MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE HEMATOLOGIA

E.S.E. CENTRO DE SALUD RICAURTE LABORATORIO CLINICO

DERLY MILENA AYA BACTERIOLOGA Y LAB. CLINICO 2006

TOMA DE MUESTRA ♦ Se elige la vena que favorece la toma de la muestra, preferiblemente de la región venosa antecubital, porque a este nivel la piel es fina y móvil y las venas son de grueso calibre y relativamente superficiales. Cuando este lugar no favorece para la punción, se observan otras venas como de la mano o de la cara anterior del antebrazo. ♦ El personal encargado de la toma de muestras se colocara los guantes de látex, previo lavado de las manos. ♦ Si las venas no son muy superficiales se coloca un torniquete 5cc arriba del sitio elegido para puncionar, se le pide al paciente que empuñe la mano y si es necesario se frota suavemente con la mano de quien va a puncionar el lugar de la vena elegida. Si la vena es superficial solo se le pide al paciente que empuñe la mano. ♦ Una vez elegida el área de punción se esteriliza con algodón empapado con alcohol antiséptico, se emplea jeringa desechable y se procede a la punción. ♦ La cinta elástica debe retirarse después de introducida la aguja en la vena, se aspira la sangre con la jeringa y una vez retirada, se presionará la zona puncionada con un algodón empapado en alcohol antiséptico. ♦ Cuando se va a tomar únicamente para exámenes de hematología, se toman 2cc de sangre, cuando además el paciente tiene orden para exámenes de química clínica y/o inmunología se toman 5cc. La muestra para CH se almacena en los tubos tapa lila que son previamente organizados y deben contener 2 gotas de EDTA.

pero a temperatura ambiente en el momento de emplearlo) por 6 minutos.FROTIS SANGUINEO Y COLORACION Para el frotis sanguíneo se emplea el método de los dos portaobjetos: ♦ Identificar la lámina. El grosor del frotis sanguíneo puede variar de acuerdo al ángulo empleado durante la extensión. ♦ Colocar el canto de otro portaobjetos. se seca por la parte posterior y se deja secar a temperatura ambiente en posición vertical. ♦ Se aplica buffer Giordano (que debe mantenerse en la nevera. hasta que alcance la gota de sangre. una vez seco el extendido no se deja pasar más de una hora: ♦ Se aplica 1 cm colorante de Wright por 1 minuto. sobre la superficie del primer portaobjeto. por la parte anterior a la gota de sangre. . ♦ Deslizar suavemente y a velocidad moderada un portaobjetos sobre el otro en sentido longitudinal. sobre la superficie del primer portaobjetos. es aconsejable que la sangre no llegue a los lados del portaobjetos. ♦ Se lava la lámina con agua de chorro. ♦ Esperar que por capilaridad toda la sangre se distribuya uniformemente. hasta que la gota de sangre quede bien extendida. ♦ Colocar una pequeña gota de sangre no más de 3 mm de diámetro de un portaobjetos a 2 cm de uno de los extremos. Se deja secar a temperatura ambiente y en posición horizontal. sobre el que se realiza la extensión. Para la coloración. formando un ángulo de 45 grados y desplazarlo suavemente hacia atrás. si es superior a 45° será gruesa y corta y si es inferior será larga y fina.

además de lecturas superiores de 0. agitar. REACTIVOS Reactivo concentrado y patrón de Hb. bien cerrados. protegidos de la luz y evitar su contaminación durante su uso para que se conserve hasta la fecha indicada en la etiqueta. Presencia de turbidez. HEMOGLOBINA: ESPECTROFOTOMETRICA ICSH FUNDAMENTO El ión ferroso de la HB se oxida a ión férrico por acción del ferricianuro potásico formándose hemiglobina (metahemoglobina).010 a 540 nm del blanco. Homogeneizar el tubo por inversión con movimientos suaves. La hemiglobina reacciona con el cianuro para formar cianhemiglobina (cianmetahemoglobina) que se puede medir por espectrofotometría.HEMOGLOBINA Servir en un tubo de ensayo 2. . deben guardarse en refrigeración. Conservar en frasco oscuro siendo estable 6 meses a 15-30°C: No congelar. partículas en el reactivo y el blanco son indicaciones de deterioro. limpiar muy bien la punta y llevar al fondo del tubo y aplicar. Para preparar otros volúmenes mezclar en proporción 1 ml de reactivo concentrado + 49 ml de agua destilada. MUESTRAS Sangre capilar o venosa recogida con EDTA o heparina. Leer a 540 nm. llevando a cero con el blanco del reactivo y calibrando con el patrón de hemoglobina. enjuagar la punta con el reactivo en la parte superior. La Hb en sangre es estable 6 días de 2-8°C.5 ml de Drabkin y tomar 10 ul de sangre con anticoagulante. Reactivo de trabajo: Diluir el contenido del frasco de reactivo concentrado hasta 1000 ml con agua destilada. Dejar en reposo de 5 a 10 minutos.

7-16.0 g/dl BLANCO --2.0 g/dl 11.3 g/dl 12.5 ml PATRON 10 ul -2.2 g/dl de Hb. La lipemia puede elevar falsamente los resultados debido a la turbidez.X C patrón = C muestra A patrón Sin patrón: A muestra X 37. Otros medicamentos y sustancias pueden interferir.5 = C muestra VALORES NORMALES: 12-14 años 15-17 años 18-74 años HOMBRES 12.0-16.5 ml CARACETERISTICAS METROLOGICAS  Límite de detección: 0. Leer las absorbancias a 540 nm frente al blanco.  Interferencias: La bilirrubina no interfiere.  Límite de linealidad: 20 g/dl.5 ml MUESTRA -10 ul 2. Cálculos: Con patrón: A muestra -----------.5-15.0-16. Para valores superiores diluir la muestra ½ con agua destilada y repetir.5 g/dl MUJERES 11. .0 g/dl 11.5-17. El color es estable por varias horas.PROCEDIMIENTO PATRON MUESTRA REACTIVO TRABAJO Agitar y dejar por 3 minutos a temperatura ambiente.6 g/dl 13.7/15.

Cuando la centrifuga pare. colocarla en la microcentrifuga de 5 a 10 minutos entre 10.m. Tomando el punto cero donde la plastilina se une con la muestra hasta la línea superior que marque con sangre en el capilar. ni burbujas.000 r.HEMATOCRITO Se llena el capilar de la muestra tomada con anticoagulante. hasta las 3/4 partes y sellar por este extremo con plastilina.000 y 5. . leer el valor en la tabla de hemotocrito.p. Solamente se lee si no han quedado espacios.

♦ Llenar la cámara. ♦ Aspirar líquido de turk hasta el enrose de 11. ♦ Contar los leucocitos presentes en los 4 cuadrados grandes (los de las 4 esquinas).5 y limpiar la punta de la pipeta. ♦ Realizar la observación y conteo en 10X.RECUENTO DE LEUCOCITOS ♦ Aspirar mediante la pipeta de Thoma sangre total hasta el enrose de 0. se cuentan las células contenidas en el interior del área de recuento y las que sean tangente o secantes a las líneas de demarcación superior y derecha. . ♦ Desechar las tres primeras gotas. ♦ Con el dedo índice tapar la parte superior de la pipeta y con el dedo pulgar la parte inferior y mezclar suavemente. ♦ El total de leucocitos en los 4 cuadrados se multiplica por 50 y este será el valor del recuento de leucocitos.

se observan pequeñas y escasas ganulaciones de color . ♦ Células anucleadas (hematíes) con función respiratoria. Es importante diferenciar los tres tipos de células que podemos observar: ♦ Células nucleadas (leucocitos) con función defensiva. ♦ Seudofragmentos citoplasmáticos (plaquetas) con función hemostática.  Neutrofilos: Es el más predominante. el que se observa de un violeta más tenue que el neutrofilo y por lo general de dos masas. Cada valor se dará en porcentaje de células vistas. La lectura se realiza en sentido vertical y de derecha a izquierda buscándose con anterioridad en 10X la zona ideal. en la parte media del frotis. el núcleo es de color violeta oscuro y de cromatina densa y esta divido en lóbulos unidos por puentes de cromatina. cuando el puente es muy ancho adquiere forma de C siendo propio de los cayados o células inmaduras de esta línea granulocítica. Estos pueden ser: Polinucleares: de núcleo lobulado de apariencia múltiple como los neutrofilos. su citoplasma es ligeramente acidófilo (rosa pálido) y contiene abundantes granulaciones distribuidas en todo el citoplasma. bien individualizados y redondos. Mononucleares: núcleo único y redondo como los linfocitos y monocitos. su citoplasma se observa de gránulos irregulares que cubren completamente el núcleo y se observan de color muy oscuro entre azul y morado.  Linfocitos: El citoplasma puede ser escaso o abundante y de color azul claro.  Basofilos: Es el menos abundante. casi nunca cubren el núcleo. eosinófilos y basofilos. Los leucocitos tienen la característica de tener núcleo y organélos citoplasmáticos lo que permite su diferenciación morfológica con los hematíes y las plaquetas.  Eosinofilos: Su citoplasma esta lleno de granulaciones de color naranja que se observan de gran tamaño. dando la apariencia de tener varios núcleos.RECUENTO DIFERENCIAL En la lámina una vez coloreada se lee con objetivo de 100X las células vistas hasta llegar a 100 células contadas.

 Monocitos: De citoplasma abundante y color gris azulado. linfocitos atípicos (cuando es superior a el 10% del total de linfocitos). cayados. Su núcleo es redondo y abarca gran parte de la células. . su cromatina es laxa.rosado a rojo. reacción leucoeritoblástica que serán contados dentro de las 100 células del recuento diferencial. restos nucleares o normoblastos. Posee granulaciones finas azurofilas por todo el citoplasma . Ante la presencia de normoblastos realizar la corrección de leucocitos. filamentosa e irregular. Aveces posee vacuolas. el núcleo es central por lo general redondo aunque con una o más escotaduras ocupa gran parte del citoplasma. se pueden observar espacios en el núcleo que están compuestos por cromatina laxa. Se debe informar la presencia de neutrófilos con granulación tóxica.

Así. se contara en cada campo. siendo este el valor del número total de plaquetas por milímetro cúbico.000. se suman. se divide por 10 y se multiplica por 21. . el número de plaquetas observadas. siendo 10 en total.RECUENTO DE PLAQUETAS Se busca entre el cuerpo y la cola del frotis sanguíneo una zona de distribución uniforme de hematíes (que no estén amontonados y no se observen grandes espacios en blanco entre ellos). se cuenta la presencia de 100 de estos por campo.

dándonos el valor de leucocitos en mm3. morfología normal o las alteraciones observadas en las diferentes líneas. hacia la parte de la pluma y el cuerpo del frotis. Para linfocitos atípicos se debe informar: si son mas del 10% (es decir. si hay disminución o aumento en alguna de las líneas. leucopenia.000 mm3. miramos 3 campos en forma vertical en 10X. linfocitos atípicos. (a+b+c) / 3 X 250 = leuc / mm3 Estos datos son confiables cuando la cantidad de blancos no sobrepasa los 20. sumándolos al total de los linfocitos) se deben informar en el diferencial de los 100 leucocitos. donde las células se endosan unas con otras observándose bien delimitados sus contornos. Promediar y multiplicar este valor por la constante 250. Anotar la presencia de neutrófilos con granulación tóxica. Cifras mayores se pueden considerar fuentes de error y es necesario realizar el recuento total por líquido de turk confirmando el valor repitiendo la prueba. hipolobulación (síndrome de Pelger – Huet) vacuolas. • Cualitativamente: el diferencial. presencia de células inmaduras. contar la cantidad de células blancas en cada uno de ellos. Si es menor del 10% del total de linfocitos solo se anotan como: se observan linfocitos atípicos escasos.ANALISIS DE FROTIS DE SANGRE PEIFERICA Seleccionamos la zona ideal de lectura en 10X. restos nucleares. con alteraciones en los gránulos. degranulados. . eosinófilos y basófilos hiperlobulados. Observar la morfología de los leucocitos en 100X e informar: • Cuantitativamente: la cantidad por mm3 como normales. vacuolados.  Para valorar el recuento total de blancos. monocitos vacuolados. núcleos picnóticos. macropolicitos (hipersegmentados). leucocitosis. cuerpos de Dohle. homógenos en cuento a número de hematíes.

Microcitosis: Ligera 76 – 80. un glóbulo rojo normal debe tener el mismo tamaño de un linfocito. • El color dado normocrómico como: Normal 0.En caso de reacción leucoeritoblástica se incluyen por aparte dentro del recuento diferencial. microcítico o macrocítico.5 por la cantidad de hemoglobina presente puede ser o hipocromía. Se cuantifica en 10 campos: Normal Ligera Moderada Marcada 0–5 6 – 15 16 – 30 mayor 30 El tamaño se relaciona con el VCM 76 – 96 fl. moderada 66 – 75. Esta última se determina en 10 campos Ligera 6 – 15 Moderada 16 – 30 Marcada mayor 30 • Para la poiquilocitosis se debe informar la forma prevalente y cuantificar así: Normal Ligera Moderada Marcada 0 1–5 6 – 15 mayor de 15 . Además la presencia de normoblastos deberán incluirse como se menciono. el color. marcada menor de 65. • La anisocitosis se puede cuantificar así: Se determina al compararlos con los linfocitos pequeños. De acuerdo al VCM: Macrocitosis: Ligera H 95 – 108. En caso de reacción leucoblástica o desviación a la izquierda también se deberá incluir en el recuento diferencial).  Observar en 100X los eritrocitos para determinar y valorar: el tamaño o anisocitosis. para estos dos últimos se informa ligera. marcada mayor de 120. Puede ser normocítico. moderada o marcada. la inmadurez globular o policromatofilia que es la presencia de hematies con tonalidad gris azulada y de mayor tamaño. moderada 109 – 120. M101 – 108. la variación de formas o poiquilocitosis y.

esquitocitos.  Para las plaquetas se debe informar si son normales en número y morfología. estomatocitos. 10 campos en proporción cada uno de 100 hematíes y se debe encontrar de 7 a 21 plaquetas por campo para considerarlas normal. pero solo determinaremos la policromatofilia como: Normal Ligera Moderada Marcada 0–2 2–3 3–4 mayor 4 • Además se debe informar la presencia de inclusiones como punteado basófilo. ovalocitos. codocitos. célula falciforme. . cuerpos de Heinz. . cuerpos de Howell Jolly. • La policromatofilia y los reticulositos (se valoran con coloración de azul de cresil brillante) son proporcionales en 10 campos. restos nucleares. knizocitos. acantocitos. anillos de Cabot. parásitos y normoblastos si los hay.Pueden ser: esferocitos. Si no se solicito antes un recuento de plaquetas que nos de un valoración de la cantidad se observa 100X. queratocitos. en casos contrarios se informa trombocitosis o trombocitopenia y la morfología cuando se encuentran mas de 3 macroplaquetas lo que se debe informar o por el contrario microplaquetas. dacriocitos.

FORMA DE CORRECCION: 1.250 mm3 de leucocitos corregidos. 3. automatizado o manual por líquido de Turk. Deberán ser anotados a medida que se realice el recuento diferencial anotándolos apearte y se informa la cantidad de normoblastos en100 células blancas contadas. .500 mm3 de leucocitos X 100% total de células contadas en el diferencial / 120% = 6. X 100 % que es le número de leucocitos contados para el diferencial / (100 % que es el número de leucocitos contados para el diferencial + el % de restos nucleares o normoblastos contados en el diferencial).500 mm3 de leucocitos por líquido de turk 100 % de células contadas para el diferencial 20% de restos nucleares o normoblastos hallados en el diferencial 7.NORMOBLASTOS Ante la presencia de normoblastos se debe realizar la corrección de leucocitos. En este recuento interfiere los normoblastos y los restos nucleares. 2. Se corrigen siempre que se encuentren mas del 10% al realizar el recuento diferencial. Hacer el recuento diferencial. Leucocitos corregidos: número de leucocitos contados X 100 / número de normoblastos + 100 Recuento total de leucocitos por mm3 por cualquier método. Saber cuántos normoblastos o cuantos restos nucleares se obtuvieron en este recuento. es decir. Ejemplo: 7. Conocer el recuento total de blancos.

citoplasma basófilo con abundantes granulaciones y desflecado. núcleo con cromatina laxa. gran número de los cuales se agrupan y rodean lo que se denomina una membrana de demarcación.LINEA MEGACARIOCITICA  MEGACARIOBLASTO: De tamaño grande. presencia de nucleolo. presenta prolongaciones a modo de seudópodos útiles para su identificación morfológica. núcleo multilobulado. . citoplasma intensamente azul. de color rosado y con gránulos en su interior.  MEGACAROCITO: Es el de mayor tamaño.  PLAQUETAS: Se observan de pequeño tamaño. La fragmentación final del citoplasma dará origen a las plaquetas. sin gránulos.  PROMEGACARIOCITO: De mayor tamaño que la anterior. Gran citoplasma de color grisáceo y repleto totalmente de gránulos azurófilos.

intensa basofilia citoplasmática.  PROERITOBLASTO: Gran tamaño.  ERITOBLASTO BASOFILO: Es de menor tamaño que la anterior. núcleo grande con cromatina laxa. su citoplasma es de color gris azulado. cromatina gruesa e irregularmente condensada se nota como un tablero de ajedrez. más pequeño y más condensado. alrededor del núcleo se observa como encaje. más que la línea mieoloide. no tiene núcleo.  ERITOBLASTO ORTOCROMATICO: Su tamaño es un poco menor a la anterior sin ser muy notoria la diferencia. aunque son muy difusos.  ERITOBLASTO POLICROMATICO: Es de menor tamaño que la anterior. El citoplasma conserva su intensa basofilia. con coloración supravital revela un retículo granulofilamentoso.LINEA ERITROIDE La maduración eritropoyética se caracteriza por: 1. 2.  RETICULOCITO: Tiene un tamaño un poco mayor que el hematie. citoplasma gris rosado. núcleo picnótico. en el que pueden apreciarse dos o más núcleolos. la cromatina es más burda como grumos y los nucleolos poco distinguibles o completamente ausentes. 3. Desaparición de todos los organelos citoplasmáticos. El aumento progresivo de la acidofilia celular. Su núcleo es más central y pequeño que la línea granulocítica. núcleo más central. citoplasma de tono azulado. .

presenta una ligera invaginación dando aspecto de frijol. Según su naturaleza se clasifican en neutrófilo. eosinófilo o basófilo según los gránulos que se observan cerca del núcleo. citoplasma rosado.  MIELOCITO: De menor tamaño que la anterior. el núcleo ocupa la mayor parte de la célula quedando solo una pequeña cantidad del citoplasma. Cromatina muy laxa con dos o tres nucleolos definidos y oscuros. con abundante granulación azurófila (se observan rojos. aún se pueden distinguir los nucleolos.  MIELOBLASTO: Citoplasma azulado y granulaciones primarias o azurófilas muy escasas o inexistentes.  PROMIELOCITO: De mayor tamaño que la anterior. Los gránulos son visibles en el núcleo como en el citoplasma. Es de forma redonda u ovalada. es excéntrico y no posee nucleolos. eosinófilo y basófilo.LINEA GRANULOPOYETICA Es característico que el núcleo disminuya de tamaño en relación al citoplasma. toscos y grandes) citoplasmática. El citoplasma es azul con una zona relativamente clara alrededor del núcleo.  METAMIELOCITO: De menor tamaño que la anterior con núcleo excéntrico. la cual se caracteriza por la gran abundancia de granulaciones específicas citoplasmáticas. que se va a lobular generalmente a neutrófilo. .  EN BANDA O CAYADO: La invaginación es más pronunciada arqueando la totalidad del núcleo. Núcleo redondo y relativamente grande. El núcleo contiene una cromatina más condensada que la del promielocito.

. citoplasma azul grisáceo más abundante que en el monoblasto. suave y homogénea que se ve interrumpida por los núcleolos. La cromatina es fina e irregularmente distribuida. Escasos gránulos azurófilos. Casi siempre contiene gránulos azurófilos. El citoplasma es basófilo y tienen un halo pálido alrededor del núcleo.LINEA MONOCITICA  MONOBLASTO: Son similares a los mieloblastos y difícil de diferenciar entre sí. Un pliegue en el núcleo es bastante característico.  PROMONOCITO: Tiene un núcleo regular e irregular. El citoplasma es de color azul – grisáceo. el citoplasma presenta ligeras prolongaciones simulando pseudópodos. que pueden ser de 2 a 4 redondos y de color azul claro. El núcleo tiene una cromatina fina.  MONOCITO: Núcleo irregular en forma de frijol.

característicos de células tisulares fijas que han sido arrancadas de su sitio normal. . de cordones y senos esplénicos Bazo Células sinusoidales Ganglio linfático Macrófagos medulares Médula ósea Macrófagos de las serosas Pleura y peritoneo Osteoclastos Hueso Células de la microglia Sistema nervioso Los histiocitos son células grandes con abundante citoplasma que contiene vacuolas digestivas y/o partículas fagocitadas bien visibles. Algunos pueden presentar seudópodos obtusos. sin gránulos. Otros bordes citoplasmáticos dilacerados. con o sin gránulos. El citoplasma es azul claro o gris azulado. con actividad macrofágica. de núcleo excéntrico. Sus características dependen del tejido al cual ha migrado: NOMBRE TEJIDO Histiocitos Conjuntivo Células de Kupfer Hígado Macrófagos alveolares Pulmón Macr.HISTIOCITOS Son los monocitos que de sangre periférica pasan a los diferentes tejidos.

.LINEA LINFOIDE  LINFOBLASTO: Tiene la cromatina homógena y delicada pero es un poco más burda que la de los mieloblastos y monoblastos. sin gránulos y un halo claro perinuclear.  PROPLASMOCITO: forma ovalada. LINEA PLASMOCITICA  PLASMOBLASTO: Célula de tamaño intermedio.  PLASMOCITO: el núcleo es muy excéntrico con una cromatina muy condensada da el aspecto de radios de rueda. el citoplasma ha tomado forma ovalada.  PROLINFOCITO: Más basófilos que los linfocitos. núcleo excéntrico grande que contiene el nucleolo. se tiñe de azul oscuro y presenta una brillante translucidez o zona clara. Por lo general es redonda pero no necesariamente. más grandes. mayor cantidad de citoplasma que presenta color azul intenso y la zona clara perinuclear se observa mejor. de núcleo grande con cromatina fina y presencia de nucleolo bien definido. escaso citoplasma azul. el citoplasma a veces parece rugoso y granular. El citoplasma no es granuloso pero sí de gran tamaño contrario al linfocito. Tiene uno o dos nucleolos. citoplasma de color azul oscuro y algunas veces se puede observar una zona clara perinuclear. cromatina menos densa que el linfocito. con un nucleolo. de núcleo ligeramente excéntrico.

Se limpia la zona con algodón impregnado con alcohol antiséptico. en la zona A. Anti B. el paciente es grupo AB y si no se observa aglutinación para ninguna de las dos zonas. si la aglutinación es para las dos zonas. el paciente es grupo A. Cada gota se coloca debajo de cada letra y se aplican los reactivos del juego de hemoclasificadores. el paciente es grupo sanguíneo O. Para los dos primeros espacios se determina el grupo sanguíneo y para el último el Rho. B y D. La incubación de los hematíes muestra con el reactivo Anti A. DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO PRINCIPIO BOLOGICO DE LA PRUEBA Se basa en la hemaglutinación directa.HEMOCLASIFICACION Si el paciente llega únicamente con orden de hemoclasificación. se aplica una gota de Anti A. si solo se observa aglutinación el la zona B. se colocara una torunda de algodón en la zona puncionada y se le dirá al paciente que la sostenga por un minuto. si el correspondiente antígeno esta presente en los hematíes muestra. se toma la muestra del pulpejo de su dedo índice. se deja secar a temperatura ambiente toma una lanceta y se punciona por la zona del lado del pulpejo del dedo. La reacción es demostrada por la . en la zona B una gota de Anti B y en la zona d una gota de Anti D.anticuerpo. el paciente es grupo B. en cada una en la parte superior se marca como A. Anti D produce una reacción específica de antígeno . separadas entre sí. se descarta la primera gota y se toma tres gotas en una lámina portaobjetos. Si solo se observa aglutinación en la zona A. La lámina portaobjetos en su posición horizontal se divide en 3 partes. la muestra será tomada del mismo tubo y no se puncionara al paciente en su dedo índice. En la zona D la presencia de aglutinación nos indica rho positivo y la no aglutinación un rho negativo. Si la orden además indica otro examen que implique la toma de tubo con EDTA.

no congelar. Se puede tomar muestra venosa (usando anticoagulante) o por punción capilar en este caso si la prueba se realiza de una vez sin retrasos para evitar que la muestra se seque. se deben manipular como si fueran material sospechosos de infección. Lavado de glóbulos rojos de pueden almacenar en solución preservante de 2-8°c por no más de 35 días. El material biológico con los que se preparó el reactivo fue sometido a pruebas de HBsAg y Anti VIH dando negativo. DESCRIPCION DEL PRODUCTO Los reactivos son preparados de pool de suero humano obtenidos de donantes inmunizados. .aglutinación visible. La no aglutinación indica ausencia del antígeno para cada uno de los reactivos siempre que se hayan cumplido correctamente la indicaciones del procedimiento. sin embargo. puede presentar contaminación bacteriana o deterioro del producto. MUESTRA No se requiere preparación especial del paciente para obtener la muestra. Si se observa turbidez no emplearlo. tampoco usarlo después de la fecha de vencimiento. Deben almacenarse de 2-8°C.

se deben colorear antes de 2 horas de tomadas empleando la coloración de Field. una para marcarla en el extremo derecho y los otros dos espacios para colocar cada gota. allí se adiciona el colorante de Field evitando la formación de burbujas que se ha preparado previamente adicionando 3 ml de solución amortiguadora. Primero se hace una precoloración: Se sumerge durante 1 segundo la lámina en azul de metileno fosfatado. una gota de solución A y una gota de solución B. Se extiende la sangre de cada gota utilizando el ángulo y los primeros 5 mm del borde longitudinal de otro portaobjetos se extiende la gota amanera de “N” para formar un rectángulo de 1. Se coloca dos gotas en una lámina portaobjetos sin tocar la piel. se hacen 2 laminas que se dejan secar a temperatura ambiente en posición horizontal. Enjuagar con solución amortiguadora rápidamente La coloración se realiza colocando la lámina boca abajo en una superficie cóncava. Se presiona para obtener una gota pequeña.GOTA GRUESA Puede hacerse con sangre con anticoagulante o de gotas obtenidas por punción.5 cm. y mover la lámina en breves trazados horizontales y . se deja escurrir sobre una toalla de papel en posición vertical. Es importante tener en cuenta que el exceso en el tiempo de secado. luego se escurren sobre el papel absorbente y se deja secar. se deja secar. Limpiar con alcohol la lámina que se utilizó para las gotas gruesas con el fin de evitar la contaminación de las siguientes muestras.5 a 0. el alcohol o el calor pueden fijar la hemoglobina. se punciona con lanceta desechable y se limpia la primera gota con algodón seco. Se debe limpiar la piel con alcohol. La observación se realiza en 100X. la cual se ha divido imaginariamente en 3 partes. se deja actuar por 9 minutos. haciendo inadecuada la muestra para el diagnóstico de malaria. examinando la gota a partir de uno de sus bordes. que se obtienen de la parte lateral de la yema del dedo medio de la mano y en niños pequeños del dedo gordo del pie.

000 luec/ul de sangre / 100 leucocitos = # de parásitos/ul de sangre. lo que equivale a 100 campos microscópicos. su especie en caso de observarse y el recuento del plasmodium. En un extendido de sangre periférica se busca el porcentaje de eritrocitos parasitados por trofozoitos y esquizontes presentes en 10. Conociendo el número de leucocitos por mm3 se puede calcular la cantidad de parásitos en este volumen de sangre. LECTURA:  Con base en el número de leucocitos.  Con base en el número de eritrocitos. los trofozoitos y esquizontes presentes. se deben observar 200 campos para calificar la muestra como negativa. y/o trofozoitos y/o gametocitos.  Con base en el número de sangre de la gota gruesa. Se calcula que en una preparación bien hecha. esquizontes y gametocitos para P. se escurre y se deja secar a temperatura ambiente en posición vertical. Para hacer el diagnóstico por la lectura de extendido se debe realizar hematocrito al paciente.000 leuc/ul de sangre. se lava con agua de chorro. 100 campos microscópicos en 100X.5 de buffer Giordano por 6 minutos. En gota gruesa se cuentan los trofozoitos. Puede determinarse la parasitemia contando en los 100 campos.2 mm3 de sangre. falciparum. presentes en los campos microscópicos determinados con 10X y 40X donde se encuentre mayor número de leucocitos. mirando los campos hasta que estos sumen 100 leucocitos. También se puede hacer extendido coloreando la lámina con 2 ml Wright por 1 minuto y luego 0. De no visualizar el parásito.verticales (zig – zag) en la que se identifica la presencia del parásito. vivax. asumiendo que cada campo tiene igual cantidad de eritrocitos. equivalen a 0. Un buen campo microscópico es aquel en donde se encuentran de 10 a 20 leucocitos. Se establece la proporción de parásitos en 100 leucocitos encontrados: # de parásitos X 8.000 eritrocitos. Se busca campos en donde la . aunque ocasionalmente esquizontes para P. Ejemplo: paciente con malaria con un recuento de 8.

falciparum ( 2. En los casos de P. Así: 1 – 10 en 100 campos microscópicos + 11 – 100 en 100 campos microscópicos ++ 1 – 10 por campo microscópico +++ mayor de 10 por campo microscópico ++++ En las infecciones por P. falciparum (200 gametocitos/ul). vivax.  Con base en el número de sangre de la gota gruesa.distribución de los eritrocitos sea homogénea y no se encuentren superpuestos. Ejemplo: serían necesarios 33 campos microscópicos. . • Hemoparásitos: Positivo aunque no se puede precisar la especie. Ejemplos: • Hemoparásitos: Negativo.000 parásitos/ul) y P. • Hemoparásitos: Positivo para P. falciparum (50. es posible informar separadamente las forma sexuales de las asexuadas. El recuento semi cuantitativo consiste en informar la especie de Plasmodium que ocasiona la infección y el número aproximado de parásitos encontrados. vivax no se debe hacer recuento ni diferenciación entre las formas sexuadas y asexuadas. hacia el segundo tercio del extendido. • Hemoparásitos: Positivo para P. Se sugiere nuevo examen. falciparum se debe informar por separado las formas sexuadas y asexuadas. • Hemoparásitos: Positivo para infección mixta: P. • Hemoparásitos: Positivo para P. si hay 300 eritrocitos por campo.000 trofozoitos/ul). vivax (5. falciparum. • Hemoparásitos: Positivo para P.000 trofozoitos/ul). falciparum (100 trofozoitos/ul y 5 gametocitos/ul). por la facilidad en el reconocimiento de los gametocitos de los trofozoitos. En las infecciones mixtas se debe registrar primero el parásito prevalente y luego la especie subordinada. INFORME DE RESULTADOS:  Con base en el número de leucocitos: Para los casos de P.

puntos pequeños de rosa a rojos que aumentan con intensidad con el crecimiento del parásito.000 eritrocitos serian necesarios 33 campos si hay 300 eritrocitos por campo microscópico. COMPARACION DE LAS ESPECIES DE PLASMODIUM EN EXTENDIDO G. Para determinar el número de parásitos en 10. X hematocrito X 10 = # Se indica la presencia y la cantidad de formas presentes. * Forma especiales del parásito Tamaño del parásito Fase de anillo de los En “i”.R parasitados P.). Ejemplo: # parásitos X # de eritrocitos/ul de sangre / 10. Punteado grueso (hendiduras de Maurer. Para un hematocrito de 40% estimamos que el paciente tienen 4.000 eritrocitos/ul de sangre. “”. Marginales raras P. vivax Agrandados. pálidos. Grande Pequeño Anillos grandes (1/2 a 1/3 Anillos muy pequeños (1/5 . falciparum No agrandados.000 eritrocitos = parásitos/ul de sangre 3 eritrocitos/ul = hematocrito x 100.000 eritrocitos parásitos/ul de sangre. Punteado fino (punteado de Schuffner. Color normal. puntos rojos generalmente escasos.Ejemplo: Hemoparásitos: Positivo para P.  Con base en un extendido de sangre periférica. candelabro. vivax ++. Invade todos los eritrocitos. Inicialmente invade los reticulocitos.000 reemplazando y simplificando: # de parásitos en 10.000. numerosas). falciparum: trofozoitos ++ y gametocitos + Hemoparásitos Positivo para P.

Pigmento en los trofozoitos Partículas finas de color en desarrollo pardo ligero carmelito. Masa de cromatina central rodeada por pigmento malárico en forma de bastones.000 / ul * Ordinariamente solo se observan etapas de anillo o gametocitos en sangre periférica con P. amarillento. diseminados. * Hasta más de 200. presencia de granulaciones de Maurer * De 2 a 4 merozoitos. granulaciones Shuffner. ocasionalmente granulaciones de Shuffner. en el citoplasma del parásito. En los esquiozontes se condensa en una masa única. cromatina abundante laxa puede se claramente distinguible (macrogametocito femenino) o difusa (microgametocitomasculino) Distribución en sangre Todas las formas. Solamente anillos y semilunas (gametocitos). aumenta el tamaño del eritrocito. dispersos en el citoplasma del parásito. * Semilunares o salchicha. escasos. vacuolado. Posee una masa de pigmento malárico. periférica Parasitemia habitual Hasta 30. Grumos burdos de color negro o carmelito oscuro. Jóvenes) del diámetro de los hematies). grandes. anillos delicados y regulares. Generalmente un gránulo de cromatina. infecciones múltiples. Esquizontes maduros Ocupa generalmente todo (segmentados) el glóbulo rojo. pueden adherirse a los eritrocitos.del diámetro de los eritrocitos) a veces con citoplasma ameboide o amorfo. ocupa por lo general todo el eritrocito.000 /ul de sangre. Gametocitos Redondos u ovales.000 / ul. Muchas veces dos gránulos o dos puntos de cromatina. Trofozoitos viejos Muy pleomorfos. falciparum. Compactos y redondeados. trofozoitos (T. las etapas consecutivas a la fase de . De 12 a 24 merozoitos. Comúnmente 50.. vacuolados. en los esquizontes se condensan en una masa única. rico en citoplasma muy ameboide. Muy raros en sangre periférica pero puede llegar a tener de 8 y 40merozoitos.

candelabro. “”. Se puede diferenciar el femenino del masculino. Raro de encontrar. De 12 a 14 merozoitos distribuidos irregularmente. color carmelito. usualmente contiene pigmento. Pigmento malárico. regulares. Gránulos de pigmento marrón o negro esparcidos por el citoplasma. Granulaciones de Shuffner a manera de halo rosado. Trofozoito maduro Esquizonte Gametocitos . Grande con variedad de formas ameboides. En infecciones severas acompañado de un gran número de trofozoitos. aveces abierto mostrando un citoplasma regular o ameboide. una sola masa de pigmento malárico. Con 2 o más merozoitos. VIVAX Formas de anillo pequeño. Redondos ovalados con una única cromatina grande. pigmento malárico distribuido en el citoplasma. Vacuola presente. granulaciones de Shuffner como halo rosado. vacuola pequeña. Granulaciones de Shuffner Grandes. CARACTERISTICAS DEL PLASMODIUM EN GOTA GRUESA PARASITO Trofozoitos jóvenes P. redondos. también pueden demostrase redondeados. FALCIPARUM Anillos muy pequeños. Pequeños. Cromatina central rodeada de pigmento malárico de color negro a manera de bastones. finos y delicados. Forma creciente de media luna o salchicha. Compacto con aspecto sólido. P.anillo hacen adherentes a los eritrocitos y tienden a ser retenidos en los lechos capilares profundos en infecciones masivas. redondos y compactos. A veces abierto formando figura de i.

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