Ectracción de DNA

UNIVERSIDAD ESPECIALIZADA DE LAS AMÉRICAS

GUÍA DE LABORATORIO VIRTUAL 1

EXTRACCIÓN DE DNA | | UPV DE UN TEJIDO VEGETAL

TOMATE

NOMBRE DEL EXPERIMENTO

ASIGNATURA: PRACTICA UNIVERSITARIA

PRESENTADO POR:

NOMBRE: KEREN EVERSLEY

CÉDULA: 8-1045-2191

CODIGO DE GRUPO: 6137

PRESENTADO A

MAGISTER

DAMARIS ALCEDO

LIC. Q.F.B-ALIMENTOS

FECHA DE ENTREGA: 04/09/2021

Ectracción de DNA

Universidad Especializada de las Américas

ASIGNATURA :

NOMBRE DEL EXPERIMENTO

LABORATORIO VIRTUAL # 1
GUIA DE LABORATORIO 1
I SEMESTRE 2021

Nombre del estudiante: Keren Eversley Grupo 20812 Puntos 60 Totales

Fecha de aplicación: 04-09-2022 Fecha de entrega 04-09-2021

PROFESORA: DAMARIS ALCEDO Puntos Obtenidos Calificación

………………………………………………………………………………………………………………………….

Instrucciones: Complete la guía vaciando los resultados. Recuerde que la guía

es una nota sumativa. La D,E,F,G,H Se resuelven en esta guía. La guía se
entrega junto con el informe de Laboratorio #1, 8 días después de asignarse, en
el mismo documento Word.

A-OBJETIVO GENERAL

⮚ Conocer la importancia de la Extracción de ADN Vegetal

. B-OBJETIVOS ESPECÍFICOS

⮚ Observar los pasos de la extracción del ADN vegetal

⮚ Identificar los equipos que se utilizan para un cultivo in vitro
⮚ Describir los pasos para el desarrollo del cultivo in vitro

C- INTRODUCCIÓN

Las características fisiológicas y bioquímicas de todo ser vivo están contenida

s en sus respectivos genomas . Los genomas de bacterias, hongos, plantas,
animales y algunos virus están compuestos por moléculas de ácido
desoxirribonucléico (comúnmente llamado ADN). El ADN es una estructura
química cuyos elementos fundamentales (nucleotidos) se organizan de manera
a lineal generando enormes secuencias de información. La información que
define y codifica un carácter determinad o se denomina gen (Lewin 1995). Los
genes se organizan linealmente y se agrupan formando estructuras llamadas
Ectracción de DNA

cromosomas, los cuales pueden ser vistos bajo el microscopio durante ciertas
etapas del ciclo de vida de la célula.

D- MATERIALES : Se resuelve en la guía

10 puntos
Reactivos :
Pipetas
Puntas estériles
Micro Tubos
Mortero de plástico

D.1 Equipos Se resuelve en la guía 10 puntos

Video 1
⮚ Baño bloque térmico
⮚ Centrífuga
⮚ Campana de extracción

E- Reactivos y medios de cultivo Se resuelve en la guía 10 puntos

Detergente: Cetal
Tampón de extracción : CTAB
EDTA
Cloroformo
Isopropanol
Etanol al 70%
Tampón TE
Nitrógeno líquido
Hoja de tomate

G-PROCEDIMIENTO Se resuelve en la guía 20 puntos

Observe los videos y vaya anotando lo siguiente

1. Indique paso a paso el procedimiento en cada video 1

⮚ Procedimiento: Vídeo 1
Ectracción de DNA

La extracción, se toman alrededor de 75 miligramos de tejido de hoja joven, se introducen en un tubo de plástico
y se congelan en nitrógeno líquido, el proceso de extracción comienza triturando la muestra congelada en
nitrógeno líquido con ayuda de un mortero de plástico, el tejido debe quedar reducido a un polvo fino.

La ruptura de las membranas celulares se realiza mediante la adición de 500 microlitros de tampón de extracción,
no debe transcurrir mucho tiempo entre la trituración de la muestra y la adición del tampón, durante todo el
proceso es necesario inhibir la acción de las nucleasas.

Las muestras se incuban en un baño o bloque térmico durante 10 minutos a 65 grados centígrados, transcurrido
este tiempo se añade a la muestra cloroformo ,se debe añadir en campana ya que se trata de un disolvente
orgánico, además debido a su baja tensión superficial es necesario añadirlo con precaución para evitar que
resbale por la punta de la pipeta, se añaden 450 microlitros de una mezcla de cloroformo isoamílico en
proporción 24.1 y a continuación la muestra se centrifuga durante 5 o 10 minutos a 13.000 revoluciones por
minuto.

El DNA está en la fase acuosa, de forma que es necesario recuperar esta fase y transferirla a un nuevo
tubo, se deben recuperar alrededor de 400 microlitros de la fase acuosa.

Para la precipitación de los ácidos nucleicos se emplea un alcohol en nuestro caso utilizaremos
isopropanol se debe añadir un volumen de isopropanol equivalente a la cantidad de fase acuosa
recuperada en el paso previo , inmediatamente después de la adición del alcohol, la precipitación se ve
favorecida si el alcohol se añade frío a la muestra con el mismo objetivo es conveniente mantener la
mezcla en hielo durante 5 o 10 minutos para precipitar los ácidos nucleicos se centrifuga de nuevo
durante 5 o 10 minutos a 13.000 revoluciones por minuto el precipitado obtenido contiene el DNA.

Para lavar este precipitado se añaden 100 microlitros de etanol al 70% se despega el precipitado del
fondo del microtubo y se centrifuga durante 2 minutos a 13.000 revoluciones por minuto ,tras este
centrifugado se eliminan el sobrenadante con ayuda de una micropipeta con cuidado de no arrastrar el
DNA precipitado, el precipitado así obtenido se deja secar a temperatura ambiente durante 5 minutos .

Por último se suspende en 50 microlitros de tampón TE , es conveniente conservar la muestra a 4

grados hasta que el DNA se suspenda por completo, posteriormente si la muestra se quiere conservar
durante mucho tiempo se debe mantener al menos 20 o al menos 80 grados centígrados.

H- RESULTADOS Se resuelve en la guía 10 puntos

Incluya tiempos y temperaturas del proceso

Proceso Tiempo Temperaturas

Incubación de las 10 mit. 65°g Centígrados
muestras
Centrifugación 5 - 10 mit. Fría
Precipitado 5 mit. temperatura ambiente
Extracción de las No específico temperatura ambiente
muestras Indicación: No debe transcurrir mucho
tiempo entre la trituración de la
muestra y la adición del tampón
Ectracción de DNA

Universidad Especializada de las Américas

INFORME DE LABORATORIO VIRTUAL 1

Nombre del Experimento

Extracción de DNA | | UPV DE UN TEJIDO VEGETAL

Tomate

ASIGNATURA: PRACTICA UNIVERSITARIA I

NOMBRE: KEREN EVERSLEY

Cédula: 8-1045-2191

Grupo: 6137

PRESENTADO A

MAGISTER

DAMARIS ALCEDO

Q.F.B-Alimentos

FECHA DE ENTREGA: 04-09-2021

Ectracción de DNA

Introducción

El ADN es la abreviatura de ácido desoxirribonucleico (ácido desoxirribonucleico). El

ácido desoxirribonucleico es una molécula compleja que se encuentra en cada célula de

nuestro cuerpo y contiene todas las instrucciones necesarias para crear y mantener la vida.

Debemos tener en cuenta que la función del ADN es almacenar y transferir la información

genética que constituye el organismo y sus descendientes. El genoma de una persona contiene

toda la información genética contenida en el ADN. Para aprender a manipular y analizar el

ADN de las células veremos el proceso de extracción de hojas de tomate, que consiste en

separar el ADN de otros componentes celulares. Según los tipos de células que veremos, para

separar los ácidos nucleicos, la membrana y la pared celular deben ser destruidas por métodos

físicos, químicos o enzimáticos para liberar moléculas de ADN al ambiente extracelular.

Luego, el ácido nucleico se purifica extrayendo proteínas y lípidos con un disolvente

orgánico, se recupera en una etapa posterior y luego se precipita con el isopropanol.

Ectracción de DNA

Planteamiento del problema:

¿Cómo realizar la extracción del DNA en una hoja de tomate?

Preguntas de Investigación

¿Cómo se rompen las membranas celulares del DNA?

¿Qué disolventes orgánicos se pueden utilizar para el proceso de la extracción del DNA?

¿El protocolo de extracción cumple los objetivos del laboratorio?

Hipótesis:

Siguiendo los pasos del protocolo , primero realizamos la ruptura de las membranas

celulares con el uso de un detergente orgánico , una vez liberado el contenido celular se

realiza la desnaturalización y separación de proteínas mediante disolventes orgánicos como el

cloroformo isoamílico , interaccionan con el interior hidrofóbico de las proteínas,

desorganizando la estructura terciaria, provocando su desnaturalización y precipitación y así

obtener una muestra pura de la hoja de tomate.

Objetivo general:

Aprender a utilizar técnicas sencillas de extracción del ADN y analizar los pasos

correspondientes para visualizar la importancia de su manipulación genética.

Objetivos específicos

- extraer ADN
Ectracción de DNA

- Aprender a utilizar los reactivos correctos

- observar el ADN extraído

Resultados

El precipitado obtenido tiene la muestra del DNA, se puede observar un líquido blanco con

un ligero.

Análisis

Una vez observado el video correspondiente a el título del video, procedimos a

analizar los procedimientos de extracción de DNA, los mismos fueron utilizados para

visualizar el manejo de distintos tipos de equipos, materiales y reactivos del laboratorio. Los

expositores presentaron las clases de una manera ordenada explicando los pasos

correspondientes y muestras que se deben de usar con respecto al tema. Por consiguiente,

debemos responder a las siguientes preguntas del cuestionario.

Cuestionario

1. De qué depende el protocolo a emplear en el estudio

El protocolo a emplear varía en función de la especie y el tipo de tejido de

partida.

2. Describa los pasos ordenados de la extracción. Lo puede plasmar en mapa

conceptual

- Se toma alrededor de 75 miligramos de tejido de hoja joven,

- Se introducen en un tubo de plástico y se congelan en nitrógeno líquido

- El proceso de extracción comienza triturando la muestra congelada en

nitrógeno líquido con ayuda de un mortero de plástico el tejido, debe

quedar reducido a un polvo fino.

Ectracción de DNA

3. ¿Qué tipo de sustancias se emplean en la desnaturalización

- A través de disolventes orgánicos

4. ¿Cuál es el nombre del disolvente para romper proteínas

- Cloroformo isoamílico.

5. ¿Cuál es la finalidad del nitrógeno líquido

- Se usa para evitar la formación de cristales de hielo.

6. ¿Qué es un agente Quelante

- Sustancia química que se utiliza para unir iones metálicos y así formar

una estructura de anillo.

7. ¿Cuál es el nombre del alcohol para precipitar los ácidos nucleicos

- Isopropanol

Se extrajo la muestra del tejido joven de la hoja triturándola con la muestra aún

congelada para evitar la formación de cristales, con ayuda de un mortero, se le añadió tampón

de extracción para la ruptura de las membranas, para facilitar la lisis celular y la liberación

del contenido se incuban las muestras en un bloque térmico por 10 mit, luego se le añadió el

cloroformo isoamílico. Este disolvente orgánico al entrar en contacto con las células captura

los lípidos y las proteínas, que forman parte de las membranas, el detergente permitió que las

proteínas que acompañan al DNA que son de gran tamaño sean cadenas más pequeñas y se

puedan separar. Luego de obtener una fase acuosa de la muestra es necesario precipitarse con

alcohol en este caso isopropanol, este alcohol es más soluble en el DNA, por lo tanto, la

precipitación ocurre de manera más rápida y así obteniendo una muestra pura de DNA.
Ectracción de DNA

Conclusión

La hipótesis fue aceptada ya que el protocolo utilizado cumplió su objetivo principal

al sacar una muestra de DNA pura, al analizar paso a paso los procedimientos se visualizó la

importancia de la temperatura en la que debe estar la muestra, el uso de los reactivos

específicos como el tampón de extracción que ayuda a la ruptura de las membranas , el

alcohol isopropanol que facilitó el tiempo de espera en la muestra, el cloroformo elimina

trazas de fenol y desnaturaliza nucleasas y el alcohol isoamílico que reduce formación de

espuma, facilita fases, así poder ver una muestra clara de DNA, teniendo el protocolo

correcto podremos manipular y examinar de mejor manera muestras en nuestro laboratorio..

Ectracción de DNA

Anexo

Hoja de tomate

Desnaturalización y separación de proteínas

Precipitación de DNA en alcohol frío

Muestra del DNA

Bibliografía
Ectracción de DNA

Abyntek. (2017, June 29). Precipitación de DNA con Etanol vs. Isopropanol.

Abyntek.com. https://www.abyntek.com/precipitacion-de-dna-con-etanol-vs-

isopropanol/

Blanco, S. (n.d.). LA REACCION EN CADENA LA REACCION EN CADENA DE LA

POLIMERASA DE LA POLIMERASA. Paho.Org. Retrieved April 9, 2021,

from

https://www.paho.org/hq/dmdocuments/2010/C%20Gutierrez%20INHRR.pdf

Extracción de DNA | | UPV. (2015, February 23). Youtube.

https://www.youtube.com/watch?v=nXeB1Ib13P8
Ectracción de DNA

ÍNDICE 2
INTRODUCCIÓN( 1 HOJA) 5
PLANTEAMIENTO DEL 5
PROBLEMA
PREGUNTAS DE 5
INVESTIGACIÓN(3)
OBJETIVOS GENERALES 1
OBJETIVOS ESPECÍFICOS 1
HIPÓTESIS 5
RESULTADOS 10
ANÁLISIS DE RESULTADOS 10
CONCLUSIÓN 10

Responder a las hipótesis,

preguntas de investigación,
los objetivos
BIBLIOGRAFÍA 5
WEBGRAFÍA 5
ANEXO 4
Imagen con título y
leyenda
Ectracción de DNA