25/8/2021 Biorreactores y fermentadores: herramientas poderosas para resolver los cuellos de botella del cultivo
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LIBRO BLANCO No. 21 I Julio de 2019
Biorreactores y fermentadores—
Potentes herramientas para resolver
Cuellos de botella de cultivo
Ulrike Rasche
Eppendorf AG, Centro de bioprocesos, Juelich, Alemania
Contacto: solbach.d@eppendorf.com
Resumen ejecutivo
Los matraces de agitación, las placas de cultivo celular y los matraces en T son losreproducibilidad. En este libro blanco explicamos la clave
primeros vasos que nos vienen a la mente, cuando pensamos en
sistemas de cultivo para el cultivo de eucariotas y procariotas
células en el laboratorio. Los biorreactores y fermentadores son otro
alternativa a considerar si necesitamos mayores cantidades de células,
aumento de la eficiencia del cultivo, o mejorado
Introducción
Muchas aplicaciones están bien atendidas por el cultivo de
bacterias o levadura en matraces de agitación y células en platos o
Matraces T. Los biorreactores y fermentadores, sin embargo, mejoran
productividad y ahorre trabajo, tiempo y espacio de laboratorio para
científicos, que
> necesitan grandes cantidades de células, microbios o de los productos
ellos expresan
> quisiera mejorar la reproducibilidad del crecimiento, el
la formación del producto o la calidad del producto
> quisiera comparar sistemáticamente diferentes crecimientos
condiciones
> quisiera aumentar la eficiencia del cultivo.
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características de los biorreactores de tanque agitado y que
los organismos se cultivan típicamente en ellos. Usando específicos
ejemplos, demostramos cómo los biorreactores y
Los fermentadores pueden ayudar a resolver los cuellos de botella del cultivo.
¿Qué son biorreactores y fermentadores?
En términos generales, los biorreactores y fermentadores son cultivos
sistemas para producir células u organismos. Son usados
en diversas aplicaciones, incluida la investigación básica y
desarrollo y fabricación de productos biofarmacéuticos,
alimentos y aditivos alimentarios, productos químicos y otros productos. A
Se puede cultivar una amplia gama de tipos de células y organismos en
biorreactores y fermentadores, incluidas las células (como mamíferos
líneas celulares, células de insectos y células madre), microorganismos (como
bacterias, levaduras y hongos), así como células vegetales y algas.
Biorreactor y fermentador son dos palabras para básicamente
la misma cosa. Los científicos que cultivan bacterias, levaduras o
los hongos suelen utilizar el término fermentador. El término biorreactor
a menudo se relaciona con el cultivo de células de mamíferos, pero es
también de uso genérico. Si hablamos de biorreactores en este
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libro blanco, por lo general nos referimos a sistemas para el cultivo de
microbios o células de mamíferos.
Biorreactores de tanque agitado
Aunque existen muchos tipos de biorreactores, nos centraremos en
biorreactores de tanque agitado. El nombre es descriptivo con precisión.
El cultivo se lleva a cabo en el tanque del biorreactor, a menudo llamado
recipiente, y el cultivo se mezcla agitando (en lugar de agitando)
ing, por ejemplo).
Los biorreactores de tanque agitado vienen en diferentes tamaños, para
cultivos de unos pocos mililitros a miles de litros, y son
hecho de varios materiales, generalmente vidrio, plástico o acero inoxidable
acero. Los componentes básicos y el funcionamiento del tanque agitado.
Los biorreactores son siempre los mismos.
Un sistema de biorreactor de tanque agitado consta de varias partes
(Figura 1):
> Un recipiente, que se llena con medio en el que las células se
cultivado
> Una placa de cabeza, para cerrar el recipiente
> Componentes, dentro o unidos al recipiente o la cabeza
placa, para medir y ajustar las condiciones de cultivo, tales
como líneas de alimentación y sensores
> Un sistema de control que comprende componentes externos utilizados para
ajustar las condiciones de cultivo (por ejemplo bombas) y
software de control
Creando condiciones óptimas de cultivo
Al igual que las incubadoras y los agitadores, los biorreactores permiten
creación de condiciones ambientales óptimas para el crecimiento
de células o microbios. Sin embargo, difieren en cómo se
establecido.
Motor
Placa de cabeza
Embarcación
Sensor
Impulso
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Mezcla de cultivos
En lugar de mezclar agitando, en un biorreactor el cultivo
se agita con un impulsor. El impulsor está montado en el
eje impulsor, que a su vez está conectado a un motor. en un
biorreactor, no solo son bacterias, levaduras y células en suspensión
cultivos constantemente mezclados, pero también cultivos de células adherentes
unido a una matriz de crecimiento.
Templado
Para obtener la temperatura de cultivo adecuada, un biorreactor
no necesita colocarse dentro de un agitador o incubadora, pero
puede permanecer en la mesa de laboratorio. La temperatura de la cultura
el medio se controla continuamente con una temperatura
sensor. Para regularlo, el recipiente se coloca en un termopozo,
envuelto con una manta térmica o tiene una chaqueta de agua.
El enfriamiento también es posible.
Establecer condiciones aeróbicas o anaeróbicas
En un agitador o incubadora, el oxígeno se transfiere desde el
aire circundante al medio de cultivo. Este proceso
es más eficaz en matraces agitados que en cultivos estáticos,
porque la agitación aumenta la exposición de la superficie del líquido. En
biorreactores, generalmente aire u oxígeno puro (que vienen, por ejemplo,
de un cilindro de aire comprimido) se introduce en el cultivo.
Con el uso de rociadores, la interfaz gas / líquido se puede
aumentado y el suministro de oxígeno maximizado. El oxigeno es
importante para el crecimiento de la cultura y la cantidad de oxígeno
disuelto en el medio (concentración de oxígeno disuelto,
DO) se mide continuamente con un sensor de OD.
Para mantener el OD en el punto de ajuste, a menudo se configura una cascada de OD en
y ejecutado por el software de control de bioprocesos. Figura 2
Figura 1: Tanque agitado
sistema de biorreactor que consta de
Bioproceso de la estación de control de bioprocesos,
software de control recipiente y bioproceso
software de control. los
Bioproceso BioFlo ® 120
Bomba se muestra la estación de control.
Bioproceso
estación de control
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muestra un ejemplo de una cascada DO típica. Si DO cae control de pH

por debajo del punto de ajuste, primero la velocidad de agitación se Para regular el pH de los medios de cultivo celular tamponados con carbonato,
aumentado hasta 1200 rpm para aumentar la transferencia de oxígeno desde Los cultivos celulares en matraces o placas se colocan generalmente en CO2.
el aire circundante. Si esto no es suficiente para mantener DO en incubadoras. En los biorreactores, el principio es el mismo; CO 2 es
punto de ajuste, el caudal de gas aumenta hasta tres introducido en el cultivo a partir de un cilindro de gas comprimido.
litros por minuto (SLPM). Como medida final, el oxígeno En biorreactores, el pH del medio se mide continuamente.
La concentración en la mezcla de gases aumenta, pasando de usando un sensor de pH y se agrega CO 2 según sea necesario. Este es
gasificación con aire (que contiene 21% de oxígeno) hacia la formación de gases diferente de la situación en una incubadora de CO 2 , en la que el
con oxígeno puro. Este es solo un ejemplo. El mínimo Concentración de CO 2 en la atmósfera interna de la incubadora
y valores máximos de agitación, caudal de gas y oxígeno se mide y controla, en lugar del pH medio.
la concentración se puede optimizar en función del organismo Los biorreactores también difieren en que a menudo se agrega una solución básica
y necesidades del proceso. para compensar la acidificación durante el crecimiento del cultivo.
Las condiciones anaeróbicas se pueden establecer gaseando con N 2 Para cultivos microbianos en biorreactores, básicos y ácidos
u otros gases anaeróbicos. Las soluciones se utilizan comúnmente para ajustar el pH. Este es
diferente de los cultivos en matraces agitados, donde el pH del cultivo
generalmente no se controla.
Agit S-Flo S-O2
RPM SLPM %
1200 7.5 100 Control de parámetros en el setpoint
En biorreactores, diferentes componentes y el control
965 6.0 80
El software juega en conjunto para controlar el pH, la temperatura y
oxígeno disuelto en el punto de ajuste deseado. Los parametros
se miden constantemente usando pH, temperatura y
730 4.5 60
HACER sensores. Los sensores transmiten la información al
software de control de bioprocesos que regula la adición de
495 3,0 40
CO 2 y agentes de pH líquido, la actividad de los dispositivos de templado,
agitación, y el gaseado con aire y / o O 2 .
260 1,5 20

25 0.0 0
0 20 40 60 80 100
Fuera %

Figura 2: Cascada de OD. Consulte el texto para obtener más detalles.

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Una ejecución de bioproceso típica software de control. Además, los científicos a menudo toman cultura
Para mantener las culturas, los científicos suelen mantenerlas en muestras para analizar, por ejemplo, la biomasa y la
sistemas de cultivo dentro de incubadoras. Los biorreactores suelen ser concentración de metabolitos. Eventualmente, los investigadores alimentan
utilizado para un experimento específico o ejecución de producción, que el cultivo agregando soluciones nutritivas.

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puede durar horas,
y aplicación. días o semanas,
Una corrida segúntípicamente
de bioproceso el organismo
comprende el Los
> Encultivos
la fasesuelen pasaralpor
de rezago, cuatro
inicio del fases de crecimiento.
cultivo, el
siguientes pasos (Figura 3). los organismos no se multiplican o se multiplican solo lentamente,
1. Precultivo: se inocula el medio en el biorreactor probablemente porque necesitan adaptarse a la nueva cultura
con una precultura. A menudo, el precultivo se cultiva en un condiciones.
agitador o incubadora. A veces, los biorreactores más pequeños son > En la fase de crecimiento exponencial, como su nombre lo dice, el
utilizado para cultivar precultivos para la inoculación de grandes la cultura crece exponencialmente.
biorreactores. > En la fase estacionaria el crecimiento se detiene, porque el
2. Preparación del biorreactor: El biorreactor se prepara en concentración de nutrientes, concentración de oxígeno,
paralelo a la preparación del inóculo. Los preparativos incluyen el acumulación de subproductos u otros factores se convierten
esterilización de biorreactores, líneas de alimentación y sensores; medio limitante del crecimiento.
adición al biorreactor; la conexión del biorreactor > A la fase de crecimiento estacionario le sigue la muerte
con la estación de control de bioprocesos; y la definición de fase, en la que la densidad de células viables disminuye.
puntos de ajuste de los parámetros de proceso en el control de bioprocesos 5. Cosecha de cultivos: los científicos suelen poner fin al bioproceso.
software. ejecutar y cosechar el cultivo cuando entra en el estacionario
3. Inoculación: una vez preparado el biorreactor, el medio fase de crecimiento.
está inoculado. 6. Procesamiento posterior: el caldo de cultivo se
4. Período de cultivo: durante el período de cultivo, procesado.
agitación, pH, temperatura y OD son típicamente 7. Limpieza del biorreactor: El biorreactor se esteriliza para
monitoreado y controlado en tiempo real a través del bioproceso inactivar los residuos de cultivo y limpiarlos.

Precultivo Preparación del biorreactor

> Los precultivos utilizados para inocular el biorreactor son > Esterilización de biorreactores y sensores
a menudo cultivado en agitadores o incubadoras > Conexión del biorreactor a la estación de control de bioprocesos
> Adición media
> Introducción de puntos de ajuste en software de control de bioprocesos

Inoculación

Periodo de cultivo
> Agitación de la cultura
> Control de los parámetros del proceso en el punto de ajuste
> Alimentación de cultivos, si es necesario
> Muestreo, si es necesario

Cosecha de cultivo

Limpieza del biorreactor Procesamiento posterior del cultivo

> Esterilización de biorreactores y sensores
> Limpieza de todos los componentes

Figura 3: Serie de eventos en una ejecución de bioproceso típica.

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Cómo ayudan los biorreactores y fermentadores

resolver los cuellos de botella del cultivo
Los biorreactores pueden ahorrar trabajo, tiempo y espacio de laboratorio de
científicos que necesitan grandes cantidades de células, microbios o
de los productos que expresan. Además puede mejorar
reproducibilidad de crecimiento, formación de producto y producto
calidad y aumentar la eficiencia del cultivo.
Cultivar grandes cantidades de células y microbios.
A veces, los investigadores requieren grandes cantidades de células o de
el producto que producen. Grandes cantidades de un recombinante
La proteína expresada puede ser necesaria, por ejemplo, para
caracterización bioquímica o estructural, para uso continuo
Logre densidades celulares más altas
En algún momento, el crecimiento de células y microbios en matraces y
platos alcanza una fase estacionaria. La concentración celular
no aumenta más. En biorreactores, los cultivos alcanzan un
fase estacionaria también (a menos que realice una
bioproceso), pero se pueden obtener densidades de cultivo mucho mayores
logrado.
Un ejemplo: cuando nuestros ingenieros de aplicaciones cultivaron
E. coli en un medio complejo en un matraz de agitación, el cultivo
entró en la fase de crecimiento estacionario durante la noche y típicamente
tenía una densidad óptica a 600 nm (DO 600 ) de alrededor de 12. Cuando

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como herramientas
Pequeñas moléculasdeproducidas
investigación o para evaluar
por microbios aplicaciones
y destinadas a su médicas.
uso.
como componentes químicos, combustibles o aditivos alimentarios y para piensos
puede ser necesario en pequeñas cantidades en la fase de I + D, pero
Por lo general, se necesitan grandes cantidades para sus operaciones comerciales.
usar. Se necesitan grandes cantidades de células para
aplicaciones de investigación de fármacos y terapia celular.
Manejar menos recipientes
Producir células en un par de matraces en T o preparar algunos
litros de un cultivo de bacterias o levadura en matraces de agitación son
factible. Pero si se necesitan docenas o incluso cientos de frascos
para producir la cantidad necesaria de biomasa, espacio de laboratorio
se vuelve limitante y la cantidad de trabajo manual explota.
Los biorreactores de tanque agitado son escalables, lo que significa que permiten
aumentando el tamaño del recipiente de cultivo en lugar del
número de embarcaciones, de modo que los requisitos de trabajo y espacio
mantenerse manejable.
Como ejemplo: en consumibles de cultivo celular convencionales,
Células CHO alcanzan típicamente una densidad de 2-4 x 10 5 células por
cm² [1]. Esto corresponde a 3,5 - 7 x 10 7 células por T-175
matraz. En biorreactores podemos alcanzar fácilmente densidades celulares de hasta lote de medio. En un proceso de alimentación por lotes, el cultivo se alimenta a
a 1 x 107 células por ml [2, 3]. Esto corresponde a 3 x 10 9
células por biorreactor con un volumen de trabajo de 250 mL. En
En este ejemplo, un biorreactor comparativamente pequeño reemplaza 250
Matraces T-175.
Para cultivos microbianos en matraces agitados, la situación es
similar. Normalmente, matraces Erlenmeyer con capacidades de hasta 5 L
son usados. Por el contrario, los biorreactores con volúmenes de trabajo de
hay cientos y miles de litros disponibles.
La disponibilidad de embarcaciones más grandes no es la única ventaja.
En biorreactores, se pueden lograr densidades celulares más altas,
a veces haciendo un aumento del volumen de trabajo
innecesario.
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controlado de forma independiente en cada biorreactor. Esto ahorra tiempo
y asegura la máxima reproducibilidad entre corridas. Si por
ejemplo, le gustaría comparar la expresión de proteínas en
ocho temperaturas diferentes, en un sistema de biorreactor paralelo
puede realizar los experimentos en paralelo. Esto es más
conveniente que usar un agitador convencional o un solo
biorreactor, donde necesitaría realizar uno
experimentar tras otro o necesitaría varios agitadores o
biorreactores.
La posibilidad de comparar múltiples condiciones de proceso.
en paralelo, hacer biorreactores adecuados para sistemáticamente
Analizar la influencia de varios parámetros en la cultura.
resultado (p. ej., crecimiento de cultivos, formación de productos, subproductos
formación). De esta forma, los investigadores pueden obtener una amplia
comprensión del proceso, que a su vez permite la optimización de
condiciones de cultivo para lograr los mejores resultados posibles.
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cultivaron
La cultura E. coli enhabía
también un biorreactor,
entrado en después de 12 horas el
la fase estacionaria, pero alcanzó un
DO 600 de 240 [2].
¿Cómo se las arreglaron? El uso de biorreactores nos permitió
ingenieros para reducir algunos de los factores que limitan el crecimiento
en cultivos de células microbianas: mejoraron el suministro de
nutrientes y oxígeno, así como el control de temperatura [2].
Los cultivos aeróbicos de rápido crecimiento consumen mucho oxígeno.
Si, a una densidad celular alta, el cultivo necesita más oxígeno
que se transfiere al medio, el crecimiento se ve afectado. En
biorreactores, se puede suministrar aire u oxígeno puro mediante gasificación,
que es más eficaz que agitar o agitar solo.
Los cultivos en crecimiento producen calor. Para mantener la temperatura
en el punto de ajuste, los cultivos bacterianos de alta densidad a menudo no necesitan
para ser calentado más, pero enfriado. Biorreactores
facilitan el enfriamiento del cultivo, en contraste con los agitadores convencionales.
Si los nutrientes se vuelven limitantes, el crecimiento se detiene. Culturas en
Los biorreactores pueden alimentarse de forma sencilla y automática añadiendo
alimentar soluciones utilizando las bombas integradas del sistema. En
bioprocesamiento distinguimos diferentes modos de proceso: En
un proceso por lotes el cultivo crece en el inicialmente suministrado
mantener constante la concentración de nutrientes. En un continuo
proceso el medio de cultivo se intercambia continuamente.
Esto es sólo un ejemplo. Depende de la línea celular
cepa microbiana, otros parámetros pueden ser críticos para
el crecimiento de cultivos y / o la formación de productos, por ejemplo
pH medio, concentraciones de metabolitos, potencial redox y
Fuerzas mecánicas. Los biorreactores son herramientas valiosas para optimizar
condiciones de cultivo.
Comparando las condiciones de crecimiento
Hay disponibles sistemas de bioprocesos paralelos para controlar más
de un recipiente (Figura 4). A menudo tienen poco trabajo
volúmenes que ayudan a ahorrar recursos. Sistemas paralelos
tienen la ventaja de que los parámetros de cultivo pueden ser
parámetros en el punto de ajuste. El software también guarda continuamente
valores de proceso, lo que permite analizarlos posteriormente.
El seguimiento, el control y el registro de los valores del proceso ayudan
aumentando la reproducibilidad del crecimiento de la cultura, producto
formación, características del producto y más.
Tomemos un ejemplo sencillo. Tú expresas recombinantemente
una proteína. Supongamos que la proteína tiene la tendencia
para agregar y la agregación depende en gran medida de la
temperatura. Supongamos además que encontró el óptimo
perfil de temperatura para la fase de crecimiento y expresión para
equilibrar el crecimiento, la expresión de proteínas y la agregación. usted
puede emplear ese perfil de temperatura en un agitador; sin embargo,
es propenso a errores. Temperatura no deseada e inadvertida
Las fluctuaciones pueden deberse a la apertura repetida del
agitador por otros usuarios que agregan o quitan matraces. en un
biorreactor la temperatura del medio de cultivo es
monitoreado y ajustado continuamente según sea necesario. Como resultado,
el perfil de temperatura se mantiene de forma más fiable, lo que
a resultados más reproducibles. Además, la temperatura
se registran los datos del sensor. Eventualmente, las desviaciones de temperatura
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Figura 4: El sistema de mini biorreactores DASbox permite
funcionamiento de hasta 24 biorreactores.
Incrementando la reproducibilidad
En biorreactores, parámetros de proceso como pH, temperatura y
El oxígeno disuelto se puede medir constantemente mediante sensores.
Los sensores transmiten la información al bioproceso
software de control, que regula la acción de los actuadores, como
bombas, dispositivos de templado y dispositivos de gaseado, para mantener el
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Hogar dulce hogar - Un biorreactor para cada
organismo
Células eucariotas, como líneas celulares de mamíferos, células madre, insectos
células y células vegetales, y organismos microbianos como bacterias,
levaduras, hongos y algas pueden cultivarse en biorreactores.
Sin embargo, las condiciones óptimas de crecimiento difieren y, por lo tanto,
diferenciar el diseño óptimo del biorreactor, así como los puntos de ajuste
de agitación, temperatura, OD, pH y otros parámetros. Están
¿Estás cultivando células o microorganismos de mamíferos? Esta
es la primera pregunta importante al configurar un proceso,
e influirá en algunas decisiones básicas con respecto a ciertos
accesorios para biorreactores. Dependiendo de la línea celular o cepa,
los parámetros deberán ajustarse con precisión.
Accesorios para biorreactores
Aunque generalizado, gran parte de lo siguiente se aplica a
muchas cepas y células microbianas:
Muchas de las cepas microbianas que son habitualmente
utilizado en aplicaciones de bioprocesos industriales (por ejemplo, E. coli , C.
glutamicum y S. cerevisiae , P. pastoris ) crecen mucho más rápido
que las líneas celulares de mamíferos comúnmente utilizadas (por ejemplo, CHO y comúnmente utilizado para cultivos de células de mamíferos.
HEK293). Por ejemplo, la tasa de crecimiento de E. coli está en el
rango de 1 / pocas horas o menos; la tasa de crecimiento de una célula CHO
la línea está más cerca de 1 / día. Esto tiene importantes implicaciones para la
diseño del sistema de bioprocesos.
Demanda de oxigeno
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se detectan, lo que permite identificar la fuente de
error.
Y la situación puede ser mucho más compleja. además
la temperatura, los parámetros del proceso, incluido el medio
pH, OD, concentraciones de metabolitos, fuerzas mecánicas y
La composición del medio puede influir en el crecimiento del cultivo, el producto
rendimiento, patrones de glicosilación de proteínas, formación de subproductos,
y más. Los parámetros del proceso influyen en la viabilidad celular,
comportamiento y diferenciación. Esto es especialmente importante si
la celda en sí es el producto de interés, por ejemplo, si las celdas
se utilizan para aplicaciones de terapia celular.
En un bioproceso, la temperatura, el pH y el OD se
supervisado y controlado. Control avanzado de bioprocesos
El software permite la integración de sensores adicionales, para
ejemplo para monitorear biomasa y metabolitos, así como la
Configuración de estrategias de control de procesos a medida.
Mezcla de cultivos
Además de la formación de gases, la agitación es un parámetro crítico para mantener
HACER en el punto de ajuste. Los impulsores tipo Rushton mezclan la cultura
más eficiente que los impulsores marinos o de palas inclinadas, pero
también provocan mayores fuerzas de cizallamiento. Por lo tanto, los primeros son
Impulsor tipo Rushton Impulsor de palas inclinadas
Figura 5: Dos tipos de impulsores. Los impulsores de tipo Rushton son
comúnmente utilizado para bioprocesos microbianos. Hoja inclinada
los impulsores se utilizan comúnmente para cultivos de células de mamíferos.
comúnmente utilizado para cultivos microbianos, mientras que los últimos son
Esterilidad
Debido a su crecimiento más lento, el riesgo de contaminación en
Los cultivos de células de mamíferos son mucho más altos que en cultivos microbianos.
Procesos. El material y la conexión de las líneas de alimentación son
dos factores a considerar para asegurar la esterilidad. Minimizar
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La demanda de oxígeno de microbios aeróbicos de rápido crecimiento
las culturas es alta. El sistema de bioprocesos debe ser capaz
de altos índices de flujo de gas para suministrar suficiente aire y / u oxígeno
para mantener el OD en el punto de ajuste. Para maximizar el oxígeno disuelto
concentración en cultivos microbianos aire / oxígeno son usualmente
introducido en el medio de cultivo a través de sumergido
gasificación, ya sea a través de un tubo de inmersión con un extremo abierto o un
rociador poroso. Los poros del dispositivo de gasificación determinan
el tamaño y el número de las burbujas de gas y, por lo tanto, el
Superficie disponible para el intercambio de gases con el medio. los
la demanda de oxígeno de los cultivos de células de mamíferos es menor. A menudo agitación, y las estrategias para controlarlos difieren entre
no es necesario maximizar la interfaz gas / medio
a través del burbujeo, pero el suministro de aire / oxígeno al biorreactor
el espacio de cabeza es suficiente. Una ventaja importante del espacio de cabeza
gasear es evitar las burbujas de aire que causan la fuerza de cizallamiento
que puede dañar las células sensibles de los mamíferos.
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Cultivo de células adherentes en tanque agitado
biorreactores
Muchos tipos de células de mamíferos necesitan adherirse a un crecimiento.
superficie para sobrevivir y multiplicarse. Expansión de células adherentes
en biorreactores de tanque agitado suena contradictorio al principio,
pero es factible si se proporciona una matriz de adjuntos. Las celdas
adjuntar a la matriz, que se mantiene en suspensión por suave
agitación.
Varias matrices son de uso común.
Microportadores
Células de suspensión Células adherentes cultivadas en matriz de crecimiento.
en biorreactor de tanque agitado en biorreactor de tanque agitado
Figura 6: Representación esquemática de células en suspensión y
células adherentes cultivadas en biorreactores de tanque agitado.
Los microportadores son partículas esféricas que proporcionan un crecimiento
superficie para células adherentes. Los microportadores suelen tener un
diámetro de 100 - 300 µm. Pueden estar hechos de diferentes
materiales, como vidrio, DEAE-Dextran, poliestireno y
alginato. También hay versiones revestidas, cuyo material de núcleo
está cubierto de péptidos, proteínas o mezclas de proteínas
como fibronectina, colágeno o Matrigel ® . El material del núcleo
de microportadores no recubiertos no está funcionalizado por el
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los riesgos de contaminación en los bioprocesos de cultivos celulares, muchos
Los científicos prefieren las líneas de alimentación hechas de material esterilizable en autoclave.
(en lugar de líneas de alimentación que deben limpiarse químicamente)
y que se puede conectar de forma segura mediante soldadura [5].
Puntos de ajuste
El párrafo anterior proporciona algunas
recomendaciones sobre los accesorios del biorreactor para
Aplicaciones de cultivos microbianos y celulares. Pero este no es el
toda la historia. Puntos de ajuste adecuados para temperatura, pH, OD,
organismos, líneas celulares y cepas, e incluso pueden ser diferentes
para una sola cepa utilizada en diferentes aplicaciones. Puntos de ajuste
y las estrategias de control deben optimizarse caso por caso
base. Los métodos descritos en la literatura pueden servir como punto de partida
punto para una mayor optimización [5, 6]
tripsina.
Las células Vero y las células madre mesenquimales son solo dos
ejemplos de células adherentes, que se han cultivado en
biorreactores de tanque agitado sobre microportadores [7, 8].
Discos Fibra-Cel ®
Al igual que los microportadores, los discos Fibra-Cel brindan un soporte de crecimiento
para células adherentes. Los discos de Fibra-Cel están hechos de una malla
de poliéster y polipropileno, que es electrostáticamente
pretratado para apoyar la unión celular. En contraste con muchos
tipos de microportadores, Fibra-Cel proporciona un tridimensional
superficie de crecimiento con una alta relación superficie-volumen, y
protege las células de las fuerzas de cizallamiento dañinas, aumentando así
la biomasa total que se puede mantener en el biorreactor.
Los discos de Fibra-Cel tienen un diámetro de 6 mm. Proporcionan un
matriz de crecimiento en biorreactores de lecho empacado, y en principio
También se puede utilizar flotando libremente en matraces de agitación o desechables.
pantalón. Fibra-Cel se utiliza principalmente para cultivo celular.
procesos para la producción de productos secretados, como
proteínas y virus recombinantes. Han sido utilizados para
ejemplo para el cultivo de células Vero [7].
Agregados solo de células
En lugar de crecer en una matriz, las células pueden crecer en un tanque agitado.
biorreactores como agregados solo de células. Esto ha sido descrito,
por ejemplo, para células madre pluripotentes inducidas por humanos y
células diferenciadas de las mismas [9, 10], y ciertas células tumorales
líneas [11]. Para expansión como agregados solo de células, biorreactor
los cultivos generalmente se inoculan con una suspensión unicelular.
La expansión celular conduce a la formación y crecimiento de
agregados. La unión de las células entre sí es
influenciado por la velocidad de agitación y el tipo de impulsor, entre
otros factores. Esferoides de células derivadas de células madre, neuroesferas
por ejemplo, puede alcanzar un grado notable de maduración
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fabricante, pero puede, sin embargo, unir proteínas una vez que el
el portador está en contacto con el medio de cultivo que contiene suero.
Para iniciar un proceso de cultivo celular en microportadores,
normalmente se añaden al medio de cultivo a una densidad
recomendado por el fabricante y posteriormente el
El biorreactor se inocula con una suspensión de una sola célula. Para
soporte de la unión celular al microportador, el cultivo es
sólo periódicamente agitado durante las primeras horas después
inoculación. Una vez que las células se han adherido a los portadores
la cultura se agita continuamente para mantener a los portadores en
suspensión. Para el procesamiento posterior, los microportadores
pueden recolectarse y separarse las células, por ejemplo, usando
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Conclusión
Los biorreactores de tanque agitado simplifican el cultivo de grandes
Cantidades de células en comparación con el cultivo convencional.
sistemas que utilizan agitadores e incubadoras. Control de bioprocesos
El software facilita la monitorización y el control precisos de
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y son sistemas modelo prometedores en investigación básica y
aplicaciones de detección de drogas [12]. La ausencia de un sintético
La matriz puede simplificar el procesamiento posterior, por ejemplo
para aplicaciones de terapia celular.
Resumen
Las ventajas del cultivo celular en biorreactores de tanque agitado,
como la escalabilidad simplificada y el control de proceso mejorado son
no limitado a células en suspensión. Proporcionando una matriz de crecimiento
o cultivando como agregados solo de células, las células adherentes pueden ser
también se expandió en biorreactores de tanque agitado.
parámetros críticos del proceso. Cultivando células y microbios
en biorreactores, por lo tanto, puede salvar el trabajo científico,
tiempo y espacio de laboratorio y mejorar la reproducibilidad y
eficiencia del crecimiento celular y formación de productos.
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25/8/2021 Biorreactores y fermentadores: herramientas poderosas para resolver los cuellos de botella del cultivo

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Información sobre pedidos

Descripción N º de pedido.
DASbox Mini sistema de biorreactor, para aplicaciones microbianas, máx. 25 sL / h de gasificación, sistema de 4 pliegues
® 76DX04MB
DASbox Mini Bioreactor System, para aplicaciones de cultivo celular, máx. 5 sL / h de gasificación, sistema de 4 pliegues
® 76DX04CC
BioFlo 120, avanzado
® por favor pregunte
Fibra-Cel discos, 250 g
® M1292-9988

Para obtener más información, visite www.eppendorf.com/bioprocess

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Sobre Eppendorf

Eppendorf es una empresa líder en ciencias de la vida que desarrolla y vende instrumentos, consumibles y servicios para líquidos,
manipulación de muestras y células en laboratorios de todo el mundo. Su gama de productos incluye pipetas y sistemas de pipeteo automatizados,
dispensadores, centrifugadoras, mezcladores, espectrómetros y equipos de amplificación de ADN, así como congeladores de temperatura ultrabaja,
fermentadores, biorreactores, incubadoras de CO 2 , agitadores y sistemas de manipulación celular. Consumibles asociados como puntas de pipeta,
Los tubos de ensayo, las placas de microtitulación y los biorreactores desechables complementan los instrumentos para obtener soluciones de flujo de trabajo de la más alta calidad.

Eppendorf se fundó en Hamburgo, Alemania, en 1945 y cuenta con más de 3100 empleados en todo el mundo. La compañía tiene
subsidiarias en 26 países y está representada en todos los demás mercados por distribuidores.

Su distribuidor local: www.eppendorf.com/contact

Eppendorf AG · Barkhausenweg 1 · 22339 Hamburgo · Alemania
eppendorf@eppendorf.com · www.eppendorf.com

www.eppendorf.com

Corning ® , Cellbind ® , y Matrigel ® son marcas registradas de Corning Inc., EE.UU. registrado. Fibra-Cel ® es una marca registrada propiedad de Minerales de California, Inc., EE.UU. y con licencia
a Eppendorf, Inc., EE. UU. Eppendorf ® , Eppendorf Brand Design y BioBLU ® son marcas comerciales registradas de Eppendorf AG, Alemania. DASGIP ® y DASbox ® están registrados
marcas comerciales de DASGIP Information and Process Technology GmbH, Alemania. BioFlo ® es una marca registrada de Eppendorf, Inc., EE.UU.. Todos los derechos reservados, incluidos los gráficos.
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