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EVALUACION DE DURACIÓN DE INMUNIDAD DE UNA VACUNA

COMERCIAL – 1ª Comunicación

Dr. Julián Bermudez, Departamento de Ciencias Microbiológicas, Facultad de Veterinaria.


Martha Baison, Depto. Técnico de Santa Elena S.A.
Departamento Técnico de Laboratorios Santa Elena S.A.

La vacuna evaluada, CLOSTRISAN, logró un efecto de larga duración de inmunidad, de


aproximadamente un año, en condiciones de campo y laboratorio. Los resultados obtenidos nos revelan
datos nacionales no disponibles hasta ahora en la bibliografía consultada.

INTRODUCCION:

Las Clostridiosis son un grupo de enfermedades toxiinfecciosas cuya aparición depende en gran medida
de los sistemas de producción. El manejo intensivo de pasturas y suplementos, la alta rotación y
animales de gran productividad aumentan su incidencia.

La necesidad de desarrollar una vacuna contra Clostridiosis, capaz de ser utilizada en todas las
explotaciones pecuarias del Uruguay, llevó al DEPARTAMENTO TECNICO de LABORATORIOS
SANTA ELENA S.A. a la investigación tecnológica de un nuevo producto completo, seguro y probado.

Para ello el Departamento Técnico, desarrolló la vacuna comercial CLOSTRISAN compuesta con 6
Clostridios: (Cl. chauvoei, Cl. sépticum, Cl. perfringens tipo D, Cl. oedematiens tipo B, Cl. sordellii, y
Cl. haemolyticum), formulación necesaria para cubrir los problemas de Clostridiosis que habitualmente
afectan a la producción pecuaria de esta región.

CLOSTRISAN se comercializa luego de someterse a pruebas de control y evaluación de su potencia,


realizadas en el laboratorio Santa Elena y en el laboratorio oficial DI.LA.VE. del M.G.A.P. Dichas
pruebas son realizada en animales de laboratorio, tal como lo indica la British Pharmacopeia (B.P. 85),
C.F.R. U.S.A. y reglamentaciones del MERCOSUR.
El objetivo del presente ensayo fue realizar una prueba de duración de la inmunidad en animales de la
especie para la que es formulada la vacuna (ovinos y bovinos). Simultáneamente se extendió a animales
de laboratorio (cobayos y conejos), con el fin de establecer una relación entre las especies mas
utilizadas en control de vacunas y la evaluación en la propia especie de uso.

MATERIAL y METODOS:

Para la valoración en esta prueba, se usaron 10 conejos, 25 cobayos, 22 terneros y 30 corderos. Y la

vacuna CLOSTRISAN serie 79 con vencimiento 4/5/98. Todos los animales fueron seleccionados, en
perfecto estado de salud, peso adecuado y desparasitados previamente. Los animales de laboratorio
fueron ubicados en el bioterio de Laboratorio SANTA ELENA S.A.. Los ovinos y bovinos fueron
ubicados en el Establecimiento MACONDO, 8° Sección, FLORIDA, sobre campo natural (índice
CONEAT 110) y praderas convencionales. Los sangrados de todos los animales fueron realizados bajo
supervisión técnica y según protocolo, identificando animales y remitidos inmediatamente refrigerados
al Departamento Técnico del Laboratorio. Los desafíos en animales de laboratorio fueron realizados en
bioterio controlado, y los animales mayores fueron desafiados en el Establecimiento y observados en el
campo cada 2 horas post-desafio. Los animales muertos fueron necropsiados y se obtuvieron muestras
para microbiología, serología e histopatología.
El esquema de vacunación de los animales en experimentación se realizó de acuerdo al Cuadro N° 1.

ESQUEMA DE VACUNACION (Cuadro Nº 1)

25 COBAYOS 10 CONEJOS 30 OVINOS 22 BOVINOS


dosis: 1 ml. dosis: 2 ml. dosis: 2 ml. dosis: 5 ml.
(1/5 de dosis bovina) (dosis ovina) (dosis ovina) (dosis bovina)
NOTA: En las cuatro especies la vía de administración fue subcutánea, la revacunación a los 21 días
y luego de 14 días de ésta y hasta los 11 meses, se procede a la sangría o desafío según corresponda.

Las técnicas utilizadas para la valoración de anticuerpos y desafíos fueron las siguientes:

1) En Cobayos: Para Cl. chauvoei el desafío se realizó según CFR USA Code 113.91
2) En Conejos: Para Cl. perfringens la determinación de niveles de anticuerpos en suero fue realizada
por seroneutralización en ratones según BP 85.

3) En Ovinos: Para Cl. Perfringens: desafío por laparatomía e inoculación en primera porción de
duodeno según trabajo de B.C. Jansen (J.S.A.V.M.A. XXXI) (2) (1960) y determinación de niveles de
anticuerpo en suero por seroneutralización en ratones según BP 85.

Para Cl. chauvoei: el desafío fue realizado usando la misma técnica que en cobayos.

4) En Bovinos: Para Cl.chauvoei: el desafío fue realizado según técnica descripta por M.E. Macheak y
col. (Am. J. Vet. Res.,Vol. 33, Nº5 May, 1972.).

Las toxinas y esporas usadas en los desafíos fueron preparadas y tituladas por el Departamento Técnico
de SANTA ELENA S.A., siguiendo protocolos del laboratorio Central de Weybridge del Reino Unido
(Referencia Internacional en Clostridiosis).

Durante 11 meses se realizaron evaluaciones de niveles de anticuerpos y desafíos con cepas patógenas
para los componentes de Cl. chauvoei y Cl. perfringens tipo D. Conjuntamente con los animales
vacunados se desafiaron los animales testigos no vacunados.

RESULTADOS

TITULACION DE ANTICUERPOS Y RESPUESTA AL DESAFIO


Los resultados se muestran en los Cuadros Nº 2 al Nº 4.
Para Cl. chauvoei, (como lo indica el cuadro Nº 4) se demuestra que los bovinos están protegidos
satisfactoriamente en un 80 % hasta los 7 meses después de vacunados. Se mantiene la inmunidad en
cobayos y ovinos en un 100 % hasta a los 11 y ½ meses. Mientras que en los bovinos disminuye hasta
el 60 % en el mismo período.

En los Cuadros Nº 2 y Nº 3 se puede apreciar los resultados para el Cl perfringens D presentando a los
14 días títulos protectores en conejos y ovinos. A los 3 meses hay una disminución de títulos en ovinos
pero se mantienen en conejos (0.25 UI/ml en ovinos y 2.5 UI/ml en conejos). Cuando se realiza el
desafío en ovinos a los 7 meses de vacunados éstos sobreviven en el 100 % y mantienen títulos
protectores de alrededor de 0.25 UI/ml . A los 11 y ½ meses hay una disminución de la inmunidad
sobreviviendo el 72 % de los animales vacunados y se logran títulos de anticuerpos de alrededor de
0.15 UI/ml.

DISCUSION

En esta primera comunicación se evalúa la respuesta antigénica para los antígenos de Cl. Chauvoei y
Cl. Perfringens tipo D por ser éstos los más importantes en la patología de nuestro pais y de ellos
además se posee los controles de potencia para ovinos y bovinos.
Se confirma una buena correlación entre los resultados obtenidos en animales de laboratorio y animales
de campo, y que para Cl. perfringens tipo D se puede monitorear el estado inmunitario siguiendo el
título de anticuerpos en animales vacunados. Si bien se observó una disminución de los títulos de
anticuerpos en ovinos vacunados después de los 3 meses, hecho que ya ha sido observado por B.
Jansen, lo mismo no sucedió en conejos donde los títulos se mantienen por más tiempo, hecho
observado por este equipo no mencionado por la bibliografía consultada.

Si bien a los 7 meses existe una protección elevada entre el 80% y 100% para Cl. perfringens tipo D y
Cl. chauvoei, a los 11 ½ meses se observa una disminución de la protección llegando a proteger entre el
60% y 72% para los mismos componentes. Cabe destacar que si tomamos en cuenta que el desafío
usado mató el 100 % de los animales testigos, esto llevado a condiciones de campo, donde los desafíos
naturales producen una mortandad entre el 15 % y el 20 %, cabría suponer que la protección con este
producto es superior a la encontrada en el experimento. Podemos afirmar que dicho producto en
condiciones de desafío natural protegería el 100 % de los animales hasta los 7 meses. Alcanzando
niveles adecuados de protección (≥ 80%) por arriba de los 11 y ½ meses. Este hecho se corresponde
con el resultado del uso de la vacuna en el campo.

CONCLUSIONES

La vacuna utilizada (CLOSTRISAN) logró un efecto de larga duración de inmunidad, alrededor de un


año, en condiciones de campo y laboratorio. Los resultados obtenidos nos revelan datos nacionales no
disponibles hasta ahora en la bibliografía consultada. Los mismos nos permiten suponer que los
bovinos y ovinos vacunados con dicho producto estarán protegidos hasta los 7 meses para los
componentes de Cl. perfringens tipo D y Cl. chauvoei en un porcentaje que oscila entre el 100 % y el
80 %, y que cuando llega a cumplirse el año la protección estaría en el entorno del 80%.

Información de esta índole le dan sólido respaldo al producto valorado y le aportan al profesional
veterinario y al productor rural fundamentos para la elección de una vacuna para proteger sus majadas
y rodeos. Además es la primera comunicación en el Uruguay que aporta datos de mantenimiento de la
inmunidad frente al desafío en una vacuna de fabricación regional (Mercosur).

Los componentes aquí elegidos se realizaron sobre la base de que son los patógenos más importantes de
las especies en estudio (ovinos y bovinos) y es de los que se posee la forma de desafío estandarizadas y
científicamente reconocidas en dichos animales. Estudios más completos se planean ejecutar donde se
realizarán evaluaciones de otros componentes de la vacuna en la medida que se pueda diseñar formas
de desafío en ovinos y bovinos.

B I B L I O G R A F I A:
A disposición de los interesados. Solicitarla a sesa@cs.com.uy.

AGRADECIMIENTOS:
Se agradece al Dr. Esteban Guerra (Depto. de Ciencias Microbiológicas, F. DeVeterinaria) y a un grupo
de estudiantes de la Generación 93 de la Facultad de Veterinaria por su valiosa colaboración.
RESPUESTA INMUNITARIA PARA CL. PERFRINGENS D EN
OVINOS
CUADRO Nº 2

Títulos de Resultado Títulos después TESTIGO


TIEMPO Procedimiento Nº de animales anticuerpos Desafío. desafío. S
en UI/ml Sobrevida
Sobrevida
14 días Sangría pool 6 corderos 3.33 UI/ml
Seroneutralizació
n
3 meses Sangría pool 6 corderos 0.26 UI/ml
Seroneutralizació
n
6 meses Sangría 8 corderos 4 < 0.25 UI/ml
Seroneutralizació 4 > 0.25 UI/ml
n
7 meses Sangría 7 corderos 4 0.25 UI/ml 100 % 7/7 5 ov. 0.5 UI/ml 0/3
Desafío 3 < 0.25 UI/ml 2 ov. 1.0 UI/ml
Seroneutralizació
n
11 1/2 m Sangría 7 corderos 5 < 0.15 UI/ml 72 % 5/7 4 ov. 0.25 0/3
Desafío 2 > 0.15 UI/ml UI/ml
Seroneutralizació 3 ov. < 0.25
n UI/ml
RESPUESTA INMUNITARIA PARA CL. PERFRINGENS D EN CONEJOS
CUADRO N° 3

TIEMPO Procedimiento Nº de Títulos en


animales UI/ml
14 días Sangría Pool 5 3.33 UI/ml
Seroneutralización conejos
3 meses Sangría Pool 5 2.5 UI/ml
Seroneutralización conejos
6 meses Sangría Pool 5 entre 1 y 1.5
Seroneutralización conejos UI/ml
RESPUESTA INMUNITARIA PARA CL CHAUVOEI
CUADRO N° 4

TIEMPO Procedimiento COBAYOS OVINOS BOVINOS TESTIGOS


N° de Animales N° de Animales N° de Sobrevivencia
Sobrevivencia Sobrevivencia Animales
Sobrevivencia
14 días Desafío 100 % 5/5 En 48 horas - 0/5

3 meses Desafío 80 % 4/5 En 72 horas - 0/5

7 meses Desafío 100 % 5/5 100 % 5/5 80 % 4/5 Cobayos en 72 horas - 0/5
Ovinos en 72 horas – 0/3
Bovinos en 72 horas – 0/3
11 y ½ Desafío 100 % 5/5 100 % 5/5 60 % 3/5 Cobayos en 72 horas - 0/5
Ovinos en 72 horas - 0/3
Bovinos en 72 horas – 0/3