UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA

CARRERA DE INCENIERIA QUIMICA

ASIGNATURA:
LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA

TEMA:
ENSAYO DE BIURET

INFORME: IV SEMESTRE: IV
PARALELO: “1” PARCIAL: l

ESTUDIANTE:
SANTANA ALBORNOZ JOSELYN BEATRIZ

DOCENTE:

Ing. WILFRIDO JIMMY TERAN VERZOLA

PERIODO:

2017 – 2018 CII

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Existe un número de métodos de análisis de proteínas disponible para científicos. Uno
de los más comunes en el ensayo de Proteína de Biuret.

El nombre del ensayo es algo confuso debido a que los ensayos para proteínas usan este
método no usan Biuret.
Biuret es un pequeño compuesto que se forma cuando la urea es calentada que causa
que dos moléculas de urea se unen. Las moléculas de urea se fusionan en una manera
que producen grupos aminos (-NH) en el centro de la molécula que se une a iones de
cobre en un pH básico.
Los complejos de cobre resultantes de la interacción producen un color fuerte que puede
ser medido con un espectofometro.
Proteínas también contiene grupos amidas. Cuando un grupo amino y un grupo
carboxílico se unen forman un enlace peptídico, el grupo amino (-NH2) se convierte en
un grupo amida (-NH).
Por lo tanto, las proteínas se unen con iones de cobre en un pH básico.
Porque esta reacción fue primero observado con el Biuret es también llamado la
reacción de Biuret, y cuando se usa para medir la concentración de proteína, es llamado
el ensayo de proteína de Biuret , además este ensayo va a combinar muestras de proteína
con el reactivo de Biuret que contienen iones de cobre en una solución básica. Los iones
de cobre se unirán con los grupos amida en la proteína para crear un color azul que será
medido usando un espectofometro. La cantidad de color azul que forma es directamente
proporcional a la cantidad de proteína en las muestras.

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Métodos para la cuantificación de proteínas: ventajas e inconvenientes

Determinar la concentración de proteínas en una muestra biológica es una técnica de

rutina básica cuando se aborda un esquema de purificación de una proteína concreta,
cuando se quiere conocer la actividad específica de una preparación enzimática, para el
diagnóstico de enfermedades, así como para otros muchos propósitos.

Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos

métodos se basan en: a) la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el
UV, b) para la formación de derivados químicos, o c) la capacidad que tienen las
proteínas de unir ciertos colorantes. En la Tabla I se recogen los métodos más usados,
así como sus respectivas sensibilidades. Cada uno de estos métodos tiene sus ventajas e
inconvenientes.

Tabla I. Principales métodos para Rango de sensibilidad (μg) Coeficiente de extinción o

la cuantificación de proteínas y Cálculo de la concentración
sus rangos de sensibilidad
Método
Métodos de Absorción 100-3000 ε280 = 1 mL/mg cm
A280 3-100 ε205 = 31 mL/mg cm
A205 100-3000
25-700 Proteína (mg/mL) = (1.55A280
A280 - A260 5-180 – 0.76A260)
A235 - A280 2-45
Proteína (mg/mL) = (A235 –
A224 - A236 A280)/2.51
A215 - A225 Proteína (mg/mL) = (A224 –
A236)/0.6
Proteína (μg/mL) = 144(A215 –
A225)
Métodos Derivados Colorimétricos
Biuret 1000-10000 ε545 = 0.06 mL/mg cm
Lowry 25-100 a 500 nm Usar curva estándar
2-30 a 660 nm
1-2 a 750 nm
Bradford 1-15 ε595 = 81 mL/mg cm
BCA 0.5- 10 Usar curva estándar
Métodos Derivados Fluorimétricos
o-ftalaldehido 1-5 λexcitación a 340 nm Usar curva estándar
λemisión a 475 nm

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Principales métodos para la cuantificación de proteínas, principales
ventaja e inconvenientes

Método de Biuret
Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el Cu 2+ y los grupos NH de los
enlaces peptídicos en medio básico. 1Cu2+ se acompleja con 4 NH. La intensidad de
coloración es directamente proporcional a la cantidad de proteínas (enlaces peptídicos)
y la reacción es bastante específica, de manera que pocas sustancias interfieren. La
sensibilidad del método es muy baja y sólo se recomienda para la cuantificación de
proteínas en preparados muy concentrados (por ejemplo, en suero).
 PROTOCOLO A REALIZAR
Método de Biuret

Añadir 1 ml del reactivo de Biuret a los tubos estándar y muestras problemas preparadas
como se indica en la Tabla III. Dejar a temperatura ambiente y leer la Absorbancia a
545 nm frente al blanco. El color es estable 1 hora.

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 Tabla III. Protocolo tipo para la
cuantificación de proteínas por el RESULTADOS
método de Biuret Reactivos
Estándar R. Grupo Grupo Grupo Grupo Grupo
Tubo H2O
(20 Biur 1 2 3 4 5
s
mg/ml) et
Blanc 0 0 0 0 0
0 μl 100 μl 1 ml
o
1 25 μl 75 μl 1 ml 0,994 1,0310 0,368 0,855 0,374

2 50 μl 50 μl 1 ml 0,973 0,934 1,041 0,929 1,068

3 75 μl 25 μl 1 ml 0,986 1,061 0,972 0,978 0,991

4 100 μl 0 μl 1 ml 0,913 0,86 0,890 0,848 0,370

Promedio
de
Muestras de proteína
absorbanci
a

M1 0,9
(leche 100 μl 0 μl 1 ml 1,022 0,996 0,440 0,981 1,061
)
M2 2,5584
(huev 100 μl 0 μl 1 ml 2,944 2,886 1,60 2,402 2,960
o)

CONVERSION DE CONCENTRACIONES

1 ml 20 mg
25 μl x x =0,5 mg
1000 μl 1ml

1ml 20 mg
50 μl x x =1mg
1000 μl 1 ml

1ml 20 mg
75 μl x x =1,5mg
1000 μl 1 ml

1ml 20 mg
100 μl x x =2mg
1000 μl 1 ml

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CUADRO PARA ELEGIR LA MEJOR GRAFICA

Concentracion de Grupo
Tubos Grupo 1 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5
Biuret 2

Blanco 0 mg 0 0 0 0 0

1 0,5 mg 0,994 1,0310 0,368 0,855 0,374

2 1 mg 0,973 0,934 1,041 0,929 1,068

3 1,5 mg 0,986 1,061 0,972 0,978 0,991

4 2 mg 0,913 0,86 0,890 0,848 0,370

Promedio de absorbancia 0,7732 0,7772 0,6542 0,7222 0,5606

Grupo 4
1

f(x) = 0.06 x + 0.8

0.95 R² = 0.99
ABSORBANCIA

0.9
Grupo 4
Linear (Grupo 4)
0.85

0.8

0.75
0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
CONCENTRACION
y=
y=0,0615x + 0,7977
R² = 0,9864
y (absorbancia )−0,7977
x(concentracion en g)=
0,0615

1,002−0,7977
x conc g
= =3,3219 mg
( huevo
grupo 1 ) 0,0615

2,944−0,7977
x conc g
= =3 4 ,8991 mg
( leche
grupo 1 ) 0,0615

0,996−0,7977
x conc g
= =3 , 2243 mg
( huevo
grupo 2 ) 0,0615

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 1,002−0,7977
x conc g
= =3 3 , 9560 mg
( leche )grupo 2 0,0615

0,440−0,7977
x conc g
= =−5,8162 mg
( huevo )grupo 3 0,0615

1,60−0,7977
x conc g
= =13 ,0,455 mg
( leche )grupo 3 0,0615

0,981−0,7977
x conc g
= =2,9804 mg
( huevo )grupo 4 0,0615

2,402−0,7977
x conc g
= =26,0861 mg
( leche )grupo 4 0,0615

1,061−0,7977
x conc g
= =4,2813 mg
( huevo )grupo 5 0,0615

2,960−0,7977
x conc g
= =3 5,1593mg
( leche )grupo 5 0,0615

CONCLUSIONES

 La absorbancia depende de la cantidad de concentración variando la cantidad de

concentración.
 La longitud y la absorbancia son proporcionales hasta alcanzar el punto máximo
de ahí empieza a descender.

RECOMENDACIONES

 Lavar bien los tubos con agua destilada para que todos los tubos tengan el
mismo color al momento de colocar el Biuret
 Mezclar bien la proteína con el disolvente para tener una lectura correcta, una
muestra tenemos los resultados del grupo 3.