PIGMENTOS BILIARES:HIPERBILIRRUBINEMIAS

EXPERIMENTO 1

DETERMINACION DE LA BILIRRUBINA DIRECTA E INDIRECTA EN EL SUERO

(Método: Malloy Evelyn.)

Procedimiento

1.- En 4 tubos de prueba rotularlos como I, II, III y IV, medir lo siguiente:

| I II III IV

Suero diluido (1/10) 2,0 2,0 2,0 2,0

Agua destilada 2,5 2,5 --- ---

Metanol --- --- 2,5 2,5

Reactivo de Erhlich 0,5 --- 0,5 ---

Reactivo blanco --- 0,5 --- 0,5

 CALCULOS

 Solución del Estándar (0.004 mg/ml)

0.004mg ____ 1mL

x ____ 2.5mL

x= 0.01mg

 Factor de calibración

Fc = [Std] / Abs = 0.01/0.224 =0.045

 Muestra: Suero diluido 1:10

 1mL ____ 10mL

x ____ 2mL

x= 0.2mL de muestra real

 Factor porcentual

0.045Fc ____ 0.2mL de muestra

x ____ 100mL

x= 22.5mg%

Bl Std MB MI

Abs bruta 0.067 0.199 0.690 0.320

Abs neta ___ 0.132 0.623 0.253

Expresión de los resultados

1.- Estimar el factor de calibración porcentual

Absorbancia del Estándar : .0.224

Concentración del Estándar : 0.01mg (2.5ml)

Factor de calibración : 0.045

Factor de calibración porcentual : 22.5

2.- Completar la siguiente tabla:

 ABSORBANCIAS CONC. BILIRRUBINAS

I II III IV BT BD BI
Suero Normal 0.023 0.016 0.065 0.028 0.83mg/dl 4.20mg/dl 3.37mg/dl

Suero A 0.201 0.048 0.234 0.056 4mg/dl 3.44mg/dl 0.56mg/dl

Suero B 0.052 0.034 0.430 0.046 8.64mg/dl 0.4mg/dl 8.24mg/dl

Suero C 0.194 0.058 0.292 0.052 0.54mg/dl 3.06mg/dl 2.34mg/dl

 SUERO NORMAL

 BILIRRUBINA DIRECTA

Abs (T1 – Abs T2) x factor porcentual

0.203 – 0.016 x 22.5

4.20k,, mg/dl

 BILIRRUBINA TOTAL
Abs (T3 – Abs T4) x factor porcentual

0.065 - 0.028 x 22.5

0.83mg/dl

 BILIRRUBINA INDIRECTA
(BT)- (BD)

4.20mg/dl – 0.83mg/dl

3.37mg/dl

 SUERO A
  BILIRRUBINA DIRECTA

Abs (T1 – Abs T2) x factor porcentual

0.201 – 0.048 x 22.5

3.44 mg/dl

 BILIRRUBINA TOTAL
Abs (T3 – Abs T4) x factor porcentual

0.234 - 0.056 x 22.5

4mg/dl

 BILIRRUBINA INDIRECTA
(BT)- (BD)

4mg/dl – 3.44mg/dl

0.56mg/dl

 SUERO B

 BILIRRUBINA DIRECTA

Abs (T1 – Abs T2) x factor porcentual

0.052– 0.034 x 22.5

0.4 mg/dl

 BILIRRUBINA TOTAL
Abs (T3 – Abs T4) x factor porcentual

0.430 - 0.046 x 22.5

8.64mg/dl

 BILIRRUBINA INDIRECTA
(BT)- (BD)

8.64m/dl – 0.4mg/dl

8.24 mg/dl
  SUERO C

 BILIRRUBINA DIRECTA

Abs (T1 – Abs T2) x factor porcentual

0.194– 0.058 x 22.5

3.06 mg/dl

 BILIRRUBINA TOTAL
Abs (T3 – Abs T4) x factor porcentual

1.292 - 0.052 x 22.5

5.4 mg/dl

 BILIRRUBINA INDIRECTA
(BT)- (BD)

5.4mg/dl – 3.06mg/dl

2.34 mg/dl

VALORES NORMALES:

Bilirrubina total: 0.4 – 1.0 mg %

Bilirrubina Directa 0.2 – 0.4 mg %

Bilirrubina Indirecta 0.2 – 0.6 mg %

3.- Completar la siguiente tabla indicando si los valores de la concentración de

bilirrubina directa (BD) y de la bilirrubina indirecta (BI), están aumentados (A),

normales (N) o disminuidos (D).

Bilirrubina Bilirrubina Hiperbilirrubinemia

directa (BD) Indirecta (BI) (a predominio)
MUESTRA A 3.44mg/dl 0.56 mg/dl Posthepatica obstructiva
MUESTRA B 0.4mg/dl 8.24 mg/dl Prehepatica hemoliticos
MUESTRA C 3.06mg/dl 2.34 mg/dl Hepatica daño anivel de higado
EXPERIMENTO 2

IDENTIFICACIÓN DE PIGMENTOS BILIARES EN LA ORINA (tira reactiva )

Las reacciones falsas positivas se deben a pigmentos no usuales en

orina (p. ej. los metabolitos de fenazopiridina de color amarillo-

naranja, indicán y metab olitos de la medicación Lodine (etodolac) ).

Los falsos negativos pueden deberse a muestras mal conservadas ya

que la bilirrubina es fotosensible y sufre un proceso

de fotooxidación a biliverdina cuando es expuesta a la luz, o por

hidrólisis del glucurónido que produce bilirrubina libre ya que esta

última es menos reactiva.

INTERROGANTES

1.- Qué Contiene el reactivo de Erhlich

 2g dimetilaminobenzaldehido en HCL al 20% para demostrar la presencia de

urobilina en orina.

 También se utilizan otros alcoholes como el 1 propanol

2.- Porqué no se prepara un tubo blanco para la determinación de bilirrubinas

por el método de Malloy Evelyn. Tenga en cuenta que los tubos 2 y 4 no

corresponden a los blancos que Ud. Está acostumbrado a preparar.

 Porque se tendría que utilizar más agua en el blanco más el reactivo que es

incoloro lo cual no saldría un absorbancia.

 Su interferencia estaría en el suero que presenta color de la muestra procando

así datos erróneos

3.- Qué bilirrubina es la que se determina en el tubo Nº 3 y por qué?

 Bilirrubina indirecta – la reacción demora, más prolongada y se tiene que utilizar el

metanol para acelerar la reacción

4.- Dan positiva los bilatrienos (biliverdina) la reacción de Gmelin. Fundamente

su respuesta.

 Si da positivo porque la bilirrubina se oxida a biliverdina ya que rompe los enlaces

mediticos entre los pirroles dando derivadas coloreadas

5.- El urobilinógeno da positiva la reacción de Gmelin?

 No, porque esta reacción es especialmente para la determinación de bilirrubina.

6.- Qué tipo de bilirrubina es la que se encuentra en la orina en cantidades trazas

en una persona normal?

 Se encuentra la bilirrubina directa ya que se encuentra 0.2 – 0.4 mg%

7.- A qué se llama ictericia?

 Es la coloración amarrilla de la piel y mucosa debido al exceso de bilirrubina en

sangre que migre hacia tejidos extravasculares.

8.- Cumplen rol fisiológico los pigmentos biliares?

 Si cumplen ya que posee propiedades antimutagenicos.

9.- Señale las causas más comunes de un aumento de bilirrubina tipo directa.

 Cirrosis hepática

 Hepatitis

 Cálculos biliares y tumores

 Síndrome de Dubin Johnson y de Roteri (enfermedades hereditarios )

10.- Defina los siguiente términos:

- Ictericia: pigmentación amarrilla de la piel por exceso de bilirrubina.

- Coluria: presencia de bilirrubina en la orina.

- Acolia: Signo de muchas enfermedades, como hepatitis, siendo

patogénicamente con la ictericia, coluria y la obstrucción de las vías biliares

por múltiples enfermedades

11.- Se encontrará pigmentos biliares en las heces de una persona que tenga una

obstrucción total del colédoco a causa de un cálculo. Por qué?

 No porque debemos realizar una exploración físico y unos análisis de sangre que

mostraran las alteraciones, infección biliar o sospecha de pancreatitis.

12.- Consultando la bibliografía correspondiente indique los hallazgos bioquímicos

que se encuentran en la ictericia obstructiva, ictericia hemolítica y en la

ictericia hepetocelular (hepatitis viral por ejemplo).

 Ictericia hemolítica: exceso de producción de bilirrubina no conjugado por la

destrucción intravascular o extravascular.

 Ictericia obstructiva: por una obstrucción hepática haciendo que la bilirrubina

directa (conjugada) vuelva a la sangre, aumento de la bilirrubina conjugada.

 Ictericia hepatocelular: Aumento de la bilirrubina directa o indirecta. Falta de

captación conjugación o excreción de bilirrubina daño a nivel de hígado.