PROTOCOLOS PARA TOMA DE MUESTRA DE HELICOBACTER PYLORI

CARBONO 14

1. Preparación del paciente

Los fármacos antisecretores como los inhibidores de la bomba de protones (omeprazol) y los anti-
H2 (ranitidina) deben ser suprimidos siete días antes de realizar la prueba, requieriéndose para los
antibióticos y el bismuto un mes. El paciente debe estar en ayunas de al menos cuatro horas (aunque es
preferible realizar la prueba por la mañana previa noche en ayunas).

2. Recogida de una muestra de aliento basal (T0)

En condiciones basales, existe una producción endógena de C 14 en el CO2 total espirado, que puede
aumentar tras la comida, el ejercicio o después de fumar. Por ello, debe recogerse una muestra de aliento
basal antes de la ingesta de la urea marcada, que servirá para cuantificar el fondo.

3. Administración de la solución con urea marcada disuelta en agua

La cantidad de urea-C14 que debe ingerir el paciente es de 1 µCi disuelto en 25 ml de agua. Debe beberlo
lo más rápidamente posible y se puede seguir de otros 25 ml de agua.

4. Reposo

Para evitar la producción de CO2 endógena el paciente debe permanecer sentado el resto de la prueba.

5. Recogida de muestras de aliento posteriores a la ingesta de la urea-C14

Tabla IV
PROTOCOLO ACTUAL DE LA PRUEBA DEL ALIENTO CON UREA-C14

1. Paciente en ayunas de al menos cuatro horas.

2. Suspender antibióticos y bismuto un mes y antisecretores cinco-siete días antes de la prueba.
3. Recogida de una muestra de aliento basal.
4. Ingesta de 1 µCi de urea-C14 disuelto en 25 ml de agua.
5. Recogida de una muestra de aliento 20 minutos después de administrar el sustrato.
6. Añadir el líquido de centelleo a las dos muestras de aliento.
7. Cuantificación del 14CO2 excretado en cada muestra de aliento.
8. Expresión de los resultados en desintegraciones por minuto (dpm).
9. Valoración de los resultados:
Positivos > 200 dpm.
Negativo < 100 dpm.
Dudoso entre 100 y 200 dpm.

Es suficiente recoger una única muestra de aliento 20 minutos después de la ingesta de la urea-C14, pero al
ser un procedimiento de recogida de muestras sencillo y cómodo para el paciente también se pueden
obtener dos muestras seguidas en el tiempo; por ejemplo, a los 20 y a los 30 minutos. Para ello, el
paciente debe soplar en el interior del vial de centelleo hasta que se produce el atrapamiento de los
mmoles de CO2 que viene indicado por el cambio de color de la solución.
6. Medición de la actividad específica del  14CO2

y análisis de los resultados

A cada vial de centelleo que contiene la muestra del aliento del paciente se le añaden 10 ml de líquido de
centelleo (Hisafe 3, Wallac) y la radiactividad de cada uno de ellos se cuantifica en un contador de
centelleo líquido junto con un estándar que contiene un 1% de la dosis administrada.

7. Expresión e interpretación de los resultados

Los resultados son expresados en desintegraciones por minuto. Una prueba del aliento con urea-C 14 se
considera positiva para H. pylori cuando la radiactividad contenida en las muestras de aliento es mayor de
200 dpm y negativa cuando es menor de 100 dpm. Entre ambas cifras (100-200 dpm) el resultado se
considera dudoso y se debe ser cuidadoso en su interpretación. En estos casos es recomendable repetir la
prueba dos semanas después.

CARBONO 13

1. Preparación del paciente

La mayoría de los protocolos requieren que el paciente esté en ayunas de al menos cuatro horas (aunque
es preferible realizar el test por la mañana previa noche en ayunas). El ayuno se debe hacer para evitar
que algunos alimentos ricos en urea-C13 (glúcidos derivados del maíz, azúcar de caña, carne de vaca)
puedan interferir en los resultados 33. Recientemente varios grupos de trabajo han demostrado que no es
necesario un ayuno tan prolongado, si se utiliza un protocolo que incluya una comida altamente
calórica 34,35.

2. Ingesta de una bebida estándar

La parte más variable de un protocolo a otro es la que se refiere a la ingesta de la comida hipercalórica. El
objetivo de su administración es retrasar el vaciamiento gástrico de la urea prolongando con ello el
tiempo que la enzima ureasa de la bacteria está expuesta a la urea marcada y evitar así resultados falsos
negativos. Además, incrementa el valor discriminativo de la prueba al aumentar los resultados positivos
en los tiempos de recogida del aliento más precoces.

La mayoría de los laboratorios adoptaron el método europeo definido por Logan en 1987 36que utiliza una
comida altamente calórica que mezcla 50 ml de una solución rica en calorías con otros 50 ml de otra de
triglicéridos de cadena larga. Sin embargo, este tipo de comida tiene el inconveniente de que su alta
energía incrementa la proporción de dióxido de carbono-C13 en el aliento expirado de cualquier individuo
esté o no infectado por H. pylori. Por ello, algunos autores prefieren utilizar bebidas sin carbohidratos
como, por ejemplo, el ácido cítrico 37. La urea-C13 se administra disuelta en una solución de ácido cítrico
que induce una relajación inmediata del fundus gástrico y una inhibición marcada de la motilidad antral.
Con ello, se consigue una pérdida intestinal mínima del sustrato antes de que se alcance una inhibición
marcada del vaciamiento gástrico por la comida altamente nutriente 38. Si la comida hipercalórica puede
ser omitida completamente, como se ha hecho en el test del aliento con urea-C 14, no está todavía bien
determinado, aunque existen evidencias de que la sensibilidad y especificidad de la prueba no se ve
afectada 26.

3. Recogida de una muestra de aliento basal

El C13 es un componente habitual de la atmósfera y por ello, en condiciones basales, todos los individuos
presentan C13 en el CO2 total espirado. La recogida de la muestra de aliento basal se realiza a los cinco
minutos de la ingesta de la bebida estándar. Con ello se consigue cuantificar la relación de CO 2 45/44
propia de cada paciente, que como ya hemos comentado, es prácticamente la misma en todas las personas.

4. Administración de la solución con urea marcada disuelta en agua

La cantidad de urea-C13 que debe ingerir el paciente ha ido disminuyendo desde los 200 mg por los que
optaron Graham y cols. cuando describieron la primera prueba en 1987 14 hasta los 100 mg que ahora
recomienda el Standar European Method para el uso del test de aliento con urea-C 13 sin pérdida de
sensibilidad o especificidad 36. Incluso hay otros grupos que utilizando sólo 75 mg de urea-C13 también
encuentran una excelente correlación con otros métodos diagnósticos 26,37,39.

5. Reposo y adopción de posturas óptimas

Para favorecer la mejor distribución de la urea por toda la superficie de la mucosa gástrica tanto del antro
como del cuerpo y fórnix, se recomienda al paciente que adopte una posición echada en decúbito supino y
del lateral izquierdo y derecho durante un minuto en cada uno, y por último que permanezca sentado el
resto de la prueba.

6. Recogida de muestras de aliento posteriores a la ingesta de la urea-C13

Otra modificación frecuente en los distintos protocolos se relaciona con los intervalos de tiempo de
recogida de las muestras de aliento del paciente después de la ingestión de la urea marcada. Graham y
cols. 14 en la descripción original del método tomaron muestras de aliento seriadas cada diez minutos
durante 180 minutos, Logan y cols. siguiendo el protocolo estándar europeo recomendaron la recogida de
las muestras de aliento cada cinco minutos durante 40 minutos con dos litros de muestras de respiración
espirada. El contenido completo de la bolsa de dos litros se traspasa a otra más grande, de la cual al final
se sacan 20 ml de muestra para su análisis. Posteriormente, para reducir el coste de la prueba y hacerla
más confortable para el paciente se han diseñado protocolos con una única muestra de aliento recogida a
los 30 minutos después de la administración de la urea sin que se vea afectada negativamente la seguridad
del test 26,39,40, aunque algunos autores continúan prefiriendo la medida de al menos dos muestras exhaladas
en tiempos diferentes, basal y a los 30 minutos de la ingesta de urea marcada 41.

7. Medición del  13CO2 y análisis de los resultados

En la mayoría de los laboratorios, el exceso de 13CO2 se analiza mediante espectrometría de masa de la

relación gas-isótopo. Los resultados de cada muestra de aliento son expresados en unidades delta, que es
un valor estandarizado internacionalmente, y en el cual se incluye un factor corrector para eliminar
posibles errores de cálculo. Técnicamente se define esta unidad como la expresión en tantos por mil de la
relación de C13/C12 del problema con respecto al estándar.

El valor de corte para el test de aliento con urea-C13 fue inicialmente de 5,00 unidades por mil, es decir,
cuando entre los valores delta basal y posterior de un mismo paciente hubiera una diferencia significativa
de cinco unidades se consideró que existía infección. Sin embargo, en un reanálisis reciente de los datos
de varios estudios clínicos se han realizado las curvas ROC para optimizar el valor de corte de acuerdo a
la sensibilidad y especificidad del test. Con ello, un valor de corte de 3,5 unidades delta por mil de exceso
de 13CO2 proporciona una sensibilidad y especificidad de 98,5 y 97%, respectivamente. Incluso otros
autores recomiendan valores de corte menores, un exceso de 2,4 unidades delta por mil de 13CO2 en el
aliento medido a los 30 minutos después de ingerir la urea marcada indica la presencia de infección
activapor H. pylori con una sensibilidad y especificidad del 100% 40.

Por último, comentaremos que aunque el coste económico de la medida del C13 por espectrometría de
gases ha ido disminuyendo, todavía es alto, siendo esta la principal desventaja que limita su uso masivo.
Por ello, varios métodos alternativos para el análisis de 13CO2 han sido descritos recientemente, entre ellos
destacan la espectrometría por infrarrojos y por láser optogalvánico 42,43. Estas nuevas tecnologías se
encuentran en un estado de desarrollo inicial y se están realizando estudios para conocer su seguridad,
aunque parece que van a mejorar y abaratar la realización de esta prueba.