Primera Unidad Fundamentos Bioquímicos, Enzimología y Biología Molecular de las membranas biológicas

PRACTICA N° 01b
- NATURALEZA QUÍMICA DE LAS ENZIMAS Y ACTIVIDAD ENZIMÁTICA - -
INTRODUCCION:
Las enzimas son proteínas relativamente frágiles con tendencia a sufrir desnaturalización e inactivación, por efecto de diversos
agentes físicos y químicos como: temperatura, ácidos, álcalis fuertes, sales pesadas, pH, etc.

Las enzimas se encuentran en pequeñas concentraciones en los materiales biológicos, resultando complicada su individualización o
purificación. Para poder verificar directamente las propiedades comunes de la naturaleza proteica que las caracterizan,
experimentalmente se pueden utilizar las propiedades de catalizadores específicos que tienen las enzimas, como indicador de las
alteraciones que pueden sufrir éstas cuando son sometidas a la acción de diferentes agentes físicos y químicos.

La finalidad de la presente práctica, es evidenciar la característica proteica de la enzima que al exponerse a agentes físicos y
químicos varían su comportamiento y actividad catalítica.

PROCEDIMIENTO:
1) Preparar: el primer sistema denominado: SISTEMA A. Rotular previamente los tubos y colocar en cada uno lo que se indica en
el siguiente cuadro:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (en ml)
I II III IV V VI
Amilasa al 1% 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
NaOH 1N - 2.4 - - - -
HCl 3N - - 2.4 - - -
Ácido Tricloro acético 20% - - - 2.4 - -
Sulfato de Cobre al 20% - - - - 2.4 -
Buffer fosfato 0.1M / pH 6.6 2.4 - - - - 2.4
a. Observar el aspecto y color producido.
b. Dejar los 5 primeros tubos del sistema en reposo por 10 minutos a la temperatura ambiente.
c. Colocar el tubo VI en un baño de agua hirviendo por 10 minutos.

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2) Durante este lapso, preparar el segundo sistema llamado SISTEMA B:

TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (en ml)
I II III IV V VI
Almidón al 1.0% en solución acuosa 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
Buffer fosfato 0.1 M / pH 6.6 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
NaCl 0.15 M 1.4 1.4 1.4 1.4 1.4 1.4
Agua Destilada 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
Pre incubar por dos minutos a 37 °C
Agregar enzima tratada, del sistema (A) 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6
Dejar en incubación a 37 °C por 20 minutos

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3) A continuación, armar el siguiente sistema:

TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (en ml)
I II III IV V VI
Acido Clorhídrico 0.05N 5 5 5 5 5 5
Del sistema (B), extraer y agregar 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Solución yodada 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

4) Observar el color producido.

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ACTIVIDADES A DESARROLLAR POR EL ALUMNO:

Explique bioquímicamente lo encontrado en los tubos del resultado final producido.

CUESTIONARIO:
1) Explique los cambios de color producidos en los diversos sistemas.
2) Explique la teoría de la acción molecular de las enzimas sobre sus respectivos sustratos.
3) Identifique las sales pesadas empleadas en la práctica y explique su mecanismo de acción.
4) Identifique los ácidos y bases fuertes empleadas en la práctica y explique su mecanismo de acción.
5) ¿Cómo actúa la temperatura sobre la estructura proteica de la enzima?

REFERENCIAS:
1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.
2) UCV. Protocolo de seguridad en laboratorios. Trujillo 2018.