Desarrollo de práctica #4.

Extracción de DNA Genómico

Torres Reynoso Andrea Margarita
Asignatura: Técnicas Moleculares Licenciatura QFBT
Periodo 2021-2
Fecha de entrega: 6 de Septiembre del 2021
Docente: Dr. En C. Cornelio Martinez Sergio Francisco

Función de cada una de las sustancias vistas en el video de Extracción de DNA método
fenol cloroformo: https://www.youtube.com/watch?v=5tvw8AkECCA&t=223s.
Reactivo Descripción de su función

Lisozima (Sigma Aldrich) Enzima de lisis con actividad bacteriológica

contra las paredes celulares bacterianas
gramnegativas.

Dodecil sulfato de sodio (SDS) Solubilización de lípidos de la membrana celular.

Proteinasa k (ThermoFisher Scientific) Digestión de proteínas.

Fenol; Cloroformo; Solución de alcohol Separación de ADN de otros componentes

isoamilico (PCI) celulares.

Etanol Precipita ADN de la solución.

Tampón Tris-EDTA (TE) Solución tampón utilizada para almacenar ADN

purificado compuesto de Tris mM, EDTA 1 mM.

Evidencia del Simulador

Solución de lisis

enzima llamados proteinasa k, el

detergente rompe la membrana celular y
la envoltura nuclear, haciendo que las
células se abran y liberen su ADN.
El adn todavía está muy apretado
alrededor de proteínas llamadas histonas,
y la proteinasa K corta las histonas para
liberar el ADN.
La solución de lisis, contiene dos
importantes ingredientes: detergente y
Solución de concentración de sal.

La solución de concentración de sal hace que las proteínas y otros desechos celulares se
agrupen.

Alcohol Isopropilico.

Al invertir el tubo varias veces, se mezcla el alcohol isopropílico con la solución de ADN.
Debido a que el ADN no es soluble en alcohol isopropílico, sale de la disolución.

Evidencia de video #2: Reacción en Cadena de la polimerasa (PCR): Conceptos

Básicos.https://www.youtube.com/watch?v=mslMRgxbdOA&t=2s.

Reactivos Descripción de su función

Muestra de DNA Contiene el fragmento target que se va a amplificar.

Cloruro de magnesio Cofactor esencial de la polimerización.

DNA Polimerasa Cataliza la reaccion de polimerizacion de los desoxi

nucleicos a una hebra de DNA
 Primers (Iniciadores) Reconocen la secuencia (target). Primer forward y
reverse delimitaran la región de interés.

Desoxinucleótidos Trifosfato Son los ladrillos para la construcción de una nueva

(dNTPs) hebra de DNA. Su estructura es análoga a la de las
moléculas usadas en el proceso de replicación.

PCR Buffer Crea un ambiente óptimo para la actividad de la DNA

polimerasa

DMSO Coadyuvantes de la reacción.

Glicerol
Formamida
BSA

Temperatura No. Ciclos

Desnaturalización inicial 94°C -------------------

Desnaturalización +-94°C 30 Ciclos

Alineación +-62°C 30 Ciclos

Extensión +-75°C 30 Ciclos

Evidencia de video #3: COVID | La RUTA de la PCR: todo lo que necesitas saber de los
test de CORONAVIRUS. https://www.youtube.com/watch?v=rJDNNGpiX6g.

La prueba de reacción en cadena de polimerasa (PCR), fue desarrollada en los años 80 por
el bioquímico estadounidense Kary Mullis.

La técnica de PCR busca detectar srna abidal, el molde para una reacción de PCR, es RN,
nosotros lo tenemos que transformar a DNA porque es un paso intermedio, y luego se hace
el PCR,, que es como una fotocopiadora, es una técnica que amplifica, que copia muchas
veces el material genético de este virus, esta técnica es muy sensible. El test de antígeno lo
que busca es identificar proteínas de la nucleocápside del virus.