Está en la página 1de 136

Universidad Nacional Agraria La Molina

Facultad de Ciencias
Departamento Académico de Química

BIOQUÍMICA PESQUERA
Elva Ríos Ríos
Docente
Departamento Académico de Química
Facultad de Ciencias
BIOQUÍMICA PESQUERA
Capítulo 1
Bioenergética y Biocatálisis
TEMA 1
■ Sistemas amortiguadores biológicos

LOGRO DE APRENDIZAJE:

1. Comprende la importancia de los buffers en los seres vivos


EQUILIBRIO ÁCIDO BÁSICO

1. Mantenimiento del pH en sangre líquidos biológicos

2. Valores normales de pH 7.2 - 7.4

3. Mecanismos:
o Sistemas de Amortiguadores Fisiológicos
o Regulación de frecuencia respiratoria
o Regulación Renal
EQUILIBRIO ÁCIDO BÁSICO – SISTEMAS TAMPONES
Conceptos generales sobre tampones:

Sinónimos: Buffers, amortiguadores

Concepto:

Sistemas formados por 2 componentes que tiene la capacidad de evitar


cambios bruscos de pH cuando se le adiciona un ácido o un hidróxido
EQUILIBRIO ÁCIDO BÁSICO – SISTEMAS TAMPONES
Dos componentes (siempre) :
. Un ácido débil y su base conjugada
. Una base débil y su ácido conjugado
Por lo general , el nombre deriva del nombre de la base
conjugada
CARÁCTERÍSTICAS
GENERALES DE LOS Buffer Lactato : Mezcla de ácido láctico y lactato
TAMPONES
La concentración de un buffer se expresa siempre en
Molaridad :
Buffer Acetato 0.3M
La concentración del buffer es la suma de la concentración molar
de sus componentes:
[Buffer ] = [Acido ] + [ Base]
EQUILIBRIO ÁCIDO BÁSICO – SISTEMAS TAMPONES
Ecuación de Henderson Haaselbach

[𝑆]
pH = pKa + log
[𝐴]

- Log [H+] - Log [Ka]

[𝑁° 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑆]
pH = pKa + log [𝑁° 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝐴]
SISTEMAS TAMPONES TÍPICOS
A. Ac. Monopróticos débiles y su base - 01 hidrógeno ionizable
conjugada - 01 pKa
- Forma 01 sistema buffer

B. Ac. Dipróticos débiles y su base - 02 hidrógenos ionizables


conjugada - 02 pKa
- Forma 02 sistemas buffer

- 03 hidrógenos ionizables
C. Ac. Tripróticos débiles y su base
- 03 pKa
conjugada
- Forma 03 sistemas buffer
SISTEMAS TAMPONES FISIOLÓGICOS
A. Tampón Extracelular o - Par conjugado:
Tampón Bicarbonato Ac Carbónico y Bicarbonato

- Par conjugado:
B. Tampón Intracelular o
Fosfato diácido y Fosfato
Tampón Fosfato
monoácido

C. Tampones formados por


Aminoácidos
- Dependen del N° de grupos ionizables
que tenga el aa y del pKa
EQUILIBRIO ÁCIDO BÁSICO – SISTEMAS TAMPONES
Capacidad y Efectividad de Tampones

Un buffer es mas efectivo:

❖A mayor concentración molar de sus componentes.

❖A medida que la concentración de sal y ácido es la misma.

❖Cuando el pH es = pKa del ácido constituyente.


EQUILIBRIO ÁCIDO BÁSICO – SISTEMAS TAMPONES
Mecanismo de Acción
Existen “dos defensores del pH”
Caso 1: cuando se añade a un buffer un ácido

HA H+ + A-

> Cantidad No varía < Cantidad


H+
EQUILIBRIO ÁCIDO BÁSICO – SISTEMAS TAMPONES
Mecanismo de Acción
Caso 2: cuando se añade a un buffer un álcali

HA H+ + A-

OH- H2O

:< Cantidad No varía > Cantidad


El buffer con
concentraciones
El buffer después iguales del ácido El buffer después
de la adición de débil y su base de la adición de H+
OH- conjugada

A- HA A- HA
HA OH- H+ A-

OH- + HA H2O + A- H+ + A- HA
REGULACIÓN DE FRECUENCIA RESPIRATORIA
Acción conjunta del Tampón Extracelular y la frecuencia respiratoria

H2CO3 H+ + HCO3-
Anhidrasa
carbónica H+

CO2 + H2O
En procesos de acidosis: la frecuencia respiratoria aumenta

En procesos de alcalosis: la frecuencia respiratoria disminuye


MECANISMO RENAL
Mecanismo de producción de orina ácida

Sangre Célula Túbulo Renal Filtrado Glomerular

Na2HPO4
V.N. de pH en orina: 4-8 (7.4) H2O
H2CO3
H2O
Riñón filtra: 1.2 Lt/24 horas CO2 Na+
CO2 NaHPO4-
Excreta: 1 Lt/24 horas HCO3- H+ H+

NaH2PO4
Orina ácida
APLICACIONES DEL BUFFER
En la Industrias Agrícola
Las disoluciones tampón se usan para la fertiirrigación y la
agricultura hidropónica (cultivar plantas usando disoluciones
minerales y no suelo agrícola). Todas las plantas tienen un
intervalo de pH en que las raíces absorben nutrientes de
forma idónea. Una variación del pH puede afectar al proceso
de absorción de las raíces: disminuyendo la captación de
minerales y aumentando la permeabilidad a sustancias
tóxicas como el aluminio. A su vez, una variación en el pH
afecta a la solubilidad de la mayoría de minerales. Existe un
pH idóneo para cada planta dependiendo de su fisiología y
de los minerales que requiere, pero, como norma general,
podemos decir que precisan un pH ligeramente ácido (5.5-7)
salvo excepciones como las habas con pH un tanto básico
(7.4-8.1)
APLICACIONES DEL BUFFER
En la Industria Alimentaria:
Son de gran importancia los parámetros del pH
ya que, por ejemplo, nos indica si la carne es
apta para el consumo humano. Si la carne está
entre 5.4 y 7.0 de pH, es apta para el consumo,
pero a lo largo del tiempo el pH disminuye, hecho
que indica que su consumo no es pertinente. En
la industria vinícola, se deben de tener muy en
cuenta las variaciones de pH en la elaboración
del vino. Este debe oscilar entre 2.8 y 3.5, puesto
que a pH superior a 3.5 determinadas bacterias
pueden atacar el vino y producir variaciones en el
sabor.
APLICACIONES DEL BUFFER
En la Industria Farmacéutica:
Es sin duda alguna en la industria farmacéutica en la que se debe
tener un control y conocimiento más exhaustivo del pH, por
distintas razones:
❖Primeramente, para el diseño de los medicamentos es necesario
saber el pH de la zona del cuerpo en la que trabajará el fármaco,
pues si bajo ese pH las proteínas que queremos usar se
desnaturalizan el medicamento no tendrá efecto alguno.
❖En el proceso de formulación de los fármacos se usan las
propiedades fisicoquímicas del pKa y el pH para elegir la fórmula
óptima del medicamento.
❖En los ensayos previos a la comercialización de los medicamentos
se requiere un control del pH para garantizar que los resultados
obtenidos sean reales y ciertos, pues un pH erróneo podría dar
resultados falsos.
PARA LOS ÁCIDOS:
PARA LAS BASES:
TEMA 2
■ Bioenergética: Aplicaciones de las Leyes de la
Termodinámica a los seres vivos.
■Reacciones exergónicas y endergónicas.
LOGRO DE APRENDIZAJE:

1. Comprende el rol de la energía y las reacciones


acopladas en el metabolismo
FLUJO DE LA ENERGÍA A TRAVÉS DE LA BIÓSFERA
Entropia

Células
heterotróficas

Células
fotosintéticas
BIOENERGÉTICA
Aplicación de leyes de la termodinámica a los
seres vivos

Flujo de energía
❖Ciclo fundamental de la interconversión de la
energía.
❖Complementariedad entre organismos
fotosintetizadores y organismos heterótrofos.
❖Propiedad fundamental del ser vivo: su capacidad
para tomar, transformar energía y luego utilizarla.
BIOENERGÉTICA
Leyes de la termodinámica

Primera ley:

❖La energía no se crea ni se destruye , sólo se transforma.

❖La energía del universo permanece constante.

❖Los organismo vivos toman del medio, energía que les es útil, en las condiciones
normales de presión y temperatura en que se desarrollan y devuelven al medio una
cantidad equivalente de energía pero bajo una forma menos útil.
BIOENERGÉTICA
Segunda ley:
“La Entropía del Universo (S) aumenta constantemente”
Entonces para todo proceso espontáneo se cumple:
S SISTEMA + S ENTORNO > 0

❖Los seres vivos mantienen una ordenación esencial a expensas de su entrono, al cual
vuelven más desordenado y caótico.

❖Los seres vivos utilizan la energía más útil de todas y devuelve al medio energía
calorífica que contribuye al aumento de la entropía del universo
BIOENERGÉTICA
Ley de la energía libre o ley de Gibbs

❖Los seres vivos utilizan Energía Libre G ó G.

❖Es la energía que puede producir trabajo en condiciones


normales de presión y temperatura, condiciones en las que se
desarrollan los seres vivos.

❖Como toda energía se expresa en cal/mol o joule/mol o


múltiplos de estos

Para cada reacción química hay un cambio de energía libre


entre reactivos y productos
BIOENERGÉTICA
La energía libre de Gibbs se aplica:

Constante de equilibrio (Keq)

A + B C + D

𝐶 [𝐷]
Keq= 𝐴 [𝐵]

G = Gº + 2,3 RTº. Log Keq

A las reacciones de óxido reducción


G = -nf E
BIOENERGÉTICA
Clasificación de las reacciones según la energía libre

Reacciones Espontáneas:
❖La energía se libera a medida que progresa la reacción
❖ G=(-)
❖Termodinámicamente favorables
❖Pendiente cuesta abajo
❖Son reacciones exergónicas
BIOENERGÉTICA
Reacciones Espontáneas:

❖ Para producirse necesitan aporte de energía adicional


❖ G= (+)
❖ Termodinámicamente no favorable
❖ Pendiente cuesta arriba
❖ Son reacciones endergónicas
BIOENERGÉTICA
Reacciones en Equilibrio:

❖ Cuando llegan a un estado de equilibrio

G= 0

❖ Cada reacción Bioquímica dispone de un cambio de energía libre. Esta energía libre esta
relacionado a los procesos del catabolismo y anabolismo.

Reacciones Acopladas:

❖ Se realiza entre una reacción endergónica y una exergónica, existiendo un intermediario


común entre amabas, siendo el resultado una reacción exergónica.
TEMA 3
■ El ATP y transferencia de la energía libre
■ Ciclo energético.

LOGRO DE APRENDIZAJE:

1. Comprende el rol de la energía y las reacciones


acopladas en el metabolismo
ATP
Moneda Energética

❖ Es la principal fuente de energía de los seres vivos.

❖ Alimenta casi todas las actividades celulares, entre ellas el movimiento muscular, la
síntesis de proteínas, la división celular y la transmisión de señales nerviosas.

❖ Los enlaces de los grupos fosfato almacenan la energía

❖ La energía liberada es de aproximadamente -7,3 Kcal/mol


ATP
Estructura:

Es un nucleótido formado por una base


nitrogenada, la molécula de adenina,
unida a un azúcar de 5-carbonos, la ribosa
y a tres grupos fosfatos.
ATP
ATP
ATP
¿Porqué el ATP tiene alta energía de Hidrólisis?

Los productos resultantes de la


hidrólisis, ADP y Pi se hallan
cargados negativamente, por
lo que tienen poca tendencia a
aproximarse, debido a la
repulsión de sus cargas.
HIDROLISIS DEL ATP
ATP
¿Cómo se sintetiza el ATP?
El ATP se puede sintetizar a partir de ADP
y Pi mediante dos procesos:

1. Fosforilación a nivel de substrato:


ocurre en el citoplasma celular

2. Mecanismo quimiosmótico de Mitchell


o fosforilación oxidativa (ganador del
premio Nobel en 1978). Ocurre en la
mitocondria
CADENA DE TRANSPORTE DE ELECTRONES
ATP
Fotofosforilación fotosintética:

❖ Es la síntesis de ATP producida en los cloroplastos, mediante la utilización de energía


luminosa.
❖ P + Pi + cloroplastos + luz + ATP.
❖ En la membrana tilacoidal como resultado de la fotólisis del agua, se generan
protones (H+), que originan un alto gradiente de concentración de protones, al ser
transportados del lumen tilacoidal hacia el estroma.
FORMAS DE OBTENER
ENERGIA
FORMAS DE
OBTENER ENERGÍA
TRABAJO BIOLÓGICO
El trabajo biológico básicamente se divide en tres:

- Trabajo químico ............ biosíntesis y biocatálisis.

- Trabajo de concentración ......... trabajo osmótico.

- Trabajo mecánico ............... contracción muscular.


TRANSFERENCIA DE ENERGIA EN LAS CÉLULAS
HETEROTRÓFICAS POR MEDIO DEL SISTEMA ATP-ADP

Fuente: Lehninger (1975)


PAPEL DEL ATP UNIENDO CATABOLISMO Y
ANABOLISMO
TEMA 4
■ Clasificación funcional de las enzimas
■ Características generales de las enzimas y coenzimas.
Energía de activación

LOGRO DE APRENDIZAJE:

1. Conocer y relacionar nombre y función de las enzimas


2. Conocer la estructura molecular de las enzimas y sus
mecanismos de acción
ENZIMA

❖ Catalizadores biológicos

❖ Aceleran la velocidad de reacciones


que se producen al interior de los
organismos hasta hacerlas
compatibles con las condiciones de
temperatura y presión en las que se
desenvuelve la célula
ENZIMA
Algunas características

❖ En su gran mayoría de naturaleza proteica.


❖ Susceptibles de desnaturalización.
❖ Alto peso molecular.
❖ Gran poder catalítico.
❖ Actúan en bajas concentraciones.
❖ No alteran las constantes termodinámicas.
ESTRUCTURA PROTEICA

Aa no esenciales

Aa de unión

Centro activo
Aa catalíticos
PESO MOLECULAR Y CONCENTRACIÓN

Enzima

Sustrato

Producto
CAMBIO CONFORMACIONAL INDUCIDO POR
GLUCOSA EN LA HEXOQUINASA

La unión del sustrato produce un cambio conformacional de la enzima hexoquinasa (cinasa); la


cual es monomérica
ESPECIFICIDAD DE REACCIÓN
La especificidad de reacción está basada en la existencia de un Centro
Activo, lugar específico de unión de una enzima con un sustrato.

1.Especificidad Absoluta

2.Especificidad Relativa
ESPECIFICIDAD ABSOLUTA
(Teoría de Fisher – Llave-Cerradura)

+ +
S2
S2 y S3 no son
S3
reconocidos
Como sustratos

E + S E-S E + P
ESPECIFICIDAD RELATIVA
(Teoría de Koshland – Mano-guante)

+ +
E S1 E-S1

E + P2
S2
E-S2

S3 E + P3
E-S3
ESPECIFICIDAD RELATIVA
(Teoría de Koshland – Mano-guante)

Teoría de la adaptación inducida:

❖ El centro activo no tiene forma definida sino después de su unión con el sustrato

❖ La unión E-S está influenciada por la orientación de las moléculas en el espacio


ESPECIFICIDAD ENZIMÁTICA

Especificidad Absoluta

Una enzima reconoce un único compuesto como su sustrato

Especificidad Relativa

Una enzima puede reconocer a varios compuestos que tengan similaridad estructural
como sus sustratos.

Mostrará afinidad diferente por cada uno de ellos


TEORIAS PROPUESTAS PARA EXPLICAR LA ACCION
ENZIMATICA
MECANISMO DE ACCIÓN

Las enzimas actúan disminuyendo la energía de activación


necesaria para que se produzca una determinada reacción
CLASIFICACIÓN INTERNACIONAL DE ENZIMAS
• Oxidoreductasas
1

2 • Transferasas
Unión Internacional de
3 • Hidrolasas
Bioquímica reconoce 6
grupos principales de
4 • Liasas
enzimas:
5 • Isomerasas

6 • Ligasas
GRUPO 1 - OXIDOREDUCTASAS
❖ Catalizan reacciones de óxido reducción

❖ Frecuentemente requieren como cofactor NAD o FAD

❖ Las más frecuentes son :

. Deshidrogenasas
. Oxidasas
GRUPO 1 - OXIDOREDUCTASAS
Deshidrogenasas

SH2 + A AH2 + S
Sustrato
deshidrogenasa

CH3CH2OH + NAD CH3CHO + NADH+H

Etanol + NAD Acetaldehído + NADH +H

Alcohol deshidrogenasa
GRUPO 1 - OXIDOREDUCTASAS
Oxidasas

SH2 + ½ O2 H2O + S
Sustrato oxidasa

C18H37COCoA + i/2 O2 C18H35COOH + H20

Estearoil CoA + Oxígeno Oleil CoA + Agua

Estearoil CoA oxidasa


GRUPO 2 - TRANSFERASAS

❖ Catalizan reacciones de transferencia de grupos químicos:

- NH2 Aminotransferasas
- CH3 Transmetilasas etc

❖ Las más frecuentes son :


- Quinasas o Cinasas
- Fosforilasas
GRUPO 2 - TRANSFERASAS
Quinasas

S-OH + ATP S-O-P + ADP


Sustrato quinasa
C6H12O6 + ATP Glu-6P + ADP

Glucosa + ATP Glucosa-6fosfato + ADP

Glucoquinasa
GRUPO 2 - TRANSFERASAS
Fosforilasas

S-OH + Pi S-O-P + H2O

Sustrato Fosforilasa

(C6H12O6)n + Pi Glu-1P + (C6H12O6)n-1

Glucógeno + Fosfato inorg Glucosa-1fosfato+ (Glucógeno)

Glucogeno fosforilasa
GRUPO 3 - HIDROLASAS
❖ Catalizan reacciones de hidrólisis (ruptura de
enlaces con participación directa del agua). • Esterasas
• Glucidasas
• Peptidasas

❖ Son las más abundantes.

❖ En las reacciones, el agua figura como


reactante.

❖ En este grupo se encuentran las fosfatasas.


GRUPO 3 - HIDROLASAS
Fosfatasas

S - O - P + H2O S – O - H + Pi
Sustrato fosfatasa
Glucosa – 6P + H2O C6H12O6 + Pi

Glucosa – 6P + H2O Glucosa + Fosfato inorg


Glucosa 6 fosfatasa
GRUPO 4 - LIASAS

Fructuosa 1,6BiP Glic3P + DHAP

Sustrato liasa
(C6,2P) (C3,1P) + (C3,1P)

F1,6BiP Liasa o Aldolasa


GRUPO 5 - ISOMERASAS
❖ Catalizan reacciones de isomerización (cis, trans – dextro, levo, epímeros etc).

Ribosa - 5P Ribulosa - 5P

Sustrato isomerasa

Ribosa 5P isomerasa
GRUPO 5 - ISOMERASAS
Epimerasas

Sustrato epimerasa

D D

A C B B C A

C C
Ribulosa – 5P Xilulosa – 5P

Ribulosa – 5P epimersa
GRUPO 6 - LIGASAS
❖ Catalizan reacciones de unión o condensación.

❖ Reacciones que proceden con formación de nuevos enlaces, de tipo C-C, C-N- C-S,
para lo cual requieren de fuente de energía.

❖ Pueden ser referenciadas como:

. Sintetasas (Fuente de energía : ATP)

. Sintasas (Fuente de energía ≠ ATP)


GRUPO 6 - LIGASAS

R-(CH2)n-COOH + CoA + ATP

Acido graso Coenzima A ATP

Acil CoA Sintetasa

R-(CH2)n-CO-CoA + AMP + PPi


Acido graso activado (Acyl CoA)
GRUPO 6 – LIGASAS (Sintasas)

OAA + CH3-CO-CoA Citrato

Oxalacetato (C4) + Acetil CoA(C2) (C6)

Citrato Sintasa
OAA:Acetil CoA Ligasa
NOMENCLATURA INTERNACIONAL
❖ Todas las enzimas deben poseer un código y un nombre sistemático aparte de un
nombre común

Nomenclatura Internacional

Código Nombre Sistemático

4 dígitos separados por A) Nombre del Sustrato


puntos B) Naturales de reacción
C) Sufijo “Asa”
NÚMERO DE CÓDIGO
1 1 1 1

Grupo principal al que pertenece la enzima

Sub grupo al que pertenece la enzima o tipo de enlace


sobre el que actual la enzima

Necesidad de cofactor o aclaración

Número de orden
EL CÓDIGO : 1.1.1.1
1 1 1 1

Oxidoreductasa

Enzimas que actúan sobre enlaces R – OH


(alcohol)

Requieren NAD como cofactor

Número 1 en el grupo
NOMBRE SISTEMÁTICO
Alcohol :NAD Oxidoreductasa

“AlcoholDeshidrogenasa”

Segunda parte : Nombre común :


Primera parte :
Nombre del (los)
Naturaleza de la “Alcohol
reacción+”asa” Deshidrogenasa”
Sustratos
CLASIFICACIÓN DE ENZIMAS
Según la necesidad de activación:

1. Enzimas que no requieren activación (centro activo formado y su actividad catalítica


depende sólo de la estructura y conformación del centro activo).

2. Zimógenos o Proenzimas

3. Enzimas que requieren Cofactor


ZIMÓGENOS O PROENZIMAS
❖Enzimas que son sintetizadas por la
célula al estado inactivo.

❖Requieren ciertas condiciones en el


medio para poder pasar al estado activo
(generalmente por un proceso de
Activación proteolítica.

❖Existen zimógenos que disponen del


centro activo”bloqueado” o que no
disponen centro activo
ZIMÓGENOS O PROENZIMAS

+ HCl

Jugo gástrico
Pepsina
Pepsinógeno
Polipéptido
44 aa
ENZIMAS QUE REQUIEREN COFACTOR
❖ Enzimas que requieren un componente adicional
para que su actividad catalítica sea óptima

COFACTOR

❖ Compuesto de naturaleza no proteica que debe


unirse a la estructura proteica de la enzima para:

◦ Terminar de formar el centro activo

◦ mantener la estructura tridimensional de un


centro activo
ENZIMAS QUE REQUIEREN COFACTOR

Cofactor

Sustrato

Apoenzima Holoenzima
TIPOS DE COFACTOR
Activadores Metálicos:

❖ Iones metálicos mono/divalentes.

❖ Se unen a la estructura proteica mediante enlace iónico.

❖La unión para formar la Holoenzima es sólo mientras se realiza el ciclo catalítico
TIPOS DE COFACTOR
Cofactores enzimáticos o Coenzimas

❖ De naturaleza orgánica, derivadas de


vitaminas hidrosolubles (Complejo B y
vitamina C).

❖ La unión para formar la Holoenzima es


de tipo iónico y sólo mientras se realiza
el ciclo catalítico
TIPOS DE COFACTOR
Grupos prostéticos

❖ De naturaleza orgánica,
derivadas de vitaminas
hidrosolubles (Complejo B).

❖La unión para formar la


Holoenzima es de tipo covalente,
no disociable
COFACTORES DERIVADOS DE VITAMINAS
HIDROSOLUBLES
Vitamina Sigla Vit Cofactor Sigla Reacciones/
Cofactor Procesos
Tiamina B1 Pirofosfato de Tpp Transferencia
Tiamina Grupos Acilo

A E1 B
Tpp
UN TERCIO DE LAS ENZIMAS REQUIEREN ALGÚN
IÓN METÁLICO PARA CATALIZAR
TEMA 5
■ Cinética Enzimática: ecuación de Michaellis- Menten
Determinación de las reacciones de orden Cero y primer orden
■ Factores que afectan la actividad enzimática: pH,
temperatura. Iones e Inhibidores
■ Enzimas reguladoras
LOGRO DE APRENDIZAJE:

1. Comprender los principios básicos de la cinética


enzimática
2. Comprender los cambios que se presentan en la
velocidad de reacción enzimática
3. Comprender las formas de regulación enzimática
CINÉTICA ENZIMÁTICA
Velocidad de reacción
❖ Cambio de la [S] ó de [P] en función del tiempo.
❖ Unidades de velocidad: [ ] / t
❖ M/min, milimoles/lt.seg, etc
❖ Notación de velocidad:
- d [S] ó d [P]
dt dt
CINÉTICA ENZIMÁTICA
Factores que afectan la Velocidad de Reacción
Enzimática
❖ [S] (Cinética Michaeliana)
❖[E]
❖ pH
❖ Temperatura
❖ Concentración de Cofactor ( Si se requiere)
❖ Presencia de Inhibidores de reacción Enzimática
PARÁMETROS QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD
DE REACCIÓN ENZIMÁTICA
La velocidad de una reacción catalizada por una enzima depende de:

1. La concentración de moléculas de sustrato (Ecuación de Michaelis-Menten)

2. La temperatura: las enzimas posees una temperatura óptima a la cual la enzima presenta
máxima eficiencia catalítica. Existe un intervalo en el cual son estables.

3. pH del medio, que afecta a la confirmación (estructura espacial) de la enzima. Existe un pH


óptimo de actuación, a valores superiores o inferiores la velocidad disminuye.

4. Enzima. A pH y temperatura óptimos, la velocidad inicial es proporcional a la concentración de


enzima, al menos en un determinado rango de concentraciones.

5. La presencia de inhibidores.
CINÉTICA MICHAELIANA

Michaelis Menten
TEORÍA DE ACCIÓN Y CINÉTICA ENZIMÁTICA
Aportes:

1. Definición de la trayectoria de reacción enzimática.

2. Identificación del comportamiento hiperbólico rectangular y definición de Km.

3. Definición de la ecuación de Michaelis y Menten para cálculo de velocidades de


reacción
DEFINICIÓN DE LA TRAYECTORIA DE REACCIÓN
ENZIMÁTICA

K1 K3
E + S E-S E + P

K2
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO:
CINÉTICA MICHAELIANA
En una reacción enzimática donde va a aumentando la [S] manteniéndose los otros
factores óptimos y constantes :

❖ Comportamiento hiperbólico rectangular.

❖ Hipérbole que tiene como límites los parámetros cinéticos de Vm y Km


CONCENTRACIÓN DE ENZIMA, TIEMPO DE
INCUBACIÓN Y OTRAS CONDICIONES NO VARÍAN
GRÁFICO DE LINEWEAVER Y BURK:
GRÁFICA DE MICHAELIS_MENTEN
Variación de la actividad enzimática con la concentración de sustrato:

Nivel de saturación de la enzima


Velocidad de
reacción

Concentración de sustrato
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO
IDENTIFICACIÓN DE KM - LA CONSTANTE DE
MICHAELIS
❖ Km es la concentración de sustrato necesaria para
alcanzar la Mitad de la Velocidad Máxima.

❖ Km es un criterio de afinidad de una enzima por un


sustrato en particular.

❖ Km es un patrón de comparación entre enzimas.

❖ Valores de Km se expresan en Molaridad en un


rango entre 1 x10-7M a 0.1 M
LA ECUACIÓN DE MICHAELIS MENTEN
• Velocidad de una reacción
V= enzimática

• Velocidad máxima
Vm . [S] Vm=
V= Donde:
Km + [S]
• Constante de Michaelis
Km

• Concentración de Sustrato
[S]
RELACIONES MATEMÁTICAS ENTRE KM Y [S]
1. Cuando la [S] es <0.01 Km

Vm . [S] -d [S]
V= = K. [S]_
Km dt

En estos casos :
• La Velocidad de la reacción enzimática
• Es de primer orden
RELACIONES MATEMÁTICAS ENTRE KM Y [S]
2. Cuando la [S] es > 100 KM

Vm . [S] -d [S]
V= = Vm_
S dt

En estos casos :
• La Velocidad de la reacción enzimática.
• Es de orden cero.
• La velocidad de reacción a esta concentración.
• De sustrato es la Velocidad máxima.
TRANSFORMACIONES MATEMÁTICAS A LA
ECUACIÓN DE MICHAELIS MENTEN
Gráfico de Lineweaver y Burck: • Velocidad de una reacción
V= enzimática
Vm . [S]
V= • Velocidad máxima
Km + [S] Vm=

Donde: • Constante de Michaelis


Km

• Concentración de Sustrato
[S]
Y = m. x +b
DETERMINACIÓN DE KM Y Vmax
Gráfica de Lineweaver – Burk o dobles recíprocos
PARÁMETROS QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD
DE REACCIÓN ENZIMÁTICA
La velocidad de una reacción catalizada por una enzima depende de:
1. La concentración de moléculas de sustrato (Ecuación de Michaelis-Menten).
2. La temperatura: las enzimas poseen una temperatura óptima a la cual la enzima
presenta máxima eficiencia catalítica. Existe un intervalo en el cual son estables.
3. pH del medio, que afecta a la conformación (estructura espacial) de la enzima.
Existe un pH óptimo de actuación a valores superiores o inferiores la velocidad
disminuye.
4. Enzima. A pH y temperatura óptimos, la velocidad inicial es proporcional a la
concentración de enzima, al menos en un determinado rango de concentraciones.
5. La presencia de inhibidores.
INHIBICIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Hay dos tipos de inhibidores
enzimáticos:

❖ Reversibles (unión no covalente de


un inhibidor a la enzima):
- Competitivos
- No competitivos

❖ Irreversibles Acompetitivo
INHIBIDORES REVERSIBLES COMPETITIVOS
Unión de inhibidor al centro activo, el inhibidor
compite con el S
❖ Aumenta KM
❖ No cambia Vmax

[S]
V0 = Vmax
[S] + Kap
M
Kap= VM (1 + [I] / VI )
M
INHIBICIÓN COMPETITIVA
Los inhibidores competitivos son
sustancias, muchas veces similares sustrato
químicamente a los sustratos, que inhibidor
se unen al centro activo impidiendo
con ello que se una el sustrato.

▪ El proceso es reversible y depende Enzima Enzima


de la cantidad de sustrato y de Sin con
inhibidor, pués ambos compiten por inhibidor inhibidor

la enzima.
INHIBICIÓN
COMPETITIVA
INHIBICIÓN NO COMPETITIVA
sustrato
Los inhibidores no
competitivos son sustancias
que se unen a la enzima en
lugares diferentes al centro No se produce la
activo alterando la catálisis
conformación de la molécula de
tal manera que, aunque se
forme un complejo enzima-
Enzima Enzima
sustrato, no se produce la
catálisis. Este tipo de inhibición
depende solamente de la Sin Con
concentración de inhibidor. inhibidor inhibidor
inhibidor
INHIBIDORES
REVERSIBLES NO
COMPETITIVOS

Unión del inhibidor a un segundo lugar (no al centro


activo), el inhibidor no compite con el S:
. No cambia KM
. Disminuye Vmax
INHIBICIÓN NO
COMPETITIVA

❖ No cambia KM
❖ Disminuye Vmax
INHIBICIÓN IRREVERSIBLE
Algunas sustancias se combinan de forma covalente
con las enzimas y las inactivan de manera irreversible.

Casi todos los inhibidores


enzimáticos irreversibles
son sustancias tóxicas
(naturales o sintéticas
INHIBIDOR ACOMPETITIVO

[I] es un Inhibidor
Acompetitivo]
Incrementa [I]
1/v

Y Interceptos son:
1/vmax [1+ [I]/KI]
[I] = O

Pendiente es Constante = kM /Vmax

X Interceptos son: 1/[s]


-1/kM [1+ [I]/KI]
INHIBICIÓN ACOMPETITIVA

Producto

+
Enzima

E+ S ES EP
ES + I ESI
Sustrato Inhibidor
ENZIMA ALÓSTERICAS
❖ Una enzima alostérica es una enzima cuya actividad
está regulada mediante un sitio alostérico, que es un
sitio, distinto del sitio activo de la enzima, al que se
une un regulador (llamado "regulador alostérico") de
manera reversible y no covalente.

❖ La unión de este regulador modifica la estructura


tridimensional de la enzima y llega a afectar la
configuración del sitio activo, por lo que aumenta o
disminuye su actividad, según el caso.
ENZIMAS ALÓSTERICAS
El alosterismo es una de las principales
formas de regulación en la célula debido a
que puede producir cambios rápidos y
fácilmente reversibles en la actividad de
las enzimas (y, por lo tanto, en el
metabolismo) sin depender de que el
regulador tenga una estructura similar al
sustrato de la enzima (lo que puede
ayudar a conectar vías metabólicas).
TEORÍA ALOSTÉRICA
Sustentada por: Monod, Jacob y Changeux.

Explica el comportamiento sigmoidal y la capacidad de regulación de la actividad enzimática


de las enzimas alostéricas
TEORÍA ALOSTÉRICA
Principios:

a. Todas las enzimas alostéricas son oligoméricas.


b. Cada oligómero dispone de un centro activo y un sitio de unión con modulador.

Sitio de unión con modulador


Los moduladores son compuestos químicos
que al unirse a la enzima pueden aumentar
II o disminuir la actividad catalítica de la
Centro activo enzima /( Moduladores positivos y
I Moduladores negativos)
TEORÍA ALOSTÉRICA
d. Cada enzima alostérica puede
estar en dos estados
conformacionales: Inactivo o
Activo.

e. En principio los dos estados


conformacionales están en
equilibrio
TEORÍA ALOSTÉRICA
f. La existencia de un determinado tipo de modulador hace que el equilibrio se
desplace a la izquierda o a la derecha.

g. La existencia de modulador positivo hace que se estabilice el estado


conformacional activo y por tanto la velocidad sube abruptamente
ENZIMAS ALOSTÉRICAS

Vm

[sustrato]
Efecto cooperativo
ENZIMAS ALOSTÉRICAS

Cinética
Vm Sigmoidal

_
+
Vm/2

0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Km1 Km2 Km3
MECANISMO DE ACCIÓN
ASPARTATO TRANSCARBAMOILASA, ENZIMA
RESPONSABLE POR LA SÍNTESIS DE ALGUNOS
NUCLEÓTIDOS, ESTÁ FORMADA POR 12 CADENAS
DE POLIPÉPTIDOS
CTP, UNO DE LOS PRODUCTOS FINALES DE LA
ASPARTATO TRANSCARBAMOILASA, ES UN
MODULADOR NEGATIVO DE ESTA ENZIMA
ENZIMAS POR MODIFICACÓN COVALENTE

Las formas fosforilada y


En algunas enzimas la
no fosforilada son
regulación depende de El proceso tiene el
diferentes (una activa y
modificaciones fosfato de ATP y es
otra inactiva) y
estructurales reversibles, dependiente del aporte
dependen de la
como la unión covalente de energía del mismo
presencia de fosforilasas
con un grupo fosfato
y fosfatasas
ENZIMAS POR MODIFICACÓN COVALENTE

E -OH

Proteína Proteína
Fosfatasa Quinasa
Pi

E
-Pi
INHIBICIÓN
FEEDBACK
Llamada también Inhibición por el producto o
Inhibición por retroalimentación

Permite a la célula activar una vía metabólica


cuando requiere un determinado metabolito y
sintetizarlo en la cantidad que necesita

Puede darse en vía abierta lineal o en via bifurcada


INHIBICIÓN FEEDBACK EN VIA ABIERTA

E1 E2 E3 E4
A B C D E

-
Otro compuesto

+
E1
A B C D E
INHIBICIÓN FEEDBACK EN VÍA BIFURCADA

E4 E5
D E F
E3

E1 E2
A B C
E7 E8
E6 G H I