en microbiología alimentaria, industrial y
parar una respuesta motora en menos de 200 milésimas de médica. Las endosporas sobreviven a menudo la cocción
segundos. durante una o más horas; por ello, hay que emplear autocla-
Los fundamentos moleculares de la quimiotaxia son ves {véase el Capítulo 7) para esterilizar muchos materia-
bastante complejos. Implica cambios conformacionales de les. Las endosporas tienen también un interés teorético con-
proteínas, metilación y foforilación de proteínas. Cuando un siderable. Como las bacterias producen estas entidades
atrayente, como por ejemplo un nutriente, no se une a una intrincadas de una manera muy organizada, en pocas horas,
PQM, la proteína Che A es forforilada vía ATP. Esta proteí- la formación de endosporas es un tema muy conveniente
na fosforilada puede entonces ceder su fosfato a la proteína para investigar la construcción de estructuras biológicas
Che Y, que interaccionará entonces con Fli M en la base del complejas. En el ambiente, las endosporas permiten la
flagelo para inducir una rotación a favor de las agujas del supervivencia de las bacterias cuando la humedad o los
reloj provocando un giro. Un incremento en la concentra- nutrientes son escasos. Resistencia de endosporas a tempera-
ción de nutrientes facilitará una mayor interacción de PQM turas elevadas (Capítulo 7).
con los mismos, por lo que Che A quedará defosforilada,
Las endosporas se pueden examinar con los microsco-
provocando una rotación en contra de las agujas del reloj, es
pios óptico y electrónico. Como las endosporas son imper-
decir, una carrera. Cuando no se encuentren en el medio ni
meables a la mayoría de los colorantes, a menudo se obser-
atrayentes ni repelentes, el sistema mantiene unos niveles
van como áreas incoloras en bacterias tratadas con azul de
intermedios de Che A fosforilada y Che Y fosforilada, que
metileno y otros colorantes; se han utilizado tinciones espe-
producirá una trayectoria normal aleatoria. En términos muy
generales, el sistema dispone de una proteína sensora que ciales para endosporas con el fin de poder verlas mejor
puede ser fosforilada y entonces ésta fosforile a otra proteí- {véase el Capítulo 2). La'situación de la endospora en la
na para inducir una respuesta. Como veremos más adelante, célula madre, o esporangio, difiere frecuentemente según la
a este sistema se le denomina «sistema fosforilable de dos especie, teniendo por ello un valor considerable en la identi-
componentes». Los detalles moleculares del sistema de qui- ficación. Las endosporas pueden estar situadas centralmen-
miotaxia se describirán en el Capítulo 12, una vez sea discu- te, cerca de un extremo (subterminal), o claramente termina-
tido el sistema general de dos componentes. Por otra parte, les (Figura 3.40). A menudo, una endospora es tan grande
debe destacarse que un sistema similar se utiliza para res- que hincha el esporangio.
ponder a otros factores ambientales como el oxígeno (aero- Microfotografías electrónicas muestran que la estructu-
taxia), luz (fototaxia), temperatura (termotaxia) y presión ra de la endospora es compleja (Figura 3.41). La endospora
osmótica (osmotaxia). Sistemas fosforilables de dos compo- está a menudo rodeada por una capa delicada y delgada,
nentes (pp. 305-307). denominada exosporio. La cubierta de la endospora se
encuentra debajo del exosporio, es responsable de la birre-
3.8 Endospora bacteriana 73

Figura 3.42 Ácido dipicolínico.

aunque se dispone de algunos datos muy sugerentes. Por


ejemplo, tanto como el 15 % del peso seco de la endospora
consiste en ácido dipicolínico formando complejos con
iones de calcio en el protoplasto (Figura 3.42). Desde hace
mucho tiempo se ha creído que el ácido dipicolínico era res-
Figura 3.40 Ejemplos de localización y tamaño de endosporas. ponsable directo de la resistencia al calor de las endosporas,
(a) Endospora central, (b) Endospora subterminal. (c) Endospora aunque recientemente se han aislado mutantes termorresis-
terminal, (d) Endospora terminal con esporangio hinchado.
tentes que carecen de ácido dipicolínico. Es conocido que el
calcio sí que protege frente al calor húmedo, agentes oxidan-
tes e incluso, a veces, frente al calor seco. Quizás, el complejo
fringencia característica en observaciones microscópicas, ya dipicolinato calcico estabilice los ácidos nucleicos de la
que está compuesta por varias capas de proteínas hidrófo- endospora. Recientemente, se han descubierto en endosporas
bas, pudiendo ser bastante gruesa. El córtex, que puede pequeñas proteínas, acidosolubles, ligadas al DNA, que satu-
ocupar tanto como la mitad del volumen celular, descansa ran el DNA de la endospora y la protegen frente al calor, la
debajo de la cubierta de la endospora. Está constituida por radiación, la desecación y las sustancias químicas. La deshi-
un peptidoglicano modificado, con menos enlaces que en dratación del protoplasto parece que es muy importante en la
las células vegetativas. La pared celular de la endospora resistencia al calor. El córtex puede eliminar osmóticamente
se encuentra dentro del córtex y rodea al protoplasto. El agua del protoplasto, y con ello proteger a la célula frente,
protoplasto contiene las estructuras celulares normales tanto al calor como a una lesión por radiación. La cubierta de
como ribosomas y un nucleoide, pero es metabólicamente la endospora también parece protegerla frente a enzimas y
inerte. otros compuestos químicos como el peróxido de hidrógeno.
Aún no se ha determinado con precisión por qué la Por último, las endosporas contienen diversas enzimas de
endospora es tan resistente al calor y a otros agentes letales, reparación del DNA. De esta forma el DNA puede ser repa-
rado durante la germinación una vez que el protoplasto es de
nuevo activo. En resumen, en la termorresistencia de las
endosporas estén probablemente involucrados varios meca-
nismos: estabilización del DNA por dipicolinato calcico y
proteínas acidosolubles, deshidratación del protoplasto, y
una mayor estabilidad de las proteínas en bacterias adaptadas
a crecer a temperaturas elevadas, entre otras.
La formación de endosporas, esporogénesis o esporu-
lación, comienza normalmente cuando cesa el crecimiento
debido a una falta de nutrientes. Se trata de un proceso
complejo y puede dividirse en varias fases (Figura 3.43).
Primero se forma un filamento axial de material nuclear
(fase I), seguido de un plegamiento interno de la membrana
celular para englobar una de las hebras de DNA, formándo-
se el septo de la prespora (fase II). La membrana continúa
creciendo y engloba a la endospora inmadura con una
segunda membrana (fase III). A continuación, se elabora el
córtex en el espacio situado entre las dos membranas,
donde se acumulan tanto calcio como ácido dipicolínico
(fase IV). Después, se forman las cubiertas de proteínas
(fase V), y madura la endospora (fase VI). Finalmente, las
Figura 3.41 Estructura de una endospora. Endospora de Bacillus
enzimas líticas destruyen el esporangio liberando la endos-
anthracis (x 151 000). Obsérvense las siguientes estructuras: pora (fase Vil). La esporulación precisa solamente de 10
exosporio, EX; cubierta de la endospora, CE; córtex, CX; pared del horas en Bacillus megaterium. Regulación de la esporula-
protoplasto, PP; y el protoplasto con su nucleoide, N y los ribosomas, ción en Bacillus (pp. 303, 305-306).
R.
74 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota

Figura 3.43 Formación de una endospora: ciclo vital de Bacülus megateríum. Las fases se señalan con números romanos. Los números de los
círculos indican el número de horas desde el final de la fase logarítmica. 0.25 h: célula vegetativa típica; 4 h: célula en fase II, septación; 5.5 h: célula en
fase III, englobamiento; 6.5 h: célula en fase IV, formación del córtex; 8 h: célula en fase V, formación de la cubierta; 10.5 h: célula en fase VI,
endospora madura en el esporangio. Abreviaturas utilizadas: CX, córtex; MIP y MEP, membranas interna y externa de la prespora, respectivamente; M,
mesosoma; N, nucleoide; S, septo; CE, cubierta de la endospora. Barras = 0.5 |!m.
Resumen 75

germinará satisfactoriamente, incluso en un medio rico en


nutrientes, salvo que haya sido activada. La activación es un
proceso reversible que prepara a las endosporas para su ger-
minación, y se produce normalmente como resultado de tra-
tamientos, como el calentamiento. Está seguida de la germi-
nación, esto es, la finalización del estado de reposo de la
endospora. Este proceso se caracteriza por hinchazón de la
endospora, rotura o absorción de la cubierta de la endospora,
pérdida de resistencia al calor y a otros factores estresantes,
pérdida de la refractilidad o birrefringencia, liberación de
los componentes de la endospora, y aumento de la actividad
metabólica. Muchos metabolitos o nutrientes normales (p. ej.,
aminoácidos y azúcares) pueden desencadenar la germina-
ción después de la activación. La germinación continúa con
la tercera fase, el crecimiento. El protoplasto de la endospo-
ra produce nuevos componentes, emerge a partir de los res-
tos de la cubierta de la endospora y se transforma de nuevo
Figura 3.44 Germinación de la endospora. Clostridiwn en una bacteria activa (Figura 3.44).
pectinovorum emergiendo de la endospora durante la germinación.
Barra = 0.5 Um.

1. Describa la estructura de la endospora bacteriana mediante


un diagrama con leyendas.
Parece que la transformación de endosporas latentes en
2. Describa brevemente la formación y la germinación de la
células vegetativas activas es casi tan compleja como la endospora. ¿Cuál es la importancia de la endospora?
esporogénesis. Se producen tres fases: 1) activación, 2) ger- ¿A qué puede deberse su termorresistencia?
minación, y 3) crecimiento. A menudo, una endospora no

Resumen

1. Las bacterias pueden ser esféricas (cocos), 6. La matriz citoplasmática contiene los 12. Algunas bacterias, como los micoplasmas,
en forma de bastoncillos (bacilos), espirales cuerpos de inclusión y los ribosomas. carecen de pared celular.
o filamentosas; forman yemas y mechones; 13. Estructuras como cápsulas, fimbriae y pili
7. El material genético procariótico se localiza
o incluso no tienen una forma característica sexuales se localizan fuera de la pared
en un área denominada nucleoide, que no
(pleomórficas). está cubierta por una membrana. celular.
2. Las células bacterianas pueden permanecer 8. La mayoría de las bacterias tiene una pared 14. Muchas bacterias son móviles, normalmente
juntas después de dividirse para formar celular por fuera de la membrana plasmática gracias a orgánulos locomotores similares
pares, cadenas y racimos de varios tamaños para darles forma y protegerlas frente a la a hilos, denominados flagelos
y formas. lisis osmótica. (Figura 3.32).
3. Todas las bacterias son procariotas y mucho 9. Las paredes bacterianas son complejas 15. Las especies bacterianas difieren
más sencillas estructuralmente que las químicamente y contienen normalmente en el número y la distribución de sus
eucariotas. La Tabla 3.1 resume las peptidoglicano o mureína flagelos.
funciones principales de las estructuras de la (Figuras 3.16-3.19). 16. El filamento flagelar es una hélice rígida
célula bacteriana. que gira como las hélices de un barco para
10. Las bacterias suelen clasificarse como Gram
4. La membrana plasmática y otras membranas positivas o Gram negativas, según las impulsar a la bacteria en el agua
están compuestas por una capa doble diferencias en la estructura de la pared (Figuras 3.35 y 3.36).
lipídica, en la que están incluidas las celular y su respuesta a la tinción de Gram. 17. Las bacterias móviles pueden responder a
proteínas integrales (Figura 3.7). Las gradientes de sustancias atrayentes y
11. Las paredes de las bacterias Gram positivas
proteínas periféricas están más débilmente repelentes, fenómeno denominado
tienen capas gruesas y homogéneas de
unidas a las membranas. quimiotaxis.
peptidoglicano y ácidos teicoicos
5. La membrana plasmática puede invaginarse (Figura 3.21). Las bacterias Gram negativas 18. Algunas bacterias sobreviven a condiciones
para formar algunas estructuras simples, tienen una capa fina de peptidoglicano ambientales adversas formando endosporas,
como los sistemas de membrana que rodeada por una membrana externa estructuras latentes que son resistentes al
contienen los sistemas respiratorios y compleja que contiene lipopolisacáridos calor, la desecación y a muchas sustancias
fotosintéticos y, posiblemente, mesosomas. (LPS) y otros componentes (Figura 3.23). químicas (Figura 3.41).
76 Capítulo 3 Estructura y función de la célula procariota
Palabras clave
ácido desoxirribonucleico (DNA) 55 exosporio 72 filamento axial modelo de mosaico fluido 50
ácido dipicolínico 73 70 filamento 06 fimbria 66 monotrica 66
ácido teicoico 59 flagelina 66 flagelo 66 movilidad por deslizamiento 70
anfitrico 66 flagelo polar 66 gancho 66 mureína 58
antígeno O 63 germinación 75 giros 71 nucleoide 55
autoensamblaje 67 glicocálix 65 glucógeno 52 osmosis 64
bacilo o bastoncillo 45 granulo metacromático 54 pared celular de la endospora 73
cadena lateral O 63 granulo de volutina 54 penicilina 64
capa S 65 granulos de cianoficina 52 peptidoglicano 58
cápsula 65 granulos de polifosfato 54 periplasma 58
carboxisomas 52 hidrofílico 49 hidrofóbico peritrica 66
carrera 71 49 interpuente peptídico 59 pili sexuales 66
coco 45 lípido A 61 plásmido 57
core del LPS 61 lipopolisacárido (LPS) 61 plasmólisis 64
córtex 73 lisis 64 lisozima 64 pleomórfico 46
cubierta de la endospora 72 lofotrica 66 magnetosomas poli-P-hidroxibutirato (PHB) 52
cuerpo basal 66 54 matriz citoplasmática 52 porina 63
cuerpo de inclusión 52 membrana externa 58 proteínas integrales 50
diplococo 45 membrana plasmática 48 proteínas periféricas 50
micelio 46 protoplasto 52
endospora 72
envoltura 58 quimiorreceptores 70
esferoplasto 64 quimiotaxis 70
espacio periplásmico 58 ribosoma 55
espirilos 46 «slime» 65
espiroqueta 46 unidad Svedberg 55
esporangio 72 vacuola de gas 52
esporogénesis 73 vesículas de gas 52
esporulación 73 vibrio 45
exoenzima 59

Preguntas para razonar y repasar Cuestiones para reflexionar


1. Enumere las estructuras principales de propiedades químicas entre las paredes de las 1. Proponga un modelo para el ensamblaje
células procariotas descritas en este capítulo, bacterias Gram positivas y Gram negativas. de un flagelo en una bacteria Gram
y exponga una breve descripción de las 4. ¿Qué es el autoensamblaje y por qué es tan positiva. ¿De qué manera habría que
funciones de cada una de ellas. importante para las células? modificar dicho modelo para explicar el
2. Algunos microbiólogos consideran que la ensamblaje en una Gram negativa?
5. ¿Cómo podría demostrarse que las bacterias
membrana plasmática participa en la síntesis forman verdaderas endosporas? 2. ¿Cómo se podría determinar si una célula
de DNA durante la multiplicación es procariota o eucariota sin el empleo de
bacteriana. ¿Cómo podría demostrarse que un microscopio? Asuma que el organismo
esto es así? puede multiplicarse fácilmente en el
3. Razone un mecanismo probable que laboratorio.
fundamente la tinción diferencial de Gram, 3. El peptidoglicano ha sido comparado con
en términos de diferencias en estructura y la malla que protegía a los caballeros
medievales bajo su armadura, ya que
proporciona protección así como
flexibilidad. ¿Podría describir otras
estructuras biológicas que realicen
funciones análogas? ¿De qué manera son
reemplazadas o modificadas
para acomodar el crecimiento del
organismo

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CAPITULO 4
Estructura y función
de la célula eucariota
A menudo, enfatizamos
exclusivamente en
procariotas y virus,
aunque los
microrganismos
eucariotas también tienen
un gran impacto sobre el
bienestar humano. Por
ejemplo, el parásito
protozoario Trypanosoma
brucei gambiense es la
causa de la enfermedad
del sueño africana. El
organismo invade el
sistema nervioso y,
frecuentemente, la
víctima muere después de
sufrir durante varios años
síntomas tales como
debilidad, dolores de
cabeza, apatía, escualidez,
somnolencia y coma.

índice Conceptos
4.1 Resumen de Ja estructura de la 1. Las células eucariotas se diferencian
célula eucariota 80 principalmente de las procariotas por poseer
4.2 Matriz citoplasmática, diversos organillos membranosos complejos en la
matriz citoplasmática, y por tener la mayor parte
microfilamentos,
de su material genético contenido en un núcleo
filamentos intermedios rodeado de una membrana. Cada orgánulo tiene
y microtúbulos 80 una estructura distintiva, relacionada
4.3 Retículo endoplasmático 83 directamente con unas funciones específicas.
4.4 Aparato de Golgi 83 2. Un citoesqueleto constituido por microtúbulos,
4.5 Lisosomas y endocitosis 85 microfilamentos y filamentos intermedios
4.6 Ribosomas de eucariotas 87 confiere a las células eucariotas su forma
4.7 Mitocondrias 87 característica; los microtúbuíos y los
4.8 Cloroplastos 89 microfilamentos participan también en los
4.9 Núcleo y división celular 90 movimientos celulares y en el transporte
intracelular.
Estructura nuclear 90
Nucléolo 91 Mitosis y 3. En las células eucariotas, el material genético se
meiosis 91 transmite a las células hijas mediante procesos
muy organizados y complejos, denominados
4.10 Envolturas externas mitosis y meiosis.
celulares 93
4. A pesar de las grandes diferencias que existen
4.11 Cilios y flagelos 93
entre los eucariotas y los procariotas respecto a
4.12 Comparación entre las células aspectos como la morfología, son similares desde
procariotas y eucariotas 95 el punto de vista bioquímico.
4.1 Resumen de la estructura de la célula eucariota 79

han estudiado también ampliamente. Estos microorganismos


La clave de cualquier problema biológico hay que buscarla son a menudo muy complejos, interesantes por sí mismos y
finalmente en la célula. miembros importantes del ecosistema (Figura 4.1). Además,
■ E. B. Wilson. los hongos (y hasta cierto punto, las algas) son excepcional-
mente útiles en microbiología industrial. Muchos hongos y
protozoos son también agentes patógenos importantes de
n el Capítulo 3 se ha tratado extensamente de la es- humanos; sólo tenemos que pensar en la malaria o la enfer-
tructura y función de la célula procariota, porque las medad del sueño africana (véase la figura introductoria) para
bacterias tienen una importancia considerable en ser conscientes de la importancia de los eucariotas en micro-
microbiología y han ocupado gran parte de la atención de los biología patológica. Por ello, aunque este libro hace hincapié
microbiólogos en el pasado. Sin embargo, las algas, los hon- en el estudio de las bacterias, se describen los microorganis-
gos y los protozoos son microorganismos eucariotas que se mos eucariotas en numerosas ocasiones.

Figura 4.1 Ejemplos representativos de microorganismos eucariotas. (a) Paramecium,


visto con microscopio de contraste de interferencia (x 115). (b) Mezcla de frústulas de
diatomeas (x 100). (c) Colonias de Penicillium y (d) vista microscópica de la hifa y los
conidios de un hongo (x220). (e) Stentor; los protozoos ciliados están extendidos y
alimentándose activamente, microscopio de campo oscuro (x 100). (g) Amanita muscaria, seta
grande venenosa (x5).
80 Capítulo 4 Estructura y función de la célula eucariota

El Capítulo 4 trata de la estructura de la célula eucariota principalmente al uso de membranas internas para varias
y de su relación con la función celular. Numerosos estudios funciones. La división del interior de una célula eucariota
sobre la ultraestructura de la célula eucariota han empleado por membranas permite el desarrollo de funciones bioquími-
organismos diferentes a microorganismos, por ello, se cas y fisiológicas diferentes en compartimientos separados,
expondrán parte de Las investigaciones realizadas con célu- de manera que pueden tener lugar simultáneamente con más
las no microbianas. Al final de este capítulo, se compararán facilidad, bajo un control independiente y una coordinación
en profundidad las células procariotas y las eucariotas. adecuada. La existencia de superficies amplias de membra-
na permite una mayor actividad respiratoria y fotosintética,
ya que estos procesos se localizan exclusivamente en mem-
branas. El complejo intracitoplasmático de membrana sirve
4.1 Resumen de la estructura de la célula también como un sistema de transporte de materiales entre
eucariota distintos lugares de la célula. En definitiva, la presencia de
numerosos sistemas de membrana es necesaria en las células
La diferencia más obvia entre las células procariotas y las eucariotas debido a su gran volumen y la necesidad de una
eucariotas radica en el uso de membranas. Las eucariotas regulación, actividad metabólica y transporte adecuados.
poseen un núcleo limitado por membranas, y las membranas Las Figuras 4.2, 4.3 y 4.26b ofrecen una vista general
desempeñan también un papel prominente en la estructura de la estructura de una célula eucariota e ilustra la mayoría
de muchos organulos (Figuras 4.2 y 4.3). Los organulos de los organulos que se van a analizar. La Tabla 4.1 resume
son estructuras intracelulares que desempeñan funciones brevemente las funciones de los organulos más importantes
específicas en las células, análogas a la función de los órga- de eucariotas. Primero se describirán los internos, conteni-
nos en los seres vivos superiores. Precisamente, el nombre dos por la membrana plasmática, y luego los componentes
orgánulo (órgano pequeño) fue acuñado por los biólogos por situados por fuera de ésta.
el paralelismo funcional entre los organulos celulares y los
órganos del cuerpo. Sin embargo, los organulos no deberían
definirse simplemente como estructuras con membrana, ya 4.2 Matriz citoplasmática, microfüamentos,
que ésto excluiría a componentes como los ribosomas y los filamentos intermedios y microtúbulos
flagelos. La comparación de las Figuras 4.2 y 4.3 con la
Figura 3.11 (p. 52) revela hasta qué punto es compleja la Cuando se examina una célula eucariota con el microscopio
estructura de la célula eucariota. Esta complejidad se debe electrónico con bajos aumentos, se ven los grandes orgánu-

Figura 4.2 Ultraestructura de una célula eucariota. (a) Linfoblasto en un ganglio linfático de rata (x 17 500). (b) La levadura Saccharomyces
(X7200). Obsérvese el núcleo (N), mitocondrias (M), vacuola (V), retículo endoplasmático (RE), y pared celular (PC).
4.2 Matriz citoplasmática, microfilamentos, filamentos intermedios y microtúbulos 81

bas que demuestran que el agua ligada es donde se desarro-


llan muchos procesos metabólicos. El contenido proteico de
las células es tan alto que la matriz citoplasmática puede ser
a menudo semicristalina. Normalmente, el pH de la matriz
es próximo a la neutralidad, entre 6.8 y 7.1, pero puede
variar ampliamente. Por ejemplo, las vacuolas digestivas de
los protozoos pueden alcanzar valores de pH tan bajos como
3 a 4.
Posiblemente, todas las células eucariotas poseen mi-
crofilamentos, filamentos muy finos de proteínas, con un
diámetro de 4 a 7 nm, que pueden estar distribuidos por la
matriz del citoplasma, u organizados en redes y formaciones
paralelas. Los microfilamentos participan en el movimiento
celular y en los cambios de forma. Algunos ejemplos de
movimientos asociados con la actividad de los microfila-
mentos son el movimiento de los granulos de pigmentos, el
movimiento ameboide y la corriente protoplasmática en los
hongos mucosos (véase el Capítulo 25).
Los estudios de microscopía electrónica indican que los
microfilamentos participan en el movimiento celular, al

Figura 4.3 infraestructura de una célula eucariota. Diagrama


esquemático tridimensional de una célula donde se han identificado
los organulos más importantes. VA, vacuola autofágica; C, centn'olo;
Cl, cloroplasto; Ci, cilio; CR, cromatina; VD, vacuola digestiva; F,
microfilamentos; G, glucógeno; AG, aparato de Golgi; GE, GERL; GL,
gotita de lípido; M, mitocondria; MT, microtúbulos; N, núcleo; NU,
nucléolo; P, peroxisoma; LP, lisosoma primario; MP, membrana
plasmática; VP, vesícula pinocítica; R, ribosomas y polisomas; CR,
cuerpo residual; RER, retículo endoplasmático rugoso; REL, retículo
endoplasmático liso; VS, vacuola de secreción.

los inmersos en una sustancia homogénea, sin características


distintivas aparentes, denominada matriz citoplasmática.
La matriz, aunque parece carecer de interés, es realmente
una de las partes más importantes y complejas de la célula.
Constituye el «entorno» de los organulos y el lugar donde se
desarrollan muchos procesos bioquímicos fundamentales.
Diversos cambios químicos que se observan en las células
—de viscosidad y de corriente citoplasmática, entre otros—
se deben a la actividad de la matriz.
El agua constituye entre el 70 y el 85 % del peso de una
célula eucariota, es decir, gran parte de la matriz citoplasmá-
tica es agua. El agua celular puede existir de dos formas
diferentes: como agua libre, normal, osmóticamente activa;
o, como agua ligada, denominándose agua de hidratación.
Osmosis, actividad del agua y crecimiento (pp. 64, 128-131).
El agua de hidratación está ligada a la superficie de pro-
teínas y otras macromoléculas, es osmóticamente inactiva, y
está más ordenada que el agua libre. Existen algunas prue-
82 Capítulo 4 Estructura y función de la célula eucariota

revelar que se localizan frecuentemente en lugares adecua-


dos para este papel. Por ejemplo, se encuentran en la interfa-
se entre el citoplasma inmóvil y el que fluye, en células
vegetales y hongos mucosos. Los resultados obtenidos con
el fármaco citocalasina B aportan nuevas evidencias. La
citocalasina B altera la estructura de los microfilamentos, y
se observa que, frecuentemente, inhibe los movimientos
celulares. Sin embargo, es difícil realizar una interpretación
causa-efecto de estos resultados, ya que este fármaco produ-
ce otros efectos en las células.
Por otra parte, se ha aislado y analizado químicamente
la proteína del microfilamento. Es una actina, muy similar a
la proteína actina contráctil del tejido muscular. Esto es una
prueba indirecta de la participación de los microfilamentos
en el movimiento celular.
Algunos patógenos, como Listeria moncytogenes, utili-
zan la actina de la célula eucariota para desplazarse con
rapidez en la célula huésped. La proteína A'ctA liberada por
Figura 4.5 Estructura de un microtúbulo. El cilindro hueco, de un
Listeria induce la polimerización de los filamentos de actina diámetro de cerca de 25 nm, está constituido por dos clases de
por delante de la bacteria. Se forma una fibra de actina que subunidades de proteína, cc-tubulina y P-tubulina.
queda atrapada en el citoesqueleto de la célula huésped. Su
continua elongación empuja a la bacteria hacia delante a
gran velocidad, 11 ujn/minuto. La bacteria puede incluso ser
impulsada a través de la superficie de la célula huésped y coidal para formar un cilindro con una media de 13 subuni-
entrar en células vecinas (Figura 4.4). dades por cada vuelta o circunferencia (Figura 4.5).
Una segunda clase de orgánulo filamentoso presente en Los microtúbulos tienen al menos tres funciones: 1) ayu
la matriz citoplasmática tiene la forma de un fino cilindro dan a mantener la forma celular, 2) participan junto con los
(aprox., 25 nm de diámetro). Debido a su naturaleza tubular, microfilamentos en el movimiento celular, y 3) actúan en los
este orgánulo se denomina microtúbulo. Los microtúbulos procesos de transporte intracelular. Las pruebas de su papel
son estructuras complejas constituidas por dos proteínas estructural radican en su distribución intracelular y en los
globulares ligeramente diferentes, denominadas tubulinas, estudios sobre los efectos del fármaco colchicina. Estructuras
cada una de las cuales tiene un diámetro aproximado de 4 a largas y delgadas que precisan de un soporte, como los axó-
5 nm. Estas subunidades están montadas en disposición heli- podos (pseudópodos rígidos, largos y delgados) de los proto
zoos, contienen microtúbulos (Figura 4.6). Cuando se expo
nen células embrionarias nerviosas migratorias y células
cardíacas a colchicina, pierden simultáneamente sus micro
túbulos y sus formas características. Las células así tratadas
parece que se encuentran «sin rumbo», incapaces de realizar
movimientos dirigidos sin su forma normal. Los microfila
mentos están aún intactos, pero debido a la alteración de sus
microtúbulos por la colchicina, dejan de tener un comporta
miento normal. :
Los microtúbulos están también presentes eñ estructuras
que participan en movimientos de las células o de los orgá-
nulos —huso mitótico, cilios y flagelos—. Por ejemplo, el
huso mitótico está constituido por microtúbulos; cuando una
célula en división se trata con colchicina, se altera el huso y
se bloquea la separación de los cromosomas. Los microtú-
bulos son también esenciales para el movimiento de los
cilios y flagelos eucarióticos.
Otras clases de componentes filamentosos están tam-
bién presentes en la matriz, siendo los más importantes los
filamentos intermedios (de 8 a 10 nm de diámetro, aproxi-
madamente). Los microfilamentos, microtúbulos y filamen-
Figura 4.4 Movilidad de Listeria y filamentos de actina. Una tos intermedios son los componentes principales de una red
célula de Listeria es propulsada a través de la superficie de la célula
huésped por un penacho de filamentos de actina. amplia e intrincada de filamentos comunicados entre sí,
4.4 Aparato de Golgi 83

1. ¿Qué es un orgánulo?
2. Defina matriz citoplasmática, agua libre, agua ligada,
microfilamento, microtúbulo y tubulina. Describa los
papeles de los microfilamentos, filamentos intermedios y
microtúbulos.
3. Describa el citoesqueleto. ¿Cuáles son sus funciones?

4.3 Retículo endoplasmático


Además del citoesqueleto, la matriz citoplasmática contiene
una red irregular de túbulos membranosos, de entre 40 y
70 nm de diámetro, que se ramifican y fusionan, y muchos
sacos aplanados denominados cisternas. Esta red de túbulos
y cisternas constituye el retículo endoplasmático (RE)
(Figura 4.2a y Figura 4.8). La naturaleza del RE varía
según el estado funcional y fisiológico de la célula. Por
ejemplo, en células que sintetizan una gran cantidad de pro-
teínas con fines secretorios, el RE presenta gran parte de su
superficie externa tachonada de ribosomas, y se denomina
retículo endoplasmático rugoso o granular (RER o REG).
Otras células, como las que producen grandes cantidades de
lípidos, tienen RE sin ribosomas, denominándose RE liso o
agranular (REL o REA).
El retículo endoplasmático posee funciones importan-
Figura 4,6 Microtúbulos citoplasmáticos. Microfotografías
electrónicas de pseudópodos con microtúbulos. (a) Microtúbulos en un tes, como la síntesis de membrana celular, y el transporte de
pseudópodo del protozoo Reticulomyxa (x65 000). (b) Corte proteínas, lípidos y probablemente otros materiales a través
transversal de un axópodo heliozoano (x48 000). Obsérvese la de la célula. Los lípidos y las proteínas son sintetizados por
disposición paralela de microtúbulos organizados según un modelo enzimas y ribosomas asociados al RE. Las cadenas de poli-
espiral.
péptidos sintetizadas en los ribosomas ligados al RER pue-
den introducirse en la membrana del RE o quedar en su luz
para ser transportadas a otro lugar.
denominada citoesqueleto (Figura 4.7). Como ya se ha Se produce nuevo retículo endoplasmático por expan-
mencionado anteriormente, el citoesqueleto desempeña un sión del viejo. Muchos biólogos piensan que el RER sinteti-
papel, tanto en la forma como en el movimiento. Los proca- za nuevas proteínas y lípidos para el nuevo RE en forma-
riotas carecen de un citoesqueleto organizado, y puede que ción. El RER «viejo» pierde entonces sus ribosomas y se
no posean proteínas similares a la actina. modifica para convertirse en REL. No todos los investigado-
res están de acuerdo con esta interpretación y es posible que
existan otros mecanismos de crecimiento del RE.

4.4 Aparato de Golgi


El aparato de Golgi es un orgánulo membranoso compuesto
por cisternas aplanadas y apiladas, parecidas a sacos
(Figura 4.9). Estas membranas, al igual que en el RE liso,
carecen de ribosomas. Están constituidas normalmente por 4
a 8 cisternas o sacos apilados, aunque pueden ser más. Cada
saco tiene un grosor de 15 a 20 nm y están separados de
otras cisternas por una distancia de 20 a 30 nm. En los extre-
mos de las cisternas está ubicada una red compleja de túbu-
Figura 4.7 Citoesqueleto eucariótico. (a) Sistema de los y vesículas (de un diámetro de 20 a 100 nm). La pila de
microfilamentos teñido con anticuerpos en una célula de mamífero cisternas presenta una polaridad definida porque hay dos
(x400). (b) Sistema de microtúbulos teñido con anticuerpos en una
célula de mamífero (x 1000). extremos o caras que son bastante diferentes entre sí. Los
84 Capítulo 4 Estructura y función de la célula eucariota

Figura 4.8 Retículo endoplasmático.


Microfotografía electrónica de transmisión del cuerpo
amarillo de un ovario humano, mostrando variaciones
estructurales en el retículo endoplasmático eucariótico.
Obsérvese la presencia de tanto el retículo
endoplasmático rugoso cubierto de ribosomas, como
del liso, sin éstos (x 26 500).

sacos de la cara productora o cis están asociados a menudo man en el aparato de Golgi y luego se transportan a la super-
con el RE, y se diferencian de los sacos de la cara madura o ficie en vesículas. Participa a menudo en la formación de
trans por el grosor, el contenido en enzimas y el grado de membranas celulares y en la secreción de productos celula-
formación de vesículas. Parece que el material se transporta res. El crecimiento de algunas hifas micóticas se produce
de las cisternas cis a las trans por vesículas que se despren- cuando las vesículas del Golgi liberan su contenido en la
den por gemación de los extremos de las cisternas y se des- pared, en el extremo de la hifa.
plazan al saco siguiente. En todos estos procesos, los materiales se desplazan del
El aparato de Golgi está presente en la mayoría de las RE al aparato de Golgi. En la mayoría de los casos, las vesí-
células eucariotas, pero muchos hongos y protozoos ciliados culas se desprenden por gemación del RE, viajan hasta el
pueden carecer de una estructura completamente formada. A aparato de Golgi y se fusionan con la cara cis de la cisterna.
veces, consiste en una única pila de cisternas; sin embargo, Por ello, el aparato de Golgi debe estar asociado con el RE,
muchas células pueden contener hasta 20, y a veces más, tanto estructural como funcionalmente. La mayoría de las
pilas separadas. Estas pilas de cisternas, denominadas a proteínas que entran en el aparato de Golgi procedentes del
menudo dictiosomas, pueden estar agrupadas, o bien, distri- RER son glicoproteínas que contienen cadenas de hidratos
buidas por toda la célula. de carbono de cadena corta. El aparato de Golgi modifica
El aparato de Golgi empaqueta materiales- y los prepara con frecuencia proteínas con diferentes destinos y funcio-
para su secreción, variando la naturaleza exacta de su papel nes, añadiéndolas grupos específicos, para luego enviarlas a
según el organismo. Las escamas de superficie de algunas su lugar adecuado (p. ej., las proteínas lisosomales poseen
algas flageladas y protozoos radiolarios parece que se for- grupos fosfato añadidos a los azúcares de mañosa).

(a) Dictiosoma
(pila de
cisternas o
Figura 4.9 Estructura del aparato de
laminillas
Golgi. Aparato de Golgi de Euglena
aplanadas)
gracilis. Las pilas de cisternas se muestran
en la microfotografía electrónica (x 165 000)
(a) y esquemáticamente en (b). (b)
4.5 Lisosomas y endocitosis 85

4.5 Lisosomas y endocitosis sólidos. Las cavidades de mayor tamaño se denominan


vacuolas, y las más pequeñas, vesículas. Existen dos clases
Una función muy importante del aparato de Golgi y del retí- principales de endocitosis: fagocitosis y pinocitosis. Durante
culo endoplasmático es la síntesis de otro orgánulo, el lisoso- la fagocitosis, se rodean partículas de gran tamaño, e inclu-
ma. Este orgánulo (u otra estructura muy semejante) está pre- so otros microorganismos, para formar una vacuola fagocíti-
sente en numerosos microorganismos —protozoos, algunas ca o fagosoma, donde quedan englobados (Figura 4.10a).
algas y hongos— así como en plantas y animales. Los lisosomas En la pinocitosis, se atrapan pequeñas cantidades de líquido
son esferoides y están cubiertos por una membrana; su diá- circundante con sus moléculas de soluto, formando vesícu-
metro tiene una media de 500 nm, pero varían desde 50 nm las pinocitósicas (denominadas también vesículas pinocíti-
hasta varios (j,m. Participan en la digestión intracelular y con- cas) o pinosomas. A los fagosomas y pinosomas se les deno-
tienen enzimas necesarias para digerir todos los tipos de mina conjuntamente endosomas, ya que que se forman por
macromoléculas. Estas enzimas, denominadas hidrolasas, endocitosis. Una clase de pinocitosis mediada por recepto-
catalizan la hidrólisis de moléculas y funcionan mejor en res, que produce vesículas cubiertas (véase la p. 435), es im-
condiciones ligeramente acidas (normalmente, a un pH de portante para la entrada de virus en las células huésped de
3.5 a 5.0). Los lisosomas consiguen este pH al bombear pro- animales.
tones hacia su interior. Las enzimas digestivas se elaboran El material de los endosomas es digerido con ayuda de
en el RER y se empaquetan en el aparato de Golgi para for- lisosomas. Los lisosomas recién formados, o lisosomas pri-
mar lisosomas. Fracciones del RE liso próximas al aparato marios, se fusionan con vacuolas fagocíticas para producir
de Golgi pueden también liberar lisosomas por gemación. lisosomas secundarios, lisosomas que contienen material
Los lisosomas son especialmente importantes en las células en digestión (Figura 4.10). Estas vacuolas fagocíticas o liso-
que obtienen nutrientes por endocitosis. Mediante este somas secundarios se denominan a menudo vacuolas ali-
proceso, la célula capta solutos o partículas englobándolos en mentarias. A continuación, los nutrientes digeridos salen del
vesículas formadas a partir de su membrana plasmática. Las lisosoma secundario y entran en el citoplasma. Cuando el
vacuolas y vesículas son cavidades limitadas por membrana lisosoma ha acumulado una gran cantidad de material no
que contienen fluidos y, a menudo, materiales digerido, se denomina cuerpo residual.

Figura 4.10 Estructura, formación y función de los lisosomas.


(a) Representación esquemática de la formación y función de los
lisosomas. (b) Lisosomas en macrófagos de un pulmón. Los lisosomas
secundarios contienen material digerido parcialmente y están formados
por fusión de lisosomas primarios y vacuolas fagocíticas (x 14 137).
86 Capítulo 4 Estructura y función de la célula eucariota

Los lisosomas se unen a los fagosomas con fines de ción y exportación de materiales (Figura 4.11). Christian de
defensa (sistema inmunitario) y para adquirir nutrientes. Por Duve (Premio Nobel de 1974) ha propuesto que este com-
ejemplo, los fagocitos profesionales de vertebrados ingieren plejo se denomine vacuoma, reconociendo una unidad fun-
bacterias invasoras que, normalmente, serán destruidas cional.'El RE elabora proteínas secretorias y material de
cuando los lisosomas se fusionan con el fagosoma. Fagoci- membrana, que serán parte del aparato de Golgi. Luego, el
tosis y resistencia frente a agentes patógenos (pp. 774-777). aparato de Golgi forma vesículas secretorias que se fusionan
Las células también pueden digerir selectivamente partes con la membrana plasmática y liberan el material al exterior.
de su propio citoplasma en un lisosoma secundario que se También produce lisosomas que se fusionan con endosomas
llama vacuola autofágica o autofagosoma (Figura 4.10a). para digerir material adquirido por fagocitosis y pinocitosis.
Se piensa que éstas se producen al englobarse una fracción El movimiento de la membrana en la región del vacuoma,
de citoplasma (Figura 4.11) o cuando el RE atrapa parte de ubicado entre el aparato de Golgi y la membrana plasmática,
citoplasma para formar una vesícula que posteriormente se es de doble dirección. Las vesículas vacías suelen reciclarse
fusiona con los lisosomas. Posiblemente, la autofagia tiene y regresar al aparato de Golgi y a la membrana plasmática,
un papel en el recambio normal o reciclaje de los constitu- en lugar de destruirse. Estos intercambios se producen en el
yentes celulares. Incluso, después de la muerte celular, los vacuoma sin que se rompa la membrana, de manera que el
lisosomas facilitan la digestión y la eliminación de los restos contenido de la vesícula no escapa nunca directamente a la
celulares. Aunque, también es cierto que una célula puede matriz citoplasmática.
sobrevivir durante un período de inanición al digerir selecti- Más recientemente, un sistema de degradación no liso-
vamente partes de sí misma con el fin de permanecer viva. somal de proteínas ha sido descubierto en eucariotas, en
El aspecto más notable de los lisosomas es que realizan unas pocas procariotas y en muchas archaea. La mayoría de
todas estas funciones sin liberar sus enzimas digestivas a la las proteínas de eucariotas pueden ser degradadas por este
matriz citoplasmática, una catástrofe que destruiría la célula. sistema. En eucariotas, las proteínas son marcadas para su
La membrana lisosomal retiene las enzimas digestivas y destrucción mediante la unión de diversos pequeños poli-
otras macromoléculas, mientras que permite la liberación de péptidos denominados ubiquitinas (Figura 4.12). Una vez
productos pequeños digeridos. marcada, la proteína entra en un gran complejo cilindrico
El intrincado complejo de orgánulos membranosos com- hueco denominado proteosoma 26S, donde será degradada
puesto por el aparato de Golgi, los lisosomas, los endosomas a péptidos mediante un proceso ATP-dependiente, liberán-
y las estructuras asociadas, parece que funciona como un dose entonces las ubiquitinas. Los péptidos pueden ser pos-
conjunto coordinado cuya función principal es la importa- teriormente hidrolizados a aminoácidos. En este caso, el sis-

Figura 4.11 Flujo de membrana en el vacuoma.


Flujo de material y de membranas entre orgánulos
en una célula eucariota. / /
(1) Transporte de vesículas entre el RE y el aparato
de Golgi.
(2) Sistema de transporte entre el aparato de Golgi
y la membrana plasmática para la secreción de
materiales.
(3) Transporte entre el aparato de Golgi y los
lisosomas.
(4) Movimiento de material y membranas durante la
endocitosis.
(5) Rutas de recuperación de la membrana
plasmática a partir de endosomas, lisosomas y a
través del aparato de Golgi.
(6) Movimiento de las vesículas de los endosomas a
los lisosomas
(7) Autofagia por un lisosoma.
4.7 Mitocondrias 87

los ribosomas libres se insertan en orgánulos como el


núcleo, la mitocondria y el cloroplasto. En relación con la
síntesis y destino de las proteínas debemos mencionar a las
chaperonas. Como se discute en los Capítulos 3 y 12
(véanse las pp. 55, 293-294), las chaperonas moleculares
facilitan el plegamiento adecuado de las proteínas después
de su síntesis. También facilitan el transporte de las proteí-
nas hacia orgánulos eucarióticos, como mitocondrias.
Varios ribosomas se unen normalmente a un único RNA
mensajero y traducen simultáneamente el mensaje en pro-
teína. Estos complejos formados por RNA mensajero y
ribosomas se denominan polirribosomas o polisomas.
Figura 4.12 Degradación de proteínas en un proteosoma. Véase
Más adelante se tratará la participación de los ribosomas
el capítulo para más detalles. en la síntesis de proteínas. El papel de los ribosomas en la
síntesis de proteínas (pp. 287-293).

tema se está utilizando para reciclar proteínas. El proteoso-


1. Describa la estructura del ribosoma eucariótico 80S
ma también está involucrado en producir los péptidos para la
y compárelo con el procariótico.
presentción antigénica durante la respuesta inmunitaria
(véase la sección 32.4). 2. ¿En qué se diferencian los ribosomas libres de los unidos
al RE?

1. ¿En qué se diferencian estructural y funcionalmente los


retículos endoplasmáticos liso y rugoso? Enumere los
procesos en los que participa el RE. 4.7 Mitocondrias
2. Describa con palabras y esquemáticamente la estructura del
aparato de Golgi. ¿En qué se diferencian las caras cis y Las mitocondrias están presentes en la mayoría de las
trans del aparato de Golgi? Enumere las funciones células eucariotas, y se califican en ocasiones como las
principales del aparato de Golgi que se describen en el «centrales eléctricas» de la célula. En estos orgánulos tie-
texto. nen lugar el ciclo de los ácidos tricarboxílicos y la genera-
3. ¿Cómo se forman los lisosomas? Describa las distintas ción de ATP mediante los sistemas de transporte de elec-
formas de los lisosomas y la forma en que participan en la trones y de fosforilación oxidativa. Al observarlas con el
digestión intracelular. ¿Qué es una vacuola autofágica? microscopio electrónico, las mitocondrias aparecen como
Defina endocitosis, pinocitosis y fagocitosis. ¿Qué es un estructuras cilindricas que miden aproximadamente de 0.3
proteosoma? a 1.0 (im por 5 a 10 |im. (En otras palabras, tienen casi el
mismo tamaño de las células bacterianas.) Aunque las
células pueden tener hasta 1000 o más mitocondrias, al
menos ciertas células (algunas levaduras, algas unicelula-
4.6 Ribosomas de eucariotas res y protozoos tripanosomas) poseen una única mitocon-
dria tubular gigante que se retuerce formando una red con-
El ribosoma eucariótico puede estar asociado con el retículo tinua inserta en el citoplasma (Figura 4.13). Ciclo de los
endoplasmático rugoso o libre en la matriz citoplasmática, y ácidos tricarboxílicos, transporte de electrones y fosforilación
tiene un tamaño superior al ribosoma bacteriano de 70S. Es oxidativa (pp. 194-199).
un dímero formado por subunidades de 60S y 40S, con un La mitocondria está rodeada por dos membranas, ex-
diámetro de aproximadamente 22 nm, un coeficiente de terna e interna, separadas por un espacio intermembranoso
sedimentación de 80S y un peso molecular de 4 millones. de 6 a 8 nm (Figura 4.14). Invaginaciones especiales de la
Cuando está unido al RE rugoso, está adherido por la sub- membrana interna, denominadas crestas, aumentan enorme-
unidad de 60S. mente el área de superficie. La forma de las crestas varía
Tanto los ribosomas libres como los unidos al RER según la especie. Los hongos tienen crestas en forma de
sintetizan proteínas. Como se ha mencionado anteriormen- placa (laminar), mientras que los protozoos flagelados
te, las proteínas sintetizadas por los ribosomas del RER euglenoides pueden tenerlas en forma de disco. Se observan
penetran en la luz de éste para ser transportadas, y a menu- crestas tubulares en diversos eucariotas; sin embargo, las
do secretadas, o quedan en el mismo RE como proteínas amebas pueden tener mitocondrias con crestas en forma de
integrales de membrana. Por el contrario, los ribosomas vesícula (Figura 4.15). La membrana interna engloba la
libres son el lugar para la síntesis de proteínas no-secreto- matriz mitocondrial, una matriz densa que contiene riboso-
rias, ni de membrana. Algunas proteínas sintetizadas por mas, DNA y a menudo granulos grandes de fosfato calcico.
88 Capítulo 4 Estructura y función de la célula eucariota

Los ribosomas mitocondriales son más pequeños que los


citoplasmáticos y se parecen a los bacterianos por varios
motivos, incluyendo el tamaño y la composición de las
subunidades. El DNA mitocondrial es un círculo cerrado,
como el bacteriano.
Cada compartimiento mitocondrial difiere del resto por
la composición química y enzimática. Por ejemplo, las
membranas interna y externa mitocondriales poseen lípidos
diferentes. Las enzimas y los transportadores de electrones
que participan en el transporte de electrones y en la fosfori-
lación oxidativa (formación de ATP como consecuencia del
transporte de electrones) se ubican solamente en la membra-
na interna. Las enzimas del ciclo de los ácidos tricarboxíli-
cos y de la ruta (3-oxidativa de los ácidos grasos (véase el
Capítulo 9) se localizan en la matriz.
La membrana interna de la mitocondria tiene otra carac-
terística distintiva estructural, relacionada con su función.
Figura 4.13 Mitocondrias de Muchas esferas pequeñas, con un diámetro de 8.5 nm, están
un tripanosoma. Mitocondrias gigantes de tripanosomas. (a) adheridas por un pedúnculo a la superficie interna. Estas
Mitocondria de Crithidia fasciculata con cinetoplasto, C. El
cinetoplasto contiene DNA que codifica RNA y proteínas
esferas se denominan partículas F, y sintetizan ATP duran-
mitocondriales. (b) Mitocondria de Trypanosoma cruzi; la flecha te la respiración celular (véanse las pp. 198-199).
indica la posición del cinetoplasto.

Figura 4.14 Estructura mitocondrial. (a) Diagrama de la estructura


mitocondrial. El detalle muestra los complejos F|F0 cubriendo la
superficie interna de'las crestas, (b) Microfotografía electrónica de
barrido (x 70 000) de una mitocondria tratada por criofractura, donde
se muestran las crestas (flechas). Las membranas externa e interna son
también evidentes, (c) Microfotografía electrónica de transmisión de
una mitocondria del páncreas de un murciélago (x 85 000). Obsérvense
las membranas mitocondriales externa e interna, las crestas y las
inclusiones en la matriz. La mitocondria está rodeada por retículo
endoplasmático rugoso.
4.8 Cloroplastos 89

Figura 4.J5 Crestas mitocondriales.


Mitocondrias con diversas formas. (a)
Mitocondria del hongo mucoso
protostélido Schizoplasmodiopsis
micropunctata. Obsérvense las crestas
tubulares (x49 500). (b) Crestas
vesiculares en la mitocondria del
protozoo Actinosphaerium (x75 000).

La mitocondria utiliza su DNA y ribosomas para sintetizar 4.8 Cloroplastos


sus propias proteínas, aunque la mayona de las proteínas mito-
condriales se elaboran bajo la dirección del núcleo. Las mito- Los plástidos son orgánulos citoplasmáticos de algas y
condrias se reproducen por fisión binaria. Los cloroplastos plantas superiores que, a menudo, poseen pigmentos
muestran una independencia parcial similar y se reproducen como clorofilas y carotenoides, y son el lugar de la sínte-
también por fisión binaria. Como vemos, son muchas las simi- sis y almacenamiento de reservas alimenticias. La clase
litudes entre mitocondrias, cloroplastos y bacterias, por ello, se más importante de plástido es el cloroplasto. Los cloro-
ha propuesto que ambos proceden de asociaciones simbióticas plastos contienen clorofila y utilizan energía lumínica
entre bacterias y células de mayor tamaño (Recuadro 4.1). para convertir CO2 y agua en hidratos de carbono y O2. Es

Origen de la célula eucariota


as profundas diferencias entre las células eucariotas y las cloroplastos y eucariotas fotosintéticos. Algunos investigadores

L procariotas han estimulado muchas discusiones sobre el


origen de la compleja célula eucariota. Algunos biólogos
consideran que la célula «protoeucariota» original fue una bacte-
ria o una archaea aerobia grande que formó mitocondrias, cloro-
han especulado sobre la posibilidad de que los cilios y los flage-
los se formasen por la adhesión de bacterias espiroquetas (véase
el Capítulo 21) a la superficie de las células eucariotas, del
mismo modo que las espiroquetas se fijan a la superficie del pro-
plastos y un núcleo cuando su membrana plasmática se invaginó tozoo móvil Myxotricha paradoxa, que crece en el aparato diges-
y englobó material genético en una membrana doble. Luego, se tivo de las termitas.
pudieron desarrollar los orgánulos independientemente. Es tam- Existen pruebas que apoyan la teoría endosimbiótica. Tanto
bién posible que una bacteria grande verde-azulada perdiese su las mitocondrias como los cloroplastos se parecen a las bacterias
pared celular y se convirtiese en fagocítica. Posteriormente, los en cuanto a tamaño y aspecto, contienen DNA circular, como las
cloroplastos, las mitocondrias y el núcleo primitivos se formarí- bacterias y se reproducen semiautónomamente. Los ribosomas
an por fusión de los tilacoides y las cisternas del retículo endo- de las mitocondrias y los cloroplastos se parecen más a los pro-
plasmático para englobar áreas específicas del citoplasma. cariotas que a los de la matriz citoplasmática eucariota. Las
Con mucho, la teoría más popular del origen de las células secuencias de los genes de los cloroplastos y las mitocondrias
eucariotas es la teoría endosimbionte. Brevemente, según esta para formar RNA ribosómico y RNA de transferencia son más
teoría la célula procariota ancestral perdió su pared celular y similares a las secuencias de los genes bacterianos que a las de
adquirió la capacidad para obtener nutrientes fagocitando otras los genes nucleares eucarióticos de rRNA y de tRNA. Finalmente,
procariotas. Cuando se desarrollaron las cianobacterias fotosin- existen asociaciones simbióticas que parecen endosimbiosis
téticas, el ambiente se transformó lentamente en aerobio. Si un bacterianas, donde se han perdido las características procariotas
procariota fagocítico, ameboide, anaerobio —posiblemente con distintivas. Por ejemplo, el flagelado protozoario Cyanophora
un núcleo desarrollado— fagocitase una célula bacteriana aero- paradoxa tiene orgánulos fotosintéticos denominados cianelas,
bia y estableciese una relación permanente simbiótica con ésta, con una estructura similar a la de las cianobacterias, y restos de
el huésped podría adaptarse mejor al ambiente aerobio. La bacte- peptidoglicano en la pared. El DNA es mucho más pequeño que
ria aerobia endosimbiótica evolucionaría finalmente para conver- el de las cianobacterias y se parece al de los cloroplastos. A pesar
tirse en una mitocondria. De forma similar, las asociaciones sim- de estas pruebas, la teoría endosimbiótica es todavía especulativa
bióticas con cianobacterias podrían originar la formación de y centro de continuas investigaciones y discusiones.
90 Capítulo 4 Estructura y función de la célula eucariota

decir, son el lugar donde se realiza la fotosíntesis oxigé- tiene DNA, ribosomas, gotitas de lípidos, granulos de almi-
nica. dón y un sistema complejo de membrana interna cuyos com-
Aunque los cloroplastos varían en tamaño y forma, en ponentes más importantes son unos sacos aplanados, limita-
general presentan muchas características estructurales comu- dos por membrana, denominados tilacoides. Racimos de dos
nes. En la mayoría de los casos son ovalados, con una dimen- o más tilacoides están dispersos en el estroma de la mayoría
sión de 2 a 4 (im por 5 a 10 (xm, pero algunas algas tienen un de los cloroplastos de las algas (Figuras 4.16 y 4.25b). En
cloroplasto gigante que ocupa gran parte de la célula. Al igual algunos grupos de algas, varios tilacoides en forma de disco
que las mitocondrias, los cloroplastos están rodeados por una están apilados como monedas para formar los grana.
doble membrana (Figura 4.16). La matriz, el estroma, con- Las diferentes reacciones fotosintéticas están separadas
estructuralmente en el cloroplasto, de la misma forma que
las reacciones de la respiración (el transporte de electrones y
el ciclo de los ácidos tricarboxílicos) lo están en la mitocon-
dria. La formación de hidratos de carbono a partir de CO2 y
agua, fase oscura, tiene lugar en el estroma. La captación de
energía lumínica para generar ATP, NADPH y O?, fase lumí-
nica, se localiza en las membranas de los tilacoides, donde
se encuentran la clorofila y los componentes del sistema de
transporte de electrones. Fotosíntesis (pp. 209-215).
Los cloroplastos de muchas algas contienen un pire-
noide (Figura 4.25b), región densa de proteínas rodeada de
almidón u otro polisacárido. Los pirenoides participan en la
síntesis de polisacáridos.

1. Describa con detalle la estructura de las mitocondrias y los


cloroplastos. ¿Dónde se encuentran los diversos
componentes de los sistemas de captación de energía en
estos orgánulos?
2. Defina partícula Fi, plástido, fase oscura, fase lumínica y
pirenoide.
3. ¿Cuál es el papel del DNA mitocondrial?

4.9 Núcleo y división celular

El núcleo celular es el orgánulo más prominente. Fue descu-


bierto en los inicios del estudio de la estructura celular, y
Robert Brown demostró en 1831 que era una característica
constante de las células eucariotas. El núcleo almacena la
información genética de la célula y es su centro de control.

Estructura nuclear
Los núcleos son cuerpos esféricos limitados por una mem-
brana, con un diámetro de aproximadamente 5 a 7 (J.m
(Figuras 4.2 y 4.25b). La cromatina es la parte del núcleo
que contiene el DNA, que aperece, tras tinción, como un
material fibroso dentro del nucleoplasma del núcleo. En las
células en reposo, la cromatina se encuentra dispersa, pero
Figura 4.16 Estructura de un cloroplasto. (a) Cloroplasto (Cl) del se condensa durante la mitosis, haciéndose visible en forma
flagelado euglenoide Colacium cyclopicolum. El cloroplasto está de cromosomas. Parte de la cromatina nuclear, la eucroma-
rodeado por una membrana doble y los tilacoides están dispuestos en tina, está organizada libremente y contiene los genes que se
grupos de tres o más. Se pueden observar un granulo de paramilio (P), expresan por sí mismos activamente. La heterocromatina
gotitas de lípidos (L) y franjas de la película (Pe) (x 40.000). (b)
Diagrama de la estructura de un cloroplasto. está enrollada más apretadamente, aparece más oscura con
4.9 Núcleo y división celular 91

el microscopio electrónico y, la mayor parte del tiempo, no por una membrana, es un orgánulo complejo con regiones
es activa genéticamente. Organización del DNA en el núcleo granulares y fibrilares separadas. Está presente en las células
eucariótico (pp. 249-251). en reposo, pero suele desaparecer durante la mitosis. Des-
El núcleo está recubierto por una envoltura nuclear pués de la mitosis, el nucléolo se vuelve a formar alrededor
(Figuras 4.2 y 4.25b), una estructura compleja formada por del organizador nucleolar, una parte especial de un cromoso-
dos membranas, interna y externa, separadas por un espacio ma específico.
perinuclear de 15 a 75 nm. La envoltura está ligada en algu- El nucléolo desempeña un papel fundamental en la sín-
nos puntos con el RE, por lo que podemos encontrar riboso- tesis de los ribosomas. El DNA del organizador nucleolar
mas recubriendo su membrana. Una red de filamentos inter- dirige la producción de RNA ribosómico (rRNA). Este RNA
medios, denominados lámina nuclear, está situada sobre la se sintetiza como una única pieza larga que luego se corta
superficie interna de la envoltura, sujetándola. La cromatina para formar las moléculas del rRNA final. A continuación,
está normalmente asociada con la membrana interna. el rRNA procesado se combina con proteínas ribosómicas
Muchos poros nucleares perforan la envoltura (Figura (que se han sintetizado en la matriz citoplasmática) para for-
4.17), cada uno de los cuales está formado por la fusión de mar subunidades ribosómicas parcialmente acabadas. Los
las membranas interna y externa. Los poros tienen un diá- granulos que se ven en el nucléolo son posiblemente estas
metro aproximado de 70 nm y ocupan en conjunto entre el subunidades. Luego, las subunidades inmaduras ribosómi-
10 y el 25 % de la superficie nuclear. En el extremo de cada cas dejan el núcleo, probablemente a través de los poros de
poro se ubica una estructura compleja de material granular y la envoltura, y maduran en el citoplasma. Corte y empalme
fibroso, con forma similar a un anillo, que se denomina del RNA (p. 283).
«complejo del poro» (annulus).
Los poros nucleares sirven como una ruta de transporte
entre el núcleo y el citoplasma circundante. Se ha observado el Mitosis y meiosis
movimiento de partículas hacia el interior del núcleo a través
de los poros. Aunque no se comprende la función del comple- Cuando un microorganismo eucariota se reproduce, su
jo del poro, puede que regule o facilite el movimiento de mate- material genético debe duplicarse y separarse, de manera
rial a través de los poros. Las sustancias se desplazan también que cada núcleo resultante posee un conjunto de cromoso-
a través de la envoltura nuclear por mecanismos desconocidos. mas. Este proceso de división nuclear y segregación cromo-
sómica en las células eucariotas se denomina mitosis. La
mitosis representa realmente sólo una pequeña parte de la
El nucléolo vida de un microorganismo, como puede observarse al estu-
diar el ciclo celular (Figura 4.18). El ciclo celular es la
A menudo, la estructura más destacable del núcleo es el secuencia completa de sucesos en el ciclo de crecimiento-
nucléolo (Figuras 4.2 y 4.25b). Un núcleo puede contener división, entre el final de una división y el final de la
uno a más nucléolos. Aunque el nucléolo no está rodeado siguiente. El crecimiento celular tiene lugar en la interfase,
aquella secuencia del ciclo entre mitosis. La interfase se
compone de tres partes. El período Gi (intervalo 1) es una
fase de síntesis activa de RNA, ribosomas y otros compo-
nentes citoplasmáticos acompañado de un crecimiento con-
siderable de la célula. Sigue el período S (período de sínte-
sis) en el que el DNA se replica, duplicando su cantidad.
Finalmente, hay un segundo intervalo, el período G2, en el
que la célula se prepara para la mitosis mediante actividades
como la síntesis de proteínas especiales de división. A conti-
nuación, se realizaría el proceso de la mitosis propiamente,
período M. La duración total del ciclo varía considerable-
mente según los microorganismos, normalmente debido a
variaciones en la duración del Gi.
Los sucesos mitóticos se resumen en la Figura 4.18.
Durante la mitosis, el material genético duplicado durante el
período S se distribuye igualmente entre los dos nuevos
núcleos, de manera que cada uno tendrá un conjunto comple-
to de genes. Hay cuatro fases en la mitosis. En la profase, los
cromosomas —cada uno con dos cromátidas— se hacen visi-
bles y se mueven hacia el ecuador de la célula. Se forma el
Figura 4.17 El núcleo. Preparación por criofractura del conidio del huso mitótico, el nucléolo desaparece, y la envoltura nuclear
hongo Geotrichum candidum (x44 600). Obsérvese la gran superficie
convexa con los poros nucleares dispersos en la misma.
comienza a disolverse. Durante la metafase, los cromosomas
92 Capítulo 4 Estructura y función de la célula eucariota

INTERFASE MITOSIS

Figura 4.18 Ciclo de


una célula eucariota. La
duración del período M se
ha aumentado
desproporcionadamente
para mostrar las fases de la
mitosis. Período d:
síntesis de mRNA, tRNA,
ribosomas y constituyentes
citoplasmáticos. El
nucléolo crece
rápidamente. Período S:
síntesis rápida y
duplicación del DNA e
histonas nucleares. Período
G2: preparación para la
mitosis y la división
celular. Período M: mitosis
(profase, metafase, anafase
y telofase) y citocinesis.

ya están situados en el centro del huso, y la envoltura nuclear


ha desaparecido completamente. Durante la anafase, las cro-
mátidas de cada cromosoma comienzan a desplazarse hacia
polos opuestos del huso. Finalmente, en la telofase, las cro-
mátidas se hacen menos visibles, el nucléolo reaparece, y se
forma una nueva membrana nuclear alrededor de cada con-
junto de cromátidas para formar dos nuevos núcleos.
La mitosis en microorganismos eucariotas puede ser
diferente de la representada en la Figura 4.18. Por ejemplo,
la envoltura nuclear no desaparece en muchos hongos y
algunos protozoos y algas (Figura 4.19). Con frecuencia, la
citocinesis, división del citoplasma de la célula madre para
formar nuevas células, comienza durante la anafase y acaba
al final de la telofase. Sin embargo, la mitosis puede tener
lugar sin citocinesis, para producir células multinucleadas o
cenocíticas.
En la mitosis, el número original de cromosomas es
igual al que se tiene después de la división, resultando de
células diploides nuevas diploides o 2N (esto es, que posee
todavía dos copias de cada cromosoma). Con frecuencia, un
microorganismo reduce su número de cromosomas a la
mitad, pasando del estado diploide a haploide o 1N (una
única copia de cada cromosoma). Las células haploides pue-
den actuar como gametos y fusionarse para volver a formar
organismos diploides; este acción como gametos la harán
inmediatamente, o bien después de un tiempo considerable
(Figura 4.20). El proceso por el cual se reduce el número de
cromosomas a la mitad, recibiendo cada célula hija un con-
junto completo de cromosomas se denomina meiosis. Los
ciclos vitales pueden llegar a ser muy complejos en microor-
Figura 4.19 Mitosis con la envoltura nuclear intacta. Mitosis en
ganismos eucariotas; un clásico ejemplo es el ciclo de Plas- el hongo mucoso Physarum flavicomum. La envoltura nuclear, EN,
modium, el agente de la malaria (véanse las pp. 1034-1036). permanece intacta, y el huso es intranuclear. El proceso se encuentra
Ciclos vitales de los microorganismos eucariotas (Capítulos 25-27). con los cromosomas, CR, en metafase, alineados en el centro y unidos
a las fibras del huso, FH (x 15 000).
4.11 Cilios y flagelos 93

tencia mecánica de la célula, reduciendo la necesidad de un


soporte externo (Sin embargo, como se ha mencionado en la
página 50, numerosas membranas procarióticas están forta-
lecidas por hopanoides). Numerosos eucariotas sí que poseen
una pared celular externa rígida. Por ejemplo, la pared
celular en las algas presenta un aspecto laminado y contiene
grandes cantidades de polisacáridos, como celulosa y pecti-
na. Además, la pared celular puede presentar sustancias
inorgánicas como sílice (en diatomeas) o carbonato calcico
(en algunas algas rojas). La pared celular en los hongos es
normalmente rígida. Su composición exacta varía según el
organismo; pero, normalmente, están presentes la celulosa,
quitina o glucanos (polímeros de glucosa diferentes a la
celulosa). A pesar de su naturaleza, los materiales rígidos de
la pared celular eucariótica son químicamente más sencillos
que el peptidoglicano de los procariotas. Estructura y com-
posición química de la pared celular bacteriana (pp. 58-63).
Muchos protozoos y algunas algas tienen una estructura
La meiosis es bastante compleja y comprende dos fases. externa diferente, la película (Figura 4.16a). Se trata de una
La primera fase es notablemente diferente de la mitosis. capa relativamente rígida ubicada justo debajo de la mem-
Durante la profase, los cromosomas homólogos se aproxi- brana plasmática (a veces la membrana plasmática se consi-
man y disponen uno al lado del otro, proceso que se conoce dera también parte de la película). La película puede tener
como sinapsis. Luego, en la anafase, cada cromosoma del una estructura bastante sencilla. Por ejemplo, Euglena pre-
par homólogo con sus dos cromátidas migra hacia cada polo senta una serie de franjas superpuestas con una cresta en el
opuesto. Por el contrario, durante la anafase de la mitosis, extremo de cada franja, que encaja en un surco de la adya-
las dos cromátidas de cada cromosoma se separan y segre- cente. Por el contrario, las películas de los protozoos cilia-
gan cada una de ellas a un polo opuesto. En consecuencia, el dos son extraordinariamente complejas, con dos membranas
número de cromosomas se reduce a la mitad en la meiosis, y diversas estructuras asociadas. Aunque las películas no
pero no en la mitosis. La segunda fase de la meiosis es simi- son tan fuertes ni rígidas como las paredes celulares, confie-
lar a la mitosis desde el punto de vista mecánico, separándo- ren a las células que las poseen de una forma característica.
se las cromátidas. Después de finalizar la meiosis I y la
meiosis II, la célula diploide original se ha transformado en
cuatro células haploides. 4.11 Cilios y flagelos
Los cilios y los flagelos son orgánulos relacionados con la
Describa la estructura del núcleo. ¿Qué son la eucromatina y movilidad. Aunque ambos son parecidos a un látigo y vibran
la heterocromatina? ¿Cuál es el papel de los poros en la para desplazar al microorganismo, se diferencian entre sí
envoltura nuclear?
por dos motivos. Primero, los cilios tienen una longitud típi-
Discuta brevemente la estructura y función del nucléolo. ¿Qué ca de sólo 5 a 20 um, mientras que los flagelos tienen de 100
es el organizador nucleolar? a 200 (im de longitud. Segundo, sus modelos de movimiento
Describa el ciclo.de la célula eucariota y el proceso de son normalmente diferentes y característicos (Figura 4.21).
mitosis. ¿Qué es la meiosis, cómo se desarrolla y cuál es su Los flagelos se mueven de una manera ondulante, creando
papel en el ciclo vital microbiano? ondas planas o helicoidales, en la base o en la punta. Si la
onda se mueve desde la base a la punta, la célula es empujada
hacia delante; un impulso que viaje desde la punta a la base
arrastra a la célula hacia atrás. A veces, el flagelo tiene pelos
4.10 Envolturas externas celulares laterales denominados filamentos «flimmer» (los pelos más
gruesos y rígidos se denominan mastigonemos). Estos fila-
Los microorganismos eucariotas se diferencian notablemente mentos cambian la acción de los flagelos, de manera que una
de los procariotas por las estructuras protectoras o de onda que se desplace por el filamento hacia la punta hace
soporte que poseen por fuera de la membrana plasmática. A retroceder a la célula en lugar de empujarla. Este tipo de fla-
diferencia de la mayoría de los procariotas, muchos eucario- gelo se denomina a menudo flagelo «tinsel», y el desnudo,
tas carecen de pared celular externa. Las amebas son un flagelo en forma de látigo (Figura 4.22). Por el contrario, los
ejemplo excelente. Las membranas de la célula eucariota, al cilios poseen una vibración con dos fases muy peculiares. En
contrario de la mayoría de las membranas procariotas, con- el golpe efectivo, el cilio bate a través del líquido circundante
tienen esteróles, como colesterol, que contribuye a la resis- como un remo, por lo que impulsa al organismo hacia delan-
94 Capítulo 4 Estructura y función de la célula eucariotá

Figura 4.21 Patrones para el movimiento flagelar. El movimiento


flagelar (dibujo izquierdo) produce a menudo ondas que se desplazan Figura 4.23 Coordinación de la actividad ciliar. Microfotografía
desde la base del flagelo hasta su punta o en sentido contrario. El electrónica de barrido de Paramecium, donde se observan los cilios (x
movimiento de estas ondas impulsa al organismo. El batido de un cilio 1500). El batido ciliar es coordinado y forma ondas a través de la
(dibujo derecho) puede dividirse en dos fases. En el golpe efectivo, el superficie del protozoo, como puede verse en la fotografía.
cilio permanece bastante rígido, conforme se mueve en el agua. Esta
fase continúa con un golpe de recuperación en el que el cilio se dobla y
vuelve a su posición inicial. Las flechas negras indican la dirección del
movimiento del agua en estos ejemplos. otros realizan la fase efectiva (Figura 4.23). Esta coordina-
ción permite al organismo moverse suavemente en el agua.
A pesar de las diferencias, los cilios y los flagelos pose-
te en el agua. A continuación, el cilio se dobla a lo largo, en una ultraestructura muy similar. Son cilindros rodeados
mientras es arrastrado hacia delante durante el golpe de recu- por una membrana, con un diámetro de aproximadamente
peración, para preparar otro golpe efectivo. Realmente, un 0.2 (im. En la matriz del orgánulo se encuentra ubicada una
microorganismos ciliado coordina los golpes, de manera que estructura compleja, el axonema, que consiste en nueve
algunos cilios están en fase de recuperación, mientras que pares de dobletes de microtúbulos dispuestos en círculo
alrededor de dos túbulos centrales (Figuras 4.24), se le
denomina modelo de microtúbulos de 9 + 2. Cada doblete
tiene también pares de brazos que se proyectan de un subtú-
bulo A (microtúbulo completo) hacia el doblete vecino. Un
eje radial se extiende desde el subtúbulo A hacia el par inter-
no de microtúbulos con su vaina central. Estos microtúbulos
son similares a los observados en el citoplasma. Cada uno de
ellos está constituido por dos tipos de subunidades de tubuli-
na, a y p\ que recuerdan en su composición a la proteína
contráctil actina. Flagelos bacterianos y movilidad (pp. 66-70).
Un cuerpo basal se ubica en la cara citoplasmática, en la
base de cada cilio o flagelo. Se trata de un cilindro corto con
nueve tripletes de microtúbulos alrededor de su periferia
(modelo 9 + 0), separado del resto del orgánulo por una placa
basal. El cuerpo basal dirige la construcción de estos orgánu-
los. Se cree que los cilios y flagelos crecen por la adición de
aubunídadcs profomitidcis ele microtúbulos cu sus puntas.
Los cilios y los flagelos se doblan porque los dobletes
de microtúbulos adyacentes se deslizan a lo largo entre sí,
mientras que mantienen su longitud individual. Los brazos
Figura 4.22 Flagelos en látigo y tinsel. Microfotografía electrónica
de transmisión mediante sombreado de un flagelo en látigo, FL, y un del doblete (Figura 4.24), de casi 15 nm de longitud, están
flagelo tinsel, FT, con mastigonemas. constituidos por la proteína dineina, que es quien hidroliza el
4.12 Comparación entre las células procariotas y eucariotas 95

Figura 4.24 Ultraestructura de cilios y flagelos, (a) Microfotografía de un corte transversal de un cilio. Obsérvense los dos microtúbulos
centrales rodeados por nueve dobletes de microtúbulos (x 160 000). (b) Diagrama de la estructura de cilios y flagelos, con dos dobletes eliminados para
mayor claridad.

ATP necesario para el movimiento de cilios y flagelos. Ade- 4.12 Comparación entre las células
más, participa en el movimiento, ya que parece que los bra- procariotas y eucariotas
zos de dineína interactúan con los subtúbulos B de los doble-
tes adyacentes para provocar deslizamiento. Los ejes radiales La comparación celular que se muestra en la Figura 4.25
participan también en el movimiento de deslizamiento. demuestra que existen muchas diferencias fundamentales
Los cilios y los flagelos vibran a un ritmo de 10 a 40 lati- entre las células eucariotas y las procariotas. Las células
dos u ondas por segundo, impulsando así a los microorganis- eucariotas (algas, hongos, protozoos, plantas y animales
mos rápidamente. El microorganismo que tiene el récord de superiores) tienen un núcleo rodeado por una membrana.
velocidad es el flagelado Monas stigmatica, que nada a una Por el contrario, las células procariotas (bacterias y ar-
velocidad de 260 ¡o.m/segundo (aproximadamente, 40 veces chaea) carecen de un núcleo verdadero, limitado por una
su longitud por segundo); el flagelado común Euglena graci- membrana. Las células procariotas son normalmente más
lis, viaja a una velocidad aproximada de 170 |Xm o 3 veces su pequeñas que las eucariotas, con un tamaño similar al de las
longitud por segundo. El protozoo ciliado Paramecium cau- mitocondrias y cloroplastos eucarióticos.
datum nada a una velocidad de aproximadamente 2700 |im/ La presencia del núcleo eucariótico es la diferencia
segundo (12 veces su longitud por segundo). Estas velocida- más obvia entre estos dos tipos de células, pero existen
des son equivalentes a, o más rápidas que, las observadas en otras que hay que resaltar. En la Tabla 4.2 queda claro que
animales superiores. las células procariotas tienen una estructura mucho más
sencilla. En particular, éstas carecen de una serie diversa
de orgánulos limitados por membrana. Además, los proca-
1. ¿En qué se diferencian los microorganismos eucariotas de
los procariotas respecto a las estructuras de soporte o
riotas son funcionalmente más sencillos por varios moti-
protectoras, externas a la membrana plasmática? Describa vos. Carecen de mitosis y meiosis y poseen una organiza-
la película e indique qué microorganismo.posee una. ción genética más simple. En los procariotas no se
desarrollan muchos procesos complejos eucarióticos:
2. Elabore y rotule un diagrama que muestre la estructura
detallada de un cilio o flagelo. ¿Cómo se mueven los cilios fagocitosis y pinocitosis, digestión intracelular, corriente
y los flagelos, y cuál es el papel de la dineína en este proceso? citoplasmática dirigida, movimiento ameboide, entre
otros.
96 Capítulo 4 Estructura y función de la célula eucariota

Figura 4.25 Comparación de la estructura de células procariotas y eueariotas. (a) Procariota Bacillus megaterium (x30 500). (b) Alga eucariota
Chlamydomonas reinhardtii, una célula sin flagelos. Obsérvese el gran cloroplasto con su cuerpo pirenoide (x30 000).

Tabla 4.2 Comparación entre células procariotas y eueariotas


Propiedad Procariotas Eucariotas

Organización del material genético


Núcleo verdadero rodeado por membrana Ausente Presente Sí
Complejos de DNA con histonas No Uno* Más de uno
Número de cromosomas Raro Común Presente
Intrones en los genes Ausente Sí
Nucléolo No Meiosis y fusión de gametos Presentes Presentes
Desarrollo de mitosis Parcial, transferencia unidireccional de DNA Si-De tamaño microscópico; rodeados de
Recombinación genética Ausentes Ausentes Normalmente, nob membrana;
Mitocondrias De tamaño submicroscópico; compuestos de normalmente con 20 microtúbulos dispuestos
Cloroplastos una fibra según el modelo 9 + 2 Presente
Membrana plasmática con esteróles Presente Químicamente más sencilla y
Flagelos Ausente carece de
Ausente peptidoglicano
Normalmente, compuesta químicamente por
Retículo endoplasmático peptidoglicanoc 80S (excepto en las mitocondrias y cloroplastos)
Aparato de Golgi Pared Presentes
celular 70S Presentes
Ausentes Ausentes Presente
Diferencias en orgánulos más sencillos o raros Ausente Tejidos y órganos
Ribosomas Rudimentaria
Lisosomas y peroxisomas
Microtúbulos Citoesqueleto
Diferenciación
Los plásmidos pueden proporcionar una información genética adicional.
Sólo los micopiasmas y los metanotrofos (que emplean metano) contienen esteróles. Los micoplasmas no pueden sintetizar esteróles y necesitan adquirir sus precursores.
Muchos procariotas contienen hopanoides.
Los micoplasmas y las Archaea no contienen peptidoglicano.
Palabras clave 97

A pesar de las numerosas diferencias que existen entre del DNA. Los principios que fundamentan los procesos
estos dos tipos básicos de células, son notablemente simila- metabólicos y la mayoría de las rutas metabólicas más
res bioquímicamente, como se expondrá en capítulos suce- importantes, son idénticos. En consecuencia, existen dife-
sivos. Los procariotas y los eucariotas están compuestos rencias estructurales y funcionales profundas entre proca-
por constituyentes químicos similares. Con unas pocas riotas y eucariotas, pero subyace una unidad uniforme más
excepciones, el código genético es el mismo en ambas, así fundamental: una unidad molecular que es básica en todos
como la forma en que se expresa la información genética los procesos vitales.

Resumen
1. La célula eucariota posee un núcleo ■ y permiten la digestión intracelular de 10. El nucléolo se encuentra dentro del núcleo
verdadero, limitado por una membrana, materiales, incluyendo los que son y participa en la síntesis del RNA
y muchos orgánulos membranosos englobados por endocitosis. ribosómico y de las subunidades
(Tabla 4.1). 6. Los ribosomas eucarióticos libres en la ribosómicas.
2. La matriz citoplasmática contiene matriz citoplasmática o unidos al RE son de 11. Los cromosomas eucarióticos se transmiten
microfilamentos, filamentos intermedios y 80S. Varios pueden unirse al mismo RNA a las células hijas durante la división celular
microtúbulos, orgánulos pequeños que son mensajero para formar polirribosomas o ordinaria, por mitosis (Figura 4.18). La
parcialmente responsables de la estructura y polisomas. meiosis sirve para reducir a la mitad el
movimiento celular. Estos y otros tipos de 7. Las mitocondrias son orgánulos cubiertos número de cromosomas durante la
filamentos están organizados en un por dos membranas, estando la membrana multiplicación sexual.
citoesqueleto. interna plegada en crestas. Son responsables 12. Cuando existe una pared celular, está
3. La matriz contiene una red irregular de de la generación de energía mediante el ciclo constituida por polisacáridos, como celulosa,
túbulos y sacos aplanados o cisternas, de los ácidos tricarboxílicos, el transporte de que son químicamente más sencillos que el
denominada retículo endoplasmático (RE). electrones y la fosforilación oxidativa peptidoglicano de los procariotas. Muchos
El RE puede tener adheridos ribosomas (Figura 4.14). protozoos tienen una película en lugar de
y ser activo en la síntesis de proteínas 8. Los cloroplastos son el lugar donde se pared celular.
(retículo endoplasmático rugoso o granular), realiza la fotosíntesis. La captación de 13. Muchas células eucariotas son móviles
o carecer de ribosomas (RE liso o energía lumínica tiene lugar en la membrana gracias a cilios y flagelos, orgánulos
agranular). de los tilacoides, mientras que la limitados por una membrana con nueve
4. El RE puede donar materiales al aparato de incorporación de CO2 se localiza en el dobletes de microtúbulos que rodean a dos
Golgi, un orgánulo compuesto de una o más estroma (Figura 4.16). microtúbulos centrales (Figura 4.24). Los
pilas de cisternas (Figura 4.9). Este 9. El núcleo es un orgánulo grande que dobletes se deslizan entre sí para doblar el
orgánulo prepara y empaqueta los productos contiene los cromosomas de la célula. Está cilio o el flagelo.
celulares para su secreción. rodeado por una envoltura compleja, de 14. A pesar de las numerosas diferencias
5. El aparato de Golgi forma también los doble membrana, perforada por poros a entre eucariotas y procariotas
lisosomas (Figuras 4.10 y 4.11). Estos través de los cuales se pueden desplazar (Tabla 4.2), son bastante similares
orgánulos contienen enzimas digestivas materiales. metabólicamente.

Palabras clave
aparato de Golgi 83 envoltura nuclear 91 orgánulo 80
axonema 94 células estroma 90 fagocitosis pared celular 93
eucariotas 95 células 85 filamento intermedio partícula Ft 88
procariotas 95 ciclo 82 flagelos 93 grana 90 película 93
celular 91 cilios 93 interfase 91 lisosoma pinocitosis 55
cisterna 83 85 lisosomas primarios pirenoide 90
citoesqueleto 83 85 lisosomas secundarios plástido 89
cloroplasto 89 crestas 85 matriz citoplasmática polirribosomas 87
87 cromatina 90 80 meiosis 92 polisomas 87
cromosoma 90 microfilamento 81 poros nucleares 91
cuerpo basal 94 microtúbulo 82 RE liso o agranular (REL o REA) Si
cuerpo residual 85 mitocondria 87 mitosis RE rugoso o granular (RER o REG) 83
dictiosoma 84 91 núcleo 90 nucléolo retículo endoplasmático (RE) 83
dineína 94 91 teoría endosimbiótica 89
endocitosis 85 tilacoide 90
endosoma 85 vacuola autofágica 86
98 Capítulo 4 Estructura y función de la célula eucariota

Preguntas para razonar y repasar Cuestiones para reflexionar


1. Describa la estructura y función de cada 4. Exponga brevemente cómo el complejo de 1. Giardia lamblia es un ejemplo de eucariota
orgánulo eucariótico que se ha explicado en orgánulos membranosos que de Duve que contiene núcleos pero no mitocondrias.
este capítulo. denomina «vacuoma« funciona como ¿De qué manera afecta la existencia de
2. Razone la afirmación siguiente: «La diferencia un todo coordinado. ¿Cuál es su Giardia a la teoría endosimbionte? ¿Cómo
más obvia entre las células eucariotas y función? obtiene Giardia su energía? ¿Cambiaría sus
procariotas radica en el uso de membranas.» 5. Describa y contraste las maneras en que los respuestas si supiera que Giardia es un
¿Cuáles son las funciones generales de las flagelos y los cilios impulsan a los parásito?
membranas en las células eucariotas? microorganismos en el agua. 2. ¿Esperaría encontrar organismos sin
3. Describa cómo el aparato de Golgi distribuye 6. Enumere las diferencias fundamentales entre núcleos pero con mitocondrias? ¿Por qué?
las proteínas que recibe del RE a los procariotas y eucariotas. ¿En qué sentido son Apoye su respuesta con datos
diferentes orgánulos. similares? bibliográficos.

Lecturas suplementarias
General 4.4 Aparato de Golgi Welch, W. J. 1993. How cells respond to stress. Sci.
Alberts, B.; Bray, D.; Lewis, J.; Raff, M.; Roberts, K.; Rothman, J. E. 1985. The compartmental Am. 268(5):56-64.
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4.5 Lisosomas y endocitosis 4.9 Núcleo y división celular
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PARTE II CAPÍTULO 5
Nutrición, Nutrición microbiana
crecimiento
y control
microbiano
Staphylococcus aureus
forma grandes colonias
Capítulo 5 doradas cuando se
Nutrición microbiana multiplica sobre agar
sangre. Este patógeno
humano produce
Capítulo 6 enfermedades como
Crecimiento microbiano furúnculos, abscesos,
bacteriemia, endocarditis,
Capítulo 7 intoxicaciones
alimentarias, faringitis y
Control de microorganismos neunomía.
por agentes físicos y químicos
índice Conceptos
5.1 Requerimientos nutritivos 1. Los microorganismos celulares precisan de al
esenciales 100 menos 10 elementos en grandes cantidades, ya
5.2 Requerimientos de carbono, que se utilizarán para producir hidratos de
hidrógeno y oxígeno 100 carbono, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos.
Otros elementos son necesarios en cantidades
5.3 Tipos nutricionales entre los
muy pequeñas y forman parte de enzimas y
microorganismos 101 cofactores.
5.4 Necesidades de nitrógeno,
2. Todos los microorganismos celulares pueden
fósforo y azufre 102
clasificarse en algunas de las pocas categorías
5.5 Factores de crecimiento 103 nutricionales que existen, en función de sus
5.6 Captación celular necesidades de carbono, energía y átomos de
de nutrientes 104 hidrógeno o electrones.
Difusión facilitada 104 3. Las moléculas de nutrientes, con frecuencia, no
Transporte activo 106 pueden atravesar por difusión pasiva las
Translocación de grupo 108 membranas plasmáticas selectivamente
Captación de hierro 109 permeables. En este caso, deben ser transportadas
5.7 Medios de cultivo 109 por uno de los tres mecanismos principales de
transporte que comprenden la participación de
Medios sintéticos proteínas transportadoras. Los microorganismos
o definidos 110 eucariotas emplean también la endoeitosis para
Medios complejos 110 captar nutrientes.
Tipos de medios 111
4. Los medios de cultivo son necesarios para
5.8 Aislamiento de cultivos cultivar los microorganismos en el laboratorio, y
puros 112 poder así realizar estudios característicos, como
Siembra en placa por extensión el análisis de agua y alimentos, y el aislamiento e
y en estrías 112 Siembra en identificación de microorganismos.
profundidad 112 Morfología y 5. Los cultivos puros se pueden obtener mediante
crecimiento siembra en placa por extensión, en estrías o en
de colonias 114 profundidad, y son imprescindibles para estudiar
las especies microbianas.
100 Capítulo 5 Nutrición microbiana

enzimas y cofactores, y facilitan la catálisis de reacciones y


Toda la naturaleza es, como se ha dicho, una conjugación activa y el mantenimiento de la estructura de proteínas. Por ejemplo,
pasiva del verbo comer. el cinc (Zn2+) se encuentra en el centro activo de algunas
William Ralph Inge. enzimas, pero también está invoucrado en la asociación de
las subunidades reguladoras y catalíticas de la aspartato car-
bamoiltransferasa en E. coli {véase la sección 8.9). El man-
ganeso (Mn2+) facilita a muchas enzimas la transferencia

P ara obtener energía y elaborar nuevos componentes


celulares, los organismos tienen que disponer de
materias primas, o nutrientes. Los nutrientes son sus-
tancias que se' emplean en la biosíntesis y producción de
catalítica de los grupos fosfato. El molibdeno (Mo2+) es
necesario para fijar nitrógeno; y el cobalto (Co2+) es un com-
ponente de la vitamina Bt2. Enzimas y transportadores de
energía y, en consecuencia, son necesarios para el creci- electrones (pp. 168-175).
miento microbiano. Este capítulo describe los requerimien- Además de los macroelementos comunes y elementos
tos de nutrientes de los microorganismos, su forma de capta- traza, los microorganismos pueden tener necesidades especia-
ción y el cultivo de los microorganismos. les que reflejen la naturaleza especial de su morfología o de
Factores ambientales como temperatura, nivel de oxíge- su habitat natural. Las diatomeas {véase la Figura 26.6c,d)
no y concentración osmótica del medio son críticos para cul- necesitan ácido silícico (H4SiO4) para construir sus hermosas
tivar con éxito los microorganismos. Estos temas se expon- paredes celulares de sílice [(SiC^),,]. Aunque la mayoría de
drán en el Capítulo 6, después de una introducción sobre el las bacterias no requieren grandes cantidades de sodio,
crecimiento microbiano. muchas bacterias que crecen en lagos salinos y océanos
{véanse las pp. 130, 497) dependen de la presencia de con-
centraciones elevadas del ion sodio (Na+).
Por último, debe recalcarse que los microorganismos
requieren una mezcla compensada de nutrientes. Si un
5.1 Requerimientos nutritivos esenciales nutriente esencial no se encuentra disponible, el crecimiento
microbiano se verá limitado, independientemente de la con-
El análisis de la composición de la célula microbiana revela centración de otros nutrientes.
que más del 95 % del peso seco de la célula está constituido
por unos pocos elementos: carbono, oxígeno, hidrógeno,
nitrógeno, azufre, fósforo, potasio, calcio, magnesio y hie-
rro. Estos se denominan macroelementos o macronutrien- 5.2 Requerimientos de carbono, hidrógeno
tes, porque los microorganismos los captan en cantidades y oxígeno
relativamente grandes. Los seis primeros (C, O, H, N, S y P)
son componentes de los hidratos de carbono, lípidos, proteí- Las necesidades de carbono, hidrógeno y oxígeno suelen
nas y ácidos nucleicos. Los cuatro macroelementos restantes cubrirse al mismo tiempo. El carbono es necesario para
se encuentran en la célula en forma de cationes y desempe- construir el esqueleto de todas las moléculas orgánicas y,
ñan diversos papeles. Por ejemplo, el potasio (K+) es necesa- además, las moléculas que sirven como fuente de carbono
rio para la actividad de varias enzimas, incluyendo algunas aportan también, normalmente, átomos de oxígeno e hidró-
que participan en la síntesis de proteínas. El calcio (Ca2+) geno. Es decir, los compuestos de carbono constituyen la
contribuye, entre otras funciones, a la termorresistencia de fuente de los tres elementos. Por otra parte, ya que estos
las endosporas. El magnesio (Mg2+) actúa como cofactor de compuestos orgánicos se encuentran casi siempre reducidos
muchas enzimas, forma complejos con el ATP, y estabiliza y pueden donar esos electrones a otras moléculas, pueden
los ribosomas y las membranas celulares. El hierro (Fe2+ y servir como fuentes de energía. Así, cuanto más reducidos
Fe+) forma parte de los citocromos y es cofactor de enzimas
estén, mayor contenido energético tendrán (p. ej., los lípidos
y de proteínas transportadoras de electrones.
tienen un mayor contenido energético que los carbohidra-
Todos los organismos, incluidos los microorganismos,
tos). Esto es así porque, como veremos más adelante, la
requieren diversos micronutrientes o elementos traza,
transferencia de electrones libera energía cuando los electro-
además de los macroelementos. La mayoría de las células
nes se mueven de dadores reducidos (con un potencial de
necesitan los micronutrientes: manganeso, cinc, cobalto,
reducción más negativo) a aceptores oxidados (más electro-
molibdeno, níquel y cobre. Sin embargo, las células preci-
positivos). En definitiva, las fuentes de carbono frecuente-
san de unas cantidades tan pequeñas, que contaminantes
presentes en el agua, recipientes y en los componentes habi- mente se utilizan además como fuentes de energía, aunque
tuales del medio son a menudo suficientes para el creci- ésta no fuera su utilidad inicial. Reacciones de óxido-reduc-
miento. Por ello, es muy difícil demostrar la necesidad de ción y energía (pp. 168-170).
un micronutriente. En la naturaleza, los micronutrientes son Una fuente de carbono muy importante que no aporta
ubicuotas y probablemente, por lo general, no limiten el cre- hidrógeno o energía es el dióxido de carbono (CO2). Esto es
cimiento. Estos micronutrientes son normalmente parte de así porque el CO2 está oxidado y carece de hidrógeno. Pro-
bablemente, todos los organismos pueden fijar CO2 —esto
5.3 Tipos nutricionales entre los microorganismos 101

es, reducirlo y transformarlo en moléculas orgánicas—. Sin den agruparse en clases nutricionales basadas en cómo satis-
embargo, por definición, sólo los organismos autotrofos facen dichos requerimientos (Tabla 5.1). Ya hemos visto
pueden usar CO2 como fuente única o principal de carbono. que los microorganismos pueden clasificarse en heterotrofos
Numerosos microorganismos son autotrofos, y la mayoría o autotrofos con respecto a su fuente preferente de carbono.
de éstos son fotosintéticos, y utilizan la luz como fuente de Por otra parte, existen únicamente dos fuentes de energía
energía. Algunos autotrofos oxidan moléculas inorgánicas y disponibles para los organismos: 1) la energía lumínica para
obtenien energía al ceder esos electrones. Fijación fotosinté- la fotosíntesis, y 2) la energía derivada de la oxidación de
tica del dióxido de carbono (p. 223). moléculas orgánicas o inorgánicas. Los fototrofos emplean
La reducción del CO2 es un proceso que consume gran luz como fuente de energía; los quimiotrofos obtienen la
cantidad de energía. Por ello, muchos microorganismos no energía a partir de la oxidación de compuestos químicos
pueden usar CO2 como única fuente de carbono, sino que (orgánicos o inorgánicos). También, los microorganismos
dependen de la presencia de moléculas complejas, más redu- tienen solamente dos fuentes de átomos de hidrógeno, o
cidas, como fuente de carbono. Los organismos que emplean electrones. Los litotrofos (esto es, «que comen piedras»)
moléculas orgánicas preformadas y reducidas como fuentes utilizan sustancias inorgánicas reducidas como fuente de
de carbono son heterotrofos (estas moléculas preformadas electrones, mientras que los organotrofos obtienen electro-
proceden generalmente de otros organismos). Como se indi- nes o hidrógeno de compuestos orgánicos. Fase lumínica de
có anteriormente, la mayoría de los heterotrofos usan la fotosíntesis (pp. 209-215); Oxidación de moléculas orgánicas e
nutrientes orgánicos como fuente de carbono y de energía. inorgánicas (pp. 188-209).
Por ejemplo, la vía glucolítica produce energía en forma de A pesar de la enorme diversidad metabólica que presen-
ATP y NADH, y también compuestos carbonados reducidos tan los microorganismos, la mayoría puede incluirse en una
para utilizarlos en la biosíntesis. Vía glucolítica (p. 189). de los cuatro tipos nutricionales, tomando como base sus
La característica nutricional más notable de los micro- fuentes primarias de energía, hidrógeno o electrones, o
organismos es su extraordinaria flexibilidad en relación con ambos, y carbono (Tabla 5.2). La inmensa mayoría de los
las fuentes de carbono. Experimentos de laboratorio indican microorganismos estudiados hasta la fecha son autotrofos
que no existe ninguna molécula orgánica natural que no fotolitotróficos o heterotrofos quimioorganotróficos. Los
pueda ser utilizada por algún microorganismo. Los actino- autotrofos fotolitotróficos (denominados a menudo fotoau-
micetos pueden degradar alcohol amílico, parafina e incluso totrofos o fotolitoautotrofos) utilizan energía lumínica y
CO2 como fuente de carbono. Las algas y las cianobacterias
caucho. Algunas bacterias pueden emplear casi cualquier
emplean agua como dador de electrones, liberando el oxíge-
sustancia como fuente de carbono; por ejemplo, Burkholderia
no. Las bacterias verdes y púrpuras del azufre no pueden
cepacia puede utilizar más de 100 compuestos diferentes de
oxidar agua, pero captan electrones de dadores inorgánicos,
carbono. En contraste con estas bacterias «omnívoras», otras
como hidrógeno, sulfuro de hidrógeno y azufre elemental.
son extremadamente exigentes y catabolizan pocos com-
Los heterotrofos quimioorganotróficos (denominados a
puestos de carbono. Así, las bacterias metilotrofas metabo-
menudo quimioheterotrofos, quimioorganoheterotrofos o,
lizan sólo metano, metanol, monóxido de carbono, ácido incluso, simplemente heterotrofos) emplean compuestos
fórmico y similares moléculas de un átomo de carbono. Lep-
tospira utiliza solamente ácidos grasos de cadena larga como
fuente principal de carbono y energía.
Parece ser que en los entornos naturales poblaciones Tabla 5.1 Fuentes de carbono, energía
muy complejas de microorganismos son capaces incluso de
y electrones
metabolizar sustancias sintetizadas por el hombre, como por
ejemplo los pesticidas. Moléculas en principio indigestibles Fuentes de carbono
son oxidadas y degradadas en presencia de un nutriente que Autotrofos CO2 como única o principal fuente de carbono (p.
favorece el crecimiento y que es metabolizado al mismo 223)"
Heterotrofos Moléculas orgánicas preformadas reducidas,
tiempo, proceso denominado cometabolismo. Los productos procedentes de otros
resultantes de este proceso pueden ser utilizados como organismos {Capítulos 9 y 10)
nutrientes por otros microorganismos. Biodegradación y Fuentes de energía
microorganismos (pp. 1095-1100). Fototrofos Luz (pp. 209-215) Oxidación de compuestos
Quimiotrofos orgánicos o inorgánicos (Capítulo 9)

5.3 Tipos nutricionales entre Fuentes de electrones


Litotrofos Moléculas inorgánicas reducidas
los micoorganisrnos (pp. 206-209) Moléculas orgánicas (Capítulo
Organotrofos 9).
Además de los requerimientos de carbono, hidrógeno y oxí-
* Para cada categoría se indica entre paréntesis las
geno, todos los organismos necesitan fuentes de energía y páginas o el capítulo donde se describen las vías metabólicas que participan en el
electrones para su crecimiento. Los microorganismos pue- proceso.
102 Capítulo 5 Nutrición microbiana

Tabla 5.2 Principales tipos nutricionalcs entre los microorganismos


Principales tipos nutricionalcs'' Fuentes de energía, hidrógeno/electrones \ carbono Microorganismos representativos

Fotolitotrofía autotrófica Energía lumínica Algas


(fotolitoautotrofía) Dador inorgánico de hidrógeno/electrones (H/e~) Bacterias púrpuras y verdes del azufre
CO2 como fuente de carbono Cianobacterias
Fotoorganotrofía heterotrófica Energía lumínica Dador orgánico de H/e~ Fuente Bacterias púrpuras no sulfúreas
(fotoorganoheterotrofía) orgánica de carbono (puede emplearse también Bacterias verdes no sulfúreas
CO2)
Fuente de energía química (inorgánica)
Quimiolitotrofía autotrófica Dador inorgánico de H/e~ CO2 como fuente Bacterias oxidantes del azufre
(quimiolitoautotrofía) de carbono Bacterias del hidrógeno
Bacterias nitrificantes
Fuente de energía química (orgánica) Bacterias oxidantes del hierro
Quimioorganotrofía heterotrófica Dador orgánico de H/e~ Fuente Protozoos
(quimioorganoheterotrofía) orgánica de carbono Hongos
La mayoría de las bacterias no fotosintéticas
(incluyendo la mayor parte de los
microorganismos patógenos)

a
Se han aislado bacterias que pertenecen a otras categorías nutricionales. Los tipos descritos se basan en las fuentes de energía, electrones y carbono. Entre paréntesis se indica el
nombre abreviado.

orgánicos como fuentes de energía, hidrógeno, electrones y moléculas orgánicas y funcionan quimiotróficamente en
carbono para realizar la biosíntesis. Con frecuencia, un presencia de niveles atmosféricos de oxígeno. Incluso, cuan-
mismo nutriente orgánico satisface todas estas necesidades. do hay poco oxígeno, la fotosíntesis y el metabolismo oxi-
Es interesante destacar que prácticamente todos los microor- dativo pueden funcionar simultáneamente. Otro ejemplo lo
ganismos patógenos son quimioheterotrofos. proporcionan bacterias como Beggiatoa {véase la p. 539) que
Las otras dos clases comprenden pocos microorganis- pueden obtener energía de fuentes inorgánicas, utilizando
mos, pero son a menudo muy importantes desde el punto de una fuente orgánica de carbono (aunque a veces puede ser el
vista ecológico. Algunas bacterias púrpuras y verdes son propio CO2). A estos microorganismos se les denomina
fotosintéticas y utilizan materia orgánica como dador de habitualmente mixotrólícos, ya que combinan procesos
electrones y fuente de carbono. Estos organismos heterotro- metabólicos quimiolitoautotróficos y heterotróficos. Esta
fos fotoorganotrófícos (fotoorganoheterotrofos) habitan clase de flexibilidad parece compleja y confusa, pero aporta
comúnmente lagos y arroyos contaminados. Algunas de al organismo en cuestión una gran ventaja adaptativa cuando
estas bacterias pueden crecer también como fotoautotrofos, las condiciones ambientales cambian con frecuencia.
teniendo como dador de electrones al hidrógeno molecular.
Los miembros del cuarto grupo, los autotrofos quimiolito-
tróficos (quimiolitoautotrofos) oxidan compuestos inorgáni- 1. ¿Qué son los nutrientes y por qué motivos se dividen en
cos reducidos, como moléculas de hierro, nitrógeno o azufre macroelementos y elementos traza? Describa cómo utiliza
para liberar energía y electrones para la biosíntesis. El dióxi- un organismo los macronutrientes y los elementos traza.
do de carbono es la fuente de carbono. Unos pocos quimioli- 2. Defina autotrofo y heterotrofo.
totrofos pueden obtener el carbono de fuentes orgánicas y, 3. Exponga los fundamentos para clasificar los
por ello, son heterotrofos. Los quimiolitotrofos contribuyen microorganismos en función de sus necesidades de energía,
en gran medida a las transformaciones químicas de los ele- hidrógeno y electrones.
mentos (p. ej., la conversión de amonio en nitrato, o de azu- 4. Describa los requerimientos nutricionales de los cuatro
fre en sulfato) que se producen continuamente en el ecosis- grupos principales y aporte algunos ejemplos microbianos
tema. Bacterias fotosintéticas y quimiolitotrofas (secciones 21.3, de cada uno de ellos. ¿Qué es un microorganismo mixotrofo?
22.1 y 22.3).
Aunque una especie particular puede pertenecer sola-
mente a uno de los cuatro tipos nutricionales mencionados,
algunas muestran una gran flexibilidad metabólica y modifi-
5.4 Necesidades de nitrógeno, fósforo y
can sus modelos metabólicos para adaptarse a los cambios
ambientales. Por ejemplo, muchas bacterias púrpuras no sul- azufre
fúreas {véase la sección 22.7) se comportan como heterotro-
fas fotoorganotrofas en ausencia de oxígeno, pero oxidan Para crecer, un microorganismo debe ser capaz de incorporar
grandes cantidades de nitrógeno, fósforo y azufre. Aunque
5.5 Factores de crecimiento 103

estos elementos pueden adquirirse a partir de los mismos nentes celulares que precisan para su mantenimiento adecua-
nutrientes que aportan carbono, los microorganismos suelen do; sin embargo, muchos microorganismos carecen de una o
emplear también fuentes inorgánicas. Mecanismos bioquími- más enzimas esenciales. Por ello, no pueden elaborar todos
cos para incorporar nitrógeno, fósforo y azufre (pp. 225-230). los constituyentes indispensables, sino que deben obtenerlos,
El nitrógeno es necesario para sintetizar aminoácidos, o a sus precursores, del ambiente. Los compuestos orgánicos
purinas, pirimidinas, algunos hidratos de carbono y lípidos, que son necesarios porque son componentes celulares esen-
cofactores de enzimas y otras sustancias. Muchos microor- ciales, o sus precursores, y no pueden sintetizarse por el
ganismos pueden emplear el nitrógeno en aminoácidos y, a organismo, se denominan factores de crecimiento. Existen
menudo, incorporar directamente el amonio por medio de tres clases principales de factores de crecimiento: 1) amino-
enzimas, como glutamato deshidrogenasa o glutamina sin- ácidos, 2) purinas y pirimidinas, y 3) vitaminas. Los amino-
tetasa y glutamato sintetasa (véase la sección 10.4). La ácidos se necesitan para la síntesis de proteínas, y las puri-
mayoría de los microorganismos fototrofos y muchos no nas y pirimidinas, para la síntesis de ácidos nucleicos. Las
fotosintéticos reducen nitrato a amonio, incorporándolo vitaminas son moléculas orgánicas pequeñas que normal-
mediante la reducción asimilatoria de nitrato {véanse las mente forman la totalidad o parte de los cofactores enzimáti-
pp. 226-227). Numerosas bacterias (p. ej., muchas ciano- cos (véase la sección 8.6) y sólo se requieren cantidades
bacterias y la bacteria simbiótica Rhizobium) pueden redu- pequeñas para el crecimiento. Las funciones de algunas vita-
cir y asimilar el nitrógeno atmosférico mediante el sistema minas seleccionadas y ejemplos de microorganismos que las
de la nitrogenasa {véase la sección 10.4). precisan se exponen en la Tabla 5.3. Algunos microorganis-
El fósforo está presente en los ácidos nucleicos, fosfolí- mos necesitan muchas vitaminas; por ejemplo, Enterococ-
pidos, nucleótidos como ATP, varios cofactores, algunas cus faecalis (bacteria acidoláctica) necesita ocho vitaminas
proteínas y otros componentes celulares. Casi todos los diferentes para crecer. También se observan otros factores de
crecimiento; Haemophilus influenzae necesita el grupo
microorganismos usan fosfato inorgánico como fuente de
hemo (de la hemoglobina o de citocromos), y algunos mico-
fósforo y lo incorporan directamente. Niveles bajos de fos-
plasmas requieren colesterol.
fato limitan el crecimiento microbiano en numerosos entor-
El conocimiento de las necesidades de factores de creci-
nos acuáticos. La captación de fósforo por E. coli ha sido
miento específicos permite realizar bioensayos de crecimien-
muy estudiada. Esta bacteria puede utilizar tanto fósforo
to-respuesta frente a numerosas sustancias. Por ejemplo,
orgánico como inorgánico. Algunos organofosfatados como
especies bacterianas de los géneros Lactobacillus y Strepto-
las hexosas 6-fosfato pueden ser tomados directamente
coccus pueden utilizarse en bioensayos para determinar la
mediante proteínas transportadoras. Otros organofosfatados presencia de la mayoría de vitaminas y aminoácidos. Se cul-
deben ser hidrolizados en el periplasma por fosfatasas alca- tiva la bacteria apropiada en una serie de tubos de cultivo,
linas para producir fosfato inorgánico, que será entones cada uno de los cuales contiene un medio con una cantidad
transportado a través de la membrana citoplasmática. Cuan- en exceso de todos los componentes necesarios, excepto del
do el fosfato inorgánico se encuentra fuera de la célula, ésta factor de crecimiento que se va a ensayar. Se añade una can-
cruza la membrana externa a través de una porina. Posterior- tidad diferente de factor de crecimiento en cada tubo. Se
mente, un sistema de transporte la lleva a través de la mem- traza una curva estándar, relacionando la cantidad o concen-
brana citoplasmática. A altas concentraciones de fosfato, el tración de un factor de crecimiento con el nivel total de cre-
sistema de transporte más utilizado es, probablemente, el cimiento bacteriano. Idealmente, el nivel de crecimiento
Pit. Cuando la concentración de fosfato es baja, se utiliza el resultante es directamente proporcional a la concentración
PST (transporte específico de fosfato). El sistema PST tiene del factor de crecimiento presente; si el factor de crecimien-
mayor afinidad por el fosfato; se trata de un sistema ABC to se duplica, lo hace también el nivel final de crecimiento
(véanse las pp. 106-107) y utiliza proteínas periplásmicas. bacteriano. La concentración del factor de crecimiento en la
El azufre es necesario para la síntesis de sustancias muestra de ensayo se determina extrapolando el nivel de
como los aminoácidos cisteína y metionina, algunos hidra- crecimiento producido en la muestra desconocida con el
tos de carbono, biotina y tiamina. La mayoría de los micro- originado en las estándares. Los bioensayos microbiológi-
organismos utilizan sulfato como fuente de azufre y lo redu- cos son específicos, sensibles y sencillos. Todavía se
cen mediante la reducción asimilatoria de sulfato (véase emplean para cuantificar sustancias como la vitamina B12 y
sección 10.4); unos pocos precisan de una forma reducida la biotina, a pesar de los avances en las técnicas químicas
de azufre, como cisteína. de ensayos.
La observación de que numerosos microorganismos pue-
den sintetizar grandes cantidades de vitaminas ha permitido
5.5 Factores de crecimiento su empleo en la industria. Diversas vitaminas hidrofílicas o
hidrofóbicas se producen parcial o totalmente en grandes
Normalmente, los microorganismos podrán crecer y multi- incubadores industriales. Algunos ejemplos representativos
plicarse cuando dispongan de fuentes de energía, carbono, de tales vitaminas y de los microorganismos que las sintetizan
nitrógeno, fósforo y azufre. Estos organismos tienen las son: riboflavina (Clostridium, Candida, Ashbya, Eremothe-
enzimas y vías necesarias para sintetizar todos los compo-
104 Capítulo 5 Nutrición microbiana

Tabla 5.3 Funciones de algunas vitaminas comunes en los microorganismos


Vitamina
Funciones Ejemplos de microorganismos que requieren vitaminas"

Carboxilación (fijación de CO2) Metabolismo Leuconostoc mesenteroides (B)


Biotina Cianocobalamina de compuestos monocarbonados Saccharomyces cerevisiae (H)
Ochmmonas malhamensis (A)
Acanthamoeba castellana (P)
Reagrupamientos moleculares Especies de Lactobacillus (B) Euglena
(B12) Metabolismo de compuestos gracilis (A) Diatomeas y otras muchas
monocarbonados: transporta grupos metilo algas (A) Acanthamoeba castellana (P)
Enterococcus faecalis (B)
Metabolismo de compuestos monocarbonados Tetrahymena pyriformis (P)
Ácido fólico Ácido Lactobacillus casei (B)
Transferencia de grupos acilo Especies de Tetrahymena (P)
lipoico Ácido pantoténico Proteus morganii (B) Especies de
Precursor de la coenzima A: transporta grupos Hanseniaspora (H) Especies de
acilo (oxidación del piruvato, metabolismo de los Paramecium (P)
Piridoxina (Be) ácidos grasos) Especies de Lactobacillus (B)
Metabolismo de los aminoácidos (p. Tetrahymena pyriformis (P)
ej., transaminación) Brucella abortas, Haemophilus influenzae (B)
Niacina (ácido nicotínico)
Precursor de NAD y NADP: transporta electrones y Blastocladia pringsheimü (H) Crithidia
átomos de hidrógeno fasciculata (P)
Riboflavina (B2) Caulobacter vibrioides (B)
Precursor de FAD y FMN: transporta electrones o Especies de Dictyostelium (H)
átomos de hidrógeno Tetrahymena pyriformis (P)
Tiamina (B,) Bacillus anthracis (B) Phycomyces
Transferencia de grupos aldehido (decarboxilación blakesleeanus (H) Ochromonas
del piruvato, oxidación ot-ceto acida malhamensis (A) Colpidium
campylum (P)

Los microorganismos representativos son miembros de los siguientes grupos: bacterias (B), hongos (H), algas (A) y protozoos (P).

cium); coenzima A (Brevibacterium); vitamina B]2 (Strep- una sustancia que no puede utilizar. Como los microorganis-
tomyees, Propionibacterium, Pseudomonas); vitamina C (Glu- mos viven a menudo en habitat pobres en nutrientes, deben
conobacter, Erwinia, Corynebacterium); |3-caroteno (Du- ser capaces de transportarlos en contra de un gradiente de
naliella); y vitamina D (Saccharomyces). La investigación concentración, desde soluciones diluidas hasta el interior de
actual se centra en la mejora de los rendimientos y en encon- la célula. Finalmente, las moléculas de nutrientes tienen que
trar microorganismos que sean capaces de producir grandes atravesar la membrana plasmática selectivamente permea-
cantidades de otras vitaminas. ble, que no permitirá el paso libre a la mayoría de las sustan-
cias. Considerando la gran variedad de nutrientes existentes
y la complejidad del proceso de nutrición celular, no resulta
Resuma brevemente las formas en que los microorganismos
obtienen de su entorno natural nitrógeno, fósforo y azufre.
sorprendente que los microorganismos utilicen varios meca-
nismos de transporte diferentes. Los más importantes son la
¿Qué son los factores de crecimiento? ¿Qué son las
difusión facilitada, el transporte activo y la translocación de
vitaminas? ¿Cómo se pueden emplear los microorganismos
para determinar la cantidad de una sustancia específica en una grupo. Se cree que los microorganismos eucariotas no utili-
muestra? zan la translocación de grupo, sino que captan los nutrientes
por endocitosis (véase la sección 4.5). Estructura y propie-
dades de la membrana plasmática (pp. 48-51).

5.6 Captación celular de nutrientes


Difusión facilitada
El primer paso en la utilización de un nutriente consiste en
su captación por la célula. Los mecanismos de captación Algunas sustancias, como el glicerol, pueden atravesar la
deben ser específicos —esto es, hay que tomar las sustancias membrana plasmática por difusión pasiva. La difusión pasi-
necesarias y no otras—. No es útil para una célula captar va, denominada a menudo simplemente difusión, es el pro-
5.6 Captación celular de nutrientes 105

ceso por el cual las moléculas se desplazan desde una región


de concentración elevada a otra con menor concentración,
debido a una agitación térmica aleatoria. El nivel de difusión
pasiva depende de la diferencia de gradiente de concentra-
ción entre el exterior de la célula y su interior (Figura 5.1).
Es necesario un gradiente de concentración bastante elevado
para que se realice una captación de nutrientes adecuada por
difusión pasiva (esto es, la concentración externa del
nutriente debe ser alta), disminuyendo el nivel de captación
a medida que se adquiere más nutriente, salvo que éste se
utilice inmediatamente. Moléculas muy pequeñas como
H2O, O2 y CO2 atraviesan a menudo las membranas por
difusión pasiva. Grandes moléculas, iones y sustancia pola-
res no atraviesan las membranas por difusión pasiva.
El nivel de difusión a través de las membranas selectiva-
mente permeables aumenta considerablemente cuando inter-
vienen proteínas transportadoras, denominadas permeasas,
que están inmersas en la membrana plasmática. Como el
Figura 5.2 Modelo de difusión facilitada. El transportador de
transportador facilita el proceso de difusión, éste se denomi- membrana puede cambiar su conformación después de unirse a un
na difusión facilitada. La velocidad o tasa efectora en la soluto, liberándolo posteriormente al interior de la célula. Luego,
difusión facilitada también aumenta con el gradiente, pero lo recupera su conformación original, orientado hacia el exterior,
hace mucho más rápidamente que en la difusión pasiva, y a quedando listo para captar otra molécula de soluto. Como no hay
aporte de energía, las moléculas continuarán entrando en la célula
concentraciones inferiores de la molécula que difunde mientras que su concentración sea superior a la del exterior.
(Figura 5.1). Obsérvese que el nivel de difusión alcanza una
meseta por encima de un valor de gradiente específico, debi-
do a la saturación del transportador —esto es, la proteína
transportadora se une y traslada tantas moléculas de soluto teínas transportadoras se parecen también a las enzimas en
como sea posible—. La curva resultante es similar a una su especificidad por la sustancia que transportan; cada una
curva enzima-sustrato (véase la sección 8.6) y diferente de es selectiva de una sustancia y sólo transportará solutos muy
la respuesta lineal observada en la difusión pasiva. Las pro- similares. Aunque en este proceso participa una proteína
transportadora, se trata de una auténtica difusión. El movi-
miento de las moléculas no necesita un aporte adicional de
energía, está dirigido por un gradiente de concentración en
toda la membrana. Si desaparece el gradiente de concentra-
ción, el movimiento neto hacia el interior se detiene. El gra-
diente puede ser mantenido mediante la transformación del
nutriente transportado en otro compuesto, o bien, en el caso
de eucariotas, transportándolo a otro compartimiento intra-
celular. Curiosamente, algunas de estas proteínas transporta-
doras están relacionadas con las proteínas de las lentes ocu-
lares de mamíferos perteneciendo a la familia de las
proteínas MIP. Las dos MIP más utilizadas en bacterias son
acuaporinas, que transportan agua y otras sustancias facilita-
doras de la difusión de glicerol.
Aunque se han realizado muchas investigaciones sobre
el mecanismo de difusión facilitada, este proceso no se cono-
ce todavía completamente. Parece que el complejo de pro-
teína transportadora cruza toda la membrana (Figura 5.2).
Una vez que la molécula de soluto se une por el exterior, el
complejo transportador puede cambiar su conformación y
liberar la molécula en el interior de la célula. A continua-
ción, volverá a adquirir su forma original, quedando listo
Figura 5.1 Difusión pasiva y facilitada. El nivel de difusión
depende de la diferencia de gradiente de concentración del soluto.
para captar otra molécula. El efecto neto es que una molécu-
Obsérvese que cuando está funcionando un transportador de difusión la no liposoluble puede penetrar en la célula debido a su gra-
facilitada, se produce un efecto de saturación o meseta por encima de diente de concentración. Recuérdese que este mecanismo es
un valor específico de gradiente. Dicho efecto de saturación se observa dependiente de gradientes de concentración y, por tanto,
siempre que una proteína transportadora medie en el proceso.
106 Capítulo 5 Nutrición microbiana

reversible. Si la concentración del soluto es superior dentro hidrolizar ATP para facilitar el transporte. Además, estos
de la célula, se desplazará hacia el exterior. Como la célula transportadores ABC emplean a otras proteínas que serán
metaboliza los nutrientes entrantes, está favorecida la entra- quienes capten específicamente los solutos que serán trans-
da a la célula. portados {véase la Figura 3.23). Estas proteínas especiales
La difusión facilitada no parece que sea importante en se encuentran en el periplasma de bacterias Gram negativas,
los procariotas, ya que la concentración de nutrientes nor- o bien unidas a los lípidos de la cara externa de la membrana
malmente es más baja fuera de la célula. El glicerol se citioplasmática de bacterias Gram positivas. Una vez cap-
transporta por difusión facilitada en E. coli, Salmonella typ- tados los solutos, estas proteínas interactúan con los trans-
himurium, Pseudomonas, Bacillus y otras bacterias. Este portadores ABC, dominios hidrófobos, liberando entonces
proceso es mucho más destacado en las células eucariotas, el soluto que pasará a través del poro. Además de esta fun-
que lo utilizan para transportar diversos azúcares y amino- ción, las proteínas de captación de solutos participan en la
ácidos. quimiotaxis {véanse las pp. 70-72). Mediante este mecanis-
mo, E. coli transporta una gran variedad de azúcares (arabi-
nosa, maltosa, galactosa, ribosa) y aminoácidos (glutamato,
Transporte activo histidina, leucina).
En bacterias Gram negativas, los solutos deben atrave-
Aunque los transportadores de la difusión facilitada pueden sar antes la membrana externa, requiriéndose otros sistemas
desplazar eficazmente moléculas al interior celular cuando de transporte activo. Esto se puede llevar a cabo mediante
la concentración del soluto es superior en el exterior, no diferentes mecanismos. Cuando la sustancia es pequeña,
pueden transportar solutos cuya concentración sea superior pueden utilizarse proteínas genéricas como las porinas
dentro de la célula (esto es, en contra de un gradiente de OmpF {véase la p. 63); grandes moléculas requieren porinas
concentración). Los microorganismos viven a menudo en especializadas. En algunos casos (p. ej., transporte de hierro
habitat caracterizados por poseer fuentes de nutrientes muy y vitamina Bi2), se requieren receptores y transportadores de
diluidas, por lo que tienen que transportarlos y concentrarlos membrana externa de muy alta afinidad.
para poder desarrollarse. Por ello, los mecanismos de difu- En eucariotas, los transportadores ABC pueden tener un
sión facilitada no son siempre adecuados y la célula debe gran interés médico. Algunas células tumorales evitan la
utilizar otros métodos. Los dos procesos de transporte más acción de ciertos fármacos bombeándolos al exterior me-
importantes para estas situaciones son el transporte activo y diante estos transportadores. La fibrosis quística puede deri-
la translocación de grupo. var de una mutación que inactiva un transportador ABC que
El transporte activo permite el transporte de moléculas actúa como canal del ion cloro en los pulmones.
de soluto hacia concentraciones más elevadas, o en contra Las bacterias utilizan también el gradiente de protones
de un gradiente de concentración, utilizando un aporte de generado durante el transporte de electrones para facilitar el
energía metabólica. Como el transporte activo comprende la
actividad de un transportador proteico, se parece en algunos
aspectos a la difusión facilitada. Las proteínas transportado-
ras o permeasas se unen a determinados solutos con una
gran especificidad por las moléculas que transportan. En
ambos sistemas, difusión facilitada y transporte activo,
moléculas de soluto similares pueden competir por la misma
proteína transportadora. El transporte activo se caracteriza
también por el efecto de saturación del transportador en con-
centraciones de soluto elevadas (Figura 5.1). Sin embargo,
el transporte activo se diferencia de la difusión facilitada por
el uso de energía metabólica y su capacidad de concentrar
sustancias. Los inhibidores metabólicos que bloquean la
producción de energía inhibirán el transporte activo, pero no
afectarán a la difusión facilitada (al menos, por un período
corto de tiempo).
Los sistemas de transporte mediados por proteínas o
ATP-ligado (ATP-£inding cassette, por ello denomina-
dos, transportadores ABC), se encuentran en bacterias,
archaea y eucariotas. Normalmente, estos transportadores
consisten en dos dominios proteicos hidrofóbicos trans-
Figura 5.3 Función del transportador ABC. (I) La proteína de
membrana, y dos dominios en el citoplasma que pueden unión se liga al sustrato transportable y se aproxima al complejo
unirse a ATP (Figura 5.3). Los dominios transmembrana transportador ABC. (2) La proteína de unión se une al transportador
forman un poro, y los otros dos citoplásmicos puede ligar e y libera el sustrato, que se moverá atravesando la membrana con
ayuda de la hidrólisis de ATP. Véase el texto para más detalles.
5.6 Captación celular de nutrientes 107

transporte activo. Las proteínas de transporte de membrana La fuerza motriz de protones puede dirigir indirecta-
responsables de este mecanismo carecen de las anteriores mente el transporte activo, a menudo a través de la forma-
proteínas especiales periplásmicas ligadoras de solutos. La ción de un gradiente de iones de sodio. Por ejemplo, el sis-
lactosa permeasa de E. coli es un ejemplo bien estudiado. La tema de transporte de sodio en E. coli bombea sodio hacia
permeasa es una proteína sencilla con un peso molecular de el exterior, como respuesta a un movimiento interior de
aproximadamente 30 000. Transporta una molécula de lactosa protones (Figura 5.4). Este sistema de transporte combina-
hacia el interior celular, al mismo que tiempo que penetra do por el que las sustancias se desplazan en direcciones
también un protón (se mantiene en el exterior de la membra- opuestas se denomina antiporte. Posteriormente, el gra-
na una concentración más elevada de protones por la activi- diente de sodio generado por este sistema de antiporte de
dad de la cadena transportadora de electrones). Este sistema protones dirige la captación de azúcares y aminoácidos. Un
de transporte combinado de dos sustancias en la misma direc- ion de sodio puede unirse a una proteína transportadora,
ción se denomina simporte. En este caso, la energía almace- cambiando su forma. Luego, esta proteína podría unirse fir-
nada en el protón dirige el transporte del soluto. Aunque el memente a un azúcar o aminoácido y orientar sus sitios de
mecanismo de transporte no se conoce completamente, se unión hacia el interior de la célula. Debido a la baja concen-
piensa que la unión del protón a la proteína transportadora tración de sodio intracelular, el ion sodio se disocia del
cambia su forma y afinidad por el soluto, para que éste pueda transportador y la otra molécula hace lo mismo. E. coli uti-
ser transportado. E. coli utiliza también el sistema de simporte liza este sistema para transportar el azúcar melobiosa y el
de protones para captar aminoácidos y ácidos orgánicos, aminoácido glutámico cuando el sodio se desplaza simultá-
como succinato y malato. Hipótesis quimioosmótica (p. 198). neamente al interior.

Figura 5.4 Transporte activo mediado por


gradiente de protones y sodio. (1) El transporte
de electrones se emplea para bombear protones
hacia el exterior de la membrana plasmática. (2)
El gradiente de protones dirige la expulsión de
iones sodio mediante un mecanismo antiporte. (J)
El sodio se une al complejo proteico 1. El transporte de electrones
se emplea para bombear
transportador. (4) La conformación del «sitio de
protones hacia el exterior
unión al soluto» se modifica para unirse a éste (p.
de la membrana
ej., un azúcar o aminoácido). (5) A continuación, plasmática.
la conformación del transportador se altera, de
manera que se libera sodio hacia el interior de la
2. El gradiente de protones
célula. Luego, el soluto se separa del dirige la expulsión de iones
transportador (mecanismo simporte). de sodio mediante un
mecanismo antiporte.

3. El sodio se une al complejo


proteico transportador.

La conformación del «sitio


de unión al soluto» se
modifica para unirse a éste
(p. ej., un azúcar o
aminoácido).

5. La conformación del
transportador se altera, de
manera que se libera sodio
hacia el interior de la
célula. Luego, el soluto se
separa del transportador
(mecanismo simporte).
108 Capítulo 5 Nutrición microbiana

El cotransporte o simporte de sodio es también un pro- celular después de alterarse químicamente. El sistema de
ceso importante en las células eucariotas, que lo emplean translocación de grupo que mejor se conoce es el dependiente
para captar azúcares y aminoácidos. En lugar de la fuerza de fosfoenolpiruvato: sistema fosfotransferasa de azúcares
motriz de protones, las células eucariotas emplean normal- (PTS, sugar phosphotransferase system). Transporta diversos
mente el ATP para dirigir el transporte de sodio. azúcares al interior de las células procariotas, fosforilándolos
A menudo, un microorganismo presenta más de un sis- mediante fosfoenolpiruvato (PEP) como dador de fosfato.
tema de transporte para cada nutriente, como por ejemplo en
E. coli. Esta bacteria tiene al menos cinco sistemas de trans- PEP + azúcar (exterior) —> piruvato + azúcar-P (interior)
porte para el azúcar galactosa, tres para cada uno de los
aminoácidos glutámico y leucina, y dos complejos de trans- El PTS es bastante complejo. En E. coli y Salmonella
porte de potasio. Cuando existen varios sistemas de trans- typhimurium, está compuesto por dos enzimas y una proteí-
porte para una misma sustancia, los sistemas difieren en pro- na termoestable de bajo peso molecular (HPr). HPr y la
piedades como la fuente de energía, su afinidad por el soluto enzima I (El) son citoplasmáticas. La enzima TI (EII) tiene
y la naturaleza de su regulación. Posiblemente, esta diversi- una estructura más variable y está compuesta a menudo por
dad ofrece al microorganismo una ventaja competitiva aña- tres subunidades o dominios. EIIA (llamada anteriormente
dida en un ambiente variable. EIII) es citoplasmática y soluble. EIIB es también hidrofíli-
ca, pero suele estar unida a EIIC, proteína hidrofóbica que
está inmersa en la membrana. Un grupo fosfato de alta ener-
Translocación de grupo gía se transfiere desde el PEP a la enzima II, con la ayuda de
la enzima I y HPr (Figura 5.5). A continuación, se fosforila
En el transporte activo, las moléculas de soluto se desplazan a una molécula de azúcar al atravesar la membrana transporta-
través de una membrana sin modificarse. Muchos procariotas da por la enzima II. La enzima II es muy variable ya que
captan también moléculas mediante translocación de grupo, transporta sólo azúcares específicos, mientras que la enzi-
proceso por el cual una molécula es transportada al interior ma I y HPr son comunes a todos los PTS.

Figura 5.5 Translocación de grupo: transporte PTS bacteriano. Se representan dos ejemplos del sistema de transporte de azúcares mediado por
fosfoenolpiruvato (sistema fosfotransferasa, PTS). Los siguientes componentes forman parte del sistema: fosfoenolpiruvato (PEP), enzima I (El),
proteína termoestable de bajo peso molecular (HPr) y enzima II (EII). Se transfiere el fosfato de alta energía de HPr a EIIA soluble. EIIA está unida a
EIIB en el sistema de transporte de manitol y se separa de EIIB en el sistema de glucosa. En cualquier caso, el fosfato se desplaza de EIIA a EIIB, y
luego se transfiere al azúcar durante su transporte a través de la membrana. Se pueden producir otras relaciones entre los componentes de EII. Por
ejemplo, HA y IIB pueden formar una proteína soluble separada del complejo de membrana; en este caso, el fosfato sigue desplazándose desde IIA a
IIB y, luego, al o a los dominios de membrana.
5.7 Medios de cultivo 109

Los PTS están ampliamente extendidos en procariotas.


Las bacterias aerobias carecen de PTS, excepto algunas es-
pecies de Bacillus, que tienen tanto la glucólisis como los sis-
temas de fosfotransferasa. Los miembros de los géneros
Escherichia, Salmonella, Staphylococcus y otras bacterias
anaerobias facultativas {véase la p. 135) poseen sistemas de
fosfotransferasa; algunas bacterias anaerobias obligadas (p. ej.,
Clostridium) también tienen PTS. Muchos hidratos de carbono
son transportados por estos mecanismos. E. coli capta glucosa,
fructosa, manitol, sacarosa, A'-acetilglucosamina, celobiosa y
otros hidratos de carbono mediante translocación de grupo.
Además de su papel en el transporte, las proteínas de los PTS
pueden actuar como quimiorreceptores en la quimiotaxis.

Captación de hierro
Casi todos los microorganismos necesitan hierro para vivir;
está presente en citocromos y muchas enzimas. La captación
de hierro es difícil debido a la extrema insolubilidad del ion
férrico (Fe3+) y de sus derivados, quedando poco hierro libre
disponible para su transporte. Muchas bacterias y hongos
han superado esta dificultad gracias a la secreción de sideró-
foros [Griego, transportadores de hierro]. Los sideróforos
son moléculas de bajo peso molecular capaces de acomple-
jar hierro férrico y aportarlo a la célula. Estas moléculas
transportadoras de hierro son normalmente hidroxamatos o
fenolatos-catecolatos. Muchos hongos producen ferricromo
(hidroxamato); E. coli forma enterobactina (catecolato) (Fi- Figura 5.6 Complejos sideróforo: hierro férrico, (a) Ferricromo es
gura 5.6a,b). Parece que tres grupos sideróforos se acom- una molécula de hidroxamato cíclico [—CO—N(CT)—] que producen
plejan con orbitales de hierro para formar un complejo oc- muchos hongos, (b) E. coli elabora el derivado de catecolato cíclico,
enterobactina. (c) El hierro férrico se acompleja probablemente con
taédrico en seis coordenadas espaciales (Figura 5.6c). tres grupos sideróforos para formar un complejo octaédrico de seis
Los microorganismos secretan sideróforos cuando hay coordenadas, como se muestra en esta ilustración del complejo
poco hierro disponible en el medio. Cuando el complejo hie- enterobactina-hierro.
rro-sideróforo ha alcanzado la superficie celular, se une a la
proteína receptora del sideróforo. A continuación, el hierro se
libera para poder penetrar en la célula directamente, o se trans-
porta al interior todo el complejo hierro-sideróforo mediante 5.7 Medios de cultivo
un transportador ABC. En E. coli, el receptor del sideróforo se
localiza en la membrana externa de la envoltura celular; cuan- Gran parte de los estudios en microbiología depende de la
do el hierro alcanza el espacio periplásmico, se desplaza a tra- capacidad de cultivar y mantener microorganismos en un
vés de la membrana plasmática con la ayuda del transportador. laboratorio, y esto es sólo posible si se dispone de los
Después de que el hierro ha entrado en la célula, se reduce a la medios de cultivo adecuados. Un medio de cultivo es una
forma ferrosa (Fe +). El hierro es tan fundamental para los preparación líquida o sólida utilizada para el crecimiento,
microorganismos que éstos pueden utilizar más de una vía de transporte, o mantenimiento de microorganismos. Si se
captación de hierro para asegurar un aporte adecuado. desea utilizar para el crecimiento, deberá contener todos los
nutrientes esenciales para ese microorganismo concreto. Los
medios especiales son imprescindibles para aislar e identifi-
1. Describa los conceptos de difusión facilitada, transporte
car los microorganismos, evaluar la sensibilidad antibiótica,
activo y translocación de grupo, en función de sus
analizar agua y alimentos, en microbiología industrial y
características y mecanismos distintivos.
otras actividades. Aunque todos los microorganismos nece-
2. ¿En qué se diferencian los sistemas de transporte por sitan fuentes de energía, carbono, nitrógeno, fósforo, azufre
membranas y los de transporte con proteínas de unión
y varios minerales, la composición precisa de un medio ade-
respecto de las fuentes de energía? ¿Qué son los procesos
cuado que dependerá de la especie que se quiere cultivar,
simporte y antiporte?
porque las necesidades nutricionales varían considerable-
3. ¿Cómo participan los sideróforos en el transporte de hierro?
mente. El conocimiento del habitat normal de un microorga-
110 Capítulo 5 Nutrición microbiana

nismo es a menudo útil para elegir un medio de cultivo apro-


piado porque sus necesidades de nutrientes reflejan su
Tabla 5.5 Algunos medios complejos
ambiente natural. Un medio se utiliza frecuentemente para comunes
seleccionar y cultivar microorganismos específicos o para
Caldo nutritivo Cantidad (g/L)
facilitar la identificación de una especie en particular. En Peptona (hidrolizado de gelatina) 5
estos casos, la función de un medio estará también determi- Extracto de carne 3
nada por su composición. Caldo de triptona y soja
Triptona (producto digerido pancreático
de la caseína) 17
Peptona (producto digerido de semilla de soja) 3
Medios sintéticos o definidos Glucosa 2.5
Cloruro sódico 5
Algunos microorganismos, particularmente los autotrofos Fosfato dipotásico 2.5
fotolitotrófieos, como las cianobacterias y algas eucariotas, Agar MacConkey
pueden crecer en medios relativamente sencillos, que con- Producto digerido pancreático de gelatina 17.0
tienen CO2 como fuente de carbono (a menudo, incorporado Producto digerido pancreático de caseína 1.5
como carbonato o bicarbonato sódico), nitrato o amonio Producto digerido de tejido animal 1.5
Lactosa 10.0
como fuente de nitrógeno, sulfato, fosfato y diversos mine- Sales biliares 1.5
rales (Tabla 5.4). Esta clase de medios de la que se conocen Cloruro sódico 5.0
todos los componentes se denomina medio definido o Rojo neutro 0.03
Cristal violeta 0.001
medio sintético. Muchos heterotrofos quimioorganotróficos Agar 13.5
pueden crecer también en medios definidos con glucosa
como fuente de carbono y una sal de amonio como fuente de
nitrógeno. No todos los medios definidos son tan sencillos
como los ejemplos que se exponen en la Tabla 5.4, sino que
pueden elaborarse a partir de docenas de componentes. Los Medios complejos
medios definidos se emplean frecuentemente en investiga-
ción, pues a menudo se quiere conocer qué está metaboli- Los medios que contienen algunos ingredientes cuya com-
zando el microorganismo experimental. posición química exacta se desconoce se denominan medios
complejos. Estos medios son muy útiles, pues un único
medio complejo puede ser suficientemente rico para satisfa-
cer las necesidades nutricionales de diversos microorganis-
mos. Además, los medios complejos se necesitan porque a
menudo se desconocen las necesidades nutricionales de un
Tabla 5.4 Ejemplos de medios definidos microorganismo en particular, por lo que no se puede elabo-
rar un medio definido. Éste es el caso de muchas bacterias
Medio BG-11 para cianobacterias Cantidad (g/L)
NaNO3 1.5 exigentes, algunas de las cuales pueden incluso requerir un
K,HPO4 • 3H,0 0.04 medio que contenga sangre o suero.
MgSO4 • 7H2O 0.075 Los medios complejos contienen componentes como
CaCl2 ■ 2H2O 0.036
Ácido cítrico 0.006 peptonas, extracto de carne y de levadura. Las peptonas son
Citrato amónico férrico 0.006 hidrolizados de proteínas obtenidos de la digestión proteolí-
EDTA (sal de Na, Mg) 0.001 tica parcial de carne, caseína, harina de soja, gelatina u otras
Na2CO3 0.02 fuentes proteicas. Sirven como fuente de carbono, energía y
Solución de metales traza" l.OmL/L
pH final de 7.4 nitrógeno. Los extractos de carne y de levadura son medios
Medio para Escherichia coli Cantidad (g/L) líquidos de carne de vacuno y de levadura de cerveza, res-
Glucosa 1.0
pectivamente. El extracto de carne contiene aminoácidos,
Na2HPO4 16.4 péptidos, nucleótidos, ácidos orgánicos, vitaminas y mine-
KH2PO4 1.5 rales. El extracto de levadura es una fuente excelente de
(NH4)2SO4 2.0 vitaminas del complejo B, y de compuestos de nitrógeno y
MgSO4 ■ 7H,0 200.0 mg
CaCl, 10.0 mg carbono. Tres medios complejos utilizados comúnmente son
FeSO4 • 7H2O 0.5 mg 1) caldo nutritivo, 2) caldo de triptona y soja, y 3) agar Mac-
pH final de 6.8 a 7.0 Conkey (Tabla 5.5).
Si se necesita un medio sólido para cultivar microorga-
Fuentes: los datos proceden de Rippka et al., Journal of General Microbiology,
111:1-61. 1979; y S. S. Cohén, y R. Arbogast, Journal of Experimental Medicine, nismos en superficie, se puede solidificar un medio líquido
91:619, 1950. añadiendo agar, entre el 1.0 y 2.0 %, normalmente al 1.5 %.
* La solución de metales traza contiene H_,BO3, MnCl2 ■ 4H2O, ZnSO4 • 7H2O,
Na2Mo4 ■ 2H,O, CuSO4 ■ 5H,0 y Co(NO3)2 ■ 6H2O. El agar es un polímero sulfatado normalmente extraído de
algas rojas (véase la Figura 26.8) compuesto principalmente
5.7 Medios de cultivo 111

por D-galactosa, 3,6-anhidro-L-galactosa y ácido D-glucuró- Los medios selectivos favorecen el crecimiento de
nico (Recuadro 5.1). El agar es un buen agente solidificante microorganismos particulares. Las sales biliares o coloran-
porque una vez que se funde en agua hirviendo, puede tes como fucsina básica y cristal violeta favorecen el creci-
enfriarse hasta una temperatura de 40 a 42 °C, sin endure- miento de bacterias Gram negativas, al inhibir el crecimien-
cerse, y no fundirá de nuevo hasta que no se alcance una to de las Gram positivas, sin afectar a las primeras. Los
temperatura de 80 a 90 °C. El agar es también un agente medios «agar endo», «eosina-azul de metileno» y «Mac-
solidificante excelente porque la mayoría de los microorga- Conkey» (Tabla 5.5), se emplean extensamente para detectar
nismos no pueden degradarlo. E. coli y bacterias relacionadas en suministros de agua y
A veces se utilizan otros agentes solidificantes. Por otros medios, contienen colorantes que suprimen el creci-
ejemplo, se usa gel de sílice para cultivar bacterias autotro- miento de las bacterias Gram positivas. También se pueden
fas en medios sólidos en ausencia de sustancias orgánicas y aislar las bacterias incubándolas con nutrientes que puedan
para definir las fuentes de carbono en bacterias heterotrofas, utilizar de forma específica. Un medio que contenga celulosa
añadiendo al medio varios compuestos orgánicos. como única fuente de carbono y energía es bastante eficaz
para aislar bacterias que digieren celulosa. En definitiva, las
posibilidades de diseño de un medio selectivo son innumera-
Tipos de medios bles, y existen en el mercado docenas de medios selectivos
especiales.
Los medios como el caldo y el agar de triptona y soja se Los medios diferenciales son medios que diferencian
denominan medios para fines generales porque mantienen el entre grupos distintos de bacterias e incluso permiten una
crecimiento de muchos microorganismos. La sangre y otros identificación tentativa de los microorganismos, según sus
nutrientes especiales se pueden incorporar a estos medios características biológicas. El agar-sangre es tanto un medio
para favorecer el crecimiento de heterotrofos exigentes. diferencial como un medio enriquecido. Sirve para diferen-
ciar entre bacterias hemolíticas y no hemolíticas. Las bac-
Estos medios especiales (p. ej., agar sangre) se denominan
terias hemolíticas (p. ej., muchos estreptococos y estafilo-
medios enriquecidos.

Descubrimiento del agar como agente solidificante y


aislamiento de cultivos puros

L os primeros medios de cultivo eran líquidos, por lo que


resultaba enormemente difícil aislar bacterias para prepa-
rar cultivos puros. En la práctica, se diluía seriadamente
una mezcla de bacterias hasta que sólo quedaba una, como
este medio. Koch era fotógrafo aficionado —fue el primero que
realizó microfotografías de bacterias— y tenía experiencia en
preparar placas fotográficas a partir de sales de plata y gelatina.
Precisamente, éste fue el mismo método que utilizó para prepa-
media, en el medio diluido. Si todo se había desarrollado correc- rar medios sólidos. Extendió el medio de Loeffler mezclado con
tamente, la bacteria individual aislada podría producir un cultivo gelatina sobre una placa de vidrio, dejándola endurecer, e incubó
puro. Este método era tedioso, ofrecía resultados variables y la superficie de la misma manera que había realizado con las
tenía numerosos problemas de contaminación. Comprensible- rodajas de patata. El nuevo medio sólido funcionaba bien, pero
mente, los progresos en el aislamiento de bacterias patogénicas no podía incubarse a 37 °C (la mejor temperatura de crecimiento
eran muy lentos. para la mayoría de las bacterias patógenas humanas), porque la
El desarrollo de las técnicas de crecimiento de microorganismos gelatina se fundía. Además, algunas bacterias la digerían.
en medios sólidos y de obtención eficaz de cultivos puros se Un año después, en 1882, se empleó agar por primera vez
debió al trabajo del bacteriólogo alemán Robert Koch y sus cola- como agente solidificante. Había sido descubierto por un posade-
boradores. En 1881, Koch publicó un artículo en el que describía ro japonés, Minora Tarazaemon. Parece ser que este japonés des-
el uso de rodajas de patatas hervidas, cortadas con un cuchillo cubrió que el sobrante de una sopa de algas marinas gelificaba
esterilizado a la llama, para cultivar bacterias. Se inoculaban bac- tras una noche a la intemperie en las frías noches de invierno. En
terias sobre la rodaja de patata con la punta de una aguja y, luego, el este de los Estados Unidos de Norteamérica, el agar era utili-
las bacterias se extendían de manera que algunas células indivi- zado por los colonos holandeses para preparar jaleas y mermela-
duales pudiesen separarse del resto. Las rodajas se incubaban en das. Fannie Eilshemius Hesse (véase la Figura 1.5), nacida en
un recipiente en forma de campana para evitar la contaminación New Jersey y esposa de Walther Hesse, uno de los ayudantes de
atmosférica, y las células aisladas formaban colonias puras. Sin Koch, había aprendido a utilizar el agar de un amigo holandés, y
embargo, muchas bacterias no podían crecer en rodajas de patatas. sugirió su uso al conocer los problemas que tenía el equipo de
En la misma época, Frederick Loeffler, colaborador de Koch, Koch en la solidificación de medios de cultivo con gelatina. El
desarrolló un medio de peptona-extracto de carne para cultivar medio solidificado con agar fue un inmediato éxito y sigue sien-
bacterias patógenas. Koch decidió intentar solidificar do esencial en todas las áreas de microbiología.
112 Capítulo 5 Nutrición microbiana

cocos aislados de la garganta) producen zonas claras alre- Siembra en placa por extensión y en estrías
dedor de sus colonias debido a la lisis de los eritrocitos. El
agar MacConkey es tanto diferencial como selectivo. Si se extiende una mezcla de células sobre una superficie de
Como contiene lactosa y el colorante rojo neutro, las colo- agar, cada célula aislada se multiplicará formando una colo-
nias fermentadoras de la lactosa aparecen de color rosa a nia independiente, formación o agrupación macroscópica-
rojo y son fácilmente distinguibles de las colonias no mente visible de microorganismos sobre un medio sólido;
fermentadoras. cada colonia representa un cultivo puro. La siembra por
extensión es una forma directa y fácil de conseguir este
resultado. Se pasa un volumen pequeño de una mezcla
microbiana diluida conteniendo no más de un centenar de
1. Describa los siguientes tipos de medios y sus usos:
definidos o sintéticos, complejos, de fines generales, células, al centro de una placa de agar y se extiende unifor-
enriquecidos, selectivos y diferenciales. Dé un ejemplo de memente sobre la superficie con una varilla acodada de
cada uno. vidrio estéril (Figura 5.7). Las células diseminadas sobre la
2. ¿Qué son las peptonas, extracto de levadura, extracto superficie desarrollarán colonias aisladas. El número de colo-
de carne, y agar? ¿Por qué se utilizan en los nias debe ser igual al número de organismos viables de la
medios? muestra —siempre y cuando el medio y el ambiente de incu-
bación sea el apropiado para la multiplicación de esos micro-
organismos—. Por ello, este tipo de siembra puede usarse
para determinar la concentración microbiana en una muestra.
Las colonias aisladas se pueden obtener también mediante
5.8 Aislamiento de cultivos puros siembra en estrías. Se inocula la mezcla microbiana sobre
un extremo de la placa de agar con un asa de siembra o un
En los habitat naturales, los microorganismos crecen en hisopo, y se extiende formado estrías sobre la superficie en
poblaciones mixtas y complejas, que contienen varias espe- uno o varios sentidos (Figura 5.8). Las células individuales
cies. Esto representa un problema para el microbiólogo por- se irán desprendiendo del asa al frotarla sobre la superficie
que no se puede estudiar adecuadamente un único tipo de y desarrollarán colonias aisladas (Figura 5.9). En ambas
microorganismo en un medio mixto. Se necesita un cultivo técnicas, siembra por extensión y en estrías, un buen
puro, población de células que procede de una única célula, aislamiento depende de la separación adecuada de las célu-
para caracterizar una especie individual. Los cultivos puros las individuales. Las colonias que crecen sobre la superficie
son tan importantes, que el desarrollo de las técnicas de cul- se pueden utilizar también para inocular un medio fresco y
tivos puros por el bacteriólogo alemán Robert Koch trans- preparar cultivos puros.
formó la microbiología. En casi 20 años, se aisló la mayoría
de los agentes patógenos responsables de las principales
enfermedades infecciosas humanas (véase la Tabla 1.1). Siembra en profundidad
Existen varias formas de preparar cultivos puros; en este La siembra en profundidad que se emplea frecuentemente
capítulo se repasan las más comunes. Breve repaso de algu- con bacterias y hongos, puede también generar colonias ais-
nos hitos principales en microbiología (Capítulo 1). ladas. La muestra original se diluye varias veces para redu-

Flgura 5.7 Técnica de siembra en placa por extensión. Preparación de una siembra por extensión. (1) Se toma una muestra pequeña con una
pipeta y se coloca en el centro de una placa con agar. (2) Se introduce una varilla acodada de vidrio en un vaso con etanol. (3) Se esteriliza esta varilla a
la llama y se deja enfriar. (4) Se extiende la muestra uniformemente sobre la superficie de agar con la varilla esterilizada. Se incuba.
5.8 Aislamiento de cultivos puros 113

Figura 5.8 Técnica de siembra en estrías. Preparación de siembra


en estrías. El dibujo superior muestra una siembra en estrías utilizando
un asa de siembra y una placa de Petri con agar. En el dibujo inferior
se muestra uno de los patrones que se pueden seguir en la siembra por Figura 5.9 Colonias de bacterias sobre agar. Colonias creciendo
estrías (aunque el número de estrías por sección debe ser muy superior sobre una placa sembrada por extensión. Se ha inoculado una placa de
al indicado). agar-sangre con Staphylococcus aureus. Después de la incubación, se
observan grandes colonias doradas sobre el agar.

cir la población microbiana lo suficiente, con el fin de obte- agar temperado. Después de endurecerse el agar, cada célula
ner colonias separadas cuando se siembren (Figura 5.10). A forma una colonia individual. Por motivos estadísticos y de
continuación, se mezclan volúmenes pequeños de las mues- fiabilidad, únicamente se deberán contar las placas conte-
tras diluidas con agar líquido, que se ha temperado hasta niendo entre 30 y 300 colonias. De nuevo, el número total de
aproximadamente 45 °C, y la mezcla se vierte inmediata- colonias equivale al número de microorganismos viables en
mente en placas de cultivo estériles. La mayoría de las bac- la muestra diluida, con la salvedad anteriormente reseñada
terias y hongos no se destruye con una exposición breve al (Recuadro 5.2).

Figura 5.10 Técnica de siembra en profundidad.


La muestra original se diluye varias veces para reducir
suficientemente la población bacteriana. Luego, se
mezclan las muestras más diluidas con agar temperado
y se vierte en placas de Petri. Las células aisladas
crecen formando colonias, cultivos puros en sí mismas.
Las colonias de la superficie son circulares; las situadas
por debajo son lenticulares, con forma de lenteja.
114 Capítulo 5 Nutrición microbiana

Enriquecimiento y aislamiento de cultivos puros

U
n problema práctico muy importante es la obtención de nitrógeno, fósforo, azufre y minerales. Cuando se inocula este
cultivos puros cuando los microorganismos se encuen- medio con tierra, sólo crecerán las bacterias capaces de degradar
tran en una muestra compleja en bajo número. Los méto- 2,4-D. Tras una serie de pases, obtendremos una población enri-
dos de siembra en placa pueden combinarse con el uso de medios quecida en bacterias degradadoras de 2,4-D. Los cultivos puros
selectivos o diferenciales para enriquecer y aislar microorganis- se pueden obtener sembrando esta mezcla en agar que contenga
mos poco frecuentes. Un buen ejemplo es el aislamiento de bac- 2,4-D como única fuente de carbono. Sólo las bacterias capaces
terias que degradan el herbicida ácido 2,4-diclorofenoxiacético de crecer con 2,4-D formarán colonias visibles y podrán servir
(2,4-D). Se pueden obtener bacterias capaces de metabolizar el como fuente de cultivo. Este mismo método basado en la selec-
2,4-D con un medio líquido que contenga 2,4-D como única ción por características fisiológicas se utiliza para aislar y puri-
fuente de carbono, más otros componentes necesarios como ficar diversas bacterias.

Las técnicas anteriores precisan de placas especiales Morfología y crecimiento de colonias


de cultivo, denominadas placas de Petri, en memoria de
su inventor, Julius Richard Petri, miembro del laboratorio El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite
de Robert Koch; Petri diseñó estas placas hacia 1887 y al microbiólogo identificar las bacterias porque las especies
sustituyeron inmediatamente a los portaobjetos de vidrio forman a menudo colonias con una forma y aspecto caracte-
cubiertos de agar. Están formadas por dos placas circula- rístico (Figura 5.11). Cuando se ha sembrado una población
res, la parte superior se superpone sobre la inferior (Figu- heterogénea de células microbianas, es posible a veces iden-
ra 5.8). Las placas de Petri son muy fáciles de usar, pueden tificar la colonia deseada por su aspecto general y utilizarla
apilarse para ahorrar espacio y constituyen uno de los para obtener un cultivo puro. La estructura de las colonias
materiales más comunes de los laboratorios de microbio- bacterianas se ha examinado también con el microscopio
logía. electrónico de barrido. La estructura microscópica de las

Figura 5.11 Morfología de colonias bacterianas, (a) Variaciones en la morfología de las


colonias bacterianas observadas a simple vista. Se pueden determinar la forma general de la colonia
y del borde o margen mediante vista zenital. El tipo de elevación de ésta se puede apreciar viéndola
de lado, manteniendo la placa a la altura de los ojos, (b) La morfología de la colonia puede variar
significativamente según el medio en que crezcan las bacterias. Estas preciosas colonias en forma de
copos de nieve que se observan en la foto están formadas por Bacillus subtilis, que han crecido en
un agar pobre en nutrientes. Aparentemente, las bacterias adoptan un comportamiento de
cooperación cuando se encuentran en ambientes pobres en nutrientes y, a menudo, el resultado es
una estructura intrincada que recuerda a los modelos fractales que se observan en sistemas no vivos.
5.8 Aislamiento de cultivos puros 115

Figura 5.12 Microfotografías


electrónicas de barrido de colonias
bacterianas, (a) Micrococcus sobre agar
(x31 000). (b) Clostridium (x 12 000).
(c) Mycoplasma pneumoniae (x26 000).
(d) Escherichia coli (x 14 000).

colonias es a menudo tan variable como su aspecto visual Resulta evidente de la Figura 5.11 que algunas bacterias
(Figura 5.12). se multiplican sobre superficies sólidas como el agar for-
En la naturaleza, las bacterias y muchos otros microor- mando complejas e intrincadas colonias. Estos patrones
ganismos crecen con frecuencia formando biofilms. Sin varían dependiendo de la disponibilidad de nutrientes y de la
embargo, aveces forman discretas colonias. En consecuen- dureza del agar. Sin embargo, aún no está claro por qué se
cia, el conocimiento del crecimiento de las colonias es fun- desarrollan las peculiares características morfológicas de las
damental para los ecólogos microbianos, por lo que el cre- colonias. La difusión de nutrientes y su disponibilidad, la
cimiento de colonias sobre medios con agar se ha estudiado quimiotaxia bacteriana, y la presencia de líquido sobre la
con interés. En general, el crecimiento celular más rápido superficie del agar pueden jugar algún papel en los morfoti-
se produce en el extremo de la colonia. El crecimiento es pos observados. Indudablemente, la comunicación célula-
más lento en las partes centrales más antiguas de las colo- célula y el sistema del quorum sensing {véanse las pp. 141-
nias y, en algunos casos, se llega a producir una autólisis 142) es igualmente muy importante. Aún queda mucho
celular en dicha zona. Parece que estas diferencias en el trabajo por realizar para conocer la formación de las colo-
crecimiento se deben a gradientes de oxígeno, nutrientes y nias bacterianas y los biofilms.
productos tóxicos dentro de la colonia. En el extremo de
ésta, el oxígeno y los nutrientes son abundantes. El centro
de la colonia es, por supuesto, más grueso que el extremo.
Por ello, el oxígeno y los nutrientes no difunden tan fácil- 1. ¿Qué son los cultivos puros y por qué son tan importantes?
mente en el centro, los metabolitos tóxicos no pueden eli- ¿Cómo se preparan los cultivos en placa mediante siembra
minarse rápidamente y el crecimiento en esta zona es más por extensión, en estrías, y en profundidad?
lento o está detenido. Debido a estas variaciones ambienta- 2. ¿De qué forma el crecimiento microbiano varía dentro de
les dentro de una colonia, las células de la periferia crecen a una colonia? ¿Qué factores pueden causar estas variaciones
un nivel máximo, mientras que las del centro, mueren. en el crecimiento?
Biofilms (pp. 668-670).
116 Capítulo 5 Nutrición microbiana

Resumen
1. Los microorganismos precisan nutrientes, requerimiento es el fundamento de los férrico (Figura 5.6). Cuando el complejo
materiales que se utilizan en la biosíntesis y bioensayos microbiológicos. hierro-sideróforo alcanza la superficie
en la producción de energía. celular, es transportado hacia su interior y el
7. Aunque algunos nutrientes pueden entrar en
hierro se reduce a la forma ferrosa.
2. Los macronutrientes o macroelementos la célula por difusión pasiva, normalmente se
(C, H, O, N, S, P, K, Ca, Mg y Fe) se requiere una proteína transportadora de 12. Los medios de cultivo se pueden elaborar
necesitan en grandes cantidades; membrana. completamente a partir de componentes
micronutrientes o elementos traza (p. ej., definidos químicamente (medios definidos o
8. En la difusión facilitada, la proteína
Mn, Zn, Co, Mo, Ni y Cu) se utilizan en sintéticos) o pueden contener constituyentes
transportadora traslada una molécula a través
cantidades muy pequeñas. como peptonas y extracto de levadura, cuya
de la membrana, a favor de gradiente de
3. Los autolrofos utilizan CO2 como fuente concentración, por lo que no se precisa composición exacta se desconoce (medios
principal o única de carbono; los aporte de energía (Figura 5.2). complejos).
heterotrofos emplean moléculas orgánicas. 9. Los sistemas de transporte activo emplean 13. Un medio de cultivo se puede solidificar
4. Los microorganismos se pueden clasificar energía metabólica y proteínas añadiéndole agar, polisacárido complejo
según sus fuentes de energía y de electrones transportadoras de membrana para producido por algas rojas.
(Tabla 5.1). Los fototrofos utilizan la concentrar las sustancias activamente, 14. Los medios de cultivo se clasifican según su
energía lumínica y los quimiotrofos obtienen transportándolas en contra de un gradiente. función y composición en: medios con fines
energía de la oxidación de compuestos Los transportadores ABC utilizan ATP como generales, enriquecidos, selectivos y
químicos. Los litotrofos liberan electrones fuente de energía (Figura 5.3). Gradientes diferenciales.
de sustancias inorgánicas reducidas, y los de protones e iones sodio pueden también
15. Los cultivos puros se pueden obtener
organotrofos, de compuestos orgánicos facilitar el transporte de solutos a través de
normalmente aislando células individuales
(Tabla 5.2). las membranas (Figura 5.4).
con cualquiera de las tres técnicas de
5. Nitrógeno, fósforo y azufre pueden 10. Las bacterias transportan también moléculas siembra en placa: por extensión, en estrías y
obtenerse: 1) a partir de las mismas orgánicas modificándolas, proceso que se en profundidad (Figuras 5.7 y 5.8).
moléculas orgánicas que aportan carbono; conoce como translocación de grupo. Por
16. Los microorganismos que crecen sobre
2) por incorporación directa de amonio y ejemplo, muchos azúcares son transportados
superficies sólidas tienden a formar colonias
fosfato; y 3) por reducción y asimilación de y fosforilados simultáneamente
con una morfología distintiva. Dentro de
moléculas inorgánicas oxidadas. (Figura 5.5).
cada colonia, los microorganismos crecen
6. Probablemente, la mayoría de los 11. El hierro se acumula por medio de la normalmente con mayor rapidez en los
microorganismos necesitan factores de secreción de sideróforos, moléculas extremos, donde las cantidades de recursos
crecimiento para su multiplicación. Este pequeñas capaces de acomplejar hierro disponibles son mayores.

Palabras clave
agar 110 heterotrofo fotoorganotrófico 102 permeasa 105 placa de Petri
antiporte 107 heterotrofo quimioorganotrófico 101 ¡14 quimioheterotrofo 101
autotrofo quimiolitotrófico 102 autotrofo heterotrofos 101 quimiotrofo 101 sideróforos
101 autotrofo fotolitotrófico 101 colonia litotrofos 101 109 siembra en estrías 112
112 cultivo puro 112 difusión facilitada macroelementos 100 siembra en profundidad 112
105 difusión pasiva 104 elementos traza medio complejo 110 siembra por extensión /12
700 factores de crecimiento 103 medio definido 110 simporte 107
fosfoenolpiruvaro: sistema fosfotransferasa medio diferencial 111 tranportadores ABC (ATP-binding
de azúcares (PTS) 108 medio sintético 110 cassette) 106 translocación
fotoautotrofo 101 medios selectivos 111 de grupo 108 transporte activo
fototrofo 101 micronutrientes 100 106 vitaminas 103
mixotrofo 102
nutriente 100
organotrofo 101
peptonas 110
Lecturas suplementarias 117

Preguntas para razonar y repasar Cuestiones para reflexionar


1. ¿Por qué es tan difícil demostrar las 5. Cómo procedería para obtener un cultivo 1. Discuta las ventajas y desventajas que supone
necesidades de micronutrientes en los puro de bacterias que pudiesen degradar para el huésped la translocación de grupo
ni icroorganismos? benceno y lo utilizaran como fuente de respecto a la endocitosis.
2. Enumere algunos de los usos más importantes carbono y energía. 2. Explique por qué en ocasiones no resulta
del nitrógeno, fósforo y azufre que los 6. Describa las necesidades nutricionales exitoso el aislamiento de un cultivo puro sobre
microorganismos obtienen de su entorno. de un heterotrofo quimiolitotrófico. ¿En qué un medio selectivo sólido.
3. ¿Por qué los aminoácidos, purinas y ambientes podría encontrar este tipo de
pirimidinas son a menudo factores de bacteria?
crecimiento, a diferencia de la glucosa? 7. Suponga que realiza una serie de diluciones
4. ¿Por qué los microorganismos captan seriadas con muestras de 0.1 mL como se
habitualmente nutrientes mediante proteínas muestra en la Figura 5.10. De la placa 1CT1 se
transportadoras o permeasas? ¿Qué ventaja obtienen 80 colonias, y de la placa 10"4,
obtiene un microorganismo cuando utiliza el 4 colonias. Calcule la concentración
transporte activo en lugar de la difusión (bacterias formadoras de colonias/mL) de la
facilitada? muestra original no diluida.

Lecturas suplementarias
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CAPITULO 6
Crecimiento
microbiano

Los filtros de membrana


se utilizan en el recuento
de microorganismos. Este
filtro ha sido utilizado
para determinar el
número de unidades
formadoras de colonias;
aparecen coloreadas
gracias al indicador de
pH empleado,
facilitándose su recuento.

índice
6.1 Curva de crecimiento 119 pH 131
Fase de latericia (Lag) 119 Temperatura 132
Fase exponencial 120 Concentración de oxígeno 135
Fase estacionaria 121 Fase Presión 137 Radiación 137
de muerte 121 Expresión 6.5 Crecimiento microbiano en
matemática del crecimiento ambientes naturales 139
121
Limitación del crecimiento por
6.2 Determinación del crecimiento factores ambientales 139
microbiano 124 Recuento de formas vegetativas
Determinación del número de viables pero no cultivables de
células 124 procariotas 140 Quorum
Determinación de la masa sensing y poblaciones
celular 125 microbianas 141
6.3 Cultivo continuo de
microorganismos 127
Quimiostato 127
Turbidostato 128
6.4 Influencia de los factores
ambientales en el
crecimiento 128
Solutos y actividad del
agua 128
6.1 Curva de crecimiento 119

Conceptos cenocítico —esto es, multinucleado, en el que las divisiones


nucleares no se acompañan de divisiones celulares— el cre-
1. El crecimiento de un microorganismo se define como el aumento de sus
componentes celulares, que puede tener como resultado un incremento de su
cimiento produce un incremento de tamaño, pero no del
(amaño o del número de su población, o de ambos. número de células. No suele ser conveniente investigar el
2. Cuando los microorganismos crecen en un sistema cerrado, el crecimiento crecimiento y la multiplicación de microorganismos indivi-
de la población permanece en fase exponencial durante tan sólo unas pocas duales debido a su pequeño tamaño. En consecuencia, los
generaciones, pasando a una fase estacionaria debido a factores como la
limitación de nutrientes y la acumulación de residuos. En un sistema abierto, microbiólogos, cuando estudian el crecimiento, señalan nor-
donde se renuevan continuamente los nutrientes y se eliminan los residuos, malmente los cambios observados en el número total de la
la fase exponencial puede mantenerse durante períodos largos.
población. Ciclo celular (pp. 91; 307-308).
3. Se pueden emplear diversas técnicas para estudiar el crecimiento
microbiano, midiendo los cambios observados en el número total de células,
la población de microorganismos viables o la masa celular.
4. La disponibilidad de agua, el pH, la temperatura, la concentración de
oxígeno, la presión atmosférica, la radiación y muchos otros factores
6.1 Curva de crecimiento
ambientales influyen sobre el crecimiento microbiano. Sin embargo, muchos
microorganismos y, en particular, las bacterias, han conseguido adaptarse y El crecimiento de una población microbiana se estudia ana-
desarrollarse en condiciones ambientales extremas que destruirían a la
mayoría de los organismos superiores. lizando la curva de crecimiento de un cultivo microbiano.
5. En el entorno natural, a menudo el crecimiento se ve severamente limitado Cuando los microorganismos se cultivan en un medio líqui-
por los nutrientes disponibles y otros muchos factores ambientales. do, normalmente se trata de un cultivo discontinuo o en sis-
6. Las bacterias se pueden comunicar entre sí y conducirse de una forma tema cerrado —esto es, se incuban en un tubo de ensayo
cooperativa mediado por señales dependientes de la densidad de población.
cerrado al que no se añade más cantidad de medio que la ini-
cial—; en consecuencia, las concentraciones de nutrientes
disminuyen y las de residuos aumentan. Se puede represen-
tar el crecimiento de los microorganismos que se multipli-
can por fisión binaria como el logaritmo del número de célu-
las frente al tiempo de incubación. La curva resultante tiene
cuatro fases diferentes (Figura 6.1).

Fase de latencia (lag)

E n el Capítulo 5 se ha hecho hincapié en la necesidad


que tienen los microorganismos de disponer de una
fuente de energía y de materias primas esenciales
para elaborar los componentes celulares. Todos los microor-
Cuando se introducen microorganismos en un medio de cul-
tivo fresco, normalmente no se produce un aumento inme-
diato del número de células o de masa y, por ello, este perío-
ganismos necesitan carbono, hidrógeno, oxígeno, nitrógeno, do se denomina fase de latencia (lag). Aunque la división
azufre, fósforo y diversos minerales; muchos precisan tam- celular no se produce inmediatamente y no hay un incre-
bién uno o más factores de crecimiento especiales. La célula mento neto de masa, es un proceso activo, la célula está sin-
capta estas sustancias mediante procesos de transporte a tra- tetizando nuevos componentes. Una fase de latencia previa
Tiempo *-
vés de membrana, siendo los más importantes: la difusión
facilitada, el transporte activo y la translocación de grupo. Figura 6.1 Curva de crecimiento microbiano en un sistema
Las células eucariotas utilizan también la endocitosis.
Este capítulo tratará más directamente sobre el creci-
miento que tiene lugar en presencia de un aporte adecuado
de nutrientes. En primer lugar, se describe la naturaleza del
crecimiento y las formas de medirlo, para, posteriormente,
tratar las técnicas del cultivo continuo. Finalmente, se dis-
cutirá la influencia de los factores ambientales sobre el cre-
cimiento microbiano.

El crecimiento puede definirse como un incremento en los


constituyentes celulares; este crecimiento ocasiona un
aumento del número de células en el caso de los microorga-
nismos que se multiplican por procesos como gemación y
fisión binaria. En el último caso, células individuales se cerrado. Las cuatro fases están identificadas en esta curva y descritas en
agrandan y dividen para originar dos células hijas de un el texto.
tamaño aproximadamente igual. Si el microorganismo es
120 Capítulo 6 Crecimiento microbiano

al comienzo de la división celular puede ser necesaria por cen a una velocidad constante, unos respecto de otros. Si se
diversas razones. Las células pueden ser viejas y poseer can- modifican las concentraciones de nutrientes o las condicio-
tidades reducidas de ATP, cofactores esenciales o de riboso- nes ambientales, se origina un crecimiento desequilibrado.
mas; estas sustancias deben sintetizarse antes de que se ini- Se denomina así porque las velocidades de síntesis de los
cie el crecimiento. El medio puede ser diferente al anterior componentes celulares varían entre sí, hasta que se alcanza
donde crecían los microorganismos; en este caso, necesitará un nuevo estado de equilibrio. Esta respuesta se observa
nuevas enzimas para usar esos otros nuevos nutrientes. Por fácilmente en un experimento en el que se inoculan bacte-
último, también es posible que los microorganismos se rias desde un medio pobre en nutrientes a otro más rico
hayan alterado y necesiten un tiempo de recuperación. Cual- (shift-up). Las células, en primer lugar, producen nuevos
quiera que sea el motivo, durante la fase de latencia las célu- ribosomas para aumentar su capacidad de síntesis de proteí-
las se equipan de nuevo, replican su DNA, comienzan a nas. Esta fase se continúa con un obvio incremento en la
incrementar su masa y por último, se dividen. concentración de proteínas y síntesis de DNA. Finalmente,
La duración de la fase de latencia varía considerable- tiene lugar el aumento esperado de la velocidad de multipli-
mente según el estado de los microorganismos y la naturale- cación. Síntesis de proteínas y DNA (secciones 11.3 y 12.2).
za del medio. Esta fase puede ser bastante larga si el inoculo También se produce un crecimiento desequilibrado
procede de un cultivo viejo o de uno que haya sido refrigera- cuando se pasa una población bacteriana de un medio rico
do. La inoculación de un cultivo en otro químicamente dife- en nutrientes a otro más pobre (shift-dowrí). En el medio
rente resulta también en una fase de latencia mayor. En este rico de origen, los microorganismos probablemente habrán
mismo sentido, cuando se transfiere un cultivo en fase de obtenido directamente del medio muchos de los componen-
crecimiento exponencial a un medio nuevo de la misma tes celulares esenciales. Cuando se cambian a un medio ina-
composición, la fase de latencia se acorta o no se produce. propiado nutricionalmente, necesitan tiempo para elaborar
las enzimas que se precisan para realizar la biosíntesis de los
nutrientes no disponibles. En consecuencia, la división celu-
Fase exponencial lar y la replicación del DNA continúan después de la trans-
ferencia entre medios, pero la síntesis neta de proteínas y
Durante la fase exponencial o logarítmica (log), los micro- RNA es más lenta. Las células disminuyen de tamaño y
organismos crecen y se dividen hasta el nivel máximo posi- modifican su metabolismo hasta que sean capaces de crecer
ble, en función de su potencial genético, el tipo de medio y de nuevo; se reanuda el crecimiento equilibrado y el cultivo
las condiciones en que crecen. La velocidad de crecimiento entra en la fase logarítmica. Regulación de la síntesis de los
es constante durante la fase exponencial; esto es, los micro- ácidos nucleicos (pp. 296-305).
organismos se duplican en número a intervalos regulares. Estos dos tipos de experimentos {shift-up y shift-dowrí)
No existe sincronización, cada célula se divide en un demuestran que el crecimiento microbiano se encuentra bajo
momento ligeramente diferente del resto, por ello, la curva un control preciso y coordinado, respondiendo rápidamente
de crecimiento aumenta suavemente, en lugar de realizar a cambios nutricionales y en las condiciones ambientales.
saltos discretos (Figura 6.1). Durante esta fase, la población Cuando el crecimiento microbiano está limitado por la
es más uniforme, química y fisiológicamente; por ello, los baja concentración de un nutriente esencial, el crecimiento
cultivos en fase exponencial se utilizan normalmente en neto final o rendimiento celular aumenta con la cantidad ini-
estudios bioquímicos y fisiológicos. cial de dicho nutriente limitante (Figura 6.2a). Éste es el fun-
El crecimiento exponencial es un crecimiento equili- damento de los ensayos microbiológicos para cuantificar
brado. Es decir, todos los constituyentes celulares se produ- vitaminas y otros factores de crecimiento. La velocidad de

Figura 6.2 Concentración de nutriente y


crecimiento, (a) Efecto de los cambios en la
concentración de un nutriente limitante sobre
el rendimiento celular. A una concentración
suficientemente alta, el rendimiento se
estaciona, (b) Efecto sobre la tasa de
crecimiento.
6.1 Curva de crecimiento 121

crecimiento también aumenta con la concentración de experiencia positiva para la bacteria. Algunas responden con
nutrientes (Figura 6.2b), aunque de forma hiperbólica, muy cambios morfológicos muy significativos, como la forma-
semejante a la observada con muchas enzimas {véase la Figu- ción de endosporas. La mayoría, simplemente disminuyen
ra 8.17). La forma de la curva parece reflejar la tasa de inte- su tamaño, normalmente acompañado de una reducción del
racción de los nutrientes con las proteínas transportadoras protoplasto y condensación del nucleoide, y se producen
microbianas. Con niveles suficientemente altos de nutrientes, cambios significativos a nivel de la expresión génica y fisio-
los sistemas transportadores estarán saturados, por lo que la lógicos. Las bacterias en condiciones de estrés nutricional
tasa de crecimiento no aumentará a pesar de incrementarse la producen frecuentemente una serie de proteínas del ham-
concentración de nutrientes. Ensayos microbiológicos (p. 103); bre, que las hacen mucho más resistentes al daño por dife-
Sistemas de transporte de nutrientes (pp. 104-109). rentes mecanismos. Incrementan los puentes cruzados del
peptidoglicano y, por consiguiente, la fuerza intrínseca de la
pared celular. Se producen proteínas que se unen y protegen
Fase estacionaria al DNA (Dps, DNA-binding proteins from ítarved cells).
Chaperonas protegen a las proteínas de su desnaturalización,
Finalmente, el crecimiento de la población cesa y la curva además de recuperar el estado nativo de proteínas dañadas.
de crecimiento se hace horizontal (Figura 6.1). Las bacterias Como consecuencia de estos y muchos otros mecanismos,
llegan normalmente a la fase estacionaria cuando la con- las células en condiciones de hambre se vuelven más resis-
centración es de, aproximadamente, 109 células por mL. tentes a la destrucción por el hambre en sí mismo y a otros
Otros microorganismos no alcanzan normalmente esta den- factores, como compuestos químicos tóxicos, como el cloro.
sidad de población; los cultivos de protozoos y algas no sue- Estos cambios son tan efectivos que algunas bacterias pue-
len sobrepasar concentraciones de 106 células por mL. El den sobrevivir en estas condiciones de estrés nutricional
tamaño final de la población depende, por supuesto, de la durante años. Obviamente, estas consideraciones tienen una
disponibilidad de nutrientes y otros factores, así como del enorme implicación práctica en medicina y en la industria.
tipo de microorganismo que se cultive. En la fase estaciona- Hay evidencias de que Salmonella typhimurium y algunos
ria, el número total de microorganismos viables permanece otros patógenos se vuelven más virulentos cuando pasan
constante. Este hecho puede ser el resultado del equilibrio hambre.
entre la división y la muerte de las células o, simplemente,
que la población deje de dividirse, aunque siga metabólica-
mente activa. Fase de muerte
Las poblaciones microbianas entran en fase estacionaria
por varias razones. Un factor obvio es la limitación de Cambios ambientales perjudiciales, como privación de nu-
nutrientes; si se reduce drásticamente la concentración de un trientes y acumulación de residuos tóxicos, originan la dismi-
nutriente esencial, la población crecerá muy lentamente. Los nución del número de células viables, hecho que caracteriza
organismos aerobios están limitados a menudo por la dispo- la fase de muerte. La muerte de una población microbiana,
nibilidad de O2. El oxígeno no es muy soluble y puede redu- al igual que su crecimiento durante la fase exponencial, es
cirse tan rápidamente que sólo la superficie del cultivo tenga normalmente logarítmica (esto es, una cantidad constante de
una concentración de O2 adecuada para el crecimiento. En células muere cada hora). Este modelo se mantiene incluso
este caso, las células situadas por debajo de la superficie no aunque se observe que el número total de células permanece
podrán crecer, salvo que el cultivo se agite o airee de otra constante, ya que las células no se Usan inmediatamente des-
forma. El crecimiento de una población puede también cesar pués de morir. A menudo, la única forma de decidir si una
debido a la acumulación de productos residuales tóxicos. bacteria es viable consiste en incubarla en un medio fresco;
Parece que este factor limita el crecimiento de muchos culti- si no crece ni se multiplica, se considera que está muerta. Es
vos anaerobios (cultivos que crecen en ausencia de O2). Por decir, la muerte microbiana se define como la pérdida irre-
ejemplo, los estreptococos pueden producir a partir de la versible de la capacidad de multiplicarse.
fermentación de azúcares altas concentraciones de ácido Aunque la mayor parte de una población microbiana
láctico y otros ácidos orgánicos, que acidificarán su medio, normalmente muere de forma logarítmica, la velocidad de
inhibiendo el crecimiento. Finalmente, hay evidencias que mortalidad puede disminuir después de reducirse drástica-
indican que el crecimiento puede cesar cuando se alcanza un mente la población. Esto se debe a la supervivencia prolon-
cierto nivel crítico poblacional. En definitiva, un cultivo está gada de células particularmente resistentes. Por éstas y otras
razones, la curva de la fase de muerte puede ser compleja.
en fase estacionaria como consecuencia de varios factores
que actúan conjuntamente.
Como acabamos de ver, las bacterias en un cultivo dis-
continuo pueden entrar en fase estacionaria en respuesta al Expresión matemática del crecimiento
estrés nutricional, hambre. Probablemente, esto ocurre en la
El conocimiento de la velocidad de crecimiento microbiano
naturaleza ya que numerosos ambientes tienen muy bajos
durante la fase exponencial es indispensable para los micro-
niveles de nutrientes. Sin embargo, el hambre puede ser una
122 Capítulo 6 Crecimiento microbiano

biólogos. Los estudios sobre la velocidad de crecimiento


contribuyen a la investigación básica en fisiología y ecolo-
gía, y a la solución de problemas aplicados industriales. En
consecuencia, se van a analizar los aspectos cuantitativos del
crecimiento de fase exponencial.
Durante la fase exponencial, cada microorganismo se
divide a intervalos constantes. Por ello, la población dupli-
cará su número durante un período determinado de tiempo,
denominado tiempo de generación o de duplicación. Esta
situación puede ilustrarse con un ejemplo sencillo. Suponga-
mos que se inocula un tubo de ensayo con una célula que se
divide cada 20 minutos (Tabla 6.1). La población será de 2
células después de 20 minutos, de 4 células a los 40 minu-
tos, y así sucesivamente. Como la población se duplica en
cada generación, el incremento de la población será expo-
nencial o logarítmico, igual a 2n, donde n es el número de
generaciones (Figura 6.3).
Estas observaciones pueden expresarse en ecuaciones
para determinar el tiempo de generación.

Figura 6.3 Crecimiento microbiano exponencial. En esta figura se


han representado gráficamente los datos de la Tabla 6.1 para seis
generaciones, en forma lineal (•—•) y logarítmica (■=—°). La curva de
crecimiento es exponencial, como muestra la linealidad de la gráfica
logarítmica.

velocidad de crecimiento (k). Equivale al número de gene-


raciones por unidad de tiempo, expresado a menudo como
generaciones por hora.
La velocidad de crecimiento durante la fase exponencial en
un cultivo discontinuo puede expresarse por la constante de

A partir de las fórmulas anteriores se puede calcular el tiem-


Tabla 6.1 Ejemplo de crecimiento po que tarda una población en duplicar su número —esto es,
el tiempo medio de generación o tiempo medio de duplica-
exponencial ción (g)—. Si la población se duplica en un tiempo t (t = g),
Número Población entonces, tras una generación,
Tiempo" de divisiones 2* (No* 2") logio N,
0 0 2" = 1 1 0.000
20 1 2' = 2 2 0.301
40 2 22 = 4 4 0.602
60 3 23 = 8 8 0.903
80 4 2" = 16 16 1.204
100 5 25 = 32 32 1.505
120 6 26 = 64 64 1.806
a
El cultivo hipotético comienza con una célula con un tiempo de generación de 20
minutos.
6.1 Curva de crecimiento 123

El tiempo medio de generación es la inversa de la constante


de la velocidad media de crecimiento. Tabla 6.2 Tiempos de generación de algunos
microorganismos seleccionados
Temperatura Tiempo de
Microorganismo (°C) generación (horas)
El tiempo medio de generación (g) puede determinarse
directamente a partir de una gráfica semilogarítmica con los Bacterias
Beneckea natriegens 37 0.16
datos de la multiplicación (Figura 6.4), y la constante de
Escherichia coli 40 0.35
velocidad de crecimiento se calculará a partir del valor g. El Bacillus subtilis 40 0.43
tiempo de generación puede también calcularse directamen- Staphylococcus aureus 37 0.47
te a partir de las ecuaciones anteriores. Por ejemplo, supon- Pseudomonas aeruginosa 37 0.58
gamos que una población bacteriana aumenta de 103 a 109 Clostridium botulimim 37 0.58
células en 10 horas. Rhodospirillum rubrum 25 4.6-5.3
Anabaena cyUndrica 25 10.6
Mycobacterium tuberculosis 37 «12
Treponema pallidum 37 33
Algas
Scenedeswus auadricauda 25 5.9
Chlorella pyrenoidosa 25 7.75
Áster ion ella formosa 20 9.6
Euglena gracilis 25 10.9
Ceratium tripas 20 82.8
Protozoos
Tetrahymena geleii 24 2.2-4.2
Leishmania donovani 26 10-12
Paramecium caudatum 26 10.4
Acanthamoeba castellana 30 11-12
Giardia lamblia 37 18
Hongos
Saccharomyces cerevisiae 30 2
Monilinia fructicola 25 30

Los tiempos de generación cambian notablemente según


la especie de microorganismo y las condiciones ambientales.
Los valores varían desde menos de 10 minutos (0.17 horas)
en algunas bacterias, hasta varios días, en algunos microor-
ganismos eucariotas (Tabla 6.2). Los tiempos de generación
en la naturaleza suelen ser más largos que en cultivo in vitro.

1. Defina crecimiento. Describa las cuatro fases de la curva


de crecimiento en un sistema cerrado y razone las causas
y características de cada una de ellas.
2. Defina crecimiento equilibrado, crecimiento
desequilibrado, experimento shift-up y experimento
shift-down.
Figura 6.4 Determinación del tiempo de generación. El tiempo de
generación puede determinarse a partir de la curva de crecimiento 3. ¿Cómo afecta el incremento en un nutriente limitante sobre
microbiano. Se representan los datos de la población en un papel el rendimiento celular y la tasa de crecimiento?
cuadriculado semilogarítmico, indicando el número de células en el
4. ¿Qué son tiempo de generación o duplicación, y constante
eje logarítmico. Luego, se lee directamente el tiempo de duplicación
de la población a partir de la gráfica. También puede representarse en de velocidad media de crecimiento? ¿Cómo pueden
ejes regulares utilizando el logaritmo del número de células frente al deducirse a partir de datos de crecimiento?
tiempo.
124 Capítulo 6 Crecimiento microbiano

6.2 Determinación del crecimiento


microbiano
Existen muchas formas de cuantificar el crecimiento micro-
biano para determinar la velocidad de crecimiento y el
tiempo de generación. Se pueden medir tanto la masa como
el número de células de la población, ya que el crecimiento
implica un incremento de ambos. A continuación, se anali-
zan brevemente las técnicas más comúnmente empleadas
para medir el crecimiento, y se exponen las ventajas e
inconvenientes de cada una de ellas. No siempre una deter-
minada técnica es la mejor, dependerá de cada situación
experimental.

Determinación del número de células


La forma más obvia de determinar el número de células
microbianas es por recuento directo. La utilización de una
cámara de recuento es fácil, económica y relativamente rápi-
da; ofrece también información acerca del tamaño y la mor-
fología de los microorganismos. Las cámaras de Petroff-
Hausser se pueden emplear para contar procariotas; los
hemocitómetros pueden utilizarse para ambos, procariotas y
eucariotas. Para facilitar el recuento de microorganismos
procariotas en estas cámaras, éstos deben teñirse, o bien,
emplear un microscopio de contraste de fases o de fluores-
cencia. Estos portaobjetos especialmente diseñados tienen
cámaras tipo rejilla, excavadas en el fondo de la cámara, con
una profundidad conocida (Figura 6.5). Se puede calcular el
número de microorganismos en una muestra, a partir del
volumen de la cámara y la dilución que se efectuó a la mues-
tra. Esta técnica presenta algunos inconvenientes. Debido al
pequeño volumen de las microcámaras excavadas, normal-
mente 0.001 mL, la concentración de la población microbia- Figura 6.5 Cámara de recuento de Petroff-Hausser. (a) Vista
na tiene que ser bastante alta para que el resultado sea repre- lateral de la cámara, mostrando el cubreobjetos y el espacio entre
sentativo. Es también difícil distinguir entre células vivas y ambos, ocupado por la suspensión bacteriana en estudio, (b) Vista
superior de la cámara. La rejilla se encuentra en el centro del
muertas sin el empleo de técnicas especiales. portaobjetos, (c) Vista aumentada de la rejilla. Se cuentan bacterias en
Los microorganismos de mayor tamaño, como protozoos, varios cuadrados centrales, normalmente a un aumento de x400 a
algas y levaduras no filamentosas, pueden contarse directa- x500. El número medio de bacterias en estos cuadrados sirve para
mente con contadores electrónicos, como el Contador Coul- calcular la concentración de células en la muestra original. Como hay
25 cuadrados en un área de 1 mm2, el número total de bacterias en 1
ter. Este método consiste en hacer pasar una suspensión mm de la cámara es (n.° de bacterias/cuadrado) x (25 cuadrados). La
microbiana a través de un pequeño orifico. Una corriente cámara tiene una profundidad de 0.02 mm y por ello,
eléctrica fluye a través del mismo, y los electrodos situados N.° de bacterias/mm3 = (n.° de bacterias/cuadrado)(25 cuadrados)(50)
a ambos lados miden su resistencia eléctrica. Cada vez que
El número de bacterias por cnr (mL) es 10 veces este valor. Por
una célula microbiana atraviesa el orificio, aumenta la resis- ejemplo, supongamos que el recuento medio por cuadrado es de
tencia eléctrica (o disminuye la conductividad) y se cuenta 28 bacterias:
la célula. El Contador Coulter ofrece resultados precisos con
N.° de bacterias/cm3 = (28 bacterias)(25 cuadrados)(50)(103) = 3.5xlO7
células grandes y se utiliza ampliamente en los laboratorios
de los hospitales para el recuento de eritrocitos y leucocitos.
No es tan eficaz para contar bacterias debido, entre otros
para contar células capaces de crecer y multiplicarse. En la
problemas, a la interferencia con partículas pequeñas de
mayoría de estos métodos de recuento, se dispersa una
residuos y con la formación de filamentos.
muestra diluida de bacterias u otros microorganismos sobre
Las cámaras de recuento y los contadores electrónicos
una superficie de agar sólido. Cada microorganismo o agre-
permiten contar todas las células, vivas o muertas. Existen
gado de microorganismos desarrolla una colonia individual.
también otras técnicas, que son procedimientos específicos
El número original de microorganismos viables en la mués-
6.2 Determinación del crecimiento microbiano 125

tra puede calcularse a partir del número de colonias forma- con agar y se incuba hasta que cada célula forme una colo-
das y la dilución de la muestra. Por ejemplo, si 1.0 mL de nia individual. Un recuento de colonias permite obtener el
una dilución de 1 x 10~6 produce 150 colonias, la muestra número de microorganismos presentes en la muestra filtra-
original contendría alrededor de 1.5 x 10* células por mL. da, y pueden emplearse medios especiales para seleccionar
Normalmente, el recuento es más exacto si se utiliza un con- microorganismos específicos (Figura 6.7). Esta técnica es
tador especial de colonias. De esta forma, se pueden emple- especialmente útil en el análisis de muestras de agua. Aná-
ar las técnicas de siembra por extensión y en profundidad lisis de la pureza del agua (pp. 704-707).
para determinar el número de microorganismos viables en Los filtros de membrana se utilizan también para contar
una muestra. bacterias directamente. Primero se filtra la muestra a través
Las técnicas de siembra en placa son sencillas, sensibles de un filtro negro de membrana de policarbonato para crear
y se utilizan ampliamente para el recuento de bacterias y un fondo oscuro que permita observar objetos fluorescentes.
otros microorganismos en muestras como alimentos, agua y Luego, se tifien las bacterias con un colorante fluorescente,
suelo. Sin embargo, existen varios problemas que pueden como naranja de acridina o DAPI, y se observan al micros-
producir imprecisiones. Es necesario desagregar previamente copio. Los microorganismos teñidos con naranja de acridina
las agrupaciones de células ya que, de lo contrario, el brillan con un color naranja o verde y pueden contarse fácil-
número de colonias será inferior al esperado. En cualquier mente con un microscopio de epifluorescencia {véase la sec-
caso, como no es posible estar totalmente seguro de que ción 2.2). Normalmente, los recuentos obtenidos por este
cada colonia proceda de una célula individual, los resultados método son mucho más elevados que con las técnicas de
suelen expresarse en unidades formadoras de colonias cultivo ya que algunas de las bacterias están muertas.
(UFC, colony forming unii), en lugar de expresarlo como Actualmente se dispone de pruebas comerciales que permi-
número de microorganismos. El número de colonias por ten contar directamente el número de microorganismos
placa debe ser entre 30 y 300 para que sea un valor estadísti- vivos y muertos en una muestra, empleando reactivos fluo-
camente fiable. Igualmente, el recuento no será fiable si el rescentes que marcan diferencialmente las células vivas y
medio con agar empleado no puede mantener el crecimiento las muertas (véase la Figura 2.13d).
de todos los microorganismos viables presentes. El agar
caliente que se utiliza en la siembra en profundidad puede
dañar o matar células sensibles; por ello, la siembra en placa Determinación de la masa celular
por extensión ofrece a veces recuentos superiores que con la
técnica de siembra en profundidad. Técnicas de siembra en El crecimiento de una población también supone el aumento
placa por extensión y en profundidad (pp. 112-114). de la masa total celular, por ello, las técnicas empleadas
El número de microorganismos se determina también para medir los cambios de masa pueden utilizarse para
con frecuencia a partir de colonias que crecen sobre filtros medir el crecimiento. El método más directo consiste en
especiales de membrana, que tienen poros de un tamaño lo determinar el peso seco microbiano. Se recogen las células
suficientemente pequeño para retener bacterias. En esta téc- que crecen en un medio líquido por centrifugación, se
nica, se pasa una muestra a través de un filtro de membra- lavan, se secan en estufa y se pesan. Esta técnica es espe-
na (Figura 6.6), luego, el filtro se coloca sobre un medio cialmente útil para medir el crecimiento de hongos. Sin

Figura 6.6 Sistema de filtración con membrana. Para retener diferentes tipos de microorganismos se utilizan membranas con diferente tamaño de
poro. Posteriormente, los tiempos de incubación variarán dependiendo del medio y del tipo de microorganismo.
126 Capítulo 6 Crecimiento microbiano

Figura 6.7 Colonias sobre filtros de membrana. Muestras filtradas con membrana y cultivadas en diversos medios, (a) Medio estándar de
nutrientes para un recuento bacteriano total. Un indicador colorea las colonias de rojo para facilitar el recuento, (b) Medio para coliformes fecales
para detectar estos microorganismos que forman colonias azules, (c) Agar m-Endo para detectar E. coli y otros coliformes que producen colonias con
un brillo verde, (d) Agar mosto para cultivar levaduras y mohos.

embargo, lleva mucho tiempo y no es muy sensible. Como de dispersión de la luz con un espectrofotómetro, y, en nive-
las bacterias pesan tan poco puede ser necesario centrifu- les de absorbancia pequeños, está casi linealmente relacio-
gar varios cientos de mililitros de cultivo para recoger una nada con la concentración bacteriana (Figura 6.8). Por
cantidad suficiente. tanto, el crecimiento de una población puede medirse fácil-
Existen técnicas más sensibles y rápidas que se basan en mente espectrofotométricamente, siempre que la población
la capacidad de las células de dispersar la luz que incide sea lo suficientemente grande para que pueda medirse la tur-
sobre ellas. Como el tamaño de las células microbianas en bidez.
un cultivo puro es casi constante, el grado de dispersión es Si la cantidad de una sustancia determinada es constante
directamente proporcional a la biomasa celular presente, e en cada célula, la cantidad total de dicho constituyente celu-
indirectamente relacionado con el número de células. Cuan- lar estará directamente relacionada con la masa celular total
do la concentración de las bacterias alcanza aproximada- microbiana. Así, por ejemplo, se puede analizar la cantidad
mente 107 células por mL, el medio aparece ligeramente tur- total de proteínas o nitrógeno de una muestra de células
bio. Incrementos posteriores en la concentración producen lavadas recogidas a partir de un volumen conocido de
nuevos incrementos de la turbidez —disminución de la luz medio. Un aumento en la población microbiana se reflejará
transmitida a través del medio—. Se puede medir el grado en un incremento en el nivel total de proteínas. De forma

Figura 6.8 Determinación de la turbidez y masa


microbiana. Determinación de la masa microbiana por la
medida de la absorción de luz. Al aumentar la población y la
turbidez, se dispersa más cantidad de luz y aumenta la
absorbancia leída en el espectrofotómetro. El contador de este
aparato tiene dos escalas. La escala inferior muestra la
absorbancia, y la superior indica la transmitancia en porcentaje.
La absorbancia aumenta al disminuir la transmitancia.
6.3 Cultivo continuo de microorganismos 127

similar, se puede utilizar el análisis de clorofila para medir


poblaciones de algas, y la cantidad de ATP, para estimar la
cantidad de masa microbiana viva.

1. Describa brevemente cada técnica de determinación del


número de células en una población microbiana, exponien
do sus ventajas e inconvenientes.
2. ¿Por qué los resultados de recuento en placa se deben
expresar como unidades formadoras de colonias?

6.3 Cultivo continuo de microorganismos

Hasta ahora se han tratado los sistemas cerrados, denomina-


dos cultivos discontinuos, en los que no se renuevan los
aportes de nutrientes ni se eliminan los residuos. El creci-
miento exponencial dura solamente unas pocas generacio-
nes y el cultivo alcanza pronto la fase estacionaria. Sin
embargo, es posible cultivar microorganismos en un sistema
abierto, en el que se mantengan constantes las condiciones
ambientales gracias a un suministro continuo de nutrientes y Colector
la retirada de los residuos. Estas condiciones se cumplen en
un laboratorio mediante los sistemas de cultivo continuo. Figura 6.9 Sistema de cultivo continuo: el quimiostato.
En este tipo de cultivo, se puede mantener una población Diagrama esquemático del sistema. El medio fresco contiene una
cantidad limitante de un nutriente esencial. La tasa de crecimiento
microbiana en fase de crecimiento exponencial y a una con- está determinada por la velocidad de flujo del medio ai frasco de
centración constante de biomasa durante un período largo de cultivo.
tiempo.

La concentración celular microbiana y el tiempo de


Quimiostato generación están relacionados con la velocidad de dilución
(Figura 6.10). La densidad de la población microbiana per-
Se utilizan dos clases principales de sistemas de cultivo con- manece inalterada a lo largo de un amplio rango de veloci-
tinuo: 1) quimiostatos, y 2) turbidostatos. Un quimiostato dades de dilución. El tiempo de generación disminuye (esto
se construye de forma que se alimenta un recipiente de culti- es, la velocidad de crecimiento aumenta), al aumentar la
vo con un medio estéril a la misma velocidad con que los velocidad de dilución. El nutriente limitante quedará casi
microorganismos consumen los nutrientes que contiene completamente agotado en estas condiciones de equilibrio.
(Figura 6.9). El medio de cultivo de un quimiostato contie- Si la velocidad de dilución aumenta con demasiada rapidez,
ne un nutriente esencial (p. ej., un aminoácido) en cantida- los microorganismos pueden realmente desaparecer del reci-
des limitantes. Debido a la presencia de este nutriente limi- piente de cultivo antes de que se multipliquen, porque la
tante, tanto el crecimiento como la densidad final celular velocidad de dilución es superior a la velocidad máxima de
dependen de las concentraciones del mismo; es decir, la crecimiento. La concentración de nutriente limitante aumenta
velocidad de crecimiento podrá variarse dependiendo de la a velocidades de dilución elevadas porque hay pocos
velocidad con la que se incorpore nuevo medio en el reci- microorganismos presentes para utilizarlo.
piente. La velocidad de recambio del nutriente se expresa A velocidad de dilución muy baja, un aumento de D
como velocidad de dilución (D), que equivale a la tasa con la causa un incremento tanto de la densidad celular como de la
que el medio fluye al recipiente de cultivo en relación al velocidad de crecimiento. Esto se debe al efecto de la con-
centración del nutriente sobre la velocidad de crecimiento, a
volumen de este recipiente, en donde / es la tasa de flujo
veces denominada relación de Monod (Figura 6.2b). A
(mL/h), y V es el volumen del recipiente (mL).
velocidades de dilución bajas, sólo hay disponible una can-
tidad limitada de nutriente. La velocidad de crecimiento
D=flV
aumenta cuando la energía total disponible supera la ener-
gía de mantenimiento. Gran parte de la energía disponible
Por ejemplo, si /es 30 mL/h y V, 100 mL, la velocidad de
debe utilizarse para el mantenimiento celular, no para el
dilución será de 0.30 h"1.
128 Capítulo 6 Crecimiento microbiano

1. ¿En qué se diferencia un sistema abierto de uno cerrado o


discontinuo?
2. Describa el funcionamiento de los dos sistemas de cultivo
continuo, el quimiostato y el turbidostato.
3. ¿Qué es la velocidad de dilución? ¿Qué es la energía de
mantenimiento?

6.4 Influencia de los factores ambientales


sobre el crecimiento
Como se ha visto anteriormente (pp. 120-121), los microor-
ganismos deben ser capaces de responder a variaciones en
los niveles de nutrientes y, particularmente, a la limitación
en nutrientes. El crecimiento de los microorganismos está
influido notablemente por la naturaleza química y física de
Figura 6.10 Velocidad de dilución y crecimiento microbiano en un su ambiente. El conocimiento de estas influencias ambienta-
quimiostato. Efectos del cambio en la velocidad de dilución en un les permitirá controlar el crecimiento microbiano y estudiar
quimiostato. la distribución ecológica de los microorganismos.
La habilidad de algunos microorganismos para adaptar-
se a ambientes extremos e inhóspitos es realmente extraordi-
naria. Los procariotas son virtualmente ubícuotas, se
crecimiento ni la multiplicación. A medida que aumenta la encuentran en cualquier lugar. Muchos habitat donde las
velocidad de dilución, aumentan la cantidad de nutrientes bacterias pueden prosperar destruirían a la mayoría del resto
y la densidad celular resultante, porque la energía está dis- de microorganismos. Bacterias como Bacillus infernus pue-
ponible, tanto para el mantenimiento como para el creci- den incluso multiplicarse a más de 2.5 km bajo la superficie
miento. terrestre, sin oxígeno y a temperaturas próximas a los 60 °C.
Los microorganismos que crecen en condiciones tan extre-
mas se suelen denominar extremófilos.
Turbidostato En esta sección revisaremos brevemente cómo afectan
al crecimiento microbiano algunos de los más importantes
El segundo procedimiento para conseguir cultivos continuos factores ambientales. Un mayor énfasis se pondrá en el efec-
se basa en el empleo de un turbidostato, que tiene una foto- to de los solutos y la actividad del agua, pH, temperatura,
célula para medir la absorbancia o turbidez de un cultivo en nivel de oxígeno, presión y radiación. La Tabla 6.3 resume
el recipiente de cultivo. La velocidad de flujo del medio al cómo pueden catalogarse los microorganismos según su res-
recipiente se regula automáticamente para mantener una tur- puesta a estos factores.
bidez o densidad celular predeterminada. El turbidostato se
diferencia del quimiostato por varias características. La
velocidad de dilución en un turbidostato es variable, en
lugar de permanecer constante, y el medio de cultivo carece
Solutos y actividad del agua
de un factor limitante. Un turbidostato funciona mejor a Una membrana plasmática selectivamente permeable separa
velocidades de dilución altas; un quimiostato es más estable el contenido citoplasmático del microorganismo de su
y eficaz a velocidades de dilución bajas. ambiente, por ello, alteraciones en la concentración osmóti-
Los sistemas de cultivo continuo son muy útiles porque ca del medio extracelular podrán afectar incluso a la viabili-
ofrecen un aporte constante de células en fase exponencial, dad de los mismos. Si se coloca un microorganismo en una
que crecen a una velocidad conocida. Estos sistemas permi- solución hipotónica (con una concentración osmótica infe-
ten el estudio del crecimiento microbiano en niveles muy rior), entrará agua en la célula causando su estallido, salvo
bajos de nutrientes, concentraciones próximas a las existen- que la propia célula desarrolle alguna estrategia para evitar
tes en los medios naturales. Estos sistemas son esenciales su entrada. Por ejemplo, la concentración osmótica del cito-
para la investigación en muchas áreas —p. ej., en estudios plasma puede reducirse gracias a los cuerpos de inclusión
sobre reacciones entre especies microbianas en condiciones (véanse las pp. 52-55). Los procariotas también pueden con-
ambientales similares a las de un lago o charca de agua tener canales sensibles a la presión osmótica, que se abren
dulce—. Los sistemas continuos también se utilizan en para permitir la salida de solutos cuando la osmolaridad del
microbiología de los alimentos e industrial. entorno se vuelve más baja que la del citoplasma.
6.4 Influencia de los factores ambientales sobre el crecimiento 129

Respuestas microbianas a factores ambientales


Factor y término descriptor Definición Microorganismos representativos

Solutos y actividad del agua


Osmotolerunte Capaz de crecer en un amplkio rango de actividad Staphylococcus aureus, Saccharomyces rouxii
del agua o presión osmótica Requiere altas
Halófilo concentraciones de cloruro sódico Halobacterhtm, Dunaliella, Ectothiorhodospira
para crecer, normalmente por encima de 0.2 M

pH
Acidófilo Óptimo de crecimiento entre pH 0 y 5.5 Sulfolobus, Picrophilus, Ferroplasma, Acontium, Cyanidium
caldarium
Neutrófilo Óptimo de crecimiento entre pH 5.5 y 8.0 Escherichia, Euglena, Paramecium
Alcalófilo Óptimo de crecimiento entre pH 8.5 y 1 1.5 Badilas alcalophilus. N a I ronobacíeri um

Temperatura
Psicrófilo Crece bien a 0 °C y tiene una temperatura óptima Badilas psychrophilus, Chlamydomonas nivalis
de 15 °C o inferior Puede crecer a 0-7
Psicrotrofo °C; óptima entre 20 Listeria monocytogenes, P seudomonas fluorescens
y 30 °C; máxima alrededor de 35 °C
Mesófilo Temperartura óptima alrededor de 20-45 °C Escherichia coli, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis
Termófilo Puede crecer a 55 °C o superior; la óptima a Badilas stearothethermophilus, Thermus aquaticus, Cyanidium
menudo entre 55 y 65 °C Temperatura caldarium, Chaetomium thermophile
Hipertermófilo óptima entre 80 y 113 °C Sulfoliibiis, Pyrococcus, Pyrodictium

Concentración de oxígeno
Completamente dependiente del O2 atmosférico Micrococcus luteus, Pseudomonas, Mycobacterium; la mayoría
Aerobio obligado para crecer No requiere O2 para crecer, pero de las algas, hongos y protozoos Escherichia,
crece mejor en su Enlerococcus, Saccharomyces cerevisiae
Anaerobio facultativo presencia Crece igualmente bien en
presencia como en Strcptococcus pyogenes
Anaerobio aerotolerante ausencia de O2
No tolera el O2 y muere en su presencia Requiere Clostridium, Bacteroides, Methanobacterium, Trepomonas agilis
Anaerobio obligado niveles de O2 por debajo de 2-10 % para Campylobacler, Spirillum volutans, Treponema pallidum
Microaerófilo crecer, y es dañado por el O2 atmosférico (20 %)

Presión Crece más rápido a altas presiones hidrostáticas Photobacterium pmfundum, Shewanella benlhica,
Barófilo Methanococais jannaschü

La mayoría de las bacterias, algas y hongos poseen una potasio. Con el mismo objetivo, algas y hongos utilizan
pared celular rígida que mantiene la forma e integridad celu- sacarosa y polioles —p. ej., arabitol, glicerol y manitol—.
lar, pero cuando se colocan microorganismos con pared Los polioles y aminoácidos son solutos ideales para esta
celular rígida en ambientes hipertónicos, disminuye el nivel función porque normalmente no alteran la estructura y fun-
de agua celular, la célula se contrae, y la membrana plasmá- ción de las enzimas. Algunas bacterias como Halobacte-
tica se separa de la pared celular. Este proceso se denomina rium salinarium elevan su concentración osmótica con
plasmolisis. Esta situación deshidrata la célula y puede iones potasio (también aumentan los iones sodio, pero no
dañar la membrana plasmática; normalmente, la célula no tanto). De hecho, las enzimas de Halobacterium son tan
muere, aunque es inactiva metabólicamente y deja de crecer. peculiares que requieren concentraciones de sal elevadas
Muchos microorganismos conservan la concentración para poder desarrollar una actividad normal {véase la sec-
osmótica de su protoplasma por encima del correspondiente ción 20.3). Como los protozoos no tienen pared celular,
a su habitat utilizando solutos compatibles, de manera que deben utilizar vacuolas contráctiles (véase la Figura 27.3)
aunque estén en medios teóricamente hipotónicos, no entra para eliminar el exceso de agua cuando habitan en entornos
agua a la célula. Estos solutos son compatibles con el hipotónicos. Osmosis y función protectora de la pared celular
metabolismo y el crecimiento aun cuando se encuentren en (p. 64).
concentraciones intracelulares elevadas. Así, por ejemplo, La cantidad de agua disponible para el microorganismo
la mayoría de las bacterias eleva su concentración osmóti- se puede reducir debido a las interacciones de la misma con
moléculas de soluto (efecto osmótico) o por adsorción a las
ca interna mediante la síntesis o captación de colina, betaí-
superficies de sólidos (efecto matricial). Como la concentra-
na, prolina, ácido glutámico y otros aminoácidos; también
ción osmótica de un habitat tiene efectos tan marcados sobre
participan, en cierto grado, cantidades elevadas de ion
130 Capítulo 6 Crecimiento microbiano

los microorganismos, es de gran utilidad poder expresar una concentración interna de solutos elevada para poder
cuantitativamente el grado de disponibilidad del agua. Para retener agua. Por ejemplo, Staphylococcus aureus, muy
ello, los microbiólogos emplean la actividad del agua (aw ). bien adapatada para multiplicarse sobre la piel, puede culti-
La actividad del agua de una solución es 1/100 de su hume- varse en medios conteniendo concentraciones de cloruro
dad relativa (cuando se expresa en porcentaje). Equivale sódico de hasta casi 3 M. La levadura Saccharomyces rouxii
también a la relación entre la presión de vapor de la solución crece en soluciones de azúcares con valores de aw tan bajos
(Pso,) y la del agua pura (Pagua). como 0.6. El alga Dunaliella viridis tolera incluso hasta
concentraciones saturadas de cloruro sódico de 1.7 M.
Sin embargo, muy pocos microorganismos son verda-
deramente osmotolerantes, la mayoría crece solamente en
medios con una actividad de agua de aproximadamente
La actividad del agua de una solución o un sólido 0.98 (valor aproximado de aw para el agua de mar), o supe-
puede establecerse aislándolos en una cámara y midiendo la rior. Ésta es la razón por la que la deshidratación de los ali-
humedad relativa después de que el sistema haya alcanzado mentos o la incorporación a los mismos de una gran canti-
el equilibrio. Supongamos que, después de tratar la muestra dad de sal y/o azúcar son métodos muy eficaces para evitar
de este modo, el aire esté saturado al 95 % —es decir, con- su putrefacción. Como muestra la Tabla 6.4, muchos hon-
tiene el 95 % de la humedad que tendría cuando se equili- gos son osmotolerantes y, por ello, especialmente importan-
brase a la misma temperatura con una muestra de agua tes en el deterioro de alimentos salados o deshidratados.
pura—. La humedad relativa sería del 95 %, por tanto, la Deterioro de los alimentos (pp. 1047-1050).
actividad del agua de la muestra es 0.95. La actividad del Los halófilos se han adaptado tan bien a condiciones
agua está inversamente relacionada con la presión osmóti- hipertónicas que necesitan niveles elevados de cloruro sódico
ca; si una solución tiene una presión osmótica elevada, su para crecer. Las bacterias halófilas extremas requieren
aw es baja. concentraciones de entre 2.8 y 6.2 M (saturación). La archa-
Los microorganismos difieren enormemente en cuanto eon Halobacterium puede aislarse en el Mar Muerto (lago
a su capacidad para adaptarse a habitat con una actividad de salado situado entre Israel y Jordania, el más bajo del
agua baja (Tabla 6.4). Microorganismos osmotolerantes mundo), el Gran Lago salado de Utah (EE.UU.) y en otros
son aquellos que pueden crecer en un rango amplio de acti- habitat acuáticos con concentraciones de sal próximas a la
vidad del agua o concentración osmótica. Estos microorga- saturación. Los miembros de Halobacterium y otras bac-
nismos tienen que realizar un esfuerzo adicional para crecer terias halófilas extremas han modificado sustancialmente
en habitat con un valor bajo de aw, porque deben mantener la estructura de sus proteínas y membranas, en lugar de

Tabla 6.4 Límites inferiores aproximados de aw para el crecimiento microbiano

Actividad del agua Ambiente Bacterias Hongos Algas

1.00-agua pura Sangre 1 Verduras, La mayoría de las Gram negativas no halófilas


Plantas marchitas [carne, fruta
Agua de mar
0.95 Pan La mayoría de los bacilos Gram positivos Basidiomycetes La mayoría
de las algas
0.90 Jamón La mayoría de los cocos, Bacillus Fusarium, Mucor
Rhizopus
Levaduras de ascomicetos
0.85 Salami Staphylococcus Saccharomyces rouxii
(en sal)
0.80 Conservas Penicillium
0.75 Lagos salados Halobacterium Aspergñlus Dunaliella
Pescado salado Actinospora
0.70 Aspergillus
Cereales, dulces, frutos secos
0.60 Saccharomyces rouxii
Chocolate (en azúcares)
Miel Xeromyces bisporus
Leche deshidratada
0.55-alteración del DNA

Adaptado a partir de A. D. Brown, «Microbial Water Stress» en Bacteriological Reviews, 40(4):803-846, 1976. Derechos reservados © por la Sociedad Americana de Microbiología.
Reimpreso con autorización.
6.4 Influencia de los factores ambientales sobre el crecimiento 131

aumentar simplemente las concentraciones intracelulares de cias de pH características. La mayoría de las bacterias y pro-
solutos, sistema utilizado por la mayoría de los microorga- tozoos son neutrófilos. La mayor parte de los hongos prefie-
nismos osmotolerantes. Estos halófilos extremos acumulan ren medios ligeramente ácidos, con valores de pH de 4 a 6;
grandes cantidades de potasio para mantener hipertónico el las algas prefieren también una ligera acidez. Existen nume-
ambiente intracelular; la concentración interna de potasio rosas excepciones a esta norma. Por ejemplo, el alga Cyani-
puede llegar a un valor de 4 a 7 M. Las enzimas, los riboso- dium caldarium y el archaeon Sulfolobus acidocaldarius
mas y las proteínas transportadoras precisan niveles eleva- habitan comúnmente aguas termales acidas; ambos crecen
dos de potasio para ser estables y activas. Además, la mem- bien a pH de 1 a 3 y a temperaturas elevadas. Las archaea
brana plasmática y la pared celular de Halobacterium se Ferroplasma acidavmanus y Picrophilus oshimae pueden
estabilizan por concentraciones elevadas de ion sodio. Si la multiplicarse a pH 0, o muy próximos a este nivel.
concentración de sodio disminuye demasiado, la pared y la Aunque los microorganismos crecen a menudo en
membrana plasmática se desintegran. Las bacterias halófilas medios con un amplio rango de pH, su tolerancia tiene un
extremas se han adaptado con éxito a condiciones ambien- límite. Variaciones intensas en el pH pueden dañar a los
tales que destruirían a la mayoría de los organismos. Duran- microorganismos alterando la membrana plasmática o inhi-
te el proceso, se han especializado tanto que han perdido la biendo la actividad de las enzimas y las proteínas transporta-
flexibilidad ecológica y pueden desarrollarse solamente en doras. En general, los procariotas mueren si el pH interno
unos muy restringidos habitat extremos. Halobacterias (sec- desciende por debajo de 5.0 a 5.5. Los cambios en el pH
ción 20.3). externo pueden modificar también la ionización de las molé-
culas de nutrientes, disminuyendo, por ello, su disponibili-
dad para el organismo.
1. ¿Cómo se adaptan los microorganismos a ambientes Se han propuesto diversos mecanismos para el manteni-
hipotónicos e hipertónicos? ¿Qué es la plasmólisis? miento del pH neutro en el citoplasma. La membrana plas-
2. Defina actividad del agua y describa brevemente cómo mática puede ser relativamente permeable a los protones.
puede determinarse. Parece ser que los neutrófilos intercambian protones por
3. ¿Por qué es difícil para los microorganismos crecer en potasio mediante un sistema de transporte antiporte (p. 107).
medios con valores bajos de aw? Acidófilos extremos mantienen su pH interno próximo a la
4. ¿Qué son microorganismos halófilos, y por qué los neutralidad, intercambiando protones externos por iones de
miembros de Halobacterium precisan iones de sodio y sodio internos. También los búferes internos pueden contri-
potasio. buir a la homeostasis del pH.
Los microorganismos tienen que adaptase a menudo a
cambios ambientales de pH para sobrevivir. En las bacterias,
los sistemas antiporte potasio/protón y sodio/protón corri-
gen probablemente pequeñas variaciones de pH. Si el pH se
PH
vuelve demasiado ácido, se ponen en marcha otros mecanis-
El pH es una medida de la actividad de los iones de hidróge- mos. Cuando el pH baja hasta valores de 5.5 a 6.0, Salmone-
no de una solución, que se define como el valor negativo del lla typhimurium y E. coli sintetizan un grupo de nuevas pro-
logaritmo de la concentración de iones de hidrógeno (expre- teínas, como parte de la denominada respuesta de tolerancia
sada en moles). a un medio ácido. La ATPasa translocadora de protones con-
tribuye a esta respuesta protectora, produciendo más ATP o
bombeando protones fuera de la célula. Si el pH externo dis-
minuye a valores de 4.5 o inferiores, se sintetizan chapero-
La escala de pH se extiende de 0.0 (1.0 M H+) a 14.0 (1.0 x nas como las proteínas de choque ácido o de choque térmico
10~14 M H+), representando cada unidad de pH un cambio de 10 {véanse las pp. 293-294). Probablemente, estas sustancias
veces en la concentración de iones de hidrógeno. La eviten la desnaturalización de las proteínas y faciliten de
Figura 6.11 muestra cómo los habitat en que crecen los nuevo el plegamiento de las desnaturalizadas.
microorganismos varían ampliamente —desde valores de Los microorganismos cambian con frecuencia el pH de
su propio habitat, al producir productos residuales metabóli-
pH entre 1 y 2, en el extremo ácido, hasta pH entre 9 y 10,
cos ácidos o básicos. Los microorganismos fermentadores
en algunos lagos y suelos alcalinos.
producen ácidos orgánicos a partir de hidratos de carbono,
No resulta sorprendente que el pH afecte intensamente
mientras que los quimiolitotrofos como Thiobacillus oxidan
al crecimiento microbiano. Cada especie tiene un rango
compuestos reducidos de azufre a ácido sulfúrico. Otros
definido de pH para su crecimiento y un pH óptimo. Los
alcalinizan su ambiente produciendo amonio mediante la
acidófilos tienen un valor de pH óptimo de crecimiento
degradación de los aminoácidos. Fermentaciones microbia-
entre 0 y 5.5; los neutrófilos, entre 5.5 y 8.0; y los alcalófi-
nas (pp. 192-194); Bacterias oxidantes del azufre (pp. 537-539).
los prefieren un rango de pH entre 8.5 y 11.5. Los alcalófilos En los medios de cultivo suelen añadirse búferes para
extremos tienen un valor de pH óptimo de crecimiento de 10 evitar la inhibición del crecimiento por cambios grandes de
o más. En general, cada grupo microbiano posee preferen-
132 Capítulo 6 Crecimiento microbiano

Ejemplos de ambientes Ejemplos microbianos

Ácido nítrico concentrado Ferroplasma


Picrophilus oshimae
Contenido gástrico, aguas termales acidas Dunaliella acidophila

Zumo de limón Drenaje ácido de minas Cyanidium caldarium


Thiobacillus thiooxidans
Vinagre, gingerale Pina Sulfolobus acidocaldarius

Tomate, zumo de naranja Suelo muy ácido

Queso, repollo Pan Physarum polycephalum


Acanthamoeba castellana
Carne de vacuno, pollo
Agua de lluvia Lactobacillus acidophilus
Leche E. cotí, Pseudomonas aeruginosa
Saliva Euglena gracilis, Paramecium bursaria
Agua pura
Sangre Staphylococcus aureus

Agua de mar Nltrosomonas spp.

Suelo muy alcalino Lagos alcalinos


Mycrocystis aeruginosa
Jabón Bacillus alcalophilus

Amoníaco de uso doméstico

Solución saturada de hldróxido calcico

Lejía Desatascador
Mayor alcalinidad

Figura 6.11 Escala de pH. Escala de pH y algunos ejemplos de sustancias con diferentes
valores de pH. Se muestran ejemplos de microorganismos a los pH óptimos indicados.

pH. El fosfato es el microorganismos son especialmente susceptibles porque son


búfer más común y un generalmente unicelulares y su temperatura varía con la
buen ejemplo de amortiguación mediante un ácido débil ambiental. Por estas razones, la temperatura de la célula
(H2PO4~) y su base conjugada microbiana refleja directamente la de su ambiente. Las reac-
(HPO42~). —> H PO "
ciones catalíticas son las más vulnerables, ya que, el factor
2 4
que más influye sobre el efecto de la temperatura en el creci-
+
H + HPO42 OH- HPO42 + HOH miento es la termosensibilidad de las enzimas. En condicio-
nes por debajo de la temperatura óptima, un aumento en la
+H2PO4"
temperatura eleva la velocidad de crecimiento, porque la
Si se añaden protones a la mezcla, se combinan con la sal velocidad de una reacción catalizada por enzimas, como la
formada para producir un ácido débil. Se previene un de cualquier reacción química, casi se duplica por cada
aumento de alcalinidad porque el ácido débil neutraliza los aumento de temperatura de 10°C. Como la velocidad de
iones hidroxilos, al donar protones para formar agua. Los cada reacción aumenta, el metabolismo en general es más
péptidos y los aminoácidos en medios complejos producen activo a temperaturas altas y el microorganismo crece más
también un fuerte efecto de amortiguación. rápidamente. A partir de cierto punto (temperatura óptima),
un mayor aumento disminuye la velocidad de crecimiento, y
temperaturas más altas llegarán a ser letales. Las altas tem-
Temperatura peraturas ocasionan daños a los microorganismos al desna-
turalizar las enzimas, las proteínas transportadoras, y otras
La temperatura ambiental afecta intensamente a los micro-
organismos, así como al resto de organismos. De hecho, los
6.4 Influencia de los factores ambientales sobre el crecimiento 133

estructura ni la composición química. Dependencia de la


actividad enzimática respecto de la temperatura (pp. 174-175).
Debido a estos efectos opuestos de la temperatura, el
crecimiento microbiano tiene una dependencia bastante
característica de la temperatura, existiendo temperaturas
cardinales distintivas —temperaturas mínima, óptima y
máxima de crecimiento— (Figura 6.12). Aunque la forma
de la curva de dependencia de la temperatura puede variar,
la óptima está siempre más próxima a la máxima que a la
mínima. Las temperaturas cardinales de una especie en par-
ticular no son invariables, sino que dependen de otros facto-
res ambientales, como el pH y los nutrientes disponibles.
Por ejemplo, Crithidia fasciculata, protozoo flagelado que
Temperatura
habita en el intestino de los mosquitos, crecerá en un medio
Figura 6.12 Temperatura y crecimiento. Efecto de la temperatura simple entre 22 y 27 °C. Sin embargo, no puede cultivarse a
en la velocidad de crecimiento. temperaturas de entre 33 y 34 °C, sin añadir metales, amino-
ácidos, vitaminas y lípidos.
Las temperaturas cardinales varían ampliamente entre
proteínas. El calor también deteriora las membranas micro- microorganismos (Tabla 6.5). Las óptimas se encuentran
bianas; la doble capa lipídica puede fundirse y desintegrarse. normalmente en un rango de 0 °C hasta un valor tan alto
Por ello, a pesar de que las enzimas funcionales actúan más como 75 °C, mientras que el crecimiento microbiano se pro-
rápidamente a temperaturas elevadas, el microorganismo duce en un rango de -20 °C hasta más de 100 °C. El princi-
puede alterarse hasta el punto de inhibirse su crecimiento, pal factor que determina este rango de crecimiento parece
porque el daño no puede repararse. A muy bajas temperatu- ser el agua, ya que, incluso a las temperaturas más extremas,
ras, las membranas gelifican y las enzimas no operan a gran los microorganismos necesitan agua líquida para crecer. La
velocidad. En definitiva, cuando los organismos están por temperatura de crecimiento de un microorganismo determi-
encima de la temperatura óptima, tanto la estructura como la nado abarca normalmente un margen de 30°. Algunas espe-
función celular están afectadas. Si las temperaturas son muy cies (p. ej., Neisseria gonorrhoeae) tienen un rango peque-
bajas, la función se ve afectada pero no necesariamente su ño; otras, como Enterococcus faecalis, crecen en un amplio

Vida por encima de 100 °C

H
asta hace poco, la temperatura más alta publicada de cre-
cimiento bacteriano era de 105 °C. De hecho, se creía
que el límite superior de temperatura para la vida se
encontraba en aproximadamente 100 °C, punto de ebullición del
agua. En la actualidad, se han descrito bacterias que crecen en
chimeneas sulfurosas o «black smokers», situadas a lo largo de
grietas y estrías del suelo oceánico, que expulsan agua bentónica
rica en sulfuro, con. temperaturas muy altas, por encima de
350 °C (véase la figura del recuadro). Se ha demostrado que
estas bacterias pueden crecer y multiplicarse a 113 °C. Es posi-
ble que las bacterias puedan crecer a temperaturas superiores. La
presión existente en este habitat es suficiente para mantener al
agua en estado líquido (a 265 atm, el agua de mar no hierve hasta
los 460 °C).
Las consecuencias de este descubrimiento son numerosas.
Las proteínas, las membranas y los ácidos nucleicos de estas
bacterias son extremadamente termoestables y constituyen un
tema idóneo para estudiar los mecanismos de estabilización de
las macromoléculas y membranas. En el futuro, puede ser posi- usos industriales y científicos importantes. Por ejemplo, la Taq
ble diseñar enzimas que puedan actuar a temperaturas muy altas. polimerasa del termófilo Thermus aquaticus se utiliza con
Algunas enzimas termoestables de estas bacterias pueden tener mucha frecuencia en la PCR {véanse las pp. 349-352).
134 Capítulo 6 Crecimiento microbiano

rango de temperaturas. Los principales grupos microbianos Tabla 6.5 Rangos de temperatura
se diferencian entre sí por la temperatura máxima de creci-
miento. El límite superior de los protozoos es de aproxima- para el crecimiento microbiano
damente 50 °C. Algunas algas y hongos pueden crecer a Temperaturas cardinales (°C)
temperaturas tan elevadas como 55 a 60 °C. Se han aislado
procariotas a temperaturas de o próximas a 100 °C, punto de Microorganismo Mínima Óptima Máxima
ebullición del agua (véase la Figura 20.8). Recientemente,
Bacterias no fotosintéticas
se han descubierto cepas que crecen a temperaturas incluso
Bacillus psychrophilus -10 23-24 28-30
superiores (Recuadro 6.1). Sin duda alguna, los organismos
Micrococcus cryophilus -4 10 24
procariotas pueden crecer a temperaturas mucho más altas Pseudomonas fluorescens 4 25-30 40
que los eucariotas. Se ha propuesto que los eucariotas no Staphylococcus aureus 6.5 30-37 46
son capaces de sintetizar membranas para los orgánulos que Enterococcus faecalis 0 37 44
Escherichia coli 10 37 45
sean estables y funcionales a temperaturas superiores a 60 °C. Neisseria gonorrhoeae 30 35-36 38
El aparato fotosintético también parece ser relativamente Thermoplasma acidophilum 45 59 62
inestable, ya que los organismos fotosintéticos no se en- Bacillus stearothermophilus 30 60-65 75
cuentran en ambientes a muy altas temperaturas. Thermus aquaticus 40 70-72 79
Sulfolobus acidocaldarius 60 80 85
Los microorganismos, como los expuestos en la Tabla 6.5,
Pyrococcus abyssi 67 96 102
pueden clasificarse en una de las cinco categorías siguientes, Pyrodictium occultum 82 105 110
en función de los rangos de temperatura de crecimiento Pyrolobus fumarii 90 106 113
(Figura 6.13). Bacterias fotosintéticas
Rhodospirillum rubrum SD' 30-35 SD
1. Los psicrófilos crecen bien a 0 °C y tienen una Anabaena variabilis SD 35 SD
Oscillatoria tennis SD SD 45-47
temperatura óptima de 15 °C, o inferior; la máxima es de
Synechococcus eximius 70 79 84
aproximadamente 20 °C. Se aislan fácilmente en habitat
Algas eucariotas
del Ártico y Antartico; como el 90 % del océano tiene
una temperatura de 5 °C, o inferior (véase el Capítulo 29), Chlamydomonas nivalis -36 0 4
Fraguaría sublinearis -2 5-6 8-9
éste constituye un inmenso habitat para los psicrófilos. Chlorella pyrenoidosa SD 25-26 29
El alga psicrófila Chlamydomonas nivalis puede Euglena gracilis SD 23 SD
realmente colorear en rosa un campo de nieve o un Skeletonema costatum 6 16-26 >28
glaciar debido a sus esporas de color rojo brillante. Los Cyanidium caldarium 30-34 45-50 56
psicrófilos están muy distribuidos entre los taxa Hongos
bacterianos y se encuentran en géneros como Candida scottii 0 4-15 15
Saccharomyces cerevisiae 1-3 28 40
Pseudomonas, Vibrio, Alcaligenes, Bacillus,
Mucor pusillus 21-23 45-50 50-58
Arthrobactei; Moritella, Photobacterium y Shewanella.
Protozoos
El archaeon Methanogenium ha sido recientemente
Amoeba proteus 4-6 22 35
aislado del Lago Ace en la Antártida. Los Naegleria fowleri 20-25 35 40
microorganismos psicrófilos se han adaptado a su Trichomonas vaginalis 25 32-39 42
ambiente mediante varios mecanismos. Las enzimas, Paramecium caudatum 25 ■ 28-30
sistemas de transporte y sísntesis de proteínas actúan Tetrahymena pyriformis 6-7 20-25 33
Cyclidium citrullus 18 43 47
bien a bajas temperaturas. Las membranas celulares de
estos microorganismos tienen niveles elevados de ácidos * SD, sin datos.
grasos insaturados que permanecen en estado semifluido
a temperaturas frías. De hecho, muchos psicrófilos
comienzan a perder componentes celulares a
temperaturas más altas de 20 °C porque se altera la
membrana celular. los microorganismos pertenecen a esta categoría. Casi todos
2. Muchas especies pueden crecer a 0 °C, aunque su los agentes patógenos humanos son mesófilos, como es de
temperatura óptima sea de 20 a 30 °C, y la máxima de esperar, pues la temperatura corporal humana es, casi de
casi 35 °C. Estos microorganismos se denominan forma constante, de 37 °C. 4. Algunos microorganismos son
_ psicrotrofos o psicrófilos facultativos. Las bacterias y termófilos; pueden crecer a temperaturas de 55 °C, o
los hongos psicrotrofos son los agentes principales del superiores. La temperatura mínima es normalmente de 45
deterioro de alimentos refrigerados (véase el Capítulo °C, y la óptima es de 55 a 65 °C. La inmensa mayoría son
41). bacterias, aunque algunos hongos y algas son termófilos
3. Los microorganismos mesófilos crecen a una (Tabla 6.5). Estos organismos crecen rápidamente en muchos
temperatura óptima de 20 a 45 °C, siendo la mínima de habitat, incluyendo compost, pacas de heno, tuberías de agua
15 a 20 °C, y la máxima de casi 45 °C. La mayoría de caliente y aguas termales. Los termófilos se diferencian de
6.4 Influencia de los factores ambientales sobre el crecimiento 135

ausencia, es anaerobio. La mayoría de los organismos su-


periores dependen totalmente del O2 atmosférico para su
crecimiento —es decir, son aerobios obligados—. El oxíge-
no actúa como aceptor final de electrones en la cadena trans-
portadora de electrones durante la respiración aerobia. Ade-
más, los eucariotas aerobios utilizan O2 para sintetizar
esteróles y ácidos grasos insaturados. Los anaerobios facul-
tativos no requieren O2 para crecer, pero lo hacen mejor en
su presencia, en cuyo caso emplearán la respiración aerobia.
Los anaerobios aerotolerantes, como Enterococcus faeca-
lis, pueden crecen bien tanto en su presencia como en su
ausencia. Por el contrario, los anaerobios estrictos u obli-
gados (p. ej., Bacteroides, Fusobacterium, Clostridium pas-
teurianum, Methanococcus) no toleran en absoluto el O2 y
mueren en su presencia. Los anaerobios aerotolerantes y los
estrictos no pueden producir energía mediante respiración y
Figura 6.13 Rangos de temperatura para el crecimiento deben utilizar vías de fermentación o respiración anaerobia
microbiano. Los microorganismos se pueden clasificar en categorías para este objetivo. Finalmente, existen aerobios, como
diferentes según los rangos de temperatura de su crecimiento. En orden Campylobacter, denominados microaerófilos, que se alte-
de menor a mayor temperatura de crecimiento, se clasifican en: ran con niveles atmosféricos normales de O2 (20 %), preci-
psicrófilos, psicrotrofos, mesófilos, termófilos e hipertennófilos. En esta
figura se representan los rangos y las temperaturas óptimas de estos sando concentraciones inferiores para crecer (2-10 %). La
cinco tipos. naturaleza de las respuestas bacterianas al O2 puede estu-
diarse fácilmente cultivando las bacterias en medios sólidos,
o en medios líquidos que contengan agentes reductores para
disminuir los niveles de O2, como en el caldo tioglicolato
los mesófilos por poseer muchas enzimas termoestables y (Figura 6.14). Transporte de electrones y respiración aerobia
sistemas de proteínas capaces de actuar a temperaturas altas. (pp. 196-199); Fermentación (pp. 192-194); Respiración anaerobia
Los lípidos de su membrana son también más saturados que (pp. 203-204).
los de los mesófilos, con un punto de fusión más alto; por ello, Un grupo microbiano puede mostrar más de un tipo de
las membranas de termófilos permanecen intactas a relación con el O2. Entre las bacterias y los protozoos po-
temperaturas altas. 5. Como se ha mencionado anteriormente, demos encontrar representantes de los cinco tipos. Los hon-
unos pocos termófilos pueden crecer a 90 °C, o más, y gos son normalmente aerobios, pero un número de especies
algunos tienen una temperatura máxima de 100 °C. Los —especialmente entre las levaduras— son anaerobias facul-
procariotas con una temperatura óptima de entre 80 °C y casi tativas. Las algas son casi siempre aerobias obligadas. Debe
113 °C se denominan hipertermófilos. No suelen crecer bien remarcarse que la habilidad para crecer en ambientes tanto
por debajo de 55 °C. Pyrococcus abyssi y Pyrodictium aeróbicos como anaeróbicos proporciona una enorme flexi-
occultum son ejemplos de hipertermófilos marinos aislados bilidad desde el punto de vista de la adaptación ecológica.
en zonas calientes del suelo marino. Aunque los anaerobios estrictos mueren en presencia de
oxígeno, se pueden aislar de habitat aerobios. En realidad,
1. Defina pH, acidóftlo, neutrófilo y acalófilo. ¿Cómo pueden
aunque el ambiente sea anaerobio, se encuentran en micro-
modificar los microorganismos el pH de su ambiente, y ambientes anaerobios, gracias a la acción de anaerobios
cómo puede minimizar el microbiólogo este efecto? facultativos que utilizan el O2 disponible. Por ejemplo, el
2. ¿Qué son las temperaturas cardinales?
anaerobio estricto Bacteroides gingivalis vive en la boca,
creciendo en las grietas de alrededor de los dientes.
3. ¿Por qué aumenta la velocidad de crecimiento con la
Estas diferentes relaciones con el O2 parece que se
temperatura, para disminuir de nuevo a temperaturas más
deben a varios factores, incluyendo la inactivación de las
elevadas?
proteínas y el efecto de los productos tóxicos del O2. Así,
4. Defina psicrófilo, psicrotrofo, mesófilo, termófilo e
algunas enzimas pueden inactivarse cuando se oxidan gru-
hipertermófilo.
pos sensibles como los sulfhidrilos. Un ejemplo destacado
es la enzima nitrogenasa fijadora de nitrógeno (véase la sec-
ción 10.4), que es muy sensible al oxígeno.
El oxígeno acepta electrones y se reduce fácilmente
Concentración de oxígeno porque los electrones de sus orbitales externos no están apa-
reados. Las flavoproteínas (véase la sección 8.5), otros
Un organismo que puede crecer en presencia de O2 atmos-
constituyentes celulares y la radiación (pp. 138-139) pro-
férico es aerobio, mientras que otro que puede crecer en su
mueven la reducción de oxígeno. El resultado suele ser una
136 Capítulo 6 Crecimiento microbiano

Figura 6.14 Oxígeno y crecimiento


bacteriano. Ilustración del crecimiento de
bacterias con diferentes respuestas frente al
oxígeno. Cada punto representa una colonia
bacteriana individual en el agar o sobre su
superficie. La superficie, que está expuesta al
oxígeno atmosférico, será aerobia. El contenido
en oxígeno del medio disminuye con la
profundidad hasta que el medio se hace
anaerobio hacia el fondo del tubo. La presencia
y ausencia de las enzimas superóxido
dismutasa (SOD) y catalasa se indican en cada
tipo celular.

combinación de varios productos de reducción: radical diferentes para cultivar estos dos tipos de microorganismos.
superóxido, peróxido de hidrógeno y radical hidroxilo. Cuando se cultivan volúmenes grandes de microorganismos
aerobios, se agita el tubo de cultivo para airear el medio o se
O2 + e~ —> Or (radical superóxido) bombea aire estéril en el tubo. En caso de microorganismos
O27 + e" + 2H+ ---------- > H2O2 (peróxido de hidrógeno) anaerobios, el problema es el inverso, hay que eliminar todo
H2O2 + e~ + H+ ----- > H2O + OH- (radical hidroxilo) el O2. Esto se puede realizar de varias maneras. 1) Se pueden
emplear medios especiales anaerobios, conteniendo agentes
Estos productos de reducción del oxígeno son extre- reductores como tioglicolato o cisteína. Los agentes reduc-
madamente tóxicos y tienen un gran poder de oxidación, tores eliminarán el O2 disuelto presente en el medio, de
destruyendo rápidamente los constituyentes celulares. Un mi- manera que los anaerobios puedan crecer. 2) Se puede tam-
croorganismo debe ser capaz de autoprotegerse contra estos bién eliminar el oxígeno retirando el aire con una bomba de
productos del oxígeno, de lo contrario lo destruirían. Son tan vacío y, posteriormente, el O2 residual con nitrógeno gas
eficaces que los neutrófilos y macrófagos utilizan estos pro- (Figura 6.15). A menudo, se añaden CO2 y nitrógeno a la
ductos tóxicos del oxígeno para destruir agentes patógenos cámara de incubación, pues muchos anaerobios necesitan
invasores. Destrucción dependiente de oxígeno de agentes pató- cantidades pequeñas de CO2 para crecer mejor. 3) Uno de
genos (pp. 774-777). los sistemas más empleados para cultivar un número reduci-
Muchos microorganismos poseen enzimas que ofrecen do de anaerobios es el recipiente de GasPak (Figura 6.16).
protección frente a productos tóxicos del O2. Los aerobios Con este sistema, el ambiente se hace anaerobio utilizando
obligados y anaerobios facultativos contienen normalmente hidrógeno y un catalizador de paladio, se elimina el O2 ya
las enzimas superóxido dismutasa (SOD) y catalasa, que que se forma agua. Los agentes reductores eliminan también
catalizan la destrucción de los radicales superóxido y peró- el oxígeno, como se ha descrito anteriormente. 4) Las bolsas
xido de hidrógeno, respectivamente. La peroxidasa también de plástico pueden servir de contenedores idóneos cuando se
puede ser utilizada para eliminar el peróxido de hidrógeno. quieren incubar unas pocas muestras en condiciones anaero-
bias. Estas bolsas contienen un catalizador y carbonato calcico
para producir una atmósfera anaerobia, rica en dióxido de
carbono. Se añade una solución especial al compartimiento
del reactivo; se colocan placas de Petri en la bolsa, se cierra
con una pinza y se introduce en una estufa de incubación. Un
laboratorio puede utilizar todas estas técnicas pues cada una
de ellas es adecuada para diferentes objetivos.
Los microorganismos aerotolerantes pueden carecer de cata-
lasa, pero casi siempre tienen superóxido dismutasa. Lacto-
bacillus plantarum, aerotolerante, utiliza iones mánganosos,
1. Describa los cinco tipos de relaciones con el O2 que se
en lugar de superóxido dismutasa, para destruir el radical
observan en los microorganismos.
superóxido. Todos los anaerobios estrictos carecen de ambas
enzimas o las poseen en concentraciones muy bajas y, por 2. ¿Para qué emplean los aerobios el O2? ¿Por qué es tóxico el
ello, no pueden tolerar el O2. O2 para muchos microorganismos; cómo se protegen de éste?
Como los aerobios necesitan O2 y los anaerobios son 3. Describa cuatro maneras de cultivar microorganismos
destruidos por éste, hay que aplicar métodos radicalmente anaerobios.
6.4 Influencia de los factores ambientales sobre el crecimiento 137

ratura es de 2 a 3 °C. A pesar de estos extremos, las bacte-


rias pueden sobrevivir y adaptarse. Muchas son barotole-
rantes: un aumento de la presión las afecta negativamente,
pero no tanto como lo haría a las bacterias no tolerantes.
Algunas bacterias presentes en el intestino de invertebrados