Laboratorio de Microbiología Ambiental- UPTC

Grupo de lab:1-0 Docente: SINDY PAOLA BUITRAGO PUENTES

Nombre y código: Luis Gabriel Gómez Becerra, 201712217 y Karen Lorena Rodríguez Sepúlveda,
201710905
NOTA: Cada estudiante o pareja debe entregar el taller en PDF al correo institucional del docente con
el siguiente nombre: “taller 3. Tinciones- Nombres integrantes” Máx. 8 días después de la clase.

TALLER 3. LABORATORIO MORFOLOGÍA BACTERIANA

INTRODUCCIÓN
Características Microscópicas
Las bacterias son microorganismos procariotas extremadamente versátiles dada la gran variedad de
formas y diversidad fisiológica que poseen. Son células muy pequeñas, su tamaño ocila entre 0,2 y 5
μm, aunque existen excepciones como la especie Thiomargarita namibiensis y Epulopiscium fishelsoni
que llegan a alcanzar los 700- 600 μm, respectivamente. Dentro de las formas más frecuentes de estos
microorganismos están las formas en filamentos, esferas (cocos), barras (bacilos), sacacorchos (vibrios)
y hélices (espirilos) (Madigan et al., 2015). Dentro de los grupos principales se pueden distinguir
diferentes agrupaciones (Figura 1)

Figura 1. Agrupaciones bacterianas tomada de https://microbiologyinfo.com/different-size-shape-and-arrangement-

ofbacterial-cells/

Características Macroscópicas De Las Colonias

La evaluación de las características macroscópicas de las colonias habitualmente se lleva a cabo por
medio de observación visual del crecimiento en la superficie de las placas de agar. El tamaño, forma y
aspecto de las colonias obtenidas por esta técnica suele ser bastante constante y precisa para cada género
y/o especie bacteriana, hecho que se puede utilizar como característica diferencial. Para ello debemos
considerar los siguientes puntos a la hora de diferenciar colonias bacterianas: tamaño, forma, superficie,
consistencia, transparencia y coloración (figura 2).

Figura 2. Principales características macroscópicas de las colonias bacterianas

tomada de https://microbiologyinfo.com/different-size-shape-and-arrangement-of-bacterial-cells/

Morfología Colonial.
Las características que determinan la morfología colonial son:
1. Color de las colonias.
2. Forma: puntiforme, circular, irregular, filamentosa
3. Elevación: Plana, convexa, Umbilicada, mamelonada, papilar, otra.
4. Borde: Entero, ondulado o dentado, lobulado, filamentoso, rizado, otro
5. Superficie: lisa, rugosa, granular
6. Aspecto: húmedo, seco, brillante, opaca
7. Consistencia: duras, blanda, viscosas, mucosas, secas, cremosas
8. Tamaño de las colonias:
• Pequeño: colonias puntiformes con aproximadamente 0,5 mm de
diámetro o inferiores.
• Mediano: de 1 a 2 mm de diámetro.  Grande: de 4 a 6 mm de
diámetro.
Coloración de las colonias.
El tipo de color en las colonias; es muy diverso y esto se debe a la elaboración de algún tipo de
pigmento, a la formación de alguna sustancia por parte de la bacteria o por la utilización de algún
sustrato del medio que acidifique o alcalinice a éste de forma que, ante la presencia de indicadores de pH
que están en el medio, cambia de color, hecho que reverla la utilización de ese sustrato por parte de la
bacteria durante la tipificación bioquímica (Madigan et al., 2015).
Todas las imágenes fueron tomadas de http://www.bacteriainphotos.com/ y http://microbe-canvas.com/

METODOLOGÍA
1. Con base en las fotografías de arriba haga las descripción macroscópica y microscópica
correspondiente a cada especie. En las imágenes se muestra las colonias de S. aureus, E.coli y P.
aeruginosa cultivadas en agar triptona de soya, Bacillus licheniformes cultivado en agar sangre y
Mycobacterium tuberculosis en agar Middlebrook; así como el resultado de sus respectivas
tinciones. Con base en la información que suministran las imágenes diligencie la tabla 1.
Colonia 1 Colonia 2 Colonia 3 Colonia 4 Colonia 5
Morfología Staphylococcus Escherichia Pseudomona Bacillus M.
Macroscópica aureus coli aeruginosa licheniformis tuberculosi
s
Color Amarilla Blanca Blanca- Blanca Blanca
transparente
Forma Circular Circular Circular Irregular Filamentosa
Elevación Convexa Convexa Umbonada Elevada Umbonada
Aspecto Brillante- Brillante- Aguada- Membranoso Cristalozo
Humedo Humedo Humedo Centro-seco,
borde-humedo
Borde Entero Entero Ondulado Rizado Rizado
Consistencia Cremosa-Blanda Cremosa Gelatinosa Seca-Dura Seca
Morfología
Microscópica
Tinción Gram + X
Gram - X X X X
Otra
Forma Cocos X
Bacilos X X X
Espirilo X
Otra
Agrupaciones Staphylococcus Bacilos Bacilos Cocobacilos -
 Tabla 1. Tomada y modificada de Forero L. (2015) UPTC.

2. La tinción es una herramienta fundamental para realizar la caracterización microscópica de las

bacterias. Esta técnica se basa en la afinidad de diferentes colorantes por las propiedades
físicoquímicas de las estructuras bacterianas especialmente las membranas celulares. Con base en
lo visto en clase diligencie la siguiente tabla.
Tinción Tipo de tinción* Colorantes / Función Fundamento Utilidad

CP Cristal violeta En la técnica de la Permite identificar distintos

M Yodo tinción de Gram se tipos de bacterias según se
D Alcohol utilizan dos colorantes. coloree su superficie, como
Uno de carácter gram positivas y gram
Gram Diferencial
primario, como es el negativas aportando
CC Safranina cristal violeta, y otro de información muy útil para
contraste, como la orientar al tratamiento
safranina. antibiótico
CP Carbolfucsina La tinción de Ziehl-
Usada para la
M Calor Neelsen es una técnica
identificación de
D Acido alcohólico de tinción diferencial
microorganismos
ZN Diferencial para las bacterias que no
patógenos, como M.
se tiñen con la tinción de
CC Azul de metileno tuberculosis o el género M.
gram, como las bacterias
leprae
ácidoalcoholresistentes.
Rojo Congo o La cápsula es una
CP Se utiliza en los
Tinta China estructura fuerte de
laboratorios clínicos para
M Calor naturaleza polisacárida
ayudar al diagnóstico de
D Alcohol (Gil. M, s.f).
ciertas patologías
Los colorantes tiñen el
originadas por
fondo de la preparación
microorganismos
Capsula Especial mientras que la cápsula
capsulados.
queda incolora, si el
Safranina o También se utiliza en
CC microorganismo no
Cristal Violeta laboratorios de docencia
posee cápsula, no será
para la demostración de
distinguible ya que todo
esta estructura morfológica.
se teñirá del mismo
(Gil. M, s.f)
color.
Endosporas Especial CP Verde malaquita Las endosporas son La coloración de esporas
M Calor formas impermeables a brinda una información
D Agua desionizada los colorantes. Requiere muy valiosa y útil para la
CC Safranina calor para permitir la identificación del patógeno,
penetración de los pues la presencia de esta,
colorantes su forma, ubicación dentro
 del bacilo y la capacidad de
deformar la célula
vegetativa o no, son datos
que pueden orientar sobre
CP: Colorante principal. M: Mordiente. D: Decolorante. CC: Colorante de contraste (para contra tinción).
Tipo de tinción*: Simple-diferencial-especial, Fundamento: usar frases cortas y concretas. Citar correctamente
la bibliografía consultada

3. Desde el punto de vista ambiental, cuál de las especies mencionadas en el punto 1 resulta ser de
importancia ambiental. Redacte un párrafo corto (< 200 palabras) donde resalte los beneficios,
importancia y/o problemas asociadas a la especie seleccionada. Las fuentes revisadas deben ser
artículos publicados en revistas indexadas. Cite adecuadamente en APA Ed6, Chicago.

La Escherichia coli es una bacteria que se encuentra en el sistema digestivo de los animales y de
los seres humanos, al ser parte de la flora intestinal, se puede utilizar como indicador para detectar
y medir la contaminación fecal en la evaluación de la seguridad de los alimentos y el agua
(Franco. P., et al, 2013), a esto se debe su importancia. Por lo general, son inofensivas, sin
embargo, algunas E. coli son patógenas y pueden contaminar los alimentos, el agua y el
medioambiente; esta bacteria se transmite al hombre principalmente por el consumo de alimentos
contaminados, como productos de carne picada cruda o poco cocida, leche cruda, y hortalizas y
semillas germinadas crudas contaminadas (Rodríguez. G, 2002), llegando a generar brotes de
diarrea, síndrome urémico hemolítico, colitis hemorrágica e incluso la muerte, principalmente en
niños. Sin embargo, es importante mencionar que la bacteria E. coli ha sido usada en la
producción de antibióticos, vacunas y muchas otras terapias, siendo una bacteria modelo de uso en
la biotecnología. Además, fue uno de los primeros organismos de los que se obtuvo la secuencia
de su código genético, profundizando la comprensión del funcionamiento del ADN. (Souza. V., et
al, 2001)

4. Haga un mapa, diagrama, esquema que describa y clasifique los diferentes tipos de siembra, sus
principales características y usos.
 TIPOS DE
SIEMBRA
Estría simple Estría en t Cuatro cuadrantes Estrías múltiples
Por Permite aislar
agotamiento o colonias discretas Se toma un asa Se hace una división Se hace una división de la caja en Se hacen varias
por estrías (separadas) para esterilizada previamente, en la caja, se hace una 4, se usa para aislar colonias. estrías (5, 7)
Método observar sus se toma la muestra y se estría en 3 cuadrantes, Generalmente se hace una primera dependiendo de
cualitativo características realiza la estría. Sirve en el ultimo la idea es estría en el 1 cuadrante y no qué tan diluida
para confirmar que el tener colonias aisladas. flamea el asa, se espera que en el 4 este la muestra.
cultivo este puro. Se cuadrante se separen las colonias.
usan para ver el Evalúa características bioquímicas
comportamiento de la y diferencia entre especies.

Se necesita una placa Las colonias en la

En placa Permiten enumerar o En la caja se agrega superficie serán grandes,
desocupada (No se
vertida contar unidades 1ml de muestra, se redondas y se visualizarán
necesita medio solido
formadoras de agrega la cantidad de claramente. Ciertas
Método preparado
SIEMBR cuantitativo
colonias.
previamente)
medio líquido. colonias pequeñas se
verán sumergidas en el
A EN
PLACA
En donde la dilución
Se puede realizar con Se toma 1ml de la Se toma 1ml de
es baja se tienen más
Por dilución muestras de suelo o muestra y se pasa a muestra y se siembra Se busca enumerar o
microorganismos y
agua. Se toma cierta tubo con 10ml de por placa vertida en hacer recuentos de
más concentración de
cantidad y se diluyen medio, cada vez se las placas de Petri. colonias.
colonias.
en un medio. diluye más la muestra

Utilizado para Se necesita una placa Con un asa de vidrio se Se observará el

Por difusión o
diferenciar cepas de de agar sólido hace la siembra. Se lleva a la crecimiento de
extensión
una sola especie, o preparado, Difundir toda la incubadora, a 37°C colonias en la
trabajando bacterias normalmente se muestra logrando por 24 horas superficie del medio
Método modificadas. agregan 0.1ml sobre absorber el medio en el de manera uniforme
cuantitativo
 Sirve para sembrar Se utiliza un asa en Se observa el
Por estrías con
bacterias y observar aro, se toma una crecimiento. Sirve para
medio sólido
un comportamiento muestra y se hace una pruebas bioquímicas,
inclinado
frente a una sustancia. estría en el bisel del observando también si
tubo. Se lleva a hay cambio de color

SIEMBR Se usa un asa recta, se Se introduce en el Es un medio semisólido.

Por picadura flamea previamente y
A EN se pone en el medio
medio de cultivo, se Si la bacteria crece
incuba y se observa desde el centro hacia los
tubos donde está la bacteria. movilidad de las extremos, tiene
bacterias movilidad, tiene
Realizar
pruebas Es una siembra mixta,
bioquímicas, Por picadura útil para realizar
preservar y estrías pruebas bioquímicas
cultivo por más (mixta) como las del citrato y
prueba TSI

Se tiene un tubo con Se toma la muestra de

medio líquido, el asa microorganismo
En medio Se lleva a incubar.
en aro ya que permite pasándolo al tubo con
líquido
tomar una gota que medio liquido nuevo, se
queda dentro del aro. agita para liberar la
Bibliografía / infografía

Madigan, M.T., Martinko J., Bender, K.S., Buckley, D.H. & D. Stahl (2015). Brock. Biología de los
microorganismos. Ed 14. Editorial Pearson Education, S.A. Madrid, España. 1099 p.
Forero, L. (2015). Manual fundamentos y técnicas básicas en Microbiología. Editorial
UPTC. http://www.bacteriainphotos.com/ http://microbe-canvas.com/

Bibliografía consultada por el estudiante

Franco. P., Ramírez. L., Orozco. M. & López. L. (2013). Determinación de Escherichia coli e
identificación del serotipo O157:H7 en carne de cerdo comercializada en los principales supermercados
de la ciudad de Cartagena. Revista lasallista de investigación, 10 (1), 91-100.

Rodríguez. G. (2002). Principales características y diagnóstico de los grupos patógenos de Escherichia

coli. Salud pública de México, 44 (5).

Souza. V., Castillo. A., Rocha. M., Sandner. L., Silva. C. & Equiarte. L. (2001). Ecología evolutiva de
Escherichia coli. INCI, 26 (10).

Rivera. A., Cháves. E., Rendón. G. & Giono. S. (2006). Viabilidad de Escherichia coli en presencia de
diferentes contaminantes. Rev Peru Med Exp Salud Publica, 23 (2).

E. coli. (2018). Organización Mundial de la Salúd. Obtenido de: https://www.who.int/es/news-room/fact-

sheets/detail/e-coli

Mundasad. S. (2011). E. coli: ¿bacteria amiga o enemiga? BBC. Obtenido de:

https://www.bbc.com/mundo/noticias/2011/06/110604_ecoli_buena_o_mala_sao#:~:text=coli%20han
%20sido%20modificadas%20para,de%20genes%20de%20prote%C3%ADnas%20espec%C3%ADficas.

Gil. M. (s.f). Tinción de cápsula: fundamento y técnicas. LIFEDER. Obtenido de:

https://www.lifeder.com/tincion-de-capsula/

Gil. M. (s.f). Tinción de esporas: fundamento, técnicas y usos. LIFEDER. Obtenido de:
https://www.lifeder.com/tincion-de-esporas/#:~:text=La%20tinci%C3%B3n%20de%20esporas%20es,a
%20una%20forma%20de%20supervivencia.