ANÁLISIS QUÍMICO

INSTRUMENTAL MODERNO,
PRINCIPALES HERRAMIENTAS
TECNOLÓGICAS DISPONIBLES EN LA
ACTUALIDAD

Héctor Torres Q.F U.N.

Purificación y Análisis de Fluidos
Ltda.
• Análisis Físico – Químicos para
Control de Calidad en la Industria

– Diferentes tipos de Muflas

– Hornos
– Balanzas analíticas
– Densimetros
– Refractometros Digitales
– Termómetros
– Viscosímetros
– Bombas de Vacío
 ANALISIS QUIMICO

En el campo de los análisis químicos se han

suministrado durante años soluciones
diseñadas para simplificar los análisis en
rutina.

Métodos de análisis químico por vía húmeda:

Kjeldahl y Soxhlet, reducen drásticamente los
costes y el tiempo de trabajo de los
laboratorios.
 ANALISIS KJELDAHL
Componentes que contienen N2:

NITROGENO KJELDAHL
– Proteínas

NITROGENO TOTAL
– Amonios
– Urea
– Nitrógeno Orgánico
– Nitratos
– Nitritos
 PROCEDIMIENTO KJELDAHL

Digestión Destilación Titulación

DETERMINACION DE GRASA CRUDA Y
GRASA TOTAL

Grasa total
Hidrólisis + extracción
por solventes

Grasa cruda
Extracción por
solventes
 HIDROLISIS

Fat
• En el comercio de materias
primas
• Para el control de productos
Carbohydrate y procesos
• Supervisar restricciones
legales
• Análisis ambientales
HIDROLISIS
 DEFINICION DE GRASA CRUDA
CH2-OH + HOOC(CH2)xCH3
CH-OH + HOOC(CH2)xCH3
CH2-OH + HOOC(CH2)xCH3
Glicerol Acidos Grasos Mono-, di-, trigliceridos

Protein
Fat
C.H.
Stec011a
EXTRACCION CON SOLVENTES
• En cada tipo de laboratorio la prioridad
puede ser un poco diferente
– Bacteriología y Lab Clínico
– Investigación
– Análisis Físico – Químicos para
Control de Calidad en la Industria
– Control de calidad por
Microbiología Industrial
– Educación
-INSTRUMENTOS PARA LABORATORIO
-MAQUINAS PARA INSPECCION Y
ENSAYO
-MAQUINAS DE RAYOS X PARA
INSPECCIONAR MATERIALES SIN
DESTRUIRLOS
-BALANZAS
-EQUIPAMENTO MEDICO DE ALTA
TECNOLOGÍA
-EQUIPOS PARA AERONAUTICA
-EQUIPO INDUSTRIAL
-DISPOSITIVOS OPTICOS Y LASSER
-ANALIZADORES DE GASES
AMBIENTALES
-SOLUCIONES PARA INDUSTRIA
FOTOVOLTAICA
-ANALISIS DE ALIMENTOS
-INSTRUMENTOS PROTEOMICA Y
GENOMICA
-SOLICIONES PARA LA INDUSTRIA
FARMACEUTICA: DESARROLLO DE
FARMACOS. 17
Historia

En 1875 Genzo Shimadzu (1839-1894) inicia

negocios de manufactura de instrumentos
físicos y químicos educacionales en
Kiyamachi-Nijo en Kyoto.
Genzo Shimadzu Sr.
(1839-1894)

1909
El primer Aparato medico de rayos X en
Japón (desarrollado en el Hospital de
Chiba Kokufudai Eisei)

El primer Rayos X en Japon

Historia

1934 El primer espectrógrafo es

terminado en Japón

1947 Por primera vez en Japón se

inicia el desarrollo del microscopio 1956 El primer Cromatógrafo
electrónico desarrollado en Japón
 Introducción
1975 Se establece Shimadzu
Scientific Instrument en EU

1989 Shimadzu adquiere Kratos Group PLC

Equipos de Rayos X
Introducción
1996 Shimadzu Filipinas desarrolla
balanzas electrónicas
1997 Shimadzu Sanjo Adquiere
acreditación ISO 14001 1998 Shimadzu adquiere Nordiko Ltda
Fabricantes de tarjetas electrónicas
2001 Shimadzu Biotech en conjunto con
Proteomics System desarrollan sistemas
procesadores integrados en gel para
identificación de proteínas
Sistemas MALDI
Sistemas analizadores IT, TOF, MS/MS

2002 koichi Tanaka Premio Nobel Química

Grupo de SHIMADZU
Identificación de estructuras de
macromoléculas Biológicas por métodos de
ionizacion suave por desorcion por
Espectrometría de Masas( MALDI-QIT-TOF MS)
TIPOS DE TECNOLOGIA
• ESPECTROSCOPIA
MOLECULAR
• ESPECTROSCOPIA
ATÓMICA
• SEPARACIÓN:
CROMATOGRAFIA
• ESPECTROMETRIA DE
MASAS
• MEDICIÓN DE
PARÁMETROS
INDIVIDUALES: TOC
 Fundamento de Espectroscopia
Qué se mide?
intersacción de la energia (luz) con la materia
Que tipo de energia se mide?
Ultravioleta (~165-350nm), Visible (~350-750nm)
Cercano infrarrojo (~750-2,500nm)

© 2007 SHIMADZU
 Fundamento de Espectroscopia
Que información se puede suministrar al
usuario?
Propiedades químicas y físicas de la muestra:

Cantidad, concentración, composición, pureza,

calidad, color, brillo, apariencia, reflectancia,
absorbancia, trasmitancia, indice de refracción.

© 2007 SHIMADZU
Fundamentos de la Espectroscopia
Cinco componentes básicos de la óptica de los instrumentos:
1) Fuente- Una fuente estable de energia radiante del rango de
LO (WL range).
2) Soporte de Muestra- Contenedor transparente Celdas cubetas
3) Selector de Longitud de Onda- un dispositivo que aisle una
región de longitud de onda para medir (monocromador ,
prisma, o filtro).
4) Transductor Foto eléctrico: (Detector) Tubo foto multiplicador
o foto diodo
5) Procesador de Señal y pantalla de visualización: Desarrolla los
cálculos y muestra los resltados.
Instrumento
Todos los espectrofotómetros de Shimadzu
emplean rejillas holográficas brillados por
proceso iónico para seleccionar las longitudes
de onda.
Instrumento

Todos los
espectrofotómetros de
Shimadzu usan
lamparas de Ioduro
de Tungsteno para el
rango visible-NIR
(2,000hr) y una
lámpara de deuterio
para el UV
(2,000hr)
 Instrumento
Monocromador
Sencillo:
UV Mini, BioMini,
UV1800, UV-2600
Doble
Monocromador:
UV-2700, UV-
3600, UV-3700
© 2007 SHIMADZU
BASES DEL FTIR
 Espectroscopioa Infraroja

UV VIS NIR IR Far IR Microwave

10-5 10-5 10-4 10-3 10-2 10-1

Wavelength (cm)

Energy

31
 Espectroscopia infraroja
Symmetric In-plane bending
stretching

Asymmetric Out-of-plane
stretching bending

Cuando la molécula es irradiada con radiación electromagnética,

La vibración de los enlaces absorbera energia si la frecuencia de la luz y
La vibración son idénticas.
32
 Espectroscopia Infraroja
Espectro IR

Qué movimientos moleculares están ocurriendo?

Qué grupos funcionales existen?

 Regiones en el Infrarojo
Wavenumber (cm-1)
4000 2500 2000 1500 625
100

N-H C=N C=O

Fingerprint region
O-H C=C C=N

C-H C=C

0
2.5 4 5 7 16
Wavelength (10-6m)
34
 Espectro IR Revisión eje Y
• Eje – Y Mide la intensidad de Luz
• A = log(1 / %T) or log (100/T)
• Transmitancia o % de Transmitancia
– Qué tanta luz pasa a través de la muestra
– Picos hacia abajo
– 0-1 o 0-100%
• Absorbancia [A = log (I0/I)]
– Qué tanto absorbe la muestra
– Picos hacia arriba
– Usado para análisis cuantitativo (Abs proporcional a Conc)
 Qué se mide?
• Molecules con momento dipolar cambiante
– NIR
• Sobretonos (C-H, N-H, O-H, S-H)
• Información débil – buena para muestras con absorción fuertes
– MIR
• Organicos e Inorgánicos no metálicos
• Rico en Informacion
– FIR
• Metal-Metal o Metal-Ligando (Inorganicos)
• Enlaces fuertes

• Que grupos funcionales están presentes

– No suministra información de estructura
 DIAGRAMA OPTICO - FTIR

A: Interferometro D: Detector
B: Red Difraccion (Beamsplitter) E: Muestra
C: Fuente IR F: Espejo fijo
INTERFEROMETRO MICHELSON
Fuente
• Ceramica
• Mid-IR & Far-IR (7,800
– 240 cm-1)
• Rango Espectral
• Estability
• Tiempo de vida
• Servicio
39
 Beam splitters
• KBr es el material mas común..
• Cubierta de Germanio (depositada en la superficie del KBr) sandwich entre
2 discos de KBr.
• Actua como un espejo parcialmente plateado.

Rayo reflejado
Germanio

Rayo entrante Rayo trasmitido

KBr

40
 Beam splitters

• Diferentes tipos de material anti humedad

para cubrir; materiales similares al teflon;
previene B/S empañado (p.ej., el KBr tiene
tendencia natural a absorber humedad
atmosférica)
• Otras ventanas no son higroscópicas pero son
mucho mas costosas.

41
Beam splitter
• Bromuro de
Potasio(KBr)
• Mid-IR
(7,800 - 350 cm-1)
• Higroscopico!

42
Beam splitter
• CaF2
• NIR
(7,800 - 350 cm-1)
• No-higroscopico

43
INSTRUMENTO

• ESPECTROFOTOMETRO
• ACCESORIOS
ATR Comparison (Diamond Crystal)
Quest ATR MIRacle ATR GladiATR Golden Gate ATR
(SPECAC) (PIKE) (PIKE) (SPECAC)

220-93222-01 220-92870-00 220-93159-01 220-92742-00

$6,600.00 $7,313.00 $8,765.00 $9,341.00

The accessories above are universal and will fit all Shimadzu FTIR’s
unlike the MIRacle-10, GladiATR-10, and HATR-10 which are dedicated to
the Affinity as shown on the next slide
 ANALISIS ELEMENTAL
Definición
“Es el proceso por el cual los elementos de la muestra objeto de la
investigación se detectan y cuantifican
 Conceptos teóricos y definiciones

El átomo y la espectroscopia

Técnicas: Emisión, Absorción y Fluorescencia.

Configuración Atómica, estado fundamental.

Proceso
 Principio

• La Muestra se reduce a Estado Atómico.

• Los Elementos Absorben la luz emitida por la LCH de una determinada
longitud de onda.
• El descenso en la cantidad de luz que llega al detector se mide.
 Análisis Elemental Instrumentación Disponible

Elementos de la tabla periódica, que pueden ser analizadas con base en

diferentes prácticas
Los elementos que pueden
ser analizados
Límites de detección
Métodos Aprobados
Tipo de muestra:
Sólidos, líquidos, gases
Características Matrix
Otros requisitos:
– Número de muestras
– Número de elementos
– Costo de los análisis
 Instrumentación en Espectroscopia Atómica
Espectrofotómetro de Absorción Atómica
"Atomización de la muestra por medio de una llama o de horno de grafito (alrededor de
2800 - 3000 ° C). La luz especifica del elemento es emitida por una lámpara de HCL, esta
radiación se absorbe por el elemento atomizado, la reducción en la intensidad de la luz
debido a la absorción por el analito o elemento se mide por el detector "

Atomización por llama Atomización por Horno de grafito

 Atomic Spectroscopy Instrumentation
AA Flame Analysis Diagram

FUENTE ATOMIZACION OPTICA DETECTOR

Espectrofótometro de Absorción Atómica

AA de doble haz
Proceso de muestreo en llama
LLAMA: Aire-C2H2 T°= 2300°C
Temperatura de la llama
Análisis por horno de Grafito
Furnace Analysis
Furnace Analysis
 Instrumentación en Espectroscopia Atómica
Procesos de las lámparas de cátodo hueco

•Argón (Ar) es ionizado a Ar + (iones) por la corriente suministrada a la lampara.

•El Ar + ionizado interactúa con el metal del cátodo causando un efecto de

pulverización.
•El metal (M) es puesto en libertad en estado excitado (H *), entonces emite
radiación en el espectro característico de cada metal.

•Si el metal (analito) se encuentra en la llama, la luz emitida por la lampara será
absorbida y menos luz será detectada.
 Hamamatsu Hollow Cathode Lamps

Normal Lamp Self-Reversal Lamp

 Análisis Elemental
Instrumentación Disponible

Instrumentación disponible para análisis elemental

Espectroscopía Atómica: Absorción Atómica (AA)
Técnicas de muestreo

Por llama Aire/C2H2, C2H2 /N2O

Absorción atómica con horno de grafito
MVU (Unidad de vapor de mercurio)
HVG (Generador de Vapor hidruro )
Emisión de plasma acoplado Inductivamente(ICPE)
Introducing the new AA7000

AA7000 Flame

AA7000 Furnace

63
Introducing the new AA7000

AA7000 Flame

AA7000 Furnace

64
Shimadzu Scientific Instruments, Inc.
 Atomic Spectroscopy Instrumentation
Inductively Coupled Plasma Spectrometer

Espectrofotómetro de plasma acoplado inductivamente

“Aumenta la ionización de los elementos de la muestra al alcanzar altas
temperaturas (alrededor de 10.000 ° C), los elementos se ionizan y emiten
radiación proporcional a la concentración que es medida, de acuerdo a
su espectro.
Basado en los elementos especificados, y dependiendo del método de
investigación, se pueden usar los espectrofotometros de ICP’s en
acoplamiento con otras técnicas
ICP-AES (ICP Atomic Emission Spectrometry):
la luz es separada basada en la longitud de onda
ICP-MS ( ICP Mass Spectromerty):
los iones son separados en base a la masa.

Shimadzu Scientific Instruments, Inc.

 ICP-Principio
El plasma es gas ionizado
a altas temperaturas (Ar)
Plasma
Consta de casi el mismo
número de iones positivos Magnetic
y electrones. force line
Los Núcleos atómicos y
los electrones son
separados al estar
ionizados en el Plasma

High
frequency
Sample induction
particles coil

67
ICP Highlights

High-Performance

High-Resolution High-Precision
 Características: Echelle Grating
Pb 220.3nm
Low

P 213.62nm

Cu 213.60nm

Order
1024 X 1024 picture elements
1M pixel

Al 167.0nm
High
Short Wavelength Long

69
• Energy Dispersive X-ray
• Fluorescence Spectrometer
 EDX-720: Antecedentes teóricos

• Conocida como,
EDX (energía dispersiva de fluorescencia de rayos
X),
EDS (energía dispersiva de rayos X Espectroscopia)
ED-XRF (energía dispersiva - fluorescencia de
rayos X)
XRF (Fluorescencia de rayos X)
 Ultra long waves
10 4

Long waves
ｋｍ
1 10 1 10 2 10 3

Medium waves
X-Rays Are Electromagnetic Waves

Short waves
Ultra-short waves
ｍ
10-13 10-12 10-11 10-10 10-9 10-8 10-7 10-6 10-5 10-4 10-3 10-2 10-1

Microwaves
Far infrared
Infrared Red
Near infrared Orange

Visible Light
Yellow
μｍ

Visible light Green

Blue
Ultraviolet
Purple

ｎｍ
ｎｍ
Ｘ rays
Wavelength λ(m)

pｍ
γ rays
 EDX-720: Instrument Diagram

Sample Compartment

TheIncidental
An sample produces
X-ray excites
an X-
the sample
ray Sample

DETECTER
“SiLi”
 EDX-720 : Theoretical Background
(cont.)

DETECTER

X-rays irradiates sample

Electron is removed

Electron drops to fill void

K
L
M
 3 Good reasons for EDX

1. Non-destructive rapid analysis (1 to 5 min) with little

or no pretreatment

2. Measures a wide range of elements (Na to U) and a

wide concentration range (low ppm to 100%).

3. Minimal Maintenance
78 Elements or 76%
EDX Hardware
External Controls

Samples 300 mm (w) & 150 mm (H)

Automatic Opening / Closing Door

TECNICAS DE SEPARACIÓN
CROMATOGRAFIA
Ingreso de muestra
• LIQUIDA
– Papel
Separación, Columna
– Capa delgada
– Columna
Detección de
Componentes
– Contra corriente
• Gases

Colección
de
fracciones
Mecanismo de Separación
Mecanismo de Separación
FACTORES QUE
INFLUENCIAN Ingreso de muestra

• COMPOSICION Y Separación, Columna

PROPIEDADES DE LA FASE
MOVIL
• TIPO Y PROPIEDADES DE LA Detección de
Componentes
FASE ESTACIONARIA
• TEMPERATURA

Colección
de
fracciones
Enfoque
• Separaciones por
tamaño o por
afinidad.

G.P.C.

GC - H.P.L.C.
Introducción

IUPAC.
Cromatografía

La cromatografía es un método físico de separación en el

que los componentes a separar se distribuyen entre dos
fases, una de las cuales está en reposo (fase estacionaria)
mientras que la otra (fase móvil) se mueve en una
dirección definida.

82
Introducción

Cromatógrama

Una gráfica u otro tipo de presentación de la respuesta de

un detector, la concentración de un analito en el efluente
u otra magnitud usada como medida de la concentración
en el efluente, frente al volumen de efluente o al tiempo.
En la cromatografía plana, "Cromatógrama" puede
referirse al papel o capa con las zonas separadas

83
Mecanismo de Separación
Mecanismo de Separación
FACTORES QUE
INFLUENCIAN Ingreso de muestra

• COMPOSICION Y Separación, Columna

PROPIEDADES DE LA FASE
MOVIL
• TIPO Y PROPIEDADES DE LA Detección de
Componentes
FASE ESTACIONARIA
• TEMPERATURA

Colección
de
fracciones
Enfoque
• Separaciones por
tamaño o por
afinidad.

G.P.C.

GC - H.P.L.C.
Introducción

ESQUEMA BASICO DE UN
CROMATOGRAFO DE GASES

87
 Componentes de un Cromatógrafo

Suministro de Procesador Procesador

Columna Detector
Solvente de Muestras de Datos
 Information Obtained from LC and MS

Means of identifying sample

⇒Retention time ⇒Retention time + Mass information
Inten. (x100,000)
3.0
Column 151

2.0

1.0
Injector
SPD-20A/20AV 0.0
250 m/z
SPD-M20A PDA detector Inten. (x100,000)

207
7.5

5.0

2.5
Time LCMS-2020
0.0
250 m/z
UV spectra
17.5
mAU 150
mAU
The molecular weight of the sample can be
421
417

15.0

12.5
125
ascertained with an MS spectrum. Provides
greater selectivity than a UV spectrum.
100

10.0
75

7.5

50
246

5.0
240

25
2.5
600

0.0 0

200 300 400 500 nm 200 300 400 500 nm

LAAN-E-LM003
89
 Terminología

• Retención o factor de
capacidad K´
• Selectividad o factor de
separación
• Número de platos teóricos
N
V1 - V0
RETENCION, K´ = • La combinación de las
V0
K´2 V2 - V0 anteriores= Resolución
SELECTIVIDAD ∝= K´1
=
V1 - V0
V1 2
PLATOS N = 16 ( W1 )
LC2010

91
Introducing the World’s New Best LCMS

LIQUID CHROMATOGRAPH MASS SPECTROMETER

LCMS-2020

92
 Principle of a Mass Spectrometer (MS)

Mass Spectrometer
Mixed sample injected
Column
Separated in a column
eluate
< ESI >
Introduced into MS in
order from component with
lowest retention
Mobile phase Proton (hydrogen ion)

Ion source Ion focusing Mass separator Detector

Proton added Proton removed unit
Atmospheric pressure Vacuum region
イオン化したい化合物の分子 region
Positive ion Negative ion
(protonated molecule) (deprotonated molecule)

• A high voltage is applied to the column eluate, and it is atomized by nitrogen gas.
• The charged droplets gradually become smaller, and ion evaporation occurs.
• As the ions pass through the mass separator, they are separated according to mass.
• In the detector, the quantity of ions is detected as a current value.

LAAN-E-LM003
93
 LC-MS: System Configuration and Ionization Method

Note: The LC detector

Controller may be removed if
it is not required.

Reservoir tray Solvent delivery

pump (gradient)
Mass
Degasser
Mixer spectrometer
Mobile
phase
Column
Mobile phase LC detector

Autosampler Autosampler Column oven Nitrogen gas

cleaning liquid Rotary generator
pump

ESI: Electrospray Ionization APCI: Atmospheric Pressure

This is an extremely soft ionization method, and is Chemical Ionization
suited to the ionization of high-polarity
compounds. This method is suited to the ionization of
medium- and low-polarity compounds.
Glass capillary
Charged droplets are formed.

Liquid sample
Nitrogen gas Heater
Sample molecule
Ion evaporation
±
High voltage ( 3 to 5 kV) Liquid sample
Solvent molecule
+: Positive ions are created. Nitrogen gas
-: Negative ions are created. High voltage (±3 to 5 kV)
Heater
+: Positive ions are created.
Corona needle -: Negative ions are created.
LAAN-E-LM003
94
Shimadzu LCMS-8030 and LCMS-8040

MASAS DE TRIPLE CUADRUPOLO

Key 8030/8040 Points

Technical Aspects which Sets Shimadzu Apart

Ultra Fast Scanning
Ultra Fast Sweeper
Ultra Fast Polarity Switching
Ease of Maintenance
Ionization Sources
Ion Optics
Fully Integrated and User Friendly Software
Comprehensive Quantitation Functions
Fast and Efficient MRM Optimization

SSI LCMS and Life Sciences 96

What is Triple Quadrupole?

Q1:Quadrupole

Ion Ion
Source Optics Detector

Single Quadrupole (SQ) Instrument

Q1:Quadrupole Q3:Quadrupole
Ion Ion
Source Optics Detector

Q2:Collision Cell
Triple Quadrupole (TQ) Instrument

9/17/2013 97
Collision cell

Collision Induced Dissociation

Product ions (CID): precursor ion is
Precursor ion accelerated into Q2 by the CE
and collides with the Argon gas
to produce fragmentation. Value
of the CE determines the degree
of fragmentation.

• The collision cell is constructed of an octapole ion guide

• Filled with argon gas; default gas pressure is 200 kPa
• Collision energy (CE) is voltage applied to the octapole
• The CE is a sample dependent parameter that is
optimized for each transition

9/17/2013 98
5 Scan Modes of Operation

Scan Mode Q1 Q2 Q3
Q1 Scan Scan Ion guide Ion guide
Q3 Scan Ion guide Ion guide Scan
Product ion SIM Fragment Scan
scan
Precursor ion Scan Fragment SIM
scan
Neutral loss Scan Fragment Scan
scan

9/17/2013 99