UNIVERSIDAD DE BOYACA PROGRAMA DE BACTERIOLOGÍA Y LABORATORIO CLINICO

GUIA DE LABORATORIO N° 10 ELABORADA POR: JOHANNA GUTIERREZ Y DIANA MORENO REVISADO POR: ROMAN YESID RAMIREZ R BACTERIOLOGIA II UNIBOYACA.

MICROSISTEMAS DE IDENTIFICACIÓN: API

1. INTRODUCCIÓN

La batería de pruebas API20E es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias gramnegativas. Básicamente consta de 23 tests bioquímicos estandarizados y miniaturizados y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una prueba bioquímica distinta, Los microtubos se inoculan con una suspensión de microorganismos, en agua o solución salina, que rehidrata los medios. Las tiras se incuban a 37° C por 24 horas y por efecto del metabolismo bacteriano se van a producir cambios de colores espontáneos o bien al añadir reactivos. La prueba número 21, la oxidasa, se hace de forma independiente a la tira. VENTAJAS DE LOS MICROSISTEMAS y Fácil de manejar y Incluyen base de datos para su interpretación y Reduce costos y Fácil de interpretar y Mayor confiabilidad y Mayor seguridad en el resultado de las pruebas y Ocupa menos espacios en su almacenamiento y Mayor reproducibilidad y Mayor precisión

Las pruebas de que consta la galería de los microsistemas API son las siguientes:

.

6. Previamente poner agua en los alvéolos de la cámara para proporcionar una atmósfera húmeda durante la incubación. OBJETIVOS y Conocer la utilidad de los microsistemas y Comprender el fundamento de cada una de las pruebas del sistema API y Aprender a manejar e interpretar el sistema API 3. Streptococcus sp. Cubrir con parafina las cúpulas de los pocillos ADH. PROCEDIMIENTO Materiales y y y y y Solución salina fisiológica Mechero Sistemas API Reactivos para microsistemas API Cepas bacterianas (Staphylococcus sp. Neisseria sp.LDC. Poner la tira en su propia cámara húmeda de incubación. Llenar la cúpula de los pocillos CIT.2. A partir de una colonia bien aislada del microorganismos hacer una suspensión en 5 ml de solución salina (1% de NaCl) o 5 ml de agua estéril 2. UTILIZACIÓN DE MICROSISTEMAS API 1. Llenar con la suspensión de bacterias los tubos. GEL con la suspensión de bacterias 4.URE. VP. Incubar a 37°C por 24 horas . parte aerobia) de todos los pocillos 3. no la cúpula (cada pocillo tiene un tubo y una cúpula. Listeria sp) y y y y y Asas Pipetas Pasteur estéril Tubos estériles Parafina Tabla de identificación de microsistemas 4. H S para obtener anaerobiosis 5.ODC.

Determinadas pruebas requieren de la aplicación de algunos reactivos para obtener su resultado 9. Realizar la lectura de los test y anotar cada numero de acuerdo a: . Se humidifica el sistema mediante adición de agua destilada en los pocillos de la base de plástico transparente. Tras la incubación se anotan los resultados que no requieren ser revelados 8. 7.1. Con ayuda de una pipeta Pasteur estéril (y chupetín) se rellenan los pocillos del sistema de identificación según las indicaciones. Se toma con el asa de siembras una colonia de la cepa a analizar y se resuspende en 5ml de suero fisiológico estéril. 3. 2. Se homogeniza la suspensión.

Prueba ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA Reacción / Enzimas Beta-galactosidasa Arginina deshidrolasa Lisina descarboxilasa Ornitina descarboxilasa Utilización del citrato Producción de H 2 S Ureasa Triptófano desaminasa Producción de indol Producción de acetoína (Voges-Proskauer) Gelatinasa Fermentación/oxidación de glucosa Fermentación/oxidación de manitol Fermentación/oxidación de inositol Fermentación/oxidación de sorbitol Fermentación/oxidación de ramnosa Fermentación/oxidación de sacarosa Fermentación/oxidación de melobiosa Fermentación/oxidación de amigdalina Fermentación/oxidación de arabinosa Citocromo oxidasa Negativo sin color amarillo amarillo amarillo verde sin precipitado negro amarillo amarillo amarillo sin color sin difusión azul o verde azul o verde azul o verde azul o verde azul o verde azul o verde azul o verde azul o verde azul o verde Positivo amarillo rojo o naranja rojo o naranja rojo o naranja azul oscuro o turquesa precipitado negro rojo o naranja marrón-rojo color rosa o anillo rosa-rojo rosa-rojo difusión de pigmento amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo amarillo OX Incoloro Púrpura .

A partir de los resultados obtenidos en el sistema API.LABORATORIO 1. Reporte los resultados obtenidos durante la práctica de microsistemas API 2. identificar el microorganismo en estudio. 4 si es el tercero y Se suman los valores de cada triplete. para realizar esta operación hay programas informáticos. 5. POS. Realizar coloración de Gram y descripción macroscópicas de las colonias entregadas 2. Por medio de los perfiles numéricos obtenidos informar genero y especie del microorganismo en estudio . ACTIVIDADES ACTIVIDAD DURANTE EL LABORATORIO 1. y Con este código se busca en la tabla de identificación la especie de que se trata.y Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numérico de 7 cifras. 2 si es el segundo. Los pocillos están separados en grupos de tres: en total se tiene 7 grupos de tres tubos o tripletes (el test número 21 corresponde al test de oxidasa) y Si la reacción es negativa se pone 0 y Si la reacción es positiva se pone: 1si es el primer pocillo de un triplete. con las sumas de los siete tripletes se obtiene un código de 7 cifras.

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