Provisional Translation

from Japanese Original

Min ist r y o f H ea l th , L ab our and We l fa r e No t i fi cat i o n No .

4 99

The Mi n i s t e r of H ea l t h , L a b ou r a nd We l f a r e has p ar t i a l l y re v i se d th
e Spe c i f i ca t i o n s a n d S t a nd ar d s fo r F o od , F o o d A dd i t i v e s , E t c . ( M i n i s t r y o f
H ea l t h a n d We l f a r e N o t i f i ca t i o n N o . 3 70 , 1 9 5 9) , as g i ve n b e l o w, b as e d o n t h
e pr o v i s i o n o f P a ra g ra p h 1 , A r t i c l e 1 1 o f t h e F o o d S a n i t a t i o n L a w ; th i s
r ev i s i on w i l l t a k e ef fe c t o n M a y 29 , 2 00 6 .
N o t w i th s t a n di n g t h i s n o t i f i ca t i o n , f o o d p ro du c t s t h at a r e m a n uf ac t ur e
d o r pr oc e s se d o n or be f o r e M a y 2 8 , 20 0 6 m a y o bs e rv e t h e ex i s t i n g
r eg u l a t i o n s ,
i n s t e a d o f t h e re g u l a t i o n s t o b e a p pl i e d f r o m t h e g iv e n
d a te .

N ov e m b er 2 9 , 2 0 0
5
J i r o Ka w as a k i
Mi n i s t e r of H ea l t h , L a bo u r a n d We
lfare

I t e m 1 i n S ec t i o n A Ge n e r a l C o m po s i t i o n a l St a n d a r d s f o r F oo d , Pa rt I
F oo d
s ha l l b e r e v i se d as f o l l
o ws :
1. F oo d s s ha l l n o t co n t a i n a n y a n t ib i o t i cs o r ch e m i c a l l y sy n th e s i
z e d an t i b ac t er i a l su bs t a nc e s ( su bs t a n ce s ob t a i n ed by i n s t i ga t i n g
c h e m i c a l r ea c t i o n s t o e le m e n t s a nd / o r c o m p ou nd s th r ou g h c h em
i c a l m e t ho d s , e xc ep t f o r de c o m p os i t i o n ; t h i s a pp l i e s h er e i na f t e r i n
t h i s pa ra g r ap h ) , ex ce p t fo r t h e f o l l o w in g ca se s :

(1 ) Wh e n th e s ub s t a n c e c o nc e r ne d i s i d e n t i c a l t o t h e fo o d a d di t
i ve d e te r m i n e d b y t h e M i n i s t e r of H e a l t h , L a b ou r an d We l f a r e a s h a v
i n g n o p ot e n t i a l t o c au s e d a m a g e t o h u m a n h ea l t h u nd e r A r t i c l e 1 0
o f t h e F oo d S a n i t a t i o n L a w ( L a w No . 2 3 3 , 1 9 47 , he re i n af t e r “ t h e
L a w” ) .

(2 ) Wh e n c o m po s i t i on a l s t a nd ar d s a r e se t f o r t h i n 5 , 6 , 7 , 8 o r 9 b e l o w
f o r t h e s ub s t an c e c on ce r ne d .

(3 ) Wh e n t h e fo o d pr o d uc t co n ce r n e d ha s be e n m a n uf ac t u r e d o r pr o
c es s e d us i n g a fo o d i ng re d i e n t th a t m e e t s th e c o m p os i t i o na l s t a nd ar d s
g iv e n i n

1/126
Provisional Translation
from Japanese Original
5 , 6, 7 , 8 o r 9 b e l o w ( ex c ep t f o r f oo d s c on t a i n i n g a n t i b i o t i c s
o r ch e m i ca l l y sy n th e s i ze d a n t i b ac t e r ia l s ub s t an c es for
w h ic h co m p os i t i o na l s t a nd a r d s ar e no t s e t f o r t h i n 5 , 6 , 7 , 8 o r 9 b e l
o w. )

I n Se c t i o n A G e n e ra l Co mp o s i t i o n a l St a n d a r d s fo r F o o d , P a r t I F oo d , I t e
m 2 sh a l l b e d e l e t e d a n d r e pl a c e d b y I t e m 3, an d I t e m s 4 a n d 5 s ha l l b e r en u
m b e re d t o 3 a n d 4 , re s pe c t i v el y, t o b e f o l l ow e d b y t h e ne w I t e m 5 sh ow n
b e lo w.

2/126
5. F o o d s s h a l l no t c o nt a i n s u b s t a n ce s ( i n c l u di n g s u bs t a nc e s p ro d
u ce d by c he m i ca l t r a ns f o r m a t i on : th i s ap p l ie s h er e i n a f t e r i n t h i s
p ar ag r a p h ) u s e d as in g r ed i e nt s o f a gr i c u l t ur a l ch e m i ca l s an d o th e r
c h e m i c a l su bs t a nc e s l i s t e d i n t h e t a b l e i n ( 1 ) b e lo w. T h e a g r i c u l t
u ra l ch e m i ca l s a n d o t he r ch e m i ca l s ub s t an ce s s t a te d ab ov e , h er e a n d
a l s o l a t e r i n t h i s p a r a gr ap h , r e fe r t o su bs t a n c e s u s ed fo r p u r po s e s
d es i g na t e d b y t h e A g r ic u l t u re , F o re s t r y an d F i s h e r i e s M i n i s te r i a l
O r d in a n c e a c c o rd i n g t o t h e p ro v i s i o n o f P a r ag r a p h 3 o f A r t i c l e 2 o f
t h e L a w C o nc e rn i n g S a fe t y As s u ra nc e a n d Qu a l i t y I m p ro ve m e n t o f
A g r ic u l t u ra l Ch e m i c a l s a n d F e ed s ( L a w No . 35 ,
1 9 5 3 ) , w h ic h i s s t i p ul a t e d u n d e r P a ra g ra p h 1 o f A r t i c l e 1- 2 o f
t h e A g r ic u l t u r a l C he m i ca l s Re gu l a t i o n L a w ( L a w No . 8 2 , 19 4 8 ) , w i t h
s u c h ai m s a s ad d in g t o , m i xi n g w i t h , o r i n f i l t r a t i n g i n t o f ee d s
( t h e fe ed s s t i pu l a t e d un de r P a r a g ra p h 2 o f A r t i c l e 2 o f L a w N o . 35 ) ,
o r m e d i ca l p ro du c t s t o b e us e d f o r an i m a ls , w h ic h ar e s t ip u l a t e d i n
Pa r ag r a p h 1 o f A r t i c l e 2 o f th e P ha r m ac eu t i c a l A f f a i r s L a w ( L a w
N o . 14 5 , 1 96 0) . I n as s oc i a t i o n w i t h th i s r eg u l a t i on , a s a m p l e o f
t h e f oo d s l i s t e d i n t h e “ f oo ds ” c o l u m n i n th e t a b l e i n ( 2 ) b e lo w
s ha l l b e t es t ed u s i n g t h e pa r t
l i s t e d i n t h e “ s a m pl e s ” co l u m n i n t h e t a bl e b y t h e t es t i n g m e
t ho d s d es c r ib e d i n (3 ) t o (1 5 ) be l o w. N o in g r ed i e nt s o f a g r i c u l t u ra l c h
e m i ca l s or o th e r c h e m i ca l s ub s t an ce s s h al l be de t e c t e d i n t h es e t e s t s .

( 1 ) S u b s ta nc e s us e d a s in g r e d i e n t s o f a gr i c u l t ur a l c h e m i c a l s an d o t
h e r ch e m i c a l su bs t a nc e s t h at a r e s t ip u l a t e d t o b e “ N o t d e t e c te d ” i n f o
ods

1. 2, 4, 5-T
2 . A zo c y c l o t i n a n d c y he x a t i n
3. Am itrol
4 . C a p t a fo l
5 . C a rb a d o x
6 . C o u m a ph o s
7 . C h l o r a m ph e n i co l
8 . C h lo r p ro m az i n e
9 . D i e t hy l s t i l be s t ro l
10 . D i m e t r i d a zo l e
1 1 . Da m i no z id e
12 . N i t ro f u r an s
13 . P r op h a m
14 . M e t ro n i d a z ol e
15 . R o n i d a z o l e
(2 ) S a m p l e s

F oo d S a m p l e m a t e r ia l

B a r l e y a n d bu ck wh ea t Th r e sh e d s ee d s

W he a t a n d r y e Hu sk e d s e e d s

R i c e (b r o w n r i ce ) H us k e d se e d s

C o r n ( m a i ze ) S e ed s w i t h t h e hu sk s , t h e s i l k a n d t h e
c o r e s r e m ov e d

O t he r c er e a l g ra i n s Th r e sh e d s ee d s

Pe a s , be an s ( d ry ) ( i n c lu d in g bu t t e r S e ed s w i t h ou t t h e p o d s
b ea ns , c o w b ea n s ( r e d be an s ) , l en t i l ,
l i m a be an s , p eg i a , su l t a n i , s u l t a p y a
a n d w h i t e b ea ns ) * , br o a d b e an s a n d
s oy be an s (d r y ) )

Pe an u t s Wi t h th e sh e l l s r e m ov e d

O t he r l e g u m e s /p u l se s S e ed s w i t h ou t t h e p o d s

A p r ic o t , m u m e p l u m , ch er r y, Wi t h t h e p e du n c l e a n d t h e se e d s
J ap an e s e p l u m ( in c l ud i n g pr u n e ) r e m ov e d
a n d ne c t ar i n e

Pe ac h Wi t h t h e sk i n s a n d t h e s ee d s r e m
o ve d

O r an g e ( i n c lu d i ng n a v e l or a n ge ) , W ho l e f r u i t
g ra pe f r u i t , c i t ru s n a t s u da i d a i
( w ho l e ) , l i m e a n d l e m o n

C i t r u s na t s u da i d a i (p ul p ) an d u n s h u Wi t h t h e p e e l s r e m ov e d
o ra ng e ( p ul p )

C i t r u s na t s ud a i d a i , p e e l s Wi t h t h e ca l y x e s re m o v e d

O t he r c i t r u s f r u i t s Wh o l e f ru i t

Pe a r, J ap an e s e pe a r, q ui n c e an d Wi t h t h e bl o s s o m s ca r s , t h e co re s an d
a pp l e t h e p e d u nc l e s re m o ve d

L oq u a t Wi t h t h e p e du n c l e s , t h e s k in s a n d
t h e s e e d s r e m ov e d

Av oc a d o an d m a ng o Wi t h t h e s e ed s r e m ov e d

Kiwifruit Wi t h t h e s k in s r e m ov e d

G ua v a Wi t h th e ca l yx e s r e m o ve d
Date
Pi n e ap p l e
Pa s s i o n f ru i t an d p a p a y a
B an a n a
S t ra w be r r y, cr an b e r r y, hu ck l eb e r r y,
b l a c kb er r y an d b lu e b e r r y
R a sp be r r y
O t he r b er r i e s
J ap an e s e p e r s i m m on
Wa t e r m e lo n , ma ku w au r i m e l o n a n d m
e l on s
G r ap e
O t he r f r u i t s
T u rn i p ( ro o t s ) an d J ap an e s e r ad i s h
( r oo t s , i n c l u di n g ra d i sh )
T u rn i p ( l ea ve s ) , w a te r c r es s , k a le ,
J ap an e s e r a di s h ( l e a v e s , in c l ud i n g
r ad i s h ) , an d br u ss e l s sp r ou t s
C au l i f l o w e r an d b ro c c o l i
C ab b a ge a n d C h i n e s e c a b b a g e
K yo n a a n d ko ma t s un a ( Ja pa ne s e m u
s t a r d s p in ac h )
H o rs e r ad i s h
Q i ng - g e n g - c a i an d o t h e r
c ru c i f e ro u s v eg e t a b l e s
Sw e e t po t a t o , k o n j a c , t a r o , p o t a t o ,
y a m an d ot h e r p o t a t o e s
P u m pk i n ( i n c l u di n g s q ua sh ) ,
c uc u m b e r ( i n c l u d i n g g h er k i n ) a n d
o r i en t a l p i c k l i n g m e lo n ( ve g e t a b l e )
Wi t h t h e ca l yx e s an d t h e se ed s
r e m ov e d
Wi t h t h e t o p s r e m ov e d
Wh o l e f ru i t
Wi t h t h e p e di c e l s r e m o ve d
Wi t h th e ca l yx e s r e m o ve d
W ho l e f r u i t
Wi t h t h e c a l y xe s r e m o ve d
Wi t h t h e ca l yx e s an d t h e se ed s
r e m ov e d
Wi t h t h e r i nd s r e m ov e d
Wi t h t h e p e d un c l e s r e m o ve d
Ed i b l e p or t i o n s
Wi t h t h e d i r t l i gh t l y r i ns e d o f f w i t h
w a te r
Wi t h th e d e c ay e d l e a v e s r e m ov e d
Wi t h t h e l e a ve s r e m o ve d
A sa m p l e c on s i s t i n g o f on e p o r t i o n
f r o m ea c h o f fo u r h e a d s , w i t h e a c h
h ea d e q u a l l y c u t i n t o f o u r po r t i on s ,
w i t ho u t th e de ca ye d ou t e r l e a v es
a n d t h e c o re s
Wi t h t h e ro o t s a n d t h e d ec ay e d
l e av e s r e m ov e d
R oo t s w i t h th e d i r t l i gh t l y r i n se d o f f
w i t h wa t e r
E d i b l e po r t i on s
Wi t h t h e d i r t l i gh t l y r i ns e d o f f w i t h
w a te r
Wi t h t h e v i ne s r e m ov e d
O t he r c uc u rb i t a c e ou s v eg e t ab l es
A r t i c ho ke , e nd i v e a n d c h i c or y
B u rd o c k a n d s a l s i f y
S h u n gi k u
L e t t u c e ( in c l ud i n g co s l e t t u c e a n d
leaf let t uce )
O t he r c o m p o s i t e v eg e t a b l e s
S hi i t a k e m u s h ro o m , b u t t o n
m u s h ro o m an d o th e r m u s h ro o m s
C e l e r y, p a r s l e y an d m i t su b a
C a r ro t a n d pa r sn i p
O t he r u m b e l l i fe r ou s ve g e t a bl e s
To m a to , e g g p l a n t a n d p i m i e n t o
( s w ee t p ep pe r )
O t he r s o la n c eo u s ve g e t a bl e s
A sp a r ag u s
O n io n , ga r l i c , w e l s h ( i nc l u d i n g l e ek )
a n d m u l t i p l y i n g o ni o n
N i r a an d o t h e r l i l i a c e o u s ve ge t ab l es
G r ee n so yb ea n s , ki dn e y be an s
( i m m a t u re , w i t h po d s ) an d p ea s
( i m m a t u re , w i t h po d s )
Okra
Su ga r ca n e
G i ng e r
Su ga r b ee t
E d i b l e p o r t i on s
Wi t h t h e d e c a y e d l e a v e s re m o ve d
A s a m p l e t h i n l y s l i c e d th e n gr ou n d
w i t h a m e a t g r in d e r, t h e l e av e s
h av i n g b e e n re m o ve d a n d t h e di r t
h av i n g b e e n l i g h t l y r i n se d o f f w i t h
w a te r
Wi t h t h e ro o t s a n d t h e d ec ay e d
l e av e s r e m ov e d
Wi t h t h e d e c ay e d ou t e r l e av e s an d th e
c o r e s r e m ov e d
E d i b l e p o r t i on s
E d i b l e po r t i on s
Wi t h t h e ro o t s a n d t h e d ec ay e d
l e av e s r e m ov e d
Wi t h t h e d i r t l i gh t l y r i ns e d o f f w i t h
w a te r
E d i b l e po r t i on s
Wi t h th e ca l yx e s r e m o ve d
Ed i b l e p o r t i o n s
S t em s
Wi t h t h e ou t e r s k in s a n d th e ro o t
h a i r re m o ve d
Ed i b l e p or t i o n s
Wi t h t h e p e di c e l s r e m o ve d
Wi t h t h e c a ly x e s r e m o v e d
Wi t h t h e h u s k s r e m ov e d
Wi t h t h e l e a ve s r e m ov ed , a n d w i t h
t h e d i r t l i g ht l y r i n se d of f w i t h
w a te r
Wi t h t h e d i r t l i gh t l y r i ns e d o f f w i t h
w a te r
Sp i na c h Wi t h r e d r o ot s l e f t on , a n d w i t h t h e
r oo t h a i r a nd t h e d ec a y e d l e a v es
r e m ov e d
B a m bo o s h o ot s a nd o t he r ve g e t a b l e s Ed i b l e p o r t i o n s

Se s a m e s e e d s , ra pe s ee d s , su n f lo w e r S e ed s on l y
s ee d s , s a f f lo w e r se ed s , co t t o n s ee d s
a n d ot h e r o i l se ed s
A l m o nd , g i nk g o n u t , c h es t n u t , Wi t h t h e h u s k s re m o ve d
w a ln u t , p e c a n an d o t h e r nu t s
C ac a o be a n s a n d c o f f e e be a n s Be an s w i th ou t t h e p od s

Tea Tea l e av e s

Hop D r i e d f l o we r s

O t he r s p ic e s an d o t he r he rb s E d i b l e p o r t i on s

( 3 ) 2, 4 , 5- T a na l y t i c a l m e
t ho d
1 . Eq u i pm e n t
G a s c hr o m a t og r a p h w i t h an e l e c t r o n c a pt u r e de t e c to r ( G C - E C D )
a n d a g a s ch ro m a t og r a ph - m a s s sp ec t r o m e t e r ar e u s e d .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e t o b e us e d .
R ea g e n t s d es i gn a t e d a s “ s p ec i a l g ra de ” i n t h i s s e c t i o n m u s t m e e t
t h e re qu i r e m e n t s fo r “ s pe c ia l gr a d e ” s pe c i f i e d in th e J a pa n
I nd u s t r i a l S t an da rd s f o r t h e r ea g en t s .
Ac e to n i t r i l e : T h r e e hu nd re d m l o f ac e to n i t r i l e i s c on c e n t r a t e d us i
ng a ro t a r y v ac uu m ev ap or a t o r. A f te r r e m o vi n g the ac e t on i t r i l
e, t h e r e s id u e i s d i s so l v ed i n 5 m l o f n - h ex an e . W h e n 5 µ l o f th e
d i s so l v ed re s i du e i s i n j e c t ed in t o t h e G C - E C D f o r a na l ys i s , t h e h e
ig h t s o f p e a k s fo r c o m po un d s ot h e r t h a n n - h e xa n e o n t h e g a s
ch r o m a to g r a m m u s t b e
-1 1
th e sa m e as o r l o we r t h an t h e pe a k f o r ga m m a- B H C a t 2x 1 0 g.
Ac e to n e : Th r e e hu nd r e d m l o f a ce t on e i s c on c e n t r a t e d u s in g a
ro t a r y v ac u u m e va po r a t o r. After r e m ov i n g th e ac e to ne , th e
re s i du e i s di s s o l v ed i n 5 m l o f n- h ex an e . W h e n 5 µ l o f th e d i s so l
v ed re s i d u e i s i n j e c t e d in t o th e G C - E C D fo r a n a ly s i s , t h e h e
ig h t s o f pe ak s f o r c o m po un d s ot h e r th a n n - he x a n e o n th e ga s c h
r o m a to g r a m m u s t b e t h e
-1 1
s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0 g.
 E t he r : Th r e e hu n d re d m l o f d i e t h y l e th e r i s co nc e n t r a t e d us i n g a
ro t a r y va c u u m ev ap or a t o r. A f te r re m ov in g t h e d i e t h y l e t he r, t h e
re s i d u e i s di s s o l v ed i n 5 m l o f n - h ex an e . W h e n 5 µ l o f t h e d i s so l v
ed re s i d u e i s i n j e c t e d in t o the GC -ECD fo r a na l ys i s , the
he i gh t s o f pe a k s f o r c o m po un d s ot h e r t h an n - he x a n e o n th e ga s c
h r o m a to g r a m m u s t b e t h e
-1
s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0
1
g.
S od i u m ch l o r id e : S o d i u m c h lo r i d e ( s pe c i a l g ra de ) . I n c as e s w he r e
a s ub s t an c e t h a t i n t e r fe r e s w i t h th e a n a l y s i s o f an i ng r e d i e n t o f
th e a gr i c u l t ur a l c h em i c a l pr o d uc t c on ce rn e d i s c o n t ai n e d , i t s h
ou l d b e r in s e d o u t w i t h a s o l v e n t s u c h a s n - h ex a ne .
S yn t he t i c m a g ne s i u m silicate ( F lorisil) fo r co l u m n c hr o m a
to g r ap hy : F l o r i s i l (p a r t i c l e s iz e : 1 50 - 25 0 µm ) p ro du c ed
fo r c o l u m n c hr o m a to g r ap h y i s h e a te d a t 1 3 0 ° C fo r m o r e th a n
1 2 h o ur s b e f o r e be i n g al lo w e d t o co o l i n a de s ic c a t o r.
D ia t o m ac eo u s ea r t h : D i a t o m a ce ou s e ar t h fo r c h e m i c a l an a ly s i s i s
u se d . E t h y l a ce t a t e : T h r e e h u nd re d m l o f e th y l ac e t a t e i s c o n
c en t r a t e d u s i n g a ro t a r y va cu u m e va po r a to r. A f te r r e m o vi n g th e et
hy l ac e ta t e , t h e
re s i du e i s d i s so l v e d i n 5 m l o f n - he xa n e . W h en 5 µ l of th e d i s so l v
e d re s i du e i s i n j ec t ed in t o t h e G C - E C D fo r a na l y s i s , t h e he i gh t s of
pe a k s fo r c o m po un d s o t h e r t h an n - h e x a ne on t h e g a s ch r o m a
to g r a m m u s t b e th e sa m e as or l o we r t h an t h e pe a k f o r ga m m a-
-1 1
B H C at 2 x1 0 g.
R ea g e n t f o r bu t y l es t e r i f i c a t i o n : Te n g ra m s o f bo ro n t r i f l u o r id e e t h e r
co m p l e x i s d i s so l v e d i n 2 5 m l o f n - bu t a
no l .
n- H ex an e : Th r e e h u n d r ed m l o f n - h ex an e i s c on c e n t r a t e d t o 5 m l
us i n g a r o t a r y va cu u m ev ap or a t o r. W he n 5 µ l o f t h e c on c e n t r a t e d
sa m p l e i s i n j e c t e d in t o t h e G C - E C D f o r a n a ly s i s , t h e h e ig h t s
of pe ak s f o r c o m po un d s ot h e r t h a n n - h ex a ne o n t h e ga s c h r o m a
to g r a m m u s t b e th e s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B
-1 1
H C at 2 x1 0 g.
Wa t e r : Distille d wate r is us ed . In c as e s wh e r e a su bs t a n c e
th a t in t e r f e re s w i t h an a l y s i s of a n i ng r e d ie n t o f t h e ag r i c u l t ur a l
ch e m i ca l p ro du c t c o nc er n e d i s c on t a i n e d , i t s h ou l d b e r i n se d o u t
w i t h a s o l v e n t su c h as n - h e x an e .
 So d i u m su lfate (a nh y d r o u s ) : So d i u m su lfate (a n h y d r o u s )
( s p ec i a l g ra de ) . I n c a s e s wh e r e a su bs t a nc e t h at in t e r f e re s w i t h a n
a ly s i s o f a n in g r e d i en t of the a gr i cu l t u r a l c he m i ca l pr od u c t
co nc e r n e d i s c on t a in e d , i t s ho u l d b e r i n se d ou t w i t h a s o l v en t s u
ch a s n - h ex a ne .
Me t h a no l : T h r e e h u n d r ed m l of m e th a n o l i s c on c e n t r a t e d us i n g a ro t a r y
 va c u u m ev ap or a t or. A f t e r r e m o vi n g t h e m e t h an o l , t h e re s i d u e
i s d i s so l v e d i n 5 m l o f n - he xa n e . W h en 5 µ l o f t h e d i ss o l v e d
re s i d u e i s i n j e c t e d in t o t h e G C - E C D f o r a n a ly s i s , t h e h e ig h t s
of pe ak s f o r c o m po un d s ot h e r th a n n - he x a n e o n th e ga s c h r o m a
to g r a m m u s t b e t h e
-1
s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0
1
g.
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
2 ,4 , 5 - T: T h i s p ro d u ct s ho u l d c o n s i s t o f 98 % o r m o r e
2 , 4 ,5 - T. M e l t i n g po i n t : 1 56 ° C
4 . P r ep a ra t io n of t es t s o lu t i on s
a. E x t r a c t i o n m e t ho d s
i . C e re a l g ra i n s , l e gu m es / pu l s e s a nd s e e d
s
Ce r e a l gr a i n s , l e g u m e s /p u l se s an d se ed s ar e c ru s he d s o a s t o
pa s s t h ro u g h a s ta nd a r d m e s h s ie v e ( 4 2 0 µ m ) b ef o r e b e i n g
we i gh e d t o p re pa r e a 1 0 .0 - g ra m s a m p l e . Tw e n t y m l o f w a te r i s
ad de d t o t h e o bt a i n e d s a m p l e a n d l e f t t o s t a n d f o r t w o h o u r s .
Th e n , a c e t o n e (1 0 0 m l ) an d 4 m o l / l h yd ro ch l o r i c a c i d ( 5 m l )
ar e ad d e d . A f te r ho m o ge n iz i n g f o r t h re e m i nu t es , t h e m i xt u r e i s
f i l t er e d b y su c t i o n in t o a ro t a r y v ac uu m e va po r a to r us i n g
f i l t e r p ap e r c ov er e d w i t h a o ne - c e nt i m e t e r - th i c k l a ye r o f d i a t o
m ac eo u s ea r t h . Th e re s i du e o n th e s u r f ac e o f t h e f i l t e r pa pe r
is c o l l ec t e d a n d ac e to n e ( 5 0 m l ) i s a d de d b ef o r e h o m
og en i z in g fo r t h r e e m i n ut e s . Th e a bo v e pr oc ed u r e i s r ep e a t e d
an d th e f i l t r a t e i s ad d e d t o t h e ro t a r y va cu u m ev ap or a t o r a n d c o
n ce n t ra t e d t o ap pr ox i m a t e l y 3 0 m l at 40 ° C o r l o we r.
Th e co n c e n t r a te d s o l u t i o n i s t r a ns f e r r e d t o a 3 00 - m l se pa r a t i
n g fu nn e l a l r e ad y co n t a i n i ng 1 0 0 m l of 10 % s o d iu m c h lo r i d e so l
u t i o n . T h e e g gp l a n t - sh ap e d f l as k of t h e ab o v e ro t a r y va cu u m
ev ap or a t or i s w a sh e d w i t h 1 0 0 m l o f e th y l a c e t a t e t o o b t a i n t h
e wa s h i n gs , wh i c h a r e a dd e d t o t h e s ep a r a t i n g f un ne l a b ov e .
Th e m i x tu r e i s s h ak e n
vi go r o u s l y f o r f i v e m i n ut e s u s i n g a s h a k er b e fo r e b e i n g l e f t t o
s ta n d, an d th e n t h e e t hy l ac e t a t e l a ye r i s t r a ns f e r r e d t o a 3 0 0 - m l
co n ic a l
f l as k . F i f t y m l o f e t h y l a c e t a t e i s a d d e d t o t h e a qu e o u s l a y e r,
an d , af t e r r ep e a t i n g t h e a b o v e p ro ce du r e , th e e t hy l ac e t a t e l a y e r
i s ad d e d
to the c o n i ca l flask . An a de q ua t e am o un t of s od i u m
su l f a t e (a nh y dr ou s ) i s a l s o a d d e d t o t h e f l a sk , wh i c h i s l e f t t o
s ta n d fo r 1 5 m i n ut e s a n d s h a k en f r o m t i m e t o t i m e. Th e co n t en t
o f t h e f l a s k i s th e n f i l t e r e d i n t o a r o t a r y v ac uu m ev ap or a t o r. Th e
co n ic a l f l as k i s
 th e n wa s h e d w i t h 2 0 m l o f e t hy l a c e ta t e t o o bt a i n th e w a sh i ng s ,
w i t h w h ic h th e re s i du e on t h e s u r fa c e o f th e f i l t e r p ap e r i s w a sh e d
t w i c e . T h e wa s h in g s o bt a i ne d f r o m th e r ep e a t ed w a sh i n g ar e t h en
ad de d t o t h e r o t a r y va cu u m e va po r a t o r an d c on ce n t ra t e d t o
ap pr ox i m a t e l y 1
m l a t 40 ° C o r l o we r, a n d th e n t h e so l v e n t i s e v a po r a te d t o n e
ar dr yn e s s i n a n i t r og e n s t r e a m a t ro o m t e m p e ra t u r e .
Th i r t y m l o f n - he x a n e i s a d d e d t o t h e d r i e d r e s id u e a n d th e m i
xt u r e i s t r a ns f e r r e d t o a 10 0 - m l se pa r a t i n g f u n n e l , t o w h i c h 3
0 m l o f n- h ex a n e- s a tu r a t e d a c e t o n i t r i l e i s ad de d . A f t e r s ha k i n g
th e m i xt u r e v ig o r o u s l y fo r f i v e m i n ut e s u s i n g a sh ak e r, t h e fu nn e l
i s l e f t t o s ta n d a n d th e ac e t on i t r i l e l a ye r i s t r a n s fe r r e d t o a 2
00 - m l s ep a ra t i n g fu nn e l . A f te r a d d i n g n - h ex an e - sa t u ra t e d ac e t
on i t r i l e (3 0 m l ) t o t h e n - he x a ne l a y e r, t h e ab ov e p ro c ed ur e i s
r e p ea t e d tw ice and t h e ac e t o n i t r i l e l a y e r i s a d de d t o t h e
se pa r a t i n g f un ne l ab o v e . F i f t y m l o f n - h e x an e sa t u r a t e d with
ac e t o ni t r i l e i s a l s o a dd e d i n t o t h e se pa r a t i n g f un ne l , w h i c h
i s l i g h t l y s ha ke n an d l e f t t o s t an d . T h e a ce t on i t r i l e l ay e r is
th e n t r a n s f er r e d into a rot a ry va cu u m ev a p or a t o r an d c o n
ce n t r a te d t o a p pr ox i m a t e l y 1 m l a t 4 0 ° C o r lo w e r, a n d t h e n t h e
so l v en t i s ev ap or a t e d to nea r d r y n es s in a nit ro g en s t re a m a t
ro o m t e m p e ra t u r e .
i i . F r u i t , v e g e t a bl e s , m a t ch a an d h op s
F r u i t an d v e ge t a bl e s a r e w e ig h e d a c c ur a t e l y t o pr ep a r e a s a m p l e
of ab o u t on e ki l o gr a m . A n a pp ro p r i a t e a m ou n t o f wa t e r i s m
ea su r e d an d a d d e d t o th e sa m p l e , i f re qu i r e d . A f t e r ho m o ge n iz i n
g , a sa m p l e e qu i v a l e nt t o 2 0 . 0 g i s m ea su r e d o ut .
M a tc h a i s we i gh e d t o p re pa r e a 5 . 00 - gr a m s a m p l e , t o w h i c h 2 0 m l
o f wa t e r i s a d de d a n d l e f t t o s t a n d f o r t w o h o u r s .
Ho p s a r e f i r s t c ru s he d i n t o p i e ce s an d w e ig he d t o p re pa r e
a
5 .0 0 - gr a m s a m p l e , t o w h ic h 2 0 m l o f w a te r i s a dd e d a n d l e f t t o s t
an d f o r t w o h ou r s .
Ac e to n e (1 0 0 m l ) an d 4 m o l / l hy dr oc h l o r i c a c i d ( 5 m l ) ar e ad de d
to
th e o b t a i n e d s a m p l e . T h e m i x tu r e , af t e r ho m o ge n iz i n g f o r t h
re e m i nu t es , i s f i l t e r e d b y s uc t i o n i n t o a r o t a r y v ac uu m ev ap or a t o r
u s in g f i l t e r p a pe r co ve r e d with a o ne - c e n t i m e t e r - th i c k
l ay e r o f di a t o m a ce ou s ea r t h . T h e r e s id u e o n t h e s u r fa c e of th e
f i l t e r p a p e r i s c o l l e c t e d an d ac e t o n e ( 5 0 m l ) i s a dd e d b e fo r e h o
m og en i z i n g fo r th r e e m i n u t es . Th e a bo v e p ro ce du r e i s r ep e a t e d ,
a nd t h e f i l t r a t e i s
 ad d e d to the ro t a r y v ac u u m ev a po ra t o r an d c on ce n t ra t e d
t o ap pr o x i m a te l y 3 0 m l at 40 ° C o r l o w e r.
Th e c o n c e n t r a te d s o l u t i o n i s t r a ns f e r re d t o a 3 0 0- m l s ep a r a
t i n g f un ne l a l r e ad y c on t a i n i n g 1 0 0 m l o f 1 0 % s o di u m ch l o r id e
so l u t i o n . T h e e g gp l a n t - sh ap e d f l as k o f t h e ab o v e ro t a r y va cu u m
ev ap or a t o r i s wa s he d w i t h 1 0 0 m l o f e th y l ac e t a t e t o ob t a i n t h e
wa s h i ng s , wh i c h a r e co m b in e d i n t h e s e p ar a t i n g fu nn e l a b o ve .
Th e m i x tu r e i s sh ak e n v ig o r o u s l y fo r f iv e m i nu t e s u s in g a s ha ke r
b e fo r e be i n g l e f t t o s t a n d a n d t h e et h y l a ce t a t e l a y e r i s
t r an s fe r r e d t o a 3 00 - m l c o ni c a l f l as k . F i f t y m l o f e th y l a ce t a t e i s
ad d e d t o th e a qu eo u s l a ye r a nd , a f t e r re pe a t i n g t h e ab ov e
pr oc ed u r e , t h e e t hy l a c e t a t e l a ye r i s co m b in e d i n th e c o n i ca l
f l as k . A n ad e q ua t e am ou n t o f so d i u m s u l fa t e ( an h y d ro u s ) i s
a ls o ad d e d t o t h e f l as k , w h i c h i s l e f t t o s t an d fo r 1 5 m i nu t e s an d
sh ak e n f r o m t i m e t o t i m e . T h e co n t e n t o f th e f l a s k i s th e n f i
l t e r e d i n t o a ro t a r y va cu u m ev ap or a t o r. Th e co n ic a l f l as k i s
th e n wa s h e d w i t h 2 0 m l o f e t h y l a ce t a t e t o o bt a i n th e wa s h in g s , w i
t h w h ic h t h e r e s i du e o n t h e su r f ac e o f th e f i l t e r p ap e r i s wa s he d
t w i c e . T h e wa s h i n g s o bt a i n ed f r o m t h e r e p ea t ed wa s h in g ar e t h
en a dd e d t o th e ro t a r y va cu u m e va po r a t o r an d co n c e n t r a t e d t o
ap pr ox i m a t e l y 1
m l a t 40 ° C o r l o w e r, a n d t h e n t h e so l v e n t i s e v ap or a t e d t o
ne a r d ry ne s s i n a ni t r o ge n s t re a m at r oo m t e m p er a t u re .
i i i . Te a s ot he r th a n m a t ch a
A 9 . 00 - g ra m sa m p l e so ak e d i n 5 4 0 m l of wa t e r at 1 0 0 ° C i s l e f t
t o s t an d at r o o m t e m p e ra t u r e fo r f iv e m i nu t e s b ef o r e b e i n g f i l t
er ed . F r o m t h e c oo l e d f i l t r a t e, 36 0 m l i s t r an s fe r r e d in t o a 50 0- m l
co n ic a l f l as k , t o w h i c h 1 8 g o f so d iu m ch l o r i d e a n d 4 m o l / l
hy dr oc h l o r i c a c i d ar e a d de d t o ad j us t t h e p H t o 1 o r l o we r.
Th i s so l u t i o n i s t r a ns f e r r e d t o a 1 , 00 0 - m l s ep a ra t i n g fu n n e l
a l re ad y c o nt a i n i n g 1 0 0 m l o f e t hy l ac e ta t e b ef o r e sh ak i n g
vi go r ou s l y f o r f i v e m i n ut e s us i n g a sh a k e r. T h e s ha k e n m i x tu r e
i s l e f t t o s t an d a n d th e e t h y l a c e ta t e l a y e r i s t r a ns f e r r e d t o a
30 0- m l c on i ca l f l a s k . On e hu nd re d m l o f e th y l a ce t a t e i s ad d e d
t o th e a qu eo u s l a ye r an d , af t e r re pe a t i n g t h e ab ov e pr o c e du re , t h e
e th y l a c e t a t e l a ye r i s c o m b in e d i n th e c on i c a l f l as k . A n a de q ua t e
a m ou n t of so d iu m su l f a t e ( a n h y d r ou s ) i s a l s o ad d e d t o t h e
f l as k , w h i c h i s l e f t t o s t a n d f o r 1 5 m i nu t e s a n d s ha k e n f r o m t i m
e t o t i m e . T h e c on t e n t o f t h e f l as k i s th e n f i l t e re d i n t o a
1010/
126
ro t a r y va cu u m e va po r a t o r. T h e c o n i ca l f l a s k i s th e n wa s he d w i t h
20

1111/
126
 m l o f e t hy l ac e ta t e t o o bt a i n th e w a sh i ng s , w i t h w h ic h t h e re s i du e
on the s u r f ac e of the fi lter pa pe r is wa s h e d twic e. The
wa s h i n g s ob t a i n e d f r o m t h e re pe a t e d wa s h in g a r e t h e n ad de d t
o t h e ro t a r y v ac u u m e va po r a t o r a n d co n c e n t r a t ed t o a p p r ox i m a
t e l y 1 m l at 40 ° C o r l o we r, an d t h e n t h e s o lv e n t i s ev ap or a t e d
t o n ea r dr yn e s s i n a ni t r o g e n s t r e am at r oo m t e m p er a t u re .
i v. F oo d s o th e r t h a n t h os e l i s t e d i n i t o i i i
ab ov e
E x t r ac t s ar e ob t a i n e d b y th e m e t ho d s de sc r i be d i n i o r
i i . b . H y d ro l y s i s
T h e re s i d u e o b t a i n e d b y t h e e x t r a c t i o n m e t ho d d e s c r ib e d i n
“ a . E x t r ac t i o n m e t ho d s ” is di s s o lv e d in 20 ml of me
t h an o l a n d t r an s fe r r e d t o a 1 00 - m l e g g p l a n t - sh ap e d f l as k , t o w h i c h
1 0 m l o f a 1 . 5 m o l / l so d i u m hy dr ox i d e so l u t i o n i s a dd e d . A
r e f l u x co nd en se r i s a t ta c h e d t o t h e f l as k , w h ic h i s t h e n h ea t ed f o r
3 0 m i n ut e s i n a w a t e r b a t h at 8 0 ° C a n d a l l o we d t o c o o l . Th e
s o lu t i o n i s t r a n s fe r r e d t o a ro t a r y va c u u m ev ap or a t o r an d m o s t
o f th e m e th a no l i s re m o ve d a t
4 0° C o r l o we r. T h e r e s id u e i s t h e n f i l t e r e d b y s uc t i o n t h r ou g h a g l
a s s f i l t e r (p o r e s i z e G 3 ) . T h e f i l t r a t e i s t r an s fe r r e d t o a 3 00 - m l
s ep a ra t i n g fu nn e l ( I ) . Th e re s i du e o n th e gl a s s f i l t e r i s wa s he d
w i t h a s m a l l a m ou n t o f ac e t o n e a n d wa t e r a nd t h e w a s h in g s
a r e ad d e d t o t h e s ep a ra t i n g fu nn e l a b o v e, t o w h i c h 5 0 m l o f
e t he r an d 1 0 0 m l o f 1 0 % s od i u m c h lo r i d e sol u t i on are al so
a dd e d . T h e m i xt u r e i s s ha k e n vi go r o u s l y f o r f iv e m i nu t e s us i n g
a sh ak e r b e fo r e be i n g l e f t t o s t a n d , a n d t h e n t h e aq ue o u s l a y e r
i s t r an s fe r r e d t o a 3 00 - m l s ep a ra t i n g f un ne l ( I I ) , t o wh i c h 4 m o l / l
h yd r oc h lo r i c a c i d i s ad de d t o a d ju s t t h e p H t o 1 o r lo w e r. F i f t y m l
o f e th y l ac e t a t e i s ad de d t o t h e ad j u s t ed s o lu t i o n b e f o r e be i n g
v i g o ro u s l y s ha ke n f o r f i v e m i nu t e s u s i n g a sh ak e r an d l e f t t o
s t an d . T h e e t h y l ac e ta t e l a ye r i s th e n t r a ns f e r r e d t o a 3 00 - m l c on i c
a l f l a s k. F i f t y ml o f e th y l ac e ta t e i s a dd e d t o t h e aq u e o u s l a y
e r an d , a f t e r re pe a t i n g t h e a b o v e pr oc e d u r e, th e e t h y l ac e ta t e
l a ye r i s co m b in e d i n th e co n ic a l f l a s k de sc r i b e d ab ov e . A n ad e q
u a t e a m o un t o f s od i u m s u l fa t e (a nh y d r o us ) i s a ls o a d d e d t o t h e
f l a sk , w h i c h i s l e f t t o s ta n d f o r 1 5 m i nu t e s a n d sh a k e n f r o m t i m e
t o t i m e . Th e c on t e n t o f th e f l as k i s t h e n f i l t e r e d i n t o a ro t a r y
v ac u u m e va po r a to r. Th e c on i c a l f l as k i s th e n w a sh e d w i t h 2 0 m l
o f e t h y l a ce t a t e t o ob t a i n t h e w a sh i ng s , w i t h wh i c h t h e r e s id u e
o n t h e s u r f a ce o f t h e f i l t e r p ap e r i s wa s he d . T h e wa s h in g s ar e a
dde d to t h e rota ry
 v ac u u m e v a po ra t o r a n d co nc en t r a t ed t o a p p r o x i m a t e l y 1 m l at
4 0° C o r lo w e r.
c . Bu t y l es t e r i f i ca t i o n
T h e s o l u t i o n ob t a i n e d b y t h e h y d r ol y s i s de s c r i b e d i n “ b . H y dr o l y
s i s ” i s t r an s fe r r e d t o a 2 0 - m l eg gp l a n t - sh ap e d f l as k , an d t h en th e
so lv ent is e v a p or a t ed to n e ar d r y n es s in a n i t r og e n stre
am at r oo m t e m p e ra t u r e . A f te r th e d es i c ca t i o n , o n e m l o f a
b ut y l es t e r i f i ca t ed a ge n t i s a d de d . A re f l u x co n d en s e r i s a t t a c h e d t
o th e e gg p l a n t - sh a p e d f l as k d es c r i be d a b o v e , w h ic h i s t h en h ea t e d
f o r 3 0 m i n u t e s i n a wa t e r ba t h a t 9 0 ° C an d al l o we d t o c o o l . Th e
c o o l e d m i x tu r e i s t r an s fe r r e d t o a 20 0- m l se pa r a t i n g f un n e l a l re a d
y co n t a i n i n g 5 0 m l o f 10 % so d i u m c h lo r i de s o l u t i on an d 5 0 m l
o f n- h ex an e b e f o r e sh ak i n g v i g or o u s l y fo r f iv e m i nu t e s u s i n g a
s h a k er. T h e sh a k e n m i xt u r e i s l e f t t o s t a n d an d t h e n - h e xa n e l a y e
r i s t r a ns f e r r e d t o a 2 0 0- m l c on i c a l f l a sk . F i f t y ml o f n - h e x a n e i s
a d d e d t o th e a q u eo u s l a y e r an d , a f t e r r ep e a t i n g t h e a bo v e pr o c
e du re , t h e n - he x a ne l a y e r i s c o m b i n e d i n th e c on i ca l f l a s k
d es c r ib e d a b ov e . A n a d eq u a t e a m ou n t o f s o d i u m s u l fa t e ( an h y
d ro u s ) i s a l s o a d d e d t o t h e f l a sk , w h i c h i s l e f t t o s t a n d fo r 1 5 m i
n ut e s an d sh ak e n f r o m t i m e t o t i m e . T h e c on t en t o f th e f l a s k i s t h e n
f i l t e r e d i n t o a ro t a r y v ac uu m ev ap or a t o r. T h e co n i c a l f l a s k i s th e n
w a sh e d w i t h 1 0 ml o f n - he xa n e t o ob t a i n t h e w a s h in g s , w i t h w h ic h
t h e r e s id u e o n t h e su r f ac e o f th e f i l t er p ap e r i s wa s h ed . T h e w a
s h in g s ar e a dd e d t o t h e r o t a r y va cu u m e va po r a t o r an d c o nc en t r a t e
d t o ap pr ox i m a t e l y 2 m l at
4 0° C o r l o
w e r. d . C l e a n -
up
F i v e g ra m s o f f l o r i s i l fo r c o l u m n c hr o m a to g r a p h y s u sp e n d e d
i n n- h ex a n e i s a d d e d t o a c hr o m a to g r ap h t u b e ( in n e r di a m e te r : 1
5 m m an d l e ng t h : 30 0 m m ) , ov e r w h ic h a pp ro x i m a t e l y 5 g o f s od i u m
s u l fa t e (a nh y d ro u s ) i s fu r t h e r ad d e d . T h e n - h e xa n e i s t h e n s p i l t
o u t o f t h e c o lu m n un t i l o n l y a s m a l l a m ou n t r e m a in s o n t h e
p a ck i n g o f t h e co l u m n , i n t o wh i c h th e s o lu t i o n ob t a i n e d b y th e
b ut y l e s te r i f i c a t io n de sc r i b e d i n “ c . Bu t y l e s te r i f i c a t i o n ” i s p o
u re d . T h e n , 5 0 m l o f a m i xt u r e o f e t he r a n d n - he xa n e ( 1 : 1 9 ) i s a
l s o p ou re d i n t o th e c o l u m n an d t h e e f f l ue n t i s d i s c a rd ed . I n a dd i t i
o n , 1 5 0 m l o f a m ix t u r e o f et h e r a n d n- h ex a n e (3 : 1 7 ) i s a ls o p o u r
e d i n t o t h e co l u m n a n d t h e e l u a t e i s co l l e c t e d in a rot a ry
v ac u u m e v a po ra t or and co nc en t r a t e d t o a pp ro x i m a t e l y 1 m l
a t 40 ° C o r lo w e r, an d t h e n t h e s o lv e n t i s
 e va po r a te d t o n ea r dr yn e s s i n a n i t ro g e n s t r e a m a t ro o m t e m p
e ra t u r e . T h e re s i d u e ob t a i n e d i s di s s o lv e d i n n - h e x a n e t o m a k e
e x a c t l y 1 0 m l o f so l u t i on , wh i c h i s us e d a s t h e s a m p l e s o lu t i o n .
5 . De t e r m in a t i on
a . Qu a l i t a t i v e t es t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s o b t a in e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d
i n t h e re f e r en c e m a t e r i a l u nd e r t h e p ro ce d u r e d es c r ib e d i n “
c . B u t y l e s te r i f i c a t i on ” i n “ 4 . P r e pa r a t i o n o f t es t s o l u t i o ns . ”
Te s t i n g c on d i t i
on s
C o lu m n : A s i l i ca t e g l a s s ca p i l l a r y co l u m n ( i nn e r d i a m e t e r : 0 . 2 5
mm an d l e n gt h : 30 m ) co a te d w i t h 5 % p he ny l m e th y l s i l i c on e
fo r ga s c hr o m a t og r a ph y t o a t h i c k n e s s o f 0 .2 5 µ m i s u se d .
C o lu m n t e m p er a t u re : Th e c o l u m n t e m p er a t u r e i s h e l d at 5 0° C fo r o
n e m i n ut e , f o l l ow e d b y a n i n c re a s e o f 25 ° C e v e r y m i n ut e un t i l
re a c h i n g
12 5° C , a f t e r wh i c h t h e t e m p e ra t u r e i s i n c r e as e d b y 1 0° C e v
er y m i nu t e u n t i l r ea c h i n g 3 00 ° C , wh e r e i t i s h e l d f o r f iv e m i
nu t es .
Inlet tem p er a t u re :
2 60 ° C
D e te c t o r : S h ou l d b e o p e ra t e d at
3 00 ° C
G a s f lo w r a t e : N i t ro g e n o r he l i u m i s us e d a s th e ca r r i e r ga s . T h e f l
ow rate sh ou l d be a d ju s t e d s o th a t n - bu t y l ( 2 , 4 ,5 - t r i c h l o
ro ph e n o x y ) ac e ta t e f l o w s o u t i n a pp ro x i m a t e l y 1 5 m i nu t es .
b . Qu an t i t a t i v e t es t s
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e c on d i t i on s d es c r ib e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t h e r
t h e p e a k h e ig h t o r p ea k a re a m e th od .
c . Co n f i r m a t i o n t e s t s
G a s ch r o m a to g r a ph y / m a s s s pe c t r o m e t r y i s p e r f o r m ed u nd e r th e
s a m e c on d i t i o n s as t ho s e d e s c r ib e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t e s t s . ” Te s t
r e su l t s ob t a i n e d i n t h e r e fe r e nc e m a t e r ia l m u s t b e t h e s a m e as
t h e r e su l t s o bt a i n e d u n d e r t h e pr o c ed ur e d es c r i b e d i n “ c . Bu t y l
e s te r i f i c a t i o n ” i n “ 4 . P r e pa r a t i o n o f t e s t so l u t i o ns . ” Th e q u an t i t y m
a y b e d e te r m i n e d b y e i t he r t h e p e a k h e i g h t o r pe a k ar e a m e th od , i
f r eq u i r ed .
(4 ) A na l y t i c a l m e th o d f o r az oc y c l o t i n an d cy h ex a t i n
1 . Eq u i pm e n t
A g a s ch r o m a to g r ap h w i t h a f l a m e p ho to m e t r i c d e t e c t o r
( i n t e r fe r en c e f i l t e r for tin de t e r m i n a t io n , wa ve l e ng t h : 6 10 n m )
and a gas
 c hr o m a t og r a ph - m a s s sp ec t r o m e t e r ar e
u se d .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
R ea g e n t s d es i gn a t e d a s “ s p ec i a l g ra de ” i n t h i s s e c t i o n m u s t m e e t
t h e re qu i r e m e n t s fo r “ s pe c ia l gr a d e ” s pe c i f i e d in th e J a pa n
I nd u s t r i a l S t an da rd s f o r t h e r ea g en t s .
Ac e to n i t r i l e : T h r e e hu nd re d m l of ac e to n i t r i l e i s c on c e n t r a t e d u s i
ng a ro t a r y v ac uu m ev ap or a t o r. A f te r r e m o vi n g the ac e t on i t r i l
e, t h e r e s id u e i s d i s so l v ed i n 5 m l o f n - h ex an e . W h e n 5 µ l o f th e
d i s so l v ed re s i du e i s i n j e c t ed in t o t h e G C - E C D f o r a na l ys i s , t h e h e
ig h t s o f p e a k s fo r c o m po un d s ot h e r t h a n n - h e xa n e o n t h e g a s
ch r o m a to g r a m m u s t b e
-1 1
th e sa m e as o r l o we r t h an t h e pe a k f o r ga m m a- B H C a t 2x 1 0 g.
Ac e to n e : T h re e hu nd re d m l o f a ce t o n e i s co nc e n t r a t e d us i n g a r o
t a r y va cu u m ev ap or a t or. A f te r r e mo v in g the a ce t on e , the
re s i du e i s di s s o l v ed i n 5 m l o f n- h ex an e . W h e n 5 µ l o f th e d i s so l
v ed re s i d u e i s i n j e c t e d in t o th e G C - E C D fo r a n a ly s i s , t h e h e
ig h t s o f pe ak s f o r c o m po un d s ot h e r th a n n - he x a n e o n th e ga s c h
r o m a to g r a m m u s t b e t h e
-1 1
s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0 g.
3 m o l/l e th y l m a gn es i u m b r o m id e - e th e re a l s o lu t i on : 3 mo
l / l e th y l m a gn e s i u m b r o m id e - e th e re a l s o lu t i o n .
E t he r : T h r e e h u n dr e d m l o f d i e t h y l e th e r i s co nc e n t r a t e d us i n g a r o
t a r y v ac u u m e va po r a t o r. A f t e r r e m o vi n g t h e d i e t h y l e th e r, t h e
re s i du e i s d i s so l v e d i n 5 m l of n- he xa n e . W h en 5 µ l o f t h e d i ss o l v
ed re s i d u e i s i n j e c t e d into the GC-ECD for an a l ys i s , the he
ig h t s o f pe ak s f o r c o m po un d s ot h e r th a n n - he x a n e o n th e ga s c h
r o m a to g r a m m u s t b e t h e
-1 1
s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0 g.
S od i u m ch l o r id e : S o d i u m ch l o r i d e ( sp ec i a l g ra de ) . I n c as e s w he r e
a s ub s t an c e t h a t i n t e r fe r e s w i t h a na l ys i s o f a n in g r e d i en t of
t h e a gr i c u l t ur a l c he m i ca l p ro d u ct c o nc er n e d i s co n t a in e d , i t
sh o u l d b e r i n se d ou t w i t h a so l v en t su c h as n - he x a n e .
S yn t he t i c m a gn es i u m s i l i c a t e ( F l o r i s i l ) f o r co l u m n ch r o m a
to g r ap h y : F l o r i s i l ( p articl e s i ze : 1 5 0- 2 5 0 µm ) pr o d uc e
 d for c o l u m n ch r o m a t og r a ph y i s h e a te d a t 1 3 0 ° C fo r m o r e
th a n 1 2 h o ur s b e f o r e be i n g al lo w e d t o co o l i n a de s ic c a t o r.
D i a t o m a ce ou s ea r t h : D i a t o m a ce ou s ea r t h f o r ch e m i ca l a n a l ys i s i s
u se d .
 C y he xa t i n s t an da r d s o lu t i o n : A m i xt u r e o f a c e t i c a c i d a n d e th y l a
ce t a t e ( 1 :9 9 ) i s ad d e d t o 1 0 . 0 m g of cy h ex a t i n t o m a k e a 1 0 0 - m l
so l u t i o n . O f th e 1 0 0 - m l so l u t i o n , 1 0 m l i s t a ke n ou t an d n - h ex an e
i s a dd e d t o m a k e
10 0 m l o f m i x .
S od i u m do de cy l s u l fa t e : A r ea g en t w i t h a p u r i t y o f 85 % o r hi gh e r
i s u se d .
n- H ex an e : Th r e e h u n d r ed m l o f n - h ex an e i s c on c e n t r a t e d t o 5 m l
us i n g a ro t a r y va cu u m e va po r a to r. W he n 5 µ l o f t h e co nc e n t r a te d
sa m p l e i s i n j e c t e d in t o th e G C - E C D fo r a n a ly s i s , t h e h e ig h t s
of pe ak s fo r co m p ou nd s o th e r t h a n n - h ex a n e o n t h e g a s c h r o m a
to g r a m m u s t b e t h e
-1 1
s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0 g.
Wa t e r : Distille d wate r is us ed . In c as e s wh e r e a su bs t a n c e
th a t in t e r f e re s w i t h an a l y s i s of a n i ng r e d ie n t o f t h e ag r i c u l t ur a l
ch e m i ca l p ro du c t c o nc er n e d i s c on t a i n e d , i t s h ou l d b e r i n se d o u t
w i t h a s o l v e n t su c h as n - h e x an e .
So d i u m su lfate (a nh y d r o u s ) : So d i u m su lfate (a n h y d r o u s )
( s p ec i a l g ra de ) . I n c a s e s wh e r e a su bs t a nc e t h at in t e r f e re s w i t h a n
a ly s i s o f a n in g r e d i en t of the a gr i cu l t u r a l c he m i ca l pr od u c t
co nc e r n e d i s c on t a in e d , i t s ho u l d b e r i n se d ou t w i t h a s o l v en t s u
ch a s n - h ex a ne .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
C y he xa t i n : Th i s p ro d u c t sh o u l d c on s i s t o f 9 9 % o r m o r e cy
h ex a t i n . M e l t i n g po i n t : 1 9 5- 1 9 8 ° C
4 . P r ep a ra t io n of t es t s o lu t i on s
a . Ex t r a c t i o n m e th od s
i . L eg u m e s / p ul s e s a n d se ed s
L e gu m es / p ul s e s a n d se ed s ar e c ru s he d s o as t o pa s s th r ou g h
a s ta nd a r d m e s h s ie v e (4 2 0 µ m ) b e fo r e be i n g w e ig h e d t o
pr ep a r e a
10 . 0 - gr a m s a m p l e . Tw en t y m l of w a te r i s ad d e d t o t h e o bt a
in e d s a m p l e an d l e f t t o s ta n d f o r t w o h ou r s .
T h en , 1 0 0 m l o f a m i xt u r e of ac e t o n e a n d a c e t i c ac i d ( 99 : 1 ) i s ad d e
d. T h e m i xt u r e , a f t e r h o m o ge n iz i n g fo r th r e e m i nu t es , i s f i l t e re d
by
su c t i o n i n t o a ro t a r y v ac u u m ev ap or a t o r us i n g f i l t er p ap e r c o v e
re d w i t h a o ne - ce n t i m e te r - th i c k l a ye r of di a t o m ac eo u s e ar t h .
Th e r e s id u e on th e s u r fa c e o f t h e f i l t e r pa pe r i s c o l l e c t e d a n d 5 0
m l o f a m i xt u r e of ac e t o n e and ac e t i c ac i d ( 99 : 1 ) is ad
de d b ef o r e h o m og en i z i n g fo r t h r e e m i nu t es . Th e a b o v e pr oc e d
ur e i s re pe a t e d , an d the fi ltrate is a d de d to th e ro t a r y
va cu u m ev ap or a t o r a n d
 co nc e n t r a t e d t o ap pr o x i m a t e l y 3 0 m l at 40 ° C o r
lo w e r.
T h e co nc e n t r a te d s o l u t i o n i s t r a n s fe r r e d t o a 5 0 0 - m l s ep a ra t i
n g fu nn e l a l r e a d y c o n t a i n i n g 2 0 0 m l o f 1 0 % s o d iu m ch l o r id e s o l
u t i o n . T h e eg g p l a n t - sh ap e d f l as k o f t h e a bo v e r o t a r y v ac uu m
ev ap or a t or i s wa s he d w i t h 1 0 0 m l of n - h ex a n e t o ob t a i n t h e
wa s h i n g s , wh i c h a r e a dd e d t o t h e se pa r a t i n g f u n ne l a bo v e . T
h e m i x tu r e i s s ha k e n
vi go r o u s l y fo r f i v e m i nu t e s u s i n g a sh a k e r b e fo r e be i n g l e f t t o
s ta n d , an d t h e n t h e n - he x a n e l a y e r i s t r a ns f e r r e d t o a 30 0- m l co n i c
a l f l a s k . F if t y ml o f n - he xa n e i s a dd e d t o th e aq u e ou s l a y e r
an d , a f t e r
re pe a t i n g t h e ab ov e p ro ce du r e , t h e n - h e x a n e l a y e r i s a dd e d t o
t h e c on i c a l f l a sk . A n ad e q ua t e am o un t o f s o d i u m s u l fa t e ( a n h y d
ro u s ) i s a ls o ad de d t o t h e f l a s k , wh i c h i s l e f t t o s t a n d f o r 1 5 m
i n ut e s an d s ha ke n f r o m t i m e t o t i m e . T h e c on t e n t o f t h e f l a s k
is then filtere d
in t o a ro t a r y v ac uu m e va po r a t o r. T h e c on i c a l f l a s k i s th e n
wa s he d w i t h 2 0 m l of n- he x a n e t o o b t a i n t h e w a sh i ng s , w i t h
wh i c h t h e r e s id u e o n t h e su r f ac e o f t h e f i l t e r pa p e r i s wa s he d
t w i ce . Th e w a sh i ng s o bt a i n ed f ro m th e re pe a t e d w a sh i n g ar e t h en
ad d e d t o t h e r o t a r y va c u u m ev ap or a t o r, a n d n - he x a n e i s r e m
ov e d at 4 0 ° C o r l o we r.
Tw e n t y m l o f n - he xa n e i s a dd e d t o t h e re s i d u e a n d t h e m i
xt u r e i s t r a ns f e r r e d t o a 1 0 0 - m l s ep a ra t i n g f u n n e l , t o w h i c h
4 0 m l o f n- h ex a n e- s a tu r a t e d a c e t o n i t r i l e i s ad de d . A f t e r s ha k i n g
th e m i xt u r e v ig o r o u s l y fo r f i v e m i n ut e s u s i n g a sh ak e r, t h e fu nn e l
i s l e f t t o s ta n d a n d t h e a ce t on i t r i l e l ay e r i s t r a n s f e r re d t o t h e
ro t a r y va cu u m e va p or a t o r. A f t e r a dd i n g n - he xa ne - s a tu r a te d ac e t
on i t r i l e (4 0 m l ) t o th e n - h e x a n e l a y e r, t h e ab ov e pr oc e d u r e
is r ep e a t e d t w i ce . T h e a ce t on i t r i l e l ay e r i s th e n ad de d t o t h e
ro t a r y va cu u m e va po r a to r, a n d th e a ce t o n i t r i l e is r e m o ve d at
40 ° C or l o we r. The re s i du e i s di s s o lv e d i n n - he x an e t o m a k e
ex ac t l y 5 m l o f s o lu t i o n .
i i . C e re a l g r a in s , f ru i t a n d ve g e t a b l e s
Ce r e a l g ra i n s ar e c ru s he d s o a s t o p as s t h r ou g h a s t a nd ar d m e
s h s ie v e (4 2 0 µ m ) be fo r e be i n g w e i g he d t o pr e p ar e a 1 0 .0 - gr a m s a m
p l e . Tw en t y m l o f wa t e r i s ad d e d t o t h e ob t a i n e d s a m p l e an d t h e
n l e f t t o s t an d fo r t w o ho ur s .
F r u i t a n d v eg e t a b l e s a r e w e ig he d a cc u ra t e l y t o pr ep a r e a s a m p l e
o f ab o u t o n e k i l o g ra m . Ap p ro p r ia t e a m ou n t o f wa t e r i s m ea su r e d
an d ad d e d t o t h e s a m p l e , i f r eq u i r ed . A f te r h o m og en i z i n g , a
sa m p l e
 eq u i v a l e n t t o 2 0 . 0 g i s m ea su r e d
ou t .
On e h un d r e d m l o f a m i xt u r e of ac e t on e a nd a ce t i c a c i d (9 9 :1 )
i s a dd e d t o t h e 20 - gr a m s a m p l e b ef o r e b e i n g f i ne l y c ru s h e d fo r
th r e e m i nu t es , a nd f i l t e re d b y su c t i o n i n t o a r o t a r y va c u u m
ev ap or a t o r us i n g f i l t e r p ap e r c ov er e d w i t h a o ne - c e n t i m e t e r -
th i c k l a y e r o f d i a t o m a ce ou s e ar t h . T h e re s i du e o n t h e s u r fa c e o f
th e f i l t e r pa p e r i s c o l l e c t e d a n d 5 0 m l o f a m i xt u r e o f a ce t on e a n d
ac e t i c a c i d (9 9 :1 ) i s a dd e d b ef o r e h o m o ge n iz i n g fo r t h r e e m i n ut e s
. Th e a bo v e pr o c ed u r e
i s r ep e a t e d a n d th e f i l t ra t e i s a d d e d t o t h e r o t a r y v ac uu m ev a
po ra t o r an d c on c e n t r a t e d t o a p p ro x i m a t e l y 3 0 m l a t 40 ° C o r l o
we r.
Th e co n c e n t r a te d s o l u t i o n i s t r a ns f e r r e d t o a 5 00 - m l s ep a ra t i
n g fu nn e l a l r e a d y c o n t a i n i n g 2 0 0 m l o f 1 0 % s o d iu m ch l o r id e s o l
u t i o n . T h e eg g p l a n t - sh ap e d f l as k o f t h e a bo v e r o t a r y v ac uu m
ev ap or a t or i s wa s he d w i t h 1 0 0 m l of n - h ex a n e t o ob t a i n t h e
wa s h i n g s , wh i c h a r e a dd e d t o t h e se pa r a t i n g f u n ne l a bo v e . T
h e m i x tu r e i s s ha k e n
vi go r o u s l y fo r f i v e m i nu t e s u s i n g a sh a k e r b e fo r e be i n g l e f t t o
s ta n d , an d t h e n t h e n - he x a n e l a y e r i s t r a ns f e r r e d t o a 30 0- m l co n i c
a l f l a s k . F if t y ml o f n - he xa n e i s a dd e d t o th e aq u e ou s l a y e r
an d , a f t e r
re pe a t i n g t h e ab ov e p ro ce du r e , t h e n - h e x a n e l a y e r i s a dd e d t o
t h e c on i c a l f l a sk . A n ad e q ua t e am o un t o f s o d i u m s u l fa t e ( a n h y d
ro u s ) i s a ls o ad de d t o t h e f l a s k , wh i c h i s l e f t t o s t a n d f o r 1 5 m
i n ut e s an d s ha ke n f r o m t i m e t o t i m e . T h e c on t e n t o f t h e f l a s k
is then filtere d
in t o a ro t a r y v ac uu m e va po r a t o r. T h e c on i c a l f l a s k i s th e n
wa s he d w i t h 2 0 m l of n- he x a n e t o o b t a i n t h e w a sh i ng s , w i t h
wh i c h t h e r e s id u e o n t h e su r f ac e o f t h e f i l t e r pa p e r i s wa s he d
t w i ce . Th e w a sh i ng s o bt a i n ed f ro m th e re pe a t e d w a sh i n g ar e t h en
ad d e d t o t h e r o t a r y va cu u m e va po r a t o r, an d t h e n - h e x an e i s r e m
ov e d a t 40 ° C o r l o we r. T h e r e s id u e i s d i s so l v e d i n n- he x a n e t o m a
k e ex ac t l y 1 0 m l o f s o lu t i on .
i i i . M a t c h a a n d ho p s
M a tc h a i s we i gh e d t o p re pa r e a 5 . 00 - gr a m s a m p l e , t o w h i c h 2 0 m l
o f wa t e r i s a d de d a n d l e f t t o s t a n d f o r t w o h o u r s .
Ho p s a r e f i r s t c ru s he d i n t o p i e ce s an d w e ig he d t o p re pa r e
a
5 .0 0 - gr a m s a m p l e , t o w h ic h 2 0 m l o f w a te r i s a dd e d a n d l e f t t o s t
an d f o r t w o h ou r s .
On e h un d r e d m l o f a m i xt u r e of ac e t on e a nd a ce t i c a c i d (9 9 :1 )
i s a dd e d t o t h i s sa m p l e . T h e m i x tu r e , a f t e r ho m og en i z i n g f o r
th r e e
 m i n ut e s , i s f i l t e re d b y su c t i o n in t o a ro t a r y va cu u m e va po r a to r u s
in g f i l t e r pa per co ve r e d with a on e- c e n t i m e t e r - t h i c k
l ay e r o f di a t o m a ce ou s ea r t h . T h e r e s id u e o n t h e s u r fa c e of th e
f i l t e r pa p e r i s c o l l e c t e d a n d 5 0 m l o f a m i xt u r e o f a ce t on e a n d
ac e t i c a c i d (9 9 :1 ) i s a dd e d b ef o r e h o m o ge n iz i n g fo r t h r e e m i n ut e s
. Th e a bo v e pr o c ed u r e
i s re pe a t e d , a n d t h e f i l t ra t e i s a dd e d t o t h e ro t a r y va cu u m
ev ap or a t o r a n d c o n c e n t r a te d t o a p p ro x i m a t e l y 3 0 m l a t 4 0° C o r l o
we r.
Th e co n c e n t r a te d s o l u t i o n i s t r a ns f e r r e d t o a 5 00 - m l s ep a ra t i
n g fu nn e l a l r e a d y c o n t a i n i n g 2 0 0 m l o f 1 0 % s o d iu m ch l o r id e s o l
u t i o n . T h e eg g p l a n t - sh ap e d f l as k o f t h e a bo v e r o t a r y v ac uu m
ev ap or a t or i s w a sh e d w i t h 1 0 0 m l o f n - he x a n e t o ob t a i n t h e
wa s h i n g s , wh i c h a r e a dd e d t o t h e se pa r a t i n g f u n ne l a bo v e . T
he m i xt u r e i s sh ak e n v ig o r o u s l y fo r f iv e m i nu t e s us i n g a sh a k
er b e f o r e b e i n g l e f t t o s ta n d a n d t h e n - h e x an e l a y e r i s t r a ns f e r r e d
t o a 3 0 0 - m l co n ic a l f l as k . F i f t y ml o f n - he xa n e i s a dd e d t o t h e a q
u e ou s l a y e r a nd , a f t e r r ep e a t in g t h e a bo v e p ro c ed ur e , t h e n- h ex a
n e l a y e r i s a d d e d t o th e c on i c a l f l a s k . A n a de qu a t e a m ou n t o f
so d iu m s u l f a t e (a nh yd r ou s ) i s a l s o ad de d t o t h e f l a sk , w h i c h i s l e f t
t o s t a n d fo r 1 5 m i nu t e s a n d s h a k en f r o m t i m e
t o t i m e . Th e co n t e n t o f th e f l as k i s t h e n f i l t e re d in t o a ro t a
r y v ac u u m e va po r a t o r. T h e c on i ca l f l a s k i s t h e n wa s he d w i t h 2 0 m
l o f n - h ex a ne t o ob t a i n t h e w a sh i n g s , w i t h w h ic h t h e re s i du e
o n t h e s u r fa c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s wa s he d t w i ce . T h e w a sh i n g s
ob t a i n e d f r o m th e re pe a t e d wa s h in g are ad d e d to the rot a
ry va cu u m e va p or a t o r a n d c o n ce n t r a te d t o a p pr ox i m a t e l y 5 m l a t
4 0 ° C o r l o we r, t o wh i c h n - he x a ne i s a dd e d t o m a k e e x a c t l y 1 0 m l
o f s o l u t i on .
i v. Te a s ot h e r th a n m a t ch a
A 9 . 00 - g ra m sa m p l e so ak e d i n 5 4 0 m l of wa t e r at 1 0 0 ° C i s l e f t
t o s t an d at r o o m t e m p e ra t u r e fo r f iv e m i nu t e s b ef o r e b e i n g f i l t
er ed . F r o m th e c oo l ed f i l t ra t e , 3 6 0 m l i s t r a n s fe r r e d in t o a
50 0- m l se pa r a t i n g fu nn e l .
To t h i s c o n i c a l f l as k , 3 0 g o f s o d i u m ch l o r id e , 2 m l o f 2 % so d i u
m do d e c y l s u l f a t e so l u t i o n an d 1 0 0 m l o f n - h ex an e ar e a l s o
ad de d . T h e m i x tu r e i s s ha ke n v i g o ro u s l y f o r f i v e m i nu t e s us i n g
a sh ak e r a n d l e f t t o s t a n d . T h e n - h e xa n e l a y e r i s th e n t r
an s fe r r e d t o a 3 0 0- m l co n i ca l f l a s k. On e h u n dr e d m l o f n - h ex a n
e i s ad d e d t o th e a qu e o u s
l a y e r a nd , a f t e r re pe a t i ng th e a bo v e p r o ce du r e , th e n - hexa n e l aye r
is a dd e d t o t h e co n i c a l f l as k . A n a d e q u a t e a m o un t o f s o di u m
su l f a t e
 (a nh y dr ou s ) i s a l s o a d d e d t o t h e f l a sk , wh i c h i s l e f t t o s ta n d f o r
1 5 m i n ut e s a n d s h a k en f r o m t i m e t o t i m e. Th e co n t e n t o f th e
f l a s k i s th e n f i l t e r e d i n t o a r o t a r y v ac uu m ev ap or a t o r. Th e
co n ic a l f l as k i s
th e n w a sh e d w i t h 2 0 m l o f n - he xa n e t o o b t a i n t h e w a s h in g s ,
w i t h w h ic h th e re s i du e on t h e s u r fa c e o f th e f i l t e r p ap e r i s w a sh e d
t w i c e . T h e wa s h in g s o bt a i ne d f r o m th e r ep e a t ed w a sh i n g ar e t h en
ad de d t o
th e r o t a r y v ac u u m ev ap or a t o r, a n d n - h e x a n e i s re m o ve d at 4 0 °
C o r l o we r. T h e r e s id u e i s d i s so l v e d i n n - h ex a n e t o m a k e ex a c t l y
6 m l o f s o lu t i on .
v. F oo d s o t h e r t h a n t ho s e l i s t e d i n i t o i v
ab ov e
E x t r ac t s ar e ob t a i n e d b y th e m e t ho d s d es c r i b e d i n i , i i , or
iii. b. Ethy la ti on
O n e m l ( 2 m l fo r c e re a l g ra i n s , t ea s an d h o ps ) of th e s o l u t i
o n ob t a i n e d b y t h e m e th o d d e sc r i be d i n “ a . E x t r ac t i o n m e
t ho d s ” i s t r a ns f e r r e d t o a 5 0 - m l t es t t u b e w i t h a g l a s s s t op pe r, t o
w h ic h 1 m l ( 2 m l fo r c er e a l g ra i n s , t e a s an d ho ps ) of a 3 m o l / l
e t h y l m ag ne s i u m br o m i d e - et he r e a l so l u t i o n i s ad d e d. Th e m i x tu r e
i s l e f t t o s ta n d f o r 2 0 m i n ut e s at r o o m t e m p e r a tu r e .
T h en , 1 0 m l o f 0 . 5 m l / l su l f u r i c a c i d i s g ra du a l l y a dd ed , fo l l o w e d
b y t h e a dd i t i o n o f 1 0 m l o f wa t e r t o be m i x e d i n . Te n m l o f n -
h ex a n e i s ad d e d t o t h e m i x tu r e b e f o r e be i n g vi go r o u s l y sh ak e n fo r
o n e m i nu t e . A f te r b e in g l e f t t o s t a n d , t h e n - h e xa n e l a y e r i s
t r a ns f e r r e d t o a 5 0 m l c on i c a l f l as k . F i v e m l o f n - h e xa n e i s a d d e d t
o t h e a qu e o u s l a y e r an d , af t e r re pe a t i n g t h e a b ov e p ro c e du r e
t w i c e , th e n - he xa n e l a y e r i s a dd e d t o t h e c o n i c a l f l as k . A n
a de q u a t e a m o un t o f s od i u m su l f a t e (a nh y dr ou s ) i s a ls o a d d e d t o t
h e f l a sk , wh i c h i s l e f t t o s t an d f o r 1 5 m i n ut e s an d sh ak e n f r o m t i m
e t o t i m e . T h e c o nt e n t o f th e f l a s k i s t h e n f i l t e r e d in t o a ro t a r y
v ac u u m ev a po ra t o r. T h e c o ni c a l f l a s k i s th e n w a sh e d w i t h 5 m l o f
n - h ex an e t o ob t a i n t h e w a sh i ng s , w i t h wh i c h t h e re s i du e on the
s u r fa c e o f t h e f i l t e r p a p e r i s w a sh e d t w i c e . T h e wa s h in g s f r o
m th e r ep e a t e d w a sh i n g ar e t h en a d d e d t o t h e ro t a r y v ac u u m
e va po r a to r a n d co n c e n t ra t ed t o 2 m l a t 4 0 ° C o r lo w e r.
c . C l e a n- u p
F i v e g ra m s o f f l o r i s i l fo r c o l u m n c hr o m a to g r a p h y s u sp e n d e d
i n n- h ex a n e i s a d d e d t o a c hr o m a to g r ap h t u b e ( in n e r di a m e te r : 1
5 m m an d l e ng t h : 30 0 m m ) , ov e r w h ic h a pp ro x i m a t e l y 5 g o f s od i u m
s u l fa t e ( an h y d ro u s ) i s f u r th e r a dd e d . Th e n- h ex a n e i s th e n sp i l t o u t
u nt i l on l y
 a s m a l l a m o un t re m a i n s o n t h e p a ck i n g o f t h e c o l u m n , in t o w h i c h
t h e so l u t i o n o bt a i n e d b y t h e e t h yl a t i o n d es c r ib e d i n “ b . E t h y la t i
o n ” i s po ur e d . T h en , th e e gg p l a n t - sh ap e d flask of the ro
t a r y va c u u m ev a p or a t o r i s w a sh e d w i t h 1 5 m l o f n - h ex a n e t o ob t a i
n t h e w a sh i ng s , w h ic h ar e t r a ns f e r r e d t o a c o l u m n . Th e e lu a t e i s
c o l l e c t e d i n t h e r o t a r y va c uu m ev ap o r a t o r. Th e n , 5 0 m l o f a m
i xt u r e of et he r a n d n - he x a n e ( 1 :9 9 ) i s p ou re d i n a n d th e e l ua t e i s
c o l l e c t e d i n t h e r o t a r y va cu u m ev ap or a t o r, an d t h e e th e r a n d n- he x
a ne ar e re m ov e d at 4 0 ° C o r l o we r. Th e r e s id u e ob t a i n e d i s
d i s so l v e d i n n - h e xa n e t o m a k e e xa c t l y 2 m l o f so l u t i on , w h ic h i s
u se d as th e s a m p l e s o lu t i on .
5 . De t e r m in a t i on
a . Qu a l i t a t i v e t es t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s o b t a in e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d
i n t h e cy h ex a t i n r e fe r en c e m a t e r i a l u n d e r t h e pr o c ed ur e d e s c
r i b e d i n “ b . E t h y l a t i o n ” i n “ 4 . P r ep a ra t i o n of t es t so l u t i on s . ”
A z oc yc l o t i n i s m od i f i e d b y e t h y l a t i o n i n t o t h e s a m e su bs t a nc e
as cy he xati n.
Te s t in g co nd i t i
ons
C o lu m n : A s i l i ca t e gl a s s ca p i l l a r y colu m n ( i nn e r d i a m e te r :
0 .3 2 m m - 0 .5 3 mm an d l e ng t h : 3 0 m ) co a te d w i t h 5 % p h en y l
m e th y l s i l i co n e f o r ga s c hr o m a to g r a p h y t o a t h i c kn e s s o f 1 . 5 µ m
i s u se d .
C o lu m n t e m p er a t u re : T h e co l u m n t e m p er a t u r e i s h e l d a t 1 20 ° C
fo r t w o m i n ut e s , f o l l o we d b y a n i n c r ea s e o f 1 0 ° C e v er y m i
nu t e u n t i l re a ch i n g 20 0° C , af t e r wh i c h th e t e m p er a t u r e i s in c r e a
se d by 20 ° C e ve r y m i n ut e un t i l r e a c hi n g 3 00 ° C , wh e r e i t i s he l d
fo r f iv e m i nu t e s .
In l e t tem p e ra t u r e :
28 0° C
De t e c to r : S ho u l d b e o p er a t e d a t
30 0° C
G a s f lo w r a t e : He l i u m i s u se d as t h e c ar r i e r g as . T h e f l o w r a t e
sh ou l d b e a d ju s t e d s o t h a t cy h ex a t i n f l o w s o u t i n a p pr o x i m
a te l y 1 3- 1 5 m i n ut e s . T h e f l o w ra t e s o f a i r an d h y dr og e n ar e
ad j us t e d t o o p t i m a l c on d i t i on s .
b . Qu an t i t a t i v e t es t s

2020/
126
 T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e sa m e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t
h e r t h e pe a k he i g h t o r pe a k a r e a m e t ho d .
c . Co n f i r m a t i o n t e s t s
G a s ch r o m a t og r a ph y / m as s sp ec t r o m e t r y i s p e r fo r m ed u nd e r th e
sa m e

2121/
126
 c on d i t i o n s d es c r ib e d i n “ a . Qu a l i t a t i v e t e s t s . ” Te s t re s u l t s ob t a i n
e d m u s t be th e s a m e a s t h e r e su l t s o bt a i ne d i n th e re f e r en c e m a
t e r i a l un de r t h e p r oc ed ur e d e sc r i be d i n “ b . E t h y l a t i o n ” i n “ 4 .
P r e pa r a t i o n o f t e s t s o lu t i o ns . ” T h e q ua n t i t y m a y b e de t e r m i n e d
b y e i t he r t h e p ea k he i g h t o r p e a k ar e a m e t h o d , i f r e qu i r ed .

(5 ) A m i t r o l e an a l y t i ca l m e
th o d
1 . Eq u i pm e n t
A h ig h - pe r f o r m a nc e l i qu i d c h r o m a to g r a p h w i t h a f l u o r e s ce nc e de t
e c t o r a n d l i qu i d c hr o m a t og r a p h m a s s sp ec t r o m e t e r ar e us ed .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
A ce t on e : T h r e e h un d r e d m l o f a ce t o n e i s c on c e n t r a t e d us i n g a
ro t a r y v ac u u m e va po r a t o r. After r e m ov i n g th e ac e to ne , th e
re s i du e i s di s s o l v ed i n 5 m l o f n- h ex an e . W h e n 5 µ l o f th e d i s so l
v ed re s i d u e i s i n j e c t e d in t o th e G C - E C D fo r a n a ly s i s , t h e h e
ig h t s o f pe ak s f o r c o m po un d s ot h e r th a n n - he x a n e o n th e ga s c h
r o m a to g r a m m u s t b e t h e
-1
s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0
1
g.
E t ha n o l : T h re e h u nd r e d m l o f e t ha n o l i s co n ce n t r a te d u s in g a ro t
a r y v ac u u m ev a po ra t o r. After re m ov i n g the e th an o l , th e re s i
d u e i s d i s so l v e d i n 5 m l o f n - he xa n e . W h en 5 µ l o f t h e d i s so l v ed
r e s id u e i s in j e c t ed i n t o t h e G C - E C D f o r an a ly s i s , t h e h e i gh t s
o f p e a k s f o r c o m po un d s ot h e r t h a n n - h ex a n e o n t h e g a s c hr o m a
t og r a m m u s t b e t h e
-1
s a m e as or l o we r t h a n t h e p ea k f o r g a m m a - B H C at 2 x1 0
1
g.
D i a t o m a ce ou s ea r t h : D i a t o m a ce ou s ea r t h f o r ch e m i c a l a n a l ys i s i s
us ed . A ce t i c a c i d b u f f e r so l u t i on : 0 . 0 5 m o l / l so d iu m ac e t a t e
so l u t i o n i s ad d e d t o 80 0 m l o f 0 . 0 5 m o l / l ac e t i c a c i d so l u t i o n t o m a
k e a 1 , 0 00 - m l
so l u t i o n .
We a k ac i d ca t i o n e x ch an g e re s i n : We a k a c i d c a t i o n e xc h a n g e
re s i n pr od u c e d fo r co l u m n ch or o m a t og r ap h y i s f i r s t wa s he d w i t h 1
m o l / l h y d ro ch l o r i c ac i d , s e c on d l y w i t h a 2 .8 % a qu e o u s a m m
on i a , a n d th i r d l y w i t h 1 m o l / l h yd ro ch l o r i c ac i d ag a i n . Th e r ea f t e r
 th e w a sh i n g s ar e fu r t h e r wa s he d w i t h w a te r u n t i l t h ey be c o m e
ne u t r a l .
F l u o re s ca m in : A re ag e n t w i t h a p u r i t y o f 9 8 % o r hi g h e r i s
u se d .
Wa t e r : Distille d wate r is us ed . In c as e s wh e r e a su bs t a n c e
th a t i n t e r fe r e s w i t h an a l y s i s o f an in g r ed i en t o f t h e ag r i c u l t u ra l
ch e m i ca l
 pr od u c t c o n ce rn e d i s co n t a in e d , i t s h o u l d b e r in s e d o u t w i t h a s o l
v en t s uc h a s n - h e xa n e .
P h o sp ha t e bu f f e r so l u t i o n : 1 0 % p ho s p ho r i c ac i d s o l u t i o n i s ad d e d t o
a
0 .0 5 m l / l m o no s o d iu m ph os p h a t e so l u t i on t o a d j u s t th e p H t o 3 . 0 .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
A m i t r o l e : Th i s p ro du c t s ho u l d c o ns i s t o f 9 8 % o r m o r e a m
i t r o le . M e l t i n g p o i nt : 1 57 - 1 5 9 ° C
4 . P r ep a ra t io n of t es t s o lu t i on s
a . Ex t r a c t i o n m e th od s
i . C e re a l gr a i ns , l e g u m e s /p u l se s , s ee ds , f r u i t , v eg e t ab l es , m a t ch a
an d ho p s
Ce r e a l gr a i n s , l e g u m e s /p u l se s an d se ed s ar e c ru s he d s o a s t o
pa s s t h ro u g h a s ta nd a r d m e s h s ie v e ( 4 2 0 µ m ) b ef o r e b e i n g
we i gh e d t o p re pa r e a 3 0 .0 - g ra m s a m p l e .
F r u i t a n d v eg e t a b l e s a r e w e ig he d a cc u ra t e l y t o pr ep a r e a s a m p l e
o f ab o u t o n e k i l o g ra m . A n ap pr op r i a t e a m ou n t o f wa t e r i s m
ea su r e d an d ad d e d t o t h e sa m p l e , i f re q u i r ed . A f te r h o m o ge n iz i n
g , a sa m p l e e qu i v a l e n t t o 3 0 . 0 g i s m ea su r e d o ut .
M a t ch a i s w e ig he d t o p re pa r e a 3 0 .0 - g ra m s a m p
le.
Ho p s ar e c r us he d i n t o p i e c es a n d we i gh e d t o pr ep a r e a 30 . 0-
gr a m s a m p l e .
E i gh t y m l o f e t h a no l i s a d d e d t o t h e o b t a i n ed s a m p l e be fo r e b e
i n g cr u sh e d f i n e l y f o r th r e e m i n ut e s . T h e c ru s h e d s a m p l e i s
f i l t e re d b y s uc t i o n i n t o a r o t a r y va c u u m e va po r a t o r u s in g f i l t er
p a pe r co ve r e d w i t h a on e - c en t i m e te r - t h i c k l a y e r of di a t o m
ac eo u s ea r t h a n d t h e f i l t r a t e i s t r a ns f e r re d t o a 20 0- m l gr ad u a t e d
c y l i nd e r. Th e re s i du e o n t h e s u r fa c e o f th e f i l t e r p ap e r i s c o l l e c t e d
a n d 4 0 m l o f 60 % e th an o l i s ad d e d b e f o r e h o m og en i z i n g fo r t h r e e
m i n u t es . A f t e r r ep e a t i n g t h e a bo v e pr o c ed ur e , t h e f i l t r a t e i s a d
de d t o th e gr ad u a t e d c y l i n de r an d t h e a m o un t o f f i l t r a t e i s m
ea su r e d .
Te n m l of t h e f i l t r a t e i s t r an s f e r r e d t o a 2 0 0 - m l ro un d b o t t o m
f l as k , t o wh i c h 1 m l o f h y d ro ge n pe r o xi d e s o l u t i o n i s a d d e d .
A r e f l u x co nd en se r i s a t t a c h ed t o t h e f l a s k , w h ic h i s th e n h e
a te d f o r 3 0 m i nu t e s i n a w a te r b a t h a t 75 ° C a n d al lo w e d t o co o l .
i i . Te as ex c e p t m a t c h a
A 1 0 .0 0 - g r am s a m p l e s oa ke d i n 6 0 0 m l o f wa t e r at 1 0 0 ° C i s l e f t
t o s t an d at r o o m t e m p e ra t u r e fo r f iv e m i n ut e s b ef o r e b e i n g
f i l t er ed .
 F r o m t h e c oo l e d f i l t r a t e, 1 2 m l i s t r an s fe r r e d i n t o a 2 0 0- m l
ro un d b ot t o m f l as k , t o wh i c h 1 m l o f hy dr og e n p e r ox i d e so l u t i o n
i s ad de d . A r e f l u x c o n de ns e r i s a t t a c h ed t o t h e f l a sk , w h ic h i s t h
en he a t ed fo r
3 0 m i nu t e s i n a wa t e r ba t h at 7 5 ° C an d a l l o we d t o c
o o l . i i i . F oo d s e x c ep t th o s e l i s t e d i n i a n d i i a bo v e
E x t r ac t s ar e ob t a i n e d b y t h e m e th od s d es c r i b e d i n
i . b . C l e a n- u p
On e ml of s t ro n g acid cat io n ex ch a n g e resin ( p articl e si
ze :
0 . 0 6 3- 0 . 1 5 6 µm ) in a wate r su sp e ns i o n is p o u re d in t o
a ch r o m a t og r a p h t u b e ( in n e r di a m e te r : 1 0 m m an d l e n g t h : 3 0 0
m m ) . T h e wa t e r i s t h e n sp i l t ou t u n t i l o n l y a s m a l l a m ou n t r e m a
i n s o n t h e pa c k in g of th e c o l u m n , i n t o w h i c h 5 m l o f w a te r i s p
o ur e d a n d t h e e f f lu e n t i s di s ca r d e d . T h e s o lu t i o n o b t a i n ed b y th e
m e t ho d de sc r i b e d
i n “ a . E x t r a c t i o n m e th od s ” i s t h e n p o ur e d i n t o t h e c o l u m n . T h e
r o u n d bo t t o m f l as k d e s c r ib e d a b ov e i s t h e n wa s h e d w i t h 1 0 m l o f
w a te r a n d th e w a sh i n g s a r e a l s o p ou re d i n t o t h e c o l u m n a n d t
h e e f f l u en t i s di s ca r d e d . S ub s eq u e n t l y, 1 2 m l o f 2 . 8 % aq u e ou s am
m o n i a i s a dd e d t o t h e c o l u m n . T h e e l ua t e i s c o l l e c t e d i n a r o t a r y
v ac u u m e va po r a to r a n d
30 ml of n - pr op a n o l is ad d e d b ef o r e r e m ov in g the wa t e r
a n d n- p ro pa n o l at 4 5 ° C o r l o we r. F i v e m l o f wa t e r i s ad d e d t o t h e
r e s i d u e t o d i s so l v e i t .
I n a c h r o m a to g r a ph t u b e ( i n n er d i a m e te r : 1 0 m m an d l e n g th : 3 0 0
mm),
5 m l o f w ea k a c i d c a t i o n ex ch a n g e re s i n ( pa r t i c l e s i z e : 0 . 3 3- 0 . 5 0
µ m ) i n a w a te r s us p en s i o n i s p ou re d . T h e wa t e r i s th e n s p i l t o u t u n
t i l o n l y a s m a l l a m ou n t re m a i n s o n t h e p a ck i n g o f t h e c o lu m n ,
int o whi c h 10 m l of wa t e r is po u r ed an d th e ef f lu e n t is
d i sc a rd e d . T h e ab o v e s o lu t i on i s po ur e d i n a n d th e e f f l ue n t i s d i s c
a rd ed . F i f t y m l o f wa t e r i s a ls o p o u re d i n a n d t h e ef f lu e n t i s
d i sc a rd e d . S u b se qu e n t l y, 3 5 m l o f
2 . 8 % aq u e ou s a m m o n i a i s a d d e d t o t h e co l u m n . T h e e lu a t e
i s co l l e c t e d i n a ro t a r y v ac u u m e va po r a t o r an d 1 0 0 m l n - p ro pa n o
l i s a dd e d b ef o r e re m ov in g t h e a q u e o u s am m o ni a a n d n - p r o p an o l
at 4 5 ° C o r l o we r.
c . De r i va t i z a t io n
Tw o m l o f a c e t i c a c i d b u f f er s o lu t i o n i s ad d e d t o t h e re s i
d u e t o di s s o lv e it well. To 1 ml of this so l u t i on , 100 µl
of 0 . 25 % f l uo r e sc a m i n - ac e t o n e s o lu t i o n i s ad d e d , w h ic h i s t h e n
s ha k e n w e l l b ef o r e b e i n g a l l o w e d t o s t an d fo r o n e ho u r. Th e n , 0 . 5
m l o f 0 .0 5 m o l / l
 s od i u m b or a t e so l u t i o n i s a l s o a d de d t o p r e p ar e th e t es t s o lu t i
on.
5 . De t e r m in a t i on
a . Qu a l i t a t i v e
tests
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s o b t a in e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d
i n t h e re f e r en c e m a t e r ia l un de r th e p ro c e d ur e d es c r i b e d
in “ c . D e r iv a t i z a t i on ” i n “ 4 . P r e pa r a t i o n o f t es t s o l u t i o ns . ”
Te s t i n g c on d i t i
on s
C o lu m n pa ck i n g : Oc t a de c y l s i l a n e - bo n d e d s i l i c a ge l ( p ar t i c l e s i z
e: 5
µ m ) i s u se d .
C o lu m n : A s ta i n l e s s t ub e ( i n n er d i a m e t e r : 4 . 6 m m a n d l e n g t h :
1 5 0 m m ) i s u se d .
C o lu m n t e m p er a t u re :
4 0° C
D e te c t o r : S h ou l d be o p er a t e d w i t h an e x c i t a t i o n wa ve l e ng t h o f
3 8 0 n m an d a f l u or e sc e n t wa ve l e n g t h of 48 4 n m .
M o b i l e ph a se : A m i xt u r e o f a ce t o n i t r i l e a n d p ho s p h a t e bu f f e r s o l u
t i on ( 3 :7 ) i s us e d . Th e f l o w ra t e sh ou l d b e a d j u s te d s o t h a t t h e a
m i t r o l e f lo w s ou t i n ap p ro x i m a t e l y 1 5 m i nu t es .
b. Qu an t i t a t i v e
tests
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e sa m e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t
h e r t h e pe a k he i g h t o r pe a k a r e a m e t ho d .
c. Co n f i r m a t i o n
tests
L i q u i d ch r o m a t og r a p h y / m a s s sp ec t r o m e t r y i s pe r fo r m e d u n de r
t h e s a m e c on d i t io n s d es c r ib e d i n “ a . Qu a l i t a t i v e t es t s . ” Te s t
r e su l t s o bt a i n e d i n t h e r e fe r e nc e m a t e r ia l m u s t b e t h e s a m e as
the r e su l t s o bt a i n e d u n de r t h e pr oc e d ur e d e sc r i be d i n “ c .
D e r iv a t i za t i o n ” i n “ 4 . P r ep a ra t i o n o f t e s t so l u t i o ns . ” T h e q ua n t i t y
m a y b e de t e r m i n e d b y e i t he r t h e p ea k h e i g h t o r pe a k ar e a m e
t ho d , i f r eq u i r ed .

(6 ) C ap t a f o l a n a l y t i ca l m e
th o d
1 . Eq u i pm e n t
 A g a s ch r o m a to g r ap h w i t h a n e l e c t r o n c ap t u r e de t e c t o r ( G C - E C D )
a n d a ga s c h r o m a to g r ap h - m a s s s pe c t r o m e t e r ar e us ed .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
R ea g e n t s d es i gn a t e d a s “ s p ec i a l g ra de ” i n t h i s s e c t i o n m u s t m e e t
t h e re qu i r e m e n t s fo r “ s pe c ia l gr a d e ” s pe c i f i e d in th e J a pa n
I nd u s t r i a l S t an da rd s f o r t h e r ea g en t s .
Ac e to n i t r i l e : T h r e e hu nd re d m l of ac e to n i t r i l e i s c on c e n t r a t e d u s i
ng a ro t a r y v ac uu m ev ap or a t o r. A f te r r e m o vi n g the ac e t on i t r i l
e, t h e r e s id u e i s d i s so l v ed i n 5 m l o f n - h ex an e . W h e n 5 µ l o f th e
d i s so l v ed re s i du e i s i n j e c t ed in t o t h e G C - E C D f o r a na l ys i s , t h e h e
ig h t s o f p e a k s fo r c o m po un d s ot h e r t h a n n - h e xa n e o n t h e g a s
ch r o m a to g r a m m u s t b e
th e sa m e a s o r lo w e r t h a n t h e p e a k f o r ga m m a- B H C a t 2x 1 0
-1 1
g.
A ce t on e : T h r e e h un dr e d m l o f a c e to n e i s c on c e n t r a t e d u s in g a r o
t a r y va cu u m ev ap or a t o r. A f te r r e mo v i n g the ac e to ne , the
r e s id u e i s d i s so l v e d i n 5 m l o f n - he xa n e . W h en 5 µ l o f t h e d i s so l v
e d r e s id u e i s in j e c t ed i n t o t h e G C - E C D fo r an a ly s i s , t h e h e
i gh t s of pe a k s fo r c o m po un d s o th e r t h a n n - he x a n e o n th e g a s
c hr o m a t og r a m m u s t b e t h e s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m
-1 1
m a - B H C at 2 x1 0 g.
S od i u m ch l o r id e : S o d i u m ch l o r i d e ( sp ec i a l g ra de ) . I n c as e s w he r e
a s ub s t an c e t h a t i n t e r fe r e s w i t h a na l ys i s o f a n in g r e d i en t of
t h e a gr i c u l t ur a l c he m i ca l p ro d u ct c o nc er n e d i s co n t a in e d , i t
sh o u l d b e r i n se d ou t w i t h a so l v en t su c h as n - he x a n e .
S yn t he t i c m a gn es i u m s i l i c a t e ( F l o r i s i l ) f o r co l u m n ch r o m a
to g r ap h y : F l o r i s i l ( p articl e s i ze : 1 5 0- 2 5 0 µm ) pr o d uc e
d for c o l u m n ch r o m a t og r a ph y i s h e a te d a t 1 3 0 ° C fo r m o r e
th a n 1 2 h o ur s b e f o r e be i n g al lo w e d t o co o l i n a de s ic c a t o r.
D i a t o m a ce ou s ea r t h : D i a t o m a ce ou s ea r t h f o r ch e m i c a l a n a l ys i s i s
u se d . E t h y l a ce t a t e: Th r e e h u nd re d m l o f e t h y l a c e ta t e i s c o n
ce n t ra t e d u s i n g a ro t a r y v a cu u m ev ap or a t o r. A f t e r r e m o vi n g t h e
e th y l ac e t a t e , t h e
re s i du e i s di s s o l v ed i n 5 m l o f n - h ex an e . W h e n 5 µ l o f th e d i ss o l
v e d r e s id u e i s i n j ec t e d i n t o th e G C - E C D fo r an a l y s i s , th e h e i gh t s o f
pe a k s f o r co m p ou nd s ot h e r t h a n n - h e x a n e o n t h e g a s c hr o m a
to g r a m m u s t b e t h e s a m e as o r l o we r t h an t h e pe a k fo r g a m m a -
-1 1
B H C at 2 x1 0 g.
n - He xa ne : T h r e e h u n d r e d m l o f n - he xa n e i s co nc e n t r a t e d t o 5 m l
usin g
a r o t a r y v ac uu m ev ap or a t o r. Wh e n 5 µ l o f t h e c on c e n t r a t e d s a m p l e
i s in j e c t ed in t o t h e G C - E C D f o r a n a l ys i s , t h e h e ig h t s o f pe ak s
 fo r c o m po un d s o th e r t h a n n - he x a ne o n th e ga s c h r o m a t og r a m m u s t
-1 1
be t h e s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0
g.
Wa t e r : Distille d wa t e r is us ed . In c as e s wh e r e a su bs t a n c e
that
in t e r f e re s w i t h a n a l ys i s o f a n i ng r e d ie n t o f t h e a gr i c u l t u ra l c he m i
ca l
 pr od u c t c o n ce rn e d i s co n t a in e d , i t s h o u l d b e r in s e d o u t w i t h a s o l
v en t s uc h a s n - h e xa n e .
So d i u m su lfate (a nh y d r o u s ) : So d i u m su lfate (a n h y d r o u s )
( s p ec i a l g ra de ) . I n c a s e s wh e r e a su bs t a nc e t h at in t e r f e re s w i t h a n
a ly s i s o f a n in g r e d i en t of the a gr i cu l t u r a l c he m i ca l pr od u c t
co nc e r n e d i s c on t a in e d , i t s ho u l d b e r i n se d ou t w i t h a s o l v en t s u
ch a s n - h ex a ne .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
C ap t a f o l : T h i s p ro d u c t s ho u l d c o n s i s t o f 9 8 % o r m o r e
c ap t a fo l . M e l t i n g p o i nt : 1 59 - 1 6 1 ° C
4 . P r ep a ra t io n of t es t s o lu t i on s
a . Ex t r a c t i o n m e th od s
i . Ce r e a l gr a i ns , l e g u m e s /p u l se s a n d se e d s
Ce r e a l gr a i n s , l e g u m e s /p u l se s an d se ed s ar e c ru s he d s o a s t o
p a s s th r ou g h a s ta nd a r d m e s h s i e v e ( 42 0 µ m ) be fo r e be i n g
w e ig h e d t o pr ep a r e a 1 0 .0 - g ra m sa m p l e . Tw en t y m l o f 3 % p h
o s ph or i c a c i d s o lu t i o n i s ad d e d t o t h e ob t a i n e d s a m p l e , w h ic h
i s t h e n l e f t t o s t a n d fo r t w o ho ur s .
Ac e to n e ( 1 0 0 m l ) i s t h en a d d ed . T h e m i x tu r e , a f t e r h o m
o ge n iz i n g fo r th r e e m i n ut e s , i s f i l t e re d b y s uc t i o n in t o a ro t a
r y v ac uu m ev a p o ra t o r u s in g f i l t e r p ap e r co v e r e d w i t h a o ne - c e n
t i m e t e r - th i c k l a ye r o f di a t o m ac eo u s ea r t h . Th e re s i du e o n t h e
s u r fa c e o f t h e f i l t er pa pe r i s c o l l e c t e d a n d ac e to n e ( 5 0 m l ) i s
a dd e d b ef o r e ho m o ge n iz i n g f o r three m i nu t es . T h e a bo v e
p ro ce du r e i s th e n r ep e a t e d a n d t h e f i l t r a t e i s a dd e d t o t h e r o t a r y
v ac u u m e va po r a to r an d co nc en t r a t e d t o a pp ro x i m a t e l y 3 0 m l a t
4 0° C o r l o we r.
Th e c o n c e n t r a t e d s o l u t i o n i s t r a ns f e r r e d t o a 30 0- m l se pa r a t i
n g f un ne l a l r e ad y co n t a i n i n g 1 0 0 m l o f 1 0 % s o di u m c h lo r i d e
s o l u t i o n . T h e e g g p l a n t - sh ap e d f l as k o f th e ab o v e ro t a r y va cu u m
e va po r a t o r i s wa s he d w i t h 1 0 0 m l o f n - he x a n e t o o bt a i n t h e
w a sh i n g s , wh i c h a r e a dd e d t o t h e se pa r a t i n g f u nn e l ab o v e.
T h e m i x tu r e i s sh ak e n
v ig o r o u s l y f o r f iv e m i n ut e s us i n g a s h a k er b e f o r e b e i n g l e f t t o s t a
n d , an d t h e n t h e n - he x a n e l a y e r i s t r an s fe r r e d t o a 30 0- m l co n i c a l
f l a s k . F if t y ml o f n- he xa n e i s a dd e d t o t h e a q u e o u s l a y e r
a nd , af t e r
r ep e a t i n g t h e a bo v e p ro ce du r e , t h e n - h e x a n e l a y e r i s a dd e d t o
t h e c on i c a l f l a s k. A n ad e q ua t e am o un t o f s od i u m s u l fa t e ( a n h y d
r ou s ) i s a l s o a d d e d t o t h e f l a s k , wh i c h i s l e f t t o s t a n d f o r 1 5 m
i nu t e s a n d sh ak e n f ro m t i m e t o t i m e . Th e c o nt e n t o f t h e f l as k
i s th e n f i l t e re d
 i n t o a r o t a r y v ac uu m e v ap or a t o r. Th e co n ic a l f l a s k i s t h e n
w a sh e d w i t h 2 0 m l o f n - h e x a n e to o b ta i n t h e was h i n g s , w i
t h w h i c h t h e re s i du e o n th e s u r fa c e of th e f i l t e r p a pe r i s
w a sh e d t w i c e . T h e wa s h in g s o bt a i n ed f r o m t h e re pe a t e d wa s h i n g
a r e t h e n a dd e d t o t h e r o t a r y va cu u m e va po r a t o r, an d t h e n- h e
x an e i s r e m ov e d a t 40 ° C o r l o we r.
Th i r t y m l o f n - he x a n e i s ad d e d t o th e r e s i d u e an d t h e m i x tu r e i s
th e n
t r a ns f e r r e d t o a 1 0 0 - m l s ep a ra t i n g f u n n e l , t o wh i c h 3 0 m l
o f n - h ex a n e- s a tu r a t e d a c e t o n i t r i l e i s a dd e d . A f te r s ha k i n g t h e m i
x tu r e v ig o r o u s l y f o r f i v e m i nu t e s u s i n g a sh ak e r, t h e fu n n el i s l e f t
t o s t a n d an d t h e a ce t on i t r i l e l ay e r i s t r a n s f e r re d t o t h e r o t a r y
v ac uu m ev a p o ra t o r. A f te r ad d i ng n - h ex an e - sa t u ra t e d a c e t on i t r i l e
(30 m l ) t o
t h e n - he x a n e l a y e r, t h e ab ov e pr oc e d u r e i s r ep e a t e d t w i ce .
T h e a ce t on i t r i l e l ay e r i s th e n a dd e d t o th e r o t a r y va cu u m
e va po r a to r, a n d th e a ce t on i t r i l e i s r e m o ve d a t 4 0° C o r lo w e r.
T h e re s i du e i s di s s o l v ed i n 5 m l o f n- he xa n e .
i i . F r u i t , v e g e t a bl e s , m a t ch a an d h op s
F r u i t a n d v eg e t a b l e s a r e w e ig he d a cc u ra t e l y t o pr ep a r e a s a m p l e
o f ab o u t o n e k i l o g ra m , t o w h i c h 5 0 0 m l of 10 % p h o s ph or i c
a c i d s o lu t i o n i s a dd e d b ef o r e h o m o ge n iz i n g . Th e n , a sa m p l e
eq u i va l e n t
t o 2 0 . 0 g i s m e as u re d
ou t .
M a tc h a i s we i gh e d t o pr ep a r e a 5 . 00 - gr a m s a m p l e , t o w h i c h 2 0 m
l of
3 % ph o s p h o r i c a c i d s o lu t i o n i s ad d e d a n d l e f t t o s t an d fo r
t w o h ou r s .
Ho p s a r e f i r s t c ru s he d i n t o p i e ce s an d w e ig he d t o p re pa r e
a
5 .0 0 - gr a m sa m p l e , t o w h ic h 2 0 m l o f 3 % ph o sp ho r i c a c i d s o lu t i o n
i s a dd e d a n d l e f t t o s t a n d fo r t w o h o u r s .
On e hu nd r e d m l o f ac e to n e i s t h e n ad de d t o t h e m i xt u r e a n d
f in e l y c ru s he d for three m i n ut e s . The c ru s he d m i x tu r e is
f i l t e re d b y su c t i o n i n t o a ro t a r y v ac u u m ev ap or a t o r us i n g f i l t e r
p a pe r co v er e d w i t h a on e- c en t i m e t e r - t h i c k lay e r of di a t o m
ac eo u s ea r t h . T h e re s i du e o n th e s u r fa c e of th e f i l t er pa pe r i s
co l l e c t e d an d ac e to n e (5 0 m l ) i s a dd e d b e f o r e ho m og en i z i n g f o r
t h r e e m i n ut e s . T h e ab o v e pr oc e d ur e i s r ep e a t e d an d th e f i l t r a t e
i s a dd e d t o t h e ro t a r y va cu u m e va p or a t o r an d c on c e n t r a te d t o
ap pr o x i m a te l y 3 0 m l a t 4 0 ° C o r l o we r.
Th e c o n c e n t r a t e d s o l u t i o n i s t r a ns f e r r e d t o a 30 0- m l se pa r a t i
ng
 fu nn e l a l r e ad y c o n t a i n i n g 1 0 0 m l o f 10 % s o d iu m ch l o r id e s o l u t i
o n . Th e eg g p l a nt - s ha p e d f l a s k o f t h e a bo v e r o t a r y v ac uu m
ev ap or a t or i s wa s he d w i t h 1 0 0 m l of n - h ex a n e t o ob t a i n t h e
wa s h i n g s , wh i c h a r e a dd e d t o t h e se pa r a t i n g f u n ne l a bo v e . T
h e m i x tu r e i s s ha k e n
vi go r o u s l y fo r f i v e m i nu t e s u s i n g a sh a k e r b e fo r e be i n g l e f t t o
s ta n d , an d t h e n t h e n - he x a n e l a y e r i s t r a ns f e r r e d t o a 30 0- m l co n i c
a l f l a s k . F if t y ml o f n - he xa n e i s a dd e d t o th e aq u e ou s l a y e r
an d , a f t e r
re pe a t i n g t h e ab ov e p ro ce du r e , t h e n - h e x a n e l a y e r i s a dd e d t o
t h e c on i c a l f l a sk . A n ad e q ua t e am o un t o f s o d i u m s u l fa t e ( a n h y d
ro u s ) i s a ls o ad de d t o t h e f l a s k , wh i c h i s l e f t t o s t a n d f o r 1 5 m
i n ut e s an d s ha ke n f r o m t i m e t o t i m e . T h e c on t e n t o f t h e f l a s k
is then filtere d
in t o a ro t a r y v ac uu m e va po r a t o r. T h e c on i c a l f l a s k i s th e n
wa s he d w i t h 2 0 m l of n- he x a n e t o o b t a i n t h e w a sh i ng s , w i t h
wh i c h t h e r e s id u e o n t h e su r f ac e o f t h e f i l t e r pa p e r i s wa s he d
t w i ce . Th e w a sh i ng s o bt a i n ed f ro m th e re pe a t e d w a sh i n g ar e t h en
ad d e d t o t h e r o t a r y va cu u m e va po r a t o r, an d t h e n - h e x an e i s r e m
ov e d a t 40 ° C o r lo w e r. T h e re s i du e i s d i s so l v e d i n 5 m l o f n -
he xa n e .
i i i . Te a s e x ce p t m a t c h a
A 9 .0 0 - gr a m sa m p l e so ak e d i n 5 4 0 m l o f wa t e r at 1 0 0 ° C i s l e f t
t o s t an d at r o o m t e m p e ra t u r e fo r f i v e m i nu t e s b ef o r e b e in g
f i l t e r e d . F r o m t h e c oo l e d f i l t r a t e, 36 0 m l i s t r an s fe r r e d in t o a 50 0-
m l co n ic a l f l a sk .
Th i r t y m l of ph os ph o r i c ac i d , 10 0 m l o f a ce t on e an d 2 m l
o f s a tu r a t e d l e a d a c e t a t e s o lu t i o n a r e a l s o ad de d t o t h i s c on i c a l
f l a s k . Th e m i xt u r e i s l e f t t o s ta n d f o r o n e h o ur a t ro o m t e m p
er a t u r e b ef o r e b e in g filte red by s uc t i o n us i n g filter pa pe r
co ve r e d with a o ne - ce n t i m e t e r - th i c k l a ye r o f d i a to m ac eo u s
ea r t h . T h e f i l t r a t e i s
t r an s fe r r e d t o a 1 , 00 0- m l se pa r a t i n g f u n n e l . T h e c o n i ca l f l as k
i s th e n w a sh e d w i t h 5 0 m l o f a ce t on e t o o b t a i n t h e wa s h in g s ,
w i t h w h ic h t h e re s i du e o n t h e su r f ac e o f t h e f i l t e r pa pe r i s
wa s he d . T h e wa s h in g s a r e a dd e d t o th e s e p a r a t i n g f u nn e l , t o
wh i c h 3 0 g o f so d iu m ch l o r id e a n d 1 0 0 m l o f n - he x a n e ar e a l s o
ad d e d . Th e m i x tu r e i s sh ak e n vi go r o u s l y f o r f iv e m i nu t e s an
d l e f t t o s t an d . T h e n - he x a n e l a y e r i s th e n t r a ns f e r r e d t o a
3 0 0- m l co n i c a l f l as k . O n e hu n d re d m l o f n - h ex a n e i s ad d e d t o
th e a q ue o u s l a y e r, an d af t e r r ep e a t i n g t h e a bo v e pr oc ed u r e , t h
e n - h e x a n e l a y e r i s a dd e d t o t h e c on i c a l f l as k . A n a d e q u a t e a m
ou n t o f s o d i u m s u l fa t e ( a n h y d ro u s ) i s
 a ls o ad d e d t o t h e f l a s k , wh i c h i s l e f t t o s t a n d fo r 1 5 m i nu t e s
an d s ha ke n f r o m t i m e t o t i m e . T h e c o nt e n t o f t h e f l as k i s th e n
filtere d
in t o a ro t a r y v ac uu m e va po r a t o r. T h e c on i c a l f l a s k i s th e n
wa s he d w i t h 2 0 m l of n- he x a n e t o o b t a i n t h e w a sh i ng s , w i t h
wh i c h t h e r e s id u e o n t h e su r f ac e o f t h e f i l t e r pa p e r i s wa s he d
t w i ce . Th e w a sh i ng s o bt a i n ed f ro m th e re pe a t e d w a sh i n g ar e t h en
ad d e d t o t h e
ro t a r y va cu u m ev ap or a t o r, an d n - h e x an e i s r e m ov e d a t 4 0 ° C o r
lo w e r. Th e r e s id u e i s di s s o l v e d i n 5 m l o f n - h ex a n e .
i v. F oo d s e x c ep t th o s e l i s t e d i n i t o i i i
ab ov e
E x t r ac t s ar e ob t a i n e d b y th e m e t ho d s de sc r i be d i n i o r
ii. b. Cle a n-up
I n a c h r o m a to g r a ph t u b e ( i n n er d i a m e te r : 1 5 m m an d l e n g th : 3 0 0
mm),
5 g o f f l o r i s i l f o r c o l u m n c hr o m a t og r a p h y s us p e n de d i n n - h e x a
n e i s ad d e d , o ve r w h ic h a pp r o xi m a t e l y 5 g o f s o d i u m su l f a t e ( an h y
d ro u s ) i s f u r th e r a dd ed . Th e n - he x a ne i s th e n sp i l t ou t un t i l
o nl y a s m al l a m o un t r e m a in s o n t h e pa c k in g o f t h e c o l u m n , in t o
w h i c h th e so l u t i o n ob t a i n e d by the e x t r ac t i o n m e t ho d d es c r i
bed in “a. Ex t r a c t i o n m e t ho d s ” i s p ou re d . T h en , 1 0 0 m l o f n -
h ex a n e i s a ls o po ur e d i n a n d th e ef f l u e n t i s di s ca r d e d . S u b se q u e
n t l y, 1 5 0 m l of a m i x tu r e o f e t h y l a ce t a t e a n d n - h ex an e ( 1 :9 ) i s
a dd e d a n d t h e e l ua t e i s c o l l e c t ed i n a r o t a r y v ac uu m e va po r a to r,
a n d t h e et h y l a c e ta t e a n d n - h ex a n e a r e r e m o ve d a t 4 0° C o r l o
w e r. T h e r e s id u e i s d i s so l v e d i n n - h e x a n e t o m a k e ex ac t l y 5 m l
o f so l u t i o n , w h i c h i s u se d as th e sa m p l e so l u t i on .
5 . De t e r m in a t i on
a . Qu a l i t a t i v e t es t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s ob t a i n e d un d e r an y o f t h e co n d i t i o n s m u s t b e th e s a m
e a s t h e re s u l t s ob t a in e d i n t h e r e fe r e nc e m a t e r ia l .
Te s t i n g co n d i t i o n s
1
C o lu m n : A s i l i ca t e g l a s s ca p i l l a r y co l u m n ( i nn e r d i a m e t e r : 0 . 2 5
mm an d le n g t h : 10 -3 0 m) co ate d w it h m e t h yl si li co n e
fo r g a s ch r o m a to g r ap h y t o a t h i c k n es s o f 0 . 2 5 µ m i s us ed .
C o lu m n t e m p er a t u re : Th e c o l u m n t e m p er a t u r e i s h e l d at 5 0° C fo r o
n e m i n ut e , f o l l ow e d b y a n i n c re a s e o f 25 ° C e v e r y m i n ut e un t i l
re a c h i n g
17 5° C , a f t e r wh i c h t h e t e m p e ra t u r e i s i n c r e as e d b y 1 0° C e v
er y m i n ut e u n t i l re a ch i n g 3 00 ° C , wh e r e i t i s h e l d f o r f iv e m i
nu t es .
Inlet tem p er a t u re :
2 30 ° C
 D e te c t o r : S h ou l d b e o p e ra t e d at
3 00 ° C
G a s f lo w r a t e : He l i u m i s u se d as t h e c ar r i e r g as . T h e f l o w r a t e
sh ou l d b e a d ju s t e d t o t h e o p t i m a l co nd i t i o n .
Te s t i n g co n d i t i o n s
2
C o lu m n : A s i l i ca t e g l a s s ca p i l l a r y co l u m n ( i nn e r d i a m e t e r : 0 . 2 5
mm an d l e n gt h : 10 - 3 0 m ) c o a t e d w i t h 5 % p he ny l m e th y l s i l i c on e
fo r g a s ch r o m a to g r ap h y t o a t h i c k n es s o f 0 . 2 5 µ m i s us ed .
C o lu m n t e m p er a t u re : Th e c o l u m n t e m p er a t u r e i s h e l d at 5 0° C fo r o
n e m i n ut e , f o l l ow e d b y a n i n c re a s e o f 25 ° C e v e r y m i n ut e un t i l
re a c h i n g
12 5° C , a f t e r wh i c h t h e t e m p e ra t u r e i s i n c r e as e d b y 1 0° C e v
er y m i nu t e u n t i l r ea c h i n g 3 00 ° C , wh e r e i t i s h e l d f o r th r e e m i
nu t es .
Inlet tem p er a t u re :
2 30 ° C
D e te c t o r : S h ou l d b e o p e ra t e d at
3 00 ° C
G a s f lo w r a t e : He l i u m i s u se d as t h e c ar r i e r g as . T h e f l o w r a t e
sh ou l d b e a d ju s t e d t o t h e o p t i m a l co nd i t i o n .
b. Qu an t i t a t i v e
tests
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e sa m e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t
h e r t h e pe a k he i g h t o r pe a k a r e a m e t ho d .
c. Co n f i r m a t i o n
tests
G a s ch r o m a to g r a ph y / m a s s s pe c t r o m e t r y i s p e r f o r m ed u nd e r th e
s a m e co nd i t i o n s d es c r ib e d i n “ a . Qu a l i t a t i v e t e s t s . ” Te s t r e su l t s
o bt a i n ed m u s t b e t h e s a m e as t h e r e su l t s ob t a i n e d i n th e
r e fe r e nc e m a t e r ia l . Th e qu a n t i t y m a y b e de t e r m i n e d b y e i th e r th e
p e ak h e ig h t o r p e a k ar e a m e t ho d , i f re qu i r e d .

(7 ) C a rb a d ox a n a l y t i c a l m e
t ho d
Q u in ox a l i n e- 2 - ca r bo xy l i c a c i d i s an a ly z e d .
1 . Eq u i pm e n t
A hi gh - p e r fo r m a nc e l i qu i d c h r o m a to g r ap h with an ultra v i
o l e t sp ec t r op ho t o m e t r i c d e te c t o r an d a l i qu i d c hr o m a t og r a p h
m a s s sp ec t r o m e t e r a r e u se d .

3030/
126
2 . Re a g e n ts / t e s t s o l u t i on s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
R ea g e n t s d es i gn a t e d a s “ s p ec i a l g ra de ” i n t h i s s e c t i o n m u s t m e e t
t h e re qu i r e m e n t s fo r “ s pe c ia l gr a d e ” s pe c i f i e d in th e J a pa n
I nd u s t r i a l

3131/
126
 S t an da rd s f o r t h e r ea g en t s .
Oc t ad e c y l s i l a ne - b o n d e d silic a gel m i n i c o lu m n ( 50 0 m g ):
A
po ly e t hy l e n e co l u m n w i t h a n i nn e r d i a m e t e r o f 8 - 9 m m p ac ke d w i
th
50 0 m g o f o c ta d e c y l s i l a ne - b o n d e d s i l i c a g e l o r on e w i t h t h e s a
me s ep a ra t i o n ch ar a c te r i s t i c s i s u s e d .
S t r on g b as i c an i o n e x ch a n ge r m i n i c o l u m n ( 36 0 m g ) : A p ol y e
th y l en e c o lu m n w i t h an i n ne r d i a m e t e r o f 8- 9 m m p ac k e d w i t h
3 6 0 m g of t r i m e t h y l a m i n o a cr y l am i d e c op o ly m e r s i l a ne - b on d ed
s i l i c a g e l or on e w i t h t h e s a m e se pa r a t i o n c h a ra c t e r i s t i c s i s u s ed .
Wa t e r : Wa t e r p ro du c e d fo r l i q ui d ch ro m a t og r a ph y i s u s e d .
S od i u m s u l fa t e ( an h y d ro u s ) : S od i u m su l f a t e (a nh y d r o us )
( sp ec i a l g ra de ) . I n c a s e s w he r e a s ub s t a n c e t h a t i n t e r fe r e s w i t h a n
a ly s i s o f a n
in g r e d i en t of the ag r i cu l t u r a l c he m i ca l pr od uc t c on ce rn e d
i s c on t a i n e d, i t s ho u l d b e r i n se d ou t w i t h a s o l v en t s u c h a s n - he x a
ne .
P ho s ph a t e buf fer so l u t i o n (p H 2 .5 ) : Mono po tas s iu m di h y
dr og e n m on op ho s p h a t e ( 1 . 3 6 g ) i s d i s s o lv e d i n w a t e r t o m a k e
a 8 00 - m l s o lu t i o n , t o wh i c h p h o sp ho r i c ac i d i s ad de d t o ad ju s t t h
e p H t o 2 . 5 . Wa t e r i s a dd e d t o t h e ad j us t ed so l u t i o n t o m a k e a
1 ,0 00 - m l s o lu t i o n .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
Q u in ox a l i n e- 2 - ca r bo xy l i c ac i d : T h i s p ro d u c t sh o u l d c o ns i s t o f 9 9 %
o r m o r e qu in o x a l i n e- 2 - c a r bo x y l i c a c i d .
M e l t i ng po i n t : 2
08 ° C
4 . P r ep a ra t io n of t es t s o lu t i on s
a . Ex t r a c t i o n m e th od s
A f t e r h o m o ge n i z i n g , a s a m p l e o f 5 .0 0 g i s m ea su r e d o u t . F o r m u
s c le , t h e f a t l a y e r sh ou l d b e re m o ve d a s m u c h a s po ss i b l e b e fo r e
c h o p p i ng . On e hu n dr e d m l o f a m i xt u r e o f m e th a no l a n d 0 . 3 % m e
t a p h os p h o r i c a c i d s o lu t i o n (3 : 7 ) i s a dd e d t o t h e m e as u re d - ou t s a m p
l e . T h e m i x t u r e , af t e r ho m o g en i z i ng , i s f i l t e r e d b y s uc t i o n in t
o a ro t a r y v ac uu m e va po r a to r u s in g f i l t er pa pe r c o ve re d w i t h a
t w o - m i l l i m e t e r - th i c k l a y e r of d i a to m ac eo u s e ar t h . Th e r e s id u e o n
t h e su r f a c e of t h e f i l t er pa pe r i s t h e n wa s he d w i t h 1 0 m l o f a m i
x tu r e o f m e th a no l an d 0 . 3 % m e t ap ho s p ho r i c ac i d s o l u t i o n (3 : 7 ) t o
c o l l e c t t h e wa s h i ng s , w h i c h ar e th e n f i l t e r e d b y s uc t i o n a n d a dd e d
 i n t o th e r o t a r y va c u u m e va po r a t o r. Th e m i x tu r e i s co nc e n t r a te d t o
3 0 m l a t 45 ° C or l o we r, a n d 0 . 1 m l o f ph os p h or i c ac i d i s a d d e d .
b . C l e a n- u p
 i . Oc t ad e c y ls i l a ne - b on de d s i l i c a g e l c o lu m n c h r o m a
to g r ap h y
F i v e m l o f m e t h an o l i s ad d e d t o a n o c t a d e cy l s i l an e - b o n d ed s i l i c a
g e l m i ni c o lu m n (5 0 0 m g ) , f o l l ow e d b y 1 0 m l o f wa t e r. Th e e f
f lu e n t i s di s ca r d e d . T h e so l u t i o n o b t a i n ed b y th e e x t r a c t i o n m e
th o d d e s c r ib e d i n “a. Ex t r a c t i o n m e th o d s ” is p ou re d i n to
th is c o lu m n an d su bs e q u e n t l y 2 0 m l o f ph os p h at e b u f fe r s o
lu t i on (p H 2 .5 ) i s al s o ad d e d . Th e e f f lu e n t i s di s ca r d e d . Te n m l
o f m e th a no l i s p ou re d i n t o th e c o l u m n . T h e e l u a t e i s c o l le c t ed i
n a ro t a r y va cu u m e v a p or a t o r,
an d t h e m e th a n o l i s re m o ve d a t 40 ° C o r lo w e r. T h e r e s id u e
i s d i s so l v e d i n 5 m l o f w a te r.
i i . S t r on g ba s i c a n io n ex ch a ng e r c o lu m n ch r o m a
t og r a ph y
F i v e m l o f w a te r i s p ou re d i n t o a s t r o ng b as i c a n i o n e x ch a n
ge r m i ni c o lu m n (3 6 0 m g ) a n d th e e f f l u en t i s di s ca r d e d . Th e s o
lu t i o n o bt a i n e d in “i. O c ta d e c y l s i l a ne - b o nd e d silica gel
co lu m n c hr o m a to g r ap h y ” i s p o ur e d i n t o t h i s co l u m n . Tw o m l o f
wa t e r, 10 m l o f e t ha n o l a n d t h e n 5 m l of wa t e r a r e a ls o a dd e d i n
th a t or de r. T h e ef f lu e n t i s d i sc a rd e d . F i v e m l o f 0 . 1 m o l / l h y
dr oc h l or i c ac i d i s p ou re d i n t o t h i s co l u m n an d t h e e l ua t e i s co l
l e c t e d i n a 50 - m l t es t tu b e . T h r e e m l o f 3 m o l / l h yd ro ch l or i c
ac i d an d 15 m l o f e t hy l a ce t a t e ar e a l s o ad de d be fo r e sh a k i n g v i
go ro u s l y u s in g a s ha ke r f o r f iv e m i nu t es . A f t e r l e av i n g t o s ta nd ,
th e e t hy l ac e t a t e l a ye r i s t r an s fe r r e d in t o a 10 0 - m l co n ic a l f l as k .
F i f t e e n m l o f e th y l ac e ta t e i s ad d e d t o t h e a q u e o u s l a y e r, a n d
af t e r r ep e a t i n g t h e a b o v e p ro c e d ur e , t h e e t hy l ac e ta t e l a ye r i s
ad de d t o t h e c o n i ca l f l as k . A n ad eq ua t e am o un t o f so d iu m
su l f a t e ( an h y d r o us ) i s al s o ad d e d t o t h e f l a s k , w h ic h i s l e f t t o
s ta n d f o r 1 5 m i n ut e s a n d sh ak e n f r o m t i m e t o t i m e . Th e co n t e n t
o f th e f l as k i s th e n f i l t e r e d i n t o a ro t a r y v ac uu m ev ap or a t o r,
an d t h e e t hy l ac e t a t e i s r e m ov e d at 4 0° C o r l o we r. Th e r e s id u e
i s d i s so l ve d i n 1 . 0 m l o f a m i xt u r e o f ac e to n i t r i l e an d ph os p
h a t e b u f f e r so l u t i o n ( p H 2 . 5 ) (1 : 4 ) , wh i c h i s us e d a s t h e t e s t
so l u t i o n .
5 . De t e r m in a t i o n
a . Qu a l i t a t i v e t es t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s o b t a in e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d
i n t h e re f e r en c e m a te r i a l .
Te s t in g co nd i t i
ons
 C o lu m n pa ck i n g : Oc t a de c y l s i l a n e - bo n d e d s i l i c a ge l ( p ar t i c l e s i z
e: 5
µ m ) i s u se d .
C o lu m n : A s ta i n l e s s t u b e ( i nn e r d i am e t e r : 4 . 0 - 6. 0 m m an d l e n g th : 1
5 0 mm ) i s us ed .
C o lu m n t e m p er a t u re :
4 0° C
De t e c to r : S h ou l d b e o p er a t e d a t a n ab so r p t i o n w av e l e n g t h o f 2 4 5
n m . M ob i l e p h a s e : A m i x tu r e o f a c e t o n i t r i l e a n d ph os p h a t e b u f fe r
s o l u t i o n (p H 2 . 5 ) (1 : 4 ) i s us e d . Th e f l o w ra t e s ho u l d b e ad j u
s te d s o t h a t
qu i n ox a l i n e - 2- c a rb o x y l i c ac id flows out in a pp r o xi m a t e l y
1 0 m i nu t es .
b. Q ua n t i t a t i v e
t es t s
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e sa m e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t
h e r t h e pe a k he i g h t o r pe a k a r e a m e t ho d .
c. Co n f i r m a t i o n
tests
G a s ch r o m a to g r a ph y / m a s s s pe c t r o m e t r y i s p e r f o r m ed u nd e r th e
s a m e c on d i t i on s d es c r ib e d i n “ a . Qu a l i t a t i v e t es t s , ” b u t t h e m
o bi l e p h a s e sh ou l d be a m i x tu r e of a ce t o n i t r i l an d wa t e r
( 1 :4 ) . Te s t re s u l t s o bt a i n e d m u s t b e t h e s a m e a s t h e r e su l t s
o bt a i n ed i n t h e r e fe r e nc e m a t e r ia l . Th e qu an t i t y m a y be de t e r m i n
e d by e i t he r t h e pe a k h e ig h t o r pe a k ar e a m e t ho d , i f re qu i r e d .

( 8 ) Co u m ap h o s an a l y t i c a l m e
th o d
1 . Eq u i p m e n t
A ga s c hr o m a to g r ap h w i t h an a l k a l i f l a m e i on i z a t i o n de t ec t o r, a f l a
m e p ho t o m e t r i c d e t e c to r ( i nt e r f e re n c e f i l t e r f o r p ho s p ho ru s d e te r m
i n a t io n , wa ve l e n g t h : 526 nm ), or a h ig h l y - se n s i t i v e nitr og en
p ho s p h or u s d e te c t o r, a nd a g a s ch r o m a t og r a ph - m a s s sp ec t r o m e t e r
a r e u se d .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
R ea g e n t s d es i gn a t e d a s “ s p ec i a l g ra de ” i n t h i s s e c t i o n m u s t m e e t
t h e re qu i r e m e n t s fo r “ s pe c ia l gr a d e ” s pe c i f i e d in th e J a pa n
I nd u s t r i a l S t an da rd s f o r t h e r ea g en t s .
Ac e to n i t r i l e : T h r e e hu nd re d m l of ac e to n i t r i l e i s c on c e n t r a t e d u s i
ng a ro t a r y v ac uu m ev ap or a t o r. A f te r r e m o vi n g the ac e t on i t r i l
e, t h e re s i du e i s d i s so l v e d i n 5 m l of n - he xa n e . W h en 5 µ l o f t h e
d i s so l v ed
 re s i du e i s i n j e c t e d in t o t h e G C - E C D f o r an a l ys i s , th e he i gh t s o f p e a
k s fo r co m p ou nd s o t h e r t h a n n - h e x a n e o n t h e g a s ch r o m a t og r a m
m u s t b e t h e s a m e as o r l o we r t h an t h e pe a k fo r g a m m a - B H C at
-1 1
2x 1 0 g.
Ac e to n e : T h re e hu nd re d m l o f a ce t o n e i s co nc e n t r a t e d us i n g a r o
t a r y va cu u m ev ap or a t or. A f te r r e mo v in g the a ce t on e , the
re s i du e i s di s s o l v ed i n 5 m l o f n- h ex an e . W h e n 5 µ l o f th e d i s so l
v ed re s i d u e i s i n j e c t e d in t o th e G C - E C D fo r a n a ly s i s , t h e h e
ig h t s o f pe ak s f o r c o m po un d s ot h e r th a n n - he x a n e o n th e ga s c h
r o m a to g r a m m u s t b e t h e
-1
s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0
1
g.
S od i u m ch l o r id e : S o d i u m ch l o r i d e ( sp ec i a l g ra de ) . I n c as e s w he r e
a s ub s t an c e t h a t i n t e r fe r e s w i t h a na l ys i s o f a n in g r e d i en t of
t h e a gr i c u l t ur a l c he m i ca l p ro d u ct c o nc er n e d i s co n t a in e d , i t
sh o u l d b e r i n se d ou t w i t h a so l v en t su c h as n - he x a n e .
S i l i c a g e l f o r c o lu m n c hr o m a t o g ra ph y ( p a r t i c l e s i z e : 6 3- 2 0 0 µ
m ): Silicag e l ( pa r t i c l e s i ze : 6 3 - 20 0 µm ) pr od u c ed for
co l u m n ch r o m a t og r a ph y i s h e a te d a t 1 3 0 ° C fo r m o r e t h a n 1 2
ho u r s b e fo r e b e in g a l l o w e d t o c oo l i n a d es i c c a to r.
D i a t o m a ce ou s ea r t h : D i a t o m a ce ou s ea r t h f o r ch e m i c a l a n a l ys i s i s
u se d . E t h y l a ce t a t e: Th r e e h u nd re d m l o f e t h y l a c e ta t e i s c o n
ce n t ra t e d u s i n g a ro t a r y v a cu u m ev ap or a t o r. A f t e r r e m o vi n g t h e
e th y l ac e t a t e , t h e
re s i du e i s di s s o l v ed i n 5 m l o f n - h ex an e . W h e n 5 µ l o f th e d i ss o l
v e d r e s id u e i s i n j ec t e d i n t o th e G C - E C D fo r an a l y s i s , th e h e i gh t s o f
pe a k s f o r co m p ou nd s ot h e r t h a n n - h e x a n e o n t h e g a s c hr o m a
to g r a m m u s t b e t h e s a m e as o r l o we r t h an t h e pe a k fo r g a m m a -
-1 1
B H C at 2 x1 0 g.
n - He xa ne : Th r e e h u n d r ed m l of n - he xa n e i s co nc e n t r a t e d t o 5 m l us i n g
a r o t a r y v ac uu m ev ap or a t o r. Wh e n 5 µ l o f t h e c on c e n t r a t e d s a m p l e
i s in j e c t ed in t o t h e G C - E C D f o r a n a l ys i s , t h e h e ig h t s o f pe ak s
fo r c o m po un d s o th e r t h a n n - he x a ne o n th e ga s c h r o m a t og r a m m u s t
-1 1
be t h e s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0
g.
Wa t e r : D i s t i l l e d wa t e r i s u se d . I n ca se s w he r e a s ub s t an c e t h a t
in t e r f e re s w i t h an a l y s i s o f a n in g r ed i en t o f t h e ag r i c u l t u ra l ch e m i
ca l p ro du c t c o nc er n e d i s c on t a i n e d , i t s h ou l d b e r i n se d o u t w i t h a s
o l v e n t su c h as n - h e x an e .
S od i u m s u l fa t e ( an h y d ro u s ) : S od i u m su l f a t e (a nh y d r o us )
( sp ec i a l g ra de ) . I n c a s e s w he r e a s ub s t a nc e t h at i n t e r fe r e s w i t h a n
a ly s i s o f a n
in g r e d i en t of the a gr i cu l t u r a l c he m i ca l pr od u c t c on ce r n e d
i s c on t a i n e d , i t s ho u l d b e r i n se d ou t w i t h a s o l v en t s u c h a s n - he x a
ne .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
Co u m ap ho s : Th i s pr o d uc t s h o u l d c on s i s t o f 9 8 % o r m o r e c ou m
ap ho s . M e l t i n g po i n t : 9 5 ° C
4 . P r e pa r a t i o n o f t e s t so l u t i o n s
a. E x t r a c t i o n m e t ho d s
i . Ce r e a l gr a i ns , l e g u m e s /p u l se s a n d se e d s
Ce r e a l gr a i n s , l e g u m e s /p u l se s an d se ed s ar e c ru s he d s o a s t o
pa s s t h ro u g h a s ta nd a r d m e s h s ie v e ( 4 2 0 µ m ) b ef o r e b e i n g
we i gh e d t o p re pa r e a 1 0 .0 - g ra m s a m p l e . Tw e n t y m l o f w a te r i s
ad de d t o t h e ob t a i n e d s a m p l e an d i t i s l e f t t o s t a n d fo r t w o ho
ur s .
Ac e to n e ( 1 0 0 m l ) i s t h e n ad de d . T h e m i xt u r e , a f t e r h o m og en i z i
n g for th r e e m i n ut e s , is f i l t e re d by s uc t i o n into a ro t a r y
v ac uu m ev ap or a t o r us i n g f i l t e r p ap e r co v e r e d w i t h a o ne - ce n t i m
e t e r - th i c k l ay e r of d i a t o m a ce ou s ea r t h . T h e re s i du e o n t h e s u r fa c e
o f t h e f i l t e r p ap e r i s co l l ec t e d a n d ac e to n e ( 5 0 m l ) i s a dd e d b ef o r e
h o m og en i z in g fo r t h r e e m i nu t es . T h e a bo v e pr oc ed u r e i s th e n
r ep e a te d , a n d t h e f i l t r a t e i s a dd e d t o t h e r o t a r y v ac u u m ev ap or a t
o r a n d c on ce n t ra t e d t o ap pr o x i m a te l y 30 m l at 40 ° C o r l o w e r.
Th e c o n c e n t r a t e d s o l u t i o n i s t r a ns f e r r e d t o a 30 0- m l se pa r a t i
n g f un ne l a l r e ad y c o n t a i n i n g 1 0 0 m l o f s a tu r a t e d s o d i u m c h lo r i d
e . T h e eg g p l a n t - s ha pe d f l as k o f th e ab ov e r o t a r y va c u u m
e va po r a t o r i s w a sh e d w i t h 1 0 0 m l o f a m i x tu r e of e th y l ac e ta t e
a n d n- he xa n e ( 1 : 4 )
t o o bt a i n t h e wa s h in g s , w h ic h a r e th e n a dd e d t o t h e se pa r a t i
n g fu nn e l a b o v e . T h e m i x tu r e i s s h ak e n v i go r o us l y f o r f i v e
m i nu t e s us i n g a sh a k e r b ef o r e be i n g l e f t t o s t a n d , a n d th e n t h e l a
y e r s o f e th y l ac e ta t e a n d n - h ex an e a r e t r an s fe r r e d t o a 30 0- m l
c on i ca l f l a sk . F i f t y m l o f a m i x tu r e of e t hy l ac e t a t e a n d n - he x a
n e ( 1 : 4 ) i s ad d e d t o t h e a qu e ou s l a y e r an d af t e r re pe a t i n g t h e a
b o v e pr oc ed u r e , t h e l a y e r s o f e t hy l a ce t a t e a n d n - h e xa n e ar e
a dd e d to the c on i ca l f l as k . A n ad e q ua t e a m ou n t o f so d iu m
s u l fa t e ( an h y d r ou s ) i s a ls o a dd e d t o t h e f l a sk , w h i c h i s t h e n l e f t
t o s ta n d fo r 1 5 m i n u t es an d sh ak e n f r o m t i m e t o t i m e. T h e co n t
e n t o f t h e f l as k i s th e n f i l t e r e d i n t o a r o t a r y v ac u u m e va po r a t o r.
T h e co n ic a l f l a s k i s t h e n w a sh e d w i t h 2 0 m l o f n - h ex a n e t o o b
t a i n t h e w a sh i n g s , w i t h wh i c h t h e r e s i du e o n t h e su r f ac e o f
t h e f i l t e r p ap e r i s wa s he d t w i ce . T h e w a sh i n g s ob t a i n e d f r o m th e
r ep e a t ed w a sh i n g ar e t h en a dd e d to t h e ro t a r y va cu u m
e va po r a to r, an d t h e e t hy l ac e ta t e a n d n - h e x a n e a r e r e m ov e d a t 40 °
C
 o r l o we r.
Th i r t y m l o f n - he x a n e i s ad d e d t o th e r e s i d u e an d t h e m i x tu r e i s
th e n
t r an s fe r r e d t o a 1 0 0 - m l se pa r a t i n g f u nn e l , t o w h i c h 30 m l
o f n - he x a ne - sa t u r a t e d ac e to n i t r i l e i s a dd ed . A f t e r sh ak i n g th e m i
xt u r e vi go r o u s l y fo r f iv e m i n ut e s us i n g a s ha ke r, t h e f un n e l i s l e f t
t o s ta n d a n d t h e a ce t on i t r i l e l ay e r i s t r a n s f e r re d t o t h e r o t a r y
va cu u m e va p or a t o r. A f t e r a dd i n g n - he xa ne - s a tu r a te d ac e t o ni t r i l e
(3 0 m l ) t o t h e n - h e x a n e l a y e r, t h e a b ov e pr oc e d ur e i s r ep e a t e
d t w i c e . T h e a ce t on i t r i l e l ay e r i s th e n ad de d t o t h e r o t a r y v ac u u m
ev ap or a t o r, a n d t h e a c e t on i t r i l e i s re m o ve d a t 4 0° C o r lo w e r.
Th e r e s id u e i s d i s so l ve d i n 5- m l o f a m i xt u r e o f ac e to n e a n d n -
h e x an e ( 1 :1 ) .
i i . F r u i t , v e g e t a bl e s , t e a s a n d ho p s
F r u i t a n d v eg e t a b l e s a r e w e ig he d a cc u ra t e l y t o pr ep a r e a s a m p l e
o f ab o u t o n e k i l o g ra m . A n ap pr op r i a t e a m ou n t o f wa t e r i s m
ea su r e d an d ad d e d t o t h e sa m p l e , i f re q u i r ed . A f te r h o m o ge n iz i n
g , a sa m p l e e qu i v a l e n t t o 2 0 . 0 g i s m ea su r e d o ut .
Th e t ea i s w e ig he d t o p re pa r e a s a m p l e o f 5 . 00 g, t o w h i c h 2 0 m l
o f wa t e r i s a d de d a n d l e f t t o s t a n d f o r t w o h o u r s .
Ho p s a r e f i r s t c ru s he d i n t o p i e ce s an d w e ig he d t o p re pa r e
a
5 .0 0 - gr a m s a m p l e , t o w h ic h 2 0 m l o f w a te r i s a dd e d a n d l e f t t o s t
an d f o r t w o h ou r s .
Th e n , 10 0 m l o f a ce t o n e i s ad de d be fo r e f i n e l y cr u sh i n g fo r t h r e
e m i n ut e s . T h e cr u s h e d s a m p l e i s f i l t e re d b y su c t i o n i n t o a
ro t a r y va cu u m ev ap or a t or us i n g f ilter p a pe r co ve r e d
with a o ne - ce n t i m e te r - th i c k l a y e r o f di a t o m ac eo u s e ar t h . T h e
re s i du e o n t h e su r f ac e o f th e f i l t e r p ap e r i s co l l e c t e d a n d a c e to n e
(5 0 m l ) i s a dd e d b ef o r e h o m og en i z i n g f o r t h re e m i n ut e s . Th e a
bo v e pr o c e du r e i s r ep e a t ed a n d t h e f i l t r a t e i s a d d e d t o t h e r o t a r y
va cu u m ev a p or a t o r a n d c o n c en t r a te d t o a p pr ox i m a t e l y 3 0 m l at 4
0 ℃ or lo w e r.
Th e c o n c e n t r a t e d s o l u t i o n i s t r a ns f e r r e d t o a 30 0- m l se pa r a t i
n g fu nn e l a l r e a d y co n t a i n i n g 1 0 0 m l o f sa t u ra t e d s o d i u m c h lo r i d
e . T h e eg g p l a n t - sh ap e d flask of the a b ov e rotary va cu u m
ev ap or a t or i s wa s he d w i t h 1 0 0 m l o f a m i xt u r e o f e t hy l ac e t a t e
an d n- h ex an e (1 : 4 )
t o ob t a i n t h e w a sh i ng s , wh i c h a r e t h e n a dd e d t o t h e se pa r a t i
n g f un ne l ab o v e . T h e m i x tu r e i s s h ak e n v i g o r ou s l y fo r f i v e m
i n ut e s u s in g a s h a ke r b e fo r e be i n g l e f t t o s ta n d , a n d t h e l a y e r s
o f e t h y l a ce t a t e a n d n - h ex a n e a r e t h e n t r a n s fe r r e d t o a 3 00 - m l
co n ic a l f l a s k .
 F i f t y m l of a m i x tu r e o f e t hy l a ce t a t e a n d n - h e xa n e ( 1 : 4 ) i s a d d e
d t o th e a qu e o u s l a y e r, an d af t e r re p ea t i n g t h e ab ov e p r
oc ed ur e , t h e l a ye r s o f e th y l ac e t a t e an d n - he xa n e ar e a dd e d t o t h e
c o ni c a l f l a s k . A n ad eq ua t e a m ou n t o f so d iu m s u l f a t e ( an hy d ro u s )
i s a l s o ad de d t o t h e f l a sk , w h i c h i s l e f t t o s t a n d fo r 1 5 m i nu t e s a n d
sh a k e n f r o m t i m e
t o t i m e . Th e co n t e n t o f th e f l as k i s t h e n f i l t e re d in t o a ro t a
r y v ac u u m e va po r a t o r. T h e c on i ca l f l a s k i s t h e n wa s he d w i t h 2 0 m
l o f n - h ex a ne t o ob t a i n t h e w a sh i n g s , w i t h w h ic h t h e re s i du e
o n t h e s u r fa c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s wa s he d t w i ce . T h e w a sh i n g s
ob t a i n e d f r o m th e r ep e a t e d w a sh i n g ar e t h e n ad de d t o th e r o t a
r y va cu u m e va po r a to r, a n d th e et hy l a c e t a t e a n d n - h e x a ne a r e r e m
ov e d a t 4 0 ° C o r l o we r. T h e re s i du e i s di s s o lv e d i n 5 m l o f a m i
xt u r e o f ac e to n e an d n - h ex a n e (1 : 1 ) .
i i i . F oo d s e x c ep t th o s e l i s t e d i n i a n d i i
a bo v e
Ex t r a c t s a r e o b t a i n e d b y t h e m e th od s d es c r i b e d i n i o r
ii. b. Cle a n-up
F i v e g ra m s o f s i l i c a ge l f o r c o l u m n c hr o m a to g r a p h y (p a r t i c l e s i
ze:
6 3- 2 0 0 µ m ) su sp e n d e d i n a m i xt u r e o f ac et o n e a n d n - h ex a n e ( 1 : 1
) i s a dd e d i n t o a c hr o m a to g r ap h t u b e ( in n e r di a m e t e r : 1 5 m m a n d l
e n g th :
3 0 0 m m ) , o ve r w h ic h a b ou t 5 g o f so d i u m su l f a t e ( an h y d r ou s ) i s
a l s o po ur e d . T h e n , t h e m i x t u r e o f ac e t on e an d n - he x a n e ( 1 : 1 ) i s
s p i l t ou t u nt i l o n l y a s m a l l am o un t r e m a in s i n th e t i p o f th e
c o lu m n . T h e s o lu t i o n o b t a in e d b y t h e m e th o d d es c r ib e d i n “ a . E x
t r a c t i o n m e th od s ” i s p ou re d i n t o t h i s c o l u m n . T h en , 10 0 m l o f a m
i xt u r e o f ac e to n e a n d n - h ex a n e ( 1 :1 ) i s a l s o a dd e d . T h e e l u a t e
i s co l l ec t e d i n a ro t a r y va c u u m e va po r a t o r, a n d t h e a c e t on e
a n d n - h ex an e a r e re m o ve d a t
4 0° C or l o we r. T h e re s i du e i s di s s o lv e d i n a ce t o n e t o m a k e ex a c
t l y 5 m l o f s o lu t i o n , wh i c h i s us e d a s t h e s a m p l e s o lu t i o n .
5 . De t e r m in a t i on
a . Qu a l i t a t i v e t es t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s ob t a i n e d un d e r an y o f t h e co n d i t i o n s m u s t b e th e s a m
e a s t h e re s u l t s ob t a in e d i n t h e r e fe r e nc e m a t e r ia l .
Te s t i n g c o n d i t i on s
1
C o lu m n : A s i l i ca t e g l a s s ca p i l l a r y co l u m n ( i nn e r d i a m e t e r : 0 . 5 3
mm an d le n g t h : 10 -3 0 m) co ate d w it h m e t h yl si li co n e
fo r g a s ch r o m a to g r ap h y t o a t h i c k n es s o f 1 . 5 µ m i s u se d .
 C o lu m n t e m p er a t u re : Th e c o l u m n t e m p er a t u r e i s h e l d at 8 0° C fo r o
n e m i n ut e , f o l l ow e d b y a n i n c re a s e o f 8° C e ve r y m i n ut e un t i l
re a ch i n g
25 0° C , wh e r e i t i s h e l d f o r f i v e m i
nu t es . I n l e t t e m p er a t u re : 2 30 ° C
De t e c to r : S ho u l d b e o p er a t e d a t
28 0° C
G a s f lo w r a t e : He l i u m i s u se d as t h e c ar r i e r g as . T h e f l o w r a t e
sh ou l d be ad j u s t e d t o t h e o p t i m a l c on d i t i on . T h e f l o w s o f a i r a n d
h y d ro g e n sh ou l d a l s o b e a d j u s t e d t o th e op t i m a l co nd i t i o ns .
Te s t i n g co n d i t i o n s
2
C o lu m n : A s i l i ca t e g l a s s ca p i l l a r y co l u m n ( i nn e r d i a m e t e r : 0 . 3 2
mm an d l e n g t h : 1 0- 3 0 m ) co a te d w i t h 50 % t r i f l u o r o p r o p y l
m e th y l s i l i co n e f o r ga s c hr o m a to g r a ph y t o a t h i c kn e s s of 0 . 2 5
µ m i s u se d .
C o lu m n t e m p er a t u re : Th e c o l u m n t e m p er a t u r e i s h e l d at 7 0° C fo r o
n e m i n ut e , f o l l ow e d b y a n i n c re a s e o f 25 ° C e v e r y m i n ut e un t i l
re a c h i n g
12 5° C , a f t e r wh i c h t h e t e m p e ra t u r e i s i n c r e as e d b y 1 0° C e v
er y m i nu t e u n t i l r ea c h i n g 2 35 ° C , wh e r e i t i s h e l d f o r 1 2 m i n u
t es .
In l e t tem p e ra t u r e :
23 0° C
De t e c to r : S ho u l d b e o p er a t e d a t
28 0° C
G a s f lo w r a t e : He l i u m i s u se d as t h e c ar r i e r g as . T h e f l o w r a t e
sh ou l d be ad j u s t e d t o t h e o p t i m a l c on d i t i on . T h e f l o w s o f a i r a n d
h y d ro g e n sh ou l d a l s o b e a d j u s t e d t o th e op t i m a l co nd i t i o ns .
b . Qu an t i t a t i v e t es t s
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e sa m e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t
h e r t h e pe a k he i g h t o r pe a k a r e a m e t ho d .
c . Co n f i r m a t i o n t e s t s
G a s ch r o m a to g r a ph y / m a s s s pe c t r o m e t r y i s p e r f o r m ed u nd e r th e
s a m e co nd i t i o n s d es c r ib e d i n “ a . Qu a l i t a t i v e t e s t s . ” Te s t r e su l t s
o bt a i n ed m u s t b e t h e s a m e as t h e r e su l t s ob t a i n e d i n th e
r e fe r e nc e m a t e r ia l . Th e qu a n t i t y m a y b e de t e r m i n e d b y e i th e r th e
p e ak h e ig h t o r p e a k ar e a m e t ho d , i f re qu i r e d .
(9 ) C h lo r a m p he n ic o l an a l y t i c a l m e th o d
1 . Eq u i pm e n t
L i q u i d c h r o m a to g r ap h m a s s s pe c t r o m e t e r i s u se d .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n ad d i t i o n t o th e re a g e n t s a n d t e s t s o lu t i o n s l i s t e d b e l o w, t ho s e l i s
t ed i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
tives are
 u se d .
R ea g e n t s d es i gn a t e d a s “ s p ec i a l g ra de ” i n t h i s s e c t i o n m u s t m e e t
t h e re qu i r e m e n t s fo r “ s pe c ia l gr a d e ” s pe c i f i e d in th e J a pa n
I nd u s t r i a l S t an da rd s f o r t h e r ea g en t s .
Ac e to n i t r i l e : A ce t o n i t r i l e pr o d u c e d f o r l i q u i d ch ro m a t og r a ph y i s u s
ed . Oc t ad e c y l s i l a ne - b o n d e d sil i ca ge l m i ni c o l u m n ( 50 0 m
g ): A p ol y e th y l e n e c o lu m n w i t h a n i nn e r d i a m e te r o f 8- 9 m m
p ac ke d w i t h
50 0 m g o f o c ta d e c y l s i l a ne - b o n d e d s i l i c a g e l o r on e w i t h t h e s a
me s ep a ra t i o n ch ar a c te r i s t i c s i s u s e d .
S t r on g b a s i c a n i o n ex ch a n ge r m i n i c o l u m n ( 36 0 m g ) : A po l y e
th y l en e co l u m n w i t h an i n n e r d i a m e te r o f 8 - 9 m m pa ck e d w i t h
36 0 m g o f t r i m e th y l a m i n o a cr y l am i d e co p o ly m e r s i l a n e - bo n d e d
s i l i c a ge l o r on e w i t h t h e s a m e se pa r a t i o n c h a ra c t e r i s t i c s i s u s ed .
Wa t e r : Wa t e r pr od u c e d f o r l i q ui d ch ro m a t og r a ph y i s u s
ed.
So d i u m su lfate (a nh y d r o u s ) : So d i u m su lfate (a n h y d r o u s )
( s p ec i a l g ra de ) . I n c a s e s wh e r e a su bs t a nc e t h at in t e r f e re s w i t h a n
a ly s i s o f a n in g r e d i en t of the a gr i cu l t u r a l c he m i ca l pr od u c t
co nc e r n e d i s c on t a in e d , i t s ho u l d b e r i n se d ou t w i t h e t hy l ac e t a t
e.
P ho s ph a t e bu f fe r so l u t i o n (p H 2 .5 ) : M on o p o t a s s i u m
di hy d ro g e n m on op ho s p h a t e ( 1 . 3 6 g ) i s d i ss o l v e d i n w a te r t o m
a k e a 8 0 0- m l so l u t i on , t o w h ic h p h o s ph or i c a c i d i s a d d e d t o ad
ju s t t h e p H t o 2 . 5 . Wa t e r i s ad de d t o t h e ad j us t e d s o lu t i o n t o m a
ke a 1 , 00 0 - m l so l u t i on .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
Ch l o r a m ph en i c o l : T h is pr od u c t s ho u l d c on s i s t of 99 % or m
o r e ch l o ra m p he n ic o l .
De c o m po s i t i o n po int :
20 8° C
4 . P r ep a ra t io n of t es t s o lu t i on s
a . Ex t r a c t i o n m e th od s
A f t e r h o m o ge n i z i n g , a s a m p l e o f 5 .0 0 g i s m ea su r e d o u t . F o r m u
s c le , t h e f a t l a y e r sh ou l d b e re m o ve d a s m u c h a s po ss i b l e b e fo r e
c h o p p i ng . On e hu n dr e d m l o f a m i xt u r e o f m e th a no l a n d 0 . 3 % m e
t a p ho sp h o r i c ac i d s o l u t i o n (3 : 7 ) i s ad d e d t o t h e m e as u re d o u t sa m
p l e . A f te r f i n e l y c ru s h in g f o r th r e e m i n u t es , t h e m i xt u r e i s f i
l t e r e d by su c t i o n i n t o a ro t a r y va c u u m ev ap or a t o r us i n g fi lter
p ap e r c o v e re d wit h a
t w o - m i l l i me t e r - th i c k l a y e r o f di a t o m ac eo u s e a r th . Th e r e s i du e o n
t h e su r f ac e of t h e f i l t e r p a pe r i s th e n w a s he d w i t h 1 0 m l o f a m i
x tu r e o f m e t h an o l a n d 0 . 3 % m e t a p h os p h o r i c a c i d so l u t i o n ( 3 :7 )
to col l ect t h e
 w a sh i ng s , wh i c h a r e t h e n f i l t e r e d b y s uc t io n in t o th e r o t a r y
v ac u u m e va p o ra t o r. Th e m i xt u r e i s c o nc e n t r a te d t o 3 0 m l at 45 ° C
o r lo w e r, t o wh i c h 0 . 1 m l o f ph os ph o r i c a c i d i s ad d e d.
b . C l e a n- u p
i . Oc t ad e c y ls i l a ne - b on de d s i l i c a g e l c o lu m n c h r o m a
to g r ap h y
F i v e m l o f m e th a no l i s a dd e d t o th e o c t a de cy l s i l an e - b o nd e d
s i l i c a g e l m i n i co l u m n ( 50 0 m g ) , f o l l ow e d b y a n ad d i t i o n a l 1 0 m l
o f wa t e r. Th e e f f lu e n t i s di s ca r d ed . T h e so l u t i o n o b t a i n e d b y
th e e x t ra c t i o n m e th o d d e s c r ib e d i n “ a . Ex t r a c t i o n m e th od s ” i s
p o u re d i n t o th i s co l u m n , a n d s ub s e qu e nt l y 2 0 m l o f ph o s p h a t e
b u f f er so l u t i o n ( p H
2 .5 ) i s a ls o ad d e d. T h e ef f lu e n t i s di s ca r d e d . Te n m l o f m e
th a no l i s po ur e d i n t o th e c o lu m n . Th e e l u a t e i s c o l l e c t e d i n a
ro t a r y v ac uu m e va p o ra t o r, a n d t h e m e t h an o l i s re m ov e d a t 4 0 °
C o r l o we r. T h e re s i du e i s d i s so l v e d i n 5 m l o f wa t e r.
i i . S t ro n g b as i c an i o n e xc h a n ge r co l u m n c hr o m a
to g r ap h y
F i v e m l o f w a te r i s p ou re d i n t o a s t r o ng b as i c a n i o n e x ch a n
ge r m i ni c o lu m n (3 6 0 m g ) a n d th e e f f l u en t i s di s ca r d e d . Th e s o
lu t i o n o bt a i n e d in “i. O c ta d e c y l s i l a ne - b o nd e d silica gel
co l u m n ch r o m a to g r ap h y ” i s po u re d i n t o t h e co l u m n . Tw o m l o f
wa t e r, 1 0 m l o f e t ha n o l an d t h en 5 m l of wa t e r a r e a ls o a dd e d i n
th a t or de r. T h e ef f lu e n t i s d i sc a rd e d . F i v e m l o f 0 . 1 m o l / l h y
dr oc h l or i c ac i d i s p ou re d i n t o t h e c o l u m n a n d t h e e l u a t e i s c o l
l ec t e d i n a 5 0- m l t es t t ub e . T h r e e m l o f 3 m o l / l hy dr oc h l or i c
ac i d an d 15 m l o f e t hy l a ce t a t e ar e a l s o ad de d be fo r e sh a k i n g v i
go ro u s l y u s in g a s ha ke r f o r f iv e m i nu t es . A f t e r l e av i n g t o s ta nd ,
th e e t hy l ac e t a t e l a ye r i s t r an s fe r r e d in t o a 10 0 - m l co n ic a l f l as k .
F i f t e e n m l o f e th y l ac e ta t e i s ad d e d t o t h e a q u e o u s l a y e r, a n d
af t e r r ep e a t i n g t h e a b o v e p ro c e d ur e , t h e e t hy l ac e ta t e l a ye r i s
ad de d t o t h e c o n i ca l f l as k . A n ad eq ua t e am o un t o f so d iu m
su l f a t e ( an h y d r o us ) i s al s o ad d e d t o t h e f l a s k , w h ic h i s l e f t t o
s ta n d f o r 1 5 m i n ut e s a n d sh ak e n f r o m t i m e t o t i m e . Th e co n t e n t
o f th e f l as k i s th e n f i l t e r e d i n t o a ro t a r y v ac uu m ev ap or a t o r,
an d t h e e t hy l ac e t a t e i s r e m ov e d at 4 0° C o r l o we r. Th e re s i du e i s
di s s o lv e d i n 1 . 0 m l o f a m i x tu r e o f a ce t on i t r i l e a n d w a t e r (3 : 7 ) ,
wh i c h i s u s e d a s t h e t e s t so l u t i o n .
5 . De t e r m in a t i on

4040/
126
a . Qu a l i t a t i v e t es t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t

4141/
126
 r e su l t s ob t a i n e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d i n t
h e r e fe r e nc e ma t e r i a l .
Te s t i n g c on d i t i
on s
C o lu m n p ac k in g : Oc t ad e cy l s i l a ne - b o n de d s i l i c a g e l ( pa r t i c l e s i z e :
2-5
µ m ) i s u se d .
C o lu m n : A s t a i n le s s t ub e ( i n n er d i a m e te r : 2 . 0 - 6. 0 mm and
l e ng t h :
10 0- 2 5 0 m m ) i s us ed .
Co l u m n t e m p e ra t u r e :
40 ° C
M o b i l e p h a s e : A m i xt u r e o f ac e t o ni t r i l e an d 0 .5 % ac e t i c a c i d ( 3 :7 )
i s u se d . Th e f l o w r a t e sh ou l d b e ad j us t ed s o th a t ch l o r a m
ph en i c o l f lo w s ou t i n ap p ro x i m a t e l y 1 5 m i nu t es .
b. Qu an t i t a t i v e
tests
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e sa m e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t
h e r t h e pe a k he i g h t o r pe a k a r e a m e t ho d .

(1 0 ) Ch l o rp r o m a z in e a n a ly t i c a l m e th o d
1 . Eq u i pm e n t
L i q u i d c h r o m a to g r ap h t a n d e m m a s s sp ec t r o m e t e r i s
use d .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
Ac e to n i t r i l e : A ce t o n i t r i l e pr o d u c e d f o r l i q u i d ch ro m a t og r a ph y i s u s
ed . S t r on g ac i d c a t i o n e x ch a ng e r m i ni c o lu m n (5 0 0 m g ) : A p ol y e
th y l en e co l u m n w i t h an in n e r d i a m e te r o f 8- 9 mm pa ck e d w i t h
50 0 m g of
be nz e n es u l fo n y l pr op y l s i l a ne - b o n de d s i l i c a g e l o r on e w i t h t h e s a
me s ep a ra t i o n ch ar a c te r i s t i c s i s u s e d .
Wa t e r : Wa t e r pr od u c e d f o r l i q ui d ch ro m a t og r a ph y i s u s
ed.
M e t h a no l : M e t h a no l p r o du c e d fo r l i q u i d c h r o m a to g r ap h y i s
u se d .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
Ch l o rp r o m az i n e h y d ro ch l or i d e : Th i s p r o d u c t s h o u l d c o ns i s t o f 9 8
% or m o r e c h lo r p r o m az i n e h y dr oc h l o r i d e .
 M e l t i n g p o i nt : 1 94 - 1 9 6 °
C
4 . P r ep a ra t io n of t es t s o lu t i on s
a . Ex t r a c t i o n m e th od s
A f t e r h o m o ge n i z i n g , a sa m p l e o f 5 . 0 0 g i s m e as u re d o u t , t o wh i c
h 2 5 m l o f e t h y l a c e t a t e a n d 1 m l o f 4 m o l / l po t a s s i u m ca rb on a t e
so lut i o n
 a r e ad d e d . Th e m i x tu r e i s f i n e l y cr u sh e d b e fo r e b e i n g c e nt r i f u g e d
at
3,00 0 rpm fo r f iv e m i nu t es . Th e n , the e th y l a c e ta t e lay e r
i s t r an s fe r r e d t o a ro t a r y v ac uu m e v ap o ra t o r. Tw en t y - f i v e m l o f
e t h y l a ce t a t e i s a dd e d t o t h e re s i du e a n d cr u sh e d an d c e n t r i fu g e d
i n t h e s a m e m a n ne r a s ab ov e . T h e e t h y l a ce t a t e l a ye r i s t h e n
a dd e d t o t h e r o t a r y v ac u u m ev ap or a t or, a n d t h e e th y l a c e t a t e i s
r e m o ve d a t 4 0° C o r lo w e r. T h i r t y m l e ac h o f a c e t on i t r i l e a n d
a ce t o n i t r i l e - s a tu r a t ed n - h ex a n e a r e a dd e d t o th e re s i d u e be fo r e s h
a k i n g v i g o r ou s l y f o r f iv e m i n ut e s u s in g a s h a k er. T h e s ha k e n m i
x tu r e i s l e f t t o s t a n d , a n d t h e n
t h e a ce t o n i t r i l e l a y e r i s t r a ns f e r r e d t o a 10 0- m l se pa r a t i n g fu nn e l ,
t o wh i c h 30 m l of ac e to n i t r i l e - sa t u ra t e d n - h e x a n e i s a d d e d. Th e
a b o v e pr oc ed u r e i s re pe a t e d an d t h e a c e t on i t r i l e l a ye r i s c o l le c t e
d i n t h e ro t a r y va cu u m e va po r a t o r, a n d t h e ac e t o n i t r i l e i s r e m
o ve d at 4 0° C o r l o we r. Th e re s i du e i s d i ss o l v e d i n 10 m l o f a m i
x tu r e o f m e t h an o l a n d
1 . 2 % m e t ap ho sp h o r i c a c i d s o lu t i o n ( 2 :3 ) , w h i c h i s f i l t e r e d t h
r ou g h a c o t t o n p l u g .
b . C l e a n- u p
T h r e e m l o f m e t h an o l fo l l o w e d b y 3 m l o f w a te r ar e p ou re d in t o
a s t r on g a c i d c a t i o n ex c h an g e r m i n i c o l u m n ( 50 0 m g ) an d th e e f
f l u e n t i s d i sc a rd e d . Th e s o l u t i o n o b t a i n e d b y th e m e th o d d e
s c r ib e d i n “ a . E x t r ac t i o n m e t ho d s ” i s p o ur e d i n t o th i s c o l u m n .
Wa t e r ( 5 m l ) i s al s o ad d e d an d th e ef f lu e n t is di s c a r d ed .
F i f t e e n m l o f a m i xt u r e o f m e t h an o l and 0. 1 m o l/l di p o
t a s s iu m hy dr og e n o r th op h os p h a t e so l u t i o n ( 9 : 1 ) ar e a dd e d t o t h e
c o l u m n , an d th e e l u a t e i s c o l l e c t e d i n a r o t a r y v ac u u m e va po r a t
o r, a n d t h e w a te r a n d m e th a no l a r e r e m ov e d at
4 0° C o r l o w e r. Th e re s i du e i s di s s o lv e d i n 1 . 0 m l o f m e t h a n o l , w h
i c h i s u se d as t h e sa m p l e so l u t i on .
5 . De t e r m in a t i on
a . Qu a l i t a t i v e t es t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s o b t a in e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d
i n t h e re f e r en c e m a te r i a l .
Te s t in g co nd i t i
ons
C o lu m n p ac k in g : Oc t ad e cy l s i l a ne - b o n de d s i l i c a g e l ( pa r t i c l e s i z e :
2-5
 µ m ) i s u se d .
C o lu m n : A s t a i n le s s t ub e ( i n n er d i a m e te r : 2 . 0 - 6. 0 mm and
l e ng t h :
10 0- 2 5 0 m m ) i s us ed .
 Co l u m n t e m p e ra t u r e :
40 ° C
M o b i l e p h a se : A m i xt u r e o f a ce t o n i t r i l e , fo r m i c ac i d a n d w a
t e r (5 00 : 1 : 5 0 0 ) i s us ed . Th e f l o w r a t e s ho u l d be a d j u s te d s o
t h at ch l o rp r o m a z in e f l o w s o u t i n a p p r ox i m a t e l y 1 5 m i nu t es .
b. Qu an t i t a t i v e
tests
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e sa m e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t
h e r t h e pe a k he i g h t o r pe a k a r e a m e t ho d .

( 1 1 ) D i e t h y l s t i l b e s t ro l a na l y t i c al m e t ho d
1 . Eq u i pm e n t
L i q u i d c h r o m a to g r ap h t a n d e m m a s s sp ec t r o m e t e r i s
use d .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
R ea g e n t s d es i gn a t e d a s “ s p ec i a l g ra de ” i n t h i s s e c t i o n m u s t m e e t
t h e re qu i r e m e n t s fo r “ s pe c ia l gr a d e ” s pe c i f i e d in th e J a pa n
I nd u s t r i a l S t an da rd s f o r t h e r ea g en t s .
A ce t on i t r i l e: Ac e to n i t r i l e p ro d u c ed fo r l i q u i d c hr o m a to g r ap h y i s u s
e d . G l uc u ro n i d a s e so l u t i o n : S h ou l d c on t a i n 1 0 0 , 0 0 0 u n i t s / m l o f
b e ta - D -
g lu c u ro n i d a s e e x t ra c t e d f r o m H e l i x po ma t i a an d re f i n
e d . D ic h l o ro m e t h an e : D ic h l o r o m e th a n e ( s pe c i a l gr ad e ) .
We a k ba s i c a n i o n ex c h an g e re s i n m i n i co l u m n (5 0 0 m g ) : A p ol y e t h y l
en e co l u m n w i t h an i n n e r d i a m e te r o f 8 - 9 m m pa ck e d w i t h 5 0 0
m g o f d i e t h y l a m i n op r o p y l we a k b as i c an i o n ex c h an g e re s i n
pr od uc e d f o r co l u m n ch r o m a t og r a ph y or one with the
sa m e se pa r a t i o n c ha r ac t e r i s t i c s i s us e d .
Wa t e r : Wa t e r pr od u c e d f o r l i q ui d ch ro m a t og r a ph y i s u s
ed.
So d i u m su lfate (a nh y d r o u s ) : So d i u m su lfate (a n h y d r o u s )
( s p ec i a l g ra de ) . I n c a s e s wh e r e a su bs t a nc e t h at in t e r f e re s w i t h a n
a ly s i s o f a n in g r e d i en t of the a gr i cu l t u r a l c he m i ca l pr od u c t
co nc e r n e d is
co n t a in e d , it sh o u l d be r i ns e d out with a s o l v en t su c h
as di c h lo r o m e th a ne .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
D ie t h y l s t i l b es t r o l : T h i s p ro d u c t s ho u l d c on s i s t o f 99 % o r m o
r e di e t hy l s t i l be s t r o l .
De c o m po s i t i o n po int :
20 8° C
4 . P r ep a ra t io n of t es t s o lu t i on s
a . Ex t r a c t i o n m e th od s
A f t e r h o m og en i z i n g , a sa m p l e o f 5 .0 0 g i s m ea su r e d o u t , t o wh i c h
1 1 m l of 0 .0 4 m o l / l s od i u m a ce t a t e s o lu t i o n i s a dd e d . T h e m i
x tu r e i s
f i n e l y c ru s he d b e f o r e ad d i ng a c et i c ac i d t o a d j u s t t h e p H t o 4 .2 5 - 4
. 7 5 . On e h u n dr e d µ l o f g l u c ur on i d a s e s o lu t i o n i s a d de d t o th e
s o lu t i on a n d
l e f t t o s ta n d f o r 14 ho ur s a t 37 ° C . T h en , 1 6 m l o f ac e to n i t r i l e i s a d
d ed . T h e m i x tu r e i s sh ak e n vi g o r ou s l y f o r f i v e m i n ut e s us i n g a
s h a k er
b ef o r e bei ng c e n t r i f u ge d at 3 , 00 0 rpm for f iv e m i n ut e s .
T h e s up e rn a t an t l i q u i d i s c o l l e c t e d i n a ro t a r y v a c uu m ev ap or a t o r.
S i x t e e n m l o f ac e to n i t r i l e i s a d de d t o th e r e s id u e a n d th e ab ov e
p ro ce du r e i s re pe a t e d t w i ce . Th e su pe r na t a n t l i q u i d i s ag a i n co l l ec t
e d i n t h e ro t a r y va cu u m ev a po ra t o r a n d co nc en t r a t ed t o ap p r o x i m
a t e l y 3 m l at 5 0° C o r lo w e r. F i f t y m l o f di c h l o ro m e t h an e a n d 2 0 0 m
l o f 5 % s o di u m ch l o r i d e so l u t i o n are a dd e d to th e c on ce n t r a t e d
s a m p l e , wh i c h i s th e n v ig o r o u s l y s ha ke n fo r f iv e m i n ut e s
u s in g a sh ak e r. Th e d i ch l o ro m e t h an e l ay e r i s t h en co l l ec t e d a
n d de h y d ra t e d w i t h s o d i u m su l f a t e ( an hy d ro u s ) a n d f i l t e r ed . F i f t y
m l o f d i ch l o r o m e t h an e i s ad d e d t o t h e a q u e o u s l a y e r a n d t h e ab
o v e p ro ce du r e i s r ep e a t e d t w i c e . Th e d i c h l o r o m e th a n e l a y e r i s t h
e n m i x ed . A n a de q u a t e a m o un t o f s od i u m su l f a t e (a n h y d r ou s ) i s
a d d e d t o t h e m i x tu r e , w h i c h i s t h e n l e f t t o s ta n d fo r 1 5 m i n u t e s
a n d s h a k en f r o m t i m e t o t i m e . T h en , t h e co n t e n t is filtered
into a rot a ry va cu u m ev ap or a t or, an d t h e di c h l o ro m e t h a n e
is r e m ov e d at 40 ° C or lo w e r. The re s i d u e i s di s s o l v ed i n 4
m l o f a m i xt u r e o f n - he x a n e a n d b e n z e n e (3 : 1 ) .
b . C l e a n- u p
Te n m l o f a m i x tu r e o f n - h e xa n e a n d be n z en e ( 3 : 1 ) i s p o ur e d i n
t o a w ea k ba s i c a n i o n e x c ha n g e r e s i n m i ni c o l u m n ( 50 0 m g )
and t h e ef f lu e n t i s di s ca r d e d . T h e s o lu t i o n o b t a i n ed b y th e m e
t ho d de sc r i b e d i n “ a . E x t r ac t i o n m e th od s ” i s p o u re d i n t o t h i s
c o l u m n . Tw o m l o f a m i x tu r e of n - he x a n e an d b e n ze n e
(3: 1 ) an d t h en 4 ml of
d i ch l o ro m e t h an e a r e a l s o a d de d i n t h a t o rd e r. T h e ef f l u e n t
i s d i sc a rd e d. E i g h t m l o f a m i xt u r e o f di c h lo r o m e th a n e a nd m e
t h a n o l (9 : 1 ) i s po ur e d i n t o t h e co l u m n a n d t h e e lu a t e i s co l l e c t e d
i n a ro t a r y v ac u u m ev ap or a t o r, an d th e d i ch l o r o m e th a n e a nd
m e t h an o l ar e r e m ov e d a t 4 0° C or l o w e r. Th e r e s id u e i s d i s so l v e d
i n 0. 5 m l o f a m i x tu r e o f a ce t on i t r i l e an d w a te r ( 1 :1 ) , w h i c h i s
u se d a s th e s a m p l e
 s o lu t i on .
5 . De t e r m in a t i on
a . Qu a l i t a t i v e
tests
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s o b t a in e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d
i n t h e re f e r en c e m a te r i a l .
Te s t i n g c on d i t i
on s
C o lu m n p ac k in g : Oc t ad e cy l s i l a ne - b o n de d s i l i c a g e l ( pa r t i c l e s i z e :
2-5
µ m ) i s u se d .
C o lu m n : A s t a i n le s s t ub e ( i n n er d i a m e te r : 2 . 0 - 6. 0 mm and
l e ng t h :
1 00 - 2 5 0 m m ) i s
us ed .
C o lu m n t e m p er a t u re :
4 0° C
M o b i l e p h a se : A m i xt u r e of a ce t o ni t r i l e a n d 0 . 00 2 m o l / l a m m
on i u m ac e ta t e ( 1 : 1 ) i s us e d . Th e f l o w ra t e s ho ul d b e a d j u
s te d s o t h at di e t hy l s t i l be s t r o l f lo w s o u t i n a p p ro x i m a t e l y s ev e n
m i n ut e s .
b. Qu an t i t a t i v e
tests
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e sa m e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t
h e r t h e pe a k he i g h t o r pe a k a r e a m e t ho d .

(1 2 ) An a l y t i ca l m e t ho d fo r d i m e t r i da z o l e , m e t ro n i d a zo l e an d r o n id a
z o le
1 . Eq u i p m e n t
L i qu i d c h r o m a t og r a p h t an d em m a s s s pe c t ro m e t e r i s
us e d .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
A ce t on i t r i l e: Ac e to n i t r i l e p ro d u c ed fo r l i q u i d c hr o m a to g r ap h y i s u s
e d . M e t h a no l : M e t h a no l p r o du c e d fo r l i q u i d c h r o m a to g r ap h y i s
u se d .
Wa t e r : Wa t e r pr od u c e d f o r l i q ui d ch ro m a t og r a ph y i s u s
ed.
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
D i m e t r i da zo l e : Th is pr od u c t sh ou l d c on s i s t of 99% or mo
r e di m e t r i da z o l e .
M e l t i n g p o i nt : 1 38 - 1 3 9 °
C
M e t ro n i d a z o l e : T h is p ro d u c t s ho u l d co ns i s t of 99% or mo
r e m e t ro n i da z o l e .
M e l t i n g p o i nt : 1 58 - 1 6 0 °
C
R on i d az o l e : T h i s pr o d u c t s h ou l d co n s i s t o f 9 9 % o r m o r e ro n i d
azo l e .
 M e l t i n g po i n t : 1 6 7- 1 6 9 °
C
4 . P r ep a ra t io n of t e s t so l u t i o n s
A f t e r h o m og en i z i n g , a sa m p l e o f 5 . 0 0 g i s m e as u re d o u t , t o w h i c h
2 0 m l o f a ce t on i t r i l e i s a d de d . T h e m i x t u r e i s f i n e l y c ru s he d ag a i n
b ef o r e be i n g c e nt r i f ug e d a t 3 , 0 0 0 r p m f o r f iv e m i nu t es . T h e n , t h e
a c e t o n i t r i l e l a y e r i s t r an s fe r r e d t o a 10 0 - m l s ep a ra t i n g fu nn e l , t o
w h ic h 2 0 m l o f n - h ex a n e i s a l s o a d de d an d s h a k e n v i g o ro u s l y. Th e
s h a k en m i x tu r e i s l e f t t o s t an d , an d t h en th e ac e t on i t r i l e l a ye r i s
t r a ns f e r r e d t o a r o t a r y va c u u m e va po r a to r, t o w h ic h 5 m l o f n - p ro p a n
o l i s a d d e d t o re m o v e t h e ac e to n i t r i l e a n d n - p ro p a no l a t 40 ° C o r
l o we r. Th e r e s i d u e i s d i s so l v e d i n 1 . 0 m l of m e th a no l a n d f i l t er ed
t h ro ug h a m e m b r a ne f i l t e r w i t h a p or e s iz e o f 0 . 2 µ m . T h i s f i l t e r e d
s o l u t i on i s u se d as th e t es t s o lu t i o n .
5 . De t e r m in a t i o n
a . Qu a l i t a t i v e
tests
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s o b t a in e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d
i n t h e re f e r en c e m a te r i a l .
Te s t in g co nd i t i
ons
C o lu m n p ac k in g : Oc t ad e cy l s i l a ne - b o n de d s i l i c a g e l ( pa r t i c l e s i z e :
2-5
µ m ) i s u se d .
C o lu m n : A s t a i n le s s t ub e ( i n n er d i a m e te r : 2 . 0 - 6. 0 mm and
l e ng t h :
1 00 - 2 5 0 m m ) i s
us ed .
C o lu m n t e m p er a t u re :
4 0° C
M o b i l e ph a s e : A m i xt u r e o f a c e t o ni t r i l a n d w a te r (1 : 9 ) i s u s e d .
T h e f l o w ra t e sh ou l d b e a d j u s t e d s o t h a t d i m e t r i da z o l e , m e
t ro n i d az o l e a n d r o ni d a z o l e f l o w o u t i n 4- 1 0 m i nu t e s .
b. Qu an t i t a t i v e
tests
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e sa m e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t
h e r t h e pe a k he i g h t o r pe a k a r e a m e t ho d .

( 13 ) D a m i n o z i d e an a l y t i c a l m e
th o d
1 . Eq u i p m e n t
A ga s ch r o m a t og r a p h w i t h an a lk a l i f l a m e i o n i z a t i o n d e t e c t
o r o r hi gh l y - s en s i t i v e ni t r o ge n p ho sp ho r u s d e te c t o r, a ga s c hr o m a
t og r a ph - m a s s s pe c t r o m e t e r, an d s te a m di s t i l l a t i o n a pp ar a t u s a r e
u se d . T h e s t e a m di s t i l l a t i o n a p pa ra t u s sh ou l d b e m a d e o f g la s s a
n d r ou gh l y as sh ow n i n t h e fo l l o w i n g f i gu r e :
 A : 1 , 0 00 - m l r o u n d bo t t o m f l as k
( f o r s te a m ge ne r a t io n )
B : 1 , 0 0 0- m l ro u n d b o t t o m f l a s k
( fo r di s t i l l a t i on )
C : D i s t i l l at io n t r a
p D : C oo l i n g t ub e
E : 1 0 0 - m l c on i c a l f l a s k

2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
R ea g e n t s d es i gn a t e d a s “ s p ec i a l g ra de ” i n t h i s s e c t i o n m u s t m e e t
t h e re qu i r e m e n t s fo r “ s pe c ia l gr a d e ” s pe c i f i e d in th e J a pa n
I nd u s t r i a l S t an da rd s f o r t h e r ea g en t s .
Ac e to n e : T h re e hu nd re d m l o f a ce t o n e i s co nc e n t r a t e d us i n g a r o
t a r y va cu u m ev ap or a t or. A f te r r e mo v in g the a ce t on e , the
re s i du e i s di s s o l v ed i n 5 m l o f n- h ex an e . W h e n 5 µ l o f th e d i s so l
v ed re s i d u e i s i n j e c t e d in t o th e G C - E C D fo r a n a ly s i s , t h e h e
ig h t s o f pe ak s f o r c o m po un d s ot h e r th a n n - he x a n e o n th e ga s c h
r o m a to g r a m m u s t b e t h e
-1 1
s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0 g.
Ba s i c a l u m in a m i ni c o l u m n (1 , 7 1 0 m g ) : A po ly e t hy l en e c o l u m n
w i t h a n i nn e r di a m e t e r o f 8 - 9 m m p ac ke d w i t h 1 , 7 1 0 m g o f ba s i c
a lu m i n a o r o n e w i t h th e s a m e s ep a ra t i o n ch a r a c te r i s t i c s i s u se d .
S i l i c o n e f o r de fo a m i ng : S i l i c o n e pr od u c ed f o r d ef oa m i n g i s
u se d .
ο - N i t ro b e n z a ld e hy de : ο - N i t r ob e n za l d e h y d e ( s p ec i a l gr a
d e).
1% ο - N i t ro b en z a l d e h yd e- m e t h an o l s o lu t i o n : ο - N i t ro b e n z a ld e h y de (
10 0 m g ) is d i s so l ve d in 10 ml of m e t h an o l . Shou ld be
pr e p a r e d i m m e di a t e l y be fo r e us e .
P he no l ph t h a l e i n re ag e n t : P h e no l p h t h a l e i n ( 1 g ) i s d i s s o lv e d i n
10 0 m l o f e th a n ol .
n- H ex an e : Th r e e h u n d r ed m l o f n - h ex an e i s c on c e n t r a t e d t o 5 m l
us i n g a ro t a r y va cu u m e va po r a to r. W he n 5 µ l o f t h e co nc e n t r a te d
sa m p l e i s i n j e c t e d in t o th e G C - E C D fo r a n a ly s i s , t h e h e ig h t s
of p ea k s fo r co m p ou nd s o t h e r t h an n - he x a n e o n t h e g a s c h r o m a
to g r ap h m u s t b e th e
-1 1
s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0 g.
Wa t e r : Distille d wate r is us ed . In c as e s wh e r e a su bs t a n c e
th a t i n t e r fe r e s w i t h an a l y s i s o f an in g r ed i en t o f t h e ag r i c u l t u ra l
ch e m i ca l
 pr od u c t c o n ce rn e d i s co n t a in e d , i t s h o u l d b e r in s e d o u t w i t h a s o l
v en t s uc h a s n - h e xa n e .
M e th a n o l : Th r e e h u n d r ed m l o f m e th a n o l i s c o nc e n t r a t e d u s in g a r o t
a r y va c u u m ev ap or a t o r. A f t e r r e m o vi n g t h e m e t h an o l , t h e re s i
du e i s di s s o l v e d i n 5 m l o f n - he xa n e . W h en 5 µ l of t h e d i s so l v ed
re s i d u e i s i n j e c t e d in t o t h e G C - E C D f o r a n a ly s i s , t h e h e ig h t s
of pe ak s f o r c o m po un d s ot h e r th a n n - he x a n e o n th e ga s c h r o m a
to g r a m m u s t b e t h e
-1 1
s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0 g.
P ho s ph a t e bu f f e r so l u t i o n (p H 5): M on o p ot a s s i u m d ih y
dr og e n m on op ho s p h a t e (1 3 . 1 5 g ) a n d d i p o t as s i u m h y d ro ge n o r
th o p ho s p h a t e ( 0 . 5 9 g ) ar e d i s so l v ed i n w a te r t o m a k e a 1 0 0 - m l
so l u t i o n .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
D i m e t h y l h yd ra z i n e : T h i s pr od u c t s h ou l d c o ns i s t o f 97 % or m o
re
1 ,1 - d i m e th y l h y d ra z i n
e . Bo i l i n g p o i nt : 6 2
- 6 4° C
4 . P r ep a ra t io n o f t es t s o lu t i on s
a . Ex t r a c t i o n m e th od s
i . C e re a l gr a i ns , l e g u m e s /p u l se s , s ee ds , f r u i t , v eg e t ab l es , m a t ch a
an d ho p s
Ce r e a l gr a i n s , l e g u m e s /p u l se s an d se ed s ar e c ru s he d s o a s t o
pa s s t h ro u g h a s ta nd a r d m e s h s ie v e ( 4 2 0 µ m ) b ef o r e b e i n g
we i gh e d t o p re pa r e a 5 . 0 - gr a m s a m p l e .
F r u i t a n d v eg e t a b l e s a r e w e ig he d a cc u ra t e l y t o pr ep a r e a s a m p l e
o f ab o u t o n e k i l o g ra m . A n ap pr op r i a t e a m ou n t o f wa t e r i s m
ea su r e d an d ad d e d t o t h e sa m p l e , i f re q u i r ed . A f te r h o m o ge n iz i n
g , a sa m p l e e qu i v a l e n t t o 1 0 . 0 g i s m ea su r e d o ut .
M a tc h a i s we i gh e d t o pr ep a r e a 5 . 0- g ra m sa m p
le.
Ho p s ar e c r us he d i n t o pi ec e s an d we i gh e d t o pr ep a r e a 5 . 0 - gr a
m sa m p le.
E i gh t y m l o f wa t e r i s a dd e d t o t h e o b t a i n ed s a m p l e b ef o r e
sh ak i n g v ig o ro u s l y f o r 3 0 m i nu t es . Th e sh ak e n m i x tu r e i s f i l t e re d
b y su c t i o n u s in g a g l a s s f ib e r f i l t er. Th e re s i d u e o n th e f i l t e r i s c
o l l ec t e d a n d
 4 0 m l of w a te r i s ad de d be fo r e sh ak i n g f o r f i v e m i nu t e s .
A f te r r ep e a t i n g the ab ov e pr oc ed u r e , th e filtra t e is t ra n s f
er r e d t o a
1 ,0 00 - m l ro un d b ot t o m f l a s k ( f o r d i s t i l l
a t io n ) . i i . Te as ex c e p t m a t c h a
A 6 .0 - g ra m sa m p l e s oa ke d i n 3 6 0 m l o f w a te r at 10 0 ° C i s l e f t
to
 s ta n d a t ro o m t e m p er a t u r e f o r f i v e m i n ut e s be fo r e b e in g f i l t
er ed . F r o m th e c oo l e d f i l t r a t e , 1 2 0 m l i s t r a ns f e r r e d i n t o a 1 , 0 0 0-
m l ro un d b ot t o m f l a s k ( f o r di s t i l l a t i o n ) .
i i i . F o od s e x ce p t t ho s e l i s t e d i n i an d i i
ab ov e
E x t r ac t s ar e ob t a i n e d b y th e m e t ho d s de sc r i be d i n
i. b. Distill ati on
S i x t y g ra m s o f s od i u m h y d ro x i d e (6 5 g f o r v eg e t a bl e s a n d f r u i t )
i s a dd e d b i t b y b i t t o t h e r ou n d b o t t o m f l a s k de sc r i b e d a b ov e s o
t h a t i t di s s o l v es a s th e wa t e r co o ls . I m m e d i a te l y a f t e r ad d i n g
o n e t o t w o dr op s o f d ef o a m in g s i l i co n e t o th e d i s so l ve d so l u t i on ,
t h e f l a s k i s a t t a c h ed t o a di s t i l l at i o n a pp ar a t u s . S e pa r a t e l y, a
1 00 - m l co n ic a l f l as k co nt a i ni n g 5 m l o f p h os p h a t e b u f f e r
s o lu t i on ( p H 5 ) a n d o n e d ro p of p h e n ol ph t h a l e i n re ag e n t i s
a t t ac h e d t o a s te a m d i s t i l l e r a n d a
1 , 0 0 0 - m l ro u n d b o t t o m f l a s k ( f o r s te a m ge ne r a t i on ) i s he a t e d .
T h e s o lu t i o n i s s te a m di s t i l l e d un t i l th e di s t i l l a t e c o m e s t o 4 5
m l t o c on f i r m t h a t th e d i s t i l l a t e r e m a in s co l o r l e ss . T h e h e a t
s ho u l d be ad j us t e d s o as t o c o m p l e t e t h e di s t i l l a t i o n i n a bo u t 1 5
m i nu t e s .
c . De r i va t i z a t io n
O n e m l o f 1 % ο - ni t r o be nz a l d e h yd e- m e t h an o l s o lu t i o n i s ad de d t o
t h e ab o v e di s t i l l a t e . T h e m i x tu r e i s s h ak e n a n d l e f t t o s ta n d fo r
t w o h ou r s a t 3 0° C . T h e n , 5 0 m l o f n - h ex a n e i s ad d e d be fo r e s h a k
i n g a ga i n fo r f iv e m i n ut e s . Th e s ha ke n m i x tu r e i s l e f t t o s t a n d
a n d t h e n- he x a n e
l a y e r i s co l l ec t e d t o b e f i l t e re d i n a 2 0 0 - m l eg gp l a n t - s ha pe d
f l a s k us i n g a l i qu i d p ha s e s e p ar a t i o n f i l t e r p a pe r. F i f t y m l of n -
h ex a n e i s a dd e d t o t h e aq ue o u s l a y e r, a n d a f t e r re pe a t i n g t h e a b
o v e p ro c e d u r e , t h e n- h e x a n e l ay e r i s c o m b i n e d i n th e e g g pl a n
t - s ha pe d f l a sk . T h e re s i du e o n t h e f i l t e r i s w a sh e d w i t h 1 0 m l o f
n - he xa n e t o o bt a i n t h e w a sh i ng s , w h ic h ar e c o m b in e d i n th e eg gp l
a n t - sh ap e d f l a s k t o r e m ov e th e n - h e x a n e at 40 ° C o r lo w e r. Th e
r e s id u e i s t h e n di s s ol v e d i n 5 ml o f a m i x tu r e of a ce t on e a n d n - h e x
a n e ( 1 : 1 9) .
d . C l e a n- u p
Te n m l of a m i x tu r e o f a ce t on e a n d n - h e xa n e ( 1 :1 9 ) i s p ou re d i n t
o a b as i c a l u m in a m i ni c o l u m n ( 1 , 71 0 m g ) an d t h e e f f l u e n t i s
d i sc a r d e d . Th e so l u t i o n o bt a i n e d i n “ c . D e r iv a t i z a t i on ” i s p o
u r e d i n t o t h i s co l u m n , fo l l o w e d b y t h e i n j ec t io n o f 1 0 m l o f a m
i xt u r e o f ac e to n e an d n - h e x a n e ( 1 : 1 9) . T h e e l u a t e i s co l l e c t ed
i n a r o t a r y va c u u m e va po r a to r, a n d th e a ce t on e an d n - he xa n e
a r e r e m ov e d at 4 0° C o r
 l o we r. T h e re s i du e i s d i s so l ve d i n a c e to n e t o m a k e ex ac t l y 5 m l
o f s o lu t i on , w h i c h i s u s e d a s t h e t e s t so l u t i on .
5 . De t e r m in a t i on
a . Qu a l i t a t i v e t es t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s o b t a in e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d
i n t h e re f e r en c e m a terial u n de r the sam e pr oc ed u r e d es c
r i b e d i n “ c . De r i va t i z a t io n ” i n “ 4 . P r ep a ra t i o n o f t e s t so l u t i on s . ”
Te s t in g co nd i t i
ons
C o lu m n : A s i l i ca t e g l a s s ca p i l l a r y co l u m n ( i nn e r d i a m e t e r : 0 . 2 5
mm an d l e n gt h : 10 - 3 0 m ) c o a t e d w i t h 5 % p he ny l m e th y l s i l i c on e
fo r g a s ch r o m a to g r ap h y t o a t h i c k n es s o f 0 . 2 5 µ m i s us ed .
C o lu m n t e m p e ra t u r e : T h e c o l u m n t e m p e ra t u r e i s he l d at 60 ° C fo r t
w o m i nu t es , fo l l o w e d b y a n i n cr e a s e o f 10 ° C ev er y m i nu t e
un t i l r ea c h in g 28 0° C , w he r e i t i s h e l d f o r f iv e m i n u t e s .
In l e t tem p e ra t u r e :
28 0° C
D e te c t o r : S h ou l d b e o p e ra t e d at
2 80 ° C .
G a s f lo w r a t e : He l i u m i s u se d as t h e c ar r i e r g as . T h e f l o w r a t e
sh ou l d b e adj u ste d so th a t di m e t h y l h y dr az i n e d e r iv a t i ve s
f lo w ou t i n ap pr o x i m a te l y 1 3 m i n ut e s . T h e f l ow s o f a i r an d
h y d r o g en s h o u l d a ls o b e ad j u s t e d t o t h e op t i m a l co nd i t i o ns .
b . Qu an t i t a t i v e t es t s
T h e c on t e n t o f d i m e th y l h y d ra z i n e i s d e te r m i n e d f r o m t h e t e s t
r e su l t s ob t a i n e d u n de r t h e s a m e c on d i t i o n s de sc r i b e d i n “ a .
Q ua l i t a t i v e t es t s , ” us i n g e i t h e r t h e p ea k h e i g h t o r p ea k ar e a m e
t ho d . Th e co n t e n t o f da m i n oz i d e i s a l s o de t e r m in e d us i n g t h e
f o l l ow i ng f o r m ul a :
D a m i n oz i d e c o n t e n t ( p p m ) = 2 . 6 7 x d i m e th y l h y dr az i n e co nt e n t (
p pm )

c . Co n f i r m a t i o n t e s t s
G a s ch r o m a to g r a ph y / m a s s s pe c t r o m e t r y i s p e r f o r m ed u nd e r th e
s a m e c on d i t i on s d es c r ib e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t e s t s . ” Te s t r e su l t s
o b t a i n ed i n t h e re f e r en c e m a t e r ia l m u s t b e t h e s a m e as th e r e su l t s
o bt a i n ed u nd e r t h e pr oc e d u r e d es c r i b e d i n “ c . D e r i v a t i za t i o n ” i
n “ 4 . P r e pa r a t i o n o f
t e s t s o lu t i o ns . ” T h e q ua n t i t y m a y be d e te r m in e d b y e i t h e r th e
p ea k he i g h t o r p e a k ar e a m e t h o d , i f r e qu i r ed .
5050/
126
d . C a l i br a t i o n c u
rv e
A s o lu t i o n o f d i m e th y l hy d ra z in e ( 1 m l ) co m b in e d w i t h 5 m l
o f ph os p h a t e b u f f e r s o l u t i o n ( p H 5 ) a n d 4 0 m l o f w a te r i s as s a y e d
with

5151/
126
 t h e pr oc e d u r e d es c r i b e d i n “ c . D e r i v a t i z a t i o n ” i n “ 4 . P r
e pa r a t i o n o f t e s t so l u t i on s . ”

(1 4 ) N i t ro f u r an s an a l y t i c a l m e
th o d
3-am i no-2- oxaz o l i d i n o n e, 1-am i nohy dant oi n , 3-am i no-5- m o rphol i n o
m et hyl
-2- oxaz o l i d i none a n d s e m i carbazi de are anal y s ed.
1 . Eq u i p m e n t
L i qu i d c h r o m a t og r a p h t an d em m a s s s pe c t ro m e t e r i s
us e d .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
R ea g e n t s d es i gn a t e d a s “ s p ec i a l g ra de ” i n t h i s s e c t i o n m u s t m e e t
t h e re qu i r e m e n t s fo r “ s pe c ia l gr a d e ” s pe c i f i e d in th e J a pa n
I nd u s t r i a l S t an da rd s f o r t h e r ea g en t s .
A ce t on i t r i l e: Ac e to n i t r i l e p ro d u c ed fo r l i q u i d c hr o m a to g r ap h y i s u s
ed . P o ro u s di a t o m ac eo u s ea r t h c o l u m n ( t o h o l d 2 0 m l o f s o lu t i
o n ) : A p ol y e th y l e n e c o l u m n w i t h an i n n e r d i a m e te r o f 20 - 3 0 m m
pa ck e d w i t h
gr an u l ar po ro u s d i a to m ac eo u s e ar t h p ro du c ed for co l u
m n ch r o m a to g r ap h y t h a t c a n h o l d 2 0 m l of so l u t i on , o r o n e w i t h
th e s a m e s ep a ra t i o n ch ar a c te r i s t i c s , i s us e d .
ο - N i t r ob e n z a ld e h y de : o - N i t r ob e n z a ld e h y d e ( s p ec i a l gr a d
e ) . Wa t e r : Wa t e r p ro du c e d fo r l i q ui d ch ro m a t og r a ph y i s
us ed.
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
3 - a m in o - 2- o xa z o l i d i n o ne : T h i s p r o du c t s h o u l d c o n s i s t o f 9 9 % o r
m o re
3- a m in o - 2- o xa z o l i di n
on e .
D ec o m p os i t i o n p o in t : 6 5-
6 7° C
1 - a m in oh y da n t o i n h y d ro ch l o r id e : T h i s pr o d u ct sh o u l d co ns i s t of
90%
or m o r e 1- a m in oh y d an t o i n h y dr o c hl o r i d
e. D ec o m p os i t i o n p o i n t : 2 01 - 2 05 ° C
3 - am i n o - 5 - m o rp ho l i n o m e t h y l - 2 - o x a z o l i d i n o n e: T h is p ro du c t
s h ou l d c on s i s t o f 9 9 % o r m o r e 3 - am i n o - 5 - m o r p h o l i n o m e t h y l - 2 - o x
a z o l i d i n o n e . D ec o m p os i t i o n po i n t : 1 1 5 - 12 0 ° C
 S e m i c ar b az i d e h y d ro c h lo r i d e: T h i s pr o d uc t s ho u l d c o n s i s t of 99 %
or m o r e se m i ca rb a z i d e h y d ro ch l or i d e .
De c o m po s i t i o n po int : 17 5- 1
77 ° C
4 . P r ep a ra t io n o f t e s t so l u t i o n s
a . Ex t r a c t i o n m e th od s an d d er i v a t i za t
ion
 A f t e r h o m o ge n i z i n g , a sa m p l e o f 5 . 0 0 g i s m e as u re d o u t , t o wh i c
h 1 0 m l o f 0 . 1 m o l / l hy dr oc h l or i c ac i d i s ad d e d. T h e m i x t u r e
i s f in e l y c ru s he d be f o r e a dd i n g 0 . 4 m l o f 0 . 0 5 m o l / l ο - n i t r
o be n za l d e h y d e
- d i m e t hy l s u l fo x i de s o l u t i o n . T h e m i xt u r e i s th e n l e f t t o s ta n d f o r
1 6 ho ur s at 3 7 ° C . T h en , 5 m l o f 0 . 1 m o l / l d i p o t as s i u m h y
d ro ge n o r th o p ho s p h a t e so l u t i o n i s a d d e d . A pp r ox i m a t e l y 0 . 8 m l
o f a 1 m o l / l s od i u m hy d ro x id e s o l u t i o n i s a l s o ad d e d t o a d ju s t th e
p H t o 7 - 8 . T h i s s o lu t i o n i s ce n t r i fu g e d a t 2, 5 0 0 r p m f o r f iv e
m i nu t e s a n d t h e s up e rn a t a n t i s co l l ec t e d .
b . C l e a n- u p
T h e s up e rn a t an t ob t a i n e d b y t h e p r o c ed u r e s t a t ed in “a . Ex t r a
c t i o n m e th od s a n d d e r i v a t i z a t i o n ” i s i n j e c t ed in t o a po r o u s
d i a t o m a ce ou s e ar t h c o lu m n ( t o ho l d 2 0 m l o f so l u t i on ) . T h e c o
l u m n i s l e f t t o s t an d f o r f iv e m i n ut e s b ef o r e a dd i n g 10 0 m l o f e t hy l
a ce t a t e. Th e e l u a t e i s c o l l e c t e d i n a ro t a r y v a c uu m e va po r a t o r,
a n d t h e e t h y l ac e t a t e i s r e m ov e d a t 4 0° C o r l o w e r. Th e r e s id u e
i s di s s o l v ed i n 1 . 0 m l o f a m i x tu r e o f a c e t on i t r i l e an d wa t e r ( 1
: 1 ) , w h ic h i s u s ed a s t h e t e s t s o lu t i on .
5 . De t e r m in a t i on
a . Qu a l i t a t i v e t es t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s o b t a in e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d
i n t h e re f e r en c e m a te r i a l .
Te s t in g co nd i t i
ons
C o lu m n p ac k in g : Oc t ad e cy l s i l a ne - b o n de d s i l i c a g e l ( pa r t i c l e s i z e :
2-5
µ m ) i s u se d .
C o lu m n : A s t a i n le s s t ub e ( i n n er d i a m e te r : 2 . 0 - 6. 0 mm and
l e ng t h :
10 0- 2 5 0 m m ) i s us ed .
C o lu m n t e m p er a t u re :
4 0° C
M o b i l e p h a s e : A c on c en t r a t i o n gr ad i e n t o f a m i xt u r e of a ce t on i t r
i l e a n d 0 .1 % a ce t i c ac i d s o lu t i o n f r o m 1: 4 t o 4 : 1 sh o u l d b e
cr e a t e d i n
1 5 m i n ut e s . T h e f l o w ra t e s ho u l d b e ad j u s t ed s o t h at 3 - a m
in o - 2
 - ox az o l i d i n o n e f l o w s o u t i n a p pr o x i m a t e l y 1 2 m i
n ut e s . b. Q ua n t i t a t i v e t e s t s
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e sa m e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t
h e r t h e pe a k he i g h t o r pe a k a r e a m e t ho d .
(1 5 ) P r op h a m a na l y t i c a l m e th o d
1 . Eq u i pm e n t
G a s c hr o m a t og r a p h m a s s sp ec t r o m e t e r i s
u se d .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
R ea g e n t s d es i gn a t e d a s “ s p ec i a l g ra de ” i n t h i s s e c t i o n m u s t m e e t
t h e re qu i r e m e n t s fo r “ s pe c ia l gr a d e ” s pe c i f i e d in th e J a pa n
I nd u s t r i a l S t an da rd s f o r t h e r ea g en t s .
Ac e to n i t r i l e : T h r e e hu nd re d m l of ac e to n i t r i l e i s c on c e n t r a t e d u s i
ng a ro t a r y v ac uu m ev ap or a t o r. A f te r r e m o vi n g the ac e t on i t r i l
e, t h e r e s id u e i s d i s so l v ed i n 5 m l o f n - h ex an e . W h e n 5 µ l o f th e
d i s so l v ed re s i du e i s i n j e c t ed in t o t h e G C - E C D f o r a na l ys i s , t h e h e
ig h t s o f p e a k s fo r c o m po un d s ot h e r t h a n n - h e xa n e o n t h e g a s
ch r o m a to g r a m m u s t b e
-1 1
th e sa m e as o r l o we r t h an t h e pe a k f o r ga m m a- B H C a t 2x 1 0 g.
Ac e to n e : T h re e hu nd re d m l o f a ce t o n e i s co nc e n t r a t e d us i n g a r o
t a r y va cu u m ev ap or a t or. A f te r r e mo v in g the a ce t on e , the
re s i du e i s di s s o l v ed i n 5 m l o f n- h ex an e . W h e n 5 µ l o f th e d i s so l
v ed re s i d u e i s i n j e c t e d in t o t h e G C - E C D f o r a n a ly s i s , t h e h e
ig h t s of pe ak s fo r c o m po un d s o th e r t h a n n - he x a n e o n th e ga s c h r o
m a to g r a m m u s t b e t h e s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a
-1 1
- B H C a t 2x 1 0 g.
S od i u m ch l o r id e : S o d i u m ch l o r i d e ( sp ec i a l g ra de ) . I n c as e s w he r e
a s ub s t an c e t h a t i n t e r fe r e s w i t h a na l ys i s o f a n in g r e d i en t of
t h e a gr i c u l t ur a l c he m i ca l p ro d u ct c o nc er n e d i s co n t a in e d , i t
sh o u l d b e r i n se d ou t w i t h a so l v en t su c h as n - he x a n e .
O c ta d ec y l s i l an e - b o n d e d s i l i ca gel m i n i co l u m n (1 , 0 0 0 mg
): A
po ly e t hy l e n e c o lu m n w i t h a n i n ne r di a m e t e r o f 1 2- 1 3 m m pa ck e d w
ith
1 ,0 0 0 m g o f o c t a de c y l s i l a ne - b o n d e d s i l i ca g e l o r o n e w i t h t h e
s a m e se pa r a t i o n c ha r ac t e r i s t i c s i s us e d .
G ra ph i t e c a r bo n a nd a m in op r o p y l s i l a ne - b o nd e d s i l i c a ge l l a m i
na t e d m i ni c o lu m n ( 50 0 m g / 50 0 m g ) : A p ol y e t h y l e n e c o l u m n
w i t h a n i n ne r d i a m e te r o f 12 - 1 3 m m pa ck e d w i t h 50 0 m g e ac h o f
gr a ph i t e ca rb o n a n d am in op r op y l s i l a n e - bo n d ed s ilica ge l , or
on e w i t h t h e s a m e s ep a ra t i o n ch ar a c te r i s t i c s , i s us e d .
D i a t o m a ce ou s e ar t h : D i a t o m a ce ou s e ar t h f o r ch e m i ca l a n a l ys i s i s
u se d . To l u en e : T h re e h un d r ed m l o f t o l u e n e i s co nc e n t r a t e d i n
a ro t a r y
 va cu u m e va po r a t o r. A f t e r r e m ov i n g t h e to l u en e , t h e re s i du e
i s d i s so l v e d i n 5 m l o f n - he xa n e . W h en 5 µ l o f t h e d i ss o l v e d
re s i d u e i s i n j e c t e d in t o t h e G C - E C D f o r a n a ly s i s , t h e h e ig h t s
of pe ak s fo r co m p ou nd s o th e r t h a n n - h ex a n e o n t h e g a s c h r o m a
to g r a m m u s t b e t h e
-1
s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0
1
g.
n- H ex an e : Th r e e h u n d r ed m l o f n - h ex an e i s c on c e n t r a t e d t o 5 m l
us i n g a ro t a r y va cu u m e va po r a to r. W he n 5 µ l o f t h e co nc e n t r a te d
sa m p l e i s i n j e c t e d in t o th e G C - E C D fo r a n a ly s i s , t h e h e ig h t s
of pe ak s fo r co m p ou nd s o th e r t h a n n - h ex a n e o n t h e g a s c h r o m a
to g r a m m u s t b e t h e
-1
s a m e a s o r lo w e r th a n th e pe a k fo r g a m m a - B H C a t 2x 1 0
1
g.
Wa t e r : Distille d wate r is us ed . In c as e s wh e r e a su bs t a n c e
th a t in t e r f e re s w i t h an a l y s i s of a n i ng r e d ie n t o f t h e ag r i c u l t ur a l
ch e m i ca l p ro du c t c o nc er n e d i s c on t a i n e d , i t s h ou l d b e r i n se d o u t
w i t h a s o l v e n t su c h as n - h e x an e .
So d i u m su lfate (a nh y d r o u s ) : So d i u m su lfate (a n h y d r o u s )
( s p ec i a l g ra de ) . I n c a s e s wh e r e a su bs t a nc e t h at in t e r f e re s w i t h a n
a ly s i s o f a n in g r e d i en t of the a gr i cu l t u r a l c he m i ca l pr od u c t
co nc e r n e d i s c on t a in e d , i t s ho u l d b e r i n se d ou t w i t h a s o l v en t s u
ch a s n - h ex a ne .
0 . 5 m o l / l p h os p h a t e b u f f er so l u t i on ( p H 7 . 0 ) : 13 6 . 8 5 g o f s ec o n
d a r y s od i u m ph o s ph a t e (d o d e ca h y d ra t e ) a n d 1 7 . 9 2 g o f s o d i u m
ph os ph a t e m on ob as i c (d i h y d ra t e ) a r e m e as u re d ou t t o b e d i s s o l v e d
i n w a te r t o m a k e a 1 , 0 00 - m l so l u t i on .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
P r op ha m : T h i s pr o d uc t sh ou l d c o n s i s t of 99 % o r m o r e
pr op ha m . M e l t i n g po i n t : 8 7 ° C
4 . P r e pa r a t i o n o f t e s t so l u t i o n s
a. E x t r a c t i o n m e t ho d s
i . C e re a l g ra i n s , l e gu m es / pu l s e s a nd s e e d
s
Ce r e a l gr a i n s , l e g u m e s /p u l se s an d se ed s ar e c ru s he d s o a s t o
pa s s t h ro u g h a s ta nd a r d m e s h s ie v e ( 4 2 0 µ m ) b ef o r e b e i n g
we i gh e d t o p re pa r e a 1 0 .0 - g ra m s a m p l e . Tw e n t y m l o f w a te r i s
ad de d t o t h e ob t a i n e d s a m p l e an d i t i s th e n l e f t t o s t a n d f o r 1 5
m i n ut e s .
Ac e to n i t r i l e ( 5 0 m l ) i s th e n ad de d . A f te r h o m og en i z i n g f o r t h
re e m i n ut e s , t h e m i x tu r e i s f i l t e r e d b y s uc t i o n us i n g f i l t e r p ap e r c o
ve r e d w i t h a o ne - ce n t i m e te r - th i c k lay e r of d i a t o m a ce ou s
ea r t h . T h e r e s id u e o n t h e s u r fa c e o f t h e f i l t er p ap e r i s co l l e c te d
an d 2 0 m l of ac e to n i t r i l e is ad d e d . Th e m i xt u r e is c ru s he d
f in e l y f o r t h r e e
 m i n ut e s . T h e a b o v e pr oc ed u r e i s re pe a t e d an d t h e f i l t r a t e
i s c o m b in e d . Ac e to n i t r i l e i s t h e n a d d e d t o m a k e a 10 0- m l s o lu t i
on .
Tw en t y m l o f th e a bo v e s o l u t i on i s t r a n s fe r r e d t o a 1 0 0-
m l s ep a ra t i n g f un ne l , t o wh i c h 10 g o f so d i u m c h lo r i d e a n d 2 0 m l
o f 0 . 5 m o l / l ph o s p ha t e b u f f e r s o lu t i o n ( p H 7 .0 ) ar e ad de d . T h e
m i x tu r e i s sh ak e n v i g o ro u s l y f o r 1 0 m i nu t e s us i n g a s h a ke r an d
l e f t t o s t a n d . Th e a qu eo u s l a ye r i s th e n d i s c a r d e d a n d t h e ac e t
on i t r i l e l ay e r i s co l l e c t e d .
Te n m l o f a ce t o n i t r i l e i s p o u re d i n an o c t a d e c y l s i l a ne - b on d e d s i
l i c a g e l m i ni c o l u m n (1 , 0 0 0 m g ) an d t h e e f f lu e n t i s di s ca r d e d .
Th e a b o v e a ce t on i t r i l e l ay e r i s p ou re d i n t o t h i s c o lu m n . A f t e r
th e e l u a t e i s c o l l e c t e d i n a 50 - m l co n i ca l f l as k , 2 m l o f ac e to n i
t r i l e i s a ls o po ur e d i n t o th e co l u m n . T h e e l ua t e i s c o m b i n e d i n
th e c on i ca l f l a sk . A n a de q u a t e a m o un t o f s od i u m su l f a t e (a nh y d r
ou s ) i s a ls o ad de d t o t h e
f l as k , w h i c h i s l e f t t o s ta n d f o r 1 5 m i n ut e s a n d s h a k en f r o m t i m
e t o t i m e . Th e c on t e n t o f t h e f l a s k i s t h e n f i l t e r e d i n t o a r o t a r y
va cu u m e va po r a to r. T h e c on i c a l f l a s k i s w a s h ed w i t h 1 0 m l o f a c
e to n i t r i l e t o ob t a i n th e wa s h in g s , w i t h wh i c h t h e r e s id u e o n t h e
su r f ac e of t h e f i l t e r pa pe r is wa s h e d twice . The wa s h i n g s
ob t a i n e d f r o m th e r ep e a t e d w a s h in g ar e th e n a dd e d t o t h e r o t a
r y v ac u u m e v a p or a t o r, an d th e a c e to n i t r i l e i s r e m o ve d at 40 ° C
o r lo w e r. Th e r e s id u e i s d i s so l ve d i n 2 m l o f a m i xt u r e o f
to l u en e an d a ce t on i t r i l ( 1 :3 ) .
i i . F r u i t , v e g e t a bl e s , t e a s a n d ho p s
F r u i t a n d v eg e t a b l e s a r e w e ig he d a cc u ra t e l y t o pr ep a r e a s a m p l e
o f ab o u t o n e k i l o g ra m . A n ap pr op r i a t e a m ou n t o f wa t e r i s m
ea su r e d an d ad d e d t o t h e sa m p l e , i f re q u i r ed . A f te r h o m o ge n iz i n
g , a sa m p l e e qu i v a l e n t t o 2 0 . 0 g i s m ea su r e d o ut .
Te a s an d ho p s ar e f i r s t cr u sh e d i n t o pi e ce s an d we i g h e d t o p re p
ar e a
5 .0 0 - gr a m s a m p l e , t o w h ic h 2 0 m l o f w a te r i s ad d e d an d l e f t t o s t
an d f o r 15 m i n ut e s .
Th e n , 5 0 m l o f a ce t on i t r i l e i s a dd e d b ef o r e f i n e l y cr u sh i ng f o r t h r e
e m i n ut e s . T h e c ru s he d s a m p l e i s f i l t e r e d b y s uc t i o n us i n g f i l t e r
pa pe r c ov er e d w i t h a on e- c e n t i m e t e r - t h i c k l a y e r o f di a t o m
ac eo u s ea r t h . T h e r e s id u e o n t h e s u r fa c e o f t h e f i l t e r pa pe r
is c o l l ec t e d a n d ac e to n i t r i l e (2 0 m l ) i s a dd e d b ef o r e ho m
og en i z in g f o r t h r ee m i n ut e s . T h e ab ov e p ro ce du r e i s r ep e a te d an d
t h e f i l t r a t e i s c o m b in e d , an d th e n ac e t o ni t r i l e i s ad de d t o m a k e
a 1 00 - m l so l u t i on .
 Tw en t y m l of t h i s so l u t i o n i s t r a ns f e r re d t o a 10 0- m l s ep a ra t i n
g f un ne l , t o w h ic h 1 0 g o f s o di u m c h l o r i d e a n d 2 0 m l o f 0 . 5 m
o l / l ph os p h a t e bu f f e r s o lu t i o n (p H 7 . 0 ) a r e ad d e d . Th e m i xt u r e i s
sh ak e n v ig o r o u s l y f o r 1 0 m i n ut e s u s i n g a s h ak e r an d l e f t t o
s ta n d . T h e aq u e ou s l a y e r i s th e n d i sc a rd e d . Th e ac e t on i t r i l e l ay e
r i s c o l l e c t ed i n a 5 0- m l co n i c a l f l as k . A n a d eq u a t e a m o un t
o f so d i u m s u l fa t e ( an h y d ro u s ) i s a ls o ad de d t o t h e f l a sk , wh i c h i s
th e n l e f t t o s t an d f o r
1 5 m i n ut e s an d s h a k en f r o m t i m e t o t i m e. Th e co n t e n t o f th e f l as k
i s t h e n f i l t e r e d i n t o a r o t a r y v ac uu m ev ap or a t o r. T h e co n ic a l f l
as k i s wa s he d wit h 10 m l of ac e to n i t r i l e t o o bt a i n th e
wa s h in g s , w i t h wh i c h t h e r e s id u e o n t h e su r f ac e o f t h e f i l t e r pa pe r
i s w a s he d t w i c e . Th e wa s h in g s ob t a i n e d f r o m t h e r ep e a t e d w a
sh i n g a r e t h en ad de d t o
th e r o t a r y v ac u u m ev a po ra t or, a n d t h e ac e to n i t r i l e i s r e m
ov e d at
40 ° C o r l o w e r. Th e r e s id u e i s d i s so l v e d i n 2 m l o f a m i x tu r e
o f t o l ue n e a n d ac e to n i t r i l (1 : 3 ) .
i i i . F o od s e x ce p t t ho s e l i s t e d i n i an d i i
ab ov e
E x t r ac t s ar e ob t a i n e d b y th e m e t ho d s de sc r i be d i n i o r
ii. b. Cle a n-up
Te n m l o f a m i xt u r e o f to l u e n e a n d a ce t on i t r i l e (1 : 3 ) i s p ou re d i n t
o a gr ap h i t e ca r bo n a n d a m in op r op y l s i l a ne - b o n d e d s i l i ca g e l l a m
i n a t e d m i n i co l u m n (5 0 0 m g / 5 0 0 m g ) an d t h e e f f l u en t i s
d i sc a rd e d . Th e so l u t i o n o b t a i n ed by th e e x t r ac t i o n m e t ho d
d e scri bed in “ a . Ex t r a c t i o n m e t ho d s ” i s p ou r e d i n t o t h i s c o l u
m n a n d s u b s e qu e n t l y 2 0 m l o f a m i x tu r e o f to l u en e a n d ac e t
o ni t r i l e ( 1 :3 ) i s a l s o ad de d . T h e e lu a t e i s t r an s fe r r e d i n t o a ro t a r y
v a c uu m e va po r a t or, a n d t h e t o l u e n e an d a c e t o n i t r i l e a r e re m ov e d
at 40 ° C or l o we r. The r e s id u e i s di s s o lv e d i n a m i xt u r e o f
a ce t on e an d n - h e x a n e ( 1 :1 ) t o m a k e ex ac t l y
2 m l ( 1 m l fo r ce r ea l g r a i ns , l e g u m e s /p u l se s , s ee d s , t e a s a n d h o ps )
o f s o lu t i on , w h i c h i s u s e d a s t h e t e s t so l u t i on .
5 . De t e r m in a t i on
a . Qu a l i t a t i v e t es t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s o b t a in e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d
i n t h e re f e r en c e m a te r i a l .
Te s t i n g c on d i t i
on s
C o lu m n : A s i l i ca t e g l a s s ca p i l l a r y co l u m n ( i nn e r d i a m e t e r : 0 . 2 5
mm a n d l e n gt h : 30 m ) c oa t e d w i t h 5 % ph en y l m e t hy l s i l i co n e
fo r ga s
 ch r o m a to g r ap h y t o a t h i c k n es s o f 0 . 2 5 µ m i s us ed .
C o lu m n t e m p er a t u re : T h e c o l u m n t e m p e ra t u r e i s he l d at 50 ° C fo r o
n e m i n ut e , f o l l ow e d b y a n in c r ea s e o f 2 5° C e v e r y m i nu t e u nt i l
re a c h i n g
12 5° C , a f t e r wh i c h t h e t e m p e ra t u r e i s i n c r e as e d b y 1 0° C e v
er y m i nu t e u n t i l r ea c h i n g 3 00 ° C , wh e r e i t i s h e l d f o r 6 . 5 m i
nu t es .
In l e t tem p e ra t u r e :
25 0° C
De t e c to r : S ho u l d b e o p er a t e d a t
28 0° C
G a s f lo w r a t e : He l i u m i s u se d as t h e c ar r i e r g as . T h e f l o w r a t e
sh ou l d b e a d ju s t e d t o o pt i m al c on d i t i o ns .
I n j ec t i o n m e th od : S p l i t l e s s in j ec t i o n m e
t ho d
M e a su r e d m a s s n u m b e r ( m / z ) : 9 3 , 1 3 7 a n d
1 7 9 b . Qu an t i t a t i v e t es t s
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e sa m e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t
h e r t h e pe a k he i g h t o r pe a k a r e a m e t ho d .

T h e fo l l o w i n g re v i s i o n s h a l l b e m a d e t o I t e m 6 i n S e c t i o n A Ge ne r
al
C om po s i t i o n a l St a n d a rd s fo r Fo o d , P a r t I F oo d :
“ I n ca se s w he r e su b s t a nc e s ( i n c lu d i n g su b s t a nc e s p r o d u ce d by c h e m
i ca l t r an s fo r m a t i o n : t h i s ap p l i e s h e r e i na f t e r i n th i s p a r a gr ap h ) u s
ed a s
in g r ed i en t s o f ag r i c u l t u ra l ch e m i ca l s a n d o th e r ch e m i ca l su bs t a n ce s
l i s t e d i n th e f i r s t co l u m n o f th e t ab l e i n ( 1 ) be l o w ar e co n ta i n e d i n a
fo o d l i s t e d
i n t h e s e c o n d c o lu m n o f th e s a m e t a b le , t h e a m ou n t o f th e s u b s
t an ce s sh a l l n o t e x ce e d t h e a m o un t s t i pu l a t e d i n th e t h i r d c o l u m n o f
th e s a m e
t ab l e . Th e ag r i cu l t u r a l c h e m i c a l s an d ot h e r c he m i ca l su bs t a n c es
s ta t e d ab o v e re f e r, h er e a n d a ls o l a t e r i n t h i s pa r a g ra ph , t o s ub s t a n c e s
u s e d fo r pu rp o se s de s ig n a t e d by th e A g r ic u l t ur e , Forestry and
Fi s he r i e s M i n i s t e r i a l O r d in an c e ac co r d i n g to the pr ov i s i o n of
Pa ra g ra p h 3 of A r t i c l e 2 of th e Law C on c e rn i n g Sa fet y Ass u r a
nce an d Qu a li ty I m p r ov e m e n t o f Ag r i c u l t u r a l C h e m i ca l s a n d F ee d s
( L a w N o . 3 5 , 19 5 3 ) , w h ic h i s s t i pu l a t e d u n d er P a ra g ra p h 1 o f A r t i c l e
1- 2 o f th e Ag r i cu l t u ra l C he m i ca l s R eg u l a t i o n L a w ( L a w N o . 8 2 , 1 94 8) ,
w i t h s u c h a i m s a s a dd i n g to , m i xi n g w i th , or i n f i l t r a t i n g i n t o f ee d s
( th e fe ed s s t i pu l a t e d un de r P a r ag r ap h 2 o f L a w N o . 8 2) , o r m e di c a l
pr od u c t s t o b e u se d fo r an i m a ls , wh i c h ar e s t i pu l a t e d b y P a r ag r ap h 1
o f A r t i c l e 2 o f t h e P ha r m a c eu t i c a l A f f a i r s L a w. I n as s oc i a t i o n w i t h
th i s r eg u l a t i o n , f oo d s l i s t e d i n th e “ f oo ds ” c o l u m n i n th e t a b l e i n (
2 ) b e lo w s h a l l b e t es t ed u s i n g t h e pa r t l i s t e d i n t h e “ s a m pl e s ” c o lu m
n i n th e t a bl e a s a sa m p l e . I n ad d i t i o n , i n th e
 su bs t a n c es u se d as in g r e d i en t s of ag r i c u l t u ra l c h e m icals an d
ot h e r c he m i c a l su bs t a nc e s l i s te d i n t h e f i r s t co l u m n o f t h e t a b l e i n
(1 ) be l o w, wh i c h ar e s t i p u la t e d t o b e “ N o t d e t ec t e d ” i n t h e th i r d co l u
m n o f th e s a m e t a b l e i n t h e f oo d s l i s t e d i n th e s ec on d c o l u m n o f
th e sa m e t ab l e , n o i ng r e d ie n t o f ag r i cu l t u ra l ch e m i ca l s o r o th e r ch e m
i ca l s ub s t an ce s s ha l l b e d e te c t ed w h e n t h es e f o od s ar e t e s t e d u s i n g t h
e t e s t m e th od s s t i pu l a t e d i n (3 ) t o ( 10 ) be l o w, ” sh a l l b e c h an g e d t o “ R
eg a r d l es s o f th e pr ov i s i o n s i n 5 , i ng r e d ie n t s o f a gr i c u l t ur a l c h e m i c a l s
an d o th e r c he m i ca l s ub s t a n ce s l i s t e d i n t h e f i r s t co l u m n o f t h e t a b l e i
n (1 ) m u s t n o t b e c o n t a in e d i n f o o d s a t l ev e l s e x ce ed i n g th e l i m i t s
s t ip u l a te d i n t h e th i r d c o l u m n o f t h e s a m e t a b l e ac c or d in g t o t h e
fo o d c a t e g o r i e s sh ow n i n t h e s e c o n d c o l u m n o f t h e
sa m e t a b le . I n as s oc i a t io n w i t h t h i s r eg u l a t i o n , f o o d s l i s t e d i n t h e “ f
oo ds ” c o lu m n i n t h e t a bl e i n ( 2 ) b e lo w s h a l l b e t e s t ed u s i n g t h e pa r t l i
s t e d i n t h e “ s a m p l es ” co l u m n i n t h e t a bl e a s a s a m p l e . I n a dd i t i o n , i n
t h e s u bs t a nc e s us e d as i n gr ed i e nt s of a gr i c u l t u ra l che m icals
an d ot h e r c h e m i c a l su bs t a n c e s l i s t e d i n t h e f i r s t co l u m n of t h e t a b l e
i n ( 1 ) b e lo w, w h i c h a r e s t i pu l a t e d t o b e “ N ot d e te c t ed ” i n t h e t h i r d
co l u m n of th e s a m e t ab l e i n
th e f o o d s l i s te d i n t h e s ec on d c o l u m n o f t h e s a m e t ab l e , n o i n gr e d i e
n t of a gr i c u l t ur a l c h em i ca l s o r o th e r c he m i c a l s ub s t an c es sh a l l b e
de t e c t e d w he n t h es e fo od s a r e t es t e d u s i n g t h e t es t m e t ho d s s t ip u l
a te d i n ( 3 ) t o ( 10 ) be l o w. ”

T h e f o l l o w i n g r ev i s i o n s sh a l l a l s o b e m a d e t o t h e t a b l e i n I t e m 6
(1):
T h e de sc r i p t i o n o f “ B H C (a s t o t a l o f a lp ha - B H C , b e ta - B H C , g a m m a - B H C
a n d s i g m a - B H C , wh i c h a p pl i e s he re i n af t e r ) ” s ha l l b e c h a n ge d t o “ ( as
t o t a l o f a l ph a - BH C , b e ta - B H C , ga m m a - B H C a n d s i g m a - B H C ) . ”
U nd e r th e he a d i n g o f D C I
P,
“ K yo n a : 1 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 1 . 0 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 1. 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 1 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 1 . 0 pp m
N i r a : 1 . 0 p p m ” an d
“ S p in a ch : 1 . 0 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 1 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 1 . 0 pp m . ”
The de sc r i p t i o n of “D D T ( in c l u d i n g DDD an d DD E , wh i c h a pp l i
e s h er e i na f t e r ) ” s ha l l b e c ha ng e d t o “D D T ( in c l ud i n g D D D a n d DD E ) . ”
U nd e r th e he a d i n g o f E P T C ,
“ K yo n a : 0 . 0 4 p p m ” s h a l l b e c h an g e d t o
“ Ky on a : 0 . 04 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 0 . 1 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 .0 4 p p m ” s h a l l b e ch a n ge d t o
“ G a r l i c : 0 .0 4 pp m
N i r a : 0 . 0 4 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 0 . 1 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S pi n ac h : 0 . 1 p p m
B a m bo o s ho o t s : 0 . 1 p p m . ”
T h e d e sc r i pt i o n o f “ M C PA ( i n c lu d i n g p h e no t h i o l , w h i c h a p p l i e s h er e i n a f t e
r)”
s ha l l b e ch a ng e d t o “ M C PA ( i n c lu d i n g p h e n ot h i
o l ) . ” U nd e r th e he a d i n g o f 2 ,4 , 5 - T
“ K yo n a : No t d e t ec t e d ” sh a l l be ch an g e d t o
“ Ky on a : No t de t e c t e d
Q i ng - g en g - ca i : N o t d e t ec t e d , ”
“ G ar l i c : N o t de t e c t e d ” s ha l l b e c ha ng e d t o
“ G a r l i c : N o t d e t ec t e d
N i r a : No t d e te c t ed , ”
“ S p in a ch : N o t de t e c t e d ” sh a l l b e c ha ng e d t o
“ S pi n ac h : No t de t e c t e d
B a m bo o sh oo t : N o t d e t ec t e d ” a n d
“ W he a t f lo u r ” sh a l l be c h a n g e d t o
“ W h ea t f l ou r (e xc e p t wh o l e gr a i
n ) ” Un de r t h e h ea d in g of a ce ph a te ,
“ K yo n a : 5 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ Ky on a : 5 . 0 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 5 . 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 2 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G arlic: 2.0 ppm
N i r a : 0 . 5 pp m ” a n d
“ O th e r c uc ur b i t a n e o u s ve g e t a b l es : 0 . 5 p p m ” sh a l l be ch a ng e d t o
“ O t h e r c uc ur b i t a n e o u s ve g e t a b l es : 0 . 5
p p m ” B a m bo o s ho o t s : 3 . 0 p p m . ”
U nd e r th e he a d i n g o f am i t r o l e p a
rt,
“ K yo n a : No t d e t ec t e d ” sh a l l be ch an g e d t o
“ Ky on a : No t de t e c t e d
 Q i ng - g en g - ca i : N o t d e t ec t e d , ”
“ G ar l i c : N o t de t e c t e d ” s ha l l b e c ha ng e d t o
“ G a r l i c : N o t d e t ec t e
d
N i r a : No t d e te c t ed , ”
“ S p in a ch : N o t de t e c t e d ” sh a l l b e c ha ng e d t o
“ S pi n ac h : No t de t e c t e
d
B a m bo o s ho o t s : N o t de t e c t e d ” a n d
“ W he a t f l o u r ” sh a l l b e c h a n g e d t o “ W h ea t f l o u r ( ex c e p t wh o l e g r a i n ) ”

T h e f o l l o w i n g t a b l e s h a l l b e a d d e d af t e r t h e se c t i o n o f a l d i c a r b p a r t :
P i m i en t o
A L D R I N an d D I E L D R I N ( a s R i c e ( b ro w n r i c e ) ( s w ee t p ep p e
to t a l ) r)
W he a t
C o r n ( m a iz e )
B uc k wh e a t
Peas
B r oa d b e a n s
P o t a t oe s
J ap an e s e r a d i sh , r o o t s
( i n c l u di n g ra d i sh )
J ap an e s e r a d i sh , r o o t s
( i n c l u di n g
r ad i s h ) C h in e s e c a
b ba g e
C ab b a g e
B r u ss e l s sp r ou t s
K o ma t s un a ( Ja pa ne s e
m u s t a r d s p in ac h )
K yo n a
C au l i f l o w e r
B r oc co l i
L e t t u c e ( i n c lu d in g co s
l e t t uc e a n d l e a f l e t t u c
e ) A sp a r ag u s
Celery
Mi t s u b
a To m a
to

6060/
126
N o t de t e c t e d No t d e t e c t e d N o t
d e t e c t e d N o t de t e c t e d No t d e t e c t e
d N o t d e t e c t e d No t de t e c t e d
0.02 ppm

0.02 ppm

0.02 ppm
0.02 ppm
0.02 ppm
Not dete cte d

Not dete cte d

Not dete cte d
0.02 ppm
Not dete cte d

Not dete cte d

Not dete cte d
0.02 ppm
0.02 ppm
0.02 ppm

6161/
126
 Egg p l an t 0 .0 2 pp m
C uc u m b er ( in c l ud i No t d e t e c t e
n g gh er k i n ) d
Wa t e r m e lo n
S p i na c h No t d e t e c t e

P e a s , i m m a tu r e ( w i t h d Not de t e

p od s ) K i dn e y b e a n s , i m m a cte d No t

tu re de t e c t e d N o t
( w i t h po ds ) de t e c t e d
U ns h u o ra n g e , p u l p
C i t r u s na t s ud a i d a i , No t d e t e c t e

p ul p C i t r u s n a t s ud a i d a i , d Not de t e

p e e l s A pp l e cte d No t

J ap an e s e p e a r de t e c t e d N o t

Pear de t e c t e d N o t

L oq u a t de t e c t e d N o t

P e ac h de t e c t e d N o t

C he r r y de t e c t e d N o t

S t ra w be r r y de t e c t e d N o t

G r ap e de t e c t e d N o t

J ap an e s e p e r s i m m o n de t e c t e d N o t

Tea ( l i m i t e d t o u nf e r m en t e de t e c t e d N o t
d tea) de t e c t e d N o t
de t e c t e d

T h e fo l l o w i n g r e vi s i o n s sh a l l a l s o b e m a de t o t h e t a bl e i n I t e m 6 ( 1 ) , S ec t i o n
A
G e ne ra l C o mp os i t i o n a l St a nd a rd s f o r F o o d , P a r t I
F oo d : Un de r t h e h ea d in g of i s o fe np h o s ,
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 0 . 1 0 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 0 . 1 0 p p m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 1 0 p p m .
” U nd e r th e he a d i n g o f ip r od i on e ,
“ K yo n a : 5 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 5 . 0 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 5 . 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 . 1 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 0 . 1 pp m
N i r a : 5 . 0 p p m ” an d
“ S p in a ch : 5 . 0 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
 “ S p in a ch : 5 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 2 0 p p m . ”
Un de r t h e h ea d in g of e t h i o fe nc a r
b,
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 2 . 0 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 2 . 0 p p m
Q in g - ge n g - c a i : 2 . 0 p p m ” a n d
“ S p in a ch : 0 . 5 0 p p m ” sh a l l b e c h a ng e d t o
“ S p in a ch : 0 . 5 0 p p m
Ba m b o o sh oo t s : 7 . 0 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f e t r i m f os ,
“ K yo n a : 0 . 2 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 0 . 2 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 0 1 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 . 2 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 0 . 2 pp m
N i r a : 0 . 2 p p m ” an d
“ S p in a ch : 0 . 2 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 0 . 2 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 0 . 2 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f c ap t a f o l ,
“ K yo n a : No t d e t ec t e d ” sh a l l be ch an g e d t o
“ K yo n a : N o t d e t ec t e d
Q in g - ge n g - c a i : No t d e t e c t e d , ”
“ G ar l i c : N o t de t e c t e d ” s ha l l b e c ha ng e d t o
“ G ar l i c : No t de t e c t e d
N i r a : N o t de t e c t e d , ”
“ S p in a ch : N o t de t e c t e d ” sh a l l b e c ha ng e d t o
“ S p in a ch : N o t d e t e c t e d
Ba m b o o sh oo t s : No t d e te c t ed ” a n d
“ W he a t f lo u r ” sh a l l be c h a n g e d t o
“ W he a t f lo u r ( ex c ep t w ho l e g ra i
n ) ” Un de r t h e h ea d in g of c an t h a x a n t h in ,
“ C h i ck en , eg g s ( l i m i t e d t o y o lk ) : 2 5 pp m ” sh a l l b e ch a ng e d t o “ C
h i c k en , eg gs : 2 5 p p m ( i n y o lk ) ”
U nd e r th e he a d i n g o f ch i n o m e t h i o na t ,
“ O th e r c uc ur b i t a c e ou s v eg e t a b l e s : 0 . 5 pp m ” s ha l l b e c h an g e d t o
“ O th e r c uc ur b i t a c e ou s v eg e t a b l e s : 0 . 5 pp m
 Ba m b o o sh oo t s : 0 . 5 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f g l y ph os a
t e,
“ K yo n a : 0 . 2 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 0 . 2 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 2 p p m ” a n d
“ S p in a ch : 0 . 2 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 0 . 2 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 0 . 2 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f g lu f o s i n
ate ,
“ K a le : 0 . 5 0 p p m ” sh a l l be c h an g e d t o
“ K a le : 0 . 5 0 p p m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 5 p p m ” a n d
“ G ar l i c : 0 .5 0 p p m ” s h a l l b e ch a n ge d t o
“ G ar l i c : 0 . 5 0 p p m
Nira : 0.5 0 ppm .”
U nd e r t h e h ea d in g o f c l o t h i a n id i n
,
“ K yo n a : 5 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ K yo n a : 5 p p m
Q in g - ge n g - c a i : 5 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 .0 2 p p m ” s h a l l b e ch a n ge d t o
“ G ar l i c : 0 . 0 2 p p m
N i r a : 2 ppm ,”
“ S p in a ch : 0 . 0 2 p p m ” sh a l l b e c h a ng e d t o
“ S p in a ch : 0 . 0 2 p p m
Ba m b o o sh oo t s : 2 p p m ” a n d
“ S p ea r m i n t : 0 . 3 p p m
Pe pp e r m i n t : 0 . 3 p p m ” s ha l l b e d e
l e t ed . A l s o un de r th e he ad i n g o f c lo t hi a n
idin,
“ O th e r ve ge t ab l es (e x c ep t s p e a r m i n t a n d p e p pe r m in t ) ” sh a l l b e c h a n g e d
to
“ O t h e r ve ge t ab l es ” an d
“ H op : 0 .0 2 pp m ” s ha l l b e c h an g e d t o
“ H op : 0 .0 2 pp m
S pe a r m i n t : 0 . 3 p p m
P ep pe r m i n t : 0 . 3 p p m . ”
Un de r th e he a d i n g o f ch l o rp y r i f o s
,
“ K yo n a : 1 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ K yo n a : 1 p p m
 Q in g - ge n g - c a i : 1 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 .0 1 p p m ” s h a l l b e ch a n ge d t o
“ G ar l i c : 0 . 0 1 p p m
N i r a : 0 . 0 1 p p m ” an d
“ S p in a ch : 0 . 0 1 p p m ” sh a l l b e c h a ng e d t o
“ S p in a ch : 0 . 0 1 p p m
Ba m b o o sh oo t s : 0. 5 pp m . ”
Un de r t h e h ea d in g of c h lo r f l u a zu
r on ,
“ K yo n a : 2 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 2 . 0 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 2 . 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 2 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 2 . 0 pp m
N i r a : 2 . 0 p p m ” an d
“ S p in a ch : 2 . 0 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 2 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 2. 0 pp m . ”
U nd e r th e he ad i n g o f ch l o ro t ha l on i l ,
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 5 p p m ” sh a l l b e c h a n g e d t o
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 5 p p m
Q in g - ge n g - c a i : 2 p p m , ”
“ G ar l i c : 1 0 p p m ” sh a l l be c h an g e d t o
“ G ar l i c : 1 0 p p m
N i r a : 2 p p m ” an d
“ O th e r cu cu rb i t a c e o u s v eg e t ab l e s : 5 pp m ” s h a l l b e ch an ge d t o
“ O th e r c uc ur b i t a c e ou s v eg e t ab l e s : 5 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 2 p p m .
” U nd e r th e he ad i n g o f
c ya na z in e ,
“ G ar l i c : 0 .0 5 p p m ” s h a l l b e ch a n ge d t o
“ G ar l i c : 0 . 0 5 p p m
Nira : 0.0 2 ppm .”
Un de r t h e h ea d in g o f d i e t h of en c a r b
pa r t ,
“ K yo n a : 5 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 5 . 0 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 5 . 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 5 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 5 . 0 pp m
 N i r a : 5 . 0 p p m ” an d
“ S p in a ch : 5 . 0 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 5 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 5 . 0 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f c y c lo x y
dim ,
“ K yo n a : 2 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ K yo n a : 2 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 2 pp m . ”
U nd e r th e he a d i n g o f di c h l o f l u a n i d e ,
“ S p in a ch : 1 5 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ S p in a ch : 1 5 pp m
B a m bo o s ho o t s : 5 . 0 pp m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f d i c h
l o rv o s ,
“ D i ch l o rv o s ” s ha l l b e c ha n ge d t o “ D i c h lo r v o s a n d n a l e d (a s
t o t a l ) , ” “ K yo n a : 0. 1 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 0 . 1 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 1 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 . 1 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 0 . 1 pp m
N i r a : 0 . 1 p p m ” an d
“ S p in a ch : 0 . 1 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 0 . 1 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 0 . 1 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f c y ha l o t h
rin ,
“ K yo n a : 0 . 5 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 0 . 5 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 5 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 . 5 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 0 . 5 pp m
N i r a : 0 . 5 p p m ” an d
“ S p in a ch : 0 . 5 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 0 . 5 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 0 . 5 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f c y
f l u t h r in ,
“ K yo n a : 2 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 2 . 0 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 2 . 0 p p m , ”
 “ G ar l i c : 2 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 2 . 0 pp m
N i r a : 2 . 0 p p m ” an d
“ O th e r c uc ur b i t a c e ou s v eg e t a b l e s : 2 . 0 pp m ” s ha l l b e c h an g e d t o
“ O th e r c uc ur b i t a c e ou s v eg e t a b l e s : 2 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 2. 0 pp m . ”
Un de r t h e h ea d in g of c y pr oc on a z o
le,
“ S u ga r be e t : 0 . 1 p p m ” sh a l l b e ch a ng e d t o
“ S u ga r be e t : 0 . 1 p p m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 0 2 p p m .
” U nd e r th e he a d i n g o f cy h ex a t i n ,
“ K yo n a : No t d e t ec t e d ” sh a l l be ch an g e d t o
“ K yo n a : N o t d e t ec t e d
Q in g - ge n g - c a i : No t d e t e c t e d , ”
“ G ar l i c : N o t de t e c t e d ” s ha l l b e c ha ng e d t o
“ G ar l i c : No t de t e c t e d
N i r a : No t d e te c t ed ,
”
“ S p in a ch : N o t de t e c t e d ” sh a l l b e c ha ng e d t o
“ S p in a ch : N o t d e t e c t e d
Ba m b o o sh oo t s : No t d e te c t ed ” a n d
“ W he a t f l o u r ” sh a l l b e ch a ng e d t o “ W h ea t f l ou r ( ex c e p t wh o l e gr a
i n) ” U nd e r th e he a d i n g o f cy p er m e t h r in ,
“ K o ma t s un a : 5. 0 p p m ” s ha l l b e c h an g e d t o
“ K o ma t s un a : 5 . 0 p p m
Q in g - ge n g - c a i : 5 . 0 p p m , ”
“ We ls h ( i n c lu d i n g l e e k ) : 5 . 0 pp m ” sh a l l b e c h a n g e d t o
“ We ls h ( in c l u d i n g l e e k ) : 5 . 0 pp m
N i r a : 6 . 0 p p m ” an d
“ S p in a ch : 2 . 0 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 2 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 5 . 0 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f s p in o s a d ,
“ K yo n a : 5 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ K yo n a : 5 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 2 pp m . ”
U nd e r t h e h ea d in g o f s e th ox y d i m
,
“ K yo n a : 1 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
 “ K yo n a : 1 0 pp m
Q i ng - g en g - ca i : 1 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 1 0 p p m ” sh a l l be c h an g e d t o
“ G ar l i c : 1 0 p p m
N i r a : 1 0 p p m ” an d
“ S p in a ch : 1 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ S p in a ch : 1 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 1 0 p p m .
” U nd e r th e he a d i n g o f da m i
n oz i d e ,
“ K yo na : No t de t e c t e d ” s ha l l b e c h an ge d t o
“ K yo n a N o t de t ec t e d
Q i ng - g en g - ca i : N o t d e t ec t e d , ”
“ G ar l i c : N o t de t e c t e d ” s ha l l b e c ha ng e d t o
“ G ar l i c : No t de t e c t e d
N i r a : No t d e te c t ed , ”
“ S p in a ch : N o t de t e c t e d ” sh a l l b e c ha ng e d t o
“ S p in a ch : N o t d e t e c t e d
B a m bo o s ho o t s : N o t de t e c t e d ” a nd
“ W he a t f l o u r ” sh a l l b e ch a ng e d t o “ W h ea t f l ou r ( ex c e p t wh o l e gr a
i n) ” U nd e r th e he a d i n g o f th i o be n ca rb ,
“ K yo n a : 0 . 2 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 0 . 2 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 2 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 . 2 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 0 . 2 pp m
N i r a : 0 . 2 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 0 . 2 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 0 . 2 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 0 . 2 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f t h i o m e
t on ,
“ K yo n a : 0 . 1 0 p p m ” s h a l l b e c h an g e d t o
“ K yo n a : 0 . 1 0 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 0. 1 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 .1 0 p p m ” s h a l l b e ch a n ge d t o
“ G ar l i c : 0 . 1 0 p p m
N i r a : 0 . 1 0 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 0 . 1 0 p p m ” sh a l l b e c h a ng e d t o
 “ S p in a ch : 0 . 1 0 p p m
B a m bo o s ho o t s : 0 . 10 pp m . ”
T h e h e a d i n g of d i e ld r i n ( i n c l u d i n g a l d r i n ) s h a l l b e d e
l e t e d. U nd e r th e he a d i n g o f t e f lu b e nz u r on ,
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 0 . 5 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 0 . 5 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 1 pp m . ”

T h e f o l l o w i n g t a b l e s h a l l b e a d d e d af t e r t h e se c t i o n o f t e f lu b e nz u r on :
D E LTA M E T H R I N a n d R i c e (b r o w n r i ce ) 1.0 p p m
T R A L O M E T H R I N (a s to t a l )
Wh e a t 1.0 p p m
Ba r l e y 1.0 p p m
Ry e 1.0 p p m
Co r n ( m a i ze ) 1.0 p p m
Bu ck w h e a t 1.0 p p m
O th e r ce r e a l gr a i n s 1.0 p p m
S o y b ea n s, d r y 0.1 p p m
Be an s , d r y * 0.1 p p m
P ea s 0.1 p p m
B ro a d b ea n s 0.1 p p m
P ea nu t s , d r y 0.1 p p m
O th e r l eg u m e s / pu l s e s 0.1 p p m
P o ta t o 0.05 ppm
Ta r o 0.05 ppm
S w ee t p ot a t o 0.05 ppm
Ya m 0.05 ppm
Ko n ja c 0.05 ppm
O th e r po t a t o s 0.05 ppm
S ug a r be e t 0.1 p p m
Ja pa ne s e r a di s h , r o ot s 0.5 p p m
( in c l u d i n g r ad i s h )
Ja pa ne s e r a d i sh , l ea v e 0.5 p p m
s
( in c l u d i n g
0.5 p p m
ra d i sh ) T u r n ip ,
0.5 p p m
ro o t s
T u r n ip , l e a v e s
H o rs e r ad i s h 0.5 p p m
Wa t e rc r e s s 0.5 p p m
C h in e s e c a bb ag e 0.5 p p m
C ab b a g e 0.5 p p m
B r u ss e l s sp r ou t s 0.5 p p m
Kale 0.5 p p m
K o ma t s un a ( Ja pa ne s e 0.5 p p m
m u s t a r d s p in ac h )
K yo n a 0.5 p p m
Q i ng - g e n g - c a i 0.5 p p m
C au l i f l o w e r 0.5 p p m
B r oc co l i 0.5 p p m
O t he r cr uc i f 0.5 p p m
e ro u s v eg e t ab l es
B u rd o c k 0.5 p p m
Salsify 0.5 p p m
A r t i c ho k e 0.5 p p m
C h i co r y 0.5 p p m
E nd i v e 0.5 p p m
S h u n gi k u 0.5 p p m
L e t t u c e ( i n c lu d in g co s 0.5 p p m
l e t t uc e a n d l e a f l e t t u c e )
O t he r c o m p o s i t e v eg e t a 0.5 p p m
bles
0.5 p p m
O n io n
0.5 p p m
We l s h ( in c l ud i n g l
0.5 p p m
e ek ) G a r l i c
0.5 p p m
Nira
0.5 p p m
A sp a r ag u s
0.5 p p m
M u l t ip l y i n g o ni o n
0.5 p p m
O t he r l i l i a c eo u s ve ge t a
bles 0.5 p p m

C a r ro t 0.5 p p m

Parsnip 0.5 p p m

Parsley 0.5 p p m
Celery 0.5 p p m
Mi t s u b
a
O t he r un b e l l i f e r ou s 0.5 p p m
v eg e t ab l es
To m a t o 0.5 p p m
P i m i en t ( s w ee t pe pp e 0.5 p p m
r ) Eg g p l a n t s 0.5 p p m
O t he r so l a n ce ou s 0.5 p p m
v eg e t ab l es
C uc u m b er ( in c l ud i 0.5 p p m
n g gh er k i n )
P u m pk i n ( in c l u d i n 0.5 p p m
g s qu a sh )
O r i en t a l p i ck l i ng m e lo n 0.5 p p m
( ve ge t a b l e )
Wa t e r m e 0.5 p p m
lon Melo ns 0.5 p p m
Ma ku w au r i m e lo n 0.5 p p m
O t he r cu cu rb i t a c e ou s 0.5 p p m
v eg e t ab l es
S p i na c h 0.5 p p m
B a m bo o s h o ot s 0.5 p p m
Okra 0.5 p p m
G i ng e r 0.5 p p m
P e a s , i m m a tu r e ( w i t h
0.5 p p m
p od s ) K i dn e y b e a n s , i m m a
0.5 p p m
tu re
( w i t h po ds )
0.5 p p m
G r ee n so yb ea n s
0.5 p p m
B u t t o n m u s h ro o m
0.5 p p m
S hi i t a k e m u sh r oo m
0.5 p p m
O t he r m u s h ro o m s
0.5 p p m
O t he r v eg e t a b l e s
0.5 p p m
U ns h u o ra n g e , p u l p
1.0 p p m
C i t r u s na t s ud a i d a i
1.0 p p m
( w ho l e ) L e m o n
1.0 p p m
O r an g e ( i n c lu d i n g n a v
e l or an ge )
1.0 p p m
G r ap e f ru i t
1.0 p p m
Li m e

7070/
126
O t he r c i t r u s f r u i t s 1.0 p p m
A pp l e 0.5 p p m
J ap an e s e p e a r 0.5 p p m
Pear 0.5 p p m
Q u in c e 0.5 p p m
L oq u a t 0.5 p p m
P e ac h 0.5 p p m
N ec t a r i n e 0.5 p p m
A p r ic o t 0.5 p p m
J ap an e s e p l u m ( in c l ud i 0.5 p p m
n g pr un e )
M u m e p lu m 0.5 p p m
C he r r y 0.5 p p m
St 0.5 p p m
r a wb e r r y 0.5 p p m
R a sp be r r y 0.5 p p m
B l a ck be r r y 0.5 p p m
B l u eb e r r y 0.5 p p m
C r an be r r y 0.5 p p m
H uc k le b e r r y 0.5 p p m
O t he r be r r i e s 0.5 p p m
G r ap e 0.5 p p m
J ap an e s e p e r s i m m o n 0.5 p p m
B an an a 0.5 p p m
Kiwifruit 0.5 p p m
P a pa y a 0.5 p p m
Av oc a d o 0.5 p p m
P i n e ap p l e 0.5 p p m
G ua v a 0.5 p p m
Mang o 0.5 p p m
Passion fruit 0.5 p p m
Date 0.5 p p m
O t he r f r u i t s 0.5 p p m
S u n f lo w e r se ed s 0.5 p p m
Sesa m e see d s 0.5 p p m
S a f f l o we r s ee d s
 Co t t o n se ed s 0.5 p p m
R ap e se ed s 0.5 p p m
O t he r o i l s e ed s 0.5 p p m
G i nk g o n u t s 0.5 p p m
Ch e s tn u t s 0.5 p p m
P ec a n 0.5 p p m
Alm ond 0.5 p p m
Wa l nu t 0.5 p p m
O t he r n ut s 0.5 p p m
Tea 10 p p m
C o f f ee b e a n s 2.0 p p m
Ca c a o b e a n s 0 .0 5 pp m
Ho p 5.0 p p m

T h e fo l l o w i n g r e vi s i o n s sh a l l a l s o b e m a de t o t h e t a bl e i n I t e m 6 ( 1 ) , S ec t i o n
A
G e ne ra l C o mp os i t i o n a l St a nd a rd s f o r F o o d , P a r t I F oo d :
T h e h e a d i n gs o f de l t a m e th r i n a n d t r a lo m e t h r i n sh a l l be de l e
t e d . Un de r t h e h ea d in g o f t r i c h la m i d e ,
“ K yo n a : 0 . 2 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 0 . 2 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 2 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 . 2 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 0 . 2 pp m
N i r a : 0 . 2 p p m ” an d
“ S p in a ch : 0 . 2 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 0 . 2 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 0 . 2 p p m . ”
U nd e r th e he a d i n g o f t r i ch l o r p h o
n,
“ K yo n a : 0 . 5 0 p p m ” s h a l l b e c h an g e d t o
“ K yo n a : 0 . 5 0 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 0. 1 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 .5 0 p p m ” s h a l l b e ch a n ge d t o
“ G ar l i c : 0 . 5 0 p p m
N i r a : 0 . 5 0 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 0 . 5 0 p p m ” sh a l l b e c h a ng e d t o
“ S p in a ch : 0 . 5 0 p p m
 Ba m b o o sh oo t s : 0 . 5 0 pp m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f t r i f l u m i
z o le ,
“ K yo n a : 1 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 1 . 0 pp m
Q i ng - g en g - ca i : 1 . 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 1 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 1 . 0 pp m
N i r a : 5 . 0 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 1 . 0 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 1 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 1 . 0 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f
trifluralin,
“ K yo n a : 0 . 0 5 p p m ” s h a l l b e c h an g e d t o
“ K yo n a : 0 . 0 5 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 0. 0 5 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 .0 5 p p m ” s h a l l b e ch a n ge d t o
“ G ar l i c : 0 . 0 5 p p m
N i r a : 0 . 0 5 p p m ” an d
“ S p in a ch : 0 . 0 5 p p m ” sh a l l b e c h a ng e d t o
“ S p in a ch : 0 . 0 5 p p m
Ba m b o o sh oo t s : 2 p p m . ”
U nd e r th e he a d i n g o f to l c l o p ho s - m e th y
l,
“ K yo n a : 2 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 2 . 0 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 2 . 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 2 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 2 . 0 pp m
N i r a : 2 . 0 p p m ” an d
“ S p in a ch : 2 . 0 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 2 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 2. 0 pp m . ”
Un de r th e he a d i n g o f pa ra t h i on - m e t h y
l,
“ K yo n a : 1 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 1 . 0 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 2 p p m , ”
“ G ar l i c : 1 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 1 . 0 pp m
 N i r a : 1 . 0 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 1 . 0 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 1 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 1 . 0 pp m . ”
U nd e r th e he a d i n g o f bi o r es m e
thrin,
“ K yo n a : 0 . 1 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 0 . 1 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 1 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 . 1 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 0 . 1 pp m
N i r a : 0 . 1 p p m ” an d
“ S p in a ch : 0 . 1 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 0 . 1 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 0 . 1 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f b i f en t
h r in ,
“ M e l on s : 0 . 2 p p m ” s ha l l b e c h an g e d t o
“ M e l on s : 0 . 2 p p m
Ba m b o o sh oo t s : 0 . 1 p p m . ”
U nd e r th e he a d i n g o f py m
e t r oz i ne ,
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 0 . 0 2 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 0 . 0 2 p p m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 0 2 p p m .
” U nd e r th e he a d i n g o f p y
r ac l o f os ,
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 0 . 1 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 0 . 1 p p m
Nira : 0.5 ppm .”
U nd e r th e he a d i n g o f p y r i d ab en ,
“ G ar l i c : 1 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 1 . 0 pp m
N i r a : 2 . 0 p p m ” an d
“ O th e r c uc ur b i t a c e ou s v eg e t a b l e s : 2 . 0 pp m ” s ha l l b e c h an g e d t o
“ O th e r c uc ur b i t a c e ou s v eg e t a b l e s : 2 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 3 . 0 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f p i r i m i
c ar b ,
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 1 . 0 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 1 . 0 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 0. 5 0 p p m . ”
U nd e r t h e h ea d in g of p i r i m i fo s - m e t h y
l,
“ K yo n a : 1 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 1 . 0 pp m
Q in g - ge n g - c a i : 1 . 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 1 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 1 . 0 pp m
N i r a : 1 . 0 p p m ” an d
“ S p in a ch : 1 . 0 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 1 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 1 . 0 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f p y
r e t h r in ,
“ K yo n a : 1 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 1 . 0 pp m
Q i ng - g en g - ca i : 1 . 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 1 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 1 . 0 pp m
N i r a : 1 . 0 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 1 . 0 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 1 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 1 . 0 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f f i p ro n i l ,
“ C ab ba g e : 0 . 0 5 p p m ” sh a l l b e ch a ng e d t o
“ C ab ba g e : 0 . 0 5 p p m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 0 5 p p m .
” U nd e r th e he a d i n g o f fe na r i m o l ,
“ K yo n a : 0 . 5 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 0 . 5 pp m
Q i ng - g en g - ca i : 0 . 5 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 . 5 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 0 . 5 pp m
N i r a : 0 . 5 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 0 . 5 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 0 . 5 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 0 . 5 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f f en i t r o t h i
on,
“ We ls h ( i n c lu d i n g l e e k ) : 0 . 2 pp m ” sh a l l b e c h a n g e d t o
“ We ls h ( in c l u d i n g l e e k ) : 0 . 2 pp m
 Nira : 0.2 ppm ,”
“ S p in a ch : 0 . 2 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 0 . 2 pp m
B a m bo o s ho o t s : 0 . 2 p p m ” an d
“ W he a t f lo u r ” sh a l l be c h a n g e d t o
“ W he a t f lo u r ( ex c ep t w ho l e g ra i
n ) . ” U nd e r th e he a d i n g o f fe no b u ca r b ,
“ K yo n a : 0 . 3 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 0 . 3 pp m
Q i ng - g en g - ca i : 0 . 3 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 . 3 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 0 . 3 pp m
N i r a : 0 . 3 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 1 . 0 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 1 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 0 . 3 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f f en a m i
d on e ,
“ G ar l i c : 0 . 2 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 0 . 2 pp m
N i r a : 1 . 5 pp m ” a n d
“ O th e r cu cu rb i t a c e o u s v eg e t a b l e s : 0 . 1 5 p p m ” s ha l l b e c h an g e d t o
“ O th e r cu cu rb i t a c e o u s v eg e t ab l e s : 0 .1 5 p p m
Ba m b o o sh oo t s : 0 . 0 2 pp m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f f en va l e r a t e
,
“ K yo n a : 0 . 5 0 p p m ” s h a l l b e c h an g e d t o
“ K yo n a : 0 . 5 0 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 1 . 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 .5 0 p p m ” s h a l l b e ch a n ge d t o
“ G ar l i c : 0 . 5 0 p p m
N i r a : 0 . 5 0 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 0 . 5 0 p p m ” sh a l l b e c h a ng e d t o
“ S p in a ch : 0 . 5 0 p p m
B a m bo o s ho o t s : 0 . 50 pp m . ”
Un de r t h e h ea d in g of f en p y ro x i m a
te,
“ S p in a ch : 0 . 5 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 0 . 5 pp m
B a m bo o s ho o t s : 5 p p m . ”
Un de r th e he a d i n g o f f lu a z i n u m
,
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 0 . 1 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 0 . 1 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 0 . 1 p p m ” an d
“ We ls h ( i n c lu d i n g l e e k ) : 0 . 1 pp m ” sh a l l b e c h a n g e d t o
“ We ls h ( in c l u d i n g l e e k ) : 0 . 1 pp m
Nira : 0.1 ppm .”
U nd e r t h e h ea d in g of f l u az i f o p ,
“ K yo n a : 0 . 1 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 0 . 1 pp m
Q i ng - g en g - ca i : 1 pp m , ”
“ G ar l i c : 0 . 5 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 0 . 5 pp m
N i r a : 0 . 1 pp m ” a n d
“ O th e r c uc ur b i t a c e ou s v eg e t a b l e s : 0 . 1 pp m ” s ha l l b e c h an g e d t o
“ O th e r c uc ur b i t a c e ou s v eg e t a b l e s : 0 . 1 pp m
B a m bo o s ho o t s : 0 . 5 p p m . ”
U nd e r th e he a d i n g o f f lu c y t hr i n a t e ,
“ K a le : 0 . 5 0 p p m ” sh a l l be c h an g e d t o
“ K a le : 0 . 5 0 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 0 . 5 p p m , ”
“ O ni on : 0 . 1 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ O ni on : 0 . 1 p p m
N i r a : 0 . 5 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 0 . 5 0 p p m ” sh a l l b e c h a ng e d t o
“ S p in a ch : 0 . 5 0 p p m
Ba m b o o sh oo t s : 0 . 5 0 pp m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f f l u su l f a m i
de,
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 0 . 1 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 0 . 1 p p m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 1 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f p ro t h i
o fo s ,
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 0 . 2 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 0 . 2 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 0 . 2 p p m ” an d
“ G ar l i c : 0 . 1 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 0 . 1 pp m
 Nira : 0.1 ppm .”
U nd e r th e he a d i n g o f pr op a m o ca rb ,
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 1 . 0 p p m ” sh a l l b e ch a n g e d t o
“ B ru s s e l s s p ro u t s : 1 . 0 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 0 . 5 p p m ” an d
“ S p in a ch : 1 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ S pi n ac h : 1 0
pp m
B a m bo o s ho o t s : 0 . 2 p p m . ”
U nd e r th e he a d i n g o f pr op i c o n a z o l e ,
“ K a le : 0 . 0 5 p p m ” sh a l l be c h an g e d t o
“ K a le : 0 . 0 5 p p m
Q in g - ge n g - c a i : 0 . 0 5 p p m .
” U nd e r th e he a d i n g o f he x a t h i a
z o x,
“ M e l on s : 0 . 5 p p m ” s ha l l b e c h an g e d t o
“ M e l on s : 0 . 5
pp m
B a m bo o s ho o t s : 2 p p m . ”
U nd e r th e he a d i n g o f pe r m e th r i n ,
“ K yo n a : 3 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 3 . 0 pp m
Q i ng - g en g - ca i : 3 . 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 3 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 3 . 0 pp m
N i r a : 3 . 0 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 2 . 0 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S pi n ac h : 2 . 0
ppm
Ba m b o o sh oo t s : 3 . 0 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f b en t a z o
ne,
“ K yo n a : 0 . 0 5 p p m ” s h a l l b e c h an g e d t o
“ K yo n a : 0. 0 5 p p
m
Q i ng - g en g - ca i : 0. 0 5 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 .0 5 p p m ” s h a l l b e ch a n ge d t o
“ G a r l i c : 0 .0 5 pp m
Nira : 2 p p m ” and
“ S p in a ch : 0 . 0 5 p p m ” sh a l l b e c h a ng e d t o
 “ S p in a ch : 0 . 0 5 p p m
B a m bo o s ho o t s : 0 . 1 p p m . ”
U nd e r th e he a d i n g o f pe n d i m e t h a l i n ,
 “ K yo n a : 0 . 0 5 p p m ” s h a l l b e c h an g e d t o
“ K yo n a : 0 . 0 5 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 0 . 0 5 p p m ” a n d
“ G ar l i c : 0 . 2 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 0 . 2 pp m
N i r a : 0 . 0 5 pp m . ”
U nd e r th e he a d i n g o f bo sc a l i d ,
“ K yo n a : 1 8 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 1 8 pp m
Q i ng - g en g - ca i : 1 8 p p m , ”
“ G ar l i c : 3 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 3 . 0 pp m
Nira : 3.0 ppm ,”
“ O th e r c uc ur b i t a c e ou s v eg e t a b l e s : 1 . 6 pp m ” s ha l l b e c h an g e d t o
“ O th e r c uc ur b i t a c e ou s v eg e t a b l e s : 1 . 6 pp m
B a m bo o s ho o t s : 1 . 6 p p m ”
and
“ S p ea r m i n t : 3 0 pp m
Pe pp e r m i n t : 3 0 p p m ” s ha l l b e d e l e
t e d . A l s o i n t h e he a d i n g o f bo sc a l i d ,
“ O th e r ve ge t ab l es (e x c ep t s p e a r m i n t a n d p e p pe r m in t ) ” sh a l l b e c h a n g e d
to
“ O th e r v eg e ta b l e s ” a n d
“ H op : 3 5 p p m ” sh a l l b e c h a n g e d t o
“ H op : 3 5 p p m
S p ea r m i nt : 3 0 p p m
P ep pe r m i n t : 30 pp m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f
f o se t y l ,
“ K a le : 60 p p m ” s ha l l b e ch a ng e d t o
“ K a le : 6 0 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 1 00 p p m , ”
“ G ar l i c : 5 0 p p m ” sh a l l be c h an g e d t o
“ G ar l i c : 5 0 p p m
N i r a : 1 0 0 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 1 0 0 p p m ” s h a l l b e c h an g e d t o
“ S p in a ch : 1 0 0 p p m
 Ba m b o o sh oo t s : 1 0 0 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f m a
l a t h io n ,
“ K yo n a : 2 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
 “ K yo n a : 2 . 0 pp m
Q i ng - g en g - ca i : 2 . 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 8 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 8 . 0 pp m
N i r a : 2 . 0 pp m , ”
“ S p in a ch : 2 . 0 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 2 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 2. 0 pp m ” a n d
“ W he a t f lo u r ” sh a l l be c h a n g e d t o
“ W h ea t f l ou r (e xc e p t wh o l e gr a i
n ) ” Un de r t h e h ea d in g of m a l e i c h y
d ra z i de ,
“ K yo n a : 0 . 2 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 0 . 2 pp m
Q i ng - g en g - ca i : 0 . 2 p p m , ”
“ G ar l i c : 5 0 p p m ” sh a l l be c h an g e d t o
“ G ar l i c : 5 0 p p m
N i r a : 1 0 p p m ” an d
“ S p in a ch : 2 5 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ S p in a ch : 2 5 pp m
B a m bo o s ho o t s : 30 p p m . ”
Un de r t h e h ea d in g o f m y c l ob u t a n
il,
“ C hi n es e c a bb a ge : 1 . 0 p p m ” sh a l l be c h an g e d t o
“ C hi n es e c a bb a ge : 1 . 0 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 1 . 0 p p m , ”
“ G ar l i c : 1 . 0 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 1 . 0 pp m
N i r a : 1 . 0 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 1 . 0 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 1 . 0 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 1 . 0 p p m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f m e
t h i oc a r b ,
“ K yo n a : 0 . 0 5 p p m ” s h a l l b e c h an g e d t o
“ K yo n a : 0 . 0 5 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 0. 0 5 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 .0 5 p p m ” s h a l l b e ch a n ge d t o
“ G ar l i c : 0 . 0 5 p p m

8080/
126
N i r a : 0 . 0 5 pp m ” a n d

8181/
126
 “ S p in a ch : 0 . 0 5 p p m ” sh a l l b e c h a ng e d t o
“ S p in a ch : 0 . 0 5 p p m
Ba m b o o sh oo t s : 0 . 0 5 pp m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f m e t o l ac h l o
r,
“ K a le : 0 . 0 2 p p m ” sh a l l be c h an g e d t o
“ K a le : 0 . 0 2 p p m
Q i ng - g en g - ca i : 0 . 1 p p m ” an d
“ S p in a ch : 0 . 3 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 0 . 3 pp m
Ba m b o o sh oo t s : 0 . 0 5 pp m
. ” Un de r t h e h ea d in g o f l e na c i l ,
“ K yo n a : 0 . 3 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ K yo n a : 0 . 3 pp m
Q i ng - g en g - ca i : 0 . 3 p p m , ”
“ G ar l i c : 0 . 3 pp m ” s ha l l b e c h a n g e d t o
“ G ar l i c : 0 . 3 pp m
N i r a : 0 . 3 pp m ” a n d
“ S p in a ch : 0 . 3 p p m ” s ha l l b e ch a n ge d t o
“ S p in a ch : 0 . 3 pp m
B a m bo o s ho o t s : 0 . 3 p p m . ”

I n “ R e m ar k 1” i n t h e t a bl e , “ , w h e a t f l o u r ” sh a l l b e d e l e t e d .
I n “ R e m a r k 2 ” i n t h e t a bl e , “ a n d p ea nu t s ” s ha l l b e c ha ng e d t o “ , p ea nu t s
a n d s p ic e s . ”
I n “ R e m ar k 4” i n t h e t a bl e , “ , q i n g - ge ng - c a i ” s ha l l b e a d de d u n de r “ ky on a ”
and
“ a n d b ro c c o l i ” s h a l l b e ch a ng e d t o “ , b ro cc o l i a n d h er b s . ”
I n “ R e m a r k 5 ” i n t h e t a b le , “ a n d l e t t u ce ” s ha l l b e c ha ng e d t o “ , l e t t uc e
a n d h er b s . ”
I n “ R e m a r k 6 ” i n t h e t ab l e , “ , n i r a ” s ha l l b e ad de d u nd e r “ g a r l i c” an d “
a n d m u l t i p ly i n g on i o n ” s h a l l b e c h a n g e d t o “ , m u l t i p l y i n g o ni o n a n d h e
rbs.”
I n “ R e m ar k 7 ” i n t h e t ab l e , “ a n d m i t su b a ” sh a l l b e c ha ng e d t o “ ,
m i t s ub a , sp i ce s an d h er b s . ”
I n “ R e m ar k 1 1 ” i n th e t a b l e , “ , ba m bo o s ho o t s ” sh a l l b e a dd e d u n d e r
“ sp i na c h ”
a n d “ a n d m u sh r oo m s ” sh a l l be ch a ng e d t o “ , m u sh r o o m s , sp i ce s a n d h er b s . ”
I n “ R em a r k 12 ” i n t h e t a b l e , “ a n d l i m e” s ha l l b e c h an g e d t o “ , l i m
e a n d s p ic e s . ”
I n “ R em a r k 1 4 ” i n t h e t a b l e , “ a n d d a te ” s h a l l b e ch a ng e d t o “ , da t e a n d
s p ic e s . ” I n “ R em a r k 1 5 ” i n t h e t a b l e , “ a n d ra pe s ee d s ” s ha l l b e c h an g e d t o
“ , r ap e se ed s
a n d s p ic e s . ”
“ R em a r k 1 8 ” i n t h e t a b l e s h a l l be ch a n g e d t o “ R em a rk s 2 0 ” a nd “ 1 7 ” t o “
1 9 . ” Th e fo l l ow i ng t w o i t e m s s ha l l b e a dd e d a f t e r “ R em a r k 1 6” :
17 . “ O th e r s p ic e s ” r e f e r t o a l l o th e r s p i c e s , ex c e p t ho r se r ad i s h ,
w a sa b i
( Ja pa ne s e ho r se r ad i s h ) r h i zo m e s , g ar l i c , p e p pe r s c h i l i , p ap r i k a , gi ng e r,
l e m o n pe e l s , or an g e p e e l s ( i n c l u d i n g n a ve l o r a ng e) , y u z u ( C h in e s e
c i t ro n )
pe e l s a n d s e s a m e se ed s .
1 8 . “ O th e r h er b s ” re f e r t o a l l ot h e r h er b s , ex ce p t w a te r c re s s , ni r a , p a rs l
e y s t e m s a n d l ea ve s , c e l e r y s t e m s a n d l e a v es .

T h e fo l l o w i n g r ev i s i o n s sh a l l b e m a d e t o t h e t a b l e i n I t e m 6 ( 2 ) , S e c t i o n
A
G e ne ra l C o mp os i t i o n a l St a nd a rd s f o r F o o d , P a r t I F oo d :
I n th e “ O th e r c ru c i f e ro u s v e ge t a b l es , ” “ O th e r c ru c i f e ro u s v e g e t a bl e s ” s ha l l
b e ch a n g e d t o “ Q in g - ge n g - ca i an d ot he r cr uc i f e r o u s ve g e t a bl e s . ”
I n t h e “ O th e r l i l i ac e o u s v eg e t a bl e s , ” “ O th e r l i l i ac eo u s ve g e t a bl e s ” sh a l l
b e ch an ge d t o “ N i r a an d o th e r l i l i a c e o u s v e ge t a b l es . ”
I n th e “ O t h e r ve g e t a bl e s , ” “ O th e r v eg e t a b l es ” sh a l l b e c ha ng e d t o “ B a m
b o o sh oo t s a nd ot h e r v e g e t a bl e s . ”
T h e fo l l ow i n g s h a l l b e ad d e d a f t e r t h e p ar t of ho p :
O th e r sp i c e s a n d o t h e r h er b s Ed i b l e p o r t i o n s

I t e m 6 (3 ) i n S e c t i o n A G e n e ra l C o m po s i t i o n a l St a nd a rd s fo r F oo d , P a r t I
F oo d sh a l l b e ch an ge d a s f o l l ow s :
( 3 ) 2 ,4 , 5 - T an a l y t i c a l m e th o d
Sho u l d b e p er f o r m ed ac co r d i n g t o 5 (3 ) .
I t e m 6 ( 4 ) i n S ec t i o n A Ge n e r a l Co m p os i t io n a l St a n da r d s f o r Fo o d , P a r t I
Fo o d s ha l l b e c ha ng e d as fo l l o w s :
(4 ) A m i t r o l a na l y t i c al m e t ho d
Sho u l d b e p er f o r m ed ac co r d i n g t o 5 (5 ) .
I t e m 6 ( 5 ) i n S ec t i o n A Ge n e r a l Co m p os i t io n a l St a n da r d s f o r Fo o d , P a r t I
Fo o d s ha l l b e c ha ng e d as fo l l o w s :
(5 ) A na l y t i c a l m e th o d f o r a ld r i n , en dr i n a n d di e l dr i n
1 . Eq u i pm e n t
A g a s ch r o m a to g r ap h w i t h a n e l e c t r on c ap t u r e de t e c t o r ( G C - E C D )
a n d a ga s c h r o m a to g r ap h - m a s s s pe c t r o m e t e r ar e us ed .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n ad d i t i o n t o th e re a g e n t s a n d t e s t s o lu t i o n s l i s t e d b e l o w, t ho s e l i s
t ed i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
tives are
u se d .
R ea g e n t s d es i gn a t e d a s “ s p ec i a l g ra de ” i n t h i s s e c t i o n m u s t m e e t
t h e re qu i r e m e n t s fo r “ s pe c ia l gr a d e ” s pe c i f i e d in th e J a pa n
I nd u s t r i a l S t an da rd s f o r t h e r ea g en t s .
Ac e to n i t r i l e : T h r e e hu nd re d m l o f ac e to n i t r i l e i s c on c e n t r a t e d us i
ng a ro t a r y v ac uu m ev ap or a t o r. A f te r r e m o vi n g the ac e t on i t r i l
e, t h e r e s id u e i s di s s o l v ed i n 5 m l o f n - he xa n e . T h en , 5 µ l o f th e
di s s o l v e d r e s id u e i s i n j ec t e d i n t o t h e G C - E C D f o r a na l ys i s , w he n
th e h e i gh t s o f pe ak s fo r c o m po un d s ot h e r t h an n - h ex a n e o n th e
ga s c h r o m a to g r a m sh ou l d b e t h e sa m e a s o r l o we r th a n t h e
pe a k fo r g a m m a - B H C a t
-1 1
2x 1 0
g.
Ac e to n e : Th r e e hu nd r e d m l o f a ce t on e i s c on c e n t r a t e d u s in g a
ro t a r y v ac u u m e va po r a t o r. After r e m ov i n g th e ac e to ne , th e
re s i du e i s di s s o l v ed i n 5 m l o f n - he xa n e . T h en , 5 µ l o f th e d i s so l
v ed r e s i d u e i s in j e c t ed in t o th e G C - E C D fo r a n a l y s i s , wh e n th e h e
ig h t s o f p e a k s f o r co m p ou nd s o t h e r th a n n - h e x a n e o n t h e g a s
ch r o m a to g r a m sh ou l d b e
th e sa m e a s o r lo w e r t h a n t h e p e a k f o r ga m m a- B H C a t 2x 1 0
-1 1
g.
E t he r : Th r e e hu n d re d m l o f d i e t h y l e th e r i s co nc e n t r a t e d us i n g a
ro t a r y va c u u m ev ap or a t o r. A f te r re m ov in g t h e di e t h y l e t he r, t h e
re s i du e i s di s s o l v e d i n 5 m l o f n - h ex an e . T h e n , 5 µ l o f t h e d i s so l v
ed re s i d u e i s i n j e c t e d in t o th e G C - E C D fo r an a l y s i s , w he n th e he
ig h t s o f p e a k s f o r co m p ou nd s o t h e r th a n n - h e x a n e o n t h e g a s
ch r o m a t og r a m s ho u l d b e th e sa m e a s o r lo w e r t h a n t h e p e a k f o r
-1 1
ga m m a- B H C a t 2x 1 0 g.
S od i u m ch l o r id e : S o d i u m c h lo r i d e ( sp ec i a l g ra de ) . I n c as e s w he r e
a su bs t a n c e w h ic h i n t e r fe r e s w i t h a na l y s i s o f an i ng r e d i e n t of
t h e a gr i c u l t ur a l c he m i ca l p ro d u ct c o nc er n e d i s co n t a in e d , i t
sh o u l d b e r i n se d ou t w i t h a so l v en t su c h as n - he x a n e .
S yn t he t i c m a g ne s i u m silicate ( F lorisil) fo r co l u m n c hr o m a
to g r ap hy : F l o r i s i l ( p articl e s i ze : 1 5 0- 2 5 0 µm ) pr o d uc e
d for c o l u m n ch r o m a t og r a ph y i s h e a te d a t 1 3 0 ° C fo r m o r e
th a n 1 2 h o ur s b e f o r e be i n g al lo w e d t o co o l i n a de s ic c a t o r.
D i a t o m a ce ou s ea r t h : D i a t o m a ce ou s ea r t h f o r ch e m i c a l a na l ys i s i s
us ed . n - H ex an e : T h r e e h u n d r ed m l o f n - h ex an e i s co nc e n t r a t e d t o 5
m l u s in g a r o t a r y v ac uu m e va po r a to r. T h e n , 5 µ l o f t h e di s s o l v e d
re s i du e i s
in j e c t ed in t o th e G C - E C D fo r a n a l ys i s , wh e n th e h e ig h t s o f pe a k s
f o r co m p ou nd s o t h e r th a n n - h e x a n e o n t h e g a s c hr o m a t og r a m
sh ou l d b e th e sa m e as o r l o we r t h an t h e pe a k f o r ga m m a- B H C a t
-1 1
2x 1 0 g.
 Wa t e r : D i s t i l l e d w a t e r i s us ed . I n ca se s wh e r e a s u bs t an c e w h i c h
in t e r f e re s w i t h an a l y s i s o f a n in g r ed i en t o f t h e ag r i c u l t u ra l ch e m i
ca l p ro du c t c o nc er n e d i s c on t a i n e d , i t s h ou l d b e r i n se d o u t w i t h a s
o l v e n t su c h as n - h e x an e .
S od i u m s u l fa t e ( an h y d ro u s ) : S od i u m su l f a t e (a nh y d r o us )
( sp ec i a l gr ad e ) . I n ca se s w he r e a s ub s t a n c e wh i c h i n t e r fe r e s w i t h a
n a ly s i s o f a n i ng r e d i e n t o f t h e ag r i cu l t u r a l ch e m i c a l pr od uc t
co nc e rn e d i s c on t a in e d , i t s ho u l d b e r i n se d ou t w i t h a s o l v en t s u
ch a s n - h ex a ne .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
A l d r in : T h i s p ro du c t s h ou l d c o ns i s t o f 97 % o r m o r e
a l d r in . M e l t i n g p o i nt : 1 02 - 1 0 4 ° C
E nd r i n : Th i s p ro du c t s h ou l d c o ns i s t of 98 % o r m o r e
e nd r i n . De c o m po s i t i o n p o in t : 20 0° C
D i e l d r in : T h i s pr o d uc t sh ou l d c o n s i s t o f 98 % o r m o r e
d i e ld r i n . M e l t i ng po i n t : 1 7 7- 1 7 9 ° C
4 . P r ep a ra t io n of t es t s o lu t i on s
a . Ex t r a c t i o n m e th od s
i . Ce r e a l gr a i ns , l e g u m e s /p u l se s a n d se e d
s
Ce r e a l gr a i ns , l e g u m e s / pu l s e s a n d se ed s ar e c ru s he d s o as t o
pa s s t h ro u g h a s t an da r d m e s h s i e v e ( 42 0 µ m ) b ef o r e b e i n g
we i gh e d t o p re pa r e a 10 . 0 - gr a m s a m p l e . Tw en t y m l o f w a t e r i s
ad de d an d l e f t t o s ta n d f o r t w o h o u r s . Ac e to n e ( 1 0 0 m l ) i s a dd e d
a n d f i ne l y cr u sh e d f o r th r e e m i nu t es . Th e cr u sh e d m i xt u r e i s f i l t
er e d b y s u c t i o n i n t o a ro t a r y va c uu m e va po r a to r us i n g fil t er
pa pe r co v e re d with a on e- c en t i m e te r - t h i c k l a ye r o f d i a t o m
ac eo u s e ar t h . T h e re s i du e o n th e s u r fa c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s
co l l e c te d an d ac e to n e (5 0 m l ) i s a dd e d b ef o r e h o m og en i z i n g f o r
t h re e m i nu t e s . T h e a b o v e p ro c e du r e i s re pe a t ed an d t h e f i l t r a t e i s
a dd e d t o t h e ro t a r y va cu u m e v a p or a t o r an d c on c en t r a t e d t o a p
pr ox i m a t e l y 3 0 m l at 40 ° C o r l o we r.
Th e co n c e n t r a te d s o l u t i o n i s t r a ns f e r r e d t o a 3 00 - m l s ep a ra t i
n g fu nn e l a l r e a d y c o n t a i n i n g 1 0 0 m l o f 1 0 % s o d iu m ch l o r id e s o l
u t i o n . T h e eg g p l a n t - sh ap e d f l as k o f t h e a bo v e r o t a r y v ac uu m
ev ap or a t or i s wa s he d w i t h 1 0 0 m l of n - h ex a n e t o ob t a i n t h e
wa s h i n g s , wh i c h a r e a dd e d t o t h e se pa r a t i n g f u n ne l a bo v e . T
h e m i x tu r e i s s ha k e n
vi go r o u s l y fo r f i v e m i nu t e s u s i n g a sh a k e r b e fo r e be i n g l e f t t o
s ta n d , an d t h e n t h e n - he x a n e l a y e r i s t r a ns f e r r e d t o a 30 0- m l co n i c
a l f l a s k . F if t y ml o f n - he xa n e i s a dd e d t o th e aq u e ou s l a y e r
an d , a f t e r
 re pe a t i n g t h e ab ov e p ro ce du r e , t h e n - h e x a n e l a y e r i s a dd e d t o
t h e c on i c a l f l a sk . A n ad e q ua t e am o un t o f s o d i u m s u l fa t e ( a n h y d
ro u s ) i s a ls o ad de d t o t h e f l a s k , wh i c h i s l e f t t o s t a n d f o r 1 5 m
i n ut e s an d s ha ke n f r o m t i m e t o t i m e . T h e c on t e n t o f t h e f l a s k
is then filtere d
in t o a ro t a r y v ac uu m e va po r a t o r. T h e c on i c a l f l a s k i s th e n
wa s he d w i t h 2 0 m l of n- he x a n e t o o b t a i n t h e w a sh i ng s , w i t h
wh i c h t h e r e s id u e o n t h e su r f ac e o f t h e f i l t e r pa p e r i s wa s he d
t w i ce . Th e w a sh i ng s o bt a i n ed f ro m th e re pe a t e d w a sh i n g ar e t h en
ad d e d t o t h e r o t a r y va cu u m e va po r a t o r, an d t h e n - h e x an e i s r e m
ov e d a t 40 ° C o r l o we r.
Tw e n t y m l o f n - h e x a ne is ad de d to th e res id u e, whic h is tr a n
sfe rre d t o a 1 0 0- m l se pa r a t i n g fu n n e l , wh e r e 40 m l o f n - he xa ne -
sa t u ra t e d ac e to n i t r i l e i s a dd ed . A f te r sh ak i n g th e m i xt u r e
vi go r ou s l y fo r f iv e m i nu t e s us i n g a s h a k er, t h e f un n e l i s l e
ft to sta nd an d t h e a ce t on i t r i l e l a ye r i s t r a ns f e r re d t o th e
ro t a r y v ac uu m ev a p or a t o r. A f te r ad d i n g n - he x a ne - s a tu r a te d a ce t o
n i t r i l e ( 4 0 m l ) t o t h e n - h e xa n e l ay e r, t h e a bo v e p ro c ed ur e i s r e
pe a t e d t w i c e an d t h e ac e t o n i t r i l e l ay e r i s a l s o ad d e d t o t h e
ro t a r y va cu u m e va po r a to r and t h e ac e to n i t r i l e i s r e m o ve d a t
40 ° C o r lo w e r. T h e re s i du e i s di s s o lv e d i n n- he x a n e t o m a k e e xa c
t l y 5 m l o f so l u t i o n .
i i . F r u i t , v e g e t a bl e s , m a t ch a
F r u i t a n d v eg e t a b l e s a r e w e ig he d a cc u ra t e l y t o pr ep a r e a s a m p l e
o f a bo u t o n e k i l o gr a m . A n ap pr op r i a t e am ou n t o f m ea su r e d
wa t e r i s ad d e d t o t h e sa m p l e , i f r eq u i r ed . A f t e r h o m o ge n iz i n g
, a s a m p l e eq u i va l e n t t o 2 0 . 0 g i s m e as u re d ou t .
M a tc h a i s we i gh e d t o p re pa r e a 5 . 00 - gr a m s a m p l e , t o w h i c h 2 0 m l
o f wa t e r i s a dd e d a n d l e f t t o s ta n d f o r t w o h ou r s . T h e n , 1 0 0 m
l o f a ce t on e i s a d de d an d t h e m i x tu r e i s f in e l y c ru s he d f o r t h re e m
i n ut e s . Th e c ru s h e d m i xt u r e i s f i l t e re d b y su c t i o n in t o a ro t a r y
va cu u m ev a p or a t o r us i n g f i l t e r p ap e r c o v e r e d w i t h a o ne - c e n t i m
e t e r - th i c k l a y e r o f di a to m a ce ou s ea r t h . T h e re s i du e r e m ov e d
f ro m th e su r f ac e o f th e f i l t e r pa pe r i s c o l l e c t e d a n d 5 0 m l o f
ac e to n e i s a dd e d b ef o r e h o m og en i z i ng f o r t h r e e m i n ut e s . T h e ab
ov e pr oc e d ur e i s r ep ea t e d a n d the fi ltrate is a dd e d to th e
ro t a r y va cu u m e va po r a to r a n d co nc e n t r a t e d t o a pp r o x i m a t e l y 3 0
m l a t 4 0° C o r l o we r.
Th e c o n c e n t r a t e d s o l u t i o n i s t r a ns f e r r e d t o a 30 0- m l se pa r a t i
n g fu nn e l a l r e ad y co n t a i n i ng 1 0 0 m l of 10 % s o d iu m c h lo r i d e so l
u ti on .
 Th e eg g p l a nt - s ha p e d f l a s k o f t h e a bo v e r o t a r y v ac uu m ev ap or a t
o r i s wa s he d w i t h 1 0 0 m l o f n - h ex a n e t o ob t a i n t h e wa s h i n g s ,
wh i c h a r e a dd e d to the se pa r a t i ng f u n ne l a bo v e . The mi
xt u r e i s sh ak e n
vi go r o u s l y fo r f i v e m i nu t e s u s i n g a sh a k e r b e fo r e be i n g l e f t t o
s ta n d , an d t h e n t h e n - he x a n e l a y e r i s t r a ns f e r r e d t o a 30 0- m l co n i c
a l f l a s k . F if t y ml o f n - he xa n e i s a dd e d t o th e aq u e ou s l a y e r
an d , a f t e r
re pe a t i n g t h e ab ov e p ro ce du r e , t h e n - h e x a n e l a y e r i s a dd e d t o
t h e c on i c a l f l a sk . A n ad e q ua t e am o un t o f s o d i u m s u l fa t e ( a n h y d
ro u s ) i s a ls o ad de d t o t h e f l a s k , wh i c h i s l e f t t o s t a n d f o r 1 5 m
i n ut e s an d s ha ke n f r o m t i m e t o t i m e . T h e c on t e n t o f t h e f l a s k
is then filtere d
in t o a ro t a r y v ac uu m e va po r a t o r. T h e c on i c a l f l a s k i s th e n
wa s he d w i t h 2 0 m l of n- he x a n e t o o b t a i n t h e w a sh i ng s , w i t h
wh i c h t h e r e s id u e o n t h e su r f ac e o f t h e f i l t e r pa p e r i s wa s he d
t w i ce . Th e w a sh i ng s o bt a i n ed f ro m th e re pe a t e d w a sh i n g ar e t h en
ad d e d t o t h e r o t a r y va cu u m e va po r a t o r, an d t h e n - h e x an e i s r e m
ov e d a t 40 ° C o r l o we r. T h e r e s id u e i s d i s so l v e d i n n- he x a n e t o m a
k e ex ac t l y 1 0 m l o f s o lu t i on .
i i i . Te a s ( l i m i t e d t o u nf e r m e nt e d t e a ) o th e r t h a n m a t c h a
A 9 . 00 - g ra m sa m p l e so ak e d i n 5 4 0 m l of wa t e r at 1 0 0 ° C i s l e f t
t o s t an d at r o o m t e m p e ra t u r e fo r f iv e m i nu t e s b ef o r e b e i n g f i l t
er ed . F r o m t h e c oo l e d f i l t r a t e, 36 0 m l i s t r an s fe r r e d in t o a 50 0- m l
co n ic a l f l as k , t o w h ic h 1 0 0 m l of ac e t o n e a n d 2 m l o f sa t u ra t e d
l e a d a c e t a t e so l u t i o n a r e ad d e d . T h i s s o l u t i o n i s l e f t t o s t an d
fo r o n e ho u r a t ro o m t e m p e r a t u r e be fo r e b e in g f i l t e re d b y
su c t i o n us i n g f i l t e r p ap e r c ov er e d w i t h a o ne - c e nt i m e t e r - th i c k l a
ye r o f d i a t o m a ce ou s e ar t h . T h e f i l t r a t e i s t r an s fe r r e d to a
1 ,0 00 - m l s ep a ra t i n g fu nn e l . T h e c on i ca l f l a s k i s th e n wa s he d
w i t h 50 m l o f a c e to n e t o o bt a i n t h e w a sh i ng s , w i t h wh i c h t h e
re s i du e on t h e s u r fa c e o f th e f i l t e r p a pe r i s w a sh ed . T h e w a sh i ng s
ar e ad d e d t o th e se pa r a t i n g f un n e l ab ov e .
Th i r t y g r a m s o f so d i u m ch l o r i d e a n d 10 0 m l o f n - h e x an e a r e
al s o ad d e d t o t h e s ep a ra t i n g fu nn e l . T h e m i x tu r e i s sh ak e n v i
go ro u s l y f o r f i v e m i n ut e s an d l e f t t o s ta n d . T h e n - he x a n e l ay e r i s
th e n t r a ns f e r r e d t o a 3 00 - m l co n i c a l f l as k . O n e h u nd re d m l o f n -
he x a n e i s a dd e d t o th e a qu e ou s l a y e r a nd , af t e r r ep e a t i n g t h e
ab o v e p r o c ed ur e , th e n - h ex a n e l a y e r i s a d d e d i n t h e c o n i ca l
f l as k . A n a de q u a t e am ou n t o f a so d iu m su l f a t e ( an h y d ro u s ) i s al s o
ad d e d t o th e f l a s k , wh i c h i s l e f t t o s ta n d f o r 1 5 m i n ut e s an d
sh ak e n f r o m t i m e t o t i m e. T h e co n t en t o f
 th e f l a s k i s th e n f i l t e r e d in t o a r o t a r y va cu u m e va po r a to r. T
h e co n i ca l f l a s k i s th e n wa s he d w i t h 2 0 m l o f n - h ex a n e t o o b
t a i n t h e w a sh i ng s , w i t h wh i c h th e re s i du e o n t h e s u r fa c e o f th e f i l t e r
p a pe r i s w a sh e d t w i ce . Th e w a s h i ng s o b t a i ne d f r o m t h e re pe a t e d
wa s h in g a r e t h e n a dd e d t o t h e r o t a r y va cu u m e va po r a to r, an d
th e n- h ex a n e i s r e m o ve d at 40 ° C o r l o we r. Th e r e s id u e i s di s s
ol v e d i n n - he xa n e t o m a k e ex ac t l y 5 m l o f so l u t i on .
b . C l e a n- u p
Te n gr a m s o f f l o r i s i l f o r co l u m n ch r o m a t og r a ph y su sp e n d e d
i n n - h ex a n e i s a d d e d i n t o a ch ro m a t og r a p h t u b e ( i n n e r d i a m e t e r :
1 5 m m an d l e ng t h : 30 0 mm ) , o ve r w h ic h ap pr o x i m a te l y 5 g of
s od i u m su l f a t e (a nh y dr ou s ) i s f u r th e r a dd e d . Th e n - he x a n e i s th e n
s p i l t ou t un t i l o nl y a s m a l l am o un t r e m a in s o n t h e p a ck i n g o f t h e c
o lu m n , i n t o wh i c h 2 m l o f th e s o l u t i o n o bt a i n e d b y th e m e t ho d
d e s c r ib e d i n “ a . E x t r ac t i o n m e t ho d s ” i s p o u re d . S u bs e q ue n t l y,
2 0 0 m l o f a m i xt u r e of e t h e r a n d n - he x a n e (3 : 17 ) i s a l s o po ur e
d in t o t h e c o lu m n . Th e e l u a t e i s t r an s fe r r e d t o a ro t a r y v ac u u m
e v a p or a t o r, a nd th e e t h e r a n d n - h ex a n e ar e r e m o ve d a t 40 ° C o r
l o we r. T h e r e s id u e i s di s s o l v e d i n n - h e x a n e t o m a k e ex ac t l y 2 m l
o f so l u t i o n , w h i c h i s u se d as th e sa m p l e so l u t i on .
5 . De t e r m in a t i on
a . Qu a l i t a t i v e t es t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s ob t a i n e d un d e r an y o f t h e co n d i t i o n s m u s t b e th e s a m
e a s t h e re s u l t s ob t a in e d i n t h e r e fe r e nc e m a t e r ia l .
Te s t i n g co n d i t i o n s
1
C o lu m n : A s i l i ca t e g l a s s ca p i l l a r y co l u m n ( i nn e r d i a m e t e r : 0 . 2 5
mm an d le n g t h : 10 -3 0 m) co ate d w it h m e t h yl si li co n e
fo r g a s ch r o m a to g r ap h y t o a t h i c k n es s o f 0 . 2 5 µ m i s us ed .
C o lu m n t e m p er a t u re : Th e c o l u m n t e m p er a t u r e i s h e l d at 5 0° C fo r o
n e m i n ut e , f o l l ow e d b y a n i n c re a s e o f 25 ° C e v e r y m i n ut e un t i l
re a c h i n g
17 5° C , a f t e r wh i c h t h e t e m p e ra t u r e i s i n c r e as e d b y 1 0° C e v
er y m i n ut e u n t i l re a ch i n g 3 00 ° C , wh e r e i t i s h e l d f o r f iv e m i
nu t es .
Inlet tem p er a t u re :
2 30 ° C
D e te c t o r : S h ou l d b e o p e ra t e d at
3 00 ° C
G a s f lo w r a t e : He l i u m i s u se d as t h e c ar r i e r g as . T h e f l o w r a t e
sh ou l d b e a d ju s t e d s o t h a t al d r i n f lo w s o u t i n a p pr o x i m a t e l y 1 0
m i n ut e s .
Te s t i n g co n d i t i o n s
2
 C o lu m n : A s i l i ca t e g l a s s ca p i l l a r y co l u m n ( i nn e r d i a m e t e r : 0 . 2 5
mm a n d l e n g th : 1 0- 3 0 m ) co a t e d w i t h 1 4 % cy a n op r o p y l p h en y l
- m e th y l s i l i c on e fo r g a s ch ro m a t og r a p h y t o a t h i ck n e s s o f 0 .2 5
µ m i s u se d .
Co l u m n t e m p e ra t u r e : Th e c o lu m n t e m p er a t u r e i s he l d a t 8 0° C fo r t
w o m i n ut e s , f o l l ow e d b y an in c r e a s e o f 3 0 ° C e ve r y m i nu t e
u n t i l r ea c h in g 1 90 ° C , a f t e r wh i c h t h e t e m p er a t u r e i s in c r e a s ed
b y 3 .6 ° C e ve r y m i n ut e un t i l r e ac h i n g 2 50 ° C , wh e r e i t i s h e
l d fo r e i gh t m i nu t es .
In l e t tem p e ra t u r e :
23 0° C
De t e c to r : S ho u l d b e o p er a t e d a t
30 0° C
G a s f lo w r a t e : He l i u m i s u se d as t h e c ar r i e r g as . T h e f l o w r a t e
sh ou l d b e a d ju s t e d s o t h a t al d r i n f lo w s o u t i n a p pr o x i m a t e l y 1 0
m i n ut e s .
b . Qu an t i t a t i v e t es t s
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e c on d i t i on s d es c r ib e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t h e r
t h e p e a k h e ig h t o r p ea k a re a m e th od .
c . Co n f i r m a t i o n t e s t s
Gas c hr o m a to g r a p h y / m a s s s pe c t r o m e t r y is p er f o r m e d u n de r
t h e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s . ” Te s t re s u l t s
o bt a i n ed m u s t b e t h e s a m e as t h e r e su l t s ob t a i n e d i n th e
r e fe r e nc e m a t e r ia l . Th e qu a n t i t y m a y b e de t e r m i n e d b y e i th e r th e
p e ak h e ig h t o r p e a k ar e a m e t ho d , i f re qu i r e d .

I t e m 6 (6 ) i n S e c t i o n A G e n e ra l C o m po s i t i o n a l St a nd a rd s fo r F oo d , P a r t I
F oo d sh a l l b e ch an ge d a s f o l l ow s :
(6 ) C ap t a f o l a n a l y t i ca l m e t ho d
Sh ou l d be pe r fo r m e d a cc o rd i ng t o 5 ( 6 ) .
I t e m 6 ( 7 ) i n S ec t i o n A Ge n e r a l Co m p os i t io n a l St a n da r d s f o r Fo o d , P a r t I
Fo o d s ha l l b e c ha ng e d as fo l l o w s :
(7 ) Q u in o x a l in e - 2- c a r bo x y l i c a c i d a n a l y t i c a l m e th o d
Sh ou l d be pe r fo r m e d a cc o rd i ng t o 5 ( 7 ) .
I t e m 6 ( 8 ) i n S ec t i o n A Ge n e r a l Co m p os i t io n a l St a n da r d s f o r Fo o d , P a r t I
Fo o d s ha l l b e c ha ng e d as fo l l o w s :
(8 ) C y h ex a t i n a n a l y t i c a l m e th o d
Sho u l d b e p er f o r m ed ac co r d i n g t o 5 (4 ) .
I t e m 6 ( 9 ) i n S ec t i o n A Ge n e r a l Co m p os i t io n a l St a n da r d s f o r Fo o d , P a r t I
Fo o d s ha l l b e c ha ng e d as fo l l o w s :
( 9 ) D a m i n o z id e a n a ly t i ca l m e t ho d
 Sh ou l d b e pe r fo r m e d a cc o rd i n g t o 5 ( 13 ) .
I t e m 6 ( 10 ) i n S ec t i o n A Ge n e r a l C o mp os i t i o n a l St a n da rd s f o r F oo d , P a r t I
Fo o d s ha l l b e c ha ng e d as fo l l o w s :
(1 0 ) An a l y t i ca l m e t ho d fo r t r i a zo p h o s an d p a ra t h i o n
1 . Eq u i pm e n t
A ga s c hr o m a to g r ap h w i t h an a l k a l i f l a m e i on i z a t i o n de t ec t o r, a f l a
m e p ho t o m e t r i c d e t e c to r ( i nt e r f e re n c e f i l t e r f o r p ho s p ho ru s d e te r m
i n a t io n , wa ve l e n g t h : 526 nm ), or a h ig h l y - se n s i t i v e nitr og en
p ho s p h or u s d e te c t o r, a nd a g a s ch r o m a t og r a ph - m a s s sp ec t r o m e t e r
a r e u se d .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
R ea g e n t s d es i gn a t e d a s “ s p ec i a l g ra de ” i n t h i s s e c t i o n m u s t m e e t
t h e re qu i r e m e n t s fo r “ s pe c ia l gr a d e ” s pe c i f i e d in th e J a pa n
I nd u s t r i a l S t an da rd s f o r t h e r ea g en t s .
Ac e to n i t r i l e : T h r e e hu nd re d m l of ac e to n i t r i l e i s c on c e n t r a t e d u s i
ng a ro t a r y v ac uu m ev ap or a t o r. A f te r r e m o vi n g the ac e t on i t r i l
e, t h e r e s id u e i s di s s o l v ed i n 5 m l o f n - he xa n e . T h en , 5 µ l o f th e
di s s o l v e d r e s id u e i s i n j ec t e d i n t o t h e G C - E C D f o r a na l ys i s , w he n
th e h e i gh t s o f pe ak s fo r c o m po un d s ot h e r t h an n - h ex a n e o n th e
ga s c h r o m a to g r a m sh ou l d b e t h e sa m e a s o r l o we r th a n t h e
pe a k fo r g a m m a - B H C a t
-1 1
2x1 0 g.
Ac e to n e : T h re e hu nd re d m l o f a ce t o n e i s co nc e n t r a t e d us i n g a r o
t a r y va cu u m ev ap or a t or. A f te r r e mo v in g the a ce t on e , the
re s i du e i s di s s o l v ed i n 5 m l o f n - he xa n e . T h en , 5 µ l o f th e d i s so l
v ed r e s i d u e i s in j e c t ed in t o th e G C - E C D fo r a n a l y s i s , wh e n th e h e
ig h t s o f p e a k s f o r co m p ou nd s o t h e r th a n n - h e x a n e o n t h e g a s
ch r o m a t og r a m s ho u l d b e th e sa m e a s o r lo w e r t h a n t h e p e a k f o r
-1 1
ga m m a- B H C a t 2x 1 0 g.
S od i u m ch l o r id e : S o d i u m ch l o r i d e ( sp ec i a l g ra de ) . I n c as e s w he r e
a su bs t a n c e w h ic h i n t e r fe r e s w i t h a na l y s i s o f an i ng r e d i e n t of
t h e a gr i c u l t ur a l c he m i ca l p ro d u ct c o nc er n e d i s co n t a in e d , i t
sh o u l d b e r i n se d ou t w i t h a so l v en t su c h as n - he x a n e .
S i l i c a ge l fo r c o lu m n c hr o m a t og r a ph y ( p a r t i c l e s iz e : 63 - 2 0 0 µ
m ): Silicage l (p a r t i c l e s i ze : 6 3 - 20 0 µm ) p ro du c e d fo r co l u
m n c hr o m a to g r ap h y i s h e a t e d a t 1 3 0° C f o r m o r e th a n 1 2 h o u r s
b e fo r e b e in g a l l o w e d t o c oo l i n a d es i c c a to r.
 D i a t o m a ce ou s ea r t h : D i a t o m a ce ou s ea r t h f o r ch e m i c a l a n a l ys i s i s
u se d . E t h y l a ce t a t e: T h re e h u nd re d m l o f e t h y l a ce t a t e i s co n
c en t r a t e d u s i n g a r o t a r y va cu u m ev ap or a t o r. A f te r r e m ov in g th e
e th y l ac e ta t e, t h e
r e s id u e i s d i s so l v e d i n 5 m l o f n - h ex an e . T h e n , 5 µ l o f th e d i s s o l
v ed re s i du e i s i n j ec t e d in t o t h e G C - E C D fo r a na l ys i s , wh e n th e h e i
g ht s of p ea k s f o r c o m po un d s o th e r th a n n - h ex a n e o n t h e ga s c h
r o m a t og r a m s ho u l d b e th e s a m e as o r lo w e r t h a n t h e p ea k fo r
g a m m a -BHC at
-1 1
2x1 0
g.
n - H ex an e : Th r e e h u n d re d m l o f n - he xa n e i s co nc e n t r a t e d t o 5 m l u s
i n g a ro t a r y va cu u m ev a p o ra t o r. T h e n , 5 µ l o f t h e di s s o l v e d re s i
d u e i s i n j e c t e d i n t o t h e G C - E C D f o r an a l y s i s , w he n t h e he i g h t s o f
p e a k s f o r co m p ou nd s o th e r t h an n - he x a n e o n t h e g a s c hr o m a
t og r a m s ho u l d b e
t h e s a m e as o r l o we r t h an t h e pe a k fo r g a m m a - B H C at 2 x1 0
-1 1
g.
Wa t e r : D i s t i l l e d w a t e r i s u se d . I n c as e s wh e r e a su bs t a nc e w h
i c h i n t e r fe r e s w i t h a na l y s i s o f an in g r e d i en t o f th e a gr i c u l t u ra l
c he m i c a l pr od u c t c o n ce rn e d i s c on t a i n e d , i t sh o u l d b e r in s e d o u t
w i t h a s o l v e n t su c h as n - h e x an e .
S od i u m su lfate ( an h y d r ou s ) : S od i u m s u l fa t e (a nh y d r ou s )
( s pe c i a l g ra de ) . I n ca se s w he r e a s ub s t an c e w h ic h i n t e r fe r e s w i t h
a na l ys i s o f a n i ng r e d i e n t o f t h e ag r i cu l t u r al c he m i c a l pr od uc t
c on ce r ne d i s co n t a i n e d , i t sh ou l d b e r in s e d o u t w i t h a s o l v e n t s u
c h a s n- he x a n e .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
T r i az o p ho s : T h i s p ro d u c t s h ou l d co n s i s t o f 98 % o r m o r e t r i az o
ph o s . M e l t i n g p o i nt : 0 - 5 ° C
P a ra t h i on : T h i s pr od uc t sh ou l d c on s i s t o f 9 7 % o r m o r e pa ra t h
i on . B o i l i ng po i n t : 3 75 ° C
4 . P r e pa r a t i o n o f t e s t so l u t i o n s
a. E x t r a c t i o n m e t ho d s
i . C e re a l g ra i n s an d l e gu m
e s /p u l se s
Ce r e a l gr a i n s an d l e g u m e s /p u l se s a r e cr u sh e d s o a s t o p a s s
th r ou g h a s ta nd a r d m e s h s i e v e ( 42 0 µ m ) b ef o r e b e i n g we i gh e d t
o pr e p ar e a

9090/
126
10 . 0 - gr a m sa m p l e . Tw en t y m l of w a te r i s a dd e d a n d l e f t t o s ta n d
fo r t w o h ou r s . Ac e to n e ( 1 0 0 m l ) i s ad d e d a n d f i n e l y cr u sh e d fo r
th r e e m i n ut e s . T h e cr u sh e d m i xt u r e i s f i l t e re d b y s uc t i o n i n t o
a ro t a r y va cu u m ev ap or a t o r u s in g f ilter pa p e r co ve r e d
with a on e- c en t i m e t e r - t h i c k l a ye r o f d i a t o m a ce ou s ea r t h . T h e
re s i du e o n th e s u r fa c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s co l l e c te d an d ac
e to n e (5 0 m l ) i s

9191/
126
 ad d e d be f o r e ho m og en i z i n g f o r t h re e m i nu t e s . T h e a b o v e p ro c
ed u r e
i s re pe a t e d , a n d t h e f i l t ra t e i s a dd e d t o t h e ro t a r y va cu u m
ev ap or a t o r a n d c o n c e n t r a te d t o a p p ro x i m a t e l y 3 0 m l a t 4 0 ℃ o r
lo w e r.
Th e co n c e n t r a te d s o l u t i o n i s t r a ns f e r r e d t o a 3 00 - m l s ep a ra t i
n g fu nn e l a l r e ad y c on t a i ni n g 100 ml of sa t u ra t e d s od i u m
ch l o r i d e so l u t i o n . T h e e g g p l a n t - sh ap e d f l as k of t h e ab ov e r o t
a r y va cu u m e va po r a to r i s wa s he d w i t h 10 0 m l o f a m i xt u r e of et
hy l ac e t a t e an d n - he x a ne ( 1 : 4 ) t o o b t a i n th e wa s h in g s , w h ic h
ar e a dd e d t o t h e s ep a ra t i n g fu nn e l a b o v e . T h e m i x tu r e i s s h
ak e n vi g o r ou s l y fo r f iv e m i n ut e s u s in g a s h a k er be fo r e b e i n g
l e f t t o s ta n d , a n d th e n t h e l a ye r s o f e t hy l a ce t a t e a n d n - h e
xa n e ar e t r an s fe r r e d t o a 3 0 0 - m l c on i ca l f l a s k . F i f t y m l o f a m
i xt u r e of et h y l ac e t a t e a n d n - he x a n e (1 : 4 ) i s a dd e d t o t h e aq u e
ou s l a y e r, a n d a f t e r r ep e a t i n g t h e a b o v e p ro ce du r e , th e l ay e r s o f
e th y l a c e ta t e a n d n- h ex an e ar e a d d e d t o t h e co n i ca l f l as k . A n a d e
q u a t e am ou n t o f s o d i u m su l f a t e ( a n h y d ro u s ) i s a ls o ad de d t o t h e
f l a s k , wh i c h i s l e f t t o s t a n d fo r 1 5 m i nu t e s a n d sh ak e n f ro m t i m
e t o t i m e . T h e c on t e n t o f t h e f l a s k i s t h e n f i l t e r e d
in t o a ro t a r y v ac uu m e va po r a t o r. T h e c on i c a l f l a s k i s th e n
wa s he d w i t h 2 0 m l of n- he x a n e t o o b t a i n t h e w a sh i ng s , w i t h
wh i c h t h e r e s id u e o n t h e su r f ac e o f t h e f i l t e r pa p e r i s wa s he d
t w i ce . Th e w a sh i ng s o bt a i n ed f ro m th e re pe a t e d w a sh i n g ar e t h en
ad d e d t o t h e r o t a r y v ac u u m ev ap o r a to r, an d t h e e t h y l a c e ta t e
an d n - h ex an e ar e re m o ve d at 4 0° C o r l o w e r.
Th i r t y m l of n - h ex a n e i s a dd e d t o th e r e s id ue , wh i c h i s
th e n
t r an s fe r r e d to a 10 0- m l se pa r a t i n g fu n n e l , wh ere 30 ml
o f n - he x a ne - sa t u r a t e d ac e to n i t r i l e i s a dd ed . A f t e r sh ak i n g th e m i
xt u r e vi go r o u s l y fo r f iv e m i n ut e s us i n g a s ha ke r, t h e f un n e l i s l e f t
t o s ta n d a n d t h e a ce t on i t r i l e l ay e r i s t r a n s f e r re d t o t h e r o t a r y
va cu u m e va p or a t o r. A f t e r a dd i n g n - he xa ne - s a tu r a te d ac e t o ni t r i l e
(3 0 m l ) t o t h e n - h e x a n e l a y e r, t h e a b ov e pr oc e d ur e i s r ep e a t e
d t w i c e . T h e a ce t on i t r i l e l ay e r i s th e n ad de d t o t h e r o t a r y v ac u u m
ev ap or a t o r, a n d t h e a c e t on i t r i l e i s re m o ve d a t 4 0° C o r lo w e r.
Th e r e s id u e i s d i s so l ve d i n 5 m l o f a m i xt u r e o f ac e to n e a n d n -
h e x an e ( 1 :1 ) .
i i . F r u i t a n d v e ge t a b l e s
F r u i t a n d v eg e t a b l e s a r e w e ig he d a cc u ra t e l y t o pr ep a r e a s a m p l e
o f a bo u t o n e k i l o gr a m . A n ap pr op r i a t e am ou n t o f m ea su r e d
wa t e r i s a dd e d t o t h e s a m p l e , i f re qu i r e d . A f t e r ch op p in g i n t o p i
ec e s o f eq ua l
 s iz e , a s a m p l e e q u i va l e n t t o 2 0 . 0 g i s t a
ke n .
Th e n 1 0 0 m l of ac e to n e i s ad de d be fo r e f i n e l y cr u sh i n g fo r th r e e
m i n ut e s . T h e cr u s he d s a m p l e i s f i l t e re d b y su c t i o n i n t o a
ro t a r y va cu u m ev ap or a t or us i n g f ilter p a pe r co ve r e d
with a on e- c en t i m e t e r - t h i c k l a ye r o f d i a t o m a ce ou s ea r t h . T h e
re s i du e o n th e s u r fa c e o f t h e f i l t e r p ap e r i s co l l e c te d an d ac
e to n e (5 0 m l ) i s a dd e d b ef o r e h o m o ge n iz i n g fo r t h r e e m i n ut e s .
Th e a bo v e pr o c e du r e i s r ep e a t ed a n d t h e f i l t r a t e i s a d d e d t o t h e
ro t a r y va cu u m e v a p or a t o r an d c on c en t r a t e d t o a p pr ox i m a t e l y 30
m l a t 4 0° C or l o w e r.
Th e c o n c e n t r a t e d s o l u t i o n i s t r a ns f e r r e d t o a 30 0- m l se pa r a t i
n g fu nn e l a l r e a d y co n t a i n i n g 1 0 0 m l o f sa t u ra t e d s o d i u m c h lo r i d
e . T h e eg g p l a n t - sh ap e d flask of the a b ov e rotary va cu u m
ev ap or a t or i s wa s he d w i t h 1 0 0 m l o f a m i xt u r e o f e t hy l ac e t a t e
an d n- h ex an e (1 : 4 )
t o o bt a i n t h e w a sh i n gs , w h ic h ar e ad de d t o th e se pa r a t i n g
fu nn e l a bo v e. T h e m i x tu r e i s s ha k e n v i g or ou s l y f o r f iv e m i
nu t e s us i n g a s ha ke r b ef o r e b e i ng l e f t t o s t a nd , a n d t h e n t h e l ay e r s
o f e t h y l a ce t a t e an d n- h e x a n e a r e t r an s f e r re d t o a 3 00 - m l c on i ca l
f l as k . F i f t y m l o f a m i x tu r e of e th y l ac e t a t e an d n - h e x a n e ( 1 : 4 ) i s
ad d e d t o t h e a qu e o u s l a y e r, an d af t e r r ep e a t i n g t h e a b o v e p ro c e
d u re , t h e l a y e r s o f e th y l ac e ta t e an d n - h ex a n e ar e ad d e d t o th e
co ni c a l f l a sk . A n ad e q u a t e a m o un t o f so d iu m su l f a t e ( an h y d r
ou s ) i s a l s o a d de d t o t h e f l as k , wh i c h i s l e f t t o s t an d f o r 1 5 m i
nu t e s a n d s ha ke n f r o m t i m e t o t i m e . T h e co n t e n t o f t h e f l as k
is the n f i l t e re d in t o a rota ry va cu u m e va po r a to r. Th e c on i c a l
f l as k i s th e n wa s he d w i t h 2 0 m l o f n - h ex a n e
t o ob t a i n th e w a sh i ng s , w i t h wh i c h t h e re s i du e o n th e s u r fa c e o f t
h e f i l t e r p a p e r i s w a sh e d t w i c e . T h e wa s h i n g s o bt a i n e d f r o
m th e re pe a t e d w a s h in g ar e th e n a d d e d t o t h e r o t a r y va cu u m
ev a po ra t o r, a n d th e e th y l a ce t a t e a n d n - he x a n e a t 40 ° C o r l o we r.
Th e r e s id u e i s di s s o lv e d i n 5 m l of a m i x tu r e of a ce t on e a n d n - h e
xa n e (1 : 1 ) .
b. Cle a n-up
F i v e g ra m s o f s i l i c a ge l f o r c o l u m n c hr o m a to g r a p h y (p a r t i c l e s i
ze:
6 3- 2 0 0 µ m ) su sp e n d e d i n a m i xt u r e o f ac et o n e a n d n - h ex a n e ( 1 : 1
) i s a dd e d i n t o a c hr o m a to g r ap h t u b e ( in n e r di a m e t e r : 1 5 m m a n d l
e n g th :
3 0 0 m m ) , o ve r w h ic h a b ou t 5 g o f so d i u m su l f a t e ( an h y d r ou s ) i s
a l s o po ur e d i n . Th e n , t h e m i x tu r e o f ac e t o n e a n d n - h e x an e ( 1 :1 )
i s sp i l t ou t un t i l o n l y a s m a l l a m ou n t r e m a in s o n t h e p ac k i n g o f
t h e co l u m n . T h e s o l u t i o n o b t a in e d b y t h e m e t ho d d e sc r i be d i
n “ a . Extra c tio n
 m e t ho d s ” i s p ou re d i n t o th i s c o l u m n . T h e n 1 0 0 m l o f a m i
x tu r e o f ac e to n e a n d n - h e x an e (1 : 1 ) i s a l s o ad de d . T h e e l u a t e i s
c o l l ec t e d i n a r o t a r y v ac u u m ev ap or a t or, a n d th e ac e t on e a n d n - h e
x a n e ar e re m ov e d at 40 ° C o r l o we r. Th e re s i du e i s d i s so l v e d i n
a ce t on e t o m a k e e xa c t l y
5 m l of s o lu t i o n , wh i c h i s u s e d a s t h e s a m p l e s o lu t i
on.
5 . De t e r m in a t i on
a . Qu a l i t a t i v e t es t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s ob t a i n e d un d e r an y o f t h e co n d i t i o n s m u s t b e th e s a m
e a s t h e re s u l t s ob t a in e d i n t h e r e fe r e nc e m a t e r ia l .
Te s t i n g co n d i t i o n s
1
C o lu m n : A s i l i ca t e g l a s s ca p i l l a r y co l u m n ( i nn e r d i a m e t e r : 0 . 5 3
mm an d le n g t h : 10 -3 0 m) co ate d w it h m e t h yl si li co n e
fo r g a s ch r o m a to g r ap h y t o a t h i c k n es s o f 1 . 5 µ m i s u se d .
C o lu m n t e m p er a t u re : Th e c o l u m n t e m p er a t u r e i s h e l d at 8 0° C fo r o
n e m i n ut e , f o l l ow e d b y a n i n c re a s e o f 8° C e ve r y m i n ut e un t i l
re a ch i n g
25 0° C , wh e r e i t i s h e l d f o r f i v e m i
n ut e s . In l e t t e m p e ra t u r e : 23 0° C
D e te c t o r : S h ou l d b e o p e ra t e d at
2 80 ° C
Ga s f l o w ra t e : H e l i u m i s us e d a s t h e c ar r i e r ga s . Th e f l o w r a t e
s ho u l d b e a d j u s t e d t o t h e o p t i m a l co nd i t i o n . T h e f l o w s o f a i r an d
h y dr o g e n sh ou l d a l s o b e a d j u s t e d t o th e op t i m a l co nd i t i o ns .
Te s t i n g co n d i t i o n s
2
C o lu m n : A s i l i ca t e g l a s s ca p i l l a r y co l u m n ( i nn e r d i a m e t e r : 0 . 3 2
mm an d l en g th : 10 - 3 0 m ) c oa t e d w i t h 50 % t r i f l u o r o p ro py l m
e th y l s i l i c on e fo r g a s ch ro m a t og r a p h y t o a t h i ck n e s s o f 0 .2 5 µ m
i s u se d .
C o lu m n t e m p er a t u re : T h e c o l u m n t e m p e ra t u r e i s he l d a t 7 0° C f o r
o n e m i nu t e , fo l l o we d b y a n in c r ea s e o f 2 5° C e v e r y m i nu t e u nt i l
re a c h i n g
12 5° C , a f t e r wh i c h t h e t e m p e ra t u r e i s i n c r e as e d b y 1 0° C e v
er y m i nu t e u n t i l r ea c h i n g 2 35 ° C , wh e r e i t i s h e l d f o r 1 2 m i n u
t es .
 Inlet tem p er a t u re :
2 30 ° C
D e te c t o r : S h ou l d b e o p e ra t e d at
2 80 ° C
G a s f lo w r a t e : He l i u m i s u se d as t h e c ar r i e r g as . T h e f l o w r a t e
sh ou l d be ad j u s t e d t o t h e o p t i m a l c on d i t i on . T h e f l o w s o f a i r a n d
h y d ro g e n sh ou l d a l s o b e a d j u s t e d t o th e op t i m a l co nd i t i o ns .
b . Qu an t i t a t i v e t es t s
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
the
 c on d i t i on s d es c r ib e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t h e r t h e
p e a k h e ig h t o r p ea k a re a m e th od .
c . Co n f i r m a t i o n t e s t s
Gas c hr o m a to g r a p h y / m a s s s pe c t r o m e t r y is p er f o r m e d u n de r
t h e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s . ” Te s t re s u l t s
o bt a i n ed m u s t b e t h e s a m e as t h e r e su l t s ob t a i n e d i n th e
r e fe r e nc e m a t e r ia l . Th e qu a n t i t y m a y b e de t e r m i n e d b y e i th e r th e
p e ak h e ig h t o r p e a k ar e a m e t ho d , i f re qu i r e d .

T h e f o l l o w i n g fo u r i t e m s s ha l l b e a dd e d a f t e r I t e m 6 i n S ec t i o n A G e n e ra l
C om po s i t i o n a l St a n d a rd s fo r Fo o d , P a r t I F oo d :
7. I n a d d i t i o n t o t h e s ub s t a n c es s t ip u l at e d u n de r 6 , i n g re d i e n t s
o f a gr i c u l t ur a l c he m i ca l s an d o t h e r c he m i ca l s ub s t an ce s l i s te d i n t h e
f i r s t c o lu m n o f t h e t a bl e i n (1 ) m u s t no t b e co n t a i n e d i n fo od s a t
l e v e l s e xc e e di n g th e l i m i t s s t ip u l a t e d i n th e t h i r d c o l u m n o f t h e
s a m e t a b l e a cc o rd i n g t o t h e fo o d c a te go r i e s sh ow n i n t h e s ec on d co l u m
n o f th e s a m e
t a b l e . C o n c er n i n g t h i s , fo od s l i s t e d i n t h e “ f oo ds ” co l u m n i n t h e t a b l
e i n (2 ) sh a l l be t e s t e d u s in g th e pa r t l i s t e d i n th e “ s a m pl e s ” co l u m
n i n th e t a b l e as a sa m p l e . I n ad d i t i o n , i n t h e s u bs t a nc e s u s e d a s
i ng r e d i e n t s of a gr i c u l t ur a l ch e m i ca l s an d o t he r ch e m i ca l s ub s t an ce s l
i s te d i n t h e f i r s t co l u m n o f t h e t a b l e i n (1 ) , w h ic h ar e s t ip u l a t ed t o
b e “ N ot d e te c t e d ” i n th e t h i r d c o l u m n o f th e sa m e t ab l e i n t h e
f oo d s l i s t e d i n t h e s e co n d co l u m n o f t h e sa m e t a b l e , n o in g r e d i e n t o f
a g r i c u l t u ra l c h e m i ca l s o r ot h e r c he m i ca l s ub s t an ce s s h a l l b e d e t e c te d
w he n t h es e f oo d s ar e t e s t ed u s in g th e t e s t m e t ho d s s t i p u l a t e d i n (3 ) t o
(8).”

(1 ) T h e m a xi m u m r e s id u e l i m i t s o f s ub s ta nc e s us e d as in g r ed i e nt s
of ag r i cu l t u r a l c he m i ca l s i n fo od s ( P r ov i s i o na l M R L s L i s t )

(2 ) S a m p l e
s

Food S a mp l e ma t e r i a l

B a r l e y a n d bu ck wh ea t Th r e sh e d s ee d s

W he a t a n d r y e Hu sk e d s e e d s

R i c e (b r o w n r i ce ) H us k e d se e d s

C o r n ( m a i ze ) S e ed s w i t h t h e hu sk , t h e s i l k a n d t h e
c o r e s r e m ov e d
O t he r c er e a l g ra i n s Th r e sh e d s ee d s
Pe a s , b ea n s ( d r y ) * , b ro a d b e an s a n d
s oy be an s (d r y )
Pe an u t s , dr y
O t he r l e g u m e s /p u l se s
A p r ic o t , m u m e p l u m , ch er r y,
J ap an e s e p l u m ( in c l ud i n g pr u n e )
a n d ne c t ar i n e
Pe ac h
O r an g e ( i n c lu d i ng n a v e l or a n ge ) ,
g ra pe f r u i t , c i t ru s n a t s u da i d a i
( w ho l e ) , l i m e an d l e m o n
C i t r u s na t s u da i d a i (p ul p ) an d u n s h u
o ra ng e ( p ul p )
C i t r u s na t s ud a i d a i , p e e l s
O t he r c i t r u s f r u i t s
Pe a r, J ap an e s e pe a r, q ui n c e an d
a pp l e
L oq u a t
Av oc a d o an d m a ng o
Kiwifruit
G ua v a
Date
Pi n e ap p l e
Pa s s i o n f ru i t an d p a p a y a
B an a n a
S t ra w be r r y, cr an b e r r y, hu ck l eb e r r y,
b l a c kb er r y an d b lu e b e r r y
R a sp be r r y
O t he r b er r i e s
J ap an e s e p e r s i m m on
Wa t e r m e lo n , ma ku w au r i m e l o n a n d
S e ed s w i t h ou t t h e p o d s
Wi t h t h e s h e l l s r e m ov e d
S e ed s w i t h ou t t h e p o d s
Wi t h t h e p e du n c l e s an d t h e s ee d s
r e m ov e d
Wi t h t h e sk i n s a n d t h e s ee d s r e m
o ve d
W ho l e f r u i t
Wi t h t h e p e e l s r e m ov e d
Wi t h t h e ca l y x e s re m o v e d
Wh o l e f ru i t
Wi t h t h e bl o s s o m s ca r s , t h e co re s an d
t h e p e d u nc l e s re m o ve d
Wi t h t h e p e du n c l e s , t h e s k in s a n d
t h e s e e d s r e m ov e d
Wi t h t h e s e ed s r e m ov e d
Wi t h t h e s k in s r e m ov e d
Wi t h th e ca l yx e s r e m o ve d
Wi t h t h e ca l yx e s an d t h e se ed s
r e m ov e d
Wi t h t h e t o p s r e m ov e d
Wh o l e f ru i t
Wi t h t h e p e di c e l s r e m o ve d
Wi t h th e ca l yx e s r e m o ve d
W ho l e f r u i t
Wi t h t h e c a l y xe s r e m o ve d
Wi t h t h e c a l y xe s a n d t h e s ee d s
r e m ov e d
Wi t h t h e r i nd s r e m ov e d
m e l on s
G r ap e
O t he r f r u i t s
T u rn i p ( ro o t s ) an d J ap an e s e r ad i s h
( r oo t s , i n c l u di n g ra d i sh )
T u rn i p ( l ea ve s ) , w a te r c r es s , k a le ,
J ap an e s e r a di s h ( l e a v e s , in c l ud i n g
r ad i s h ) an d b ru s s e l s s p ro u t s
C au l i f l o w e r an d b ro c c o l i
C ab b a ge a n d C h i n e s e c a b b a g e
K yo n a a n d ko ma t s un a ( Ja pa ne s e m u
s t a r d s p in ac h )
H o rs e r ad i s h
Q i ng - g e n g - c a i an d o t h e r
c ru c i f e ro u s v eg e t a b l e s
Sw e e t po t a t o , k o n j a c , t a r o , p o t a t o ,
y a m an d ot h e r p o t a t o e s
P u m pk i n ( i n c l u di n g s q ua sh ) ,
c uc u m b e r ( i n c l u d i n g g h er k i n ) a n d
o r i en t a l p i c k l i n g m e lo n ( ve g e t a b l e )
O t he r c uc u rb i t a c e ou s v eg e t ab l es
A r t i c ho ke , e nd i v e a n d c h i c or y
B u rd o c k a n d s a l s i f y
S h u n gi k u
L e t t u c e ( in c l ud i n g co s l e t t u c e a n d
leaf let t uce )
Wi t h t h e p e d un c l e s r e m o ve d
Ed i b l e p or t i o n s
Wi t h t h e d i r t l i gh t l y r i ns e d o f f w i t h
w a te r
Wi t h th e d e c ay e d l e a v e s r e m ov e d
Wi t h t h e l e a ve s r e m o ve d
A s a m p l e co ns i s t i n g o f o n e p o r t i on
f r o m ea c h o f fo u r h e a d s , w i t h e a c h
h ea d e q u a l l y c u t i n t o f o u r po r t i on s ,
w i t ho u t th e de ca ye d ou t e r l e a v es
a n d t h e c o re s
Wi t h t h e ro o t s a n d t h e d ec ay e d
l e av e s r e m ov e d
Ro o t s w i t h t h e di r t l i g ht l y r in s e d of f
w i t h wa t e r
E d i b l e po r t i on s
Wi t h t h e d i r t l i gh t l y r i ns e d o f f w i t h
w a te r
Wi t h t h e v i ne s r e m ov e d
E d i b l e p o r t i on s
Wi t h t h e d e c a y e d l e a v e s re m o ve d
A s a m p l e t h i n l y s l i c e d th e n gr ou n d
w i t h a m e a t g r in d e r, t h e l e av e s
h av i n g b e e n re m o ve d a n d t h e di r t
h av i n g b e e n l i g h t l y r i n se d o f f w i t h
w a te r
Wi t h t h e ro o t s a n d t h e d ec ay e d
l e av e s r e m ov e d
Wi t h t h e d e c ay e d ou t e r l e av e s an d th e
c o r e s r e m ov e d
O t he r c o m p o s i t e v eg e t a b l e s E d i b l e p o r t i on s

S hi i t a k e m u s h ro o m , b u t t o n E d i b l e po r t i on s
m u s h ro o m an d o th e r m u s h ro o m s

C e l e r y, p a r s l e y an d m i t su b a Wi t h t h e ro o t s a n d t h e d ec ay e d
l e av e s r e m ov e d
C a r ro t a n d pa r sn i p Wi t h t h e d i r t l i g h t l y r in s e d o f f

O t he r u m b e l l i fe r ou s ve g e t a bl e s E d i b l e po r t i on s

To m a to , e g g p l a n t a n d p i m i e n t o Wi t h th e ca l yx e s r e m o ve d
( s w ee t p ep pe r )
O t he r s o la n c eo u s ve g e t a bl e s Ed i b l e p o r t i o n s

A sp a r ag u s S t em s

O n io n , g ar l i c , we l s h ( i nc l u d i n g Wi t h t h e ou t e r s k in s a n d th e ro o t
l e ek ) a n d m u l t i p l y i n g o n i o n h a i r re m o ve d

N i r a an d o t he r l i l i a c e o u s E d i b l e po r t i on s
v eg e t ab l es
G r ee n s oy be an s , k id n e y b ea n s ( w i t h Wi t h t h e p e di c e l s r e m o ve d
p od s , i m m a tu r e ) a n d p ea s ( w i t h
p od s , i m m a tu r e )

Okra Wi t h t h e c a ly x e s r e m o v e d

Su ga r ca n e Wi t h t h e h u s k s r e m ov e d

G i ng e r Wi t h t h e l e av e s re m o ve d , a n d w i t h
t h e d i r t l i g ht l y r i n se d of f w i t h
w a te r

Su ga r b ee t Wi t h t h e d i r t l i gh t l y r i ns e d o f f w i t h
w a te r

Sp i na c h Wi t h r e d r o ot s l e f t on , a n d w i t h t h e
r oo t h a i r a nd t h e d ec a y e d l e a v es
r e m ov e d

B a m bo o s h oo t s a n d o t h e r E d i b l e po r t i on s
v eg e t ab l es

Se s a m e s e e d s , ra pe s ee d s , su n f lo w e r S e ed s on l y
s ee d s , sa f f l o we r s ee d s , co t t o n s ee d
a n d ot h e r o i l se ed s

A l m o nd , g i nk g o n u t , c h es t n u t , Wi t h t h e h u s k s re m o ve d
w a ln u t , p e c a n an d o t h e r nu t s

C ac a o be a n s a n d c o f f e e be a n s Be an s w i th ou t t h e p od s
 Tea Tea l e av e s

Hop D r i e d f l o we r s

O t he r s p ic e s an d o t he r he rb s E d i b l e p o r t i on s

(3 ) A na l y t i c a l m e th o d f o r a ld r i n , en dr i n a n d di e l dr i n
Sho u l d b e p er f o r m ed ac co r d i n g t o 6 (5 ) .

(4 ) C l e n b u t e r o l an a l y t i c a l m e t ho d
1. E q u i p m en t
L i q u i d c h r o m a to g r ap h t a n d e m m a s s sp ec t r o m e t e r i s
use d .
2. R e a g en t s / Tes t s o l u t i on s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
Ac e to n i t r i l e : A ce t o n i t r i l e pr o d u c e d f o r l i q ui d ch ro m a t og r a ph y i s u s
e d . S t ro n g a c i d c a t i o n e x c h a n ge r m i ni c o lu m n (5 0 0 m g ) : A p ol y e
t h y l e n e co l u m n w i t h an i n ne r di a m e t e r o f 8 - 9 m m pa ck e d w i t h
50 0 m g of
be nz e n es u l fo n i l pr o p y l s i l an e - b o nd e d s i l i c a ge l o r o n e w i t h t h e
s a m e se pa r a t i o n c ha r ac t e r i s t i c s i s us e d .
Wa t e r : Wa t e r pr od u c e d f o r l i q ui d ch ro m a t og r a ph y i s u s
ed.
M e t h a no l : M e t h a no l p r o du c e d fo r l i q u i d c h r o m a to g r ap h y i s
u se d .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
C l en b u t e r o l h y d ro c h l o r id e : T h i s pr o d uc t s h ou l d co n s i s t o f 98 %
or m o r e c l en b u t e r o l hy d ro ch l or i d e .
M e l t i n g po i n t : 1 7 4- 1 7 6 °
C
4 . P r ep a ra t io n of t es t s o lu t i on s
a . Ex t r a c t i o n m e th od s
A f t e r h o m o ge n i z i n g , a sa m p l e o f 5 . 0 0 g i s m e as u re d o u t , t o wh i c
h 2 5 m l o f e t h y l a c e t a t e a n d 1 m l o f 4 m o l / l po t a s s i u m ca rb on a t e
s o l u t i o n ar e a dd e d . Th e m i x tu r e i s f i n e l y c ru s he d b e f o r e be i n g c e
n t r i f ug e d a t
3,00 0 rpm fo r f iv e m i nu t es . Th e n , the e th y l a c e ta t e lay e r
i s t r an s fe r r e d t o a ro t a r y v ac uu m e v ap o ra t o r. Tw en t y - f i v e m l o f
e t h y l a ce t a t e i s a dd e d t o t h e re s i du e a n d th e n cr u s h e d a n d ce
n t r i f ug e d a s de sc r i b e d a bo v e . Th e e th y l ac e t a t e l a y e r i s th e n ad d
e d t o t h e r o t a r y va cu u m e va po r a to r, a n d th e e t hy l a ce t at e i s r e m
o ve d a t 4 0° C o r lo w e r. Th i r t y m l e ac h o f ac e t o ni t r i l e a n d ac e to n i t r i l
e - sa t u r a te d n - h ex a ne a r e a dd e d t o t h e r e s id u e b e f o r e s ha k i n g v i
g or o u s l y f o r f iv e m i n ut e s us i n g
 a s ha ke r. T h e s h a k en m i x tu r e i s l e f t t o s t an d a n d t h e a c e to n i t r i l e l
a ye r
is t r an s fe r r e d to a 10 0- m l s ep a ra t i n g f u nn e l , w h er e 30 ml
o f ac e to n i t r i l e - sa t u ra t e d n - h ex a n e i s ad d e d. T h e a b o v e p ro ce d
u r e i s re pe a t e d a n d t h e a c e to n i t r i l e l a y e r i s c o l l e c t ed i n t h e r o
t a r y va cu u m ev ap or a t o r, an d t h e a ce t on i t r i l e i s r e m o ve d a t 40 ° C
o r lo w e r. T h e re s i du e i s di s s o l v ed i n 1 0 m l o f a m i xt u r e o f m e
t h a n o l a n d 1 . 2 % m e t a ph os p h or i c a c i d s o l u t i o n ( 2 : 3 ) , wh i c h i s
f i l t e r e d t h ro ug h a c o t t o n pl u g .
b . C l e a n- u p
T h r e e m l o f m e t h an o l f o l l ow e d a l s o b y 3 m l o f w a te r a r e po ur e d i n t o
a s t r on g a c i d c a t i o n ex c h an g e r m i n i c o l u m n ( 50 0 m g ) an d th e e f
f l u e n t i s d i sc a rd e d . Th e s o l u t i o n o b t a i n e d b y th e m e th o d d e
s c r ib e d i n “ a . Ex t r a c t i o n m e t ho d s ” i s po ur e d i n t o t h e c o l u m n .
Wa t e r ( 5 m l ) i s a l s o ad d e d and th e ef flue nt is d i sc a r de d .
F i f t e e n m l o f a m i xt u r e o f m e t h an o l and 0. 1 m o l/l di p o
t a s s iu m hy d ro ge n o r t ho p h os p h a t e so l u t i o n (9 : 1 ) i s ad de d t o t h e
c o l u m n , an d th e e l u a t e i s c o l l e c t ed i n a r o t a r y v ac u u m e va po r a t
o r, a n d th e wa t e r an d m e t h an o l a r e re m o ve d a t
4 0° C o r l o we r. Th e r e s i du e i s d i s so l v e d i n 1 . 0 m l o f m e th a no l ,
a n d t h i s i s u s e d a s t h e s a m p l e s o lu t i on .
5 . De t e r m in a t i on
a . Qu a l i t a t i v e t es t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s o b t a in e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d
i n t h e re f e r en c e m a te r i a l .
Te s t i n g c on d i t i
on s
C o lu m n p ac k in g : Oc t ad e cy l s i l a ne - b o n de d s i l i c a g e l ( pa r t i c l e s i z e :
2-5
µ m ) i s u se d .
C o lu m n : A s t a i n le s s t ub e ( i n n er d i a m e te r : 2 . 0 - 6. 0 mm and
l e ng t h :
10 0- 2 5 0 m m ) i s us ed .
C o lu m n t e m p er a t u re :
4 0° C
M o b i l e p h a se : A m i xt u r e o f a ce t o n i t r i l e , fo r m i c ac i d a n d w a
t e r (5 00 : 1 : 5 0 0 ) i s us ed . Th e f l o w r a t e s ho u l d be a d j u s te d s o
t h at c le n b ut e r o l f l o w s o u t i n a p pr ox i m a t e l y 10 m i n ut e s .
b . Q ua n t i t a t i v e t e s t s
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e c on d i t i on s d es c r ib e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t h e r
t h e p e a k h e ig h t o r p ea k a re a m e th od .
( 5 ) De xa m e t h as o n e a n a l y t i c a l m e th o d
1 . Eq u i p m e n t
L i qu i d c h r o m a t og r a p h t an d em m a s s s pe c t ro m e t e r i s
us e d .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
A ce t on i t r i l e: Ac e to n i t r i l e p ro d u c ed fo r l i q u i d c hr o m a to g r ap h y i s u s
ed . Oc t ad e c y l s i l a ne - b o n d e d sil i ca ge l m i ni c o l u m n ( 36 0 m
g ): A p ol y e th y l e n e c o lu m n w i t h a n i nn e r d i a m e te r o f 8- 9 m m
p ac ke d w i t h
36 0 m g o f o c ta d e c y l s i l a ne - b o n d e d s i l i c a g e l o r on e w i t h t h e s a
me s ep a ra t i o n ch ar a c te r i s t i c s i s u s e d .
S yn t he t i c m a gn es i u m s i l i c a t e ( F l o r i s i l ) f o r co l u m n ch r o m a
to g r ap h y : F l o r i s i l ( p articl e s i ze : 1 5 0- 2 5 0 µm ) pr o d uc e
d for c o l u m n ch r o m a t og r a ph y i s h e a te d a t 1 3 0 ° C fo r m o r e
th a n 1 2 h o ur s b e f o r e be i n g al lo w e d t o co o l i n a de s ic c a t o r.
Wa t e r : Wa t e r p ro du c e d fo r l i q u i d c hr o m a to g r ap h y i s us
ed .
M e t h a no l : M e t h a no l p r o du c e d fo r l i q u i d ch r o m a t og r a p h y i s
u se d . P ho s ph a t e bu f f e r so l u t i o n ( p H 5 . 0 ) :
F i r s t so l u t i o n : A n am o un t o f 2 7 . 2 g o f m o n o p o t as s i u m di h y
dr og e n m on op ho s p h a t e i s m e as u re d , wh i c h i s d i s so l v ed i n w a t e r
t o m a ke a
1 , 0 0 0- m l so l u t i on
.
S e co n d s o l u t i o n : A n am o un t o f 3 . 4 8 g o f di po t as s i u m h y
dr og e n or t ho p h os p h a t e i s m ea su r ed , w h i c h i s di s s o l v ed i n w a t e r
to m a ke a
1 00 - m l so l u t i o n .
T h e f i r s t s o lu t i o n i s c o m b in e d w i t h t h e s ec on d s o lu t i o n t o
a d ju s t t h e pH t o 5 . 0.
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
De xa m e t h as on e : Th i s pr o d uc t s ho u l d c o ns i s t of 99% or mo
r e de xa m e th a so ne .
M e l t i n g po i n t : 2 6 2- 2 6 4 °
C
4 . P r e pa r a t i o n o f t e s t so l u t i o n s
a. E x t r a c t i o n m e t ho d s
100100/
126
A f t e r h o m o ge n i z i n g , a sa m p l e o f 5 . 0 0 g i s m e as u re d o u t , t o wh i c
h 3 0 m l of 95 % ac e to n i t r i l e s o lu t i o n i s ad d e d . T h e m i x tu r e i s
f i n e l y cr u sh e d a g a i n be fo r e be i n g c e n t r i f ug e d a t 2 , 50 0 r p m f o r f iv e
m i n u t e s an d t h e a c e to n i t r i l e l a y e r i s co l l ec t e d . Th i r t y m l o f 9 5 %
a ce t on i t r i l e

101101/
126
 s o lu t i o n i s ad d e d t o t h e re s i d u e , an d t h en i t i s f i n e l y cr u sh e d a
n d c en t r i f ug e d as d es c r i b e d ab ov e b e fo r e c o l le c t i n g th e ac e t o ni t r i l e
l a ye r.
b . C l e a n- u p
i. Florisil f o r co l u m n c hr o m a
to g r ap h y
E i gh t gr a m s o f f lo r i s i l fo r c o l u m n c hr o m a t og r a p h y su sp e n d e d
i n a ce t o n i t r i l e i s p ou r e d i n t o a c hr o m a t og r a p h tu b e ( i nn e r di a m
e te r : 1 5 mm a n d l e ng t h : 3 0 0 m m ) . T h e ac e to n i t r i l e i s t h e n s p i l t o u t
u n t i l o n l y a s m a l l a mo un t re m a i n s o n t h e p ac k i n g o f t h e c o l u m
n , into whic h
10 0 m l of ac e t o n i t r i l e i s p o ur e d a n d t h e ef f l u e n t i s d i sc a rd ed .
T h e s o lu t i o n o b tai n ed by the m e th o d d e sc r i b e d in “a.
Ex t r a c t i o n m e t ho d s ” a n d , s ub se q u en t l y, 3 0 m l o f a ce t on i t r i l e
ar e a l s o p ou r e d
in t o t h e c o l u m n . T h e e l ua t e i s t r a ns f e r re d t o a 3 00 - m l s ep a ra t i
n g f un ne l . F i f t y m l o f n - h ex an e i s t h en ad d e d t o t h e f u n n el be fo r e
be i n g v ig o r o u s l y s ha ke n u s i n g a sh a k er f o r th r e e m i n ut e s a n d l e f t
t o s ta n d . Th e a c e t on i t r i l e l ay e r is th e n coll ecte d in a ro t a
ry va cu u m ev a p or a t o r, a n d t h e ac e to n i t r i l e i s re m ov e d a t 4 0° C
o r lo w e r. Th e re s i du e i s d i s so l v e d i n 4 m l o f ph os ph a t e b u f f e r
so l u t i o n ( p H 5 . 0 ) , t o wh i c h 6 m l of w a te r i s ad d e d .
i i . Oc t ad e c y l s i l a ne - b on de d s i l i c a g e l c o l u m n c hr o m a to g r ap h y
Te n m l o f m e th a no l , 1 0 m l o f w a te r an d 2 m l o f p ho s p ha t e b u f
f e r s o lu t i on ( p H 5 . 0 ) a r e a dd e d t o t h e o c t ad e c y l s i l an e - b on d ed s i l
i c a g e l m i ni c o lu m n (3 6 0 m g ) i n t h at o r d e r. Th e ef f lu e n t i s d i
sc a rd ed . T h e so l u t i o n ob t a i n e d in “i. Floris il fo r c o lu m n
ch r o m a t og r a ph y ” i s po ur e d i n t o t h i s c o l u m n . S ub s eq ue n t l y, 5
m l o f p ho s p ha t e b u f f e r s o lu t i o n ( p H 5 . 0 ) an d 1 0 m l o f 2 5 %
m e th a no l s o l u t i o n ar e a l s o p ou re d i n t o th e c o l u m n i n th a t o r
de r. Th e e f f l u en t i s d i s ca r de d . Te n m l o f 60 % ac e t o n i t r i l e s o lu t
i o n i s po ur e d in t o t h e c o l u m n . T h e e lu a t e is co l l e c t e d in a
ro t a r y va cu u m e v a po ra t o r, and t h e ac e to n i t r i l e an d wa t e r a r e
r e m ov e d at 40 ° C o r lo w e r. Th e re s i du e i s di s s o l v e i n 0 . 5 m l of
10 % ac e t o n i t r i l e so l u t i o n , a n d t h i s i s us e d a s th e t e s t s o l u t i o n .
5 . De t e r m in a t i o n
a. Q ua l i t a t i v e t e s t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s o b t a in e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d
i n t h e re f e r en c e m a te r i a l .
Te s t in g co nd i t i
ons
 C o lu m n p ac k in g : Oc t ad e cy l s i l a ne - b o n de d s i l i c a g e l ( pa r t i c l e s i z e :
2-5
µ m ) i s u se d .
C o lu m n : A s t a i n le s s t ub e ( i n n er d i a m e te r : 2 . 0 - 6. 0 mm and
l e ng t h :
10 0- 2 5 0 m m ) i s us ed .
C o lu m n t e m p er a t u re :
4 0° C
M o b i l e p h a se : A m i xt u r e o f a ce t o n i t r i l e , fo r m i c ac i d a n d w a
t e r (1 , 2 0 0 : 1 : 8 0 0 ) i s us e d . Th e f l o w ra t e s h ou l d b e ad ju s t e d
s o t h a t d ex a m e t h as on e f lo w s o u t i n a p pr o x i m a t e l y 7 - 1 0 m i
nu t es .
b. Qu an t i t a t i v e
tests
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e c on d i t i on s d es c r ib e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t h e r
t h e p e a k h e ig h t o r p ea k a re a m e th od .

(6 ) A na l y t i c a l m e th o d f o r t r i az o p ho s a n d p a r a t h i o n
Sh ou l d be pe r fo r m e d a cc o rd i ng t o 6 ( 10 ) .

( 7 ) An a l y t i ca l m e t ho d fo r a l ph a - t r e n b o l o n e a n d b e t a - t r e n bo l o n e
1 . Eq u i p m e n t
A hi gh - p e r fo r m a nc e l i qu i d c h r o m a to g r ap h with an ultra v i
o l e t sp ec t r op ho t o m e t r i c d e te c t o r an d a l i qu i d c hr o m a t og r a p h
m a s s sp ec t r o m e t e r a r e u se d .
2 . Re a g e n ts / Te s t so l u t i o n s
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
R ea g e n t s d es i gn a t e d a s “ s p ec i a l g ra de ” i n t h i s s e c t i o n m u s t m e e t
t h e re qu i r e m e n t s fo r “ s pe c ia l gr a d e ” s pe c i f i e d in th e J a pa n
I nd u s t r i a l S t an da rd s f o r t h e r ea g en t s .
We a k ba s i c a n i o n ex c h an g e re s i n m i n i co l u m n (5 0 0 m g ) : A p ol y e t h y l
en e co l u m n w i t h an i n n e r d i a m e te r o f 8 - 9 m m pa ck e d w i t h 5 0 0
m g o f d i e t h y l a m i n op r o p y l we a k b as i c an i o n ex c h an g e re s i n
pr od uc e d f o r co l u m n ch r o m a t og r a ph y or one with the
sa m e se pa r a t i o n c ha r ac t e r i s t i c s i s us e d .
H y d ro x y p ro p y l d e x t ra n fo r c o l u m n c hr o m a to g r a p h y : D ex t r a n
(p a r t i c l e s i ze : 2 5 - 1 0 0 µ m ) ch e m i c a l l y bo nd e d w i t h a h y dr ox y p r
op y l gr o u p pr od u c ed f o r c o lu m n ch r o m a to g r ap h y i s us e d .
 D i ch l o r o m e th a ne : D i ch l o r o m e th a n e ( s pe c i a l
g ra de ) .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
 A lp ha - t r e n b ol o n e : T h i s p ro d u c t sh ou l d co ns i s t o f 94 % o r m
o r e a lp ha - t r en bo l o ne .
M e l t i n g po i n t : 1 1
0° C
Be t a - t r en b o lo n e : This pr od u c t sh ou l d c on s i s t of 99 % or m
o r e be t a - t re n b o l on e .
M e l t i ng po i n t : 1
86 ° C
4 . P r ep a ra t io n of t es t s o lu t i on s
a . Ex t r a c t i o n m e th od s
A f t e r h o m o ge n i z i n g , a s a m p l e o f 5 .0 0 g i s m ea su r e d o u t . F o r m u
s c le , th e fa t l a y e r sh o u l d b e r e m o ve d a s m u c h a s p o s s i b l e
b ef o r e b e in g c ho p pe d .
Tw e n t y m l o f a m i x tu r e o f a ce t on i t r i l e an d m e t h an o l ( 4 :1 ) i s
a dd ed . T h e m i x tu r e i s f i n e l y cr u sh e d b ef o r e be i ng c e n t r i f ug e d a t 2 ,
6 0 0 r p m f o r f i v e m i n u t es . T h e s up e rn a t a n t l i q u i d i s co l l ec t e d
i n a 1 00 - m l se pa r a t i n g fu nn e l . Tw en t y m l o f a m i x tu r e o f ac
e t o n i t r i l e a n d m e t h an o l ( 4 :1 ) i s ad de d t o t h e p re c i p i t a t e , an d t h
e m i x tu r e i s t h e n ce n t r i fu g e d u nd e r the abo v e co n d i t i o ns .
The m i xe d lay e r o f a ce t on i t r i l e a n d m e th a no l i s c o m b i n e d i n
t h e s ep a ra t i ng fu nn e l , t o wh i c h 20 m l w a te r - s a tu r a t e d n - he x a n e
i s a l s o ad d e d b ef o r e sh a k i n g vi go r o u s l y fo r f iv e m i nu t es . T h e
s ha ke n m i xt u r e i s th e n l e f t t o s t a n d a n d t h e m i x e d l ay e r of
a ce t on i t r i l e an d m e t h an o l i s t r an s fe r r e d t o a ro t a r y v a c uu m
e va po r a to r. F o r t y m l ea c h o f 5% s o di u m s u l fa t e so l u t i o n a nd
d i c h lo r o m e th a n e ar e a ls o ad d e d b e fo r e sh a k i n g vi go r o u s l y
f o r f iv e m i n ut e s . T h e sh ak e n m i xt u r e i s th e n l e f t t o s t a n d an d t h e
l a y e r of d i c h l o r o m e t h an e i s t r an s fe r r e d t o a r o t a r y v ac uu m
e va po r a to r. F i f t e e n m l o f d i c h lo r o m e th a n e i s a dd e d t o t h e a q u e
o u s l a y e r, a n d af t e r r ep e a t i n g t h e a b ov e pr oc e d u re , t h e d i
c h lo r o m e th a n e l a ye r is c o m b in e d in the ro t a r y va cu u m
e va po r a t o r, a nd t h e d i c h lo r o m e th a n e i s re m o ve d at 4 0° C o r
l o we r. The resid u e i s di s s o l v e d i n 1 m l o f a m i x tu r e o f n - he x a
n e a n d b e n z e n e (3 : 1 ) .
b . C l e a n- u p
i . We a k ba s i c a n io n ex ch an g e r e s i n c o l u m n c h r o m a
to g r ap h y
A we a k b as i c an i o n ex ch a n g e re s i n m i ni c o l u m n ( 50 0 m g ) i s i n j ec t
e d w i t h 6 m l o f a m i xt u r e of n - h e xa n e a n d b e nz e n e ( 3 :1 )
an d t h e e f f l u en t i s d i sc a rd e d . T h e s o lu t i o n o b t a i n e d b y t h e m e
th o d d es c r i b e d i n “ a . Ex t r a c t i o n m e t ho d s ” i s p o u re d i n t o t h i s
co l u m n . Tw o m l of a m i xt u r e o f n - he x a n e a n d b e n ze n e (3 : 1 ) i s
a l s o a d de d t o t h e c o l u m n
 an d th e e f f lu e n t is d i sc a rd e d . Three ml of a m i x tu r e
o f d i ch l o ro m e t h an e a n d m e th a no l ( 9 : 1 ) i s p ou re d i n t o t h e co l u m
n an d t h e e l ua t e i s c o l l e c t e d i n a r o t a r y va cu u m ev ap or a t o r,
an d t h e so l ve n t i s ev ap or a t e d t o ne a r d r y ne s s u nd e r n i t r og e n a t
40 ° C o r lo w e r. Th e re s i du e i s d i s so l v ed i n 0 . 5 m l o f a m i xt u r e
o f b e nz e n e an d m e t h an o l (1 7 : 3) .
i i . H y d ro x y pr op y l d e x t ra n fo r c o l u m n c hr o m a t og r a
ph y
A po l y e th y l en e co l u m n w i t h a n i n ne r d i a m e te r o f 6 m m i s
pa ck e d w i t h h y d ro x y p ro p y l d ex t r a n f o r co l u m n ch r o m a t og r a p h y
su sp e nd e d i n a m i xt u r e o f be n z e n e an d m e t h an o l ( 17 : 3 ) b ef o r e
b e in g l e f t t o s ta n d f o r 1 2 h o ur s s o a s t o o bt a i n a 1 2 0- m m
lo n g lay e r o f h y dr ox y pr op y l d ex t r a n f o r c o lu m n c hr o m a
to g r ap h y. T h e m i x tu r e o f be nz e n e a n d m e t h an o l (1 7 :3 ) i s th e n
sp i l t ou t u nt i l o nl y a s m a l l
am o un t r e m a in s on th e pa c k i n g o f t h e c o lu m n . T h e so l u t i o n o b t a i
n ed i n “ i . We a k ba s i c a n i o n e xc ha ng e r e s i n c o lu m n ch r o m a
to g r ap hy ” i s p ou re d in t o t h i s c o l u m n . Te n m l o f a m i x tu r e
o f b en z e n e a n d m e th a no l ( 1 7: 3 ) i s a l s o ad d e d t o t h e c o lu m n
an d 2 . 0 m l o f t h e f i r s t e f f l u en t i s d i sc a rd e d . Th e n e x t e l ua t e i s co l
l ec t e d i n a r o t a r y va c u u m ev a p or a t o r, an d t h e s o lv e n t i s e v
ap or a t ed t o n e ar d r y n es s un d e r ni t r o g en a t 40 ° C o r l o w e r. T h e
re s i du e i s di s s o l v ed i n 0 . 5 m l o f a m i x tu r e o f ac e to n i t r i l e an d
wa t e r ( 1 :1 ) , a n d t h i s i s us e d as th e t e s t s o lu t i on .
5 . De t e r m in a t i on
a. Q ua l i t a t i v e
tests
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s o b t a in e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d
i n t h e re f e r en c e m a te r i a l .
Te s t in g co nd i t i
ons
C o lu m n pa ck i n g : Oc t a de c y l s i l a n e - bo n d e d s i l i c a ge l ( p ar t i c l e s i z
e: 5
µ m ) is
us ed .
C o lu m n : A s ta i n l e s s t u b e ( i nn e r d i am e t e r : 4 . 0 - 6. 0 m m an d l e n g th : 1
5 0 mm ) i s us ed .
C o lu m n t e m p er a t u re :
4 0° C
De t e c to r : S h ou l d b e o p er a t e d a t a n ab so r p t i o n w av e l e n g t h o f 3 4 0
n m . M ob i l e ph a s e : A m i xt u r e o f ac e to n i t r i l e an d w a te r (5 : 6 ) i s
u se d . T h e f l o w r a t e sh ou l d b e a d ju s t e d s o th a t a l p h a- t r e nb o l o n e
flows out i n
ap pr o x i m a te l y 1 0 m i n u
t es .
 b. Qu an t i t a t i v e
tests
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e c on d i t i on s d es c r ib e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t h e r
t h e p e a k h e ig h t o r p ea k a re a m e th od .
c. Co n f i r m a t i o n
tests
L i q u i d c h r o m a to g r ap h y / m a s s sp ec t r o m e t r y i s pe r fo r m ed un d e r
t h e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s . ” Te s t re s u l t s
o bt a i n ed m u s t b e t h e s a m e as t h e r e su l t s ob t a i n e d i n th e
r e fe r e nc e m a t e r ia l . Th e qu a n t i t y m a y b e de t e r m i n e d b y e i th e r th e
p e ak h e ig h t o r p e a k ar e a m e t ho d , i f re qu i r e d .

(8 ) E t h y l e n e di b ro m i d e a na l y t i c a l m e t ho d
1 . Eq u i pm e n t
A g a s ch ro m a t og r a p h w i t h a n e l e c t ro n ca pt u r e d e te c t o r ( G C -
E C D ) , a ga s ch ro m a t og r a ph - m a s s sp ec t r o m e t e r an d D ea n S t a r k
d i s t i l l a t i o n ap pa r a t u s a r e us ed .
T h e De a n S t ar k d i s t i l l a t i o n a p p a r a t u s i s ro u g hl y as sh ow n i n
t h e fo l l o w i n g f i gu r e :

A: Distillat i on flas k
B : C o o l i n g t ub e
C : D i s t i l l at io n t r a p

2 . R e a g en t s / Tes t s o l u t i
ons
I n a dd i t i o n t o th e r e a g en t s a n d t e s t so l u t i on s l i s t e d b e l o w, th o s e l i s
t e d i n S ec t i o n C Re ag e n t s / Te s t S o l u t i o n s , E t c . , P a r t I I F oo d a dd i
t i v e s a r e us ed .
S yn t he t i c m a gn es i u m s i l i c a t e ( F l o r i s i l ) f o r co l u m n ch r o m a
to g r ap h y : F l o r i s i l ( p articl e s i ze : 1 5 0- 2 5 0 µm ) pr o d uc e
d for c o l u m n ch r o m a t og r a ph y i s h e a te d a t 1 3 0 ° C fo r m o r e
th a n 1 2 h o ur s b e f o r e be i n g al lo w e d t o co o l i n a de s ic c a t o r.
S i l i c o n e f o r de fo a m i ng : S i l i c o n e pr od u c ed f o r d ef oa m i n g i s
u se d .
n- He xa ne : Th r e e h u n d r ed m l o f n - he xa n e i s co nc e n t r a t e d t o 5 m l
us i n g a r o t a r y v ac uu m e va po r a to r. T h e n , 5 µ l o f t h e di s s o l v e d
re s i du e i s in j e c t ed i n t o t h e G C - E C D f o r a n a l y s i s , wh e n t h e h e i gh t s
of p e a k s f o r co m p ou nd s o t h e r th a n n - h e x a n e on t h e g a s c hr o m a
to g r a m sh ou l d b e
 th e sa m e a s o r lo w e r t h a n t h e p e a k f o r ga m m a- B H C a t 2x 1 0
-1 1
g.
Wa t e r : D i s t i l l e d wa t e r i s u se d . I n c as e s w he r e a s ub s t an c e w h i c h
in t e r f e re s w i t h an a l y s i s o f a n in g r ed i en t o f t h e ag r i c u l t u ra l ch e m i
ca l p ro du c t c o nc er n e d i s c on t a i n e d , i t s h ou l d b e r i n se d o u t w i t h a s
o l v e n t su c h as n - h e x an e .
3 . Re f e r en c e m a t e r i a l
E t h y l e n e d i b r o m id e : Th i s pr o d u c t sh o u l d c on s i s t o f 99 % o r m
o r e e th y l e n e d i b r o m id e .
Bo i l i n g p o i nt : 1 3 1 . 5 ° C
4 . P r ep a ra t io n of t es t s o lu t i on s
a . Ex t r a c t i o n m e th od s
A bo u t on e kg of a sa m p l e i s c ho p p e d in t o s m a l l pi e c es o f e qu a l
s i z e . O f t h e c ho p p e d sa m p l e , 10 0 g i s m e as u re d ou t t o b e t r a n
s f e r re d i n t o a
1 , 00 0 - m l di s t i l l a t i o n f l a sk . Tw o h u n dr e d m l o f wa t e r a n d 1 0 m l
o f n - h ex a n e a r e a l s o a d d e d t o t h e f l a sk . A f e w d ro p s o f
d ef oa m i n g s i l i co n e a n d b oi l in g s t on e s a r e t h e n a dd e d b ef o r e th e f l
a s k i s a t t a c h e d t o t h e D e a n S t ar k d i s t i l l a t i o n ap p a ra t u s t o b e he a
t e d a n d r e f l ux e d f o r on e h o u r. A f te r co o l i ng , m o s t o f th e w a te r i n
t h e di s t i l l a t i o n t r a p i s re m ov ed . T h e n - h e x an e l ay e r i s t h e n f i l t er e
d i n t o a 1 0- m l m e as u r in g f l as k t h ro u gh l i q u i d p h a s e se pa r a t i o n f i
l t e r pa pe r. T h e in s i d e o f t h e
t r a p i s wa s he d w i t h a s m a l l am o un t o f n- h e x an e t o o b t a i n
t h e w a sh i ng s , wh i c h ar e f i l t e r e d t h r o u g h t h e f i l t e r p ap e r as s ta t e d a
b o v e. Th e f i l t r a t e i s co m b in e d w i t h t h e n - h ex a n e l a y e r t o m a k e
e xa c t l y a
1 0- m l so l u t i
o n . b . C l e a n- u p
T h e s o l u t i on o b t a in e d b y t h e m e t ho d d e s c r ib e d i n “ a . Ex t r a c
t i o n m e th od s ” i s t r a ns f e r r e d t o a 1 0 - m l t es t t ub e w i t h a g l as s
s t op pe r, t o w h ic h a p pr ox i m a t e l y 1 g o f f lo r i s i l f o r c o l u m n c hr o m
a to g r a p h y i s a dd e d . T h e m i xt u r e i s v ig o r o u s l y sh ak e n be f o r e be i
n g l e f t t o s t a n d at ro o m t e m p er a t u r e fo r ab o u t 15 m i nu t es .
T h en , about f iv e ml o f s up e rn a t an t l i qu i d is co l l e c t e d in
a no t he r t e s t tu b e w i t h a g l a s s s t op pe r, an d th i s i s u s ed as t h e t e s t
s o lu t i o n .
5 . De t e r m in a t i on
a . Qu a l i t a t i v e t es t s
Q ua l i t a t i v e t e s t s a r e p e r fo r m ed u nd e r t h e f o l l ow i n g c o n di t i o ns .
Te s t re s u l t s o b t a in e d m u s t b e th e s a m e a s th e re s u l t s ob t a in e d
i n t h e re f e r en c e m a te r i a l .
 Te s t in g co nd i t i
ons
C o lu m n : A s i l i ca t e g l a s s ca p i l l a r y co l u m n ( i nn e r d i a m e t e r : 0 . 3 2
mm a n d l e n g t h : 30 m ) c oa t e d w i t h 6% cy a n op r o p y l p h e n y l
- m e th y l s i l i c on e fo r g a s ch ro m a t og r a p h y t o a t h i ck n e s s o f 1 . 8 µ
m i s us ed .
C o lu m n t e m p e ra t u r e : Th e c o l u m n t e m p er a t u r e i s h e l d at 5 0° C fo r t
w o m i nu t e , fo l l o we d b y a n i n cr e as e o f 5 ° C ev e r y m i nu t e u nt i l
re a ch i n g
1 1 0° C , a f t e r wh i c h t h e t e m p e ra t u r e i s i n c r ea se d b y 3 0° C e
v er y m i n ut e u n t i l re a ch i n g 26 0° C , w h e r e i t i s h e l d fo r f i v e m i
nu t es .
Inlet tem p er a t u re :
2 50 ° C
D e te c t o r : S h ou l d b e o p e ra t e d at
3 00 ° C
G a s f lo w r a t e : He l i u m i s u se d as t h e c ar r i e r g as . T h e f l o w r a t e
sh ou l d b e ad j u s t e d s o t h a t e t h y l en e d i b r o m id e f l o w s ou t i n a p
pr ox i m a t e l y e i g h t m i n u t es .
b . Qu an t i t a t i v e t es t s
T h e qu an t i t y i s d e te r m in e d f r o m t h e t es t re s u l t s o bt a i n ed u nd e r
t h e c on d i t i on s d es c r ib e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s , ” u s i n g e i t h e r
t h e p e a k h e ig h t o r p ea k a re a m e th od .
c . Co n f i r m a t i o n t e s t s
Gas c hr o m a to g r a p h y / m a s s s pe c t r o m e t r y is p er f o r m e d u n de r
t h e c on d i t i on s de sc r i b e d i n “ a . Q ua l i t a t i v e t es t s . ” Te s t re s u l t s
o bt a i n ed m u s t b e t h e s a m e as t h e r e su l t s ob t a i n e d i n th e
r e fe r e nc e m a t e r ia l . Th e qu a n t i t y m a y b e de t e r m i n e d b y e i th e r th e
p e ak h e ig h t o r p e a k ar e a m e t ho d , i f re qu i r e d .

8. I n ca se s w he r e a s ub s t an c e us e d as an i ng r e d ie n t o f an a gr i c u l t ur a l
c he m i c a l (e xc l u d i n g s ub s t an c es d e t e r m in e d b y t h e M i n i s t e r o f H ea l t
h , L ab ou r a n d We l f a r e a s ha v i ng n o p o t e n t i a l t o c a us e d a m a g e t o
h u m a n he a l t h un d er P a ra g ra p h 3 o f A r t i c l e 1 1 o f th e L a w ) , fo r
w h ic h n o c o m po s i t i on a l s t a nd ar d s ar e s t ip u l a t e d i n 5 t o 7 , i s t h e
s a m e a s t h e s ub s t an c e na t u ra l l y c on t a i n e d i n th e fo o d , t h e a m ou n t
o f t h e s u b s t a n c e co n t a i n e d i n t h e f oo d sh a l l n o t e x c ee d t h e a m ou n t
n or m a l l y c on t a in e d i n th e f oo d . T h i s , h ow e v e r, do e s n o t ap p l y t o
f oo d s co n t a i n i ng s ub s t a nc e s t h a t m a y ca us e da m a ge t o h u m an he a l t h at
t h e a m ou n t no r m a l l y c on t a in e d .
9. I n c as e s wh e r e su b s t a nc e s us e d as in g r ed i e nt s of a g r i c u l t u ra l c h e m
i c a l s a n d o t h e r c h e m i ca l su bs t a n c es t h at ar e l i s t e d i n th e f i r s t c o lu m
n of th e f o l l ow i n g t a bl e ar e co n t a i n e d i n a f oo d , t h e am o un t o f t h e
s ub s t a nc e s s ha l l no t e x c ee d t h e a m o un t s t i p ul a t ed i n t h e t h i r d c o
l u m n o f th e s a m e
t a b l e ac c or d in g t o t h e f oo d c a t e g o r i e s s ho w n i n t h e se c o n d c o lu m n o f
t h e s a m e t a b le .
Th e m a x i m u m re s i d u e l i m i t s o f s ub s t a n c e s u se d a s in g r e d i e nt s
o f a gr i c u l t ur a l ch e m i c a l s i n fo od s ( ex c l u d i n g f oo d s l i s t e d i n t h e
se co n d c o lu m n o f th e t a b l e i n 6 ( 1 ) an d t h e s ec on d c o lu m n o f th e t ab l e
i n 7 (1)):

Co l u m n 1 C o lu m n 2 Co l u m n 3

AZINPHOS-METHYL O t he r s p ic e s , dr i e d 0.5 p p m

AC EP H AT E O t he r sp i c e s , d r i e d (e xc e p t th e 0.2 p p m
f r u i t o f S ans h o ( J ap an e s e
p ep pe r ) )

AMITRAZ C o t t o ns e e d o i l ( e x ce p t re f i n e d 0.05 ppm

c o t t o ns e e d o i l a n d c o t t o ns ee d
s a la d oi l t h a t m ee t th e Ja pa ne s e
A g r ic u l t u ra l S t a nd ar d s ( J A S )
f o r Ed i b l e Ve ge t a b l e F a t s an d
O i l s , a n d ot h e r e d ib l e o i l s t h a t m
e e t s ta nd a rd s eq u iv a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )
ALDIC A RB P e an u t oi l ( l i m i t e d t o re f i n e d 0.01 ppm
p ea n u t o i l an d p ea n u t s a la d o i l
t h a t m e e t th e J A S fo r Ed i b l e
Ve g e t a bl e F a t s a n d O i l s , an d
o th e r e d i b l e oi l s t h a t m ee t
s t an da r d s e q ui v a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )
C o t t o ns e e d oi l ( l i m i t e d t o 0.01 ppm
r e f i ne d c o t t o ns ee d o i l an d
c o t t o ns e e d s a la d o i l t h at m ee t
t h e JA S f o r E d i b l e Ve ge t ab l e
F a t s an d O i l s , a n d o t h e r ed i b l e
o i l s t h a t m e e t s t a nd a r d s
e qu i v a l e n t t o o r s t r i c t er t h a n
JA S )
I P ROD I ONE O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 0.05 ppm
s ee d s )
O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 0.1 p p m
r oo t s or r h i z o m e s )

IM ID AC L O PR I D W he a t f lo u r ( ex c ep t w h ol e 0.03 ppm
g ra i n )

W he a t br a n 0.3 p p m
ETHION O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 5 pp m
fruits)
O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 3 pp m
s ee d s )
O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 0.3 p p m
r oo t s or r h i z o m e s )

ETHEPHON Raisin 5 ppm

Fig, dried 10 p p m

EN DO SU L FA N C o t t o ns e e d o i l ( e x ce p t re f i n e d 0.5 p p m
c o t t o ns e e d o i l a n d c o t t o ns ee d
s a la d o i l t h at m e e t th e JA S f o r
E d i b l e Ve ge t ab l e F a t s a n d O i l s ,
a n d ot h e r e d ib l e o i l s t h a t m ee t
s t an da r d s e q ui v a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )

O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 5 pp m
fruits)
O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 1 pp m
s ee d s )
O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 0.5 p p m
r oo t s or r h i z o m e s )
C A R BA RY L Rice bra n 1 7 0 pp m

Mille d rice 1 pp m

W he a t f lo u r ( ex c ep t w h ol e 0.2 p p m
g ra i n )
W he a t g e r m 1 pp m

W he a t br a n 2 ppm

C o r n o i l ( e xc ep t e d ib l e c or n o i l 0.1 p p m
t h a t m e e t s t h e JA S f o r E d i b l e Ve
g e t a bl e F a t s a n d O i l s , a n d
o th e r e d ib l e oi l s th a t m ee t
s t an da r d s e q ui v a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )
S o yb ea n o i l (e xc e p t e d ib l e 0.2 p p m
s oy be a n o i l th a t m e e t s t h e J A S
f o r Ed i b l e Ve ge t a b l e F a t s an d
O i l s , a n d ot h e r e d ib l e o i l s t h a t m
e e t s ta nd a rd s eq u iv a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )
To m a t o j u i c e 3 pp m
 To m a t o p a s t e 10 p p m

Ed i b l e o l iv e o i l ( l i m i t e d t o 25 p p m
vi r g i n o i l )
S un f l o we r oi l (e xc e p t e d ib l e 0 .0 5 pp m
su n f lo w e r oi l t h at m e e t s th e
JA S fo r E d ib l e Ve g e t a bl e F a t s
an d O i l s , a n d ot h e r e d i b l e oi l s
th a t m ee t s t an da r d s e qu i v a l en t t o
o r s t r i c t er t h a n J A S )

QU I N T O Z E NE O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0 .0 2 pp m
f ru i t s )
O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0.1 p p m
se ed s )

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 2 ppm
ro o t s o r rh i z o m es )

G LY P H O S AT E Co t t on se e d o i l ( l i m i t e d t o 0 .0 5 pp m
re f i n e d c o t t on se e d o i l a n d
co t t on se e d sa l a d oi l t h a t m e e t
th e J A S fo r Ed i b l e Ve g e ta b l e
F a t s a n d O i l s , an d o t h e r e d ib l e
oi l s t h at m ee t s t a n da r d s
eq u i va l e n t t o o r s t r i c t e r th a n
JAS )

Co t t on se e d oi l (e x c e p t r e f i ne d 0 .0 5 pp m
co t t on se e d oi l a n d c o t t on se e d
sa l a d oi l t h a t m ee t t h e J A S fo r
Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

G LU F OS I N AT E S un f l o we r oi l (e xc e p t e d ib l e 0 .0 5 pp m
su n f lo w e r oi l t h at m e e t s th e
JA S fo r E d ib l e Ve g e t a bl e F a t s
an d O i l s , a n d ot h e r e d i b l e oi l s
th a t m ee t s t an da r d s e qu i v a l en t t o
o r s t r i c t er t h a n J A S )

Ra pe s e e d o i l ( ex c e p t r e f i n e d 0 .0 5 pp m
ra pe s ee d o i l an d r a pe s e e d s a l a d
oi l t h at m e e t th e JA S f o r
Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )
KRESOXIM-METHYL Raisin 2 pp m

E d i b l e o l i v e oi l ( l i m i t e d t o 0.7 p p m
v i r g i n o l i v e oi l )

CLETHODIM S o yb ea n o i l ( l i m i t e d t o ed i b l e 0.5 p p m
s oy be a n o i l th a t m e e t s t h e J A S
f o r Ed i b l e Ve ge t a b l e F a t s an d
O i l s , a n d ot h e r e d ib l e o i l s t h a t m
e e t s ta nd a rd s eq u iv a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )
S o yb ea n o i l (e xc e p t e d ib l e 1 pp m
s oy be a n o i l th a t m e e t s t h e J A S
f o r Ed i b l e Ve ge t a b l e F a t s an d
O i l s , a n d ot h e r e d ib l e o i l s t h a t m
e e t s ta nd a rd s eq u iv a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )

S u n f lo w e r o i l ( ex c ep t ed i b l e 0.1 p p m
s un f l o we r o i l t h a t m e e t s t h e
J A S f o r E d i b l e Ve ge t a b l e F a t s
a n d O i l s , a n d o th e r e d ib l e o i l s
t h a t m e e t s ta nd a rd s eq u iv a l e n t t o
o r s t r i c t e r th a n JA S )

C o t t o ns e e d oi l ( l i m i t e d t o 0.5 p p m
r e f i ne d c o t t o ns ee d o i l an d
c o t t o n se e d sa l a d o i l t h a t m e e t
t h e JA S f o r E d i b l e Ve ge t ab l e
F a t s an d O i l s , a n d o t h e r ed i b l e
o i l s t h a t m e e t s t a nd a r d s
e qu i v a l e n t t o o r s t r i c t er t h a n
JA S )

C o t t o ns e e d o i l ( e x ce p t re f i n e d 0.5 p p m
c o t t o ns e e d o i l a n d c o t t o n se e d
s a la d o i l t h at m e e t th e JA S f o r
E d i b l e Ve ge t ab l e F a t s a n d O i l s ,
a n d ot h e r e d ib l e o i l s t h a t m ee t
s t an da r d s e q ui v a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )

R ap e se e d oi l ( l i m i t e d t o 0.5 p p m
r e f i ne d ra p e s ee d o i l a n d
r ap e se e d s a l a d oi l t h a t m ee t th e
J A S f o r E d i b l e Ve ge t a b l e F a t s
a n d O i l s , a n d o th e r e d ib l e o i l s
t h a t m e e t s ta nd a rd s eq u iv a l e n t t o
o r s t r i c t e r th a n JA S )
 Ra pe s e e d o i l ( ex c e p t r e f i n e d 0.5 p p m
ra pe s ee d o i l an d r a pe s e e d s a l a d
oi l t h at m e e t th e JA S f o r
Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

CHLORDANE Mille d rice 0 .0 2 pp m

S oy be a n o i l ( l i m i t e d t o e d i b l e 0 .0 2 pp m
so yb ea n oi l t h a t m ee t s th e JA S
fo r E d i b l e Ve g e t a bl e F a t s a n d
O i l s , an d o th e r ed i b l e oi l s t h at m
ee t s t an da r d s e qu i v a l en t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

S oy be a n o i l ( ex c e p t e d i b l e 0 .0 5 pp m
so yb ea n oi l t h a t m ee t s th e JA S
fo r E d i b l e Ve g e t a bl e F a t s a n d
O i l s , an d o th e r ed i b l e oi l s t h at m
ee t s t an da r d s e qu i v a l en t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

Co t t on se e d oi l (e x c e p t r e f i ne d 0 .0 5 pp m
co t t on se e d oi l a n d c o t t on se e d
sa l a d oi l t h a t m ee t t h e J A S fo r
Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

L i ns e e d o i l (e xc e p t re f i n e d 0 .0 5 pp m
l i ns e e d o i l )

CHLORPYRIFOS Wh e a t f l ou r (e xc e p t w ho l e 0.1 p p m
gr a i n )

Co r n oi l ( l i m i t e d t o e d ib l e c or n 0.2 p p m
oi l t h at m e e t s th e JA S f o r
Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

S oy be a n o i l ( l i m i t e d t o e d i b l e 0 .0 5 pp m
so yb ea n oi l t h a t m ee t s th e JA S
fo r E d i b l e Ve g e t a bl e F a t s a n d
O i l s , an d o th e r ed i b l e oi l s t h at m
ee t s t an da r d s e qu i v a l en t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )
 Co t t on se e d o i l ( l i m i t e d t o 0 .0 5 pp m
re f i n e d c o t t on se e d o i l a n d
co t t on se e d sa l a d oi l t h a t m e e t
th e J A S fo r Ed i b l e Ve g e ta b l e
F a t s a n d O i l s , an d o t h e r e d ib l e
oi l s t h at m ee t s t a n da r d s
eq u i va l e n t t o o r s t r i c t e r th a n
JAS )
Co t t on se e d oi l (e x c e p t r e f i ne d 0 .0 5 pp m
co t t on se e d oi l a n d c o t t on se e d
sa l a d oi l t h a t m ee t t h e J A S fo r
Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 1 ppm
f ru i t s )

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 5 ppm
se ed s )

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 1 ppm
ro o t s o r rh i z o m es )

CHLORPYRIFOS-METHYL Wh e a t f l ou r (e xc e p t w ho l e 2 ppm
gr a i n )
Wh e a t b r a n 20 p p m

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0.3 p p m
f ru i t s )

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 1 ppm
se ed s )

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 5 ppm
ro o t s o r rh i z o m es )

C H L O R M E Q U AT Wh e a t f l ou r ( l i m i t e d t o w ho l e 5 ppm
gr a i n )

Wh e a t f l ou r (e xc e p t w ho l e 2 ppm
gr a i n )

Wh e a t b r a n 10 p p m

R y e f l ou r ( l i m i t e d t o wh o l e 4 ppm
gr a i n )

R y e f l ou r (e xc e p t wh o l e gr a i n ) R 3 p p m

y e b ra n 10 p p m

FE N B U TAT I N O X I D E
Ra pe s e e d o i l ( ex c e p t r e f i n e d 0.1 p p m
ra pe s ee d o i l an d r a pe s e e d s a l a d
oi l t h at m e e t th e JA S f o r
Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )
Plu m , dried 10 p p m

Ra i s i n 20 pp m

D I C H L O RV O S an d N A L E D Wh e a t f l ou r ( l i m i t e d t o w ho l e 2 ppm
(as total) gr a i n )
Wh e a t f l ou r (e xc e p t w ho l e 1 ppm
gr a i n )

Wh e a t b r a n 10 p p m

Wh ea t ger m 1 0 pp m
O th e r sp i c e s , d r i e d 0.1 p p m

D I Q U AT Mille d rice 0 . 2 pp m

Wh e a t f l ou r ( l i m i t e d t o w ho l e 2 ppm
gr a i n )

Wh e a t f l ou r (e xc e p t w ho l e 0.5 p p m
gr a i n )

Wh e a t b r a n 5 pp m

Ve ge t a b l e o i l (e xc e p t r e f i n e d 0 .0 5 pp m
ve g e t a b l e o i l )

DICOFOL Plu m , dried 3 ppm

Co t t on se e d o i l ( l i m i t e d t o 0.5 p p m
re f i n e d c o t t on se e d o i l a n d
co t t on se e d sa l a d oi l t h a t m e e t
th e J A S fo r Ed i b l e Ve g e ta b l e
F a t s a n d O i l s , an d o t h e r e d ib l e
oi l s t h at m ee t s t a n da r d s
eq u i va l e n t t o o r s t r i c t e r th a n
JAS )
Co t t on se e d oi l (e x c e p t r e f i ne d 0.5 p p m
co t t on se e d oi l a n d c o t t on se e d
sa l a d oi l t h a t m ee t t h e J A S fo r
Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )
 O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0.1 p p m
f ru i t s )

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0 .0 5 pp m
se ed s )

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0.1 p p m
ro o t s o r rh i z o m es )

DISULFOT ON O t he r s p ic e s , dr i e d 0.05 ppm

C YHA L O T H RI N Co t t on se e d o i l ( l i m i t e d t o 0 .0 2 pp m
re f i n e d c o t t on se e d o i l a n d
co t t on se e d sa l a d oi l t h a t m e e t
th e J A S fo r Ed i b l e Ve g e ta b l e
F a t s a n d O i l s , an d o t h e r e d ib l e
oi l s t h at m ee t s t a n da r d s
eq u i va l e n t t o o r s t r i c t e r th a n
JAS )
Co t t on se e d oi l (e x c e p t r e f i ne d 0 .0 2 pp m
co t t on se e d oi l a n d c o t t on se e d
sa l a d oi l t h a t m ee t t h e J A S fo r
Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

DIP H EN YL AMINE Ap p l e j u i c e 0.5 ppm

CYPRODINIL Wh e a t b r a n 2 ppm

Plu m , dried 5 ppm

Ra i s i n 5 ppm

CYPERMETHRIN O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0.1 p p m
f ru i t s )
O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0.2 p p m
ro o t s o r rh i z o m es )
Ve ge t a b l e o i l ( l i m i t e d t o 0.5 p p m
re f i n e d v e g e t a b l e o i l )

DIMETHIPIN Co t t on se e d o i l ( l i m i t e d t o 0.1 p p m
re f i n e d c o t t on se e d o i l a n d
co t t on se e d sa l a d oi l t h a t m e e t
th e J A S fo r Ed i b l e Ve g e ta b l e
F a t s a n d O i l s , an d o t h e r e d ib l e
oi l s t h at m ee t s t a n da r d s
eq u i va l e n t t o o r s t r i c t e r th a n
JAS )
 Co t t on se e d oi l (e x c e p t r e f i ne d 0.1 p p m
co t t on se e d oi l a n d c o t t on se e d
sa l a d o i l t h a t m ee t th e JA S f o r
Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

D I M E T H O AT E Ed i b l e o l iv e o i l ( e x c e p t vi r g i n 0 .0 5 pp m
oi l )
O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0.5 p p m
f ru i t s )

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 5 ppm
se ed s )

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0.1 p p m
ro o t s o r rh i z o m es )

BROMIDE Wh e a t f l ou r ( l i m i t e d t o w ho l e 50 p p m
gr a i n )

P ea ch , drie d 50 p p m

Plu m , dried 20 p p m

Ra i s i n 10 0 p p m

Da t e , dr i e d 10 0 p p m

F i g , dr i e d 25 0 p p m

F r u i t s (d r i e d f ru i t s e xc ep t 30 p p m
pe ac h , p l um , g ra pe , d a t e an d
f ig )

O th e r he rb s , dr i e d 40 0 p p m

SP I NO S A D Wh e a t b r a n 2 ppm

Ra i s i n 1 ppm

Co t t on se e d o i l ( l i m i t e d t o 0 .0 1 pp m
re f i n e d c o t t on se e d o i l a n d
co t t on se e d sa l a d oi l t h a t m e e t
th e J A S fo r Ed i b l e Ve g e ta b l e
F a t s a n d O i l s , an d o t h e r e d ib l e
oi l s t h at m ee t s t a n da r d s
eq u i va l e n t t o o r s t r i c t e r th a n
JAS )
Co t t on se e d oi l (e x c e p t r e f i ne d 0 .0 1 pp m
co t t on se e d oi l a n d c o t t on se e d
sa l a d o i l t h a t m ee t th e JA S f o r
 Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

D IAZ IN ON Plu m , dried 2 ppm

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0.1 p p m
f ru i t s )

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 5 ppm
se ed s )

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0.5 p p m
ro o t s o r rh i z o m es )

T H I O D I C A R B an d Wh e a t f l ou r (e xc e p t w ho l e 0 .0 3 pp m
ME T H O M Y L gr a i n )

Wh e a t ge r m 2 ppm

Wh e a t b r a n 3 ppm

Co r n oi l ( l i m i t e d t o e d ib l e c or n 0 .0 2 pp m
oi l t h at m e e t s th e JA S f o r
Ed i b l e Ve ge t ab l e F a t s a n d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

S oy be a n o i l ( l i m i t e d t o e d i b l e 0.2 p p m
so yb ea n oi l t h a t m ee t s th e JA S
fo r E d i b l e Ve g e t a bl e F a t s a n d
O i l s , an d o th e r ed i b l e oi l s t h at m
ee t s t an da r d s e qu i v a l en t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

S oy be a n o i l ( ex c e p t e d i b l e 0.2 p p m
so yb ea n oi l t h a t m ee t s th e JA S
fo r E d i b l e Ve g e t a bl e F a t s a n d
O i l s , an d o th e r ed i b l e oi l s t h at m
ee t s t an da r d s e qu i v a l en t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

Co t t on se e d o i l ( l i m i t e d t o 0 .0 4 pp m
re f i n e d c o t t on se e d o i l a n d
co t t on se e d sa l a d oi l t h a t m e e t
th e J A S fo r Ed i b l e Ve g e ta b l e
F a t s a n d O i l s , an d o t h e r e d ib l e
oi l s t h at m ee t s t a n da r d s
eq u i va l e n t t o o r s t r i c t e r th a n
JAS )
TEBUCON AZOLE Ra i s i n 3 pp m

TEBUFENOZIDE Raisin 2 pp m

D E LTA M E T H R I N a n d W he a t f lo u r ( l i m i t e d t o wh o l e 2 pp m
T R A L O M E T H R I N (a s to t a l ) g ra i n )

W he a t f lo u r ( ex c ep t w h ol e 0.3 p p m
g ra i n )

W he a t br a n 5 ppm

TE RB UF O S R ap e se e d o i l (e xc e p t r e f in e d 0.05 ppm
r ap e se e d o i l a n d r a p e s ee d s a l a d
o i l t h a t m e et t h e J A S fo r
E d i b l e Ve ge t ab l e F a t s a n d O i l s ,
a n d ot h e r e d ib l e o i l s t h a t m ee t
s t an da r d s e q ui v a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )

PA R A Q U AT S u n f lo w e r oi l ( l i m i t e d t o 0.05 ppm
e d ib l e s un f l o we r oi l t h at m ee t s
t h e JA S f o r E d i b l e Ve ge t ab l e
F a t s an d O i l s , a n d o t h e r ed i b l e
o i l s t h a t m e e t s t a nd a r d s
e qu i v a l e n t t o o r s t r i c t er t h a n
JA S )

S u n f lo w e r o i l ( ex c ep t ed i b l e 0.05 ppm
s un f l o we r o i l t h a t m e e t s t h e
J A S f o r E d i b l e Ve ge t a b l e F a t s
a n d O i l s , a n d o th e r e d ib l e o i l s
t h a t m e e t s ta nd a rd s eq u iv a l e n t t o
o r s t r i c t e r th a n JA S )

C o t t o ns e e d oi l ( l i m i t e d t o 0.05 ppm
r e f i ne d c o t t o ns ee d o i l an d
c o t t o ns e e d s a la d o i l t h at m ee t
t h e JA S f o r E d i b l e Ve ge t ab l e
F a t s an d O i l s , a n d o t h e r ed i b l e
o i l s t h a t m e e t s t a nd a r d s
e qu i v a l e n t t o o r s t r i c t er t h a n
JA S )

PA R AT H I O N O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 0.2 p p m
fruits)

O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 0.1 p p m
s ee d s )

O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 0.2 p p m
r oo t s or r h i z o m e s )
PA R AT H I O N - M E T H Y L Raisin 1 ppm

O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 5 pp m
fruits)
O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 5 pp m
s ee d s )
O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 3 pp m
r oo t s or r h i z o m e s )
BI OR ES M E TH RI N W he a t f lo u r ( l i m i t e d t o wh o l e 1 pp m
g ra i n )
W he a t f lo u r ( ex c ep t w h ol e 1 pp m
g ra i n )
W he a t g er m 3 pp m

W he a t br a n 5 pp m

BI FE N T H RI N W he a t f lo u r ( l i m i t e d t o wh o l e 0.5 p p m
g ra i n )

W he a t f lo u r ( ex c ep t w h ol e 0.2 p p m
g ra i n )

W he a t br a n 2 pp m

PI PE R O N Y L BU T OX I D E W he a t f lo u r ( l i m i t e d t o wh o l e 30 p p m
g ra i n )
W he a t f lo u r ( ex c ep t w h ol e 10 p p m
g ra i n )

W he a t g er m 90 p p m
W he a t br a n 80 p p m
C o r n o i l ( e xc ep t e d ib l e c or n o i l 80 p p m
t h a t m e e t s t h e JA S f o r E d i b l e Ve
g e t a bl e F a t s a n d O i l s , a n d
o th e r e d ib l e oi l s th a t m ee t
s t an da r d s e q ui v a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )
To m a t o j u i c e 0.3 p p m
J u ic e o f c i t r u s f ru i t s 0.05 ppm
Fruits, drie d 0.2 p p m

PY R I P RO X YF E N
C o t t o ns e e d oi l ( l i m i t e d t o 0.01 ppm
r e f i ne d c o t t o ns ee d o i l an d
c o t t o ns e e d s a la d o i l t h at m ee t
t h e JA S f o r E d i b l e Ve ge t ab l e
F a t s an d O i l s , a n d o t h e r ed i b l e
 oi l s t h at m ee t s t a n da r d s
eq u i va l e n t t o o r s t r i c t e r th a n
JAS )
Co t t on se e d oi l (e x c e p t r e f i ne d 0 .0 1 pp m
co t t on se e d oi l a n d c o t t on se e d
sa l a d oi l t h a t m ee t t h e J A S fo r
Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

PI R I M I C A R B O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 5 ppm
se ed s )

PI R I M I P H O S - M E T H Y L Wh e a t b r a n 15 p p m

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0.5 p p m
f ru i t s )

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 3 ppm
se ed s )

PY R E T H R I N S F r u i t s , dr i e d 0.2 p p m

V INC L O Z O LI N O th e r sp i c e s , d r i e d 0 .0 5 pp m

FA M O X A D O N E Wh e a t b r a n 0.2 p p m

Ra i s i n 5 ppm

FEN AM I P HOS P ea nu t o i l (e xc e p t re f i n e d 0 .0 5 pp m
pe a n u t o i l a n d pe a n u t sa l a d o i l
th a t m ee t t h e JA S f o r E d i b l e
Ve ge t a b l e F a t s an d O i l s , a n d
ot h e r e d ib l e o i l s th a t m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )
Co t t on se e d oi l (e x c e p t r e f i ne d 0 .0 5 pp m
co t t on se e d oi l a n d c o t t on se e d
sa l a d oi l t h a t m ee t t h e J A S fo r
Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

FEN IT R OT HI O N Wh e a t f l ou r ( l i m i t e d t o w ho l e 5 ppm
gr a i n )

Wh e a t b r a n 20 p p m

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 1 ppm
f ru i t s )
 O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 7 ppm
se ed s )

O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0.1 p p m
ro o t s o r rh i z o m es )

F E N T HI ON Ed i b l e o l iv e o i l ( l i m i t e d t o 1 ppm
vi r g i n o i l )

PH E N T H O AT E O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 7 ppm
se ed s )

FE N VA L E R AT E Wh e a t f l ou r ( l i m i t e d t o w ho l e 2 ppm
gr a i n )

Wh e a t f l ou r (e xc e p t w ho l e 0.2 p p m
gr a i n )

Wh e a t b r a n 5 ppm

Co t t on se e d o i l ( l i m i t e d t o 0.1 p p m
re f i n e d c o t t on se e d o i l a n d
co t t on se e d sa l a d oi l t h a t m e e t
th e J A S fo r Ed i b l e Ve g e ta b l e
F a t s a n d O i l s , an d o t h e r e d ib l e
oi l s t h at m ee t s t a n da r d s
eq u i va l e n t t o o r s t r i c t e r th a n
JAS )
Co t t on se e d oi l (e x c e p t r e f i ne d 0.1 p p m
co t t on se e d oi l a n d c o t t on se e d
sa l a d oi l t h a t m ee t t h e J A S fo r
Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

FEN P R O PATH RI N Co t t on se e d oi l (e x c e p t r e f i ne d 3 ppm

co t t on se e d oi l a n d c o t t on se e d
sa l a d oi l t h a t m ee t t h e J A S fo r
Ed i b l e Ve g e ta b l e F a t s an d O i l s ,
an d o th e r e d i b l e o i l s t h at m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )

FLU D IO X ON IL N i r a , dr i e d 50 p p m

Ba s i l , dr i e d 50 p p m

FLU S I LA Z O LE Ra i s i n 1 ppm

FLU T OL A N IL R i c e br a n 10 p p m

Mille d rice 1 ppm

PR OC H L O R AZ W he a t br a n 7 pp m

S u n f lo w e r oi l ( l i m i t e d t o 1 pp m
e d ib l e s un f l o we r oi l t h at m ee t s
t h e JA S f o r E d i b l e Ve ge t ab l e
F a t s an d O i l s , a n d o t h e r ed i b l e
o i l s t h a t m e e t s t a nd a r d s
e qu i v a l e n t t o o r s t r i c t er t h a n
JA S )
PR OC YM I DON E S u n f lo w e r oi l ( l i m i t e d t o 0.5 p p m
e d ib l e s un f l o we r oi l t h at m ee t s
t h e JA S f o r E d i b l e Ve ge t ab l e
F a t s an d O i l s , a n d o t h e r ed i b l e
o i l s t h a t m e e t s t a nd a r d s
e qu i v a l e n t t o o r s t r i c t er t h a n
JA S )
PR O PARG I T E C o r n f l ou r 0.2 p p m

C o r n o i l ( l i m i t e d t o ed i b l e co r n 0.5 p p m
o i l t h a t m e e t s t h e J A S fo r
E d i b l e Ve ge t ab l e F a t s a n d O i l s ,
a n d ot h e r e d ib l e o i l s t h a t m ee t
s t an da r d s e q ui v a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )
C o r n o i l ( e xc ep t e d ib l e c or n o i l 0.7 p p m
t h a t m e e t s t h e JA S f o r E d i b l e Ve
g e t a bl e F a t s a n d O i l s , a n d
o th e r e d ib l e oi l s th a t m ee t
s t an da r d s e q ui v a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )
P e an u t oi l ( l i m i t e d t o re f i n e d 0.3 p p m
p ea n u t o i l an d p ea n u t s a la d o i l
t h a t m e e t th e J A S fo r Ed i b l e
Ve g e t a bl e F a t s a n d O i l s , an d
o th e r e d i b l e oi l s t h a t m ee t
s t an da r d s e q ui v a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )
P e an u t oi l ( ex c ep t r e f i ne d 0.3 p p m
p ea n u t o i l an d p ea n u t s a la d o i l
t h a t m e e t th e J A S fo r Ed i b l e
Ve g e t a bl e F a t s a n d O i l s , an d
o th e r e d i b l e oi l s t h a t m ee t
s t an da r d s e q ui v a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )
O r an g e ju i c e 0.3 p p m
A pp l e j u i c e 0.2 p p m
 G ra p e ju i c e 1 ppm

Ra i s i n 12 p p m

Co t t on se e d o i l ( l i m i t e d t o 0.2 p p m
re f i n e d c o t t on se e d o i l a n d
co t t on se e d sa l a d oi l t h a t m e e t
th e J A S fo r Ed i b l e Ve g e ta b l e
F a t s a n d O i l s , an d o t h e r e d ib l e
oi l s t h at m ee t s t a n da r d s
eq u i va l e n t t o o r s t r i c t e r th a n
JAS )

PRO F E N O F O S Co t t on se e d o i l ( l i m i t e d t o 0 .0 5 pp m
re f i n e d c o t t on se e d o i l a n d
co t t on se e d sa l a d oi l t h a t m e e t
th e J A S fo r Ed i b l e Ve g e ta b l e
F a t s a n d O i l s , an d o t h e r e d ib l e
oi l s t h at m ee t s t a n da r d s
eq u i va l e n t t o o r s t r i c t e r th a n
JAS )
H EP TAC H L OR S oy be a n o i l ( l i m i t e d t o e d i b l e 0 .0 2 pp m
so yb ea n oi l t h a t m ee t s th e JA S
fo r E d i b l e Ve g e t a bl e F a t s a n d
O i l s , an d o th e r ed i b l e oi l s t h at m
ee t s t an da r d s e qu i v a l en t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )
S oy be a n o i l ( ex c e p t e d i b l e 0.5 p p m
so yb ea n oi l t h a t m ee t s th e JA S
fo r E d i b l e Ve g e t a bl e F a t s a n d
O i l s , an d o th e r ed i b l e oi l s t h at m
ee t s t an da r d s e qu i v a l en t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )
PE R M E T H R I N Wh e a t f l ou r ( l i m i t e d t o w ho l e 2 ppm
gr a i n )
Wh e a t f l ou r (e xc e p t w ho l e 0.5 p p m
gr a i n )
Wh e a t ge r m 2 ppm

Wh e a t b r a n 5 ppm
S oy be a n o i l ( ex c e p t e d i b l e 0.1 p p m
so yb ea n oi l t h a t m ee t s th e JA S
fo r E d i b l e Ve g e t a bl e F a t s a n d
O i l s , an d o th e r ed i b l e oi l s t h at m
ee t s t an da r d s e qu i v a l en t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )
 S un f l o we r o i l ( l i m i t e d t o 1 ppm
ed i b l e su n f lo w e r o i l t h a t m e e t s
th e J A S fo r Ed i b l e Ve g e ta b l e
F a t s a n d O i l s , an d o t h e r e d ib l e
oi l s t h at m ee t s t a n da r d s
eq u i va l e n t t o o r s t r i c t e r th a n
JAS )
S un f l o we r oi l (e xc e p t e d ib l e 1 ppm
su n f lo w e r oi l t h at m e e t s th e
JA S fo r E d ib l e Ve g e t a bl e F a t s
an d O i l s , a n d ot h e r e d i b l e oi l s
th a t m ee t s t an da r d s e qu i v a l en t t o
o r s t r i c t er t h a n J A S )
Co t t on se e d o i l ( l i m i t e d t o 0.1 p p m
re f i n e d c o t t on se e d o i l a n d
co t t on se e d sa l a d oi l t h a t m e e t
th e J A S fo r Ed i b l e Ve g e ta b l e
F a t s a n d O i l s , an d o t h e r e d ib l e
oi l s t h at m ee t s t a n da r d s
eq u i va l e n t t o o r s t r i c t e r th a n
JAS )
O th e r sp i c e s , d r i e d 0.05 ppm
P E N C ON AZO LE Raisin 0.5 p p m
P H OS A L ON E O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 2 ppm
f ru i t s )
O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 2 ppm
se ed s )
O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 3 ppm
ro o t s o r rh i z o m es )
PHO R AT E P ea nu t o i l ( l i m i t e d t o r e f i ne d 0 .0 5 pp m
pe a n u t o i l a n d pe a n u t sa l a d o i l
th a t m ee t t h e JA S f o r E d i b l e
Ve ge t a b l e F a t s an d O i l s , a n d
ot h e r e d ib l e o i l s th a t m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )
P ea nu t o i l (e xc e p t re f i n e d 0 .0 5 pp m
pe a n u t o i l a n d pe a n u t sa l a d o i l
th a t m ee t t h e JA S f o r E d i b l e
Ve ge t a b l e F a t s an d O i l s , a n d
ot h e r e d ib l e o i l s th a t m e e t
s ta nd a rd s e qu i v a l e n t t o o r
s t r i c te r t h a n J A S )
O th e r s p ic e s , dr i e d ( l i m i t e d t o 0.1 p p m
f ru i t s )
 O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 0.5 p p m
s ee d s )
O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 0.1 p p m
r oo t s or r h i z o m e s )

MA L AT H I O N To m a t o ju i ce 0 .0 1 pp m
O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 1 pp m
fruits)
O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 2 pp m
s ee d s )
O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 0.5 p p m
r oo t s or r h i z o m e s )

ME TH AM I DOP H O S O t he r sp i c e s , d r i e d (e xc e p t th e 0.1 p p m
f r u i t o f S ans h o ( J ap an e s e
p ep pe r ) )

ME TA L A X Y L an d
ME F E N O X A M
ME T H I D AT H I O N
ME T H O X Y F E N O Z I D E
O t he r sp i c e s , d r i e d ( l i m i t e d t o 5 pp m
s ee d s )
E d i b l e o l i v e oi l ( l i m i t e d t o 2 pp m
vir g i n oi l)
C o t t o ns e e d o i l ( e x ce p t re f i n e d 2 pp m
c o t t o ns e e d o i l a n d c o t t o ns ee d
s a la d o i l t h at m e e t th e JA S f o r
E d i b l e Ve ge t ab l e F a t s a n d O i l s ,
a n d ot h e r e d ib l e o i l s t h a t m ee t
s t an da r d s e q ui v a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )
Plu m , dried 2 pp m
Raisin 3 pp m

ME TH OP R E NE W he a t f lo u r ( l i m i t e d t o wh o l e 5 pp m
g ra i n )
W he a t f lo u r ( ex c ep t w h ol e 2 pp m
g ra i n )
W he a t br a n 10 p p m
C o r n o i l ( l i m i t e d t o ed i b l e co r n 0.2 p p m
o i l t h a t m e e t s t h e J A S fo r
E d i b l e Ve ge t ab l e F a t s a n d O i l s ,
a n d ot h e r e d ib l e o i l s t h a t m ee t
s t an da r d s e q ui v a l e n t t o o r
s t r i c t e r th a n JA S )

HY D R OG E N P H O S P H I D E Ve ge t ab l e s , dr i e d 0 .0 1 pp m
Fruits, drie d 0 .0 1 pp m
10 . I n ad d i t i o n t o t h e pr ov i s i o n s of 6 o r 9 , wh e n fo o d pr o d u c t s
a r e m a nu fa c t u re d o r pr o c e ss e d u s i n g f oo d s fo r w h i c h co m po s i t i o n a l s t
a nd ar d s ar e sp e c i f i e d i n 6 t h r ou g h 9 , t h e f o od s u s ed m u s t co m p
l y w i t h t h e s t an da r d s g i ve n i n 6 t h r ou g h 9 .