USO DEL MICROSCOPIO OPTICO EN BIOLOGIA CELULAR

Cervantes David, cantillo José Manuel, Santafe Nicolle.

Célula, diámetro, conteo, profundidad, cámara de Neubauer.

Esta práctica se realizó con el fin de saber el uso correcto del microscopio en el cual antes de
usar se verifico que estuviera limpio y en perfecto estado se analizaron varias muestras entre
ellas los hilos de diferentes colores para ver la profundidad de foco con diferentes objetivos, se
observó la inversión de la imagen por el microscopio compuesto para esto se utilizó la letra e, se
determinó el diámetro del campo visual con un pequeño cuadro de hoja milimetrada, se midió el
diámetro y se determinó el volumen de 10 células de epitelio bucal y de cebolla con sus núcleos,
por último se realizó el conteo de células de levadura en la cámara de Neubauer.

INTRODUCCION se usan diferentes tipos de microscopio

La biología celular estudia la unidad
fundamental de todos los seres vivos: la
célula, además analiza e investiga sus
estructuras internas y sus procesos
fisiológicos, se interesa por el desarrollo de
la vida a nivel celular como el crecimiento,
la especialización, los orgánulos que la
constituyen y las interacciones entre las
células y con el ambiente1. Logrando
entender una gran parte de su
funcionamiento para prevenir padecimiento
en los organismos vivos ya que son
observados desde su parte microbiológica,
los organismos pueden ser unicelulares o
multicelulares y la mayoría de las células no
son visibles a simple vista. Los biólogos
utilizamos herramientas derivadas de estas
disciplinas como la microscopia que es el
conjunto de métodos que se utilizan para
poder visualizar objetos muy pequeños que
están fuera del alcance de la resolución del
ojo humano2, utiliza instrumentos especiales
como la lupa y el microscopio siendo este el
más implementado ya que permiten
aumentar el tamaño de estructuras mínimas,
como el microscopio de luz, formado por la
combinación de dos o más lentes, podemos
encontrar el microscopio de campo claro y el
de campo oscuro, también se puede llegar a
la posibilidad de observar células vivas con
la ayuda del microscopio de contraste de
fase. Igualmente se aplican métodos y
técnicas que nos permiten resolver cada una
de las preguntas que nos hemos formulado.
CAMARA DE NEUBAUER: Es un
instrumento utilizado en la medicina y la
biología para realizar el recuento de esporas
y células en un medio líquido, que puede ser
un cultivo celular, sangre, orina, entre otros.
Esta cámara de recuento está adaptada al
microscopio de campo claro o al de
contraste de fase. Se trata de un portaobjeto
que tiene dos zonas ligeramente impresas en
cuyo fondo se ha marcado con la ayuda de
un diamante, se cubre la cámara con un
cubreobjetos que se adhiere por simple
tensión superficial

21 de marzo-2017 -Biología celular


OBJETIVOS
• Aprender a utilizar correctamente el
microscopio para así interpretar exactamente
lo que se ve con este instrumento.
• La determinación del diámetro del
campo visual para saber en cual objetivo se
debe usar para observar mejor la muestra y
determinar el diámetro de cada una de ellas.
• Conteo de células con la cámara de
Neubauer.
MATERIALES
Frasco gotero, papel de arroz, porta objetos,
cubre objetos, papel toalla, bajalengua,
cebolla, tijera, hilos de diferentes colores,
levadura, bisturí, lugol, eosina y azul de
metileno.
METODOLOGIA
Esta práctica de laboratorio, se dividió en
cuatro partes en las cuales se analizaron
diferentes muestras que permitieron mejorar
y poner en práctica el manejo adecuado del
microscopio. Inicialmente se identificando
la función de cada una de las partes que
componen el microscopio, luego se
estudiaron las muestras llevadas al
laboratorio.
Se cortaron hilos de tres colores diferentes,
se enfocaron para apreciar la estructura
tridimensional de estos hilos, también se
observó la profundidad de foco con
diferentes objetivos, con la letra “e” se
observó la inversión de la imagen por el
microscopio compuesto. Para la segunda
parte de la práctica se preparó una muestra
con un portaobjetos al cual se le agrego una
gota de agua, luego se colocó un cuadrado
de papel milimetrado y finalmente se
acomodó un cubreobjetos sobre la muestra,
se llevó a la platina y primero se enfocó en
4Xpara que una línea de papel milimetrado
quedara en el campo visual y se procedió a
los objetivos de 10X, 40X Y 100X y se
reportaron las medidas aproximadas del
diámetro.
En la tercera parte de la práctica se
prepararon dos muestras, en la primera
muestra se tomó la catàfila de la cebolla, se
colocó en el portaobjeto, al cual se le agrego
una gota de lugol se cubrió con el
cubreobjetos y se procedió a observar, para
la segunda muestra, con la ayuda de un
bajalengua se extrajo una mínima cantidad
del epitelio bucal y a continuación se le
agrego una gota de azul de metileno, ya que
este permite observar las células presentes
en un montaje gracias a su propiedad de
tinción, anteriormente se usó eosina pero
con esta no se logró teñir de forma correcta.
Finalmente Para cada muestra se realizó un
conteo de 10 células de cebolla con el
objetivo de 40X, 10 células del epitelio
bucal y un núcleo por cada célula con el
objetivo de 100X usando el aceite de
inmersión para este objetivo y se sacó un
promedio para lograr hallar sus medidas y
también se le hallo la desviación estándar .
Para la última parte de esta práctica se
realizó un conteo de células presentes en la
levadura, esta muestra fue diferente ya que
el montaje estaba presente en la cámara de
neubauer.
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 RESULTADOS Y DISCUSION 250

200

Diametro en µm
células diametro de 1 de
de diámetro celula(µm)
1
epitelio célula(µm) 150
2 200 100
2 200
50
3 130
2 200 0
2 2 3 2 4 3 3 6 6 3
4 100
3 130 N.˚ de celulas observadas en 0,4mm
3 130
6 60 grafica1. Células de epitelio bucal
6 60
Xcelulas de Diametro de 1celula
3 130
cebolla (µm)
X 134
SD 52,96 3 130
3 130
tabla1. Células de epitelio y
2 200
diámetro.
1 400
Xcelulas de 1 400
epitelio 1 400
2 200 1 400
2 200 2 200
3 130 1 400
2 200 1 400
4 100 X 306
3 130 SD 123,58
3 130
6 60
6 60
3 130
X 134
450
SD 52,96 400
350
Diametro en µm

300
250
200
150
100
50
0
3 3 2 1 1 1 1 2 1 1
N.˚ de celulas observadas en 0,4mm

grafica2. Células de cebolla

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 diam e tro de una ce lula de ce bolla
350
300
250
200
150
100
diametro de una celula de epitelio

160 50
140 0
1
120 celula de cebolla (valor promedio)
100
80
60
40 Grafica 4. Barra de error del promedio para células de
20 cebolla.
0
1 Al tomar el cuadrito recortado de la hoja de
celula de epitelio (valor promedio) papel milimetrado y posterior a la
observación hecha en el microscopio, los
grafica3. Barra de error del promedio para célula de
epitelio. diámetros de los campos visuales para cada
uno de los objetivos (4X, 10X, 40X) son los
siguientes:
4X: 5 mm
10X: 2 mm
40X: 0,2 mm
Con estos diámetros obtenidos se puede
inferir que a medida que cambiamos los
objetivos de forma creciente, se puede
observar menor cantidad de campo visual.

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CONCLUSIÓN:
En biología celular es importante conocer y poner en práctica el buen uso del
microscopio, ya que esto nos permite ser eficientes a la hora de observar y analizar
una muestra. En esta práctica no solamente es importante observar cuidadosamente
la muestra o la imagen sino saber interpretar lo que estamos viendo, esto se pudo
concretar gracias a la práctica que se hizo con los hilos (donde se pudo ver las
diferentes profundidades que se pueden observar con los diferentes objetivos), y a la
determinación del diámetro del campo visual ya que es necesario conocer el número
de células presentes en un área o volumen dado.

CUESTIONARIO:

1. ¿Cuál es la diferencia entre un microscopio simple y uno compuesto?

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 R// La diferencia es que el microscopio simple es un solo lente de
distintos espesores y diámetros, biconvexas o planoconvexas, que nos
permiten aumentar la muestra, comúnmente conocidas como lupa y
microscopio compuesto es la combinación de dos sistemas de lentes
convergentes, uno próximo al ojo del observador conocido como ocular
y el otro próximo a la muestra llamado objetivo4.

2. ¿Qué importancia tiene el uso del microscopio en la biología celular?

R// La importancia del microscopio permitió observar estructuras nunca
antes vistas por el hombre, las células, que no son perceptibles a
simple vista. También el
microscopio constituyó un gran aporte al estudio de la biología
celular, ya que permitió conocer la tridimensionalidad de las
estructuras celulares así como la distribución espacial de los
componentes moleculares en su interior.

3. ¿Por qué es necesario utilizar aceite de inmersión al utilizar el

objetivo del mismo nombre?
R// El aceite de inmersión es necesario porque habilita a los
usuarios a enfocar objetos muy pequeños que no se resolvería
usando objetivos secos. Esto se debe a que el tamaño del lente del
objetivo de inmersión es muy pequeño y hace que los rayos de luz
no lleguen eficientemente a la muestra, entonces el aceite de
inmersión hace que no se desvíen los rayos de luz y lleguen mejor a
la muestra y hace que la resolución sea mejor.

4. ¿Qué significa resolución, poder de resolución y amplificación,

asimismo de que factores depende cada uno de ellos? Presenta tu
respuesta a manera de tabla.
R//

Definición Factores de que dependen

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 La resolución de un
microscopio es la mínima
distancia a la que tienen que
estar dos puntos para que en
Resolución la imagen se perciban
separados uno del otro.
Poder de Resolución Es la medida de la cantidad
de detalle que ofrece la
imagen formada por el
objetivo.
Amplificación La amplificación de un
microscopio es el producto
de número de aumentos del
objetivo por los del ocular.
Aumentos útiles: x1000 a
x2000.
5. Realiza una tabla comparativa de todos los tipos de microscopios incluyendo: fuente de
iluminación, condensador, longitud de onda, tipo de tinción, resolución, amplificación, tipo de
lentes, etc.
La resolución depende de la
longitud de onda de la fuente
luminosa, el espesor del
espécimen, la calidad de la
fijación y la
intensidad de la coloración.
El poder de resolución depende
de tres factores: (1) el tamaño de
la primera lente de aumento
llamada lente objetivo, (2) la
longitud de onda de la luz
empleada en la iluminación del
espécimen, y (3) el índice de
refracción del material que se
encuentre entre la lente objetivo y
el espécimen.
La amplificación depende del
tamaño de la primera lente del
objetivo llamado objetivo, entre
menor sea el lente del objetivo
mayor es la amplificación.
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Nombre del microscopio Características
Es utilizado comúnmente,
en los laboratorios, este
puede ser monocular,
binocular con dos tubos de
observación para poder
Microscopio Compuesto observan con ambos ojos
la muestra, mediante un
haz de luz, los ilumina
para una mejor
5
Microscopio de apreciación .
Posee un condensador que
Campo no permite que la luz
Oscuro. penetre directamente al
objeto sino de una manera
oblicua, utiliza un haz de
luz intensa en forma de
cono hueco.
Microscopio Los objetos son
iluminados por una
de Fluorescencia. determinada longitud de
onda, la imagen es el
resultado de una radiación
Microscopio de Barrido. Este microscopio utiliza
un haz de electrones, tiene
una gran profundidad de
campo; que permite que se
enfoque a la vez una gran
parte de la muestra,
también posee 50000
aumentos, permite verlo
invisible adherido a de rayos X determina la
diferentes sustancias.
Funciones
Se utiliza para la
observación ampliada de
las imágenes de el objeto
de muestra y se utiliza
para la observación de
objetos transparentes o
cortados en láminas tan
finas que se transparentan.
Se utiliza para la
observación demuestras
metalográficas para la
observación de los
detalles en superficies con
alta reflectancia.
Se utiliza para detectar
sustancias con auto
fluorescencia como la
vitamina A, o sustancias
marcadas con
Es utilizado en biología
celular y también en la
actividad pericial para dar
eficacia y certeza al
análisis de indicios de
naturaleza orgánica y
acoplado a un analizador
por difracción de energía
composición química

demuestras inorgánicas
como de los explosivos,
vidrio, pintura, disparos
Microscopio Posee una de
Se arma de fuego,para
utiliza etc. la
estereoscopio visión observación de objetos
tridimensional para la que requieren poco
observación de objetos, aumento óptico, es
tiene dos objetivos uno de utilizado en botánica,
2X y otro de 40X que es mineralogía, y para la
el aumento total. disección de animales

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 Microscopio Quirúrgico Es un instrumento óptico Se utiliza en la
que consta de un realización de
conjunto de lentes, de tal intervenciones quirúrgicas
manera que permite del sistema nervioso y
trabajar con 6 aumentos. pequeñas estructuras.
Viene dado por un
objetivo, que suele ser de
zoom de distancia focal.
Permite la visualización
de diferentes estructuras
anatómicas, proporciona
una mayor iluminación y
magnificación de las
estructuras.

ANEXOS DE RESULTADOS
COORDENADAS DE LA LETRA (e) en el carro del microscopio:
36 en eje Y – 136en X.
COORDENADAS DE LOS HILOS en el carro del microscopio:
28 en Y – 142 en Y.

Tabla 4. Comparación de los imagen1. Anexo de muestra de célula de cebolla.

microscopios

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imagen2. Anexo de observación invertida (letra e).

imagen3. Anexo de observación de hilos.

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BIBLIOGRAFIA
-‘Importancia de la biología celular en los organismos, el estudio y análisis para entender el
comportamiento y desarrollos de los seres vivos en su entorno natural, Av. Instituto Politécnico
Nacional 2508, Col. San Pedro Zacatenco, departamento de biología celular’ (En línea)
http://www.cinvestav.mx/Departamentos/BiologiaCelular.aspx .
-‘La microscopia reúne múltiples métodos para la visualización de microorganismos, CIENCIAS
BIOLÓGICAS y educación para la salud’. (En línea)- http://hnncbiol.blogspot.com
-‘articulo explicativo de la técnica y uso de la cámara de neubauer’ (En línea)-
http://celeromics.com/es/resources/docs/Articles/Conteo-Camara-Neubauer.pdf
-‘Microscopio simple y compuesto: diferencias, Escrito por Michaelyn Erickson, Traducido por Eliana
Caruso’( En línea) http://www.ehowenespanol.com/microscopio-simple- compuesto-diferencias-
lista_49089/
-‘Tipos de microscopios : compuesto, óptico, digital, fluorescente, microscopio, electrónico, estéreo
d(En línea) http://www.tiposdemicroscopio.com/images/css/under- microscope.css
-‘Uso del microscopio óptico en biología celular, Microscopia: practica ’Laboratorio de Biología Celular,
profesor Roger H. Valle Molinares.

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