Informe Identificación de proteínas

Sandoval T. Jorge ID 680274

Corporación Universitaria Minuto de Dios UNIMINUTO Facultad de educación

Licenciatura en educación básica con énfasis en ciencias naturales y educación ambiental -

Bioquímica

NRC 23532 Arquímedes G. Henry

Mayo 20, 2021

Tabla de contenido

Introducción.....................................................................................................................................2

Objetivos..........................................................................................................................................3

Marco teórico...................................................................................................................................4

Materiales y reactivos......................................................................................................................6

Procedimiento inicial.......................................................................................................................6

Procedimiento identificación...........................................................................................................7

Análisis de resultados....................................................................................................................16

Conclusiones..................................................................................................................................17

Bibliografía....................................................................................................................................18
 Introducción

Las proteínas son elementos vitales para los organismos, encontrándose en plantas y animales en

una proporción elevada. Hay una gran variedad de proteínas y cada una desempeña una función

biológica específica que puede ser de reserva, de sostén, transporte, estructural, etc.

Químicamente las proteínas están constituidas por combinaciones complejas de carbono,

hidrogeno, oxigeno, nitrógeno y otros elementos en menor proporción como son azufre cobre y

fosforo. Cuando la estructura de la proteína se desorganiza, se dice que se encuentra

desnaturalizada y esto trae como consecuencia la perdida de la actividad biológica. La

desnaturalización puede lograrse por medios físicos como el calor o químicos como una

variación de pH, observándose una disminución en la solubilidad y la formación de un coagulo.

Este método es utilizado para demostrar la presencia de proteínas. También se puede identificar

proteínas mediante el uso de sustancias que, al ponerse en contacto con ellas, producen una

coloración específica, tal es el caso de la Reacción de Biuret. La reacción debe su nombre al

Biuret, una molécula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la más

sencilla que da positiva esta reacción la presencia de proteínas. El reactivo de Biuret contiene

CuSO4 en solución acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reacción se basa en la formación de

un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre iones

Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forman parte de los enlaces

peptídicos presentando un máximo de absorción a 540nm.

 Objetivos

- Determinar propiedades físicas y químicas que afectan el funcionamiento y la estructura

de las proteínas.

- Realizar experimentos para identificar las proteínas, como la configuración y la

identificación por el reactivo BIURET.

- Identificar la presencia de proteínas en diversos alimentos por medio de la reacción de

BIURET observando la desnaturalización de una proteína.

- Comprobar la solubilidad de las proteínas en diferentes solventes

Marco teórico

Proteína, cualquiera de los varios compuestos orgánicos constituidos por aminoácidos ligados

por enlaces peptídicos que intervienen en distintas funcionalidades vitales fundamentales, como

el metabolismo, la contracción muscular o la respuesta inmunológica.

Se descubrieron en 1838 y hoy se conoce que son los elementos primordiales de las células y que

suponen más del 50% del peso seco de los animales. El termino proteína deriva del griego

proteico, que significa primero. El plasma sanguíneo común tiene de 6.5 a 7.5gr de proteínas por

100 al. Las proteínas plasmáticas tienen la posibilidad de separarse en 3 conjuntos: a)

fibrinógenos; b) globulinas; c) albuminas.

Todas estas variedades tienen la posibilidad de ser precipitadas en bases a su solubilidad en

resoluciones salinas, y se consigue una división fácil o burda por medio de precipitación salina

de dichas proteínas o fuerzas iónicas diferentes. La precipitación salina con sulfato de amonio es

una fase preliminar eficaz en muchas técnicas de aislamiento de proteínas en especial de

enzimas.
Hay 2 tipos de conseguir esta fase de purificación o bien sea agregando sulfato de amonio sólido,

o bien sea con una solución saturada (100 por 100) neutra del mismo. En el primer caso, existe

virtud de conservar en un mínimo el incremento de volumen; sin embargo, la solución saturada

muestra la virtud de una manipulación más cómoda. Las moléculas proteicas van a partir de las

largas fibras insolubles que conforman el tejido conectivo y el cabello, hasta los glóbulos

compactos solubles, capaces de atravesar la membrana celular y desencadenar actitudes

metabólicas. Poseen un peso molecular alto y son concretas de cada especie y de todos sus

órganos. Se considera que el hombre tiene unas 30.000 proteínas diversas, de las que solo un 2%

se ha descrito con detalle.

Las proteínas sirven más que nada para edificar y conservar las células, aun cuando su

descomposición química además da energía, con un rendimiento de 4 kilocalorías por gramo,

parecido al de los hidratos de carbono. Las enzimas son proteínas, al igual que la insulina y casi

cada una de las otras hormonas, los anticuerpos del sistema inmunológico y la hemoglobina.

REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET) Entre las reacciones coloreadas

específicas de las proteínas, que sirven por tanto para su identificación, destaca la reacción del

Biuret. Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que se

debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los aminoácidos. El

reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre (II) y sosa, y el Cu, en un medio fuertemente alcalino,

se coordina con los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya

intensidad de color depende de la concentración de proteínas.

 Materiales y reactivos

Materiales Reactivos
5 goteros Agua destilada

5 tubos de ensayo Ácido clorhídrico

Mortero Hidróxido de sodio

Pinza para tubo de ensayo Peróxido de hidrógeno

Pinzas Urea

2 vaso de precipitado Papa

Gradilla Leche

Gafas de laboratorio Albúmina

Guantes de nitrilo Clara de huevo

Bata de laboratorio Agua desionizada

Paño de seda Reactivo de BIURET

Nota: Los materiales y reactivos resaltados en negrita deben ser proporcionados por cada grupo.

Además, deben traer su respectivo equipo de trabajo (jabón antibacterial, papel absorbente,

calculadora y atomizador con alcohol antiséptico).

Se deben entregar el material y el espacio suministrados en perfectas condiciones de limpieza.

 Procedimiento inicial

Primeramente, armar el montaje de los tubos de

ensayo en la gradilla.

Luego poner en cada tubo de ensayo 2,00 g de papa

Luego al tubo 1 y 2 añadir 3,00 mL de agua, tubo 3

agregar 3,00 mL de HCl, al tubo 4 añadir 3,00 mL de
NaOH y al tubo 5 se le añade 3,00 mL solución de Urea.

Luego los tubos 2, 3, 4 y 5 se encuban a 20°C, el tubo se

encuba a 70°C, luego de esto se adiciona peróxido de
hidrógeno al 30%

Procedimiento identificación

Primeramente, armar el montaje de los tubos de

ensayo en la gradilla.

Luego en el tubo agregar 3,00 mL de leche, en el 2

tubo agregar 2,00 mL de clara de huevo y ahí mismo
1,00 mL de agua desionizada, el tubo 3 agregar 3,00
mL de agua desionizada y finalmente agregar 3,00
mL de solución de albúmina.

Seguido de esto a cada tubo de ensayo se agrega ½

mL de NaOH, se mezclan los tubos de ensayo y se
agrega
Pasados los1,00 mL de reactivo
10 minutos de BIURET,
se observan se agitanen cada
las coloraciones
tubo,los tubos
Tubo 1: yColoración
se esperanvioleta
10 minutos.
pastel, Tubo 2: Púrpura
oscuro arriba y abajo transparente con partes púrpuras y
espuma arriba, Tubo 3: transparente oscurecido, pero arriba
hay una pequeña línea azul, y abajo una coloración algo
oscura, Tubo 4: Totalmente violeta.
El reactivo de BIURET se utiliza para la identificación de proteínas ya que forma un complejo

con enlace peptídico y cobre presente en el BIURET, el cobre inicialmente tiene una coloración

azul que asume una coloración violeta en el momento en el que forma el complejo con los

enlaces peptídicos de los aminoácidos que forman las proteínas.

Estructura

Las proteínas son biomoléculas formadas básicamente por carbono, hidrógeno, oxígeno y

nitrógeno. Pueden además contener azufre y en algunos tipos de proteínas, fósforo, hierro,

magnesio y cobre entre otros elementos. Pueden considerarse polímeros de unas pequeñas

moléculas que reciben el nombre de aminoácidos y serían, por tanto, los monómeros unidad. Los

aminoácidos están unidos mediante enlaces peptídicos. La unión de un bajo número de

aminoácidos da lugar a un péptido; si el número de aminoácidos que forma la molécula no es

mayor de 10, se denomina oligopéptido, si es superior a 10 se llama polipéptido y si el número es

superior a 50 aminoácidos se habla ya de proteína. Por tanto, las proteínas son cadenas de

aminoácidos que se pliegan adquiriendo una estructura tridimensional que les permite llevar a

cabo miles de funciones. Las proteínas están codificadas en el material genético de cada

organismo, donde se especifica su secuencia de aminoácidos, y luego son sintetizadas por los

ribosomas.

Primaria: Se le llama así a la secuencia de aminoácidos en una proteína.

Secundaria: Describe la orientación, en un patrón regular, de los diferentes segmentos de una

proteína.

Terciaria: Describe el enrollamiento total de la proteína en una forma general tridimensional.

Cuaternaria: Se refiere a la reunión de varios péptidos o proteínas en grandes estructuras

agregadas.
Propiedades físicas y químicas

Las características físicas y químicas de una proteína dependen casi por completo de los equipos

funcionales contenidos en las cadenas laterales de los AA que permanecen expuestos en su área,

o sea, del plegamiento de la cadena o cadenas peptídicas y de la conformación geométrica que

adopten en el medio acuoso celular. Entre las propiedades la las proteínas se pueden destacar

cuatro:

 Solubilidad

El nivel de solubilidad de las proteínas cambia en funcionalidad de varios componentes:

pH, concentración salina, temperatura, etcétera. Generalmente las proteínas globulares

son solubles en agua gracias a los radicales R que permanecen colocados en el área de la

proteína y que establecen enlaces por puente de Hidrógeno con el agua.

 Como las moléculas proteicas resultan muy monumentales (partículas de 10 -4 a 10 -6)

originan dispersiones coloidales y no difunden por medio de ciertas construcciones

membranosas (por ejemplo, el muro de los capilares) que si permiten el paso de agua y

sales minerales.

 Especificidad

Las proteínas son moléculas concretas, o sea, cada especie biológica tiene varias

proteínas que las demás especies no poseen. Inclusive proteínas que muestran la misma

funcionalidad y una composición tridimensional muy similar acostumbran tener una

sucesión peptídica algo diferentes en los diversos organismos. La especificidad proteica

se observa inclusive entre personas de una misma especie.

Por consiguiente, cada especie tiene proteínas diferentes de las demás especies y el nivel

de diferencia es dependiente de su vínculo evolutivo; ejemplificando, la hemoglobina

humana es más parecida a la del chimpancé que a la del can.

La especifidad de las proteínas es la primordial causa del rechazo en los trasplantes de

órganos y en las transfusiones de sangre. Al incorporar una proteína foránea (no propia),

el organismo la reconoce como extraña y responde produciendo anticuerpos específicos

para su devastación. Por esa razón se buscan continuamente donantes y receptores

compatibles. sólo no se genera rechazo entre donantes y receptores genéticamente

idénticos (clónicos) y que, por consiguiente, poseen las mismas proteínas, como es la

situación de los gemelos homocigóticos o univitelinos (aquellos que proceden del mismo

cigoto).
 Desnaturalización

La desnaturalización proteica se apoya en la perdida de la configuración espacial

característica, que es la que poseen en estado nativo, o sea, la definida por las condiciones

celulares, adoptando una configuración al azar lo cual conlleva a una pérdida de la

funcionalidad biológica.

En la desnaturalización se alteran los enlaces que estabilizan las construcciones

secundarias, terciaria y cuaternaria con lo cual cambian los plegamientos propios de la

molécula que adopta una conformación al azar.

Entre los componentes que tienen la posibilidad de ocasionar la desnaturalización

proteica se hallan las variaciones de presión y temperatura y determinadas radiaciones

electromagnéticas (agentes físicos) y las variaciones de pH, así como los cambios en

concentración salina o determinadas sustancias química como la urea (agentes químicos).

La desnaturalización podría ser reversible si al desaparecer el componente

desnaturalizante la proteína recupera su conformación nativa y por consiguiente su

funcionalidad biológica. En caso opuesto la desnaturalización es irreversible.

 Capacidad amortiguadora del pH

La desnaturalización proteica se apoya en la perdida de la configuración espacial

característica, que es la que poseen en estado nativo, o sea, la definida por las condiciones

celulares, adoptando una configuración al azar lo cual conlleva a una pérdida de la

funcionalidad biológica.
En la desnaturalización se alteran los enlaces que estabilizan las construcciones

secundarias, terciaria y cuaternaria con lo cual cambian los plegamientos propios de la

molécula que adopta una conformación al azar.

Entre los componentes que tienen la posibilidad de ocasionar la desnaturalización

proteica se hallan las variaciones de presión y temperatura y determinadas radiaciones

electromagnéticas (agentes físicos) y las variaciones de pH, así como los cambios en

concentración salina o determinadas sustancias química como la urea (agentes químicos).

La desnaturalización podría ser reversible si al desaparecer el componente

desnaturalizante la proteína recupera su conformación nativa y por consiguiente su

funcionalidad biológica. En caso opuesto la desnaturalización es irreversible.

Clasificación de las proteínas

Composición

Simples: Por hidrólisis dan sólo aminoácidos

Conjugadas: Por hidrólisis dan otros compuestos además de los aminoácidos, pueden ser:

Glucoproteínas, Lipoproteínas, Nucleoproteínas, Fosfoproteínas, Metaloproteínas

Forma tridimensional

Fibrosas: Forman fibras largas, se utilizan en la naturaleza para formar materiales

estructurales como: Músculos, tendones, uñas, cuernos, pezuñas.

 Globulares: Están enrolladas en formas compactas y casi esféricas solubles en agua y se

mueven dentro las células: Enzimas, hormonas y de transporte.

Función

Proteínas estructurales: Querastina, elastina, colágeno

Proteínas de transporte: Hemoglobina

Proteínas protectoras: Anticuerpos, inmunoglobina

Proteínas hormonales: Insulina

Proteínas enzimáticas: Quimotripsina, catalizadores biológicos.

Montaje inicial para la determinación de propiedades físicas y químicas que afectan el

funcionamiento y estructura de las proteínas.

Resultados de la primera parte del procedimiento.

Montaje inicial para identificación de proteínas

Resultado Tubo #1
 Resultado Tubo #2

Resultado Tubo #3

Resultado Tubo #4

MARGARITA HABRAN UNIVERSIDAD ECCI. (2020, diciembre 5). BIOQUÍMICA - 3

IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS. Recuperado de https://www.youtube.com/watch?

v=Y0nBB0p7_bk
 Análisis de resultados

Una vez que la proteína no ha sufrido ninguna alteración en su relación con el disolvente, se

plantea que muestra una composición nativa. Se denomina desnaturalización de las proteínas a la

pérdida de las construcciones de orden preeminente (secundaria, terciaria y cuaternaria),

quedando la cadena polipeptídica limitada a un polímero estadístico sin ni una composición

tridimensional fija. La coagulación de las proteínas se crea por su desnaturalización, provocada

por distintos componentes tanto químicos como físicos; el incremento de temperatura,

variaciones de presión y de pH o cambios en la concentración salina.

Las cadenas de proteínas presentes en la clara de huevo, la leche y la milanesa, una vez que

fueron sometidas al reactivo de Biuret, que en su estructura tiene NaOH al 10% (el cual no

participa de la actitud, empero es de importante trascendencia su presencia debido a que otorga el

medio fundamental necesario) junto con el CuSO4, reaccionan con el sulfato cúprico y se

vuelven de color violeta lo cual nos sugiere que la actitud ha sido positiva.

La desnaturalización de proteínas se da en la clara de los huevos, que son en parte importante

albúminas en agua. En los huevos frescos, la clara es transparente y líquida; sin embargo, al

cocinarse se torna opaca y blanca, conformando una masa sólida ínter comunicada. Dicha misma
desnaturalización puede producirse por medio de una desnaturalización química, ejemplificando,

volcándola en un recipiente con acetona. Desnaturalización Irreversible de la proteína de la clara

de huevo y pérdida de solubilidad, causadas por la alta temperatura (mientras se la fríe). El

impacto de la temperatura, una vez que la temperatura es alta se incrementa la energía cinética de

las moléculas con lo cual se desorganiza la envoltura acuosa de las proteínas y, se desnaturalizan.

Conclusiones

- Las proteínas conforman una de las moléculas más relevantes en el organismo debido a

que cumplen muchas funcionalidades, las proteínas permanecen constituidas por

aminoácidos por los cuales los procedimientos se fundamentan en el reconocimiento de

los aminoácidos.

- En esta práctica pudimos mirar el contenido de proteína en los diferentes alimentos que

usamos, y como se ha podido mirar puesto que los alimentos que poseen más proteína

son la clara de huevo, el pescado y la leche. Por consiguiente, pudimos ver que este no es

bastante recomendado para la nutrición en los individuos y que lo cual si tenemos la

posibilidad de consumir para tener un óptimo balance de proteínas en nuestro cuerpo

humano es el huevo, aun cuando solo tienen la posibilidad de consumir de uno a 2 como

más alto.

- En las actitudes donde se obtuvo precipitación se debió a un cambio en el estado físico de

la proteína, mientras tanto que en la coagulación se ha producido un cambio en el estado

físico y en la composición química por esa razón es irreversible.

 Bibliografía

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