PRACTICA DE LABORATORIO No 3

MACROMOLÉCULAS DE LA LEVADURA

INTRODUCCIÓN
Los compuestos de carbono relativamente complejos se denominan compuestos orgánicos. Dado que los
átomos de carbono se unen muy fácilmente entre sí, el esqueleto básico de casi todos los compuestos
orgánicos son cadenas de carbono de diversas longitudes y formas, a las que por lo general se adhieren
átomos de hidrógeno, oxígeno y nitrógeno. Entre los compuestos orgánicos más estrechamente asociados con
los procesos básicos de la vida están los carbohidratos, las proteínas, los lípidos y los ácidos nucleicos que
junto con moléculas orgánicas más pequeñas y moléculas inorgánicas conforman la materia viva en un
sistema bastante complejo que interactúa con el ambiente para mantener su integridad estructural y
funcional.

OBJETIVO:
Extraer e identificar cualitativamente las principales macromoléculas presentes en las células de la levadura
de panadería (Sacharomyces spp.): proteínas, ácidos nucleicos y glucógeno.

MATERIALES Y REACTIVOS:
Levadura de panadería granulada mortero
Acido tricloroacético al 5% (P/V) cuchara
Arena lavada pipetas para cada reactivo
Alcohol etílico al 96% gradilla y pinzas para tubos de ensayo
Reactivo de yodo (lugol) tubos para centrífuga (2 por grupo)
Solución de glucógeno al 0.5% centrífuga
Cloruro de sodio al 10% tubos de ensayo
Cloruro de sodio 0.15M (amortiguador salino) baño de agua hirviendo
Reactivo de orcinol (bial) fresco baño de hielo
Sulfato cúprico 0.1M Solución de Albúmina o caseína al 10%
Hidróxido de sodio 10M Solución de almidón al 5%

PROCEDIMIENTO:
1. En un mortero coloque el equivalente a una cucharadita de levadura de panadería. Agregue arena lavada
(lo que quepa en la punta de la cuchara), y triture cuidadosamente durante 5 minutos. Agregue 10 ml de
ácido tricloroacético al 5% y macere por 3 minutos más. Deje que la arena se asiente y decante la
suspensión sobrenadante dentro de un tubo de centrífuga. Centrifugue durante 5 minutos a 3000 r.p.m. El
sedimento contendrá ácidos nucleicos y proteínas y el sobrenadante contendrá glucógeno.
2. Decante el sobrenadante en otro tubo y el tubo con el sedimento colóquelo en baño sobre hielo.
Precipite el glucógeno añadiendo al volumen del sobrenadante 2 volúmenes de alcohol etílico al 96%
frío, agitando y manteniendo el recipiente en el baño de hielo. Deje reposar por 5 minutos. Observe si se
presenta cambio en la apariencia del sobrenadante. Traslade la suspensión a un tubo de centrífuga.
Centrifugue por 3 minutos a 5000 r.p.m. Descarte el sobrenadante y observe las características del
sedimento. Disuelva el sedimento en 1 ml de agua destilada. Marque 4 tubos de ensayo diferentes, en A
coloque 1 ml de agua destilada sola (testigo), en B 1 ml de solución de almidón al 0.5% y en C 1 ml de
lugol y en D 1ml de glucógeno. A cada tubo agregue 2-3 gotas de lugol y compare la coloración.
3. Ahora tome el sedimento de ácidos nucleicos y proteínas y agréguele 10 ml de cloruro de sodio al 10%,
agite cuidadosamente. Caliente la suspensión resultante es baño de agua hirviendo por 10 minutos, deje
enfriar y transfiera a un tubo de centrífuga. Centrifugue 3 minutos a 5000 r.p.m. El sedimento contendrá
las proteínas y el sobrenadante los ácidos nucleicos. Decante el sobrenadante a otro tubo de ensayo. Deje
el precipitado proteico en el baño de hielo.
4. Precipite los ácidos nucleicos añadiendo 2 volúmenes de alcohol al 96% frío al volumen de
sobrenadante, agite y mantenga sobre hielo. Deje reposar 5 minutos y observe cambios de apariencia.
Centrifugue 3 minutos a 5000 r.p.m., descarte el sobrenadante y observe las características del
sedimento. Disuelva el sedimento en 2 ml de amortiguador salino y en otro tubo de ensayo coloque 2 ml
de amortiguador salino solo. Agregue a cada uno de los tubos 3 ml de reactivo de orcinol (Bial), caliente
en baño de agua hirviendo durante 20 minutos o hasta cuando aparezca un color verde intenso en algún
tubo.
5. Tome una pequeña porción del sedimento de proteínas y resuspéndalo en 2 ml de solución de
cloruro de sodio 0.15M, en otro tubo coloque 2 ml de solución salina y 1ml de solución de
albúmina o caseina, y en otro tubo coloque solución salina sola. Añada a cada tubo 1 ml de la
solución de sulfato cúprico 0.1M y 2 ml de hidróxido de sodio 10M. Mezcle bien y observe
cambios de color.

NOTA: En la discusión de la práctica de deben explicar los fundamentos de las técnicas de extracción y de
las pruebas de Identificación empleadas.
 MACROMOLECULAS DE LA LEVADURA
HOJA DE REPORTE
INTEGRANTES_________________________________________________________________________
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RESULTADOS:
1. Describa la apariencia del macerado, del sedimento y del sobrenadante:
Macerado:_______________________________________________________________________
Sedimento:_______________________________________________________________________
Sobrenadante:____________________________________________________________________
Con que fin se realiza el procedimiento de maceración? ___________________________________
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2. Qué sucede al agregar al sobrenadante los dos volúmenes de alcohol etílico frío? ( Al agregarlo, al
agitarlo y al colocarlo en hielo) _________________________________________________
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Cómo es el sedimento obtenido por la centrifugación?___________________________________
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3. Describa las coloraciones que observa en cada uno de los tubos al agregar 1ml de reactivo de yodo:
Muestra:________________________________________________________________________________
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Testigo:_________________________________________________________________________________
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Almidón:_______________________________________________________________________________
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Glucógeno: ______________________________________________________________________
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Considera positiva la identificación de la presencia de glucógeno? __________ Que reacción
ocurre?_________________________________________________________________________
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4. Describa lo sucedido al calentar la suspensión que contiene las proteínas y los ácidos nucleicos
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Indique la apariencia del sedimento y del sobrenadante después de la centrifugación:
Sedimento: ______________________________________________________________________
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Sobrenadante: ____________________________________________________________________
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5. Qué sucede al agregar los 2 volúmenes de alcohol etílico frío al sobrenadante? ______________
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Indique la apariencia del sedimento después de la centrifugación:___________________________
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6. Describa el color de los diferentes tubos después del calentamiento con el reactivo de orcinol:
Muestra + orcinol_________________________________________________________________
Amortiguador + orcinol ____________________________________________________________
Considera positiva la presencia de ácidos nucleicos? ______ qué reacción ocurre? _____________
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7. Qué sucede al agregar 1 ml de sulfato cúprico 0.1M?____________________________________

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Y al agregar 2 ml de hidróxido de sodio 10M? __________________________________________
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Es positiva la prueba para establecer la presencia de proteínas? _____________________________
Justifique su respuesta señalando la reacción que ocurre__________________________________
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8. De acuerdo a las observaciones realizadas indique el orden de abundancia de los 3 componentes

analizados en el extracto de levadura: ____________________________, __________________________,
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Son consistentes estos resultados con los reportes de literatura ________________ Justifique su respuesta
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Observaciones y comentarios que desee añadir__________________________________________

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Bibliografía ______________________________________________________________________
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